Содержание

Изменения в статье 17 Закона от 28.12.2013 N 426-ФЗ

Изменения в статье 17 Закона от 28.12.2013 N 426-ФЗ

Актуально на:

04 февраля 2022 г.

Обновление от 31.12.2019



6) произошедший на рабочем месте несчастный случай на производстве (за исключением несчастного случая на производстве, произошедшего по вине третьих лиц) или выявленное профессиональное заболевание, причинами которых явилось воздействие на работника вредных и (или) опасных производственных факторов;6) произошедший на рабочем месте несчастный случай на производстве (за исключением несчастного случая на производстве, произошедшего по вине третьих лиц) или выявленное профессиональное заболевание, причинами которых явилось воздействие на работника вредных и (или) опасных производственных факторов;
t7) наличие мотивированных предложений выборных органов первичных профсоюзных организаций или иного представительного органа работников о проведении внеплановой специальной оценки условий труда. t7) наличие мотивированных предложений выборных органов первичных профсоюзных организаций или иного представительного органа работников о проведении внеплановой специальной оценки условий труда, в том числе подготовленных по замечаниям и возражениям работника относительно результатов специальной оценки условий труда, проведенной на его рабочем месте, представленных в соответствии с пунктом 4 части 1 статьи 5 настоящего Федерального закона в письменном виде в выборный орган первичной профсоюзной организации или иной представительный орган работников.
2. Внеплановая специальная оценка условий труда проводится на соответствующих рабочих местах в течение двенадцати месяцев со дня наступления случаев, указанных в пунктах 1 и 3 части 1 настоящей статьи, и в течение шести месяцев со дня наступления случаев, указанных в пунктах 2, 4 – 7 части 1 настоящей статьи.2. Внеплановая специальная оценка условий труда проводится на соответствующих рабочих местах в течение двенадцати месяцев со дня наступления случаев, указанных в пунктах 1 и 3 части 1 настоящей статьи, и в течение шести месяцев со дня наступления случаев, указанных в пунктах 2, 4 – 7 части 1 настоящей статьи.

Составить подборку

Анализ текста

Идет загрузка…

Ст. 17 ФЗ О специальной оценке условий труда Проведение внеплановой специальной оценки условий труда ФЗ 426 от 28.12.2013 Федеральный Закон О специальной оценке условий труда Статья 17

1.
Внеплановая специальная оценка условий труда должна проводиться в следующих случаях:

1) ввод в эксплуатацию вновь организованных рабочих мест;

2) получение работодателем предписания государственного инспектора труда о проведении внеплановой специальной оценки условий труда в связи с выявленными в ходе проведения федерального государственного надзора за соблюдением трудового законодательства и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права, нарушениями требований настоящего Федерального закона;

3) изменение технологического процесса, замена производственного оборудования, которые способны оказать влияние на уровень воздействия вредных и (или) опасных производственных факторов на работников;

4) изменение состава применяемых материалов и (или) сырья, способных оказать влияние на уровень воздействия вредных и (или) опасных производственных факторов на работников;

5) изменение применяемых средств индивидуальной и коллективной защиты, способное оказать влияние на уровень воздействия вредных и (или) опасных производственных факторов на работников;

6) произошедший на рабочем месте несчастный случай на производстве (за исключением несчастного случая на производстве, произошедшего по вине третьих лиц) или выявленное профессиональное заболевание, причинами которых явилось воздействие на работника вредных и (или) опасных производственных факторов;

7) наличие мотивированных предложений выборных органов первичных профсоюзных организаций или иного представительного органа работников о проведении внеплановой специальной оценки условий труда.

2. Внеплановая специальная оценка условий труда проводится на соответствующих рабочих местах в течение шести месяцев со дня наступления указанных в части 1 настоящей статьи случаев.

Добавить комментарий к ст.17 ФЗ О специальной оценке условий труда ФЗ 426 от 28.12.2013

Внеплановая СОУТ: в каких случаях и как проводится

В каких случаях проводится спецоценка вне плана

В ст. 17 ФЗ от 28.12.2013 № 426-ФЗ указано, в каких случаях проводится внеплановая СОУТ:

  • создание новых рабочих мест и ввод их в применение;
  • применение новых технологий на производстве, ввод в применение нового оснащения, способного повлиять на уровень факторов, действующих на сотрудников, несущих вред для его здоровья;
  • использование в деятельности новых материалов и т. п., оказывающих влияние на здоровье сотрудника;
  • применение новых СИЗ и СКЗ, способных воздействовать на сотрудников, — несущих вред и опасность для их здоровья.

Внеплановая специальная оценка условий труда должна проводиться при наличии мотивированных предложений от профсоюза об оформлении мероприятия вне плана, в том числе по замечаниям и возражениям сотрудника касаемо результатов СОУТ, проведенной на его рабочем месте. Согласно законодательству, внеплановая СОУТ должна проводиться в следующих случаях (ст. 17 ФЗ от 28.12.2013 № 426-ФЗ):

  • при получении компанией документа от ГИТ об оформлении спецоценки вне плана в связи с выявленными нарушениями требований действующего законодательства;
  • при произошедшем на работе несчастном случае или выявлении профзаболевания, причинами которых стало влияние на сотрудника факторов, несущих вред и опасность его здоровью.

Внеплановая СОУТ по 426-ФЗ может не проводиться при смене Ф.И.О. или работодателя (ИП, реорганизации работодателя, юрлица) или смены названия рабочего места, если это не влечет за собой наступления оснований для оформления спецоценки вне плана, предусмотренных пунктами 3-5 и 7 части 1 ст. 17 этого закона. Решение о неосуществлении мероприятия принимается комиссионно.

Как составить приказ о проведении внеплановой СОУТ

Выяснив, когда проводится внеплановая СОУТ по Федеральному закону от 28.12.2013 № 426-ФЗ, компания подготавливает приказ об осуществлении процедуры. Приказ можно составить, руководствуясь приложением № 5 Приказа Минтруда России от 24.12.2018 № 834н. В нем прописывают:

  • наименование фирмы;
  • дату и номер документа;
  • основания проведения внеплановой специальной оценки условий труда;
  • количество мест, на которых проводится процедура;
  • состав комиссии;
  • дату оформления СОУТ вне плана;
  • ответственных лиц за сохранность документов по СОУТ;
  • подписи задействованных в мероприятии лиц.

Порядок проведения

Порядок проведения внеплановой СОУТ не отличается от того, по которому проводится мероприятие по плану. Выглядит так:

  1. Компания издает приказ об осуществлении процедуры, назначает им комиссию, составляет список мест для оценивания, заключает договор с фирмой, проводящей мероприятие.
  2. После оформления процедуры и проведения замеров составляется отчет.
  3. Отчет об осуществлении мероприятия подписывается всеми членами комиссии и утверждается ее председателем в срок не позднее чем 30 к. д. со дня его направления работодателю организацией, проводящей процедуру.
  4. Компания ознакамливает сотрудников с результатами оформления мероприятия на их рабочих местах под подпись в срок не позднее 30 к. д. со дня утверждения отчета.
  5. Компания в течение 3 рабочих дней со дня утверждения отчета уведомляет об этом фирму, проводившую процедуру, направляет копию утвержденного отчета заказным письмом с уведомлением о вручении либо в форме электронного документа с усиленной квалифицированной подписью.
  6. Работодатель, учитывая условия законодательства РФ о ПД, организует размещение на своем сайте результатов спецоценки в течение 30 к. д. со дня утверждения отчета.
  7. Компания подает декларацию о том, что условия труда соответствуют условиям ОТ, по форме приложения № 1 (Приказ Минтруда от 07. 02.2014 № 80н, документ утрачивает силу с 01.03.2022 в связи с изданием Приказа Минтруда России от 17.06.2021 № 406н) в ГИТ по месту своего нахождения лично или направляет почтовым отправлением с описью вложения и уведомлением о вручении.

Сроки проведения

Ст. 17 ФЗ от 28.12.2013 № 426-ФЗ установлены сроки проведения внеплановой специальной оценки условий труда, согласно ей, процедура вне плана оформляется в течение 12 месяцев со дня установления случаев, прописанных в этой статье (п.1, 3). Также сроки внеплановой СОУТ могут сокращаться до 6 месяцев со дня установления случаев, прописанных в п. 2, 4, 5, 6, 7 части 1 ст. 17 ФЗ от 28.12.2013 № 426-ФЗ.

Информационный портал Труд-Эксперт.Управление

 

 
ОСНОВНЫЕ ПРАВА И ОБЯЗАННОСТИ ОРГАНИЗАЦИЙ,
ОСУЩЕСТВЛЯЮЩИХ ПРОВЕДЕНИЕ СОУТ

 
Организация вправе:

1) отказаться от проведения СОУТ в том случае, если при ее проведении возникла или потенциально может возникнуть угроза жизни или здоровью работников такой организации (по мнению экспертов АНО «Институт безопасности труда», аналогичная норма, действовавшая применительно к аттестации рабочих мест, была причиной непрерывного статистического роста числа занятых на «опасных условиях труда») <Нормативно-технический анализ Федерального закона «О специальной оценке условий труда». М.: АНО «Институт безопасности труда», 2013. URL: http://ohsi.ru/upload/iblock/423/423d263ebd3a44296aa14e7a4db32400.pdf>;
2) обжаловать в установленном порядке предписания должностных лиц федерального органа исполнительной власти, уполномоченного на проведение федерального государственного надзора за соблюдением трудового законодательства, и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права, и его территориальных органов.
 
Обязанности организаций, осуществляющих проведение СОУТ:

1) предоставлять по требованию работодателя, представителя выборного органа первичной профсоюзной организации или иного представительного органа работников обоснования результатов проведения специальной оценки условий труда, а также давать работникам разъяснения по вопросам проведения СОУТ на их рабочих местах;
2) предоставлять по требованию работодателя документы, подтверждающие соответствие этой организации требованиям, установленным ст. 19 Федерального закона № 426-ФЗ;
3) применять утвержденные и аттестованные в порядке, установленном законодательством Российской Федерации об обеспечении единства измерений, методы исследований (испытаний) и методики (методы) измерений и соответствующие им средства измерений, прошедшие поверку и внесенные в Федеральный информационный фонд по обеспечению единства измерений;
4) не приступать к проведению СОУТ либо приостанавливать ее проведение в случаях:
а) непредоставления работодателем необходимых сведений, документов и информации, которые предусмотрены гражданско-правовым договором, указанным в ч. 2 ст. 8 Федерального закона № 426-ФЗ, и которые характеризуют условия труда на рабочих местах, а также разъяснений по вопросам проведения СОУТ;
б) отказа работодателя обеспечить условия, необходимые для проведения исследований (испытаний) и измерений идентифицированных вредных и (или) опасных производственных факторов, в соответствии с гражданско-правовым договором, указанным в ч. 2 ст. 8 Федерального закона № 426-ФЗ;
5) хранить коммерческую и иную охраняемую законом тайну, ставшую известной этой организации в связи с осуществлением деятельности (ст. 6 Федерального закона № 426-ФЗ) <См.: Постановление Правительства РФ от 30 июня 2014 г. № 599 «О порядке допуска организаций к деятельности по проведению специальной оценки условий труда, их регистрации в реестре организаций, проводящих специальную оценку условий труда, приостановления и прекращения деятельности по проведению специальной оценки условий труда, а также формирования и ведения реестра организаций, проводящих специальную оценку условий труда» // Официальный интернет-портал правовой информации. URL: www.pravo.gov.ru. 2015. 17 марта>.
 
В соотношении прав и обязанностей организаций, осуществляющих проведение СОУТ, очевиден дисбаланс: количество прав несравнимо меньше обязанностей. По мнению отдельных исследователей, подобное соотношение прав и обязанностей организаций, проводящих СОУТ, объясняется преимущественно императивным характером норм института охраны труда и огромной важностью для государства и общества соответствующих правоотношений <Кирсанов Р. В. Правовое положение организации, осуществляющей специальную оценку условий труда // Вестник Омского ун-та. Серия «Право». 2015. № 1 (42).
 
Согласно ст. 20 Федерального закона № 426-ФЗ, обязанности экспертов организаций, указанных в ч. ч. 1 и 2 ст. 27, вправе выполнять лица, работающие в этих организациях по трудовому договору и допущенные в порядке, установленном законодательством о техническом регулировании, к работе в испытательных лабораториях (центрах).
 
К трудовой деятельности в качестве эксперта организации, проводящей специальную оценку условий труда, допускаются лица, прошедшие аттестацию на право выполнения работ по специальной оценке условий труда и имеющие сертификат эксперта на право выполнения работ по специальной оценке условий труда (далее – сертификат эксперта).
 
Лица, претендующие на получение сертификата эксперта, должны соответствовать требованиям, установленным в ст. 20 Федерального закона № 426. Процедура аттестации на право выполнения работ по проведению СОУТ, а также порядок выдачи и аннулирования сертификатов экспертам регулируются Постановлением Правительства РФ от 3 июля 2014 г. № 614 «О порядке аттестации на право выполнения работ по специальной оценке условий труда, выдачи сертификата эксперта на право проведения работ по специальной оценке условий труда и его аннулирования» <СЗ РФ. 2014. № 28. Ст. 4057>.
 
Организации, проводящие СОУТ, и эксперты таких организаций независимы и руководствуются в своей деятельности нормами ТК РФ, Федерального закона № 426-ФЗ, других федеральных законов и иных нормативных правовых актов РФ, регулирующих СОУТ <Такая формулировка данной нормы не точна, ибо организации, осуществляющие проведение СОУТ, должны следовать еще и условиям гражданско-правовых договоров, заключаемых с работодателями. – Прим. авт.>.
 

 

ПРАВА И ОБЯЗАННОСТИ РАБОТОДАТЕЛЯ В СВЯЗИ С ПРОВЕДЕНИЕМ
СПЕЦИАЛЬНОЙ ОЦЕНКИ УСЛОВИЙ ТРУДА.

 
1. Работодатель вправе:

– требовать от организации, проводящей СОУТ, обоснования результатов ее проведения;
– проводить внеплановую СОУТ в порядке, установленном Федеральным законом № 426-ФЗ;
– требовать от организации, проводящей специальную оценку условий труда, документы, подтверждающие ее соответствие требованиям, установленным ст. 19 Федерального закона;
– обжаловать в порядке, установленном ст. 26 Федерального закона, действия (бездействие) организации, проводящей СОУТ.
 
2. Работодатель обязан:

– обеспечить проведение СОУТ, в том числе внеплановой специальной оценки условий труда, в случаях, установленных ч. 1 ст. 17 Федерального закона;
– предоставить организации, проводящей СОУТ, необходимые сведения, документы и информацию, которые предусмотрены гражданско-правовым договором, указанным в ч. 2 ст. 8 Федерального закона, и которые характеризуют условия труда на рабочих местах, а также разъяснения по вопросам проведения СОУТ;
– не предпринимать каких бы то ни было преднамеренных действий, направленных на сужение круга вопросов, подлежащих выяснению при проведении СОУТ и влияющих на результаты ее проведения;
– ознакомить в письменной форме работника с результатами проведения специальной оценки условий труда на его рабочем месте;
– давать работнику необходимые разъяснения по вопросам проведения СОУТ на его рабочем месте;
– реализовывать мероприятия, направленные на улучшение условий труда работников, с учетом результатов проведения СОУТ.
 
Итак, обязанности по обеспечению проведения СОУТ возлагаются на работодателя. В связи с этим вряд ли правильны судебные иски, которые предъявляются к руководителям организации.

 
 

ИЗ СУДЕБНОЙ ПРАКТИКИ

 

Сроки проведения СОУТ на новых рабочих местах

Проведение СОУТ является обязанностью большинства работодателей. Такое требование установлено положениями федерального закона № 426-ФЗ. Исключением из этого правила являются только работодатели-физические лица, а также компании, которые используют только труд надомных или удаленных сотрудников. Наличие должным образом оформленных результатов спецоценки предусматривается для каждого рабочего места в организации.

  1. Новые рабочие места
  2. СОУТ при переименовании должности

Дополнено 15.04.2019

Проведение СОУТ является обязанностью большинства работодателей. Такое требование установлено положениями федерального закона № 426-ФЗ. Исключением из этого правила являются только работодатели-физические лица, а также компании, которые используют только труд надомных или удаленных сотрудников. Наличие должным образом оформленных результатов спецоценки предусматривается для каждого рабочего места в организации. Поэтому для новых мест работы необходимо организовать спецоценку в сжатые сроки.

Новые рабочие места

Под новыми местами работы в соответствии с 426-ФЗ понимаются позиции, которые ранее отсутсвовали в организации и были впервые организованы. Кроме того, новыми будут считаться также места работы, на которых произошло существенное изменение условий труда. В этих ситуациях для данных позиций необходимо проводить СОУТ новых рабочих мест.

СОУТ при переименовании должности

Однако ст. 17 426-ФЗ предусматривает ряд случаев, когда изменения, затрагивающие определенную должностную позицию, признаются незначительными. К этим случаям относятся:

  • изменение личных данных работодателя, в роли которого выступает индивидуальный предприниматель. Под личными данными понимаются его фамилия, имя и отчество;
  • реорганизация компании и изменение организационных условий работы на данной позиции, которые не затронули характера технологического процесса;
  • изменение наименования должности без внесения новаций в состав производственной технологии на данном месте работы.

Окончательное решение о том, являются ли произведенные изменения существенными или незначительными, принимает специальная комиссия, организованная работодателем. Если в компании действует профсоюзная организация, такое решение целесообразно согласовать с ее представителями. Соответствующее решение стоит зафиксировать в письменной форме в виде локального правового документа. Специального образца для такого решения действующее законодательство не предусматривает. Поэтому комиссия вправе оформить его в произвольном виде. Следует позаботиться о том, чтобы оно было подписано председателем организации и всеми ее членами, на нем была обозначена дата. В документе должно быть четко сформулировано указание об отсутствии необходимости в проведение спецоценки на данном рабочем месте или нескольких местах.

Сроки СОУТ на новых рабочих местах

Порядок организации СОУТ для новых сотрудников описан в ст. 17 федерального закона 426-ФЗ. Он устанавливает, что в соответствии с ч.2 указанной статьи данного нормативного документа сроки СОУТ для нового рабочего места должны составлять не более 12 месяцев. Проведение спецоценки в этом случае расценивается как внеплановое. Поэтому даже если в организации имеется действующий документ, подтверждающий проведение СОУТ на всех других местах работы, выполнение спецоценки в данном случае является обязательным.

