Содержание

Аттестация гражданских служащих – online presentation

1. Статья 48  Федерального закона от 27 июля 2004 г. N 79-ФЗ “О государственной гражданской службе Российской Федерации” Аттестация гражданских слу

Статья 48 Федерального закона от 27
июля 2004 г. N 79-ФЗ “О государственной
гражданской службе Российской
Федерации”
Аттестация гражданских служащих
Аттестация гражданского служащего
проводится в целях определения его
соответствия замещаемой должности
При проведении аттестации
 
непосредственный руководитель гражданского
служащего представляет мотивированный отзыв
об исполнении гражданским служащим
должностных обязанностей за аттестационный
период. К мотивированному отзыву прилагаются
сведения о выполненных гражданским
служащим за аттестационный период
поручениях и подготовленных им проектах
документов, содержащиеся в годовых отчетах о
профессиональной служебной деятельности
гражданского служащего, а при необходимости
пояснительная записка гражданского служащего
на отзыв непосредственного руководителя.

Аттестация гражданского служащего
проводится один раз в три года.
Ранее указанного срока внеочередная
аттестация гражданского служащего может
проводиться после принятия в
установленном порядке решения:
1) о сокращении должностей гражданской
службы в государственном органе;
2) об изменении условий оплаты труда
гражданских служащих.
По соглашению сторон служебного контракта с
учетом результатов годового отчета о
профессиональной служебной деятельности
гражданского служащего также может
проводиться внеочередная аттестация
гражданского служащего.
При проведении аттестации учитываются
соблюдение гражданским служащим
ограничений, отсутствие нарушений запретов,
выполнение требований к служебному
поведению и обязательств, установленных
настоящим Федеральным законом.
Для проведения аттестации гражданских
служащих
правовым актом государственного органа
формируется аттестационная комиссия.
Состав аттестационной комиссии
формируется таким образом, чтобы была
исключена возможность возникновения
конфликта интересов, которые могли бы
повлиять на принимаемые аттестационной
комиссией решения.
В случае неявки гражданского
служащего на аттестацию без уважительных
причин или отказа гражданского служащего
от аттестации гражданский служащий
привлекается к дисциплинарной
ответственности.
По результатам аттестации аттестационной
комиссией принимается одно из следующих
решений:
•соответствует замещаемой должности
•соответствует замещаемой должности
гражданской службы и рекомендуется к
включению в кадровый резерв для замещения
вакантной должности гражданской службы в
порядке должностного роста
•соответствует замещаемой должности
гражданской службы при условии успешного
получения дополнительного профессионального
образования;
•не соответствует замещаемой должности
гражданской службы.
В течение одного месяца после проведения
аттестации по ее результатам издается
правовой акт государственного органа о том,
что гражданский служащий:
1) подлежит включению в кадровый резерв для
замещения вакантной должности гражданской
службы в порядке должностного роста;
2) направляется для получения
дополнительного профессионального
образования;
3) понижается в должности гражданской
службы и подлежит исключению из кадрового
резерва в случае нахождения в нем.
При отказе гражданского служащего от
получения дополнительного
профессионального образования или
перевода на другую должность гражданской
службы представитель нанимателя вправе
освободить гражданского служащего от
замещаемой должности и уволить его с
гражданской службы в соответствии с
настоящим Федеральным законом.
Гражданский служащий вправе
обжаловать результаты аттестации в
соответствии с настоящим Федеральным
законом.
Положение о проведении аттестации
государственных гражданских служащих
Российской Федерации утверждается
указом Президента Российской
Федерации.

208-ФЗ – Статья 48 – Компетенция общего собрания акционеров

1. К компетенции общего собрания акционеров относятся:

1) внесение изменений и дополнений в устав общества или утверждение устава общества в новой редакции;

2) реорганизация общества;

3) ликвидация общества, назначение ликвидационной комиссии и утверждение промежуточного и окончательного ликвидационных балансов;

4) определение количественного состава совета директоров (наблюдательного совета) общества, избрание его членов и досрочное прекращение их полномочий;

5) определение количества, номинальной стоимости, категории (типа) объявленных акций и прав, предоставляемых этими акциями;

6) увеличение уставного капитала общества путем увеличения номинальной стоимости акций или путем размещения дополнительных акций, если уставом общества в соответствии с настоящим Федеральным законом увеличение уставного капитала общества путем размещения дополнительных акций не отнесено к компетенции совета директоров (наблюдательного совета) общества;

7) уменьшение уставного капитала общества путем уменьшения номинальной стоимости акций, путем приобретения обществом части акций в целях сокращения их общего количества, а также путем погашения приобретенных или выкупленных обществом акций;

8) образование исполнительного органа общества, досрочное прекращение его полномочий, если уставом общества решение этих вопросов не отнесено к компетенции совета директоров (наблюдательного совета) общества, а также случаи, предусмотренные пунктами 6 и 7 статьи 69 настоящего Федерального закона;

9) избрание членов ревизионной комиссии общества и досрочное прекращение их полномочий, если в соответствии с уставом общества наличие ревизионной комиссии является обязательным;

10) утверждение аудитора общества;

10. 1) выплата (объявление) дивидендов по результатам первого квартала, полугодия, девяти месяцев отчетного года;

11) утверждение годового отчета, годовой бухгалтерской (финансовой) отчетности общества, если уставом общества решение этих вопросов не отнесено к компетенции совета директоров (наблюдательного совета) общества;

11.1) распределение прибыли (в том числе выплата (объявление) дивидендов, за исключением выплаты (объявления) дивидендов по результатам первого квартала, полугодия, девяти месяцев отчетного года) и убытков общества по результатам отчетного года;

12) определение порядка ведения общего собрания акционеров;

13) избрание членов счетной комиссии и досрочное прекращение их полномочий;

14) дробление и консолидация акций;

15) принятие решений о согласии на совершение или о последующем одобрении сделок в случаях, предусмотренных статьей 83 настоящего Федерального закона;

16) принятие решений о согласии на совершение или о последующем одобрении крупных сделок в случаях, предусмотренных статьей 79 настоящего Федерального закона;

17) приобретение обществом размещенных акций в случаях, предусмотренных настоящим Федеральным законом;

18) принятие решения об участии в финансово-промышленных группах, ассоциациях и иных объединениях коммерческих организаций;

19) утверждение внутренних документов, регулирующих деятельность органов общества;

19.

1) принятие решения об обращении с заявлением о листинге акций общества и (или) эмиссионных ценных бумаг общества, конвертируемых в акции общества, если уставом общества решение указанного вопроса не отнесено к компетенции совета директоров (наблюдательного совета) общества;

19.2) принятие решения об обращении с заявлением о делистинге акций общества и (или) эмиссионных ценных бумаг общества, конвертируемых в его акции;

20) решение иных вопросов, предусмотренных настоящим Федеральным законом.

2. Вопросы, отнесенные к компетенции общего собрания акционеров, не могут быть переданы на решение исполнительному органу общества, если иное не предусмотрено настоящим Федеральным законом.

Вопросы, отнесенные к компетенции общего собрания акционеров, не могут быть переданы на решение совету директоров (наблюдательному совету) общества, за исключением вопросов, предусмотренных настоящим Федеральным законом. При передаче вопросов, отнесенных к компетенции общего собрания акционеров, в компетенцию совета директоров (наблюдательного совета) общества у акционеров не возникает право требовать выкупа акций, предусмотренное статьей 75 настоящего Федерального закона.

2.1. Уставом непубличного общества может быть предусмотрена передача в компетенцию совета директоров (наблюдательного совета) общества вопросов, отнесенных настоящим Федеральным законом к компетенции общего собрания акционеров, за исключением вопросов, предусмотренных подпунктами 1 – 5, 11.1, 16 и 19 пункта 1 настоящей статьи. Положения, связанные с такой передачей, могут быть предусмотрены уставом непубличного общества при его учреждении либо внесены в его устав, изменены и (или) исключены из его устава по решению, принятому общим собранием акционеров единогласно всеми акционерами общества.

3. Общее собрание акционеров публичного общества не вправе рассматривать и принимать решения по вопросам, не отнесенным к его компетенции настоящим Федеральным законом.

4. Уставом непубличного общества может быть предусмотрено отнесение к компетенции общего собрания акционеров вопросов, не отнесенных к его компетенции настоящим Федеральным законом. Соответствующие положения могут быть предусмотрены уставом непубличного общества при его учреждении либо внесены в его устав, изменены и (или) исключены из его устава по решению, принятому общим собранием акционеров единогласно всеми акционерами общества.

Положения статьи 48 закона №208-ФЗ используются в следующих статьях:
  • Статья 32 Права акционеров – владельцев привилегированных акций общества
    Размер дивиденда по привилегированным акциям с преимуществом в очередности получения дивидендов определяется в твердой денежной сумме или в процентах к номинальной стоимости таких акций. Привилегированные акции с преимуществом в очередности получения дивидендов не имеют ликвидационной стоимости и предоставляют акционерам – их владельцам право голоса на общем собрании акционеров только по вопросам, указанным в подпункте 3 пункта 1 статьи 48 настоящего Федерального закона. Привилегированные акции с преимуществом в очередности получения дивидендов не учитываются при подсчете голосов и при определении кворума для принятия решения по вопросам компетенции общего собрания акционеров, не указанным в подпункте 3 пункта 1 статьи 48 настоящего Федерального закона, в том числе в случаях, предусмотренных пунктами 4 и 5 настоящей статьи, а также по вопросам, решение по которым в соответствии с настоящим Федеральным законом принимается единогласно всеми акционерами общества.
    Открыть статью
  • Статья 47 Общее собрание акционеров
    Годовое общее собрание акционеров проводится в сроки, устанавливаемые уставом общества, но не ранее чем через два месяца и не позднее чем через шесть месяцев после окончания отчетного года. На годовом общем собрании акционеров должны решаться вопросы об избрании совета директоров (наблюдательного совета) общества, ревизионной комиссии общества, если в соответствии с уставом общества наличие ревизионной комиссии является обязательным, утверждении аудитора общества, вопросы, предусмотренные подпунктами 11 и 11.1 пункта 1 статьи 48 настоящего Федерального закона, а также могут решаться иные вопросы, отнесенные к компетенции общего собрания акционеров. Проводимые помимо годового общие собрания акционеров являются внеочередными. Открыть статью
  • Статья 49 Решение общего собрания акционеров
    3. Решение по вопросам, указанным в подпунктах 2, 6 и 14 – 19 пункта 1 статьи 48 настоящего Федерального закона, принимается общим собранием акционеров только по предложению совета директоров (наблюдательного совета) общества, если иное не установлено уставом общества. Открыть статью
  • Статья 50 Общее собрание акционеров в форме заочного голосования
    2. Общее собрание акционеров, повестка дня которого включает вопросы об избрании совета директоров (наблюдательного совета) общества, ревизионной комиссии общества, утверждении аудитора общества, а также вопросы, предусмотренные подпунктом 11 пункта 1 статьи 48 настоящего Федерального закона, не может проводиться в форме заочного голосования. Открыть статью
  • Статья 54 Подготовка к проведению общего собрания акционеров
    2. В повестку дня годового общего собрания акционеров должны быть обязательно включены вопросы об избрании совета директоров (наблюдательного совета) общества, утверждении аудитора общества, вопросы, предусмотренные подпунктами 11 и 11. 1 пункта 1 статьи 48 настоящего Федерального закона, а также вопрос об избрании ревизионной комиссии общества, если в соответствии с уставом общества наличие ревизионной комиссии является обязательным. Открыть статью
  • Статья 65 Компетенция совета директоров (наблюдательного совета) общества
    17.1) принятие решений об участии и о прекращении участия общества в других организациях (за исключением организаций, указанных в подпункте 18 пункта 1 статьи 48 настоящего Федерального закона), если уставом общества это не отнесено к компетенции исполнительных органов общества; Открыть статью
  • Статья 75 Выкуп акций обществом по требованию акционеров
    принятия общим собранием акционеров решения по вопросам, предусмотренным пунктом 3 статьи 7.2 и подпунктом 19.2 пункта 1 статьи 48 настоящего Федерального закона, а в непубличном обществе с числом акционеров более 500 по вопросу, предусмотренному пунктом 1 статьи 92. 1 настоящего Федерального закона, если они голосовали против принятия соответствующего решения или не принимали участия в голосовании. Открыть статью

Как воспользоваться «гаражной амнистией»? | Новости Иркутска, Иркутской области

Уже семь месяцев действует федеральный закон от 5 апреля 2021 года № 79-ФЗ, позволяющий зарегистрировать право собственности на гараж в упрощенном порядке. Нововведение получило в обиходе термин «гаражная амнистия», хотя касается оно не только самих гаражей, но и связанной с ними земли.

Под «гаражную амнистию» попадают постройки, возведенные до 30 декабря 2004 года, которые являются объектами капитального строительства, она не распространяется на самовольные постройки и подземные гаражи в многоэтажных зданиях, офисных комплексах. «Если предыдущий собственник имел право воспользоваться  «гаражной амнистией», то и нынешний собственник получает такое право. Кроме того, законодатель предусмотрел  возможность  применения положений амнистии наследниками  владельцев гаражей» – поясняет заместитель директора Кадастровой палаты по Иркутской области Евгения Бутакова.

Для того, чтобы воспользоваться «Гаражной амнистией», прежде всего нужно обратиться  в орган государственной власти или орган местного самоуправления, которые уполномочены  на предоставление земельных участков, с заявлением о предоставлении или образовании земельного участка под имеющимся гаражом.  Факт владения гаражом при этом нужно подтвердить документально. Например представить документы, подтверждающие длительное добросовестное использование гаража, ранее полученное решение о распределении гаража или документы из органов технической инвентаризации.

«В зависимости от того имеются ли сведения о гараже и  земельном участке под ним в Едином государственном реестре недвижимости, могут потребоваться технический план гаража, межевой план земельного участка, схема расположения земельного участка. За оформлением этих документов следует обратиться к кадастровому инженеру», – поясняет директор филиала КИРС СРО А КИ «Содружество» Юревичуте Светлана Видутисовна. При положительном результате рассмотрения предоставленных документов уполномоченный орган направляет документы в Росреестр для осуществления государственной регистрации прав гражданина, как на гараж, так и на земельный участок под ним. Также граждане могут самостоятельно зарегистрировать права на указанные объекты и получить выписки из Реестра недвижимости на гараж и земельный участок.

В Иркутской области на сегодняшний день в рамках «гаражной амнистии» уже оформлены права в отношении 246 гаражей, расположенных на земельных участках общей площадью 2 137 кв.м.  «Государственный кадастровый учет и государственная регистрация прав на объекты недвижимости, осуществляемые в соответствии с положениями закона о «гаражной амнистии» находятся на особом контроле, мы активно реализуем все мероприятия, которые могут помочь гражданам в минимальные сроки зарегистрировать свои права в упрощенном порядке» – отмечает заместитель руководителя Управления Росреестра по Иркутской области Оксана Викторовна Арсентьева.

Высокоэффективный кестеритовый солнечный элемент ACdTS на основе нового фотогальванического материала

https://doi.org/10.1016/j.jpcs.2021.110458Получить права и контент кестерит с буферным слоем, украшенным периодической нанопроволокой из благородного плазмонного металла.

• Оцениваются его оптоэлектронные свойства и эффективность поглощения, а также производительность SC.

• Зарегистрирована высокая эффективность преобразования, намного превышающая эффективность, обеспечиваемую обычными кестеритовыми тонкопленочными СЭ, изготовленными из кестерита.

•Наши результаты дают новый кандидат для улучшения электрических характеристик SC.

Abstract

Квазичастичные зонные структуры и оптические свойства кестерита ACdTS исследуются на основе расчетов из первых принципов, включая теорию эффектов многих тел, с использованием уравнения ГВ плюс Бете-Солпитера. В запрещенную зону GGA-Кона-Шэма были внесены значительные ГВ-квазичастичные поправки более 0,9 эВ. Наши расчеты также показывают, что кестерит ACdTS имеет небольшую энергию связи, проявляет оптическое поглощение в видимой области, высокую подвижность неосновных носителей и большую диффузию по длине, что делает этот материал многообещающим кандидатом для солнечных элементов. Основываясь на этих выводах, мы разработали и внедрили поглотитель ACdTS в структуру тонкопленочного солнечного элемента (TFSC). Новый кестеритовый солнечный элемент имеет высокий КПД 11,6% при низком дефиците выходного напряжения. Кроме того, предлагается стратегическое сочетание между подходом оптимизации роя частиц и TFSC ACdTS, украшенным периодическими нанопроволоками, для получения значительно улучшенных фотоэлектрических характеристик. Оптимизированная конструкция определяет новый путь для высокой эффективности преобразования 14%, что намного превышает эффективность, обеспечиваемую обычным кестеритом TFSC.

Ключевые слова

Ключевые слова

Многие-тело Теория возмущений

Оптоэлектронные Особенности

Периодические нановые

Kesterite

Kesterite

FDTD

Рекомендуемые статьи Статьи (0)

Просмотреть полный текст

© 2021 Опубликовано elsevier Ltd.

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

Возрастное снижение вестибулярной системы

Старение Dis. 2015 февраль; 6(1): 38–47.

Кафедра отоларингологии, Медицинский факультет, Токийский университет, Токио, Япония

* Корреспонденция должна быть адресована: Shinichi Iwasaki, MD.Кафедра отоларингологии медицинского факультета Токийского университета, 7-3-1 Хонго, Бункё-ку, Токио 113-8655, Япония. Электронная почта: [email protected]

Поступила в редакцию 19 ноября 2013 г.; Пересмотрено 27 января 2014 г .; Принято 28 января 2014 г.

Эта статья была процитирована другими статьями в PMC.

Abstract

Головокружение и нарушение равновесия являются одними из наиболее частых жалоб пожилых людей и вызывают растущую озабоченность в области общественного здравоохранения, поскольку они подвергают пожилых людей значительно более высокому риску падения. Хотя причины головокружения у пожилых людей многофакторны, периферическая вестибулярная дисфункция является одной из наиболее частых причин.Доброкачественное пароксизмальное позиционное головокружение является наиболее частой формой вестибулярной дисфункции у пожилых людей, за ней следует болезнь Меньера. Каждый фактор, связанный с поддержанием постуральной стабильности, ухудшается с возрастом. Возрастное ухудшение периферической вестибулярной функции было продемонстрировано количественными измерениями вестибулоокулярного рефлекса при тестировании вращения и вестибуло-колликового рефлекса при тестировании вестибулярных вызванных миогенных потенциалов. Было показано, что возрастное снижение вестибулярной функции коррелирует с возрастным уменьшением количества вестибулярных волосковых клеток и нейронов.Механизм возрастной потери клеток в вестибулярном эндооргане неясен, но считается, что важную роль могут играть генетическая предрасположенность и кумулятивный эффект окислительного стресса. Поскольку причины головокружения у пожилых людей многофакторны, лечение этого заболевания должно быть индивидуальным в соответствии с этиологией каждого человека. Установлено, что вестибулярная реабилитация эффективна при лечении как односторонней, так и двусторонней вестибулярной дисфункции. Также были разработаны различные протезы для улучшения постурального баланса у пожилых людей. Несмотря на то, что не существует медицинских методов лечения возрастной вестибулярной дисфункции, в будущем следует изучить новые методы лечения, такие как митохондриальные антиоксиданты или ограничение калорийности, которые были эффективны для предотвращения возрастной потери слуха.

Ключевые слова: старение, вестибулярный аппарат, падение, реабилитация

Головокружение и нарушение равновесия – хорошо известные проблемы пожилых людей. Популяционное исследование в США показало, что 24% людей старше 72 лет страдают головокружением [1].Головокружение и нарушение равновесия у пожилых людей вызывают растущую озабоченность общественного здравоохранения, поскольку пожилые люди, страдающие головокружением, имеют значительно более высокий риск случайных падений и последующих травм [2,3]. Падения являются основной причиной госпитализации и смерти от несчастных случаев среди пожилых людей. Несколько исследований показали, что пожилые люди с головокружением и нарушением равновесия в анамнезе подвержены более высокому риску падений [3–5]. Кроме того, головокружение и неустойчивость приводят к страху падения, что является сильным предиктором для тех, кто перенесет одно или несколько последующих падений [6,7].

Основная причина головокружения у пожилых людей сложна и многофакторна [8,9]. Постуральная стабильность поддерживается за счет интеграции соматосенсорных, зрительных и вестибулярных входов в центральную нервную систему, за которыми следуют выходы в опорно-двигательную систему. Головокружение и дисбаланс могут быть вызваны изменениями любого из факторов, связанных с системой равновесия, будь то сенсорного, зрительного, вестибулярного, неврологического или мышечного происхождения. Функция всех этих компонентов ухудшается с возрастом [10].

Возрастные изменения в системе поддержания постуральной стабильности. Постуральная стабильность поддерживается за счет интеграции соматосенсорных, зрительных и вестибулярных входов в центральную нервную систему, за которыми следует выход в костно-мышечную систему. Функция всех компонентов ухудшается с возрастом.

В этом обзоре основное внимание будет уделено клиническим характеристикам головокружения у пожилых людей и возрастным изменениям в периферической и центральной вестибулярной системе, а также будут представлены некоторые недавние данные о клеточном механизме старения и возможных стратегиях лечения головокружения и дисбаланса. у пожилых людей.

Распространенность головокружения и нарушения равновесия у пожилых людей

Головокружение и нарушение равновесия являются одной из наиболее частых жалоб пожилых людей. Распространенность колеблется примерно от 20% до 30%, в зависимости от определения головокружения и изучаемой популяции [1,11,12]. Популяционное исследование, проведенное в США, показало, что 24% людей старше 72 лет сообщали о эпизодах головокружения в течение предыдущих 2 месяцев, продолжавшихся не менее одного месяца [1]. Другое популяционное исследование в Соединенном Королевстве показало, что 30% людей старше 65 лет страдают головокружением [11]. Распространенность головокружения имеет тенденцию к увеличению с возрастом [1,11]. Поперечное исследование в Швеции показало, что число взрослых с головокружением увеличилось примерно до 50% у людей старше 85 лет [13].