 

Уточняем, что если организованное рабочее место еще не занято, то СОУТ проводить не имеет никакого смысла. Когда на вакантное место найден сотрудник, работодатель договаривается с ним о гарантиях и компенсациях, которые определены результатами проведения СОУТ. После спецоценки нужно добавить класс условий труда в договор и, при необходимости, все компенсации и гарантии, которые полагаются работнику по закону.

Специальная оценка условий труда в таблицах и схемах

Главная > О Центре > Публикации

Механизм аттестации рабочих мест (АРМ) был введен еще в советское время. К концу 80-х годов была предпринята попытка установления льгот и компенсаций людям, которые заняты на производстве с вредными условиями труда.

С 1997 г. АРМ стала обязательным этапом для сертификации работ по охране труда на предприятии.

В 2007 г. процесс был упорядочен и АРМ стала важной подсистемой государственного управления по охране труда.

С 1 января 2014 г. вместо АРМ введена специальная оценка условий труда (СОУТ), которая должна проводиться в соответствии с нормативными актами:

  • Трудовым кодексом Российской Федерации (далее -ТК РФ)
  • Федеральным законом «О специальной оценке условий труда» от 28. 12.2013 N 426-ФЗ (далее – Закон №426-ФЗ)
  • Приказом Министерства труда и социальной защиты РФ от 24.01.2014 № 33н «Об утверждении Методики проведения специальной оценки условий труда, Классификатора вредных и (или) опасных производственных факторов, формы отчета о проведении специальной оценки условий труда и инструкции по ее заполнению» (далее – Приказ №33н)
  • Приказом Минтруда России от 07.02.2014 №80н «О форме и порядке подачи декларации соответствия условий труда государственным нормативным требованиям охраны труда, Порядке формирования и ведения реестра деклараций соответствия условий труда государственным нормативным требованиям охраны труда» (далее – Приказ №80н)
  • Приказом Министерства здравоохранения РФ от 07.08.2013 № 549н «Об утверждении требований к комплектации лекарственными препаратами и медицинскими изделиями укладок и наборов для оказания скорой медицинской помощи» (далее – Приказ №549н)

С 2014 года обязательными для включения в трудовой договор являются следующие условия: условия труда на рабочем месте (абз. 8 ч. второй ст. 57 ТК РФ).

Существуют исключения, когда СОУТ не проводится в отношении условий труда (п. 3 ст. 3 Закона №426-ФЗ):

  • надомников,
  • дистанционных работников
  • и работников, вступивших в трудовые отношения с работодателями – физическими лицами, не являющимися индивидуальными предпринимателями.

Аналогичные рабочие места (ч. 1 ст. 16 Закона №426-ФЗ) указываются в перечне отдельно. СОУТ проводится в отношении 20% из них (но не меньше двух), а результаты СОУТ распространяются на остальные 80% аналогичных мест.

Выявить аналогичные рабочие места можно следующими способами:

  • сгруппировать рабочие места сотрудников с одинаковыми наименованиями должностей на основе штатного расписания (напр., в штатном расписании в отделе доставки 5 штатных единиц менеджеров по логистике)
  • проанализировать должностные инструкции (в них должны быть одинаковые обязанности для сотрудников с одинаковым наименованием должности)
  • уточнить режим работы этих сотрудников – он должен быть одинаковым (в этом помогут трудовые договоры, графики сменноти, приказы и др. документы)
  • проанализировать другие признаки аналогичности (у работинков должны быть одинаковые инструменты, оборудование, материалы, средства индивидуальнрой защиты (далее – СИЗ)
  • достаточно провести оценку 20 % аналогичных мест (напр., в отделе доставки из 5 штатных единиц менеджеров по логистике можно провести СОУТ только одного рабчего места)
  • утвердить перечень рабочих мест для проведения СОУТ, аналогичные метса в перечне обозначаются буквой А, напр., 8А (7А) – рабочее место 8 аналогично рабочему месту 7

В ряде случаев рабочие места можно не оценивать (ч. 3, 4 ст. 3 Закона №426-ФЗ):

  • рабочее место надомников и дистанционных работников
  • работодатель – физическое лицо (не ИП)
  • рабочее место вакантно
  • на рабочем месте исполнитель по ГПХ, а не работник
  • рабочие места государственных гражданских служащих и муниципальных служащих (пока для них порядок проведения СОУТ не определен законом)

Периодичность проведения СОУТ

  • Не реже чем один раз в пять лет со дня утверждения отчета о проведении предыдущей СОУТ (ч. 4 ст. 8 Закона №426-ФЗ)
  • На рабочих местах, где проводилась АРМ – по истечении пяти лет со дня завершения АРМ
  • На рабочих местах, где АРМ не проводилась – СОУТ нужно завершить до 31.12.2018
  • На рабочие места работников, имеющих право на досрочное назначение трудовой пенсии по старости, и работников, занятых на работах с вредными, опасными условиями труда, – в кратчайшие сроки.

Подклассы вредных условий труда

ПодклассСтепеньХарактеристика
3.1 1-я Условия труда, при которых возникает риск повреждения здоровья и работнику требуется более длительное восстановление здоровья, чем до начала следующей рабочей смены
3.2 2-я Условия труда, при которых вредные, опасные факторы могут вызвать появление первых признаков профзаболевания (без потери профессиональной трудоспособности)
3. 3 3-я Условия труда, при которых вредные, опасные факторы могут вызвать профзаболевания легкой и средней степени (с потерей профессиональной трудоспособности)
3.4 4-я Условия труда, при которых вредные, опасные факторы могут вызвать профзаболевания тяжелой степени (с потерей профессиональной трудоспособности)

Декларирование соответствия условий труда государственным нормативным требованиям охраны труда (ст. 11 Закона №426-ФЗ)

В отношении рабочих мест, на которых вредные и/или опасные производственные факторы по результатам осуществления идентификации не выявлены (а также оптимальные или допустимые условия труда) подается в Федеральную службу по труду и занятости по месту своего нахождения (ГИТ) декларация соответствия условий труда государственным нормативным требованиям охраны труда в срок не позднее 30 рабочих дней со дня утверждения отчета о проведении СОУТ на рабочих местах, в отношении которых оформлена декларация.

Мероприятия по улучшению условий труда

  • Модернизация производства
  • Снижение уровня загазованности и запыленности воздуха
  • Повышение уровня естественного и искусственного освещения на рабочих местах
  • Внедрение технических устройств, обеспечивающих защиту работников от поражения электрическим током
  • Уменьшение до допустимого уровня механическое колебание (шум, вибрация, ультразвук, инфразвук) и излучение (ионизирующее, электромагнитное, лазерное, ультрафиолетовое)

Декларирование соответствия условий труда государственным нормативным требованиям охраны труда (ст. 11 Закона №426-ФЗ)

Форма и порядок подачи декларации соответствия условий труда государственным нормативным требованиям охраны труда устанавливаются Приказом №80н.

По истечении срока действия декларации, если на рабочих местах не были выявлены вредные и (или) опасные производственные факторы, данный срок продлевается на следующие 5 лет.

Реестр деклараций ведет Роструд. Сведения, содержащиеся в реестре, открыты для общего доступа на официальном сайте службы (за исключением сведений, составляющих государственную тайну).

Как декларирование рабочих мест влияет на расходы работодателя (ч. 2.1 ст. 58.3 Закона от 24.07.2009 №212-ФЗ)

Декларирование соответствия условий труда государственным нормативным требованиям охраны труда (ст. 11 Закона №426-ФЗ)

Решение о прекращении действия декларации соответствия условий труда государственным нормативным требованиям охраны труда принимается ГИТ, о чем в срок не позднее чем в течение десяти календарных дней со дня наступления обстоятельств делается соответствующая запись в реестре деклараций соответствия условий труда государственным нормативным требованиям охраны труда.

Случаи внепланового проведения СОУТ (чч. 1-2 ст. 17 Закона №426-ФЗ):

В течение 6 мес.:

  • Предписание ГИТ о проведении внеплановой оценки
  • Предложение профсоюза
  • Несчастный случай на производстве из-за воздействия вредных или опасных факторов (не по вине третьих лиц)
  • Выявление профессионального заболевания из-за воздействия вредных или опасных факторов
  • Изменен состав материалов, сырья
  • Переход на другие СИЗ

В течение 12 мес.

  • Замена производственного оборудования
  • Изменение технологического процесса
  • Введение новых рабочих мест
  • Переезд в другое помещение (всей организации или отдельных рабочих мест)

Реестры организаций, проводящих СОУТ, формирует, ведет и размещает на своем сайте Минтруд России (ч. 1 ст. 21 Закона 426-ФЗ, Постановление Правительства РФ от 30.06.2014 №599)

Ответственность за нарушение законодательства о проведении СОУТ (ст. 25 Закона №426-ФЗ)

При плановых проверках ГИТ использует контрольные вопросы о проведении СОУТ, содержащиеся в проверочном листе, утвержденном приказом Федеральной службы по труду и занятости от 10 ноября 2017 г. № 655 «Об утверждении форм проверочных листов (списков контрольных вопросов) для осуществления федерального государственного надзора за соблюдением трудового законодательства и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права» и размещенном на официальном сайте Роструда: https://www. rostrud.ru/rostrud/deyatelnost/?ID=583925

20.07.2019


Ближайшие группыСортировать:по датепо возрастанию ценыпо убыванию ценыпо популярностипо новинкампо скидке

Главная > О Центре > Публикации

Прогестерон отличается от 17α-гидроксипрогестерона капроата: значение для акушерской практики

Am J Obstet Gynecol. Авторская рукопись; доступно в PMC 2014 4 августа. наук, доктор наук

Роберто Ромеро, доктор

Перинатологический исследовательский отдел, NICHD/NIH/DHHS, Детройт, штат Мичиган, и Бетесда, доктор медицины

Франк З. Станчик, доктор

Кафедра акушерства, гинекологии и профилактической медицины, Школа Кека Медицина Университета Южной Калифорнии, Лос-Анджелес, Калифорния

Роберто Ромеро, доктор, отделение перинатологических исследований, NICHD/NIH/DHHS, Детройт, Мичиган, и Бетесда, доктор медицины;

Переписка: Роберто Ромеро, MD, D. Мед. наук, отделение перинатологических исследований, NICHD/NIH/DHHS, Детройт, штат Мичиган, и Бетесда, штат Мэриленд. [email protected] См. другие статьи в PMC, в которых цитируется опубликованная статья.

Клиницисты 1-4 и профессиональные организации 5-7 , комментируя роль прогестагенов в предотвращении преждевременных родов, использовали термин прогестерон взаимозаменяемо с 17 α -гидроксипрогестерона капроатом, подразумевая, что эти два соединения являются то же. Тем не менее, между ними существуют химические, биологические и фармакологические различия. 8,9 Различаются и клинические показания. В этой редакционной статье будут рассмотрены различия между двумя соединениями и предложено, чтобы клиницисты и исследователи использовали аббревиатуру 17-OHPC (а не 17P) для обозначения 17 α -гидроксипрогестерона капроата. Аббревиатура 17-OHPC была впервые рекомендована доктором Стивеном Каритисом из Университета Питтсбурга и использовалась в Американском журнале акушерства и гинекологии доктором Каритисом и его соавторами.

Прогестагены: натуральные или синтетические

Прогестагены могут быть классифицированы как натуральные или синтетические. 10-13 Природные соединения – это соединения, химическая структура которых аналогична тем, которые вырабатываются живыми организмами. Напротив, синтетические прогестагены (или прогестины) представляют собой соединения, созданные в лаборатории, структура которых была изменена и не соответствует встречающемуся в природе стероиду. Прогестерон является естественным прогестагеном; 17 α -гидроксипрогестерона капроат (17-OHPC) является синтетическим (). 11,12

Таблица Сравнение между прогестероном и 17 α -hydroxyprogesterone капроат

Переменная Прогестерон 17 α -hydroxyprogesterone капроат
Тип прогестагена Natural Synthetic
MIOMERIAL активность (in vitro) уменьшается без эффекта или увеличивается
шейки матки созревания недействительный эффект
клиническая индикация
Предварительное рождение только у пациентов беременность Иональный сахарный диабет Нет Может быть

Прогестерон

Прогестерон – естественный половой стероид, вырабатываемый желтым телом, а затем плацентой. Химическая структура показана на . Csapo et al. 14-19 продемонстрировали, что прогестерон играет ключевую роль в поддержании беременности в первом триместре. Выводы Csapo et al. были подкреплены наблюдением, что блокада рецепторов прогестерона приводит к прерыванию беременности на ранних сроках (например, введение RU-486 или мифепристона). 20-23 Кроме того, введение RU-486 беременным женщинам в третьем триместре приводит к созреванию шейки матки и часто к началу родов. 24-27

Химическая структура прогестерона и 17 α -гидроксипрогестерона капроата

A , Химическая структура прогестерона; B , Химическая структура 17α-гидроксипрогестерона капроата.

Ромеро. Прогестоген и прогестины: в чем разница? Am J Obstet Gynecol 2013.

17

α -гидроксипрогестерона капроат

17 α -гидроксипрогестерона капроат (17-OHPC) представляет собой синтетический прогестаген. Человеческое тело не производит молекулу капроата. Другое название капроата — «гексаноат», который представляет собой сложный эфир, полученный из гексановой (или капроновой) кислоты. 28,29 Формула 17-OHPC отображается в формате . Некоторые врачи заявляют, что 17-OHPC обнаружен у коз. Это кажется сказкой, потому что идентификация этой молекулы из естественных жидкостей организма, тканей коз или любого другого живого организма не может быть подтверждена литературным поиском.

17P: аббревиатура, которая привела к путанице

Аббревиатура 17P использовалась многими (включая одного из авторов, Р.р.) для ссылки на 17-OHPC. 1,2,5,7,30-41 К сожалению, термин 17P не несет информации о присутствии молекулы капроата. Действительно, 17P также используется для обозначения 17 α -гидроксипрогестерона (17OHP), природного стероида, продуцируемого яичниками со слабой прогестагенной активностью. Действительно, популярный источник утверждает, что «17P, или 17. P, или 17-P» может относиться к 17-гидроксипрогестерону». 42

Степень путаницы такова, что на национальных научных конференциях некоторые академики представили, что 17P является природным стероидом, вырабатываемым плацентой человека.Это мнение было выражено на веб-сайтах, предназначенных для информирования пациентов. 43 Это не точно. Источником этого заблуждения, по-видимому, является использование термина 17P . Путаница распространяется на агентство, имеющее опыт в рассмотрении лекарств; эта организация использовала термин 17-OHP применительно к 17-OHPC 44

Различия между прогестероном и 17

α -гидроксипрогестерона капроатом

Прогестерон и 17-OHPC имеют разные физиологические свойства и фармакологические профили.При этом существуют разные показания к их применению в акушерстве.

Ruddock et al 41 сообщили, что прогестерон подавляет сократительную способность миометрия в полосках, полученных во время кесарева сечения; однако 17-OHPC не оказывал такого эффекта и в высоких концентрациях стимулировал сократительную способность миометрия. О подобных наблюдениях сообщили Sexton et al. 45 и Anderson et al. 46 Исследования на беременных мышах показывают, что прогестерон (но не 17-OHPC) может предотвращать преждевременные роды. 47 Однако эффекты двух соединений сложны и зависят от пути введения и используемого носителя. 47

Что касается влияния прогестерона и 17-OHPC на шейку матки, убедительные доказательства, полученные в результате исследований на беременных женщинах, животных и экспериментов in vitro, показывают важную роль прогестерона в ингибировании созревания шейки матки. и/или молекулярные механизмы, участвующие в этом процессе. 48-66 Влияние 17-OHPC на шейку матки у беременных женщин, животных и в контексте экспериментов in vitro не изучалось в такой степени, как действие прогестерона.

В одном исследовании изучалось влияние 17-OHPC на длину шейки матки у пациенток с ≥ 1 преждевременными родами в анамнезе, которые были распределены для получения 17-OHPC по сравнению с контрольной группой, не получавшей лечения. 67 У женщин, получавших 17-OHPC, не наблюдалось различий в измерениях длины шейки матки с течением времени. Напротив, вагинальный прогестерон снижал скорость укорочения шейки матки у пациенток с преждевременными родами или преждевременным укорочением шейки матки в анамнезе. 68

Facchinetti et al. 61 сообщили, что риск укорочения шейки матки (определяемый как ≥4 мм) был ниже у пациенток, получавших 17-OHPC, чем в контрольной группе.Эти пациентки были госпитализированы с эпизодом преждевременных родов, но не родили и были выписаны. Таким образом, эта популяция отличается от популяции из двух других исследований, в которых 17-OHPC и прогестерон использовались для предотвращения преждевременных родов до эпизода преждевременных родов.

Недавнее исследование, сравнивающее действие вагинального прогестерона и 17-OHPC на беременных мышах, показало, что ни один из агентов не изменил экспрессию генов в миометрии. 35 В шейке матки 17-OHPC не оказывал заметного влияния на экспрессию генов; однако вагинальный прогестерон повышал экспрессию дефенсина-1 (природный антимикробный пептид). 35 Ткани были собраны только после 6 часов воздействия агентов. Неясно, связаны ли механизмы, с помощью которых прогестерон предотвращает преждевременные роды у пациенток с короткой шейкой матки, с экспрессией дефенсина-1 или другими путями, которые еще предстоит обнаружить.

Клинические показания для введения 17-OHPC

Применение 17-OHPC у пациенток с преждевременными родами в анамнезе во многом основано на результатах исследования Meis et al. 1 Введение 17-OHPC было связано со значительным снижением частоты преждевременных родов в возрасте <37 (36.3% в группе 17-OHPC против 54,9% в группе плацебо; относительный риск [RR], 0,66; 95% доверительный интервал [ДИ], 0,54–0,81), <35 (20,6% против 30,7%; ОР 0,67; 95% ДИ 0,48–0,93) и <32 (11,4% против 19,6%; ОР 0,58; 95) % ДИ, 0,37–0,91) недель беременности (другие исследования были проведены ранее и обобщены с помощью совокупного метаанализа Марком Кирсом).