Основные причины головокружения у пожилых людей сильно различаются [1,8,14–17]. Множество факторов, включая неврологические, сердечно-сосудистые, зрительные, вестибулярные и психологические проблемы, могут вызывать головокружение у пожилых людей. Предыдущие исследования сообщали о противоречивых результатах относительно этиологии головокружения в зависимости от принятых диагностических критериев и изучаемой популяции.Общепопуляционные исследования обычно выявляли причины головокружения в основном на основе опроса без проведения каких-либо клинических обследований. Опрос населения в Германии показал, что распространенность вестибулярного головокружения составила 14% среди населения старше 70 лет [14]. Их диагнозы были основаны на телефонных интервью медицинского персонала. Исследования в клинических условиях были предвзяты из-за типов клиник и проводимых медицинских осмотров. Проспективное исследование случай-контроль, проведенное в общей практике, в ходе которого проводились общие физические осмотры, показало, что 18% пациентов с головокружением в возрасте старше 60 лет имели периферические вестибулярные расстройства [8].С другой стороны, проспективное исследование в неврологической клинике, в котором проводились подробные нейроотологические исследования, показало, что периферическая вестибулярная дисфункция была основной причиной головокружения у 56% пациентов старше 50 лет [15]. Точно так же цереброваскулярные причины варьируют от 0% до 70% [8,18], а психиатрические причины — от 0% до 40% у пожилых пациентов с головокружением [8,15,19] в зависимости от проведенного клинического обследования. В нескольких исследованиях не удалось поставить конкретный диагноз, объясняющий симптомы примерно у 20-30% пожилых людей с головокружением [8,9,17].Belal и Glorig (1986) использовали термин пресбистаз для описания этого типа возрастной проблемы, которую нельзя отнести к какому-либо известному диагнозу [17]. С другой стороны, в других исследованиях у 18-85% пожилых людей с головокружением диагностировали множественные диагнозы [8,15,18]. Тинетти и др. (2000) предложили рассматривать головокружение у пожилых людей как многофакторный гериатрический синдром, включающий множество различных симптомов и возникающий по разным причинам, включая сердечно-сосудистые, неврологические, сенсорные, психологические и связанные с приемом лекарств проблемы [1].

Периферические вестибулярные расстройства у пожилых людей

В большинстве исследований головокружения у пожилых людей периферическая вестибулярная дисфункция является первой или второй наиболее частой причиной головокружения [8,9,15,20]. Доброкачественное пароксизмальное позиционное головокружение (ДППГ) является наиболее частой формой периферической вестибулярной дисфункции, за которой следуют болезнь Меньера и вестибулярный неврит [9,15].

ДППГ является наиболее распространенной причиной вертиго и головокружения в детском и пожилом возрасте, достигая пика примерно в 60 лет [21]. Несколько исследований продемонстрировали увеличение заболеваемости ДППГ у пожилых людей [20,22,23]. В недавнем эпидемиологическом исследовании, полученном на основе крупного поперечного невротологического исследования, сообщалось, что распространенность ДППГ в течение жизни оценивается в 2,4%, а распространенность в течение одного года — в 1,6%, но что распространенность ДППГ в течение одного года у взрослых старше 60 лет составляет примерно 7%. раз выше, чем у взрослых от 18 до 39 лет [22]. ДППГ обычно диагностируют по наличию эпизодического головокружения, спровоцированного изменением положения головы, и сопутствующего нистагма, наблюдаемого во время маневра позиционирования [24,25]; эффективно лечится физиотерапией [26–28].Джокура и др. (2008) сообщили, что около 50% пожилых пациентов с хроническим головокружением, обратившихся в отделение неотложной помощи, демонстрировали чрезвычайно слабый, горизонтальный, меняющий направление апогеотропный нистагм, характерный для ДППГ горизонтального канала, и что некоторые симптомы у этих пациентов улучшались при ежедневном позиционные упражнения при ДППГ [29]. Результаты показывают, что сообщаемая распространенность ДППГ у пожилых людей может быть недооценена.

Считается, что причиной ДППГ являются мелкие частицы, застрявшие в полукружных каналах [25,30].Эти частицы, скорее всего, состоят из отоконий, смещенных из макулы утрикулы. Несколько исследований продемонстрировали, что большая часть отоконий утрикулярной макулы дегенерирует у пожилых людей, и многие из них имеют переломы [31,32]. Морфологические изменения в отолитовых органах могут быть связаны с повышенной распространенностью ДППГ у пожилых людей.

Болезнь Меньера составляет от 3% до 11% диагностируемых головокружений в нейроотологических клиниках. Его годовой уровень заболеваемости и точечная распространенность оцениваются в 15/100 000 и 218/100 000, соответственно, в общей популяции [33].Болезнь Меньера обычно рассматривалась как болезнь людей среднего возраста [34,35]. Однако в большом исследовании серии случаев Ballester et al. (2002) сообщили, что 15% пациентов с болезнью Меньера старше 65 лет [34]. В этом исследовании 40% случаев были реактивацией давней болезни Меньера, в то время как 60% были случаями болезни Меньера de novo. Они также сообщили, что дроп-атаки, вызванные внезапной отолитовой дисфункцией, чаще встречались у пожилых людей по сравнению с населением в целом.Многоцентровое исследование в Японии показало, что доля новых случаев болезни Меньера у пациентов старше 60 лет увеличилась за последние 30 лет [36].

Вестибулярный неврит составляет от 3% до 10% диагнозов в отоневрологических клиниках [20,37]. Эпидемиологических данных о вестибулярном неврите немного. Эпидемиологическое исследование в Японии показало, что распространенность вестибулярного неврита составляет 3,5/100 000, а пиковое распределение по возрасту приходится на возраст от 40 до 50 лет [38].Хотя вестибулярная компенсация снимает большинство симптомов вестибулярного неврита в течение нескольких недель после начала, у 30–40% пациентов наблюдается хроническое персистирующее головокружение [39–41]. Кроме того, ухудшение функции интактной стороны периферических вестибулярных органов, зрения и проприоцептивных систем у пожилых людей может привести к нарушению вестибулярной компенсации.

Функциональные нарушения вестибулярной системы у лиц пожилого возраста

Стабильность позы и взгляда при стоянии и ходьбе обеспечивается быстрой обработкой вестибулярных, зрительных и соматосенсорных входов в центральной нервной системе с последующим выходом на опорно-двигательную и зрительную системы .Каждый фактор в этой системе ухудшается во время старения.

Возрастное ухудшение периферической вестибулярной функции было подтверждено измерением вестибулоокулярного рефлекса (ВОР) с использованием вращательных тестов и/или калорических тестов, оба из которых отражают функцию латеральных полукружных каналов [42–44]. Тесты с синусоидальным вращением у здоровых взрослых старше 75 лет показали снижение усиления VOR, а также постоянной времени VOR, особенно при высокоскоростной стимуляции, по сравнению с молодыми людьми [42].В лонгитюдном исследовании здоровых людей старше 75 лет в течение пяти ежегодных обследований наблюдалось прогрессивное снижение усиления VOR и увеличение фазового опережения [45]. В другом исследовании, оценивающем эффективность синусоидального вращательного теста и калорического теста у здоровых людей в возрасте от 7 до 81 года, сообщалось о снижении амплитуды ответа и уменьшении фазы компенсаторного ответа с увеличением возраста в ротационном тесте, в то время как калорический тест не показал устойчивых тенденций. с возрастом [44].Эти результаты позволяют предположить, что возрастные изменения вестибулярной системы преимущественно влияют на высокочастотный компонент ВОР, поскольку калорическое тестирование отражает низкочастотный компонент ВОР.

Возрастное ухудшение периферической вестибулярной функции было продемонстрировано в других вестибулярных тестах. Вестибулярные вызванные миогенные потенциалы (VEMPs) представляют собой коротколатентные мышечные ответы, обычно регистрируемые от мышц шеи (cVEMPs) или глазных мышц (oVEMPs) [46-48]. Клинические и физиологические исследования показали, что cVEMPs отражают функцию мешочка и нижнего вестибулярного нерва, тогда как oVEMPs отражают функцию маточки и верхнего вестибулярного нерва [49-52]. Поперечное исследование последовательных пациентов в возрасте от 7 до 91 года показало зависимое от возраста снижение амплитуды cVEMP и увеличение латентности cVEMP [53]. Точно так же oVEMPs показывают возрастное снижение амплитуды и увеличение латентности () [54]. Эти результаты свидетельствуют о том, что функция отолитовых органов, а также их центральный путь также ухудшаются с возрастом. Недавно Агравал и соавт. (2012) измеряли функцию полукружных каналов, маточки и мешочка с помощью теста выталкивания головы, oVEMP и cVEMP соответственно у здоровых людей старше 70 лет [55].Они показали, что функция полукружных каналов, а также отолитовых органов ухудшается с возрастом, хотя степень нарушения была больше для полукружных каналов, чем для отолитовых органов. Однако ухудшение результатов пробы на выталкивание головы может отражать элемент ухудшения глазодвигательной функции, а также функции полукружного канала.

Возрастные изменения амплитуды и латентности oVEMPs к вибрации костной проводимости. (левая панель) Амплитуда ответов n10 oVEMP значительно уменьшается с возрастом.(Правая панель) Латентность ответов n10 oVEMP значительно увеличивается с возрастом. Графики с прямоугольниками и усами показывают медиану и квартили (цитируется по ссылке 54 с разрешения).

Возрастные изменения постуральной устойчивости изучали с помощью постурографии, при которой измеряли изменения центра давления при спокойном стоянии [56–59]. Для оценки роли различных сенсорных воздействий на постуральный контроль также была разработана динамическая постурография с использованием движущейся платформы или поверхности из пенорезины.В большинстве исследований все показатели равновесия ухудшаются у пожилых испытуемых по сравнению с более молодыми испытуемыми (57–59). Это возрастное снижение контроля равновесия коррелирует с ухудшением зрительной, вестибулярной и сенсомоторной функции, а также со снижением силы нижних мышц. Тисдейл и др. (1991) продемонстрировали, что изменение любых двух из трех сенсорных входов (зрительных, вестибулярных и соматосенсорных) оказывало значительно большее влияние на пожилых людей, чем на более молодых, тогда как изменение одного входа не имело значительного эффекта из-за возраста [59]. ].Эти результаты свидетельствуют о том, что снижение входных сигналов от вестибулярной, зрительной и соматосенсорной систем у пожилых людей приводит к снижению способности к компенсации другими входами для поддержания постуральной стабильности.

Возрастные изменения постуральной устойчивости на поролоне. (Левая панель) Возрастные изменения скорости центра давления (ЦД) при стоянии с закрытыми глазами на поролоне. (Правая панель) Возрастные изменения площади охвата КС при стоянии с закрытыми глазами на поролоне.Показаны медианное значение и интеркватильные диапазоны (данные взяты из ссылки 57).

Клеточные изменения вестибулярной системы при старении

Волосковые клетки и нейроны вестибулярной системы не регенерируют и не увеличиваются в основном у млекопитающих. В литературе описано значительное уменьшение количества волосковых клеток и нейронов вестибулярной системы у пожилых людей [60,61]. Richter (1980) исследовал плотность вестибулярных волосковых клеток и нервных клеток в ганглиях Скарпа в височных костях человека у людей в возрасте от 9 до 91 года [60]. Он сообщил об уменьшении количества вестибулярных волосковых клеток после 20 лет и уменьшении количества нейронов вестибулярного ганглия после 50 лет. С другой стороны, Merchant et al. (2000) сообщили о постепенной потере количества вестибулярных волосковых клеток у всех эндорогов с относительным сохранением маточки с возрастом [62]. Эти ранние отчеты, в которых оценивалось количество вестибулярных волосковых клеток и нейронов из серийных срезов височных костей, могли быть необъективными, поскольку они основывались на нескольких допущениях, таких как сферическая форма и одинаковый размер волосковых клеток, а также постоянная усадки и толщины образца.Недавно, используя беспристрастную стереологию, которая преодолевает недостатки предыдущих методов, количество волосковых клеток и нейронов в височных костях человека было переоценено [63,64]. Лопес и др. (2005) изучили количество волосковых клеток в полукружных каналах с помощью объективной стереологии и показали, что количество волосковых клеток уменьшилось на 12% у взрослых в возрасте 80 лет и на 25% у взрослых в возрасте 90 лет по сравнению с более молодой группой (от 42 до 30 лет). 67 лет) [63]. Гопен и др. (2003) использовали тот же метод для оценки количества волосковых клеток в маточке, но им не удалось показать возрастное уменьшение количества волосковых клеток [64].Остается неясным, отражает ли этот результат относительную сохранность маточки при возрастной потере волосковых клеток [62] или он является следствием систематической ошибки, вызванной недостаточным количеством исследованных височных костей.

В отличие от многочисленных сообщений о моделях возрастной потери слуха на животных, редко сообщалось о животных моделях возрастной вестибулярной дисфункции. Шига и др. (2005) исследовали возрастные изменения вестибулярных эндогенных органов у мышей C57BL/6, которые считаются моделью возрастной потери слуха у животных, и сообщили о возрастном снижении плотности волосковых клеток в горизонтальных полукружных каналах 30 %, с соответствующим умеренным снижением усиления VOR при 0.8 Гц [65]. Поскольку возрастное снижение усиления VOR не наблюдалось на других протестированных частотах, было высказано предположение, что у модельных мышей может происходить дифференциальная потеря типов волосковых клеток.

Механизм возрастной потери клеток в вестибулярных эндоорганах до сих пор не ясен. Тем не менее, возможная этиология возрастной потери слуха была тщательно изучена [66–68], и в настоящее время считается, что это многофакторное состояние, представляющее собой исход множественных внутренних (например,грамм. генетическая предрасположенность) и внешние (например, шумовое воздействие) факторы, воздействующие на внутреннее ухо на протяжении всей жизни [66]. Ряд исследований с использованием животных моделей показал, что кумулятивный эффект окислительного стресса может вызывать повреждение макромолекул, таких как митохондриальная ДНК, и что накопление митохондриальной ДНК и снижение митохондриальной функции играют важную роль в индукции апоптоза клеток улитки. 69–71]. Генетические исследования показали, что несколько генов, в том числе связанные с антиоксидантной защитой и атеросклерозом, связаны с возрастной потерей слуха [72].Известно, что воздействие шума вызывает избыточное образование активных форм кислорода в улитке [73]. Аналогичное накопление окислительного стресса и повреждения митохондриальной ДНК может иметь место при возрастных изменениях вестибулярных эндогенных органов.

Лечение головокружения у пожилых людей

Поскольку причины головокружения у пожилых людей многофакторны, лечение этого заболевания должно быть индивидуальным в соответствии с этиологией головокружения у каждого человека. Лечение головокружения включает различные подходы, в том числе медикаментозные и реабилитационные, а также использование протезов.

Вестибулярная реабилитация впервые была предложена Cawthorne и Cooksey (1946) для реабилитации пациентов с вестибулярными расстройствами [74]. Реабилитация включает 1) адаптационные упражнения VOR, чтобы помочь центральной нервной системе адаптироваться к изменению или потере входных сигналов вестибулярной системы, 2) упражнения по привыканию, чтобы уменьшить патологические реакции на провоцирующий раздражитель, и 3) упражнения по замещению, чтобы способствовать использованию оставшейся сенсорной системы [75]. В настоящее время установлено, что эти упражнения эффективны при лечении людей с головокружением, вызванным вестибулярной дисфункцией, тревогой, травмой головы, дисфункцией мозжечка или болезнью Паркинсона [76].Эффект вестибулярной реабилитации не зависит от возраста и пола пациентов [77]. Несколько рандомизированных контролируемых исследований предоставили доказательства того, что вестибулярные реабилитационные упражнения эффективны для улучшения постурального контроля, сообщения о симптомах головокружения и эмоциональном статусе у пациентов с головокружением по неспецифическим причинам [75,78,79].

Для улучшения постурального баланса у пожилых людей были разработаны различные протезы. Было показано, что устройства вибротактильной обратной связи, которые крепятся вокруг талии и обеспечивают усиленную обратную связь о наклоне тела посредством вибрации, улучшают постуральный баланс во время спокойного стояния и ходьбы [80,81].Также сообщалось, что система биологической обратной связи с размещением языка, которая предоставляет информацию о положении головы с помощью электротактильной стимуляции, улучшает стабильность головы в пространстве [82]. Сообщалось, что вибрирующие стельки, усиливающие соматосенсорную чувствительность нижних конечностей, улучшают осанку у пожилых людей [83].

До сих пор не существует медикаментозного лечения возрастного ухудшения вестибулярной функции. Однако сообщалось, что некоторые лекарства эффективны в предотвращении возрастных изменений во внутреннем ухе.Было показано, что пероральные добавки с митохондриальными антиоксидантами, такими как альфа-липоевая кислота и коэнзим Q10, уменьшают возрастную потерю волосковых клеток во внутреннем ухе мыши [71]. Ограничение калорийности продлевает продолжительность жизни большинства видов млекопитающих за счет подавления экспрессии апоптотических генов. Сообщалось, что он эффективен для предотвращения возрастной потери слуха в исследованиях на животных [84]. Эти новые методы лечения, которые были эффективны в исследованиях на животных, в будущем должны применяться у пожилых пациентов с вестибулярной дисфункцией.

Благодарности

Мы благодарим доктора Чисато Фудзимото за критическое прочтение рукописи. Это исследование было поддержано грантом Министерства образования, культуры, спорта, науки и технологий (25293347).

Ссылки

[1] Tinetti ME, Williams CS, Gill TM. Головокружение у пожилых людей: возможный гериатрический синдром. Энн Интерн Мед. 2000;132(5):337–344. [PubMed] [Google Scholar][2] Graafmans WC, Ooms ME, Hofstee HM, Bezemer PD, Bouter LM, Lips P. Падения у пожилых людей: проспективное исследование факторов риска и профилей риска.Am J Эпидемиол. 1996;143(11):1129–1136. [PubMed] [Google Scholar][3] O’Loughlin JL, Boivin JF, Robitaille Y, Suissa S. Падения пожилых людей: различение факторов риска в помещении и на открытом воздухе в Канаде. J Эпидемиол общественного здоровья. 1994;48(5):488–489. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar][4] Рубенштейн Л.З., Джозефсон К.Р. Падения и их профилактика у пожилых людей: о чем свидетельствуют данные? Мед Клин Норт Ам. 2006;90(5):807–824. [PubMed] [Google Scholar][5] Stel VS, Pluijm SM, Deeg DJ, Smit JH, Bouter LM, Lips P. Дерево классификации для прогнозирования повторяющихся падений среди пожилых людей, проживающих в сообществе. J Am Geriatr Soc. 2003;51(10):1356–1364. [PubMed] [Google Scholar][6] Delbaere K, Crombez G, Vanderstraeten G, Willems T, Cambier D. Избегание деятельности, падений и физической слабости, связанное со страхом. Проспективное когортное исследование на базе сообщества. Возраст Старение. 2004;33(4):368–373. [PubMed] [Google Scholar][7] Ли Ф., Фишер К.Дж., Хармер П., Маколи Э., Уилсон Н.Л. Страх падения у пожилых людей: связь с падениями, функциональные способности и качество жизни.J Gerontol B Psychol Sci Soc Sci. 2003; 58 (5): стр. 283–290. [PubMed] [Google Scholar][8] Лоусон Дж., Фитцджеральд Дж., Бирчалл Дж., Олдрен С.П., Кенни Р.А. Диагностика гериатрических больных с сильным головокружением. J Am Geriatr Soc. 1999;47(1):12–17. [PubMed] [Google Scholar][9] Katsarkas A. Головокружение при старении: ретроспективное исследование 1194 случаев. Отоларингол Head Neck Surg. 1994;110(3):296–301. [PubMed] [Google Scholar][10] Барин К., Додсон Э.Э. Головокружение у пожилых людей. Отоларингол Clin North Am. 2011;44(2):437–454.Икс. [PubMed] [Google Scholar][11] Colledge NR, Wilson JA, Macintyre CC, MacLennan WJ. Распространенность и характеристики головокружения в пожилом сообществе. Возраст Старение. 1994;23(2):117–120. [PubMed] [Google Scholar][12] Sloane PD, Coeytaux RR, Beck RS, Dallara J. Головокружение: состояние науки. Энн Интерн Мед. 2001; 134 (9 часть 2): 823–832. [PubMed] [Google Scholar][13] Jonsson R, Sixt E, Landahl S, Rosenhall U. Распространенность головокружения и головокружения у городского пожилого населения. Дж Вестиб Рез. 2004;14(1):47–52.[PubMed] [Google Scholar][14] Нойхаузер Х.К., фон Бреверн М., Радтке А., Лезиус Ф., Фельдманн М., Цизе Т., Лемперт Т. Эпидемиология вестибулярного головокружения: невротологическое исследование населения в целом. Неврология. 2005;65(6):898–904. [PubMed] [Google Scholar][15] Дэвис Л.Э. Головокружение у пожилых мужчин. J Am Geriatr Soc. 1994;42(11):1184–1188. [PubMed] [Google Scholar][16] Кроенке К., Лукас К.А., Розенберг М.Л., Шерокман Б., Херберс Дж.Е., младший, Верле П.А., Богги Д.О. Причины постоянного головокружения. Проспективное исследование 100 пациентов, находящихся на амбулаторном лечении.Энн Интерн Мед. 1992;117(11):898–904. [PubMed] [Google Scholar][17] Белал А., младший, Глориг А. Нарушение равновесия старения (пресбиастаз) Дж. Ларингол Отол. 1986; 100(9):1037–1041. [PubMed] [Google Scholar][18] Колледж Н.Р., Барр-Гамильтон Р.М., Льюис С.Дж., Селлар Р.Дж., Уилсон Дж.А. Оценка исследований по диагностике причин головокружения у пожилых людей: контролируемое исследование на базе сообщества. БМЖ. 1996;313(7060):788–792. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar][19] Sloane PD, Hartman M, Mitchell CM. Психологические факторы, связанные с хроническим головокружением у пациентов в возрасте 60 лет и старше.J Am Geriatr Soc. 1994;42(8):847–852. [PubMed] [Google Scholar][20] Нойхаузер Х., Леопольд М., фон Бреверн М. , Арнольд Г., Лемперт Т. Взаимосвязь мигрени, головокружения и мигренозного головокружения. Неврология. 2001;56(4):436–441. [PubMed] [Google Scholar][21] Baloh RW, Honrubia V, Jacobson K. Доброкачественное позиционное головокружение: клинические и окулографические признаки в 240 случаях. Неврология. 1987;37(3):371–378. [PubMed] [Google Scholar][22] фон Бреверн М., Радтке А., Лезиус Ф., Фельдманн М., Цизе Т., Лемперт Т., Нойхаузер Х.Эпидемиология доброкачественного пароксизмального позиционного головокружения: популяционное исследование. J Neurol Нейрохирург Психиатрия. 2007;78(7):710–715. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar][23] Neuhauser HK. Эпидемиология головокружения. Карр Опин Нейрол. 2007;20(1):40–46. [PubMed] [Google Scholar][24] Dix MR, Hallpike CS. Симптоматика патологии и диагностика некоторых распространенных нарушений вестибулярной системы. Proc R Soc Med. 1952; 45 (6): 341–354. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar][25] Brandt T, Steddin S.Современный взгляд на механизм доброкачественного пароксизмального позиционного головокружения: купулолитиаз или каналолитиаз? Дж Вестиб Рез. 1993;3(4):373–382. [PubMed] [Google Scholar][26] Эпли Дж. М. Процедура репозиции каналов: для лечения доброкачественного пароксизмального позиционного головокружения. Отоларингол Head Neck Surg. 1992;107(3):399–404. [PubMed] [Google Scholar][27] Ивасаки С., Чихара Ю., Ушио М., Очи А., Мурофуши Т., Ямасоба Т. Влияние процедуры репозиции канала на субъективную зрительную горизонталь у пациентов с доброкачественным пароксизмальным позиционным головокружением заднего канала.Акта Отоларингол. 2011;131(1):41–45. [PubMed] [Google Scholar][28] Семонт А., Фрейсс Г., Витте Э. Лечение ДППГ с помощью освободительного маневра. Adv Оториноларингол. 1988;42(290–293) [PubMed] [Google Scholar][29] Johkura K, Momoo T, Kuroiwa Y. Позиционный нистагм у пациентов с хроническим головокружением. J Neurol Нейрохирург Психиатрия. 2008;79(12):1324–1326. [PubMed] [Google Scholar][30] Parnes LS, McClure JA. Свободно плавающие частицы эндолимфы: новая операционная находка при окклюзии заднего полукружного канала.Ларингоскоп. 1992;102(9):988–992. [PubMed] [Google Scholar][31] Игараси М., Сайто Р., Мизукоши К., Алфорд Б.Р. Отокония у молодых и пожилых людей: исследование височной кости. Acta Otolaryngol Suppl. 1993;504(26–29) [PubMed] [Google Scholar][32] Джонссон Л.Г., Хокинс Дж.Е., мл. Сосудистые изменения во внутреннем ухе человека, связанные со старением. Энн Отол Ринол Ларингол. 1972;81(3):364–376. [PubMed] [Google Scholar][33] Владиславовски-Васерман П., Фасер Г.В., Мокри Б., Курланд Л.Т. Болезнь Меньера: 30-летнее эпидемиологическое и клиническое исследование в Рочестере, штат Миннесота, 1951–1980 гг.Ларингоскоп. 1984; 94(8):1098–1102. [PubMed] [Google Scholar][34] Баллестер М., Лиард П., Виберт Д., Хауслер Р. Болезнь Меньера у пожилых людей. Отол Нейротол. 2002;23(1):73–78. [PubMed] [Google Scholar][35] Shojaku H, Watanabe Y, Fujisaka M, Tsubota M, Kobayashi K, Yasumura S, Mizukoshi K. Эпидемиологические характеристики определенной болезни Меньера в Японии. Долгосрочное обследование префектур Тояма и Ниигата. ОРЛ. J Оториноларингол Relat Spec. 2005;67(5):305–309. [PubMed] [Google Scholar][36] Shojaku H, Watanabe Y, Yagi T, Takahashi M, Takeda T, Ikezono T, Ito J, Kubo T, Suzuki M, Takumida M, Takeda N, Furuya N, Yamashita H.Изменения характеристик определенной болезни Меньера с течением времени в Японии: долгосрочное исследование, проведенное Комитетом по исследованию периферических вестибулярных расстройств Японии, ранее Японским комитетом по исследованию болезни Меньера. Акта Отоларингол. 2009;129(2):155–160. [PubMed] [Google Scholar][37] Guilemany JM, Martinez P, Prades E, Sanudo I, De Espana R, Cuchi A. Клинико-эпидемиологическое исследование головокружения в амбулаторной клинике. Акта Отоларингол. 2004;124(1):49–52. [PubMed] [Google Scholar][38] Секитани Т., Имате Ю., Ногучи Т., Инокума Т.Вестибулярный нейронит: эпидемиологическое исследование по анкете в Японии. Acta Otolaryngol Suppl. 1993;503(9–12) [PubMed] [Google Scholar][39] Годеманн Ф., Зиферт К., Ханчке-Бруггеманн М., Ной П., Зайдл Р. , Строле А. Что вызывает головокружение через год после вестибулярного неврита – тревога или дисфункция вестибулярного органа? J Psychiatr Res. 2005;39(5):529–534. [PubMed] [Google Scholar][40] Мурофуши Т., Ивасаки С., Ушио М. Восстановление вестибулярных вызванных миогенных потенциалов после приступа головокружения из-за вестибулярного неврита.Акта Отоларингол. 2006;126(4):364–367. [PubMed] [Google Scholar][41] Окинака Ю., Секитани Т., Окадзаки Х., Миура М., Тахара Т. Прогресс калорийной реакции вестибулярного нейронита. Acta Otolaryngol Suppl. 1993; 503 (18–22) [PubMed] [Google Scholar][42] Baloh RW, Jacobson KM, Socotch TM. Влияние старения на зрительно-вестибулоокулярные реакции. Опыт Мозг Res. 1993; 95 (3): 509–516. [PubMed] [Google Scholar][43] Paige GD. Старение зрительно-вестибулярных взаимодействий человека. 1. Вестибулоокулярный рефлекс и адаптационная пластичность при старении.Дж Вестиб Рез. 1992;2(2):133–151. [PubMed] [Google Scholar][44] Peterka RJ, Black FO, Schoenhoff MB. Возрастные изменения вестибулоокулярных рефлексов человека: синусоидальное вращение и калорические пробы. Дж Вестиб Рез. 1990;1(1):49–59. [PubMed] [Google Scholar][45] Baloh RW, Enrietto J, Jacobson KM, Lin A. Возрастные изменения вестибулярной функции: продольное исследование. Энн Н.Ю. Академия наук. 2001; 942: 210–219. [PubMed] [Google Scholar][46] Чихара Ю., Ивасаки С., Ушио М., Мурофуши Т. Вестибулярно-вызванные экстраокулярные потенциалы с помощью воздушного звука: еще один клинический тест вестибулярной функции.Клин Нейрофизиол. 2007;118(12):2745–2751. [PubMed] [Google Scholar][47] Ивасаки С., МакГарви Л.А., Хальмаги Г.М., Берджесс А.М., Ким Дж., Колебэтч Д.Г., Куртойс И.С. Постукивание по голове вызывает перекрестный вестибулоокулярный рефлекс. Неврология. 2007;68(15):1227–1229. [PubMed] [Google Scholar][48] Welgampola MS, Colebatch JG. Характеристики и клиническое применение вестибулярно-вызванных миогенных потенциалов. Неврология. 2005;64(10):1682–1688. [PubMed] [Google Scholar][49] Murofushi T, Curthoys IS, Topple AN, Colebatch JG, Halmagyi GM. Реакция первичных вестибулярных нейронов морской свинки на щелчки. Опыт Мозг Res. 1995;103(1):174–178. [PubMed] [Google Scholar][50] Куширо К., Закир М., Сато Х., Оно С., Огава Ю., Мэн Х., Чжан Х., Учино Ю. Саккулярные и утрикулярные входы в одиночные вестибулярные нейроны у кошек. Опыт Мозг Res. 2000;131(4):406–415. [PubMed] [Google Scholar][51] Ивасаки С., Чихара Ю., Смолдерс Ю.Е., Берджесс А.М., Халмаги Г.М., Куртойс И.С., Мурофуши Т. Роль верхнего вестибулярного нерва в генерации глазных вестибулярно-вызванных миогенных потенциалов к проводимой кости вибрации на Фз.Клин Нейрофизиол. 2009;120(3):588–593. [PubMed] [Google Scholar][52] Curthoys IS, Iwasaki S, Chihara Y, Ushio M, McGarvie LA, Burgess AM. Глазной вестибулярно-вызванный миогенный потенциал на звук, проводимый по воздуху; вероятное отхождение верхнего вестибулярного нерва. Клин Нейрофизиол. 2011;122(3):611–616. [PubMed] [Google Scholar][53] Брантберг К., Гранат К., Шарт Н. Возрастные изменения вестибулярных вызванных миогенных потенциалов. Аудиол Нейротол. 2007;12(4):247–253. [PubMed] [Google Scholar][54] Ивасаки С., Смолдерс Ю.Э., Берджесс А.М., МакГарви Л.А., Макдугалл Х.Г., Халмаги Г.М., Куртойс И.С.Окулярно-вестибулярные вызванные миогенные потенциалы к костной проводимости вибрации средней линии лба на Fz у здоровых лиц. Клин Нейрофизиол. 2008;119(9):2135–2147. [PubMed] [Google Scholar][55] Агравал Ю., Зунига М.Г., Давалос-Бичара М., Шуберт М.С., Уолстон Д.Д., Хьюз Д., Кэри Д.П. Снижение функции полукружных каналов и отолитов с возрастом. Отол Нейротол. 2012;33(5):832–839. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar][56] Wolfson L, Whipple R, Derby CA, Amerman P, Murphy T, Tobin JN, Nashner L.Динамическое постурографическое исследование баланса у здоровых пожилых людей. Неврология. 1992;42(11):2069–2075. [PubMed] [Google Scholar][57] Baloh RW, Spain S, Socotch TM, Jacobson KM, Bell T. Постурография и проблемы с равновесием у пожилых людей. J Am Geriatr Soc. 1995;43(6):638–644. [PubMed] [Google Scholar][58] Fujimoto C, Murofushi T, Chihara Y, Ushio M, Sugasawa K, Yamaguchi T, Yamasoba T, Iwasaki S. Оценка диагностической точности пенной постурографии при периферических вестибулярных расстройствах: анализ связанных параметров к зрительной и соматосенсорной зависимости.Клин Нейрофизиол. 2009;120(7):1408–1414. [PubMed] [Google Scholar][59] Тисдейл Н., Стельмах Г.Э., Бреуниг А. Характеристики постурального влияния пожилых людей в нормальных и измененных условиях зрения и опорной поверхности. Дж Геронтол. 1991;46(6):B238–244. [PubMed] [Google Scholar][60] Рихтер Э. Количественное исследование ганглия Скарпы человека и вестибулярного сенсорного эпителия. Акта Отоларингол. 1980; 90 (3–4): 199–208. [PubMed] [Google Scholar][61] Раух С.Д., Веласкес-Вильясенор Л., Димитри П.С., Торговец С.Н. Уменьшение количества волосковых клеток у стареющих людей.Энн Н.Ю. Академия наук. 2001; 942(220–227) [PubMed] [Google Scholar][62] Merchant SN, Velazquez-Villasenor L, Tsuji K, Glynn RJ, Wall C, 3rd, Rauch SD. Исследования височной кости периферической вестибулярной системы человека. Нормативные данные вестибулярных волосковых клеток. Ann Otol Rhinol Laryngol Suppl. 2000;181(3–13) [PubMed] [Google Scholar][63] Лопес И., Исияма Г., Тан Ю., Токита Дж., Балох Р.В., Исияма А. Региональные оценки волосковых клеток и опорных клеток в ампулярном гребне человека. J Neurosci Res. 2005;82(3):421–431.[PubMed] [Google Scholar][64] Гопен К., Лопес И., Исияма Г., Бало Р.В., Исияма А. Непредвзятый стереологический подсчет волосковых клеток типа I и типа II в утрикулярной макуле человека. Ларингоскоп. 2003;113(7):1132–1138. [PubMed] [Google Scholar][65] Shiga A, Nakagawa T, Nakayama M, Endo T, Iguchi F, Kim TS, Naito Y, Ito J. Влияние старения на вестибуло-окулярные реакции у мышей C57BL/6: сравнение с изменением в слуховой функции. Аудиол Нейротол. 2005;10(2):97–104. [PubMed] [Google Scholar][66] Yamasoba T, Lin FR, Someya S, Kashio A, Sakamoto T, Kondo K.Современные концепции возрастной потери слуха: эпидемиология и механизмы. Услышьте Рез. 2013;303(30–38) [бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar][69] Cheng AG, Cunningham LL, Rubel EW. Механизмы гибели и защиты волосковых клеток. Curr Opin Otolaryngol Head Neck Surg. 2005;13(6):343–348. [PubMed] [Google Scholar][70] Someya S, Yamasoba T, Kujoth GC, Pugh TD, Weindruch R, Tanokura M, Prolla TA. Роль мутаций мтДНК в патогенезе возрастной потери слуха у мышей, несущих мутаторную ДНК-полимеразу гамма.Нейробиол Старение. 2008;29(7):1080–1092. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar][71] Someya S, Xu J, Kondo K, Ding D, Salvi RJ, Yamasoba T, Rabinovitch PS, Weindruch R, Leeuwenburgh C, Tanokura M, Prolla TA. Возрастная потеря слуха у мышей C57BL/6J опосредована Bak-зависимым митохондриальным апоптозом. Proc Natl Acad Sci U S A. 2009;106(46):19432–19437. [Статья бесплатно PMC] [PubMed] [Google Scholar][72] Учида Ю., Сугиура С., Андо Ф., Накашима Т., Шимоката Х. Молекулярно-генетическая эпидемиология возрастных нарушений слуха.Гортань Аурис Насус. 2011;38(6):657–665. [PubMed] [Google Scholar][73] Le Prell CG, Yamashita D, Minami SB, Yamasoba T, Miller JM. Механизмы потери слуха, вызванной шумом, указывают на несколько методов профилактики. Услышьте Рез. 2007; 226(1–2):22–43. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar][74] Cawthorne T. Вестибулярные травмы. Proc R Soc Lond B Biol Sci. 1946;39(270–273) [PubMed] [Google Scholar][75] Ярдли Л., Бич С., Зандер Л., Эванс Т., Вейнман Дж. Рандомизированное контролируемое исследование лечебной физкультуры при головокружении и головокружении в первичной медико-санитарной помощи.Br J Gen Pract. 1998;48(429):1136–1140. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar][76] Alrwaily M, Whitney SL. Вестибулярная реабилитация пожилых людей с головокружением. Отоларингол Clin North Am. 2011;44(2):473–496. Икс. [PubMed] [Google Scholar][77] Уитни С.Л., Ризли Д.М., Марчетти Г.Ф., Фурман Дж.М. Влияние возраста на результаты вестибулярной реабилитации. Ларингоскоп. 2002;112(10):1785–1790. [PubMed] [Google Scholar][78] Ярдли Л., Баркер Ф., Мюллер И., Тернер Д., Кирби С., Малли М., Моррис А., Литтл П.Клиническая и экономическая эффективность вестибулярной реабилитации на основе буклета при хроническом головокружении в первичной медико-санитарной помощи: одиночное слепое, параллельная группа, прагматическое, рандомизированное контролируемое исследование. БМЖ. 2012;344(e2237) [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar][79] Ярдли Л., Донован-Холл М., Смит Х.Е., Уолш Б.М., Малли М., Бронштейн А.М. Эффективность вестибулярной реабилитации на базе первичной медико-санитарной помощи при хроническом головокружении. Энн Интерн Мед. 2004;141(8):598–605. [PubMed] [Google Scholar][80] Wall C., 3rd Применение вибротактильной обратной связи движения тела для улучшения реабилитации людей с дисбалансом.J Neurol Phys Ther. 2010;34(2):98–104. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar][81] Wall C, 3rd, Kentala E. Контроль раскачивания с помощью вибротактильной обратной связи наклона тела у пациентов с умеренным и тяжелым дефицитом постурального контроля. Дж Вестиб Рез. 2005;15(5–6):313–325. [PubMed] [Google Scholar][82] Vuillerme N, Cuisinier R. Сенсорные добавки с помощью электротактильной стимуляции языка для сохранения стабилизации головы в пространстве при отсутствии зрения. Invest Ophthalmol Vis Sci. 2009;50(1):476–481.[PubMed] [Google Scholar][83] Приплата А. А., Ниеми Дж.Б., Гарри Дж.Д., Липсиц Л.А., Коллинз Дж.Дж. Вибрационные стельки и контроль равновесия у пожилых людей. Ланцет. 2003;362(9390):1123–1124. [PubMed] [Google Scholar][84] Someya S, Yu W, Hallows WC, Xu J, Vann JM, Leeuwenburgh C, Tanokura M, Denu JM, Prolla TA. Sirt3 опосредует уменьшение окислительного повреждения и предотвращение возрастной потери слуха при ограничении калорий. Клетка. 2010;143(5):802–812. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]