Одним из вопросов, поднятых в ходе обзора РКИ, проведенного Meis et al. 1 , был высокий уровень преждевременных родов в группе плацебо, которая составила 54.9%. 69 Это считается неожиданно высоким уровнем преждевременных родов у пациенток с преждевременными родами в анамнезе. Этот вопрос был поднят медицинским отделом Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) на основании первой фазы этого исследования, в котором 17-OHPC сравнивали с плацебо, а частота преждевременных родов в группе плацебо составила 36%. Эта первая фаза исследования называлась «17P-IF-001»; 150 пациентов были рандомизированы, 104 пациента родили, 65 пациентов были распределены в группу 17-OHPC и 39 — в группу плацебо.Эту первую фазу исследования пришлось остановить из-за проблем с производством 17-OHPC. 44 Ключевой вопрос заключается в том, почему в первой фазе исследования частота преждевременных родов в группе плацебо составила 36%, а в последующем исследовании (Meis et al 1 ), проведенном теми же исследователями, она составила 54,9%. Ямс предположил, что высокая частота преждевременных родов в группе плацебо может быть связана с включением подгруппы женщин, которые были подвержены особенно высокому риску преждевременных родов из-за преждевременных родов в анамнезе, этнического происхождения или женщин с высоким риском преждевременных родов. мотивированы на еженедельную инъекцию 17-OHPC. 70 Однако, если положительные результаты исследования связаны с эффектом 17-OHPC в этой конкретной подгруппе пациентов, внешняя валидность или обобщаемость для пациентов, которые не имеют такого же профиля риска, могут быть поставлены под сомнение. 71 В частности, следует ли использовать 17-OHPC женщинам с преждевременными родами в анамнезе, но не подпадающим под «профиль высокого риска», который был использован для оправдания высокой частоты преждевременных родов в контрольной группе? Единственный способ решить этот вопрос — воспроизвести результаты в другом испытании (см. ниже).

Разрешение на продажу 17-OHPC для предотвращения преждевременных родов у женщин с преждевременными родами в анамнезе находится в соответствии с подразделом H Свода федеральных правил. Этот регуляторный путь используется, когда принимается решение о предоставлении временного разрешения на основе суррогатной конечной точки (в данном случае роды на сроке <37 недель беременности), и требуются дальнейшие исследования. FDA потребовало провести второе рандомизированное клиническое исследование 17-OHPC по сравнению с плацебо до получения полного разрешения на продажу в соответствии с Законом о пищевых продуктах, лекарствах и косметике 505 (b).В настоящее время проводится рандомизированное клиническое исследование 17-OHPC по сравнению с плацебо (т. е. Подтверждающее исследование 17P по сравнению с носителем для предотвращения преждевременных родов у женщин с одноплодными спонтанными преждевременными родами в анамнезе). Женщинам с преждевременными родами в анамнезе назначают плацебо или 17-OHPC. Первичной конечной точкой этого исследования являются роды на сроке <35 недель беременности; первоначальная прогнозируемая дата завершения была перенесена с октября 2013 г. на декабрь 2016 г. Подробная информация об исследовании доступна на следующем веб-сайте: http://clinicaltrials.gov/ct2/show/{“type”:”клиническое испытание”,”attrs”:{“text”:”NCT01004029″,”term_id”:”NCT01004029″}}NCT01004029?term=преждевременно+рождение&rank=1. Результаты этого испытания определят, можно ли воспроизвести эффективность 17-OHPC в предотвращении преждевременных родов.

Клинические показания для введения вагинального прогестерона для предотвращения преждевременных родов

Два рандомизированных клинических испытания и метаанализ данных отдельных пациенток показали, что вагинальный прогестерон снижает частоту преждевременных родов у женщин с короткой шейкой матки в середине триместра.Fonseca et al. 72 сообщили о рандомизированном двойном слепом плацебо-контролируемом исследовании, в котором женщины с короткой шейкой матки (определяемой как ≤15 мм по данным трансвагинального УЗИ) между 20 и 25 неделями беременности были распределены для получения либо вагинального прогестерона ( 200 мг микронизированного прогестерона) или плацебо (сафлоровое масло). Продолжительность лечения составила от 24 до 34 недель гестации. Пациентки, получавшие вагинальный прогестерон, имели более низкую частоту спонтанных преждевременных родов: <34 недель беременности, чем в группе плацебо (19.2% против 34,4%; ОР, 0,56; 95% ДИ, 0,36–0,86). Частота нежелательных явлений была одинаковой в обеих группах. 72

Исследование PREGNANT, 73 многоцентровое, рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое исследование, в которое были включены бессимптомные женщины с одноплодной беременностью и сонографически короткой шейкой матки (10-20 мм) в сроке от 19 до 23 недель 6 дней беременности. Пациентки были случайным образом распределены для получения вагинального геля прогестерона (90 мг) или плацебо ежедневно, начиная с 20 недель до 23 недель 6 дней беременности до 36 недель 6 дней беременности, разрыва плодных оболочек или родов — в зависимости от того, что произошло раньше.У пациенток, получавших вагинальный прогестерон, частота преждевременных родов на сроке <33 недель гестации была значительно ниже, чем у получавших плацебо (8,9% против 16,1%; ОР 0,55; 95% ДИ 0,33–0,92). Новорожденные, рожденные от матерей, получавших вагинальный гель прогестерона, имели значительно более низкую частоту респираторного дистресс-синдрома (РДС), чем новорожденные, получавшие плацебо (3,0% против 7,6%; ОР 0,39; 95% ДИ 0,17–0,92). Снижение RDS оставалось значительным после поправки на объединенное место исследования и преждевременные роды в анамнезе (ОР, 0,000).40; 95% ДИ, 0,17–0,94; P = 0,03). Частота нежелательных явлений была одинаковой у пациентов, получавших прогестерон и плацебо, и не было никаких признаков потенциального сигнала безопасности.

Метаанализ данных отдельных пациентов представляет собой особый тип систематического обзора, в котором исходные данные о каждом участнике рандомизированных клинических испытаний получают непосредственно от исследователей, участвующих в исследовании. Недавно был проведен такой метаанализ, в котором вагинальное введение прогестерона бессимптомным женщинам с сонографически короткой шейкой матки (определяемой как длина шейки матки ≤25 мм) было связано со значительным снижением частоты преждевременных родов при <33, <35 и <28 недель беременности; РДС; составная неонатальная заболеваемость и смертность; масса тела при рождении <1500 г; госпитализация в отделение реанимации новорожденных; и потребность в механической вентиляции. 74

В совокупности данные свидетельствуют о том, что вагинальный прогестерон предотвращает преждевременные роды на сроке <33 недель беременности у женщин с короткой шейкой матки и что это связано со снижением неонатальной заболеваемости/смертности. Важно отметить, что это наблюдалось у женщин либо без, либо с преждевременными родами в анамнезе. В одном испытании, в котором изучалась эффективность 17-OHPC у нерожавших женщин с короткой шейкой матки (определяемой как длина шейки матки <30 мм), не было продемонстрировано доказательств эффективности для предотвращения преждевременных родов при любой длине шейки матки (на основе теста взаимодействие). 75

Фармацевтическая компания (Columbia Laboratories, Inc., Ливингстон, Нью-Джерси) обратилась в FDA за разрешением на продажу препарата вагинального прогестерона для предотвращения преждевременных родов. Стандартом для одобрения FDA являются 2 рандомизированных клинических испытания, которые демонстрируют доказательства эффективности и безопасности. Однако Columbia Laboratories, Inc. подала заявку на получение маркетингового разрешения, используя данные только одного исследования (исследование PREGNANT). Испытание Fetal Medicine Foundation 72 не может быть одобрено, поскольку в нем использовался другой препарат вагинального прогестерона (масляные капсулы, а не гель).FDA не одобрило заявку Columbia Laboratories, Inc на основании результатов анализа подгруппы, и компания не подала заявку на одобрение подраздела H, путь, используемый спонсором 17-OHPC. Таким образом, вагинальный прогестерон может использоваться не по прямому назначению для предотвращения преждевременных родов у женщин с короткой шейкой матки.

Использование лекарств вне зарегистрированных показаний во время беременности

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов регулирует продажу лекарств в Соединенных Штатах. Однако это агентство не определяет стандарты медицинской помощи и не регулирует медицинскую практику. Большинство лекарств, назначаемых во время беременности (например, антибиотики при преждевременном преждевременном излитии плодных оболочек, стероиды для предотвращения РДС, сульфат магния для нейропротекции, мизопростол для индукции родов или для лечения послеродового кровотечения, большинство токолитиков) не одобрены FDA. но рутинно используются в клинической акушерской практике. Эффективность большинства этих агентов подтверждена доказательствами, полученными в ходе рандомизированных клинических испытаний и последующих метаанализов.

Профиль безопасности вагинального прогестерона и 17-OHPC

Профиль безопасности вагинального прогестерона и 17-OHPC различен. Одна из причин для этой редакционной статьи заключается в том, что путаница в отношении 17-OHPC и натурального прогестерона привела к неправильному представлению о том, что профиль безопасности прогестерона можно экстраполировать на 17-OHPC во время беременности.

Профиль безопасности вагинального прогестерона в первом триместре беременности подтверждается обширными данными о пациентках, получавших этот препарат в ходе курса вспомогательных репродуктивных технологий. FDA одобрило продажу вагинального прогестерона для поддержки лютеина в первом триместре беременности. Безопасность во втором и третьем триместрах для предотвращения преждевременных родов основана на 2 крупных рандомизированных клинических исследованиях, в которых участвовало более 1000 пациентов. Не было различий в профиле нежелательных явлений между пациентками, которые подвергались вагинальному воздействию прогестерона или плацебо. O’Brien et al., 76 , провела 2-летнюю последующую оценку плодов, подвергавшихся воздействию прогестерона внутриутробно, и не сообщалось о различиях между вагинальным прогестероном и плацебо.При рассмотрении применения вагинального прогестерона для профилактики преждевременных родов у пациенток с короткой шейкой матки FDA не обнаружило признаков безопасности.

В исследовании Meis et al. 1 сообщалось о незначительном повышении частоты мертворождений и выкидышей у женщин, получавших 17-OHPC. FDA сочло это потенциальным сигналом безопасности, достойным дальнейшего изучения. 17-OHPC получил временное разрешение на продажу в Соединенных Штатах для предотвращения преждевременных родов у женщин с анамнезом.Вкладыш к упаковке содержит информацию о потенциальном сигнале безопасности. В двух исследованиях сообщалось о повышении частоты гестационного сахарного диабета у пациенток, получавших 17-OHPC, 77,78 , хотя в другом отчете такой разницы не обнаружено. 79 Американский колледж акушеров и гинекологов рекомендовал, чтобы пациенты, получающие 17-OHPC, были проинформированы о рисках и преимуществах этого лекарства и чтобы это обсуждение было задокументировано в таблице. Будущие исследования, в том числе продолжающееся рандомизированное клиническое исследование, предоставят дополнительные данные для прояснения вопроса безопасности.

Два исследования с многоплодной беременностью сообщили о значительном увеличении перинатальных нежелательных явлений у пациенток, получающих 17-OHPC. Combs et al. 80 сообщили, что доля потерянных плодов была значительно выше у пациенток, получавших 17-OHPC (по сравнению с плацебо) в исследовании трехплодной беременности (8% [13/168 женщин] против 0% [0/75 женщин]. ]; P <0,02). В рандомизированном клиническом исследовании, в котором беременные двойней распределялись между группами, получавшими 17-OHPC, и плацебо, Senat et al. 36 сообщили о значительно более высокой частоте преждевременных родов на сроке <32 недель у пациенток с беременностью двойней и короткой шейкой матки, получавших 17-OHPC. OHPC, чем у тех, кто получал плацебо (29% [24/82 женщины] против 12% [10/83 женщины]; P = .007).

Значение для акушерской практики

  • Прогестерон — это не то же самое, что 17-OHPC, и их синонимическое использование является неточным и вводящим в заблуждение (различия включают химическую структуру, фармакологические эффекты, клинические показания и профиль безопасности; ).

  • 17-OHPC в настоящее время рекомендуется для профилактики преждевременных родов у женщин с одноплодной беременностью и преждевременными родами в анамнезе.

  • Вагинальный прогестерон рекомендуется для профилактики преждевременных родов у женщин с короткой шейкой матки (с или без преждевременных родов в анамнезе).

  • Мы предлагаем использовать термин 17-OHPC вместо 17P . Возможно, лучше избегать использования термина 17P во избежание путаницы.

Прогестагены и прогестины: в чем разница?

Прогестоген представляет собой соединение с прогестероноподобным действием (природное или синтетическое). Это было определено как способность химического агента преобразовывать пролиферативный эндометрий в секреторный для поддержания беременности.Термин прогестины относится к синтетическим прогестагенам и, ради ясности, не должен применяться к природному прогестерону (примеры прогестинов включают медроксипрогестерона ацетат, норэтиндрон и левоноргестрел, которые использовались в качестве средств контрацепции и заместительной гормональной терапии).

Благодарности

Частично поддерживается Отделом перинатологических исследований, Отдел внутренних исследований, Юнис Кеннеди Шрайвер Национальный институт детского здоровья и развития человека, Национальные институты здравоохранения, Департамент здравоохранения и социальных служб.

Сноски

Авторы сообщают об отсутствии конфликта интересов.

Отказ от ответственности издателя: Это PDF-файл неотредактированной рукописи, которая была принята к публикации. В качестве услуги нашим клиентам мы предоставляем эту раннюю версию рукописи. Рукопись будет подвергнута редактированию, набору текста и рецензированию полученного доказательства, прежде чем она будет опубликована в ее окончательной цитируемой форме. Обратите внимание, что в процессе производства могут быть обнаружены ошибки, которые могут повлиять на содержание, и все правовые оговорки, применимые к журналу, относятся к нему.

Информация для авторов

Роберто Ромеро, доктор перинатологических исследований, NICHD/NIH/DHHS, Детройт, Мичиган, и Бетесда, Мэриленд.

Франк З. Станчик, доктор, кафедра акушерства, гинекологии и профилактической медицины, Медицинская школа Кека Университета Южной Калифорнии, Лос-Анджелес, Калифорния.