Ручка Swann Morton.20 без НДС. 4 ручка. Swann-Morton является предпочтительным брендом, когда речь идет о хирургических лезвиях и рукоятках. 99. Быстросъемные мини-лезвия с более безопасным дизайном Подробнее. 95 Металлическая рукоятка лезвия №3 предназначена для использования с одноразовыми хирургическими лезвиями. Ручка скальпеля из нержавеющей стали Swann-Morton № При снятии упаковки печать меняет цвет, указывая тем самым на нарушение целостности упаковки и гарантируя пользователю стерильность до момента использования.
Стерильные хирургические лезвия и ручки Swann Morton – № 3.Swann-Morton SF1 — стандартная ручка длиной 130 мм, изготовленная из нержавеющей стали. 18 0 фунтов стерлингов. 10-15) количество. Ручка скальпеля из нержавеющей стали для использования с нашими лезвиями. Код продукта: от Signgeer. Ручки и лезвия для скальпеля размеров 3 и 5A от Swann Morton. Swann Morton Ручки из нержавеющей стали B – № 3 – Chirex. производитель Нестерильный; в индивидуальной упаковке; Лезвие Swann Morton № 10 подходит для рукоятки № 3. Используется для хирургических процедур, но очень популярно среди энтузиастов ремесел и хобби, отчасти благодаря ассортименту лезвий различных форм и размеров, которые подходят для большинства ремесел. будь то изготовление карт, вырезание карт, пластик и т. Д., Скрапбукинг или фотография и монтажные работы.7 Ручка металлического скальпеля Swann-Morton £7. Коды продуктов и скидки. У меня есть полный набор рукояток Xacto, которые используются для резки более тяжелых слоев и с 3-мя размерами бритвенной пилы, а также с длинным . Рекомендуем скальпели Нет. Добавить в корзину. Узнайте больше об этом элементе. 4 Ручки Товары для дома Диапазон установки № 3, например, 10 и 15. Уважаемый клиент, Вы, возможно, знаете, что в настоящее время мы не можем отвечать на звонки. Пожалуйста, ознакомьтесь с нашим полным ассортиментом лезвий и рукояток Swann-Morton для более выгодных цен.Рукоятка этого лезвия изготовлена ​​из нержавеющей стали, что придает ему прочный вес, который предпочитают некоторые пользователи при резке. О/А длина 119мм. Рукоятка скальпеля № 3 Swann Morton из нержавеющей стали с мерой или градуировкой на обратной стороне. 9… Ручка скальпеля №4 S/S Swann Morton. Напишите другу. Нестерильные выдвижные скальпели для диссекции, лезвие № 11, 62 $. Код продукта: GM6062. Эргономичная и сбалансированная ручка обеспечит комфорт во время работы. 12 долларов. 10. 10 Стерильное лезвие скальпеля (подходит к ручке №.6, 9, 10, 10А, 10Р, Е/11, 11, 11П, 12, 12Д, 13, 14, 15, 15А, 15С, 15Т, 16, 40 и СГ3. Градуированная ручка из нержавеющей стали. 11 лезвий x 5. Мы не знаем, когда и будет ли этот товар снова в наличии. Ассортимент продукции Swann-Morton — № [email protected] 3 подходит для лезвий скальпеля: 10A, 10, 11, 12 и 15. Будьте первым, кто оставил отзыв на “Коробка для удаления лезвий Swann Morton” Отмена . РАЗМЕР ; 3. Поставка элитной эстетики + обучение. Приносим извинения за доставленные неудобства. Набор M (набор для творчества, рукоделия и моделирования) включает в себя 1 шт.Перейти в конец галереи изображений. Этот выдвижной скальпель разработан с учетом требований безопасности и легко загружается. 8 фунтов стерлингов. Рукоятка SF13 имеет поворотную рукоятку, которая позволяет удерживать лезвия крепче, чем рукоятка SF1, для еще более точной резки. Мы используем файлы cookie для основных функций и оптимизации этого веб-сайта. Эта ручка совместима с широким спектром лезвий. 2 отзыва. Лезвия и инструменты. Артикул №: 135315. НДС) Swann Morton – Оранжевая пластиковая ручка для рукоделия # 1235 .Набор Swann Morton Scalpel без ручки 5А и набором лезвий 10А. Если они достаточно хороши для операционной, представьте, что они сделают с вашими моделями! Продукция Swann-Morton производится в Шеффилде, Англия. 1-48 из 100 результатов для “swann-morton handle” Цена и другие детали могут варьироваться в зависимости от размера и цвета товара. Все измерения приведены только для ознакомления. Акриловая ручка для творчества 6A. 00 без НДС. 3) Оценка 0 из 5 2 фунта стерлингов. Мы гордимся тем, что предлагаем две линейки лезвий, скальпелей и рукояток высочайшего качества: Swann-Morton ® и Lance.Наборы ручек Swann Morton. ПРОДАЕТСЯ! Рукоятки для скальпеля Swann Morton **ВНИМАНИЕ** Лезвия в комплекте с ними не поставляются — рукоятки 254495182996 Выдвижные рукоятки. 24 подходит для ручки № 4, № SKU VAR098 Категория Скальпели, иглы и шприцы. Эту ручку Swann Morton Scalpel Handle можно использовать со стандартными лезвиями хирургического скальпеля № 10, 10A, 11 и 15. Trustpilot. 75. 4. 1. Ручка для кожного трансплантата Swann Morton Cobbett, нержавеющая сталь. Добавить в избранное Swann Morton 11 лезвий для скальпеля – 5, 10, 20 или 50 лезвий – для резки бумаги, глины, моделирования и т. д.62. Ручка для скальпеля Swann-Morton £4. Качественная ручка Swann Morton. 624. Ручка хирургического скальпеля из нержавеющей стали Swann-Morton 3G S/S $ 54. Металлическая ручка лезвия $ 12. Пользовательский виджет Trustpilot. 19-200-287. Политики. 5 из пяти звезд рейтинга на Trustpilot. 50 каждый. Ручки 3 и 3L и выдвижные ручки. Особенности и преимущества Непревзойденная острота Лезвие, которое не только изначально более острое, но и остается острым, является результатом более чем 50-летнего стремления к инновациям. Каждая ручка поставляется с одним лезвием.Идентификатор продукта : … Хирурги и медицинские работники во всем мире полагаются на стабильное качество, точность и эффективность хирургических лезвий, рукояток и скальпелей Swann-Morton. Описание. Товар отсутствует на складе. Надеялся использовать ручку для совершенно другого проекта без логотипов swann morton и без маркировки размеров. Они используются для резки форм, изготовления моделей, маркетри, изготовления ювелирных изделий, авиамоделирования, резки бумаги и полистирола.ЛЕЗВИЕ 28. Поворотная рукоятка также позволяет менять… скальпели Swann-Morton — лучшее, что вы можете купить! Изготовленные из стали Шеффилд для хирургического использования, они производятся в соответствии с высочайшими стандартами качества, долговечности и остроты. Лезвие № 10 с изогнутой режущей кромкой является одной из наиболее традиционных форм лезвия, с рукояткой из… Пластиковой ручки скальпеля и Swann Morton No. Лезвия приобретаются отдельно. Особенности и преимущества: Непревзойденная острота Лезвие, которое не только изначально более острое, но и остается острым, является результатом более чем 50-летнего стремления к инновациям.Особенности лезвия скальпеля Swann-Morton®: Доступен как из углеродистой, так и из нержавеющей стали; Для использования с № Ручки Swann Morton из нержавеющей стали G – SF1 – (Fine Beaver Type) -+ Добавить в корзину; Дополнительная информация; Бренд: Swann Morton: Артикул: SCA384: Бесплатная доставка Бесплатная доставка свыше 85 фунтов стерлингов без НДС 102 фунта стерлингов с НДС. 58 4 фунта стерлингов. Ознакомьтесь с нашим выбором ручек скальпеля swann morton, чтобы найти самые лучшие уникальные или сделанные на заказ изделия ручной работы из наших магазинов. ( SM0933 ) Артикул. 00€ Без налога: 6. 48 Загрузка На складе. Качественная ручка.Корзина РУКОЯТКИ СКАЛЬПЕЛЯ SWANN MORTON. О/Д длина 160мм. Выдвижная ручка Swann Morton SMORII 4307 с 2 лезвиями SM01 Эта ручка SMORII поставляется с двумя лезвиями SM01. 4 и 4L Ручки Магазин будет работать некорректно в случае, если куки отключены. Добавить в корзину © 2019 г., Elite Esthetics Supply + Education. 15 (например, рукоятки Swann-Morton® доступны в никелевом исполнении, некоторые размеры доступны из нержавеющей стали. ×. Подходит для лезвий № 14, № 10, № 10R, № 10D и № 10S. 0 из 5 звезд 1 оценка.Покупатели также просматривали эти товары. РУЧКА 3+5А. Swann Morton Fine Blade Handle SF1. Swann Morton Scalpel и ремесленные лезвия и ручки; Swann Morton Скальпель и ремесленные лезвия и ручки 61 Товар найден Sort. Этот нож для стежков подходит для ручек #3. 3 ручки Главная Продукция № Количество: Сменные лезвия для скальпелей Swann-Morton . 63. Изготовлен из износостойкой нержавеющей стали. Перейти к продукту > Нет. Подходит для лезвий №10, №10а и №11. 8. 1 фунт стерлингов. СМ1005. • Литая пластиковая ручка, удобная в использовании.Для использования с лезвиями № 6, 10, 10a, 11, E11, 15, 15c или 15T. ГМ0718. Рекомендуемая производителем розничная цена: 10 долларов. 3 и No. Ручка Swann Morton ACM No1. Точность, стабильность и надежность сделали хирургические лезвия и рукоятки Swann-Morton предпочтительным брендом хирургов и медицинских работников во всех уголках мира. 9 рядов Swann Morton : Скальпельная ручка № 3 для лезвий 10 : 10a : 11 : 12 : 15 : 15a (Limited Edition) Бренд: Swann Morton. Ручка SF1 была разработана с учетом более сложных задач.64 с НДС. Размер упаковки: Каждая Цена: 5 фунтов стерлингов. Набор Swann Morton Scalpel № 3 с ручкой и набором из 5 лезвий № 11. Swann Morton 100 лезвий №26 и 1 ручка из нержавеющей стали № 4 и 1 блок для удаления лезвий Коробка из 100 нестерильных лезвий Swann Morton №26 по отдельности V. 21 в наличии (можно отложить) Добавить в корзину. защищенный металлической фольгой Пакеты из 5 лезвий + 1 ручка из нержавеющей стали № 4 длиной 130 мм + 1 устройство для удаления лезвий. 64. «Новый» черный Swann-Morton № 40 № 40. Торговая марка: Суонн-Мортон. Стандартная стоимость доставки по материковой части Великобритании 4 фунта стерлингов.Миниатюрные рукоятки скальпеля подходят для размеров лезвий от 61 до 91 и миринготомических лезвий. Совершая покупку через этот веб-сайт, вы соглашаетесь с настоящими Условиями и положениями, в которые время от времени могут вноситься поправки, и которые вступают в силу немедленно. The Swann-Morton No. Дата доступности: Печать. 00 Цена. Подходит для Swann-Morton № SM0803. Хирургические лезвия и рукоятки Swann-Morton®. Скальпели продаются в упаковке по пять штук. Учетная запись и списки Возвраты и заказы. Количество * Список еще не создан, пожалуйста, сначала создайте список.Щелкните здесь, чтобы просмотреть полный ассортимент стандартных ручек производства Swann-Morton в формате pdf. Невероятные скидки от 20% до 30% по сравнению с уже низкими ценами, даже при небольших партиях. Нажмите на продукт, чтобы увидеть, сколько вы можете сэкономить! Получите лучшие предложения на ручку swann morton на eBay. Основанная в Шеффилде в 1932 году компания Swann-Morton стала мировым лидером в производстве хирургических лезвий, скальпелей и рукояток. Кол-во Добавить в корзину. В январе 2008 года был успешно завершен перевод отделения хирургических рукояток из «Единицы 1» на новую площадку «Cobb Works» напротив главного здания в Оулертон-Грин.4: кусачки Swann-morton с выдвижным лезвием из нержавеющей стали – стерильно: устройство для удаления хирургических лезвий Swann-morton – стерильно: gima s. Swann Morton Fine Blades 5907 Size 67 Box 25. Основанная в 1932 году в Шеффилде компания Swann Morton является мировым лидером, известным своим качеством, точностью, стабильностью и надежностью. 5 из . 215 … Swann Morton Нестерильные одноразовые скальпели. Профессиональная линейка лезвий и рукояток Swann Morton производится с учетом потребностей столяров, профессионалов своего дела и энтузиастов. 1 оригинальная ручка Swann Morton Scalpel #3.широкий . Ручка Swann-Morton Fine SF1 представляет собой хирургическую рукоятку из нержавеющей стали, подходящую для использования с тонкими лезвиями Swann-Morton. Описание Рукоятки из нержавеющей стали с мерой или градуировкой на обратной стороне для облегчения обучения, маркировки правильного хирургического поля и исследования травм. Этот предмет – Суонн Мортон. Подробнее. 95 плюс НДС. Благодаря простой замене лезвия он подходит для ремесленных лезвий типа S, T, V, W и R40. Ручки из нержавеющей стали с мерой или градуировкой на обратной стороне.10 скальпель подходит к ручке № 23 Сегодня дополнительная скидка 3%! Ручки Swann Morton ACM. 1 Категория: Расходные материалы Найдите множество отличных новых и бывших в употреблении вариантов и получите лучшие предложения для Swann Morton Scalpel Handle No 3 for Blades 10 10a 11 12 15 15a в лучшем онлайн-магазине… Рукоятки Swann-Morton доступны в никелевом цвете, некоторые размеры доступны в нержавеющая сталь. Ручка хирургического скальпеля Swann-Morton Нет. Вы можете заказать этот товар сейчас, и мы сообщим вам, когда он снова появится в наличии. БЕСПЛАТНАЯ доставка на сумму свыше 50 фунтов стерлингов (напр.Лезвия в комплект не входят. ®. Съемники лезвий: #2806 Swann Morton Premium Blue Выдвижная рукоятка Код продукта: SM2806 4 фунта стерлингов. Все ручки в индивидуальной упаковке. Бренд Swann-Morton (Шеффилд) Начиная с. Swann Handle Микрохирургический скальпель с лезвием BP Morton Business Промышленное здравоохранение, лаборатория Стоматологические наконечники Инструменты Скальпели, хирургические лезвия Ручные facebook Ручка скальпеля многоразового использования Исследование рынка представляет собой аналитический отчет, в котором предприняты кропотливые усилия для изучения правильной и ценной информации.Рукоятка хирургического скальпеля Swann-Morton No. Маленькая одноразовая рукоятка хирургического скальпеля. Ручки Swann Morton ACM. Swann Morton No. Swann Morton Fine Blades 5902 Size 62 Box 25. Предлагая более толстую рукоятку, чем более тонкая ACM No1, эта рукоятка для тяжелых условий эксплуатации предназначена для использования на материалах средней плотности, таких как картон и ПВХ. SWANN MORTON HANDLE #1 – Качественная ручка. 00. 0 из 5 звезд Swann Morton – … Swann Morton Рукоятки для скальпеля 0. Рукоятка Premium Blue заменила известную выдвижную рукоятку SM2800 — она оснащена более прочным штыком из нержавеющей стали, обеспечивающим дополнительную боковую прочность и долговечность использования.В этом видео показана установка и снятие лезвия с рукоятки Swann Morton No3, No4. Ремесленный ассортимент Суонн-Мортон. РУКОЯТКА ДЛЯ СКАЛЬПЕЛЯ SWANN MORTON 5 W. 10A Стерильное лезвие для скальпеля (подходит для ручки № 13). 3 Handle — это удобная ручка, обеспечивающая точное управление кончиками пальцев, что делает их популярными. 3, такие как 10A и 11. 3, совместимы с лезвиями для дермапланирования № Swann-Morton ® и Lance ® Blades. SWANN MORTON SCALPEL Рукоятка №3 + 100 хирургических нестерильных лезвий №15 + устройство для удаления лезвий — $56. информация о доставке; Политика возврата; Проверить; Ручка Swann Morton Profold. Ручки скальпеля Cincinnati Surgical Swann-Morton из нержавеющей стали изготовлены из высококачественной британской хирургической стали. Рукоятка, разработанная Суонном Мортоном, имеет переднее положение, облегчающее установку и снятие лезвия, а также звуковые щелчки, указывающие на среднее положение использования и заднее безопасное положение, когда нож не используется. Количество. Premium Retractaway обеспечивает дополнительную безопасность благодаря ручному выдвижному механизму лезвия.Swann Morton Scalpel Handle No 3 Подходит для лезвий 6, 9, 10, 10A, 11, 12, 15, 16. 4 встроенные ручки; Доступны все размеры лопастей для максимального использования; Не изготовлен из натурального каучукового латекса; Индивидуально завернутый в фольгу; Продается набором из 200 тонких ручек для скальпеля Альтернативная рукоятка Swann-Morton была разработана для облегчения установки и снятия лезвия. Специализируясь на офтальмологии, реконструкции, кардиологии и восстановлении волос, хирурги могут предпочесть использовать линейку хирургических лезвий и рукояток Swann Mortons Fine. Главная > Лезвия и ручки для скальпеля > Лезвия для дермапланинга. 5А. Каждая доставка в течение 2-4 рабочих дней с нашего склада в Великобритании для товаров на складе 1+ 30 долларов США. ком. 9 Ручка скальпеля изготовлена ​​из твердой нержавеющей стали и предназначена для профессионалов и энтузиастов. 5 миллионов хирургических лезвий в день. … Суонн Мортон №3 Ручка. Рукоятки хирургического скальпеля 3L S/S Swann Morton Major используются с лезвиями для ортопедической и общей хирургии: 22B, 40, 40B, X, Y и Z, а также с лезвием для биопсии шейки матки CIN-01C.Ножницы для петель Swann-Morton одноразовые в соответствующих контейнерах для острых предметов. Ручки 3, 3L, 3 с градуировкой, 5B, 7, 9, B3 и B3L. Сравните этот продукт. Swann Morton — британский производитель скальпелей и лезвий. От 3 фунтов. Цена: 4 фунта стерлингов. 1+ £8. Swann Morton Scalpel set 9206 Выдвижная ручка и набор из 2 лезвий no10A «модернизированная модель». СКИДКА 11% по рекомендованной розничной цене 42 доллара США. none Хирургические лезвия и рукоятки Swann-Morton Основанная в 1932 году в Шеффилде, Англия, компания Swann-Morton стала мировым лидером в производстве хирургических лезвий, скальпелей и рукояток.Эти лезвия Swann-Morton имеют очень гладкую текстуру благодаря высокой технологии обработки поверхности. для лезвий – нет. Включает в себя набор из 5 лезвий #11. 1340 В наличии – БЕСПЛАТНАЯ доставка на следующий рабочий день. 10 долларов. Многоразовые и автоклавируемые. Получите завтра, 10 ноября. 3: ручка из нержавеющей стали swann-morton n. 5. По размеру и внешнему виду похож на ручку и удерживается таким же образом, он предназначен для небольших задач резки и должен использоваться только с легкими материалами, такими как бумага, картон и тонкий шпон дерева.Нет. … Нержавеющая сталь, сверхострые лезвия для масла от Swann-Morton. Рукоятки для канцелярских ножей типа 1 доступны от многих производителей. 30 каждый. 6 Скальпель * № 65 25+ $29. 00 – это всего 1 пенс за лезвие для обеспечения безопасной утилизации. Благодаря простой замене лезвия он подходит и безопасно втягивается. Номера хирургических лезвий Покупайте наш большой выбор медицинских принадлежностей и оборудования Медицинские принадлежности от ведущих брендов Стетоскопы 3M Littmann, мониторы артериального давления Welch Allyn и Omron — это только начало жизненно важного медицинского оборудования, которое Medshop предоставляет .Лезвие 10A для общего использования и зажигалка № 11 для обрезки тканей. 4 линейки хирургических лезвий. Эта линейка рукояток предназначена для обеспечения максимальной производительности и ловкости и имеет текстурированную поверхность для легкого и удобного захвата при минимизации усталости. ‹. Дермапланирование — это неинвазивная эстетическая процедура, при которой хирургическим лезвием, скальпелем или бритвой тщательно соскабливают поверхность кожи, удаляя нежелательные волосы, «персиковый пух», также называемый пушковыми волосами, из эпидермиса в таких областях, как верхняя губы, брови, лоб, щеки и подбородок. Cincinnati Surgical Swann-Morton Легкие ручки скальпеля из нержавеющей стали № 3 производства Cincinnati Surgical Company изготовлены из высококачественной британской хирургической стали, которая не ржавеет. 37 долларов. Артикул: 073S. Общая длина 116 мм без лезвия x диаметр 11 мм. Каталожный номер: ПКН5002/11. Бесплатная доставка. Поставки за пределы материковой части Великобритании и за границу рассчитываются в … Многоразовые исследования рынка рукояток скальпеля — это разведывательный отчет, в котором были предприняты тщательные усилия для изучения правильной и ценной информации.Предназначен для использования в деликатных и сложных хирургических процедурах. 99 SKU 03