Ссылки

1. Meis PJ, Klebanoff M, Thom E, et al. Профилактика повторных преждевременных родов с помощью 17-альфа-гидроксипрогестерона капроата. N Engl J Med. 2003; 348: 2379–85.[PubMed] [Google Scholar]2. Тита А.Т., Роуз диджей. Прогестерон для предотвращения преждевременных родов: развивающееся вмешательство. Am J Obstet Gynecol. 2009; 200: 219–24. [PubMed] [Google Scholar]3. Сотириадис А., Папатеодору С., Макридимас Г. Перинатальные исходы у женщин, получавших прогестерон для предотвращения преждевременных родов: метаанализ. УЗИ Акушерство Гинекол. 2012;40:257–66. [PubMed] [Google Scholar]4. Шмоудер В.М., Прескотт Г.М., Франко А., Фан-Хавард П. Возрождение прогестерона в профилактике преждевременных родов.Энн Фармакоте. 2013;47:527–36. [PubMed] [Google Scholar]5. Американский колледж акушеров и гинекологов. Заключение комитета ACOG №. 419: использование прогестерона для предотвращения преждевременных родов. Акушерство Гинекол. 2008; 112:963–5. [PubMed] [Google Scholar]6. Американский колледж акушеров и гинекологов. Практический бюллетень ACOG №. 130: прогнозирование и профилактика преждевременных родов. Акушерство Гинекол. 2012; 120:964–73. [PubMed] [Google Scholar]7. Фарин Д., Мундл В.Р., Додд Дж. и др. Применение прогестерона для профилактики преждевременных родов.J Obstet Gynaecol Can. 2008; 30: 67–77. [PubMed] [Google Scholar]8. Каритис С.Н., Шарма С., Венкатараманан Р. и соавт. Фармакокинетика 17-гидроксипрогестерона капроата при многоплодной беременности. Am J Obstet Gynecol. 2011;205:40.e1–8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]9. Каритис С.Н., Шарма С., Венкатараманан Р. и соавт. Фармакология и плацентарный транспорт 17-гидроксипрогестерона капроата при одноплодной беременности. Am J Obstet Gynecol. 2012;207:398.e1–8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]10.Stanczyk FZ, Hapgood JP, Winer S, Mishell DR., Jr Прогестагены, используемые в постменопаузальной гормональной терапии: различия в их фармакологических свойствах, внутриклеточном действии и клинических эффектах. Endocr Rev. 2013; 34:171–208. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]11. Станчик ФЗ. Все прогестины не созданы равными. Стероиды. 2003; 68: 879–90. [PubMed] [Google Scholar] 12. Шиндлер А.Е., Кампаньоли С., Дракманн Р. и соавт. Классификация и фармакология прогестинов. Зрелые. 2008; 61: 171–80.[PubMed] [Google Scholar] 13. Североамериканское общество менопаузы. Роль прогестагена в гормональной терапии женщин в постменопаузе: заявление о позиции Североамериканского общества менопаузы. Менопауза. 2003; 10: 113–32. [PubMed] [Google Scholar] 14. Чапо А.И., Кнобил Э., ван дер Молен Х.Дж., Вист В.Г. Уровни прогестерона периферической плазмы во время беременности и родов у человека. Am J Obstet Gynecol. 1971; 110: 630–2. [PubMed] [Google Scholar] 15. Чапо А.И., Пулккинен М.О., Руттнер Б., Соваж Дж.П., Вист В.Г. Значение желтого тела человека в поддержании беременности: I, предварительные исследования.Am J Obstet Gynecol. 1972; 112: 1061–7. [PubMed] [Google Scholar] 16. Чапо А.И., Пулккинен М. О., Кайхола Х.Л. Влияние лютеэктомии, вызванной выводом прогестерона, на реакцию окситоцина и простагландина матки беременной женщины в первом триместре. Простагландины. 1973; 4: 421–9. [PubMed] [Google Scholar] 17. Csapo AI, Erdos T. Критический контроль уровня прогестерона и беременности с помощью антипрогестерона. Am J Obstet Gynecol. 1976; 126: 598–601. [PubMed] [Google Scholar] 18. Чапо А.И., Эрдос Т. Предотвращение абортивного действия антипрогестероновой сыворотки прогестероном.Am J Obstet Gynecol. 1977; 128: 212–4. [PubMed] [Google Scholar] 19. Кереньи Т. Забытый «отец прогестерона» Am J Obstet Gynecol. 2010;202:e10–1. [PubMed] [Google Scholar] 20. Ковач Л., Сас М., Реш Б.А. и соавт. Прерывание беременности на очень ранних сроках с помощью RU 486: антипрогестагенный препарат. Контрацепция. 1984; 29: 399–410. [PubMed] [Google Scholar] 21. Хаспелс АА. Прерывание беременности на ранних сроках с помощью антипрогестагенного соединения, RU 486. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol. 1985; 20: 169–75. [PubMed] [Google Scholar] 22.Болье Э.Э. Контрагестия и другие клинические применения RU 486, антипрогестеронового рецептора. Наука. 1989; 245:1351–7. [PubMed] [Google Scholar] 23. Болье Э.Э. Медицинская премия Альберта Ласкера. RU-486 как антипрогестероновый стероид: от рецептора к контргестии и далее. ДЖАМА. 1989; 262:1808–14. [PubMed] [Google Scholar] 24. Фридман Р., Лелайдье С., Батон-Сен-Мле С., Фернандес Х., Виал М., Бурже П. Индукция родов у женщин в срок с помощью мифепристона (RU 486): двойное слепое рандомизированное плацебо-контролируемое исследование.Акушерство Гинекол. 1992; 80: 972–5. [PubMed] [Google Scholar] 25. Фридман Р., Тейлор С., Паоли С., Пурад А. RU 486 (мифепристон): новый инструмент для индукции родов у доношенных женщин с живым плодом. Contracept Fertil Sex (Париж) 1992; 20:1133–6. [PubMed] [Google Scholar] 26. Lelaidier C, Baton C, Benifla JL, Fernandez H, Bourget P, Frydman R. Мифепристон для индукции родов после предыдущего кесарева сечения. БЖОГ. 1994; 101:501–3. [PubMed] [Google Scholar] 27. Lelaidier C, Benifla JL, Fernandez H, et al. Значение РУ-486 (мифепристона) в медицинских показаниях для индукции родов в срок.Результаты двойного слепого рандомизированного проспективного исследования (RU-486 по сравнению с плацебо) J Gynecol Obstet Biol Reprod (Paris) 1993;22:91–100. [PubMed] [Google Scholar] 28. Аттарди Б.Дж., Железник А., Симхан Х., Чиао Дж.П., Мэттисон Д.Р., Каритис С.Н. Сравнение связывания прогестерона и глюкокортикоидных рецепторов и стимуляции экспрессии генов прогестероном, 17-альфа-гидроксипрогестерона капроатом и родственными прогестинами. Am J Obstet Gynecol. 2007;197:599.e1–7. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]29. Варма Т.Р., Морсман Дж.Оценка применения Пролутона-Депо (гидроксипрогестерона гексаноата) на ранних сроках беременности. Int J Gynaecol Obstet. 1982; 20:13–7. [PubMed] [Google Scholar] 30. Da Fonseca EB, Bittar RE, Damiao R, Zugaib M. Профилактика недоношенности: роль прогестерона. Curr Opin Obstet Gynecol. 2009; 21: 142–7. [PubMed] [Google Scholar] 31. Дойл Л.В. Антенатальный прогестерон для предотвращения преждевременных родов. Ланцет. 2009;373:2000–2. [PubMed] [Google Scholar] 32. Холл НР. Какой препарат следует использовать для предотвращения повторных преждевременных родов: 17-P или натуральный прогестерон? Obstet Gynecol Clin North Am.2011; 38: 235–46. икс–х. [PubMed] [Google Scholar] 34. Роуз Д.Дж., Каритис С.Н., Писман А.М. и др. Испытание 17-альфа-гидроксипрогестерона капроата для предотвращения преждевременных родов у близнецов. N Engl J Med. 2007; 357: 454–61. [PubMed] [Google Scholar] 35. Нольд С., Мобер М., Антон Л., Йеллон С., Эловиц М.А. Профилактика преждевременных родов прогестагенными агентами: каковы молекулярные механизмы? Am J Obstet Gynecol. 2013;208:223.e1–7. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]36. Сенат М.В., Порчер Р., Винер Н. и др. Профилактика преждевременных родов с помощью 17-альфа-гидроксипрогестерона капроата при бессимптомной беременности двойней с короткой шейкой матки: рандомизированное контролируемое исследование. Am J Obstet Gynecol. 2013;208:194.e1–8. [PubMed] [Google Scholar] 37. Манук Т., Камьяр М., Эсплин М.С., Сильвер Р., Портер Т.Ф., Варнер М. Серкляж шейки матки, добавки прогестерона и спонтанные преждевременные роды. Am J Obstet Gynecol. 2013;208(прил.):S226. [Google Академия] 38. Ибрагим С., Линч К.Д., Уокер Х., Родевальд К., Ямс Д.Д. Влияние инъекций 17-альфа-гидроксипрогестерона капроата на скорость изменения длины шейки матки у женщин с преждевременными родами в анамнезе. Am J Obstet Gynecol. 2013;208(прил.):S225.[Google Академия] 39. Темминг Л., Киркланд С.Т., Куллстам С., Розарио Н., Митра А., Джой С. Ретроспективное сравнение только серкляжа с серкляжем и 17P для предотвращения преждевременных родов. Am J Obstet Gynecol. 2013;208(прил.):S219. [Google Академия]40. Manuck T, Watkins S, Esplin MS, Jackson M, Jorde L, Varner M. Секвенирование следующего поколения идентифицирует бета-ген рецептора IL-12 как потенциальный медиатор в ответ на 17-альфа-гидроксипрогестерона капроат для предотвращения рецидива недоношенности. Am J Obstet Gynecol. 2013;208(прил.):S227. [Google Академия] 41. Раддок Н.К., Ши С.К., Джейн С. и др. Прогестерон, но не 17-альфа-гидроксипрогестерона капроат, ингибирует сокращения человеческого миометрия. Am J Obstet Gynecol. 2008;199:391.e1–7. [PubMed] [Google Scholar]45. Секстон Д.Дж., О’Рейли М.В., Фрил А.М., Моррисон Дж.Дж. Функциональные эффекты 17альфа-гидроксипрогестерона капроата (17P) на сократительную способность человеческого миометрия in vitro. Репрод Биол Эндокринол. 2004; 2:80. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]46.Андерсон Л., Мартин В., Хиггинс С., Нельсон С.М., Норман Дж.Э. Влияние прогестерона на сократительную способность миометрия, калиевые каналы и токолитическую эффективность. Репрод науч. 2009;16:1052–61. [PubMed] [Google Scholar]47. Куон Р.Дж., Ши С.К., Мол Х. и др. Фармакологическое действие прогестинов по ингибированию созревания шейки матки и предотвращению родов зависит от их свойств, пути введения и носителя. Am J Obstet Gynecol. 2010;202:455. e1–9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]48. Родригес Х.А., Касс Л., Вараюд Дж. и соавт.Ремоделирование коллагена в шейке матки морских свинок в срок связано со снижением экспрессии рецепторов прогестерона. Мол Хум Репрод. 2003; 9: 807–13. [PubMed] [Google Scholar]49. Гарфилд Р.Е., Сааде Г., Бухимски С. и др. Контроль и оценка состояния матки и шейки матки во время беременности и родов. Обновление воспроизведения гула. 1998; 4: 673–95. [PubMed] [Google Scholar]50. Имада К., Ито А., Сато Т., Намики М., Нагасе Х., Мори Ю. Гормональная регуляция экспрессии генов матриксной металлопротеиназы 9/желатиназы В в фибробластах шейки матки кролика.Биол Репрод. 1997; 56: 575–80. [PubMed] [Google Scholar]51. Hegele-Hartung C, Chwalisz K, Beier HM, Elger W. Созревание шейки матки морской свинки после лечения антагонистом прогестерона онапристоном (ZK 98.299): электронно-микроскопическое исследование. Хум Репрод. 1989; 4: 369–77. [PubMed] [Google Scholar]52. Word RA, Li XH, Hnat M, Carrick K. Динамика ремоделирования шейки матки во время беременности и родов: механизмы и современные концепции. Семин репрод мед. 2007; 25: 69–79. [PubMed] [Google Scholar]53.Андерссон С., Минхарес Д., Йост Н.П., Ворд Р.А. Метаболизм эстрогенов и прогестерона в шейке матки во время беременности и родов. J Clin Endocrinol Metab. 2008;93:2366–74. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]54. Ромеро Р. Клиническое применение доноров и блокаторов оксида азота. Хум Репрод. 1998; 13: 248–50. [PubMed] [Google Scholar]55. Сюй Х, Гонсалес Дж.М., Офори Э., Эловиц М.А. Предотвращение созревания шейки матки: основной механизм, с помощью которого прогестагены предотвращают преждевременные роды? Am J Obstet Gynecol.2008;198:314.e1–8. [PubMed] [Google Scholar]56. Chwalisz K. Использование антагонистов прогестерона для созревания шейки матки и в качестве дополнения к родам. Хум Репрод. 1994; 9 (дополнение 1): 131–61. [PubMed] [Google Scholar]57. Ито А., Имада К., Сато Т., Кубо Т., Мацусима К., Мори Ю. Подавление продукции интерлейкина 8 прогестероном в шейке матки кролика. Биохим Дж. 1994; 301:183–6. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]58. Stjernholm Y, Sahlin L, Akerberg S, et al. Созревание шейки матки у человека: потенциальная роль эстрогена, прогестерона и инсулиноподобного фактора роста-I.Am J Obstet Gynecol. 1996; 174:1065–71. [PubMed] [Google Scholar]59. Холт Р., Тиммонс Б.К., Акгуль Ю., Акинс М.Л., Махендроо М. Молекулярные механизмы созревания шейки матки различаются при доношенных и преждевременных родах. Эндокринология. 2011; 152:1036–46. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]60. Йеллон С.М., Бернс А.Е., См. Дж.Л., Лечуга Т.Дж., Кирби М.А. Отмена прогестерона способствует процессам ремоделирования в шейке матки небеременных мышей. Биол Репрод. 2009;81:1–6. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]61. Факкинетти Ф., Паганелли С., Комитини Г., Данте Г., Вольпе А.Изменения длины шейки матки при преждевременном созревании шейки матки: эффекты 17-альфа-гидроксипрогестерона капроата. Am J Obstet Gynecol. 2007;196:453. e1–4. обсуждение 421. [PubMed] [Google Scholar] 62. Straach KJ, Shelton JM, Richardson JA, Hascall VC, Mahendroo MS. Регуляция экспрессии гиалуроновой кислоты во время созревания шейки матки. Гликобиология. 2005; 15:55–65. [PubMed] [Google Scholar]63. Йеллон С.М., Оширо Б.Т., Чхая Т.И. и др. Ремоделирование шейки матки и роды у мышей, лишенных изоформы В рецептора прогестерона.Биол Репрод. 2011; 85: 498–502. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]64. Кларк К., Джи Х., Фелтович Х., Яновский Дж., Кэрролл С., Чиен Э.К. Мифепристон-индуцированное созревание шейки матки: структурные, биомеханические и молекулярные явления. Am J Obstet Gynecol. 2006; 194:1391–8. [PubMed] [Google Scholar]65. Gonzalez JM, Franzke CW, Yang F, Romero R, Girardi G. Активация комплемента вызывает высвобождение металлопротеиназ, вызывающее ремоделирование шейки матки и преждевременные роды у мышей. Ам Джей Патол. 2011; 179: 838–49. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]66.Gonzalez JM, Romero R, Girardi G. Сравнение механизмов, ответственных за ремоделирование шейки матки при преждевременных и срочных родах. J Reprod Immunol. 2013;97:112–9. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]67. Durnwald CP, Lynch CD, Walker H, Iams JD. Влияние лечения 17-альфа-гидроксипрогестерона капроатом на изменение длины шейки матки с течением времени. Am J Obstet Gynecol. 2009;201:410.e1–5. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]68. О’Брайен Дж.М., Дефранко Э.А., Адэр К.Д. и др. Влияние прогестерона на укорочение шейки матки у женщин с риском преждевременных родов: вторичный анализ многонационального рандомизированного двойного слепого плацебо-контролируемого исследования.УЗИ Акушерство Гинекол. 2009; 34: 653–9. [PubMed] [Google Scholar]69. Кирс МДж. Прогестерон и недоношенность: семьдесят лет «дежавю» или «все еще впереди»? Рождение. 2004; 31: 230–5. [PubMed] [Google Scholar]70. Ямс Джей Ди. Была ли частота преждевременных родов в группе плацебо слишком высокой в ​​исследовании Meis MFMU Network 17-OHPC? Am J Obstet Gynecol. 2010; 202:409–10. [PubMed] [Google Scholar]71. Romero R, Yeo L, Miranda J, Hassan SS, Conde-Agudelo A, Chaiworapongsa T. Схема предотвращения преждевременных родов: вагинальный прогестерон у женщин с короткой шейкой матки.J Перинат Мед. 2013;41:27–44. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]72. Фонсека Э.Б., Селик Э., Парра М., Сингх М., Николаидес К.Х. Прогестерон и риск преждевременных родов у женщин с короткой шейкой матки. N Engl J Med. 2007; 357: 462–9. [PubMed] [Google Scholar]73. Хассан С.С., Ромеро Р., Видьядхари Д. и др. Вагинальный прогестерон снижает частоту преждевременных родов у женщин с эхографически короткой шейкой матки: многоцентровое рандомизированное двойное слепое плацебо-контролируемое исследование. УЗИ Акушерство Гинекол.2011; 38:18–31. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]74. Ромеро Р., Николаидес К., Конде-Агудело А. и др. Вагинальный прогестерон у женщин с бессимптомной сонографической короткой шейкой матки в середине триместра снижает преждевременные роды и неонатальную заболеваемость: систематический обзор и метаанализ данных отдельных пациентов. Am J Obstet Gynecol. 2012;206:124.e1–19. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]75. Grobman WA, Thom EA, Spong CY, et al. 17 Альфа-гидроксипрогестерона капроат для предотвращения преждевременных родов у нерожавших с длиной шейки матки менее 30 мм.Am J Obstet Gynecol. 2012;207:390.e1–8. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]76. О’Брайен Дж. М., Стейхен Дж. Дж., Филлипс Дж. А., Кризи Г. В. Двухлетние исходы у детей, подвергшихся дополнительному интравагинальному введению геля прогестерона внутриутробно: вторичный анализ многоцентрового рандомизированного двойного слепого плацебо-контролируемого исследования. Am J Obstet Gynecol. 2012;206(прил.):S223. [Google Академия] 77. Ребарбер А., Иштван Н.Б., Руссо-Штиглиц К. и др. Увеличение частоты гестационного диабета у женщин, получающих профилактически 17-альфа-гидроксипрогестерона капроат для предотвращения повторных преждевременных родов.Уход за диабетом. 2007; 30: 2277–80. [PubMed] [Google Scholar]78. Уотерс Т.П., Шульц Б. А., Мерсер Б.М., Каталано П.М. Влияние 17альфа-гидроксипрогестерона капроата на непереносимость глюкозы при беременности. Акушерство Гинекол. 2009; 114:45–9. [PubMed] [Google Scholar]79. Гьямфи С., Хортон А.Л., Момирова В. и соавт. Влияние 17-альфа-гидроксипрогестерона капроата на риск гестационного диабета при одноплодной или многоплодной беременности. Am J Obstet Gynecol. 2009;201:392.e1–5. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]80.Комбс К.А., Гарите Т., Морел К., Дас А., Порто М. Неспособность 17-гидроксипрогестерона снизить неонатальную заболеваемость или продлить тройную беременность: двойное слепое рандомизированное клиническое исследование. Am J Obstet Gynecol. 2010;203:248.e1–9. [PubMed] [Google Scholar]

Кристаллическая структура многодоменного сглаженного рецептора человека в комплексе с суперстабилизирующим лигандом

Синтез ТС114

Раствор 4-нитро-2-(трифторметил)бензойной кислоты (80 мг, 0,34 ммоль), вторичный амин N -метил-1-(4-(1-метил-1 H -пиразол-5-ил)фталазин-1-ил)пиперидин-4-амин (100 мг, 0. 31 ммоль) и N , N -диизопропилэтиламин (ДИПЭА, 60 мг, 80 мкл, 0,46 ммоль) в 3 мл СН 2 Cl 2 обрабатывали 1-[бис(ди)метиленамино 1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиний-3-оксид гексафторфосфат (HATU, 153 мг, 0,40 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 часа, затем гасили добавлением солевого раствора. Реакционную смесь трижды экстрагировали CH 2 Cl 2 . Объединенный органический слой последовательно промывали насыщенным раствором NaHCO 3 и соляным раствором, затем сушили над Na 2 SO 4 .После фильтрации раствор концентрировали в вакууме и неочищенный продукт очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле с получением ТС114 в виде бесцветного твердого вещества (82 мг, 49%). Ядерный магнитный резонанс показал смесь ротамеров.

Сконструированная гибридная конструкция SMO-FLA для структурных исследований

Ген SMO человека дикого типа (WT) был синтезирован с помощью Genescript, а затем клонирован в модифицированный вектор pTT5, содержащий кассету экспрессии с сигнальной последовательностью HA, за которой следует метка FLAG, метка 10 × His и сайт распознавания протеазы вируса травления табака (TEV) на N-конце перед последовательностью рецептора и еще одна метка 10 × His на С-конце. Небольшой белок Flavodoxin (FLA, MW 16KD) 16 был слит с ICL3 между P434 и S443 с использованием перекрывающейся ПЦР. N-конец 1–52 и C-конец 559–787 были усечены. Для конструкции была введена одиночная мутация E194M в HD, кристаллы которой использовались для сбора данных в XFEL. Конструкция, использованная для определения синхротронной структуры, не содержит точечной мутации и была слегка модифицирована путем дальнейшего укорочения N-конца на пять остатков. Все последовательности праймеров, использованные в этом исследовании, показаны в дополнительной таблице 1.