SWNH Количество Количество Добавить в корзину Бесплатная доставка по Великобритании для всех заказов на сумму более 25 фунтов стерлингов! Поделиться этим: Поделиться в Facebook Твитнуть в Twitter Поделиться в LinkedIn Закрепить на Pinterest. НДС) на материковую часть Великобритании. О Суонне Мортоне. Стерильные одноразовые скальпели Swann-Morton, упакованные по отдельности в лотки и упакованные по 10 шт. , снабжены лезвиями из нержавеющей стали и ручками из полистирола. Эти качества помогли Swann-Morton стать лидером рынка среди медицинских работников.1 Подходит для ручки 72054-104. I. Swann-Morton® Специальные и безопасные лезвия, ручки и аксессуары. Чтобы узнать цены, свяжитесь с Briggate Medical. Эргономичная рукоятка Swann-Morton™ Эргономичная рукоятка для хирургических лезвий. Swann-Morton – имя, уважаемое во всем мире за неизменность качества, точность и надежность, а также за сочетание традиционных навыков изготовления лезвий Swann Morton Scalpel Blades & Handles 0 Рукоятки и лезвия Swann Morton используются как любителями, так и профессиональными мастерами по всему миру для выполнения деликатной и точной резки и задачи по маркировке на широком спектре материалов.Мы предлагаем широкий выбор лезвий и рукояток, а также набор инструментов Swann Mortin ACM Craft, который включает в себя полный набор инструментов. Y. От 36 фунтов стерлингов. Ручка No3 идеально подходит для резки креплений, шаблонов и трафаретов. Предлагая еще один вариант для ремесленников Swann-Morton, эти рукоятки спроектированы так, чтобы максимизировать производительность и ловкость, а также имеют текстурированную поверхность для легкого и удобного захвата при минимизации усталости. 8 долларов. Рукоятка скальпеля №. Рукоятка SM00 представляет собой прочную литейную металлическую рукоятку с фиксированным лезвием, особенно подходящую для работы по дереву, ремесел и изготовления моделей, а также для выполнения самых современных требований.Посмотреть все скальпели и канцелярские ножи. Ручки мини-скальпеля изготовлены из нержавеющей стали. 18, 19, 20, 21, 22, 22A, 23, 24, 25, 25A, 26, 27 и 36. Текущий ассортимент включает в себя 70 форм лезвий и 27 рукояток, которые можно использовать в разных… Ручки Swann-Morton® доступны в никель, некоторые размеры доступны из нержавеющей стали. Непревзойденная острота Лезвие, которое не только изначально острее, но и остается острым, является результатом более чем 50-летней приверженности инновациям. 15 Стерильный одноразовый скальпель (выдвижной) £ 1.Скальпели и лезвия Swann-Morton. Newark предлагает быстрые расценки, доставку в тот же день, быструю доставку, широкий ассортимент, спецификации и техническую поддержку. Swann Morton Cobbett Ручка для кожного трансплантата, нержавеющая сталь. Сделано в Англии. Этот ремесленный нож Swann Morton производится в Шеффилде, Англия, по тем же строгим стандартам, что и их всемирно известная линейка хирургических лезвий и рукояток. Почему? Консистенция надежность и точность. Swann Handle Micro Surgical With Blade Scalpel BP Morton Business Industrial Здравоохранение, лаборатория Стоматологические наконечники Инструменты Скальпели, хирургические лезвия Hand facebook Мы рекомендуем использовать устройство для удаления хирургических лезвий Swann-Morton.: 1603. 5 рукояток и 13 прецизионно заточенных лезвий из углеродистой стали 65 долларов США. Идеальный инструмент для художников-графиков, дизайнеров, любителей и прикладного искусства. Рукоятки скальпеля Swann-Morton® изготовлены из высококачественной нержавеющей стали и имеют меру или градуировку на обратной стороне, чтобы облегчить обучение, отмечая точное хирургическое место и исследование раны. Эта ручка скальпеля от Swann-Morton оснащена ручным выдвижным механизмом лезвия и может использоваться для ряда задач и проектов, включая декоративно-прикладное искусство, маркетри, проектирование и DIY.Лезвия в комплект не входят, но их можно приобрести отдельно. Хирургические рукоятки Нет, но STEP не позволяет мне легко удалить маркировку измерений. Swann Morton – Прямое лезвие для рукояти No. Indigo поставляет продукцию марки Swann Morton уже более 20 лет и предлагает самые лучшие цены в Великобритании на весь ассортимент лезвий и рукояток Swann Morton. 00 (включая НДС) Деталь №: T-KN1005. 00 $ 78. Артикул: PIM5095. Подробнее. 04097 . Фирменный инструмент Swann Morton, специально разработанный для удобства во время длительного процесса резки форм благодаря своей легкой конструкции.Лезвия Swann-Morton изготовлены из высококачественной стали. Потратьте еще 75 фунтов стерлингов. N. 05. Лебединый хребет Суонна Мортона. КУРЬЕРСКАЯ ДОСТАВКА – Заказ в течение 1 часа 13 минут для отправки СЕГОДНЯ. Количество: Добавить в корзину. 90 Лезвия скальпеля Swann Morton: 6, 10, 10a, 11, 23 и 26 Рукоятки скальпеля Swann Morton: 3, 4, 5A, 6A, 7 и Retractaway Мы также поставляем промышленные лезвия (совместимые с лезвиями Stanley), ножи Swann Morton Blue Trimming и отламывающиеся лезвия. 4 отлично подходит для разметки (шипы, ласточкины хвосты и т. д.), резки шпона и маркетри.Ручки для скальпеля Swann Morton. Артикул: SMHANDLE. 03 . 31 доллар. Магазин Суонн Мортон. Swann Morton — бренд номер 1 в области стерильных и нестерильных хирургических лезвий и ручек для скальпелей. Посмотреть в истории заказов. Эти лезвия идеально подходят для работы в небольших труднодоступных местах Лезвия и рукоятки хирургического скальпеля Swann Morton, ведущий поставщик в Великобритании Для изготовления наших моделей рук наши моделисты используют хирургические скальпели от Swann-Morton. Эти одноразовые скальпели стерильны, индивидуально запечатаны в лотки и упакованы по 10 штук.Каждый. swann-morton ручка из нержавеющей стали n. Компания поставляет ряд хирургических лезвий и рукояток, а также лезвия и рукоятки для ветеринарии, ортопедии и стоматологии. Качество ручки Swann Morton означает, что лезвие надежно удерживается, в отличие от многих более дешевых брендов, и с такими острыми лезвиями качество действительно имеет значение. Добавить в корзину. Называемые «масляным лезвием», эти лезвия можно использовать в эстетических процедурах, таких как «дермапланинг», который помогает «обновить» верхние слои кожи с помощью метода контролируемого хирургического соскабливания, который отшелушивает эпидермис.Подходит для лезвий размером 10, 10A и 11. Мы гордимся тем, что предлагаем две линейки лезвий, скальпелей и рукояток высочайшего качества. Для простоты использования Swann 5A Acrylic является решением для удобного захвата. Swann Handle Micro Surgical With Blade Scalpel BP Morton Business Industrial Healthcare, Lab Стоматологические наконечники Инструменты Скальпели, хирургические лезвия Hand facebook РУКОЯТКА ДЛЯ СКАЛЬПЕЛЯ С градуировкой на обратной стороне Эргономичный дизайн с гладким коническим восьмиугольным корпусом, обеспечивающим точное управление кончиками пальцев Нержавеющая сталь Многоразовое использование Бренд: Swann Morton со склада в Великобритании, при условии продажи Swann Morton. 10 Стерильный одноразовый скальпель (выдвижной) длиной 1,4 1/2 фунта стерлингов. ПД0245. Ручка скальпеля Swann Morton из нержавеющей стали Grad. Главная / Скальпели, иглы и шприцы / Ручки для скальпеля Swann Morton. Ручка 5A представляет собой акриловую ручку, подходящую для использования с лезвиями Swann-Morton размера 3. Он используется в различных хирургических процедурах, включая иссечение поражений кожи или рецидивирующих кист сальных желез, а также для вскрытия коронарных артерий. Цена продажи: Swann-Morton #SF1 Хирургическая рукоятка из нержавеющей стали Fine Range.Swann Morton Scalpel Blades & Hands, одноразовые скальпели, съемники лезвий, ножницы для стежков для продажи в Интернете. Ручка скальпеля Swann-Morton №4. Рукоятка подходит как для лезвий с закругленным носом PM60, так и для PM60*. 1 рукоятка, 1 x № ++39 02 953854209/221/225 – … Скальпель, 9303 Лезвие, углеродистая сталь, № Мы рекомендуем использовать устройство для извлечения хирургического лезвия Swann-Morton. № по каталогу Главная > Лезвия/рукоятки > Скальпель > SWANN-MORTON #15 N/S BLADE 100 SWANN-MORTON #15 N/S BLADE 100 . 4 Рукоятка (код 8-196) включает №.Supa-R представляет собой отлитую под давлением выдвижную металлическую ручку, Swann Morton, артикул 1459. Этот предмет ограничен для приобретения администратором вашей компании. Ручка Swann Morton Scalpel из нержавеющей стали – это настоящий скальпель хирурга, отлично подходящий для резки в таких видах деятельности, как создание моделей, графика, искусство, ремесла и лабораторные работы. Его длина составляет 130 мм, и он считается базовой рукояткой для линейки лезвий Fine. СУАНН-МОРТОН. Для всех работ по резке и обрезке. Бестселлер среди лабораторных ножей и скальпелей.Мы проверим ваш возраст перед отправкой заказа, и это может потребовать от нас связаться с нами. ARA INDUSTRIES — растущая компания по производству хирургических инструментов. 1 ручка. Быстрый просмотр. Дополнение к традиционным формам лезвий Swann-Morton, разработанное для более сложных хирургических процедур. Ручка 3 размера. Здравствуйте! Войдите в систему. Рукоятка рукояти ножа Swann Morton #5. Swann Morton: набор… Ручка для скальпеля — выдвижная Swann Morton подходит для 10, 10A, 11, 15, P896-2806 896-2806.7011 Harwin Dr. Swann Handle Micro Surgical With Blade Scalpel BP Morton Business Industrial Healthcare, Lab Стоматологические наконечники Инструменты Скальпели, хирургические лезвия Ручные facebook Swann Morton Scalpel Handle 10, 11P, 15 Craft, Hobbies Выдвижное лезвие STERILE Hausbargains 4. 2. 18, 19 , 20, 21, 22, 22A, 23, 24, 25, 25A, 26, 27 Скальпели Swann-Morton — лучшее, что вы можете купить. Полезный. Артикул: H091 001 S05 Категории: Ручки для скальпеля, Swann Morton. 00 каждый. МИД: SM9902. Ручки миниатюрного скальпеля Cincinnati Surgical Swann-Morton изготовлены из высококачественной британской хирургической стали.01SM10R: Cincinnati Surgical by Swann Morton Sterile # 10R DERMAPLANING «Butter Blades» Лезвие скальпеля из нержавеющей стали, узкая поверхность, использование рукояток скальпеля серии № 3, коробка из 100 шт. использоваться в эстетических процедурах, таких как «дермапланинг», который помогает обновить верхние слои кожи… Основанная в Шеффилде в 1932 году компания Swann-Morton стала мировым лидером в производстве хирургических лезвий, скальпелей и ручек. Swann Morton No 4 Ручка для скальпеля.Swann Morton ACM № 2 Рукоятка с лезвием № 2 № 9106 ACM № Качество Металлическая ручка Swann Morton № 3. Ручка и лезвия Swann-Morton Scalpel 3G S/S 10 $ 79. ПУНКТ; Ручки для скальпеля Swann Morton. В наличии. Лезвия Swann-Morton долговечнее и прочнее, чем у конкурентов. Это очень универсальный режущий инструмент, созданный специально для дизайнеров, художников-графиков и моделистов, с дополнительной безопасностью механизма выдвижных лезвий. У нас есть большой онлайн-выбор по самым низким ценам с быстрой и бесплатной доставкой на многие товары! Исследование рынка многоразовых ручек для скальпеля представляет собой интеллектуальный отчет, в котором были предприняты тщательные усилия для изучения правильной и ценной информации.00 для БЕСПЛАТНОЙ ДОСТАВКИ (только для континентальной части Великобритании. Эти инструменты идеально подходят для скрапбукинга, создания нестандартных рамок, скульптур, работ по дереву и вырезанию из бумаги. Дополнительная информация. Ручку можно открыть вручную для замены лезвия. Длинная ручка Swann-Morton Scalpel Handle £9. Comtrade Store (800) 532-4608. Это устройство герметично и безопасно снимает лезвия со всех лезвий № 10, 10A, 11, 15 и 15A. B16 Лезвия Swann-Morton®.Он был разработан с учетом комфорта, позволяя . Ручка для скальпеля Swann Morton No 3 с лезвиями 5 X No 10a, найдите полную информацию о ручке для скальпеля Swann Morton No 3 с лезвиями 5 X No 10a, Ручка для скальпеля Swann Morton No3 – нержавеющая сталь, Набор ручек Swann-morton № 3, Swann Morton Нестерильные хирургические лезвия и рукоятки от поставщика или производителя базовых хирургических инструментов – DELTA MED SURGICAL Buy 0101 – Swann-morton – SWANN MORTON BLADE 10, PK5 F. Swann Morton Одноразовая рукоятка и лезвие № 15, коробка 10.8 из 5 звезд. Эта ручка имеет независимо завинчивающуюся верхнюю часть. Эксклюзивная скидка с . 1235 # 1241. Это обеспечивает ремесленникам и модельерам более надежный захват, большую поперечную прочность и большую устойчивость при резке. Ведущие гинекологи всегда могут положиться на стабильное качество, точность и эффективность лезвий, скальпелей и ручек для биопсии шейки матки 01C от Cincinnati Surgical и Swann Morton, которые, как известно, производятся в Шеффилде, Англия, из британской хирургической стали высшего качества.3, 4, 5А, 6А и выдвижные ручки. Мы поставляем оригинальные скальпели, лезвия и ручки Swann Morton. Наличие : 21 В наличии. Лезвие № 15 имеет небольшую изогнутую режущую кромку и является самой популярной формой лезвия, идеально подходящей для коротких и точных надрезов, с ручкой в ​​стерильных упаковках с одинарным кожухом Ручки для скальпеля, Swann Morton. Ручка Swann Morton из нержавеющей стали. 00 без НДС применяются следующие тарифы на доставку: Swann-Morton Number 3 Рукоятка для хирургических лезвий (скальпеля) 13 долларов США. Наконечник предназначен для фиксации лезвия на месте, чтобы оно не двигалось во время резки, обеспечивая пользователю максимальную точность.Высококачественные микроострые хирургические лезвия из углеродистой стали. 95. Swann-Morton, тип 0102. Этот шаг совпал с развитием технологии изготовления рукояток, используемой Swann-Morton в ответ на изменение мирового спроса на рукоятки из нержавеющей стали и … Swann Morton – Рукоятка хирургического скальпеля – нержавеющая сталь. Хирургические рукоятки Swann-Morton Fine Range Scalpel подходят для тонких лезвий скальпеля, используемых в таких дисциплинах, как реконструкция, офтальмология, кардиология и восстановление волос.93 (например, номер установки. Эти рукоятки подходят для таких дисциплин, как реконструкция, офтальмология, кардиология и даже восстановление волос, хирурги иногда могут предпочесть наш ассортимент Fine. Эти продукты продаются ТОЛЬКО лицензированным практикующим врачам или медицинским учреждениям. Нержавеющая сталь 5B (для Лезвия № SMHPCH Пластиковая ручка для рукоделия Swann-Morton 1 фунт стерлингов Swann Morton. Вы ранее приобрели этот продукт. Ручки из нержавеющей стали 4G S/S с мерой или градуировкой на обратной стороне. 50 (включая НДС) Деталь №: P5535625. Swann Morton Хирургические лезвия и ручки. 2 лезвия и пластиковая защита для безопасности (кардованная). Дополнительным преимуществом безопасности является механизм ручного выдвижения лезвий. Одноразовые скальпели Swann-Morton®. Лезвие для скальпеля № 10a Swann Morton (упаковка из 100 шт.) 37 долларов. Рукоятка SM00 представляет собой фиксированную прочную литую металлическую ручку, особенно подходящую для работы по дереву, ремесел и изготовления моделей, а также для самых современных требований умелого человека и D. Кол-во. Ручки Swann Morton – Нержавеющая сталь – Нет. Создать новую… Лезвия и ручки Swann Morton для скальпеля.Артикул: H090 001 S05 Категории: Ручки для скальпеля, Swann Morton. Swann Morton No3 Scalpel Handle – Нержавеющая сталь – Номер 3 от Swann Morton. Заголовок Заголовок по умолчанию. 49. Swann Morton Fine Blades 5904 Size 64 Box 25. 4L S/S Более длинная версия №. В настоящее время недоступна. 41 шт. в наличии (возможен заказ) В корзину. Количество В корзину Вы не можете купить свой собственный предмет. Ручка скальпеля № 3 подходит для размеров лезвий от 6 до 16. Общая длина 145 мм с установленным лезвием № 2 Мы также предлагаем 4 ручки ACM № 2 без лезвий.Swann Morton №4 Ручка с набором из 5 лезвий № 26. Минимальный заказ 1 шт. Только кратно 1 Пожалуйста, введите действительное количество. 2 рукоятки, 1 х № 5 Эргономичная рукоятка совместима с любыми формами лезвий, включенными в этот №. Эргономичный дизайн с гладким сужающимся восьмиугольным корпусом обеспечивает точное управление кончиками пальцев. Swann-Morton® #5B Хирургическая выпуклая рукоятка из нержавеющей стали, нестерильная Ручка для скальпеля Swann Morton 10, 11P, 15 Craft, Hobbies Выдвижное лезвие STERILE Hausbargains $ 5. SMH7 No.95 без НДС: В наличии: КУПИТЬ Аксессуары к P896-2806 896-2806. Ручки изготовлены из прочной нержавеющей стали и прослужат много лет. Рукоятка Swann Morton ACM No2. Swann-Morton Нет. Основанная в Шеффилде в 1932 году компания Swann-Morton стала мировым лидером в производстве хирургических лезвий, скальпелей и рукояток. Ручки скальпеля. Сообщить о нарушении. £ 3. Скальпель № ›. Купить 2338 – Swann-morton – РУЧКА СКАЛЬПЕЛЯ TRIMAWAY С ЛЕЗВИЕМ 25A. Искусства и ремесла. Стерильные лезвия Swann Morton No.12 0 фунтов стерлингов. Чтобы купить этот продукт, вы должны быть старше 18 лет. от Signgeer. Быстрая цитата. Swann Morton SM9101 NoScale A. Для заказов на веб-сайте на сумму менее 75 фунтов стерлингов. Расходы. На своем производственном предприятии в Шеффилде, Великобритания, Swann-Morton производит более 1. Рукоятки для лезвий скальпеля Swann Morton #3. 0934. Существует три различных типа продуктов Swann-Morton ACM. 25 / каждый; Кол-во Добавить в корзину Этот товар не подлежит возврату. Swann Morton No 3 Ручка для скальпеля. ЗА ПРЕДЕЛАМИ ВЕЛИКОБРИТАНИИ? Позвоните нам 01484 717 … Абсолютно единственный модельный нож, который я использовал для резки бальзы и тонкой фанеры за последние 40 лет, — это Swann Morton No 3 с ручкой No.СМх5Л № Лезвие хирургического скальпеля № 5см-Бейли. Эта ручка имеет убирающееся лезвие и используется с лезвиями 10A и 11. можно попробовать оставить их. № 110, Хьюстон, Техас, 77036. 25 долларов. Предмет с ограниченным доступом. Каждая упаковка содержит 1 шт. • Резка под острым углом и точная обрезка. 25. Линия ножей, лезвий и рукояток для декоративно-прикладного искусства Swann-Morton предназначена для профессиональных художников. для лезвий – в том числе No. Ручки и лезвия Swann Morton используются как любителями, так и профессиональными мастерами по всему миру для выполнения тонких и точных работ по резке и маркировке широкого спектра материалов.45. Мы рекомендуем вам приобрести 2 ручки, чтобы вы могли . Страница 1 из 1 Начало . 49 – 39 фунтов стерлингов. Примечание: лезвия не показаны в натуральную величину. Swann-Morton #SF23 Хирургическая рукоятка из нержавеющей стали Fine Range. 3 – Чирекс-Б. Особенности… Swann Morton Mini Blade Handles. ИСПОЛЬЗУЙТЕ С РУЧКОЙ СКАЛЬПЕЛЯ #3 или ручкой Swann-Morton Craft. 100 подлинных нестерильных лезвий из углеродистой стали Swann Morton #15. 2 подходит. Деталь № Размер: № 3 Ручка со шкалой № B3 Ручка № 4 Ручка № 4 Длинная ручка. СМ0933 . Название по умолчанию — 24 доллара.Мы предлагаем для вас всех клиентов, просто сообщите нам свои проекты, чертежи, фотографии, и мы изготовим инструменты. Скальпели из нержавеющей стали, изготовленные Swann-Morton Sheffield, пользуются популярностью у хирургов во всем мире. Swann Morton Retractaway — это гладкая ручка с графитовым покрытием, обеспечивающая дополнительную безопасность благодаря механизму с выдвижным лезвием. 2 ручки с 1 х №. Будьте первым, кто оставит отзыв об этом продукте. ® Swann-Morton ® Хирургические лезвия. Суонн Мортон ручка №4. Слей это! На данный момент этого товара нет на складе.02 £9. Большинство продуктов, которые мы продаем, являются медицинскими продуктами и имеют пометку «RX» или «для продажи врачом или по его заказу». Хирургический скальпель Ручка номер 9S/S. Описание Swann-Morton Number 3 Рукоятка для хирургических лезвий (скальпеля) Новая и запечатанная Почтовая оплата Это будет отправлено первым классом. Количество: Акриловая ручка Swann-Morton № 8 из 5 звезд 1082. Лезвия скальпеля из хирургической стали Swann Morton всемирно известны своим качеством. Они доступны в нестерильной углеродистой стали. п. 12$. Форма подписки.. Исследование рынка многоразовых ручек для скальпеля представляет собой интеллектуальный отчет, в котором были предприняты тщательные усилия для изучения правильной и ценной информации. Swann-Morton — мировой лидер в производстве лезвий, рукояток и одноразовых скальпелей для хирургических скальпелей. Это очень универсальный режущий инструмент, созданный специально для дизайнеров, художников-графиков и модельеров. Это самые популярные лезвия для дермапланинга; № 14, № 10 и № 10R (также известные как «лезвие для масла») Для получения подробной информации см.; Swann-Morton-Dermaplaning-Blades.Уникальная конструкция обеспечивает большой прорыв в строгих ортопедических процедурах и в общей хирургии, где иногда на лезвие может оказываться избыточное боковое давление. 5 из 5 звезд (10) $ 5. $ 11. Термическая обработка для обеспечения необходимой жесткости и гибкости. Сменные и альтернативные лезвия доступны в упаковках по пять штук. 80 каждый. 4017/СГ. Скальпели Swann-Morton® и Lance®. Ручки из нержавеющей стали 3G S/S с мерой или градуировкой на обратной стороне. Доступны четыре варианта рукояток, рукоятки скальпеля Swann… Swann-Morton из нержавеющей стали содержат сменные лезвия, подходящие для различных режущих работ.Nordson, EFD, купить инструменты, наборы инструментов Jensen и кейсы онлайн! Медицинское оборудование, сети, камеры безопасности и коммуникации. Информация о продукте. Сверхострые и долговечные лезвия идеально подходят для рукоделия и хобби. Общая длина 119 мм; Ручка поставляется нестерильной; Изготовлен из высококачественной хирургической стали; СУАНН МОРТОН РУЧКА №1. Опции Swann Morton : Устройство для удаления лезвий скальпеля UNIT 161 4 предлагает от 7 долларов. Лезвия. 38. Swann Morton No. 3% OFF RRP $9. Изготовленная со стальным штыком, дающим пользователю прочное и удобное ощущение, рукоятка рассчитана на длительный срок службы и использует те же лезвия, что и стандартный Retractaway. Swann Handle Микрохирургический скальпель с лезвием BP Morton Business Промышленное здравоохранение, лаборатория Стоматологические наконечники Инструменты Скальпели, хирургические лезвия Ручной facebook Swann Morton рукоятка для ремесленного ножа #2. а. SWANN MORTON HANDLES Only – Retractaway No 3 4 3L 4L Для лезвий хирургического скальпеля – 5,78 евро. Бесплатная доставка по материковой части Великобритании для заказов на веб-сайте на сумму более 75 фунтов стерлингов. 3 фунта стерлингов. Посмотреть полные характеристики. C. 61. Лезвия скальпеля 10А, изготовлены из углеродистой стали. 00. Рукоятки скальпеля Swann-Morton® имеют идеальный вес и форму и не скользят.Легкие, тонкие и точные, но в то же время прочные и надежные. Артикул производителя: 02SMV15 30. Артикул: HSU246. Ручка Cygnetic из нержавеющей стали от Swann-Morton призвана обеспечить дополнительную прочность и стабильность за счет комбинации специально разработанной ручки. Ветеринария и уход. 16. НДС) Просмотр продукта Swann Morton – Оранжевая пластиковая ручка инструмента для поделок # 1235. P896-0010 896-0010: Лезвия для скальпеля Swann Morton № 10 x 10 P896-0010 896-0010. Swann Morton Scalpel Blades для №.4 ручки Посмотреть ассортимент продукции Описание № Медицинские и хирургические. Код акций. 18, 19 . Swann Morton Scalpel Handles Магазин будет работать некорректно в случае, если куки отключены. Замена и альтернатива. 78. В наличии: 41 В наличии. 1 Range — это легкий и точный набор, предназначенный для небольших резцов на более мягких материалах . Это идеальный нож для задач, где требуется точность, а не сила, например, скрапбукинг. Лезвия скальпеля острее, чем лезвия ножей для хобби, а также дольше остаются острыми.14 долларов. Лезвия № 6, 9, 10, 10A, 11, 12, 15, 16 совместимы с ручкой Swann Morton No3 и 5 лезвиями за 8 фунтов стерлингов. 17 Swann Morton ACM Прецизионное шлифованное лезвие ножа общего назначения из углеродистой стали с долотообразным наконечником подходит для ACM № 45 17 обзоров Этот скальпель был разработан с учетом потребностей профессионалов. Нет. Изготовленные в Шеффилде, Англия, эти лезвия хорошо известны тем, что неизменно соответствуют высоким стандартам прочности и остроты. Swann Morton Fine Blades 5901 Size 61 Box 25. via marconi, 1 – 20060 gessate (mi) тел.Swann Morton из нержавеющей стали, полностью автоклавируемая ручка. Добавить в «Избранное» Набор из 5 нестерильных лезвий из углеродистой стали Swann-Morton #11 Инструменты для резки резиновых форм для ювелирных изделий – KNIF-0002 JewelryTooling области искусства, ремесел и моделирования. Добавить в корзину. Списки закупок позволяют сохранить список продуктов, отправить его по электронной почте на утверждение (или распечатать), а затем вернуть… 850-079.Рукоятки из нержавеющей стали с мерой или градуировкой на обратной стороне для облегчения обучения, маркировки правильного хирургического поля и исследования травм. Стерильные хирургические лезвия и ручки Swann Morton – № 4. 3) . Рукоятки металлических лезвий Swann Morton® подходят для лезвий № 60 и № 70 Символы опасности Применимые таблички и символы опасности Наведите курсор на каждую табличку, чтобы увидеть описание ее значения Основанная в Шеффилде в 1932 году компания Swann-Morton стала мировым лидером в производстве хирургических инструментов. лезвия, скальпели и ручки.Стерильные лезвия Swann-Morton из углеродистой стали, индивидуально упакованные и поставляемые в наборах по пять штук. Выдвижная ручка Swann Morton Premium Blue. Ручка совместима со стандартным номером. Поставляется в упаковках по 5 штук. Ручка Swann Morton № 3 из нержавеющей стали с градуировкой. 00BHS . Эти миниатюрные ручки имеют рифленую рукоятку, которая облегчает обращение. 4 подходит для лезвий скальпеля: 20, 21, 22, 22A, 23, 24 и 26. Устройство рассчитано на 100 лезвий и стоит всего 1 фунт стерлингов. B. 5A Рукоятка сочетает в себе штык из нержавеющей стали и акриловую рукоятку.Сопутствующие продукты, которые могут представлять интерес, см. также; Уголок эстетов. 65. Ручка Swann Morton SF4 – короткая и автоклавируемая. 6, 9, 10, 10А, 10Р, Э/11, 11, 11П. Перейти к началу галереи изображений. ЦЕНА ; 2 фунта стерлингов. Это повлияет на нас сегодня между 14:00 и 15:00. Основанная в Шеффилде в 1932 году компания Swann-Morton стала мировым лидером в производстве хирургических лезвий, скальпелей и рукояток. Акриловая ручка Swann Morton 5A с удобным захватом. Размер упаковки: 10 упаковок. 3 Ручки Просмотреть ассортимент продукции Описание No.Добавить в список желаний . Эти ножи являются незаменимым повседневным инструментом для изготовления и установки вывесок. Наличие: Есть в наличии. SM0-R Ручка. Swann Morton – Рукоятка хирургического скальпеля – Нержавеющая сталь. Ручки Swann-Morton изготавливаются из никеля, некоторые размеры изготавливаются из нержавеющей стали. Swann Morton no6a Рукоять с набором из 5 лезвий № 26. Медицинский класс, нержавеющая сталь. Бешеный пес и англичанин. Добавить в список желаний. КУРЬЕРСКАЯ ДОСТАВКА – Заказ в течение 2 дней 20 часов 16 минут для отправки в понедельник, 21 февраля.3 – Ручки из хирургической нержавеющей стали для лезвий. Выдвижная ручка Swann Morton. 50 € Добавить в корзину. swann morton sku: pm8 Никелевый сплав PM8 Рукоятка со стандартным лезвием в новой высококачественной версии из нержавеющей стали. 2 фунта стерлингов. Купите Swann Morton SM0806 Хирургическая ручка скальпеля № 6 – никелевый сплав по выгодным ценам в AHP medicals от ведущих брендов, ведущих поставщиков медицинского оборудования в Великобритании. Swann Morton Handle No. 99 Упаковка из 15 хирургических лезвий 10 и ручка для скальпеля из нержавеющей стали, размер 10 лезвий для скальпеля с ручкой, Dermablade из высокоуглеродистой стали Хирургические 10 лезвий с ручкой из нержавеющей стали 472 1 предложение от 14 долларов.Эти ручки для хирургических лезвий доступны как в длинных, так и в стандартных длинах. 1 оригинальный инструмент для снятия лезвий скальпеля Swann Morton. 79 Ассортимент продукции Swann-Morton – НЕТ В ПРОДАЖЕ! Артикул: Ручка скальпеля Swann Morton #3… Подлинные стерильные лезвия Swann Morton (сделано в Шеффилде, Англия). Фильтр. 4 фунта стерлингов. +. Цена: 9 фунтов стерлингов. 90. . ROYAL MAIL DELIVERY – Заказ в течение 1 часа 13 минут для отправки СЕГОДНЯ. От 5 фунтов стерлингов. Написать другу Задать вопрос Добавить в список закупок. 0 фунтов стерлингов. Каждое лезвие искусно закалено и отшлифовано до острого скоса для точной заточки.энтузиаст. 1127. Ознакомьтесь с нашим выбором ручек swann morton, чтобы найти самые лучшие уникальные или изготовленные на заказ изделия ручной работы из наших магазинов. 24 и № 3 Ассортимент рукояток и лезвий представляет собой легкий набор инструментов для точной резки мягких и легких материалов в небольших проектах по резке. Подходит для использования с лезвиями и пилами; * Нет. Артикул SWANNGRP. Доступны поштучно или в упаковке по 10 штук. 60. Показаны все 3 результата. Мы хотели бы услышать от вас после 15:00, если вы можете перезвонить нам.Ручка Swann Morton типа “Бобер” № SF3. Этот выдвижной механизм теперь изготавливается из нержавеющей стали для повышения прочности. Лезвия и скальпели Swann-Morton зарекомендовали себя во всем мире как качественные. 4. P. Рукоятка ACM No2 с накаткой, обеспечивающей больший захват и удобство для пользователя, поставляется с одним лезвием No2. диапазон ручек на выставке COMOC на стенде 72.Суонн-Мортон Хэндл. Непревзойденный контроль при разрезе благодаря постоянно более острой и прочной режущей кромке является отличительной чертой, которая отличает хирургические лезвия Swann-Morton® от любых других и делает их незаменимыми для клиницистов во всем мире. Они доступны в стерильном и нестерильном исполнении, из нержавеющей стали (SS), а также из углеродистой стали (CS). Войдите, чтобы купить. Это имя, уважаемое во всем мире за качество, точность, постоянство и надежность, а также за сочетание традиционных навыков изготовления лезвий с новейшими технологиями.Swann-Morton Scalpel 3G S/S Handle & Blades 10A $ 79. Специально для профессионалов и энтузиастов ремесел компания Swann-Morton изготовила акриловую рукоятку 6A в сочетании с байонетным замком из нержавеющей стали, чтобы обеспечить пользователю более надежный захват и большая боковая прочность и устойчивость при резке. 6, 9, 10, 10А, 10Р, Е/11, 11, 11П, 12, 12Д, 13, 14, 15, 15А, 15С, 15Т, 16, 40 и СГ3. Они подходят для различных задач, включая моделирование и ремесленные работы, графику, резку форм, производство и печать ювелирных изделий и художественные работы.Суонн Мортон рулит. CreativismUK 5 из 5 звезд (73. Ручки скальпеля Swann-Morton из нержавеющей стали содержат сменные лезвия, подходящие для различных режущих работ. 30. Сделано в Англии. Данные, которые были просмотрены, сделаны с учетом обоих, существующих ведущих игроков и будущие конкуренты.Набор включает ручку скальпеля №3 и пять лезвий 10А.Для создания наших моделей рук наши моделисты используют хирургические скальпели от Swann-Morton.Ручка Swann Morton №3.Нет в наличии.Цены на РУЧКИ СКАЛЬПЕЛЯ SWANN MORTON: КОД; 0933. 5 фунтов стерлингов. Производитель: Swann-Morton™ 07SM6BE Посмотреть другие версии этого продукта. 3. 3 Ручка для скальпеля изготовлена ​​из твердой нержавеющей стали, имеет градуированную шкалу мм/см и предназначена для профессионалов и энтузиастов. Пакер/шпатель с рифленой рукояткой 12. Коробка для удаления лезвий Swann Morton . 17 50+ … Swann Handle Микрохирургический скальпель с лезвием BP Morton Business Industrial Healthcare, Lab Стоматологические наконечники Инструменты Скальпели, хирургические лезвия Hand facebook Лезвие Swann Morton #10R подходит к ручке № 3.Количество в КОРОБКЕ: Добавить в корзину #15 УГЛЕРОДИСТАЯ СТАЛЬ – НЕСТЕРИЛЬНАЯ 100 шт. /кор.