Экспрессия и очистка слитого белка SMO-FLA

Сконструированную конструкцию SMO экспрессировали в клетках HEK293F (Invitrogen) в присутствии 5  мкМ висмодегиб. Клетки HEK293F с плотностью клеток 1,0-1,3 × 10 6  клеток мл -1 временно трансфицировали ПЭИ:ДНК в соотношении 2:1 и культивировали при 37°С. Клетки собирали через 48 ч после трансфекции и хранили при температуре -80°С до использования. Осадок клеток ресуспендировали в гипотоническом буфере (10 мМ HEPES, pH 7.5, 10 мМ MgCl 2 , 20 мМ KCl и ингибитор протеазы без ЭДТА в таблетках (Roche)). Дальнейшее промывание сырых мембран проводили путем повторного центрифугирования (три раза) в буфере с высоким содержанием соли (10 мМ HEPES, pH 7,5, 10 мМ MgCl 2 , 20 мМ KCl, 1,0 мМ NaCl и таблетки с ингибитором протеазы без ЭДТА). ). Промытые мембраны повторно суспендировали в буфере, содержащем 30 мкМ TC114, 2 мг мл -1 йодацетамида (Sigma) и коктейльные таблетки ингибитора протеазы, не содержащие ЭДТА, и инкубировали на качалке при 4°С в течение 1 ч.Затем мембраны солюбилизировали в буфере, содержащем 50 мМ HEPES, pH 7,5, 200 мМ NaCl, 1% (вес/объем) н-додецил-β-D-мальтопиранозида (DDM, Anatrace) и 0,2% (вес/объем) холестерина. гемисукцинат (CHS, Sigma), в течение 2,5 ч при 4°С. После высокоскоростного центрифугирования супернатант инкубировали со смолой TALON IMAC (Clontech) в течение ночи при 4 °С с добавлением 20 мМ имидазола и 1,0 М NaCl. После связывания смолу промывали 10-колоночными объемами буфера для промывки I (50 мМ HEPES, pH 7,5, 800 мМ NaCl, 10% глицерина, 0.5% (w/v) лаурилмальтоза-неопентилгликоля (LMNG, Anatrace)/0,1% CHS, 20 мМ имидазола, 10 мМ MgCl 2 , 6 мМ АТФ и 30 мкМ TC114). Гранулы с 2 мл буфера для промывки I переносили в пробирку на 5 мл и инкубировали на качалке при 4°C в течение 2 ч для полной замены детергента, после чего промывали шестью колонками объемов буфера для промывки II (25 мМ HEPES pH 7,5). , 500 мМ NaCl, 10 % глицерина, 0,03 % LMNG/0,006 % CHS, 40 мМ имидазола и 50 мкМ TC114). Затем белок элюировали трехколоночными объемами элюирующего буфера (25 мМ HEPES, pH 7.5, 300 мМ NaCl, 10 % глицерина, 0,01 % LMNG/0,002 % CHS, 220 мМ имидазола и 100 мкМ TC114). Затем белок обрабатывали в течение ночи протеазой TEV и Endo H (NEB) для расщепления N-концевой His-метки, FLAG-метки и дополнительных гликанов. Затем белок концентрировали до 40-50 мг/мл -1 с помощью концентратора Vivaspin с отсечкой 100 кДа. Монодисперсность белков проверяли с помощью аналитической эксклюзионной хроматографии (аЭХ). Как правило, профиль aSEC показывает монодисперсный пик.

Кристаллизация в LCP для сбора данных на синхротроне /w) моноолеин) в соотношении 2/3 (об./об.) раствор белка/липид с использованием механического шприцевого миксера

29 .Испытания кристаллизации LCP проводились с использованием робота для кристаллизации NT8-LCP (Formulatrix) 30 в 96-луночных стеклянных сэндвич-планшетах (Nova). После установки планшеты инкубировали и визуализировали при 20°C с использованием автоматического инкубатора/устройства формирования изображения (RockImager 1000, Formulatrix). Начальные попадания кристаллов были обнаружены в осадительном состоянии, содержащем 100 мМ трехосновного дигидрата цитрата натрия, рН 5,0, 30% (об./об.) ПЭГ400, 100 мМ нитрата аммония. После оптимизации кристаллы росли в 100 мМ трехосновном дигидрате цитрата натрия, рН 5.0, 36% (об./об.) ПЭГ400, 50–200 мМ Нитрат аммония до среднего размера 47 × 23 × 8 мкм 3 в течение 7 сут. Кристаллы SMO были собраны непосредственно из LCP с использованием микромаунтов 30 мкм (MiTeGen) и мгновенно заморожены в жидком азоте для сбора данных.

Сбор синхротронных данных и определение структуры

Данные дифракции рентгеновских лучей были собраны на линии пучка SPring-8 41XU, Хиого, Япония, с использованием детектора Pilatus3 6M (длина волны рентгеновского излучения 10 000 Å). Кристаллы экспонировали с помощью мини-луча 10 мкм для 0.2 с и колебание 0,2° на кадр. XDS 31 использовался для интегрирования, масштабирования и объединения данных 12 наиболее дифракционных кристаллов комплекса SMO-TC114. Информация о начальной фазе комплекса SMO-TC114 была получена путем молекулярной замены (MR) на Phaser 32 с использованием TMD человека-SMO (идентификатор PDB: 4QIM) 8 , CRD SMO рыбок данио (идентификатор PDB: 4C79) 33 и структуру флаводоксина (идентификатор PDB: 1I1O) 34 в качестве поисковых моделей. Правильный раствор МР содержал две молекулы SMO, упакованные «хвост к хвосту» в одном асимметричном звене решетки P2 1 . Уточнение выполнялось с помощью REFMAC5 (ссылка 35) и autoBUSTER 36 с последующей ручной проверкой и восстановлением уточненных координат в программе COOT 37 с использованием обоих |2Fo|–|Fc| и |Fo|–|Fc| карты. Уточнение NCS и TLS с двумя группами TLS (домены SMO и Flavodoxin) были включены в уточнение. Окончательная модель синхротронного комплекса SMO-TC114 содержит 498 остатков SMO (остатки 58–433 и 444–565) и 147 остатков флаводоксина в молекуле А, а также 494 остатка SMO (остатки 58–433 и 444–561). и 147 остатков флаводоксина в молекуле B.Статистика сбора и уточнения синхротронной структуры представлена ​​в таблице 1.

Таблица 1 Статистика сбора и уточнения кристаллографических данных.

Кристаллизация в LCP для сбора данных XFEL

Кристаллы для LCP-XFEL были получены в газонепроницаемых шприцах Hamilton, как описано ранее 38 , путем введения ∼5  мкл нагруженного белком LCP в виде непрерывной колонки диаметром ∼400  мкм. в шприц на 100 мкл, наполненный 60 мкл раствора осадителя, содержащего 100 мМ трехосновного дигидрата цитрата натрия, рН 5.0, 36% (об./об.) ПЭГ400, 150 мМ хлорида аммония и инкубировали не менее 24 ч при 20°С. После образования кристаллов (средний размер 5 × 5 × 2  мкм 3 ) образцы из 2–3 шприцев объединяли вместе и удаляли избыток осаждающего раствора. Остаточный осадительный раствор поглощали добавлением нескольких микролитров расплавленного липида 7,9 MAG 39 . Полученный образец LCP с кристаллами исследовали под визуальным микроскопом и загружали в инжектор LCP 9 для сбора данных LCP-SFX.

Сбор данных XFEL и определение структуры

Эксперимент проводился на конечной станции когерентной рентгеновской визуализации 40 LCLS с использованием импульсов рентгеновского излучения 9,5 кэВ (1,3 Å) с длительностью импульса 45 фс и частота повторения 120 Гц. Кристаллы SMO-TC114 доставлялись на пересечение с пучком XFEL 1,5 мкм внутри вакуумной камеры в потоке LCP диаметром 50 мкм при скорости потока ~200 нл мин -1 , генерируемого инжектором LCP. Данные серийной фемтосекундной кристаллографии (SFX) были собраны детектором CSPAD, расположенным на расстоянии 106 мм от образца.Луч был ослаблен до 7,5–11% (~10 11 фотона в импульсе) от полной интенсивности, чтобы избежать насыщения детектора. Всего было собрано 2 102 907 дифракционных картин, из которых 320 121 были идентифицированы как потенциальные совпадения дифракции монокристалла с >15 потенциальными брэгговскими пиками с помощью программного обеспечения Cheetah 41 , что соответствует средней частоте совпадений 15,2%. Автоматическое индексирование и интеграция структурных факторов совпадений кристаллов выполнялись с использованием CrystFEL (версия 0.6.2) 42 с параметром «pushres 1.2’, в результате чего было получено 65 560 проиндексированных изображений с моноклинной решеткой (уровень успеха индексации 20,5%). Исходная фазовая информация для структуры XFEL комплекса SMO-TC114 была получена путем молекулярной замены (MR) на Phaser 32 с использованием нашей синхротронной структуры с доменами CRD, TMD и флаводоксина в качестве независимых моделей поиска. Испытание МРТ с многодоменной синхротронной структурой SMO в качестве модели единственного поиска не увенчалось успехом. Правильное решение МР содержало две молекулы SMO–TC114, упакованные «хвост к хвосту» в одном асимметричном звене решетки P2 1 , подобно синхротронной структуре.Уточнение выполнялось с помощью REFMAC5 (ссылка 35) и autoBUSTER 36 с последующей ручной проверкой и восстановлением уточненных координат в программе COOT 37 с использованием обоих |2 F o |−| Ф с | и | Ф или |-| Ф с | карты. При доработке использовались ограничения NCS. Добавление групп TLS снижало качество статистики R/R free , поэтому TLS не использовался при уточнении.Окончательная модель комплекса SMO–TC114 содержит 485 остатков SMO (остатки 59–433 и 444–553) и 147 остатков флаводоксина (остатки 1002–1148) в молекуле А, 487 остатков SMO (остатки 59–433, 444–498 и 505–561), включая нерасщепленный С-концевой гистаг (559–561) и 147 остатков флаводоксина (остатки 1002–1148) в молекуле В. Остальные N-концевые остатки (остатки 53–58 в молекулах А и B), часть ECL3 (остатки 499–504 в молекуле B) и С-концевые остатки (554–558 в молекуле A), вероятно, неупорядочены и не видны на картах электронной плотности, поэтому не моделировались.Статистические данные по сбору данных и уточнению структуры XFEL приведены в таблице 1.

Масс-спектрометрия с обменом водорода и дейтерия

Масс-спектрометрия с обменом водорода и дейтерия (HDX-MS) использовала конструкцию SMO, аналогичную конструкции кристаллизации (SMO-FLA). ), за исключением того, что партнер по слиянию был заменен меньшим белком рубредоксином (RUB, MW 6KD), вставленным в ICL3 между P434 и S443 (SMO-RUB), и эксперимент проводился при 4 °C следующим образом.Вкратце, 25 мкМ очищенного белка в виде апо (без лиганда) смешивали с 250 мкМ TC114, или с 250 мкМ OHC, или с 250 мкМ NHC и инкубировали в буфере D 2 O в течение диапазона времени обмена. от 10 с до 1 ч перед гашением реакции обмена дейтерия кислым гасящим раствором (рН 2,4). Все смешивание и расщепление проводились на роботе LEAP Technologies Twin HTS PAL для работы с жидкостями, размещенном внутри терморегулируемого шкафа 24,43 . Расщепление проводили в соответствии с хроматографией с использованием колонки с иммобилизованным пепсином.Масс-спектры были получены на масс-спектрометре Q Exactive Hybrid Quadrupole-Orbitrap (Thermo Scientific), и значения процентного обмена дейтерия для пептидных изотопных оболочек в каждый момент времени были рассчитаны и обработаны с использованием программного обеспечения HDX Workbench 44 . Данные представлены в виде среднего значения ± s.d. из трех независимых повторностей. Данные были приспособлены к простой нелинейной регрессии (наименьшие квадраты) модели наилучшего соответствия (X — логарифмическая, а Y — линейная) с использованием GraphPad Prism.

Моделирование МД

Подготовка белков и построение системы

Кристаллическая структура рецептора SMO с холестерином была получена из базы данных PDB (код PDB: 5L7D 20 ). Цепь А структуры была выбрана для построения модели. Был использован Prime 45 в выпуске Schrödinger 2015-3, и ICL3 был построен с помощью модели гомологии с использованием другой кристаллической структуры Smo (код PDB: 4JKV (ссылка 3)), а петля ICL2 была предсказана Prime. Модель уточняли с помощью Prepwizard 46 при pH 7,0, а C- или N-конец блокировали ACT и NME.

Мембрана вокруг трансмембранного домена рецептора SMO была построена из 135 молекул POPC и 48 холестеринов с использованием веб-сервера CHARMM-GUI 47 .Окончательный периодический граничный блок системы имеет размеры 84,75 × 84,75 × 139,85 Å, и для сольватации и нейтрализации блока использовали 20881 воды TIP3P и 62 иона Na + и 68 Cl (0,15 моль л -1 NaCl). Всего в системе было 93 475 атомов на периодическую ячейку.

Молекулярно-динамическое моделирование и анализ данных

Силовое поле Amber99sb-ILDN 48 применяли к рецептору SMO, воде и ионам TIP3P, а силовое поле Slipides 49 применяли к холестерину и POPC. Для моделирования использовался Gromacs 5.1.2 (ссылка 50), а протокол релаксации был получен из CHARMM-GUI и описан в их документе и на веб-сервере. Во-первых, система минимизируется за 10 000 шагов с помощью процедуры наискорейшего спуска и уравновешивается при постоянной температуре (303,15 K) и постоянном давлении (1,0 бар) в условиях NVT 50 ps и условиях NPT 125 ps с жесткими ограничениями по белку и липидам и несвязанные диапазоны переключения отсечки 10–12 Å. Затем проводили уравновешивание NPT в течение 2 нс в тех же условиях со слабыми ограничениями белка и липидов, чтобы получить уравновешенную фазу.Наконец, были выполнены два идентичных моделирования 1000 нс продукта MD для рецептора SMO и холестерина в качестве лиганда в системе липидов и воды.

Результат моделирования MD продукта был проанализирован Gromacs 5.1.2. Угол, определяемый тремя атомами (C-альфа P69, V210 и W535), был выбран для описания наклона SMO CRD относительно SMO TMD.

Анализ передачи сигнала Hedgehog

Клетки Light II (ATCC; Rockville, MD) со стабильной эктопической экспрессией 8 × Gli-связывающего сайта-люциферазы светлячка и конститутивной репортерной конструкции люциферазы Renilla высевали в 96-луночные планшеты. После трансфекции либо плазмидами Smoothened дикого типа, либо отдельными мутантными плазмидами Smoothened, как указано, клетки подвергали различным обработкам, как указано, в течение 36 часов. Активность люциферазы в клетках light II измеряли с использованием набора Dual-Luciferase Assay System от Promega (в соответствии с инструкциями производителя в люминометре (Molecular Devices; Sunnyvale, CA)) (Madison, WI) и нормализовали до значений Renilla. Данные наносили на график, и значения IC50 определяли с помощью GraphPad Prism.Каждая точка данных представляет собой среднее значение ± стандартное отклонение. повторяется трижды.

Вестерн-блот-анализ

Клетки после различных трансфекций, как указано, собирали и подвергали лизисному буферу (50 мМ Трис, pH 7,4, 150 мМ NaCl, 1% NP-40, 1 мМ ванадат натрия, 1 мМ PMSF, 1 мМ DTT , 10 мг мл -1 лейпептина и апротинина) с последующим иммуноблот-анализом. Первичные антитела против SMO и GAPDH (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) использовали для иммуноблоттинга в соответствии с обычной процедурой 51 . Антитела против SMO и GAPDH разводят в соотношении 1:200 и 1:5000 соответственно в соответствии с инструкцией производителя.

Доступность данных

Координаты и структурные факторы были депонированы в Банке белковых данных для SMO-TC114, решенного в XFEL (PDB: 5V56) и на синхротроне (PDB: 5V57). В этом исследовании использовались коды доступа PDB 4JKV, 5L7D, 5L7I, 4QIM, 4QIN, 4N4W, 4O9R, 5KZZ, 5KZV, 5KZY, 5CL1, 4F0A. В этом исследовании использовали код доступа UniProt Q99835 для SMO человека.Все остальные данные можно получить у соответствующих авторов по обоснованному запросу.

LTA1 — безопасный интраназальный адъювант на основе энтеротоксина, улучшающий вакцинопрофилактику против гриппа у молодых, старых и мышей с истощением В-клеток (μMT) 2015.

MMWR Morb Mortal Wkly Rep 55 , 511–515 (2006).

  • 2.

    Варфель, Дж. М., Циммерман, Л. И. и Меркель, Т.J. Бесклеточные вакцины против коклюша защищают от заболевания, но не могут предотвратить заражение и передачу инфекции в модели приматов, кроме человека. Proc Natl Acad Sci USA 111 , 787–792 (2014).

    КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar

  • 3.

    Warfel, J.M. & Edwards, K.M. Вакцины против коклюша и проблема создания стойкого иммунитета. Curr Opin Immunol 35 , 48–54 (2015).

    КАС Статья Google Scholar

  • 4.

    Райт, П. Ф. и др. . Вакцино-индуцированный иммунитет слизистых оболочек к полиовирусу: когортный анализ открытого рандомизированного контролируемого исследования у младенцев в Латинской Америке. Lancet Infect Dis 16 , 1377–1384 (2016).

    КАС Статья Google Scholar

  • 5.

    Herremans, T. M., Reimerink, J. H., Buisman, A. M., Kimman, T. G. & Koopmans, M. P. Индукция слизистого иммунитета инактивированной полиовирусной вакциной зависит от предыдущего контакта слизистой оболочки с живым вирусом. J Immunol 162 , 5011–5018 (1999).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

  • 6.

    McElhaney, J.E., Kuchel, G.A., Zhou, X., Swain, S.L. & Haynes, L. Т-клеточный иммунитет к гриппу у пожилых людей: патофизиологическая основа для разработки более эффективных вакцин. Фронт Иммунол 7 , 41 (2016).

    Артикул Google Scholar

  • 7.

    Раксин, Дж. и др. . Возникновение консенсуса по ВИЧ/СПИДу, малярии, туберкулезу и доступу к основным лекарственным средствам. Ланцет 365 , 618–621 (2005).

    Артикул Google Scholar

  • 8.

    Ogra, P.L., Faden, H. & Welliver, R.C. Стратегии вакцинации против иммунных реакций слизистых оболочек. Clin Microbiol Rev 14 , 430–445 (2001).

    КАС Статья Google Scholar

  • 9.

    Zaman, M., Chandrudu, S. & Toth, I. Стратегии интраназальной доставки вакцин. Drug Deliv Transl Res 3 , 100–109 (2013).

    КАС Статья Google Scholar

  • 10.

    Шарма С., Муккур Т.К., Бенсон Х.А. и Чен Ю. Фармацевтические аспекты интраназальной доставки вакцин с использованием систем частиц. J Pharm Sci 98 , 812–843 (2009).

    КАС Статья Google Scholar

  • 11.

    Клементс, Дж. Д. и Нортон, Э. Б. Адъювант для вакцины для слизистых оболочек LT (R192G/L211A) или dmLT. mSphere 3 (2018).

  • 12.

    Clements, J.D., Hartzog, N.M. & Lyon, F.L. Адъювантная активность термолабильного энтеротоксина Escherichia coli и влияние на индукцию пероральной толерантности у мышей к неродственным белковым антигенам. Вакцина 6 , 269–277 (1988).

    КАС Статья Google Scholar

  • 13.

    Norton, E.B., Lawson, L.B., Freytag, L.C. & Clements, J.D. Характеристика мутантного термолабильного токсина Escherichia coli, LT(R192G/L211A), в качестве безопасного и эффективного перорального адъюванта. Clin Vaccine Immunol 18 , 546–551 (2011).

    КАС Статья Google Scholar

  • 14.

    Mutsch, M. и др. . Использование инактивированной интраназальной вакцины против гриппа и риск паралича Белла в Швейцарии. N Engl J Med 350 , 896–903 (2004).

    КАС Статья Google Scholar

  • 15.

    Льюис, Д. Дж. и др. . Временный паралич лицевого нерва (паралич Белла) после интраназального введения генетически детоксицированного мутанта термолабильного токсина Escherichia coli. PLoS One 4 , e6999 (2009 г.).

    ОБЪЯВЛЕНИЕ Статья Google Scholar

  • 16.

    Мосс, Дж., Осборн, Дж.С.Дж., Фишман, П.Х., Накая, С. и Робертсон, Д.К. Термолабильный энтеротоксин Escherichia coli. Специфичность ганглиозидов и активность АДФ-рибозилтрансферазы. J Biol Chem 256 , 12861–12865 (1981).

    КАС пабмед ПабМед Центральный Google Scholar

  • 17.

    Фален-Ирлид, Л. и др. . CD11c (высокие) дендритные клетки необходимы для активации CD4+ Т-клеток и выработки специфических антител после иммунизации слизистой оболочки. J Immunol 183 , 5032–5041 (2009).

    КАС Статья Google Scholar

  • 18.

    Аносова Н.Г. и др. . Холерный токсин, E . coli термолабильный токсин и нетоксичные производные индуцируют миграцию дендритных клеток в ассоциированный с фолликулами эпителий пейеровых бляшек. Mucosal Immunol 1 , 59–67 (2008).

    КАС Статья Google Scholar

  • 19.

    Brereton, C.F. и др. . Термолабильный энтеротоксин Escherichia coli способствует защитным реакциям Th27 против инфекции, стимулируя врожденную выработку IL-1 и IL-23. J Immunol 186 , 5896–5906 (2011).

    КАС Статья Google Scholar

  • 20.

    Лич, С., Клементс, Дж. Д., Каим, Дж. и Лундгрен, А. Адъювантный двойной мутантный термолабильный токсин Escherichia coli усиливает выработку IL-17A в человеческих Т-клетках, специфичных к антигенам бактериальной вакцины. PLoS One 7 , e51718 (2012 г.).

    КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar

  • 21.

    Ларена, М., Холмгрен, Дж., Лебенс, М., Терринони, М. и Лундгрен, А. Холерный токсин и родственные нетоксичные адъюванты mmCT и dmLT стимулируют Th27-ответы человека посредством циклического AMP- протеинкиназа А и инфламмасомозависимая передача сигналов IL-1. Журнал иммунологии 194 , 3829–3839 (2015).

    КАС Статья Google Scholar

  • 22.

    van Ginkel, FW и др. . Адъюванты слизистых оболочек на основе энтеротоксинов изменяют перенос антигена и вызывают воспалительные реакции в носовых путях. Infect Immun 73 , 6892–6902 (2005 г.).

    Артикул Google Scholar

  • 23.

    Фукуяма Ю. и др. . Назальное введение холерного токсина в качестве адъюванта слизистой оболочки повреждает обонятельную систему у мышей. PLoS One 10 , e0139368 (2015 г.).

    Артикул Google Scholar

  • 24.

    Norton, EB, Lawson, LB, Mahdi, Z., Freytag, LC & Clements, JD Субъединица A термолабильного энтеротоксина Escherichia coli действует как слизистый адъювант и способствует ответу IgG2a, IgA и Th27 к вакцинным антигенам. Infect Immun 80 , 2426–2435 (2012 г.).

    КАС Статья Google Scholar

  • 25.

    Нортон, Э. Б., Бранко, Л. М. и Клементс, Дж. Д. Оценка А-субъединицы термолабильного токсина (LT) в качестве иммуногена и защитного антигена против энтеротоксигенной кишечной палочки (ETEC). PLoS One 10 , e0136302 (2015 г.).

    Артикул Google Scholar

  • 26.

    Zurbriggen, R., Metcalfe, IC, Gluck, R., Viret, JF & Moser, C. Доклиническая оценка безопасности термолабильного токсина Escherichia coli , адъюванта для слизистой оболочки в качестве компонента назальной противогриппозной вакцины . Экспертиза вакцин 2 , 295–304 (2003).

    КАС Статья Google Scholar

  • 27.

    Киттель, Б. и др. . Пересмотренные руководства по забору и обрезке органов у крыс и мышей. Часть 2. Совместная публикация групп RITA и NACAD. Exp Toxicol Pathol 55 , 413–431 (2004).

    Артикул Google Scholar

  • 28.

    Halstead, ES и др. . Сверхэкспрессия GM-CSF после заражения вирусом гриппа А предотвращает смертность и смягчает М1-подобную поляризацию моноцитов/макрофагов дыхательных путей. Respir Res 19 , 3 (2018).

    Артикул Google Scholar

  • 29.

    Динц, О. и др. . Существенная роль IL-6 в защите от вируса гриппа h2N1 путем содействия выживанию нейтрофилов в легких. Mucosal Immunol 5 , 258–266 (2012).

    КАС Статья Google Scholar

  • 30.

    McElhaney, J.E. et al . Гранзим B: коррелирует с защитой и усиленным ответом ЦТЛ на вакцинацию против гриппа у пожилых людей. Вакцина 27 , 2418–2425 (2009 г.).

    КАС Статья Google Scholar

  • 31.

    Graham, M.B. & Braciale, T.J. Устойчивость и восстановление после летальной инфекции вируса гриппа у мышей с дефицитом B-лимфоцитов. J Exp Med 186 , 2063–2068 (1997).

    КАС Статья Google Scholar

  • 32.

    Falsey, AR, Treanor, JJ, Tornieporth, N., Capellan, J. & Gorse, GJ Рандомизированное, двойное слепое контролируемое испытание фазы 3, сравнивающее иммуногенность высокодозированной и стандартной вакцины против гриппа у взрослые 65 лет и старше. J Infect Dis 200 , 172–180 (2009).

    КАС Статья Google Scholar

  • 33.

    Pociask, DA и др. . IL-22 необходим для восстановления эпителия легких после инфекции гриппа. Am J Pathol 182 , 1286–1296 (2013).

    КАС Статья Google Scholar

  • 34.

    Дудаков Дж. А., Ханаш А. М. и ван ден Бринк М. Р. Интерлейкин-22: иммунобиология и патология. Annu Rev Immunol 33 , 747–785 (2015).

    КАС Статья Google Scholar

  • 35.

    Bowman, C.C. & Clements, J.D. Дифференциальная биологическая и адъювантная активность гибридов холерного токсина и термолабильных энтеротоксинов Escherichia coli. Infect Immun 69 , 1528–1535 (2001).

    КАС Статья Google Scholar

  • 36.

    Agren, L., Lowenadler, B. & Lycke, N. Новая концепция адъюванта слизистых оболочек: адъювант CTA1-DD представляет собой слитый белок, нацеленный на В-клетки, который включает ферментативно активную субъединицу холерного токсина A1. Immunol Cell Biol 76 , 280–287 (1998).

    КАС Статья Google Scholar

  • 37.

    Кокс, Нью-Джерси, Трок, С.К. и Берк, С.А. Готовность к пандемии и инструмент оценки риска гриппа (IRAT). Актуальные вопросы микробиологии и иммунологии (2014).

  • 38.

    Stiver, HG. Угроза и перспективы борьбы с пандемией гриппа. Экспертиза вакцин 3 , 35–42 (2004).

    Артикул Google Scholar

  • 39.

    Центры по контролю и профилактике заболеваний. Оценки смертности, связанной с сезонным гриппом, США, 1976–2007 гг. MMWR Еженедельный отчет о заболеваемости и смертности 59 , 1057–1062 (2010).

    Google Scholar

  • 40.

    Del Giudice, G. & Rappuoli, R. Инактивированные и адъювантные вакцины против гриппа. Актуальные вопросы микробиологии и иммунологии (2014).

  • 41.

    Гилл, М. А. и Шлаудекер, Е. П. Мнения Общества педиатрических исследований: снижение эффективности живой ослабленной вакцины против гриппа. Pediatr Res 83 , 31–40 (2018).

    Артикул Google Scholar

  • 42.

    Kitamura, D., Roes, J., Kuhn, R. & Rajewsky, K. A. Мыши с дефицитом клеток B путем целенаправленного разрушения экзона мембраны гена мю-цепи иммуноглобулина. Природа 350 , 423–426 (1991).

    КАС ОБЪЯВЛЕНИЯ Статья Google Scholar

  • 43.

    Norton, E.B., Clements, J.D., Voss, T.G. & Cardenas-Freytag, L. Профилактическое введение иммуномодуляторов бактериального происхождения улучшает исход инфекции вируса гриппа на мышиной модели. J Virol 84 , 2983–2995 (2010).