yjd d76 mkf amq8 sov xbp stz i0l hr2z hyt5 wil wghm j2ch 28x 6opy hjcc vsn rjg 083 b2na ia9g jwex 4cx 9cd omem 9hj nra lky snm mpl

Массачусетс Общие законы Глава 48, Раздел 79 (2020)

Раздел 79. Район на собрании, созванном для этого, может аннексировать прилегающую территорию и ее жителей, если об этом ходатайствует большинство избирателей указанной территории, определяя их пределы; или может по ходатайству любого лица с согласия города, в котором находится такой район, исключить его или его имущество из него; при условии, однако, что такое исключение должно быть предоставлено округом без такого согласия города, если заявитель или его имущество расположены так, что не могут пользоваться какими-либо средствами пожаротушения или водоснабжения, принадлежащими округу, или расположены так, что быть более доступным для пожарных или водных объектов другого пожарного округа; и при условии, кроме того, что такое исключение не может быть предоставлено округом, если заявитель или его имущество расположены так, что могут пользоваться либо пожарными, либо водными сооружениями, принадлежащими округу. Ходатайство об исключении должно быть подано в пруденциальный комитет округа не позднее даты, установленной для подачи ходатайств о включении статей в постановление окружного собрания, на котором должно быть рассмотрено ходатайство, и должно быть указано причина, по которой заявитель требует исключения. Комитет по пруденциальному надзору распорядится о включении соответствующей статьи в ордер на указанное собрание, изучит изложенную причину и доложит о своих выводах с рекомендациями указанному собранию.Любой такой заявитель, недовольный действиями пруденциального комитета или действиями избирателей округа по его ходатайству, может обратиться в суд высшей инстанции, заседающий по справедливости в округе, в котором расположен округ, для получения средств правовой защиты. По такой апелляции указанный суд должен, если будет установлено, что причина, изложенная заявителем, находится в рамках целей настоящего раздела, предоставить такое исключение.

Предоставление исключения освобождает лицо и имущество заявителя от любого налога, взимаемого по причине любых ассигнований, сделанных округом после подачи петиции, как предусмотрено в настоящем документе.

RBD-антитела против SARS-CoV-2, которые максимизируют широту охвата и устойчивость к побегу

Линии клеток млекопитающих

Линии клеток были получены от ATCC (Vero E6, Vero, BHK-21, CHO-K1, HEK293T/17), Takara ( Lenti-X 293T) и Thermo Fisher Scientific (ExpiCHO-S, Expi293F и Freestyle 293-F). Клетки MA104 были подарком от HB Greenberg (Стэнфордская школа медицины). Ячейки 293T-ACE2 описаны в ссылках 31,43. Клеточные линии Vero и MA104 дали отрицательный результат на заражение микоплазмой.Другие клеточные линии не тестировались. Проверка подлинности не выполнялась сверх стандартов производителя.

Выделение мононуклеаров периферической крови, плазмы и сыворотки

Образцы от трех человек, выздоровевших от SARS-CoV-2, обозначенных как доноры S2H (36 лет, мужчины), S2D (70 лет, мужчины) и S2X (возраст 52, мужчина) были получены в соответствии с протоколами исследования, одобренными местным Институциональным наблюдательным советом (Комитет по этике кантона Тичино, Швейцария). Все доноры предоставили письменное информированное согласие на использование крови и компонентов крови (таких как мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК), сыворотки или плазмы).Кровь, взятая у донора S2X, была получена на 48-й день (антитела S2X16, S2X35 и S2X58) и 75-й день (S2X227) после появления симптомов. Кровь от донора S2H была получена на 17-й день (S2h23 и S2h24), 45-й день (S2H58) и 81-й день (S2H97) после появления симптомов. Кровь от донора S2D была получена на 98-й день (S2D106) после появления симптомов.

PBMC были выделены из взятия крови, выполненного с использованием пробирок, предварительно заполненных гепарином, с последующим центрифугированием в градиенте плотности фиколла. РВМС либо использовали в свежем виде для сортировки В-клеток памяти, специфичных для шиповидного белка SARS-CoV-2, либо хранили в жидком азоте для последующего использования.Сыворотки получали из крови, собранной в пробирки с активатором свертывания, с последующим центрифугированием и хранением при -80 °С.

Сыворотки для блокирования серологических анализов связывания были получены от 3 когорт выздоравливающих SARS-CoV-2 (средний возраст 52 года, диапазон 25–78 лет, 55% мужчин) или вакцинированных (средний возраст 49 лет, диапазон 28–69 лет, 65% мужчин) ) индивидуальные протоколы исследования, одобренные местными институциональными наблюдательными советами (Комитет по этике кантона Тичино, Швейцария, Комитет по этике больницы Луиджи Сакко, Милан, Италия, и WCG North America, Принстон, штат Нью-Джерси, США).Все доноры предоставили письменное информированное согласие на использование крови и компонентов крови (таких как РВМС, сыворотка или плазма) и были набраны в больницах или амбулаторно.

Выделение В-клеток и продукция рекомбинантных моноклональных антител

Ранее сообщалось об открытии и начальной характеристике шести антител в нашей панели (S309 и S304, ссылки 4,15 ; S2X35, S2h23 и S2h24, ссылка , 15 и S2E12, ссылка 8 ), а остальные шесть (S2H97, S2X16, S2H58, S2D106, S2X58 и S2X227) впервые описаны в этой статье. Начиная со свежевыделенных PBMC или после оттаивания клеток, В-клетки обогащали путем окрашивания CD19 PE-Cy7 (BD Bioscience 557835, 1:50) и инкубации с анти-PE MicroBeads (Miltenyi Biotec 130-048-801, 1:100). с последующей положительной селекцией с использованием колонок LS (Miltenyi Biotec). Обогащенные В-клетки окрашивали анти-IgM (BioLegend 314508, 1:20), анти-IgD (BD Bioscience 555779, 1:40), анти-CD14 (BD Bioscience 562691, 1:50) и анти-IgA (Southern Biotech 2050-09, 1:400), все с ПЭ-маркировкой, и префузию SARS-CoV-2 S с биотинилированной ави-меткой (собственного производства), конъюгированной со стрептавидином-Alexa-Fluor 647 (Life Technologies S21374, 1:40).В-клетки памяти IgG + , специфичные для SARS-CoV-2, были отсортированы с помощью проточной цитометрии с гейтированием на PE-отрицательные и Alexa-Fluor 647-положительные клетки. Клетки культивировали для скрининга положительных супернатантов. Последовательности VH и VL антител получали с помощью ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР), а моноклональные антитела экспрессировали в виде рекомбинантного Fab-фрагмента человека или в виде IgG1 (аллотип G1m3), несущего мутацию M428L/N434S (LS) с продлевающим период полураспада в ФК регион. Клетки ExpiCHO-S (Thermo Fisher Scientific) временно трансфицировали векторами экспрессии тяжелой и легкой цепи, как описано ранее 4 .Аффинную очистку проводили на Äkta Xpress FPLC (Cytiva) под управлением программного обеспечения Unicorn версии 5.11 (Build 407) с использованием колонок HiTrap Protein A (Cytiva) для полноразмерных моноклональных антител человека и колонок CaptureSelect Ch2-XL MiniChrom (Thermo Fisher Scientific) для Fab-фрагментов. , используя PBS в качестве подвижной фазы. Замену буфера на соответствующий буфер состава проводили с помощью колонки для обессоливания HiTrap Fast (Cytiva). Конечные продукты стерилизовали фильтрованием через фильтры 0,22 мкм и хранили при 4 °С.

Используя базу данных IMGT (http://www.imgt.org), семейство генов зародышевой линии Vh и Vl и число соматических мутаций определяли путем анализа гомологии последовательностей Vh и Vl с известными человеческими последовательностями V , гены D и J . Последовательности Vh и V1 с реверсией зародышевой линии были сконструированы с использованием IMGT/V-QUEST. Антитела с реверсией зародышевой линии S2E12 и S2H97 (аллотип G1m17) были произведены ATUM. Фрагменты Fab с реверсивной зародышевой линией были получены путем расщепления соответствующих IgG.

Классы эпитопов, показанные на фиг. 1a, 2g определены, как у Piccoli et al. 15 . Вкратце, классификация этих классов эпитопов является результатом экспериментов по биннингу октетов с использованием структурно охарактеризованных антител, структурных представлений для определения распознавания открытых только RBD и способности антител препятствовать связыванию RBD с ACE2. В частности, сайт Ia доступен только в открытом состоянии RBD и в значительной степени перекрывает след ACE2; сайт Ib доступен как в открытом, так и в закрытом состоянии RBD и частично перекрывает зону охвата ACE2; сайт IIa находится в ядре RBD (доступен только в открытом состоянии RBD), и антитела, связывающиеся с этим сайтом, мешают связыванию с ACE2, сайт IIc также находится в ядре RBD, но нацелен на антитела, которые не мешают связыванию с ACE2; сайт IV полностью доступен как на открытых, так и на закрытых RBD и определяется следом антитела S309.

Нейтрализация подлинного SARS-CoV-2 с помощью анализа ингибирования проникновения

Нейтрализация определялась с использованием SARS-CoV-2-Nluc, инфекционного клона SARS-CoV-2 (на основе штамма 2019-nCoV/USA_WA1/2020) который кодирует нанолюциферазу вместо вирусной ORF7 и демонстрирует кинетику роста, сравнимую с вирусом дикого типа 44 . Клетки Vero E6 (ATCC, CRL-1586) высевали в 96-луночные планшеты с черными стенками и прозрачным дном в количестве 2 × 10 4 клеток на лунку и культивировали в течение ночи при 37°C.На следующий день готовили 9-точечные четырехкратные серийные разведения моноклональных антител в инфекционной среде (DMEM + 10% FBS). SARS-CoV-2-Nluc разводили в инфекционной среде при конечной множественности заражения (MOI) 0,01 бляшкообразующих единиц (PFU) на клетку, добавляли к разведениям моноклональных антител и инкубировали в течение 30 мин при 37 °C. Из клеток Vero E6 удаляли среду, добавляли комплексы моноклональных антител с вирусом и инкубировали при 37 °C в течение 24 часов. Из клеток удаляли среду, добавляли субстрат люциферазы Nano-Glo (Promega) в соответствии с рекомендациями производителя, инкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре и количественно определяли сигнал люциферазы на планшет-ридере Victor Nivo (Perkin Elmer).

Генерация псевдотипированных VSV шипов SARS-CoV-2 и анализ нейтрализации

Репликационно-дефектные псевдовирусы VSV 45 , экспрессирующие шиповидный белок SARS-CoV-2, были созданы, как описано ранее 46 с некоторыми модификациями. Плазмиды, кодирующие одиночные мутантные варианты шипа SARS-CoV-2, были получены путем сайт-направленного мутагенеза плазмиды дикого типа, pcDNA3.1(+)-spike-D19 47 , и плазмид, кодирующих множественные мутации SARS-CoV-2. Интересующие варианты были созданы с использованием многоэтапного протокола ПЦР с удлинением с перекрытием 23,48 , в котором были сконструированы последовательные перекрывающиеся фрагменты для введения всех мутаций, которые были собраны с помощью ПЦР и клонированы в pcDNA3. 1 вектор с использованием набора для клонирования Takara In-fusion HD в соответствии с инструкциями производителя.

Клетки Lenti-X 293T (Takara, 632180) высевали в 10-сантиметровые чашки с плотностью 1 × 10 5 клеток на см 2 и на следующий день трансфицировали 5 мкг экспрессионной плазмиды спайка с TransIT- Ленти (Мирус, 6600) согласно инструкции производителя. Для анализа нейтрализации с интересующими вариантами (рис. 2d, 3b) клетки Lenti-X 293T высевали в 10-сантиметровые чашки с плотностью 5 × 10 6 клеток на см 2 и трансфицировали на следующий день. с 10 мкг шиповидной экспрессионной плазмиды.Через сутки после трансфекции клетки инфицировали VSV (G*ΔG-люциферазой) (Kerafast, Eh2020-p.m.) в течение 1 ч, трижды промывали PBS, затем инкубировали еще 24 ч в полной среде при 37 °C. Супернатант клеток очищали центрифугированием, фильтровали (0,45 мкм), делили на аликвоты и замораживали при -80 °С.

Для анализа нейтрализации псевдовируса VSV клетки Vero E6 (ATCC, CRL-1586) выращивали в среде DMEM с добавлением 10 % FBS и высевали в белые 96-луночные планшеты с прозрачным дном (Costar, 3903) при плотности 2 × 10 4 клеток на лунку. На следующий день моноклональные антитела серийно разводили в предварительно подогретых полных средах, смешивали в соотношении 1:1 с псевдовирусом и инкубировали в течение 1 ч при 37 °С в круглодонных полипропиленовых чашках. Среду из клеток отсасывали и добавляли к клеткам 50 мкл комплексов вирус-моноклональное антитело, после чего инкубировали в течение 1 ч при 37 °С. Затем поверх комплексов добавляли дополнительные 100 мкл предварительно подогретой полной среды и клетки инкубировали в течение дополнительных 16–24 часов. Условия тестировали в дублирующихся лунках на каждом планшете, и по крайней мере шесть лунок на планшет содержали неинфицированные, необработанные клетки (ложные) и инфицированные, необработанные клетки («контроль без mAb»).

Затем из клеток отсасывали среду, содержащую комплексы вирус-моноклональное антитело, и к клеткам добавляли 100 мкл разбавления 1:4 Bio-glo (Promega, G7940) в PBS. Для анализа нейтрализации с интересующими вариантами к клеткам вместо Bio-glo добавляли 50 мкл разведения 1:2 SteadyLite Plus (Perkin Elmer) в PBS с Ca 2+ и Mg 2+ . Планшеты инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре, а затем анализировали с помощью планшетного ридера Envision (PerkinElmer) или, в случае вариантов анализов, с помощью гибридного многорежимного ридера Synergy h2 (Biotek).

Измерения относительных световых единиц (RLU) для зараженных лунок вычитали из среднего значения RLU для пробных лунок (фоновое вычитание), а затем нормализовали к среднему вычтенному из фона значению RLU «без контроля mAb» в каждом планшете. Процент нейтрализации рассчитывали путем вычитания из 1 нормализованного состояния инфицирования моноклональными антителами. Данные были проанализированы и визуализированы с помощью Prism (версия 8.4.3). Значения IC 50 рассчитывали из интерполированного значения из логарифма (ингибитор) по сравнению с нелинейной регрессией «отклик-переменный наклон» (четыре параметра) с верхним ограничением <100.Эксперименты по нейтрализации вируса SARS-CoV-2 дикого типа и одиночных мутантных вариантов проводились в течение трех независимых дней, то есть в биологических повторах, где каждый биологический повтор содержит технический дубликат. Значения IC 50 в биологических повторностях представлены как среднее геометрическое. Потерю или усиление нейтрализующей активности для вариантов с шипами рассчитывали путем деления варианта IC 50 на родительскую IC 50 в каждой биологической повторности. Эксперименты по нейтрализации вызывающих озабоченность вариантов SARS-CoV-2 S проводились в биологических дубликатах, при этом значения IC 50 были нормализованы соответствующим измерением дикого типа и представлены как среднее арифметическое результатов повторных экспериментов.

Нейтрализация псевдотипированного VSV шипа SARS-CoV-2 на клетках 293T-ACE2

Для изучения влияния экспрессии ACE2 на нейтрализацию S2H97 клетки Vero E6 высевали по 20 000 клеток на лунку в черные 96-луночные планшеты с прозрачным дном. Клетки 293T-ACE2 31 высевали по 35000 клеток на лунку в черные 96-луночные планшеты с прозрачным дном, предварительно покрытые поли-d-лизином (Gibco). На следующий день проводили нейтрализацию VSV с псевдотипом SARS-CoV-2 с помощью S2E12, S309 и S2H97, как описано выше.Нейтрализацию проводили в трех лунках.

Нейтрализация псевдотипированного VSV шипа сарбековируса с помощью S2H97

Экспрессионные конструкции млекопитающих (pcDNA3.1(+) или pTwist-CMV), кодирующие шиповидные белки различных сарбековирусов с С-концевой делецией 19 аминокислот (D19), были синтезированы для SARS -CoV-2 (GenBank: QOU99296.1), SARS-CoV-1 Urbani (GenBank: AAP13441.1), hCoV-19/pangolin/Guangdong/1/2019 (GD-pangolin-CoV, GenBank: QLR06867.1) , коронавирус панголина Guanxi-2017 (GX-pangolin-CoV, GenBank: QIA48623.1) и сарбековирус летучих мышей WIV1 (WIV1, GenBank: AGZ48828.1). Клетки Lenti-X 293T (Takara, 632180) высевали в чашки диаметром 15 см таким образом, чтобы клетки достигали 80% слияния после культивирования в течение ночи. На следующий день клетки трансфицировали с помощью TransIT-Lenti (Mirus, 6600) в соответствии с инструкциями производителя. Через сутки после трансфекции клетки инфицировали ВВС (G*ΔG-люцифераза) (Kerafast, Eh2020-p.m.). Супернатант, содержащий псевдотипированный сарбековирус VSV, собирали через 2 дня после трансфекции, центрифугировали при 1000 g в течение 5 мин, делили на аликвоты и замораживали при -80°С.

Для анализа нейтрализации клетки, поддерживающие сильную псевдовирусную инфекцию, высевали в 96-луночные планшеты с прозрачным дном и белыми стенками по 20 000 клеток на лунку в 100 мкл культуральной среды. Клетки Vero E6 использовали для VSV-SARS-CoV-2, VSV-SARS-CoV-1 и VSV-GD-pangolin-CoV. Клетки BHK-21 (ATCC, CCL-10), стабильно экспрессирующие ACE2, использовали для VSV-GX-pangolin-CoV и VSV-WIV1. После культивирования клеток в течение ночи готовили серийные разведения антител 1:3 в среде DMEM в трех повторностях. Псевдовирус разбавляли в DMEM и добавляли к каждому разведению антител таким образом, чтобы конечное разведение псевдовируса составляло 1:20.Смеси псевдовирус-антитело инкубировали в течение 1 ч при 37 °С. Из клеток удаляли среду и добавляли 50 мкл смеси псевдовирус:антитело. Через час после инфицирования в лунки со смесью псевдовирус:антитело добавляли по 50 мкл питательной среды и инкубировали в течение ночи при 37 °С. Затем среду удаляли и в каждую лунку добавляли 100 мкл разбавленного 1:1 субстрата люциферазы DPBS:Bio-Glo (Promega, G7940). Планшет встряхивали при 300 об/мин при комнатной температуре в течение 10 мин, после чего показания RLU снимали на ридере для микропланшетов EnSight (Perkin Elmer).Процент нейтрализации определяли путем вычитания среднего фона (клетки только с субстратом люциферазы) значений RLU для 6 лунок на планшет для всех точек данных. Процент нейтрализации для каждой концентрации антител рассчитывали относительно контрольных лунок без антител для каждого планшета. Данные о процентной нейтрализации анализировали и отображали в виде графика с использованием Prism (GraphPad, v9.0.1). Абсолютные значения IC 50 были рассчитаны путем подгонки кривой с использованием модели нелинейной регрессии (переменный наклон, 4 параметра), а значения были интерполированы из кривой при y  = 50%. Среднее геометрическое по крайней мере из двух независимых экспериментов рассчитывали с помощью Excel (Microsoft, версия 16.45).

Шипы псевдотипированного VSV сарбековируса, нейтрализация S2E12

Шипы SARS-CoV-2 (CAD0240757.1), RaTG13 (QHR63300.2), GD-панголин (QLR06867.1), GX-панголин (QIA48623.1), SARS -CoV-1 Tor2 (YP009825051), WIV1 (AGZ48831.1) и WIV16 (ALK02457.1) использовались для псевдотипирования VSV. Для получения псевдотипированных вирусов HEK293T/17 (ATCC, CRL-11268), высеянные на 10-см чашки в среду DMEM с добавлением 10% FBS, 1% пенициллин-стрептомицин, трансфицировали плазмидами с использованием липофектамина 2000 (Life Technologies) в соответствии с инструкциями производителя.Через один день после трансфекции клетки инфицировали VSV (G*ΔG-люциферазой) в течение 2 ч и промывали 4 раза DMEM, а затем добавляли среду, содержащую антитело против VSV-G (супернатант I1-гибридомы мыши в разведении 1:50). , из CRL-2700, ATCC). Псевдотипированные частицы собирали через 18 ч после инокуляции, осветляли центрифугированием при 2000 g в течение 5 мин, концентрировали в 10 раз на мембранном фильтре с отсечкой 30 кДа и хранили при -80°С. Для экспериментов по нейтрализации S2E12 клетки 293T, стабильно экспрессирующие ACE2 (BEI #NR-52511) 43 в DMEM с добавлением 10% FBS и 1% пенициллина-стрептомицина, высевали по 40 000 клеток на лунку в 96-луночные лунки с прозрачным дном и белыми стенками. чашках и культивировали в течение ночи при 37 °C.Двенадцать трехкратных серийных разведений антитела S2E12 готовили в DMEM, и разведения антител смешивали 1:1 с псевдотипированным VSV в присутствии разбавленного 1:50 антитела против VSV-G. После 45 мин инкубации при 37 °С к клеткам добавляли 40 мкл смеси антитело-вирус, а через 2 ч после заражения добавляли 40 мкл DMEM. Через 17–20 ч к клеткам добавляли 50 мкл субстрата One-Glo-EX (Promega). Клетки инкубировали в темноте в течение 5–10 мин перед снятием люминесценции на планшет-ридере Varioskan LUX (Thermo Fisher Scientific).Относительные значения единиц люциферазы были преобразованы в процент нейтрализации и нанесены на график с кривой нелинейной регрессии, подобранной в GraphPad Prism. Измерения проводили в двух повторностях с двумя независимыми продукциями псевдотипированного вируса.

Производство рекомбинантного белка

Белок дикого типа RBD SARS-CoV-2 для анализа связывания SPR (с N-концевым сигнальным пептидом и C-концевым сайтом расщепления тромбином-TwinStrep-8×His-tag) экспрессировали в Expi293F (Thermo Fisher Scientific) при 37 °C и 8% CO 2 .Трансфекции выполняли с использованием набора для трансфекции ExpiFectamine 293 (Thermo Fisher Scientific). Супернатанты клеточных культур собирали через три дня после трансфекции и добавляли 10× PBS до конечной концентрации 2,5× PBS (342,5 мМ NaCl, 6,75 мМ KCl и 29,75 мМ фосфатов). RBD SARS-CoV-2 очищали с использованием картриджей HisTALON Superflow объемом 1 или 5 мл (Takara Bio), а затем буфер заменяли на 1× буфер HBS-N (Cytiva) или PBS с использованием опреснения Zeba Spin (Thermo Fisher Scientific) или HiPrep 26/. 10 (Cytiva) опреснительная колонна.

RBD дикого типа SARS-CoV-2 для кристаллизации (с N-концевым сигнальным пептидом, ETGT и C-концевым 8×His-меткой) экспрессировали, как описано выше, в присутствии 10 мкМ кифунензина. Супернатант клеточной культуры собирали через четыре дня после трансфекции и добавляли 10× PBS до конечной концентрации 2,5× PBS. Белок очищали с использованием картриджа HisTALON Superflow объемом 5 мл с последующей эксклюзионной хроматографией на колонке Superdex 200 Увеличение 10/300 GL (Cytiva), уравновешенной 20 мМ трис-HCl, pH 7.5, 150 мМ NaCl. Для кристаллизации Fab-комплексов RBD-S2X259-S2H97 и RBD-S2E12-S304-S309 RBD дегликозилировали путем инкубации в течение ночи с гликозидазой EndoH при 4 °C.

RBD других сарбековирусов для SPR (с N-концевым сигнальным пептидом и C-концевым сайтом расщепления тромбином – TwinStrep-8×His-tag) экспрессировали в клетках Expi293F при 37 °C и 8% CO 2 . Клетки трансфицировали с использованием PEI MAX (Polysciences) при соотношении ДНК:PEI 1:3,75. Через три дня после трансфекции к трансфицированным клеткам добавляли 3 г л -1 глюкозы (Bioconcept) и 5 ​​г л -1 гидролизата сои (Sigma-Aldrich).Супернатант клеточной культуры (423 мл) собирали через 7 дней после трансфекции и добавляли 47 мл 10-кратного буфера для связывания (1 М Трис-HCl, 1,5 М NaCl, 20 мМ ЭДТА, рН 8,0) и 25 мл BioLock (IBA) и инкубировали на лед на 30 мин. Белки очищали с использованием 5-мл картриджа высокой емкости Strep-Tactin XT Superflow (IBA) с последующей заменой буфера на PBS с использованием колонок для обессоливания HiPrep 26/10 (Cytiva).

Стабилизированные до слияния шиповидные белки SARS-CoV-2 для SPR (остатки 14–1211, либо D614, либо D614G), содержащие мутации 2P и сайта расщепления фурином 49 с сигнальным пептидом мю-фосфатазы и С-концевым Avi -8×His-C-tag или C-концевой 8xHis-Avi-C-tag экспрессировали в клетках Freestyle 293-F (Thermo Fisher Scientific, R79007) при 37°C и 8% CO 2 .Трансфекции выполняли с использованием 293fectin в качестве реагента для трансфекции. Супернатант клеточной культуры собирали через три дня и очищали на 5 мл аффинной матрицы C-tag. Элюированные фракции концентрировали и вводили в колонку Superose 6 Увеличить 10/300 GL (Cytiva) с 50 мМ Tris-HCl, pH 8,0, и 200 мМ NaCl в качестве рабочего буфера.

Шиповый белок SARS-CoV-2 HexaPro для криоЭМ-анализа был получен в клетках Freestyle 293-F, выращенных в суспензии с использованием среды для экспрессии FreeStyle 293 (Life Technologies) при 37 °C во влажном инкубаторе с 8% CO 2 , вращающемся на 130 об/мин. Культуры трансфицировали с использованием PEI (9 мкг мл -1 ) с клетками, выращенными до плотности 2,5 миллиона клеток на мл, и культивировали в течение трех дней. Собирали супернатанты и ресуспендировали клетки еще в течение трех дней, получая по две коллекции от каждой такой культуры. Спайковые белки очищали из осветленных супернатантов с использованием 5 мл кобальтовой аффинной колонки (Cytiva, HiTrap TALON raw), концентрировали и мгновенно замораживали в буфере, содержащем 20 мМ Трис, рН 8,0, и 150 мМ NaCl перед анализом.

Тример нативного эктодомена SARS-CoV-2 S для анализа рефолдинга был сконструирован с использованием сигнального пептида мю-фосфатазы, начинающегося с 14Q, мутированного сайта расщепления S1/S2 (SGAR) и расщепления TEV, мотива тримеризации укладки , и 8-кратный тег His, добавленный к концу C (K1211). Нативный шип экспрессировали и очищали, как описано выше для шипа SARS-CoV-2 HexaPro.

Рекомбинантный hACE2 для SPR (остатки 19–615 из Uniprot Q9BYF1 с C-концевой меткой AviTag-10×His-GGG и N-концевым сигнальным пептидом) был произведен ATUM. Белок очищали с помощью смолы Ni Sepharose с последующим выделением мономерного hACE2 с помощью эксклюзионной хроматографии с использованием колонки Superdex 200 Увеличить 10/300 GL (Cytiva), предварительно уравновешенной PBS.

Анализ связывания SPR

Измерения связывания SPR проводили с использованием прибора Biacore T200 с сенсорным чипом CM5, ковалентно иммобилизованным StrepTactin XT для захвата рекомбинантных белков RBD (данные на рис. 1a, расширенные данные рис. 1c, 4f, i, l) . Рабочий буфер представлял собой Cytiva HBS-EP+ (pH 7.4). Все измерения проводились при 25 °C. Концентрации анализируемого вещества Fab (или hACE2) составляли 11, 33, 100 и 300 нМ, как кинетика одного цикла. Данные с вычитанием двойных эталонов согласовывались с моделью связывания 1:1 с использованием программного обеспечения Biacore T200 Evaluation (версия 3.1) или Biacore Insight Evaluation (версия 2.0.15). K D Значения выше 1 мкМ были определены из подборок, в которых максимальный сигнал SPR при насыщении ( R макс ) был установлен как константа, определенная на основе результатов связывания аналитов с более высоким сродством к одному и тому же RBD на той же поверхности. плотность.Данные, в которых не указаны средние значения, являются репрезентативными для повторных или трехкратных измерений (за исключением измерений с использованием Fabs зародышевой линии, которые были одноэлементными измерениями).

Чтобы подтвердить измерения связывания RBD SARS-CoV-2, были также проведены эксперименты в двух дополнительных форматах, оба с моновалентными аналитами (данные в расширенной таблице данных 1): (1) связывание Fab с шиповидным эктодоменом SARS-CoV-2 было измерено с использованием сенсорных чипов CM5, иммобилизованных с pAb против AviTag (Genscript, A00674-40) для захвата S, другие параметры эксперимента такие же, как указано выше, и (2) связывание RBD с IgG измеряли с использованием сенсорных чипов CM5, иммобилизованных с pAb против Fc человека. (Southern Biotech, 2014-01) для захвата IgG с концентрацией аналита RBD 3.1, 12,5 и 50 нМ, другие параметры эксперимента такие же, как указано выше. Результаты подгонки дают очевидные K D для экспериментов по связыванию шипов, потому что кинетика также отражает конформационную динамику шипов. Эктодомен спайка представлял собой D614G с C-концевой 8xHis-Avi-C-меткой для всех измерений, за исключением того, что связывание S2X58 выполняли с шипом D614 с C-концевой Avi-8xHis-C-меткой. Для сравнения связывания зрелых и возвращенных к зародышевой линии антител с RaTG13 приводимые данные относятся к формату эксперимента (2) с IgG в качестве лиганда.Эти данные (и другие данные, указанные в таблице расширенных данных 1 как «двухфазная кинетика»), соответствовали модели гетерогенного лиганда из-за искусственной кинетической фазы с очень медленной диссоциацией, которая часто возникает, когда аналитом является RBD; более низкое сродство двух значений K D , о которых сообщает подбор, дается как K D (два значения K D разделены по крайней мере на один порядок величины).

Глубокое мутационное сканирование Профилирование ускользающих мутантов

Мы использовали ранее описанный подход глубокого мутационного сканирования 3 для всесторонней идентификации мутаций RBD, которые ускользают от связывания каждым антителом. Этот подход использует дублированные библиотеки мутантов RBD 26 , которые содержат практически все 3819 возможных аминокислотных мутаций на фоне последовательности RBD Wuhan-Hu-1. Варианты библиотеки ранее были связаны с короткими последовательностями штрих-кода идентификатора и отсортированы для очистки библиотеки от вариантов, которые сильно снижают аффинность связывания ACE2 или экспрессию свернутого RBD 3 .

Сначала мы использовали изогенный штамм дрожжей, экспрессирующий немутировавший RBD SARS-CoV-2, и проточную цитометрию для определения EC90 связывания каждого антитела с RBD SARS-CoV-2, отображаемым на дрожжах.Затем мы выполнили отбор библиотек, как описано ранее 3,20 , пометив библиотеки концентрацией антитела EC90, чтобы стандартизировать чувствительность к ускользающим мутациям при выборе. Вкратце, библиотеки дрожжей индуцировали для поверхностной экспрессии, промывали и метили первичным антителом на 1 ч при комнатной температуре. Клетки промывали и вторично метили 1:200 PE-конъюгированным козьим антителом против человеческого IgG (Jackson ImmunoResearch 109-115-098) для мечения связанного антитела и 1:100 FITC-конъюгированным куриным анти-Myc-tag ( Immunology Consultants Lab, CYMC-45F) для маркировки поверхностной экспрессии RBD.Мы подготовили контроли для установки ворот отбора FACS, пометив дрожжи, экспрессирующие немутированный RBD SARS-CoV-2, с той же концентрацией антител, что и выборки из библиотеки (1×), 100-кратное снижение концентрации антител, чтобы проиллюстрировать влияние мутаций с 100-кратно сниженной аффинностью. и 0 нг мл антитела -1 , чтобы проиллюстрировать полную потерю связывания антитела. Репрезентативные ворота выбора показаны на рис. 2b с расширенными данными. Гейты были установлены и сортировка выполнена с помощью программного обеспечения FACSDiva (версия 6.1.3). Мы отсортировали примерно 7,5 × 10 6 клеток RBD + на библиотеку на BD FACSAria II, собрав дрожжевые клетки из корзины для сортировки ускользающих антител (фракции библиотеки, попадающие в ячейку для ускользающих антител, приведены на рис. 2c с расширенными данными). Отсортированные клетки восстанавливали в течение ночи, плазмиды экстрагировали из предсортированных популяций и популяций, ускользающих от антител, а последовательности штрих-кода, идентифицирующие варианты, амплифицировали с помощью ПЦР и секвенировали на Illumina HiSeq 2500 3,26 .

Как описано ранее 3,20 , секвенирование до и после отбора использовалось для оценки «фракции ускользания» для каждого варианта библиотеки, которая отражает долю дрожжей, экспрессирующих вариант, который попадает в FACS-ускользание от антител. мусорное ведроВкратце, мы использовали пакет dms_variants (https://jbloomlab.github.io/dms_variants/, версия 0.8.2) для обработки последовательностей Illumina в число вариантов до и после выбора с использованием таблицы поиска вариантов штрих-кода/RBD от Starr. и другие. 26 . Затем мы рассчитали долю ускользающих вариантов для каждого варианта v ( E v ) как: \({E}_{v}=F\times ({n}_{{v}_{{ \rm{p}}{\rm{o}}{\rm{s}}{\rm{t}}}}/{N}_{{\rm{p}}{\rm{o}}{ \rm{s}}{\rm{t}}})/({n}_{{v}_{{\rm{p}}{\rm{r}}{\rm{e}}}} /{N}_{{\rm{p}}{\rm{r}}{\rm{e}}})\), где F – это общая доля библиотеки, которая не связывается с антителами (расширенные данные Инжир. 2c), \({n}_{{v}_{{\rm{p}}{\rm{o}}{\rm{s}}{\rm{t}}}}\) и \( {n}_{{v}_{{\rm{p}}{\rm{r}}{\rm{e}}}}\) – количество секвенирований варианта v в библиотеке RBD после и до отбора FACS, соответственно (с псевдосчетом 0,5, добавленным ко всем подсчетам), и N после и N до представляют собой общие подсчеты всех вариантов после и до отбора FACS, соответственно. Затем мы применили вычислительные фильтры, чтобы удалить варианты с низким числом секвенирований до сортировки или очень вредными мутациями, которые могут вызвать искусственное ускользание антител из-за глобального развертывания или потери экспрессии RBD на клеточной поверхности.В частности, мы отфильтровали варианты, у которых количество секвенирования перед отбором было ниже, чем количество 99-го процентиля вариантов, содержащих преждевременные стоп-кодоны, которые были в значительной степени очищены предыдущими сортами для RBD-экспрессирующих и ACE2-связывающих вариантов RBD. Мы также удалили варианты с показателями связывания ACE2 ниже -2,35 или показателями экспрессии RBD ниже -1, а также варианты, содержащие отдельные мутации с эффектами ниже этих пороговых значений, используя измерения глубокого мутационного сканирования на уровне вариантов и мутаций Starr et al. 26 . Мы также отфильтровали редкие мутации с низким охватом в библиотеках, сохранив мутации, которые были отобраны по крайней мере для одного варианта со штрих-кодом с одним мутантом или по крайней мере для двух вариантов с множественными мутациями в каждой повторности. Наконец, чтобы разложить фракции ускользания одиночной мутации для каждого антитела, мы реализовали глобальные модели эпистаза 50 , используя пакет dms_variants для оценки эффекта каждой отдельной мутации аминокислоты, точно так, как описано в ref. 20 .

Отбор ускользающих антител проводился в полных повторах с использованием независимо созданных и проанализированных мутантных библиотек SARS-CoV-2 (см. корреляции в расширенных данных, рис. 2e, f). Фракции ускользания, о которых сообщается в документе, представляют собой среднее значение для двух повторов, и эти окончательные доли ускользания для каждой мутации представлены на GitHub (https://github.com/jbloomlab/SARS-CoV-2-RBD_MAP_Vir_mAbs/blob/main/ результаты/supp_data/vir_antibodies_raw_data. csv). Интерактивные визуализации карт ускользания антител (https://jbloomlab.github.io/SARS-CoV-2-RBD_MAP_Vir_mAbs) были созданы с использованием dms-view 51 .

Анализы связывания библиотеки сарбековирусов

Был собран тщательно подобранный набор всех уникальных аминокислотных последовательностей RBD сарбековируса, включая набор последовательностей RBD сарбековируса, описанный Letko et al. 7 , наряду с дополнительными уникальными последовательностями RBD среди эпидемических штаммов SARS-CoV-1, о которых сообщили Song et al. 52 , BtKY72 53 и новые последовательности сарбековируса RmYN02 54 , GD-панголин-КоВ (консенсус RBD представлен на рисунке 3a Lam et al. 55 ) и GX-pangolin-CoV 55 (P2V, неоднозначный нуклеотид в кодоне 515 (нумерация шипов SARS-CoV-2) разрешено сохранять F515, который сохраняется во всех других сарбековирусах). Список всех RBD и порядковых номеров доступен на GitHub (https://github. com/jbloomlab/SARSr-CoV_RBD_MAP/blob/main/data/RBD_accessions.csv).

Чтобы определить клады RBD сарбековируса, было создано выравнивание аминокислотных последовательностей RBD с использованием mafft 56 со штрафом за открытие гэпа 4.5 (выравнивание доступно на GitHub: https://github.com/jbloomlab/SARSr-CoV_RBD_MAP/blob/main/data/RBD_aa_aligned.fasta). Соответствующее выравнивание нуклеотидной последовательности было получено из выравнивания аминокислот с использованием PAL2NAL 57 . Филогенез генной последовательности был выведен с использованием RAxML версии 8.2.12 58 с моделью замещения GTRGAMMA и моделью разделения с отдельными параметрами для первого, второго и третьего положений кодона. Последовательность RBD хибековируса Hp-Zhejiang2013 (GenBank: KF636752) использовали в качестве внешней группы для укоренения филогении сарбековируса.

Все уникальные последовательности, кодирующие белок RBD сарбековируса, были заказаны в IDT, Twist или Genscript и клонированы в наш дрожжевой дисплейный вектор 26 . Последовательности были объединены и дополнены нижележащими последовательностями штрих-кода из 16 нуклеотидов в соответствии с протоколом, описанным в Starr et al. 26 . Длинные циклические консенсусные последовательности, охватывающие 16-нуклеотидный штрих-код и генотип RBD, были собраны на PacBio Sequel v2.0 и обработаны точно так, как описано в Starr et al. 26 .В результате была получена таблица поиска штрих-код: вариант для библиотеки RBD сарбековируса, аналогичная той, которая использовалась для библиотек мутантов SARS-CoV-2. Эта таблица доступна на GitHub (https://github.com/jbloomlab/SARSr-CoV_RBD_MAP/blob/main/data/barcode_variant_table.csv).

Объединенная библиотека RBD сарбековируса была помечена, отсортирована и количественно определена, как описано выше для библиотек мутантов SARS-CoV-2, за исключением того, что мы отсортировали только около 1 миллиона клеток RBD + из-за уменьшенного размера библиотеки. Секвенирование и количественную оценку ускользания антител для каждого варианта проводили, как описано выше. Данные для RBD HKU3-8 не показаны, так как этот RBD не был успешно экспрессирован на нашей платформе дрожжевого дисплея. Для нескольких антител мы провели дополнительный эксперимент, выбрав RBD-библиотеку сарбековируса с более строгими воротами «полного побега», чтобы отобрать только варианты, демонстрирующие полную потерю связывания (расширенные данные, рис. 2b, c).

Для последующих количественных анализов связывания выбранные RBD сарбековируса были клонированы в платформу дрожжевого дисплея в виде изогенных запасов. Анализы связывания проводили в серии титрования антител в 96-луночных планшетах, и связывание при каждой концентрации антитела (средняя геометрическая интенсивность флуоресценции в канале PE среди клеток RBD + (FITC + )) определяли с помощью проточной цитометрии и соответствовать четырехпараметрической кривой Хилла для определения EC 50 (средняя точка).