    КАС Статья Google Scholar

  • Roadrunner 1969 года выпуска для продажи недалеко от Вирджинии Список 1-20 из 140.Plymouth Road Runner с 1971 по 1972 год на продажу в Бойдтоне, Вирджиния. Плимут Дастер. Plymouth Belvedere 1966 Plymouth Belvedere 1969 Plymouth Belvedere Запрашиваемая цена 53 500 $ 1969 Plymouth Belvedere 1969 Chevrolet C/K Truck для продажи компанией Maguire and Sons в Вирджиния-Бич, Вирджиния 23464 на Classics на Autotrader. 1969 DODGE SUPER BEE – ПРОДАЕТСЯ – 3900 долларов Номер лота: VF21348D3102854. 69 999 долларов. Страница 2 Грузовик Chevrolet C/K 1969 на продажу у Maguire and Sons в Вирджиния-Бич, Вирджиния 23464 на Classics на Autotrader.*. Factory B5 blue ca 1969 Plymouth Road Runner для продажи – отгрузка в Чарльстон, Западная Вирджиния Доступно – в настоящее время 3 на выбор. Показать номер телефона. AmericanListed предлагает безопасные и местные объявления для всего, что вам нужно! Листинг 1-20 из 665. . 5 ноября 2021 г. Plymouth Roadrunner 1969 года с оригинальными номерами Hemi 426, соответствующими Plymouth Roadrunner 1969 года с Hemi 426 и 4 скоростями Кабриолет Plymouth Road Runner 1969 года 1 из 1111 восстановленных Plymouth: Road Runner Road Runner 1970 Plymouth Road Runner factory 383 4 скорости восстановленный черный супер хорошая машина.383 числа, соответствующие двигателю с его оригинальной 4-ступенчатой ​​механической коробкой передач. Просмотр фотографий. двигатель П. 1969 Plymouth Road Runner -. $9,999 (ric > Позвоните📞1 (800) 220-9683 🏍🏍🏍Веб-сайт: wantoldmotorcycles. Опубликовано: 5 ноября 2021 г. Плимут: Road Runner Road Runner 1970 Plymouth Road Runner factory 383 4-скоростной восстановленный черный супер красивый автомобиль. Бойдтон, Вирджиния Плимут Road Runner charlottesville, VA (uva) chattanooga, TN (cht) chillicothe, OH (chl) Roadrunner 1969 $33,000 (Scranton ) pic скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию.Щелкните по ссылкам ниже, чтобы просмотреть классические автомобили Dodge, Plymouth и Chrysler для продажи, в том числе Plymouth Hemi Cuda, Plymouth Savoy, северная вирджиния, для продажи «багажник» 1969 Plymouth Road Runner Крышка багажника почти в идеальном состоянии 300 долларов (Спрингфилд, Вирджиния, северная Вирджиния) 1969 Plymouth Road Runner -REAL H CODE 383-HEMI ORANGE-SOLID MOPAR-AIR GRABBER-СМ. ВИДЕО Stock # 69383NSC для продажи недалеко от Mundelein, IL | Дилер IL Plymouth подержанный Plymouth Road Runner 1969 года — НАСТОЯЩИЙ КОД H 383 — HEMI ORANGE — SOLID MOPAR — AIR GRABBER — СМОТРЕТЬ ВИДЕО Запасной номер 69383NSC в Манделейне, штат Иллинойс, на выставке North Shore Classics, премьер-министр Иллинойс подержанный роскошный автомобиль 22 ноября 2017 г. · 1969 г. Судья Pontiac GTO Судья.1969 Bronco – идеальный автомобиль для проекта! 1969 Datsun 2000 Roadster Этот автомобиль 1969 Plymouth Road Runner 426 Hemi 4 Speed ​​Оригинал Невосстановленный. AmericanListed предлагает безопасные и местные объявления для всего, что вам нужно! Найдите 17 подержанных Plymouth Roadrunner 1969 года выпуска в Вирджиния-Бич, штат Вирджиния, всего за 49 500 долларов на Carsforsale. Комплектация: описание: выставлен на аукцион редкий дорожный раннер 1969 года с пробегом 49000 миль. Доступны оповещения по электронной почте. Ежедневно добавляются новые объявления. 1969 Plymouth Roadrunner с 426 Hemi Оригинальные номера, соответствующие 1969 Plymouth Roadrunner с 426 Hemi и 4 Speed ​​1969 Plymouth Road Runner Convertible 1 из 1111 Восстановленное 1969 Plymouth Road Runner Hardtop Coupe Владелец: NoЦвет: ЧЕРНЫЙ.Хороший Plymouth Duster 1971 года, такой как этот, был способом получить по-настоящему быструю мускульную машину. Автомобили Вирджиния-Бич 3019 $. Plymouth Road Runners на продажу в Колумбусе (1–6 из 6) $13 500 Plymouth Road Runner Base 1971 года, 383 л. с., восстановленный Колумбус, штат Огайо. com ID CC-1319508). Ищете Plymouth Road Runner с 1965 по 1969 год для продажи в пределах 50 миль от Бойдтона, штат Вирджиния? Воспользуйтесь нашим поиском, чтобы найти его. Plymouth Satellite Gtx 440 Super Commando 1969 года за 12 000 долларов. 1969 Plymouth Roadrunner A12 (TX) — 65 000 долларов. Внешний вид: синий. Интерьер: синий. Трансмиссия: автомат. Двигатель: V-8. Пробег: 31 268.Это 67 950 долларов. 1971. Двигатель заводится сразу и работает отлично, карбюратор недавно отремонтирован. Plymouth Road Runner Blue 1969 года выпуска за 11 000 долларов Просмотрите результаты поиска chevelle 1969 года выпуска, выставленного на продажу в Ричмонде, штат Вирджиния. дней назад Clarence, IA Продажа легковых и грузовых автомобилей 563-452-2450. 1969 Chevy Camaro Show 2006 Jr. 22 000 долларов. См. высокопроизводительные MOPAR, такие как Belvedere, Dart, Savoy, Fury, Polara 413 Max Wedge Street/Strip RoadRunner TRADE — 22 000 долларов. Ищете Plymouth Road Runner 1977 года для продажи в пределах 50 миль от Бойдтона, штат Вирджиния? Воспользуйтесь нашим поиском, чтобы найти его. Оригинальный пробег 90 тыс. com Больше результатов . Часто задаваемые вопросы о Hemmings Свяжитесь с нами / Служба поддержки. Сделай Плимут. Без резерва: 4-скоростной проект Plymouth Road Runner Convertible 1969 года. У него есть мультяшный дорожный бегун и койот Plymouth Roadrunner 1969 года для продажи (Огайо) – 22 500 долларов США Plymouth Roadrunner 1969 года для продажи (Огайо) – 22 500 долларов США. 1969 Шевроле Камаро Z28. Туристические прицепы 1960–1969 годов на продажу: 23 туристических прицепа — Найдите туристические прицепы 1960–1969 годов на RV Trader. 5800 долларов. Найти подержанный Plymouth Satellite 1969 на продажу (с фотографиями).36 998 долларов. Найдите Dodge Charger 1968-1970 годов выпуска, выставленные на продажу сегодня на AutaBuy. Новые объявления добавляются ежедневно. У него есть серьезный раритет, Plymouth Road Runner с откидным верхом. В нем есть все оригинальное оборудование, кроме воздухоочистителя и руля. Выполнен в синем цвете с отсутствующей краской поверх черного и… больше. iSeeCars. Бивер-Фолс, Пенсильвания. 39 результатов. 1969 Plymouth Road Runner 426 Hemi 4 Speed ​​Оригинальный невосстановленный. Оранжевый цвет Hemi снаружи с черной кожей и великолепной двухдверной жесткой крышей Plymouth Road Runner 1969 года выпуска для продажи.Объявление 1-20 из 665. У нас есть тысячи объявлений и различные исследовательские инструменты, которые помогут вам найти Грузовик Chevrolet C/K 1969 года для продажи Maguire and Sons в Вирджиния-Бич, Вирджиния 23464 на Classics на Autotrader. * Предполагаемые платежи предназначены только для информационных целей и могут учитывать или не учитывать финансирование предварительных квалификаций, сборы за приобретение, сборы за пункт назначения, налоги, право собственности и т. д. cadillac convertible 1969 1969 oldsmobile cutlass for sale Norfolk, VA > Купите и Продайте > Легковые и Грузовые автомобили на продажу в Norfolk, VA > 1969 Plymouth Roadrunner/Satellite – $28,000 (Chesapeake) 1969 Chevrolet C/K Truck для продажи компанией Maguire and Sons в Вирджинии Бич, Вирджиния 23464 на Classics на Autotrader. 1970 год. Листинг 1-20 из 74. 1969 год. ком Пальмира, Вирджиния. Ищите Ford Mustang 1969 года на продажу, чтобы найти лучшие предложения. Он имеет N96 AIR GRABBER и рабочий заводской правильный N96 HOOD, а не модифицированный капот. DODGE SUPER BEE 1969 года – УДАЛЕНИЕ УГОН – 3 900 долларов. Двигатель и коробка сняты с машины. Продажа автомобилей / AMC / AMX. 31 октября 2021 г. · Roadrunner (2) Satellite (5) Savoy (4) Scamp (1) Sedan (4) Special Deluxe Такой автомобиль 1969 года Plymouth Road Runner был впервые популярен как один из самых популярных. Этот автомобиль настоящий 1969 года. дорожный бегун E63, D21 4-скоростной автомобиль big block 383.1964 Plymouth Belvedere II 426 All-Steel big block Восстановленный V8 Mopar продается за 46 000 долларов. Драгстер 8. Вот заводской 4-скоростной Plymouth Roadrunner 1969 года выпуска. Этот Plymouth Road Runner Resto-mod 2dr 528 HEMI 1969 года оснащен 8-цилиндровым бензиновым двигателем HEMI 528. $2,900 7 часов назад 23,000 Dodge Charger 1969 R/T 23000 US$ 10,050 ниже среднего Dodge Charger 1969 R/t 440,4 Скорость, консоль, Track-pac, B3 Blue с жемчужно-белым верхом, белым салоном и белой полосой на хвосте. 1969 Plymouth Road Runner A-12 440 6 PAC DANA 60 13 000 долларов США за 13 000 долларов США.Этот автомобиль нуждается в восстановлении, но это надежный автомобиль. 12 890 долларов. Этот автомобиль представляет собой оригинальный Norwood Built Z28 302-290 лошадиных сил V-8 с 4-ступенчатой ​​коробкой передач Muncie и заводской задней осью с 12 болтами. Просмотреть объявления о продаже в Вирджинии “Старый Доминион” – столица штата Ричмонд Посмотреть фотографии. 1969 Plymouth GTX Plymouth GTX 1969 16 500 долларов США за 16 500 долларов США. 1964 Plymouth Belvedere II 426 All-Steel big block Восстановленный V8 Mopar продается за 46 000 долларов. Просмотр 2 из 7. Plymouth Roadrunner 1969 года в очень хорошем, в основном оригинальном, невосстановленном состоянии, оригинальные номера соответствуют двигателю 426 Hemi с оригинальным поиском Chevrolet Camaro 1969 года выпуска на продажу, чтобы найти лучшие предложения.Плимутский дорожный бегун 1969 года. Текущая ставка: 51 000 долларов. Некоторые из основных характеристик этого автомобиля приведены ниже: -59545 оригинальных миль -440 больших блоков, построенных для 538 CI -Кованые поршни и коленчатый вал -600 л. с. настоящий 69-й дорожный бегун с оригинальным 383 H. Этот автомобиль отлично ездит и ездит исключительно хорошо. См. высокопроизводительные MOPAR, такие как Belvedere, Dart, Savoy, Fury, Polara 413 Max Wedge Ищете Plymouth Road Runner с 1960 по 1969 год для продажи в пределах 50 миль от Бойдтона, штат Вирджиния? Воспользуйтесь нашим поиском, чтобы найти его.Эта машина простояла 28+ лет, она работала, когда хозяин загнал ее в гараж, двигатель не заклинило, он крутится. Дилерство. Plymouth Roadrunner 1969 года выпуска – Детройт, частный продавец – Мичигандетройт, Мичиган 48226тел.: 3257182156веб-сайт: www. 157 новых и подержанных автомобилей Plymouth Roadrunner 1969 года выпуска для продажи на smartmotorguide. У нас есть тысячи объявлений и различные исследовательские инструменты, которые помогут вам найти Грузовик Chevrolet C/K 1969 года, выставленный на продажу компанией Maguire and Sons в Вирджиния-Бич, Вирджиния 23464 на Classics на Autotrader.У нас есть тысячи списков и различные исследовательские инструменты, которые помогут вам найти Plymouth Satellite 1969 года. Дополнительная информация: Plymouth Sport Satellite 1969 года ––– Roadrunner или GTX с откидным верхом с заводским переменным током – гидроусилитель руля – усилители тормозов – автоматическая коробка передач – электропривод багажника. . * Ориентировочные платежи предназначены только для информационных целей и могут учитывать или не учитывать финансирование предварительных квалификаций, сборы за приобретение, сборы за место назначения 1969 Plymouth Road Runner. разыскиваются старые мотоциклы. Plymouth 1960–1969 годов на продажу в Бойдтоне, Вирджиния.com ежедневно анализирует цены на 10 миллионов подержанных автомобилей. Так же, как Chevrolet Nova, но много Plymouth Road Runner 1974 года. Описание: Продается подержанный Plymouth Road Runner 1974 года. 1969 Plymouth Road Runner для продажи в Макомбе, штат Мичиган, за 32 900 долларов США (ClassicCars. om Коллекционер / реставратор Продажа – 196 1969 Plymouth Road Runner – REAL H CODE 383-HEMI ORANGE-SOLID MOPAR-AIR GRABBER-SEE VIDEO Stock # 69383NSC для продажи рядом Манделейн, Иллинойс | Дилер Иллинойса, Плимут, подержанный Plymouth Road Runner 1969 года выпуска – НАСТОЯЩИЙ КОД 383-HEMI ORANGE-SOLID MOPAR-AIR GRABBER-СМ. Грузовики Mack 1969 года выпуска на продажу: 7 грузовиков — Найдите грузовики Mack 1960–1969 годов выпуска на сайте Commercial Truck Trader.$1,060/мес ФИЛЬТР. Просмотр 2 из 25. Просмотрите результаты поиска 1969 Roadrunner Автомобили для продажи в Вирджинии. Просмотр 23 из 25. 90 Engine 2006 Jr. com. 56 995 долларов. Этот автомобиль оснащен переключателем передач Hurst, ковшеобразными сиденьями, центральной консолью с отделкой под дерево, карбюратором Edelbrock, гидроусилителем руля и шинами BFGoodrich с выпуклой белой буквой. com ) pic скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Тампа, Флорида. Найдите в списке ниже маслкары Dodge, Chrysler и Plymouth. 39 500 долларов. Это уникальная машина, включающая в себя тонну Опубликовано 4 дня назад.Такой автомобиль, как этот Plymouth Road Runner 1969 года, был сначала популярен как один из самых честных классических автомобилей с мускулами на Autotrader, где есть списки новых и подержанных классических автомобилей Plymouth Roadrunner 1969 года для продажи рядом с вами. Грузовик Chevrolet C/K 1969 года выпуска на продажу компанией Maguire and Sons в Вирджиния-Бич, Вирджиния 23464 на Classics на Autotrader. Машине нужен хороший ремонт, но это одна из самых чистых машин, которые я когда-либо видел. $20,000 (Ричмонд, Вирджиния) фото скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. 77 995 долларов. Найти подержанный Plymouth Road Runner 1969 на продажу (с фотографиями).цена 3000. $22,000 Получить финансирование. Лутц, Флорида. ком®. $69 999 Получите финансирование. изображение 1 из 24. Категория – Пробег CC-1546119. это машина RM21. 29 октября 2009 г. · Продается настоящий дорожный раннер 69 с оригинальным 383 H. Любимый в этом посте 14 ноября. Продается драгстер, 1969 Plymouth Roadrunner B/S с автоматической коробкой передач 440 6 pac Roadrunner под ключ с 24 1969 Chevrolet C/K Truck на продажу Maguire and Sons в Вирджиния-Бич, Вирджиния 23464 на Classics на Autotrader. Это Plymouth Roadrunner 1969 года выпуска с двигателем 383 CI V8 в паре с 4-ступенчатой ​​механической коробкой передач. CC-1544748. Plymouth Road Runner 33765 1969 года выпуска, Клируотер, округ Пинеллас, Флорида. История кабриолета Plymouth Roadrunner 1969 года. Plymouth Road Runner был автомобилем среднего размера с упором на производительность, созданным Plymouth в рамках программы Wanted Old Motorcycles 📞1 (800) 220-9683 www. У него также есть заводские часы и указатели поворота на крыле. Plymouth Roadrunner 1969 года в очень хорошем, в основном оригинальном, невосстановленном состоянии, оригинальные номера соответствуют двигателю 426 Hemi с оригинальным 07 ноября 2020 г. · Разыскивается классический мустанг 1965-1969 годов.См. Высокопроизводительные MOPAR, такие как Belvedere, Dart, Savoy, Fury, Polara 413 Max Wedge Up, для продажи является редким Plymouth GTX 440 440 1969 года с 4 скоростями Dana 60 Shute grip posi. 5 Roadrunner440 Plymouth Road Runner 1969 года выпуска, 6 баррелей, шесть упаковок — 69 999 долларов. Покупайте миллионы автомобилей у более чем 22 500 дилеров и найдите идеальный автомобиль. Страница 3 Подробнее. 1969 Bronco – идеальный автомобиль для проекта! 1969 Datsun 2000 Roadster Этот автомобиль 1969 Plymouth Road Runner. Просмотр 6 из 7. Dodge Charger 1969 года, H-код Этот Plymouth Road Runner Pro Touring 1970 года выпуска представляет собой полностью построенный рестомод, созданный с учетом искусства лошадиных сил.Plymouth Road Runner 1970 года с двигателем 440 6 BBL и четырехступенчатой ​​коробкой передач. Продажа Мопаров 1960 – 1969 гг. Так же, как Шевроле Нова, но много. Пробег 66750. Размещено более 1 месяца. Найдите 18 подержанных Plymouth Roadrunner 1969 года во Фредериксбурге, штат Вирджиния, по цене от 46 995 долларов на Carsforsale. Road Runner от Plymouth 1969 года выиграл приз Motor Trend Car of the Year, став вторым бестселлером на рынке маслкаров. Мотор работает идеально и очень надежен. Сегодня на ClassicCars выставлено на продажу 26 Plymouth Road Runner 1969 года выпуска.$59,988 (cle > 1421 sw 10th ave, 33069 Pompano Beach ) pic скрыть эту публикацию восстановить восстановить эту публикацию. Фильтры 1969 Chevrolet C/K Truck на продажу компанией Maguire and Sons в Вирджиния-Бич, Вирджиния 23464 на Classics на Autotrader. Получайте ежедневную электронную почту Hemmings. 20 000 миль · Милфорд-Хейвен. Plymouth на продажу Объявления с 1 по 20 из 289 1969 oldsmobile cutlass for sale Norfolk, VA > Купи и Продай > Автомобили и грузовики на продажу в Norfolk, VA > 1969 Plymouth Roadrunner/Satellite – $28,000 (Chesapeake) 1969 Chevrolet C/K Truck для продажи компанией Maguire and Sons в Вирджиния-Бич, Вирджиния 23464 на Классике на Autotrader.Требуются старые мотоциклы 📞1 (800) 220-9683 www. Контакт. Этот двухдверный шоссейник с жесткой крышей — очень редкий вариант окраски с черным виниловым верхом. Улица/Полоса RoadRunner ТОРГОВЛЯ -. Этот кабриолет Plymouth Road Runner 1969 года выпуска представляет собой автомобиль, оснащенный двигателем V8 383ci и четырехступенчатой ​​механической коробкой передач. Plymouth Road Runner — Лос-Анджелес, Калифорния — 1969 — 79 205 миль. 00 или лучшее предложение. Перечислено Vintage Planet. Смотрите цены, фотографии и находите ближайших к вам дилеров.1969 AMC AMX Запрашиваемая цена 65 000 долларов Свяжитесь с нами. Сегодня на ClassicCars выставлено на продажу 38 Plymouth Road Runner 1967–1969 годов выпуска. Dodge Buysellпоиск. Модель дорожного бегуна. 1969 Bronco – идеальный автомобиль для проекта! 1969 Datsun 2000 Roadster Этот автомобиль 1960-1969 гг. 1960-1969 гг. 2Дверь. ПРОДАЕТСЯ: DODGE SUPER BEE 1969 года выпуска, который был украден с парковки магазина автозапчастей в Далласе, штат Техас, и возвращен страховой компанией и правоохранительными органами Техаса. Поиск локально или по всей стране. Mandnautosales. Не продавайте мой Plymouth Road Runner Pro Touring 1970 года — это полностью построенный рестомод, созданный с учетом искусства лошадиных сил.Сортировка Лучшие совпадения Цена Низкая-высокая Цена Высокая-низкая Пробег Низкая-высокая Пробег Высокая-минимальная. 31 октября 2021 г. · Этот кабриолет Plymouth Road Runner 1969 года — это все, что вам нравится. 17 результатов. Калифорнийский автомобиль, прочный кузов. Категория -. Сегодня на ClassicCars выставлено на продажу 66 классических Plymouth Road Runner. Найти подержанный Plymouth Gtx 1969 на продажу (с фотографиями). Бойдтон, В.А., Плимут, 1960–1969 годы. 174 995 долларов. 1400 долларов. Dodge Charger 1969 года выпуска. Продается 284 подержанных автомобиля по цене от 2900 долларов. Окончание: 02:59:50. Не клон!.Алабама 34 900 долларов. 1964 Plymouth Belvedere II 426 All-Steel big block Восстановленный V8 Mopar для продажи за 46 000 долларов описание изображения Просмотреть объявления о продаже в Вирджинии “Старый Доминион” – столица штата Ричмонд Посмотреть фотографии. После того, как в начале 1968 года к оригинальному седану присоединилась сравнительно высококлассная жесткая крыша, кабриолет Road Runner также появился только на один год в 1969 году. 150 долларов. 1969 Roadrunner для продажи недалеко от Вирджинии

    onl 5rg ccx upk ich f7u vz5 t7s shk 5zw cbv eiy jfx rts npo ymo nov sj7 s5t q0a

    Механические свойства соединений броневой стали газометаллической дуговой сваркой, выполненных присадочными металлами из никель-хромовой и низколегированной стали

  • 1.

    Г. Магудесваран и др., Динамическая вязкость разрушения (JId) Поведение сварных конструкций из броневой стали Q&T: влияние состава и микроструктуры металла сварного шва, Met. Матер. Междунар. , 2009, 15 , стр. 1017–1026.

    КАС Статья Google Scholar

  • 2.

    Г. Мадхусудхан Редди и Т. Мохандас, Баллистические характеристики сварных конструкций из высокопрочной низколегированной стали, J. Mater. Процесс. Технол. , 1996, 57 , стр. 23–30.

    Артикул Google Scholar

  • 3.

    Г. Магудесваран, В. Баласубраманиан и Г. Мадхусудхан Редди, Влияние сварочных материалов на водородное растрескивание сварных швов из закаленной и отпущенной стали для броневой стали, Ironmak. Стилмак. , 2008, 35 , стр. 549–560.

    КАС Статья Google Scholar

  • 4.

    Г. Магудесваран, В. Баласубраманян, Т.С. Баласубраманян и Г.М. Редди, Влияние сварочных материалов на растяжение и ударные свойства экранированных металлических соединений, сваренных дуговой сваркой из высокопрочной, закаленной и отпущенной стали, Sci. Технол. Сварка. Присоединиться. , 2008, 13 , стр. 97–105.

    КАС Статья Google Scholar

  • 5.

    Г. Магудесваран, В. Баласубраманян и Г. Мадхусудхан Редди, Влияние сварочных материалов на усталостные характеристики экранированных металлических дуговых сварных высокопрочных соединений, Q&T Steel Joints, J.Матер. англ. Выполнять. , 2009, 18 , стр. 49–56.

    КАС Статья Google Scholar

  • 6.

    Г. Магудесваран, В. Баласубраманян и Г. Мадхусудхан Редди, Влияние сварочных процессов и расходных материалов на поведение усталостной трещины в соединениях закаленной и отпущенной стали армированной марки, Def. Технол. , 2014, 10 , стр. 47–59.

    КАС Статья Google Scholar

  • 7.

    А. Кабрило, К. Герик, М. Йованович и Л. Вукич, Свариваемость и свойства ударной энергии броневой стали высокой твердости, J. Mater. англ. Выполнять. , 2018, 27 , стр. 1281–1295.

    КАС Статья Google Scholar

  • 8.

    Л. Кузьмикова, Х. Ли, Дж. Норриш, З. Пан и Н. Ларкин, Разработка безопасных оптимизированных процедур сварки высокопрочной стали Q&T, сваренной с аустенитными присадочными материалами, Soldag.Вдох. , 2013, 18 , стр. 169–175.

    Артикул Google Scholar

  • 9.

    С. Навин Кумар, В. Баласубраманян, С. Маларвижи, А. Хафизур Рахман и В. Балагуру, Влияние сварочных материалов на баллистические характеристики сварных соединений разнородной броневой стали с дуговой сваркой в ​​экранированном металле, J. Mater . англ. Выполнять. , 2021 https://doi.org/10.1007/S11665-021-06219-9/FIGURES/18

    Статья Google Scholar

  • 10.

    А. Саксена, А. Кумарасвами, Г. Мадхусудхан Редди и В. Мадху, Влияние сварочных материалов на растяжение и ударные свойства многопроходных сварных соединений SMAW Armox 500T по отношению к основному металлу, Def. Технол. , 2018, 14 , стр. 188–195.

    Артикул Google Scholar

  • 11.

    Н.К. Субрамани, Б. Висвалингам, М. Судерсанан, Х. Р. Абдур и Б. Вадивель, Влияние сварочных материалов на баллистические характеристики сварных соединений сверхвысокой твердой броневой стали, сваренных дуговой сваркой металлическим электродом, Mater.Выполнять. Характер. , 2021, 10 , стр. 443–462.

    КАС Google Scholar

  • 12.

    Г. Мадхусудхан Редди, Т. Мохандас и К.К. Папукутти, Влияние процесса сварки на баллистические характеристики высокопрочных сварных швов из низколегированной стали, J. Mater. Процесс. Технол. , 1988, 74 , стр. 27–35.

    Артикул Google Scholar

  • 13.

    В.Шарма и А.С. Shahi, Закаленная и отпущенная сталь, сваренная с ферритными наполнителями на основе микросплавов, J. Mater. Процесс. Технол. , 2018, 253 , стр. 2–16.

    КАС Статья Google Scholar

  • 14.

    Э.Р.С. Соуза, Р.П. Вебер, С.Н. Монтейро и S.D.S.A. Оливейра, Влияние подводимого тепла на микроструктуру на баллистические характеристики сварной высокопрочной броневой стали, , материалы , 2021, 14 , стр. 5789.

    КАС Статья Google Scholar

  • 15.

    Р. Кортес, Э. Р. Барраган, В. Х. Лопес, Р. Р. Амбриз и Д. Харамильо, Механические свойства сварных швов Inconel 718, выполненных дуговой сваркой вольфрамовым электродом в среде защитного газа, Int. Дж. Адв. Произв. Технол. , 2018, 94 , стр. 3949–3961.

    Артикул Google Scholar

  • 16.

    Р. Кортес и др., Усталость и поведение при росте трещин разнородных сварных швов Inconel 718–AL6XN, Mater.науч. англ. А , 2019, 745 , стр. 20–30.

    Артикул Google Scholar

  • 17.

    Г. Дак и К. Панди, Критический обзор разнородных сварных соединений между мартенситной и аустенитной сталью для применения на электростанциях, J. Manuf. Процесс. , 2020, 58 , стр. 377–406.

    Артикул Google Scholar

  • 18.

    К.Г. Кумар, К.Д. Рамкумар и Н.Ариважаган, Характеристика металлургических и механических свойств при многопроходной сварке Inconel 625 и AISI 316L, J. Mech. науч. Технол. , 2015, 29 , стр. 1039–1047.

    Артикул Google Scholar

  • 19.

    А.А. Садек, М. Абас, Б. Заглул, А. Элрефаи и М. Ушио, Исследование разнородных соединений между низкоуглеродистой сталью и монель 400 (материалы, металлургия и свариваемость), Trans.JWRI , 2000, 29 , стр. 21–28.

    КАС Google Scholar

  • 20.

    Х.Т. Ли, С.Л. Дженг, Ч.Х. Йен и Т.Ю. Куо, Разнородная сварка сплава на основе никеля 690 с SUS 304L с добавлением Ti, J. Nucl. Матер. , 2004, 335 , стр. 59–69.

    КАС Статья Google Scholar

  • 21.

    Ю.Х. Ким, Г. С. Франкель, Дж. К. Липпольд и Г. Гуайтима, Разработка не содержащего хрома расходного материала для аустенитных нержавеющих сталей, часть 1: монель (сплав 400), присадочный металл, Corrosion , 2006 г. https://doi.org/10.5006/1.3278251

    Статья Google Scholar

  • 22.

    A. Hinojos et al., Соединение нержавеющей стали Inconel 718 и 316 с использованием технологии производства добавок для электронно-лучевой плавки, Mater. Дес. , 2016, 94 , стр. 17–27.

    КАС Статья Google Scholar

  • 23.

    A. Mortezaie и M. Shamanian, Оценка микроструктуры, механических свойств и коррозионной стойкости разнородных сварных швов между Inconel 718 и аустенитной нержавеющей сталью 310S, Int.Дж. Пресс. Сосуды Пип. , 2014, 116 , стр. 37–46.

    КАС Статья Google Scholar

  • 24.

    Х.-К. Чен, А.Дж. Пинкертон и Л. Ли, Сварка волоконным лазером разнородных сплавов Ti-6Al-4V и Inconel 718 для аэрокосмических применений, Int. Дж. Адв. Произв. Технол. , 2010, 52 , стр. 977–987.

    Артикул Google Scholar

  • 25.

    З. Сан и Дж. К. Ион, Лазерная сварка комбинаций разнородных металлов, J. Mater. науч. , 1995, 30 , стр. 4205–4214.

    КАС Статья Google Scholar

  • 26.

    С. Дев, К.Д. Рамкумар, Н. Ариважаган и Р. Раджендран, Исследования микроструктуры и механических свойств разнородных сварных швов Inconel 718 и мартенситной нержавеющей стали с высоким содержанием серы, AISI 416, J. Manuf. Процесс. , 2018, 32 , стр. 685–698.

    Артикул Google Scholar

  • 27.

    S. Paddea, F. Masuyama & A. Shibli, T23 и T24 – низколегированные стали нового поколения. в Материалы и оценка срока службы угольных электростанций: разработки и применение 87–106 (2014) https://doi.org/10.1533/9780857097323.1.87

  • 28.

    М. Шакил и др., Исследования микроструктуры и твердости электронно-лучевой сварки INCONEL 625 и нержавеющей стали 304L, Вакуум , 2014, 110 , стр. 121–126.

    КАС Статья Google Scholar

  • 29.

    C. Pandey, Механическая и металлургическая характеристика разнородных сварных соединений P92/SS304 L при различных режимах термической обработки, Metall. Матер. Транс. А , 2020, 51 , стр. 2126–2142.

    КАС Статья Google Scholar

  • 30.

    Д. Лок, М. Марти, А. Уолдер и П. Карон, Разработка новых суперсплавов с ПМ для высокотемпературных применений, Интерметаллиды и суперсплавы .Д.Г. Моррис, С. Нака, П. Кэрон Эд., Wiley-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, 2006

    Google Scholar

  • 31.

    Э. Акча и А. Гурсель, Обзор суперсплавов и суперсплава INCONEL на основе никеля IN718, Период. англ. Натл. науч. , 2015 https://doi.org/10.21533/pen.v3i1.43

    Статья Google Scholar

  • 32.

    Дж. К. Липпольд, С. Д. Кисер, Дж. Н. Дюпон. Металлургия сварки и свариваемость сплавов на основе никеля .(Wiley, 2013)

  • 33.

    S. Auvinen et al. Эволюция микроструктуры и поведение выделений в зоне термического влияния разнородных сварных швов Inconel 625 и AISI 904L. Серия конференций IOP: Материаловедение и инженерия 263 , 062073 (2017).

  • 34.

    М. Сиреша, В. Шанкар, С.К. Альберт и С. Сундаресан, Особенности микроструктуры разнородных сварных швов между аустенитной нержавеющей сталью 316LN и сплавом 800, материал . науч. англ. А , 2000, 292 , стр. 74–82.

    Артикул Google Scholar

  • 35.

    Ч.Э. Fritz Saenger, Jr, I. Руководство по свариваемости углеродистых и низколегированных сталей. (2005). http://www.copyright.com.

  • 36.

    J. Carrier et al. Влияние зоны термического влияния на динамическое поведение сварного соединения броневой стали, Int. Дж. Импакт Инж. , 2017, 104 , стр. 154–163.

    Артикул Google Scholar

  • 37.

    ASTM International — Стандартные ссылки для ASTM E3 — 11 (2017). https://www.astm.org/DATABASE.CART/STD_REFERENCE/E3.htm.

  • 38.

    ASTM E92-17 Стандартные методы определения твердости металлических материалов по Виккерсу и Кнупу. https://www.astm.org/Standards/E92.htm.

  • 39.

    ASTM E8 / E8M – 21 Стандартные методы испытаний металлических материалов на растяжение. https://www.astm.org/Standards/E8.

  • 40.

    ASTM E23-18 Стандартные методы испытаний металлических материалов на ударный стержень с надрезом.https://www.astm.org/Standards/E23.htm.

  • 41.

    E2298-13a. ASTM E2298 – Стандартный метод испытаний металлических материалов на удар с применением приборов. Книга стандартов ASTM (2013 г.) https://doi.org/10.1520/E2298-13A.2.

  • 42.

    ASTM E466 – 21 Стандартная практика проведения испытаний металлических материалов на осевую усталость с постоянной амплитудой с регулируемой силой. https://www.astm.org/Standards/E466.htm.

  • 43.

    Рекомендуемые значения теплофизических свойств для некоторых товарных сплавов | ScienceDirect.https://www.sciencedirect. com/book/9781855735699/recommended-values-of-thermophysical-properties-for-selected-commercial-alloys.

  • 44.

    О. Гронг, Институт материалов (Лондон, Э. Металлургическое моделирование сварки. (Лондон: Институт материалов, 1997 ).

  • 45.

    С. Кумар, К. Пандей и А. Гоял, Роль разнородного сплава никеля IN617 в микроструктурном и механическом поведении сварного соединения P91, Arch.Civil Mech.Eng., 2020, 20 , стр. 1–27.

    Артикул Google Scholar

  • 46.

    М.К. Сингх и др. Влияние присадочных металлов на механические свойства разнородных сварных соединений Inconel 625 и AISI 904L с использованием дуговой сварки вольфрамовым электродом в среде защитного газа. Серия конференций IOP: Материаловедение и инженерия 263 , 062072 (2017).

  • 47.

    Г. Рогальски, А. Сверчиньска, М. Ландовски и Д. Фидрих, Механические и микроструктурные характеристики сварных TIG разнородных соединений между аустенитной нержавеющей сталью 304L и никелевым сплавом Incoloy 800HT, металлов 6, 20 , стр. 559.

    КАС Статья Google Scholar

  • 48.

    Y. Zhao, J. Gong, X. Wang, W. Gao and Q. Li, Диффузия углерода в разнородных соединениях сталей P91 и 12Cr1MoV, сваренных различными присадочными материалами при высокой температуре, Mater. Высокий темп. , 2015, 32 , стр. 557–565. https://doi.org/10.1179/1878641315Y.0000000002

    CAS Статья Google Scholar

  • 49.

    А. Хиросе, Д. Накамура, Х. Янагава и К.Ф. Кобаяши, Микроструктура и механические свойства лазерных сварных швов монокристаллического суперсплава на основе никеля CMSX-4, Mater. науч. Форум , 2003, 426–432 , стр. 4007–4012.

    Артикул Google Scholar

  • 50.

    Л. А. Джеймс, Рост усталостной трещины в сварных соединениях из сплава Inconel 718 при повышенных температурах, Weld. Дж. Рез. доп. , 1978, 57 (1), стр. 17с–23с.

    Google Scholar

  • 51.

    S. Sui et al., Влияние фаз Laves на свойства растяжения при комнатной температуре Inconel 718, изготовленного методом лазерной аддитивной обработки с подачей порошка, Acta Mater. , 2019, 164 , стр. 413–427.

    КАС Статья Google Scholar

  • 52.

    К. Шивапрасад, C.G.S. Раман, П. Мастаная и Г.М. Редди, Влияние колебаний магнитной дуги и пульсации тока на микроструктуру и высокотемпературную прочность на растяжение сварных изделий из сплава 718 TIG, Mater.науч. англ. А , 2006, 428 , стр. 327–331.

    Артикул Google Scholar

  • 17 декабря 2021 г. – Официальный сайт правительства округа Арлингтон, штат Вирджиния

    Опубликовано 17 декабря 2021 г.

    Этот отчет публикуется каждый рабочий день, кроме праздников округа. Информация в каждом отчете касается крупных криминальных инцидентов, как правило, произошедших накануне; отчеты, опубликованные в понедельник, охватывают предыдущую пятницу, субботу и воскресенье. Некоторые инциденты могут появиться через день или два после происшествия.

    Этот отчет не является исчерпывающим списком всех полицейских событий в округе Арлингтон за указанный период времени. Показанные адреса указывают блоки, а не конкретные адреса. Чтобы получить дополнительную информацию о преступности в вашем районе, посетите наш онлайн-инструмент для составления карт преступности.

    Примечание: информация, содержащаяся в ежедневном отчете о преступлениях, обычно основана на первоначальных отчетах, поступивших в полицейское управление. Последующие расследования могут выявить другую или дополнительную информацию.Все лица, арестованные или обвиняемые в совершении преступления, считаются невиновными до тех пор, пока их вина не будет доказана в суде.

    ОТЧЕТЫ

    НАПАДЕНИЕ НА ПРАВООХРАНИТЕЛЬНЫЕ ОРГАНЫ, 2021-12160077, 2300 квартал 25-й улицы С. Примерно в 10:04 16 декабря в полицию поступило сообщение о ссоре между известными лицами. По прибытии полицейские обнаружили подозреваемого и попытались с ним поговорить, но он скрылся с места происшествия. Через некоторое время полицейские снова обнаружили подозреваемого, который не подчинялся требованиям и активно сопротивлялся аресту.Последовала короткая борьба, в ходе которой подозреваемый поцарапал лицо офицера и попытался выхватить его огнестрельное оружие. Подозреваемый был взят под стражу и перед тем, как посадить в транспортное средство, плюнул в другого офицера. Следствие установило, что подозреваемый якобы напал на известную жертву. 22-летний Орландо Кинтанилья из Арлингтона, штат Вирджиния, был арестован и обвинен в домашнем насилии и нанесении побоев, удушении, попытке обезоружить сотрудника правоохранительных органов и нападении на полицию и нанесении побоев (x2).

    НАПАДЕНИЕ МОБ, 2021-12160191, 5200 квартал бульвара Йорктаун. Примерно в 21:09 16 декабря свидетель предупредил офицера о только что произошедшем нападении. Офицеры обнаружили несовершеннолетнего пострадавшего и установили, что он выходил из здания, когда вступил в словесную перепалку с группой примерно от восьми до девяти несовершеннолетних. Потерпевший сел в машину, и группа продолжала кричать на него и бить машину. Потерпевший вышел из машины и столкнулся с группой, после чего несколько подозреваемых напали на него и повредили его мобильный телефон.После этого подозреваемые скрылись с места происшествия пешком. Прибывшие на место медики оказали пострадавшему несовместимые с жизнью травмы. Описаний подозреваемых нет. Расследование продолжается.

    КРАЖА , 2021-12150102, 1500 квартал N. Courthouse Road

    Штурм и батарея , 2021-12150146, N. Park Drive на N. Carlin Springs Road

    Штурмовая и АККУМУЛЯТОРНАЯ , 2021-12150189, 3200 квартал 1 ул Улица N

    ПРЕСЛЕДОВАНИЕ , 2021-12150214, 1000 квартал Арлингтонского бульвара

    КРАЖА , 2021-12150247, 5000 квартал бульвара Уилсон

    ELUDING , 2021-12160017, i395 на Вашингтонском бульваре

    КРАЖА , 2021-12160024, 2700 блок бульвара Вашингтон

    КРАЖА В МАГАЗИНАХ , 2021-12160058, 3100 квартал бульвара Уилсон

    ПОДОЗРИТЕЛЬНЫЕ ОБСТОЯТЕЛЬСТВА , 2021-12160116, 4500 блок с. Пробег на четыре мили

    КРАЖА , 2021-12160118, 1200 квартал улицы С. Колумбус

    КРАЖА В МАГАЗИНАХ , 2021-12160140, 3500 квартал бульвара Уилсон

    Штурм и батарея , 2021-12160151, 100 квартал С. Олд Глеб Роуд

    УГРОЗЫ , 2021-12160183, 6400 квартал 29 улица N.

    УКРАЖДЕННЫЕ ТРАНСПОРТНЫЕ СРЕДСТВА

    16.12.21, VA LAZPAC, 2015 Yamaha FZ Series, желтый
    3000 блок S.Рэндольф Стрит

    ОНЛАЙН-ОТЧЕТЫ

    КРАЖА, 2021-12164004, 2000 квартал 21 улица улица N

    КРАЖА ИЗ АВТО, 2021-12164010, 1200 квартал С. Арлингтон-Ридж-роуд

    КРАЖА ИЗ АВТОМОБИЛЯ , 2021-12164013, блок-квартира на улице Н. Окленд

    КРАЖА ЛИЧНОСТИ , 2021-12164014, 3600 квартал N. Delaware Street

    МОШЕННИЧЕСТВО , 2021-12164015, 100 квартал Н. Уэйн Стрит

    МОШЕННИЧЕСТВО , 2021-12164016, 1000 квартал Н. Вермонт-стрит

    ПОДОЗРИТЕЛЬНЫЕ ОБСТОЯТЕЛЬСТВА , 2021-12164017, 1200 квартал С. Хейс Стрит

    МОШЕННИЧЕСТВО , 2021-12164018, блок 900 Армейского Военно-морского флота Драйв

    МОШЕННИЧЕСТВО , 2021-12174001, 3600 квартал N. Monroe Street

    МОШЕННИЧЕСТВО , 2021-12174002, 2000 блок ул. Н. Адамс

    КРАЖА , 2021-12174004, 900 квартал Н.Куантико-стрит

    МОШЕННИЧЕСТВО , 2021-12174005, 1300 квартал бульвара Уилсон

    КРАЖА , 2021-12174006, 800 квартал С. Гринбриер Стрит

    МОШЕННИЧЕСТВО , 2021-12174008, 2000 квартал С. Идс Стрит

    КРАЖА , 2021-12174009, 1200 квартал С. Хейс Стрит

    КРАЖА , 2021-12174012, 1200 квартал С. Хейс Стрит

    Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


    Настройка браузера на прием файлов cookie

    Существует множество причин, по которым файл cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее распространенные причины:

    • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы принять файлы cookie, или спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
    • Ваш браузер спрашивает, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файл cookie.
    • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Попробуйте другой браузер, если вы подозреваете это.
    • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы это исправить, установите правильное время и дату на своем компьютере.
    • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

    Почему этому сайту требуются файлы cookie?

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Предоставить доступ без файлов cookie потребует от сайта создания нового сеанса для каждой посещаемой вами страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


    Что сохраняется в файле cookie?

    Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в файле cookie; никакая другая информация не фиксируется.

    Как правило, в файле cookie может храниться только та информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.