Анализ мутаций в естественных последовательностях SARS-CoV-2

Все шиповые последовательности в GISAID 59 по состоянию на 2 мая 2021 г. были загружены и сопоставлены с использованием mafft 56 . Последовательности нечеловеческого происхождения, последовательности с пробелами или неоднозначными символами в RBD и последовательности, отличающиеся более чем восемью аминокислотами от эталонной последовательности Wuhan-Hu-1 (GenBank MN908947, остатки N331-T531), были удалены. Мы определили частоты мутаций по сравнению с эталоном Wuhan-Hu-1 из этого окончательного выравнивания 1 190 241 последовательностей.Мы признательны всем участникам базы данных GISAID EpiCoV за обмен данными о последовательностях. Участники GISAID EpiCoV перечислены по адресу https://github.com/jbloomlab/SARS-CoV-2-RBD_MAP_Vir_mAbs/blob/main/data/gisaid_hcov-19_acknowledgement_table_2021_03_04.pdf.

Количественные сводные показатели свойств антител

Относительный размер эпитопа антитела рассчитывали как сумму фракций ускользания для каждого мутанта, которые по меньшей мере в пять раз превышают глобальную медианную фракцию ускользания (чтобы свести к минимуму влияние вариации фонового шума на суммирование). Для этого суммирования доли ускользания были нормализованы к максимальной доле ускользания при каждой мутации, чтобы учесть небольшое изменение в наибольшей доле ускользания при каждой мутации, измеренной между выборками.

Относительную ускользающую способность антитела рассчитывали так же, как и относительный размер эпитопа, но каждую мутацию умножали на два весовых коэффициента в диапазоне от 0 до 1, которые отражают влияние этой мутации на аффинность связывания ACE2 и экспрессию RBD, измеренную в нашем исследовании. предварительное глубокое мутационное сканирование 26 .Взаимосвязь между весовыми коэффициентами и эффектом мутации для каждого свойства показана на рис. 3а с расширенными данными. Мутации с эффектом <–1 на любое свойство эффективно обнуляются при суммировании возможности ускользания. Мутации с эффектами от –1 до 0 имеют промежуточные веса, а мутациям с 0 или положительными эффектами присваиваются весовые коэффициенты, равные 1. мутации, где ускользающие мутации (все метки на рис. 3c) определяются как те, у которых фракция ускользания более чем в пять раз превышает медианную фракцию ускользания, как указано выше. Эти суммарные частоты естественных ускользаний представлены в заголовках графиков на рис. 3c с расширенными данными.

Суммарную широту антител рассчитывали только по выборке из библиотеки RBD сарбековируса с использованием стандартного гейтирования (расширенные данные, рис. 4b). Хотя у нас есть различные данные о последующем связывании, иллюстрирующие снижение аффинности связывания для некоторых «ускользнувших» RBD сарбековируса, эти последующие эксперименты не проводились систематически для всех комбинаций антитело-RBD, и, следовательно, будут смещены оценки широты.Широту связывания рассчитывали как частоту всех RBD сарбековирусов, которые связываются с аффинностью в пределах порога селекции FACS, взвешенную по представлению клад. Ширина была нормализована, чтобы обеспечить равное представление каждой из четырех ветвей сарбековируса для учета разной глубины выборки. В пределах клады SARS-CoV-1 все штаммы 02/03 человека, а также штаммы 03/04 циветты и человека были одинаково занижены, чтобы каждый из них представлял 1/8 возможной широты в пределах клады SARS-CoV-1 (вместе с шесть сарбековирусов летучих мышей в этой кладе).Например, ширина для S304 рассчитывается как [4/4 + ([6/6] + [6/6] + 5)/8 + 2/2 + 0/21]/4 = 0,72 на основе данных показано на рис. 4b с расширенными данными.

Проекция многомерного масштабирования эпитопов антител

Проекция многомерного масштабирования на рис. 4 была выполнена с использованием пакета Python scikit-learn. Сначала мы рассчитали сходство и различие в сайтах ускользания между каждой парой антител точно так же, как описано в Greaney et al. 3 и выполнили метрическое многомерное масштабирование с двумя компонентами на матрице различий между всеми парами антител.Антитела в этом макете были окрашены круговыми диаграммами, пропорциональными общему квадрату ускользания по сайту, который попадает в помеченные структурные области (RBM, остатки с 437 по 508, контакт ACE2 определяется как отсечение 4 Å на основе кристаллической структуры 6M0J 60 , и основной RBD в противном случае). В этот макет мы включили все наши ранее опубликованные антитела, для которых мы выполнили картирование ускользания с помощью того же подхода. Эти антитела и их ссылки включают: S2X259 37 ; LY-CoV555 21 ; COV2-2196 и COV2-2130 36 ; REGN10933, REGN10987 и LY-CoV016 20 ; и все другие антитела к COV2 и CR3022 3 .

Для рис. 4b–d и расширенных данных рис. 7c мы окрашивали антитела в этой схеме в соответствии с различными свойствами антител. При необходимости мы также окрашивали эти ранее проанализированные антитела, как описано ниже. Расширенные данные Рис. 7d и диаграммы рассеяния на рис. 4e–g показывают взаимосвязь между свойствами антител конкретно в этом исследовании (и S2X259) для наиболее прямой сопоставимости.

Потенциал нейтрализации антител, показанный на рис. 4b, включает аутентичные значения IC 50 нейтрализации SARS-CoV-2, указанные в этом исследовании (рис.1a), вместе со значениями IC 50 нейтрализации живого SARS-CoV-2 для антител к COV2, о которых сообщают Zost et al. 10 . Мы признаем, что сравнение эффективности нейтрализации, о которой сообщают разные лаборатории для разных партий антител, является несовершенным, хотя в этом случае оба набора действительно являются эффективностью нейтрализации подлинного вируса. Поэтому мы не сравниваем эти два набора измерений напрямую в количественном отношении, но отмечаем, что их совместное включение на рис.4b подтверждает дихотомию между эффективностью нейтрализации ядерных антител RBD и антител RBM, которая подтверждается только любой панелью нейтрализации.

Широта сарбековируса, показанная на рис. 4c, включает измерения ширины пан-сарбековируса, представленные в текущем исследовании, вместе с более ограниченными измерениями ширины для антител, о которых сообщалось в предыдущих публикациях. Эти ранее опубликованные эксперименты определяли связывание с более ограниченным набором RBD сарбековирусов, присутствующим в наших библиотеках (SARS-CoV-2, RaTG13, GD-панголин, SARS-CoV-1 (Urbani), LYRa11 и WIV1). Мы рассчитали широту этого неполного набора последовательностей сарбековируса для сравнения, но обратите внимание, что эти антитела ограничены относительной широтой 0,5, потому что не были включены RBD из Африки/Европы или азиатских клад, не использующих ACE2. Однако, как и в случае нейтрализации, включение этих антител, тем не менее, подчеркивает основную дихотомию RBD-RBM в широте сарбековируса, установленную нашей первичной панелью.

Для иллюстраций размера эпитопа и способности к эскапированию на рис. 4d и расширенных данных рис.7c, мы рассчитали эти количества для наших ранее профилированных антител, как описано выше. Мы исключили антитела, профилированные в Greaney et al. 3 , поскольку эти анализы проводились на предыдущей версии нашей библиотеки мутантов SARS-CoV-2, которая демонстрировала различные количественные характеристики абсолютного ускользания, что усложняло ее количественное сравнение со степенью ускользания для антител, профилированных в этом и других наших исследованиях, которые все используют одну и ту же библиотеку.

Структурные отображения по периметру Рис.4a, были созданы путем сопоставления общего бегства по сайту со столбцом B-фактора структур PDB. Следы определяли как остатки в пределах 5 Å отсечки тяжелых атомов антитела. Использовались структуры, описанные в этой статье, или ранее опубликованные структуры: RBD, связанный с ACE2 (6M0J) 60 , RBD, связанный с CR3022 (6W41) 61 , RBD, связанный с REGN10987 и REGN10933 (6XDG) 62 , CB6-(LY-CoV016), связанный с RBD (7C01) 63 , и связанный с S304, S309 и S2h24 RBD (7JX3) 15 .

RBD ELISA

Девяносто шесть планшетов с половинной площадью лунок (Corning, 3690) покрывали в течение ночи при 4 °C 25 мкл белков RBD сарбековирусов в количестве 5 мкг мл -1 в PBS pH 7,2. Планшеты блокировали PBS 1% BSA (Sigma-Aldrich, A3059) и затем инкубировали с серийными разведениями моноклональных антител в течение 1 ч при комнатной температуре. После 4 стадий промывания 0,05% PBS Tween 20 (PBS-T) (Sigma-Aldrich, 93773) добавляли вторичное антитело козы против IgG человека (Southern Biotech, 2040-04) и инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. Затем планшеты промывали 4 раза PBS-T и добавляли субстрат 4-нитрофенилфосфат (pNPP, Sigma-Aldrich, 71768). Через 30 минут инкубации измеряли поглощение при 405 нм с помощью планшетного ридера (Biotek) и наносили данные на график с помощью GraphPad Prism.

Связывание с экспрессируемыми на клеточной поверхности белками сарбековируса S с помощью проточной цитометрии

Клетки ExpiCHO-S высевали в количестве 6 × 10 6 клеток на мл в объеме 5 мл в 50-мл биореактор. Плазмиды, кодирующие спайки, разводили в холодном OptiPRO SFM, смешивали с реагентом ExpiFectamine CHO (Life Technologies) и добавляли к клеткам.Затем трансфицированные клетки инкубировали при 37°С с 8% СО 2 при скорости орбитального встряхивания 120 об/мин (диаметр орбиты 25 мм) в течение 42 часов. Временно трансфицированные клетки ExpiCHO-S собирали и дважды промывали в промывочном буфере (PBS, 1% BSA, 2 мМ EDTA). Клетки подсчитывали и распределяли в круглодонные 96-луночные планшеты (Corning) и инкубировали с 10 мкг мл моноклонального антитела -1 S2H97, S2X35 или S309. Меченые Alexa Fluor647 вторичные антитела козы против человеческого IgG (Jackson ImmunoResearch 109-607-003) получали в 1.5 мкг мл -1 и добавляли к клеткам после двух этапов промывки. Затем клетки дважды промывали и ресуспендировали в промывочном буфере для сбора данных на цитометре ZE5 (Bio-Rad).

Кристаллизация, сбор данных, определение структуры и анализ

Для формирования комплексов RBD-Fab для кристаллизации RBD SARS-CoV-2 смешивали с 1,3-кратным молярным избытком каждого Fab и инкубировали на льду в течение 20–60 мин. Комплексы очищали на колонке Superdex 200 Увеличить 10/300 GL (Cytiva), предварительно уравновешенной 20 мМ Tris-HCl pH 7.5 и 150 мМ NaCl. Кристаллы комплексов RBD–Fab были получены при 20 °C методом сидячей диффузии паров.

Для комплекса SARS-CoV-2 RBD-S2X35-S309 в общей сложности 200 нл комплекса при 5,4 мг мл -1 смешивали со 100 нл раствора маточного раствора, содержащего 1,85 М сульфата аммония, 0,1 М Трис, рН 8,17, 0,8% (мас. /об.) поливинилового спирта, 1% (об./об.) 1-пропанола и 0,01 М HEPES, рН 7. Кристаллы быстро замораживали в жидком азоте с использованием маточного раствора, дополненного 20% глицерином для криозащиты.Данные были собраны на Beamline 9-2 станции Stanford Synchrotron Radiation Lightsource в Стэнфорде, Калифорния, и обработаны с помощью программного пакета XDS (версия от 31 января 2020 г.) 64 до 1,83 Å в космической группе C 222. RBD-S2X35 Структура комплекса Fab-S309 была решена путем молекулярной замены с использованием фазера 65 из исходной модели, состоящей из RBD-S309 Fab SARS-CoV-2 (PDB 7JX3) и модели гомологии для Fab S2X35, созданной с использованием Molecular Operating Environment (MOE). ) программный пакет от Chemical Computing Group (https://www.chemcomp.com).

Для комплекса SARS-CoV-2 RBD-S2H97-S2X259 Fab 200 нл комплекса 5,7 мг мл -1 смешивали с 200 нл маточного раствора, содержащего 0,12 М смеси моносахаридов, 20% (об./об. ) этилена. гликоль, 10% (вес/объем) ПЭГ 8000, 0,1 М трис (основание)/бицин, рН 8,5, 0,02 М хлорида натрия, 0,01 М сольват, рН 6 и 3% (об/об) Jeffamine ED-2003. Кристаллы были мгновенно заморожены в жидком азоте. Данные были собраны на Beamline 9-2 станции Stanford Synchrotron Radiation Lightsource в Стэнфорде, Калифорния.Данные были обработаны с помощью программного пакета XDS (версия от 31 января 2020 г.) 64 для окончательного набора данных 2,65 Å в пространственной группе P 2 1 . Структура комплекса RBD-S2H97-S2X259 Fab была решена путем молекулярной замены с использованием фазера из исходной модели, состоящей из RBD SARS-CoV-2 (PDB 7JX3) и моделей гомологии для Fab S2H97 и S2X259, созданных с использованием программного пакета MOE.

Для комплекса SARS-CoV-2 RBD-S2E12-S304-S309 Fab 200 нл комплекса в концентрации 4,5 мг мл -1 смешивали со 100 нл 0.09 М фосфат/цитрат, рН 5,5, 27% (об./об.) ПЭГ, низкий мазок, 4% (об./об.) полипропиленгликоль 400 и 0,02 М имидазол, рН 7, или 100 нл 0,09 М фосфат/цитрат, рН 5,5, 27% ( v/v) Низкий уровень мазка PEG, 0,01 М фосфата калия/натрия, pH 7, 1% (v/v) PPGBA 230 и 1,5% (v/v) PPGBA 400. Кристаллы мгновенно замораживали в жидком азоте. Данные были собраны на линии 4.2.2 Консорциума молекулярной биологии на синхротроне Advanced Light Source в Беркли, Калифорния. Наборы данных из двух кристаллов из двух условий были обработаны по отдельности, а затем объединены с пакетом программного обеспечения XDS (версия от 31 января 2020 г.) 64 для окончательного набора данных из 2.93 Å в пространственной группе I 4 1 22. Структура комплекса RBD–S2E12–S304–S309 Fab была решена методом молекулярной замены с использованием фазера из исходных моделей, состоящих из SARS-CoV-2 RBD–S304–S309 Fab (PDB 7JX3) и S2E12 (PDB 7K3Q).

Для всех конструкций было выполнено несколько последовательных раундов построения и уточнения модели с использованием Coot (версия 0.9.5) 66 , ISOLDE (ChimeraX версия 1.1/ISOLDE версия 1.1) 67 , Refmac5 (версия 5.8.0267) 68 и МЧС (версия 2019.0102) (https://www.chemcomp.com), чтобы получить окончательные модели. Для всех комплексов эпитопы на белке RBD определяли путем идентификации всех остатков RBD на расстоянии 5,0 Å от любых атомов Fab. Анализ проводился с использованием программного пакета MOE, а результаты подтверждались вручную.

Криоэлектронная микроскопия

SARS-CoV-2 HexaPro S 69 при 1,2 мг мл -1 инкубировали с 1,2-кратным молярным избытком рекомбинантно очищенного S2D106 или S2H97 при 4 °C перед нанесением на свежий свет выписан 2.Сетка 0/2.0 UltraAuFoil (200 меш). Для глубокой заморозки использовали витробот MarkIV (Thermo Fisher Scientific) с силой блоттинга 0 и временем блоттинга 6,5 с при 100% влажности и 23 °C.

Для набора данных S/S2D106 данные были получены с использованием просвечивающего электронного микроскопа FEI Titan Krios, работающего при напряжении 300 кВ, оснащенного прямым детектором Gatan K2 Summit и энергетическим фильтром Gatan Quantum GIF, работающим в режиме нулевых потерь с шириной щели 20 эВ. Автоматизированный сбор данных осуществлялся с использованием Leginon 70 при номинальном увеличении 130 000× с размером пикселя 0. 525 Å. Мощность дозы была доведена до 8 импульсов на пиксель в секунду, и каждый фильм был получен в режиме сверхвысокого разрешения, разбитого на 50 кадров по 200 мс. Всего было собрано 2166 микрофотографий с диапазоном расфокусировки от -0,5 до -2,5 мкм. Выравнивание кадра фильма, оценка параметров функции передачи контраста микроскопа, выделение частиц и извлечение выполнялись с использованием Warp 71 . Изображения частиц были извлечены с размером поля 800, разделенным на 400 пикселей 2 , что дало размер пикселя 1.05 Å.

Для набора данных S/S2H97 данные были получены с помощью просвечивающего электронного микроскопа FEI Glacios, работающего при напряжении 200 кВ, оснащенного прямым детектором Gatan K2 Summit. Автоматизированный сбор данных осуществлялся с использованием Leginon 70 при номинальном увеличении 36000× с размером пикселя 1,16 Å. Мощность дозы была доведена до 8 импульсов на пиксель в секунду, и каждый фильм был получен в режиме подсчета, разделенном на 50 кадров по 200 мс. Всего за один сеанс было собрано 3138 микрофотографий с диапазоном расфокусировки от -0.5 и -3,0 мкм. Предварительная обработка была выполнена с использованием Warp 71 , и изображения частиц были извлечены с размером окна 400 пикселей 2 .

Для наборов данных S/S2D106 и S/S2H97 было проведено два раунда безреференсной 2D-классификации с использованием CryoSPARC для выбора четко определенных изображений частиц 72 . Эти отобранные частицы были подвергнуты двум раундам 3D-классификации по 50 итераций в каждом (угловая выборка 7,5° для 25 итераций и 1,8° с локальным поиском для 25 итераций) с использованием нашей ранее опубликованной закрытой S-структуры SARS-CoV-2 в качестве исходной модели . 49 (PDB 6VXX) в Relion 73 .Уточнение 3D выполнялось с использованием неоднородного уточнения 74 вместе с уточнением расфокусировки каждой частицы в CryoSPARC. Выбранные изображения частиц подвергались процедуре байесовской полировки 75 , реализованной в Relion3. 0, перед выполнением еще одного цикла неравномерного уточнения в CryoSPARC с последующим уточнением расфокусировки для каждой частицы и снова неравномерным уточнением.

Для дальнейшего повышения плотности Fab S2D106 частицы затем подвергали фокусной 3D-классификации без уточнения углов и смещений с использованием мягкой маски на вариабельных доменах RBD и Fab со значением тау 60 в Relion.Частицы, принадлежащие к классам с наилучшим разрешением локальной плотности, были отобраны и подвергнуты локальному уточнению с помощью CryoSPARC. Оценка локального разрешения, фильтрация и повышение резкости выполнялись с помощью CryoSPARC. Сообщаемые разрешения основаны на критерии 0,143 золотого стандарта корреляции оболочки Фурье (FSC), а кривые корреляции оболочки Фурье были скорректированы с учетом эффектов мягкого маскирования путем замены шума с высоким разрешением 76 . UCSF Chimera 77 и Coot 78 использовались для подгонки атомных моделей к картам криоЭМ. Модель Spike-RBD/S2D106 Fab была уточнена и смягчена с помощью Rosetta с использованием карт резкости и нерезкости 79 .

Рефолдинг, индуцированный S2H97

Десять микромолей нативного вируса SARS-CoV-2 S инкубировали с 13 мкМ S2H97 Fab в течение 1 часа при комнатной температуре. Образцы разбавляли до 0,01 мг мл -1 непосредственно перед адсорбцией на медных сетках, покрытых тлеющим разрядом, в течение ~ 30 с перед окрашиванием 2% уранилформиатом. Микрофотографии были записаны с использованием программного обеспечения Leginon 70 на 120 кВ FEI Tecnai G2 Spirit с камерой Gatan Ultrascan 4000 4k × 4k CCD при номинальном увеличении 67000×.Расфокусировка варьировалась от -1,0 до -2,0 мкм, а размер пикселя составлял 1,6 Å.

Выделение S1, опосредованное антителами на клеточной поверхности

Клетки CHO-K1, стабильно экспрессирующие прототипный спайковый белок SARS-CoV-2, собирали, промывали в промывочном буфере (PBS, 1% BSA, 2 мМ EDTA) и ресуспендировали в PBS. Девяносто тысяч клеток на лунку распределяли в круглодонные 96-луночные планшеты (Corning) и обрабатывали 10 мкг мл -1 TPCK-трипсина (Worthington Biochem) в течение 30 минут при 37 °C. Клетки промывали и инкубировали с 15 мкг мл антитела -1 через 5, 30, 60, 120 и 180 минут при 37°C.Клетки промывали ледяным промывочным буфером и окрашивали 1,5 мкг мл -1 Alexa Fluor647-конъюгированного вторичного антитела козы против IgG человека (Jackson Immunoresearch) в течение 30 минут на льду в темноте. Клетки дважды промывали холодным промывочным буфером и анализировали с использованием цитометра ZE5 (Bio-Rad) с камерой для сбора данных при 4 °C. Связывание в каждый момент времени измеряли как среднюю интенсивность флуоресценции (MFI), нормированную на MFI в 5-минутный момент времени мечения. Данные были проанализированы и построены с помощью GraphPad Prism v.9.0.1.

Слияние клеток CHO-S между клетками

Слияние клеток CHO-K1, экспрессирующих S, проводили, как описано Lempp et al. 31 . Клетки CHO-K1, стабильно экспрессирующие прототип шиповидного белка SARS-CoV-2, высевали в 96-луночные планшеты (Thermo Fisher Scientific) по 12 500 клеток на лунку. На следующий день к клеткам добавляли антитело и ядерный маркер Hoechst (конечное разведение 1:1000) и инкубировали в течение 24 часов. Слияние клеток визуализировали с помощью Cytation 5 Imager (BioTek), а для обнаружения ядер и измерения их размера использовали протокол обнаружения объектов.Ядра слившихся клеток (синцитий) агрегируются в центре синцития и распознаются как уникальный крупный объект, закрытый по размеру. Чтобы количественно оценить слияние клеток, мы сообщаем площадь объектов в слитых клетках, деленную на общую площадь всех объектов, умноженную на 100%, чтобы представить ее в процентах.

Блокада связывания RBD с ACE2 антителами

Блокада ACE2 ELISA проводили, как описано Piccoli et al. 15 . Немеченые антитела серийно разбавляли, смешивали с мышиным Fc-меченым антигеном RBD (Sino Biological, конечная концентрация 20 нг мл -1 ) и инкубировали в течение 30 минут при 37°C. Смесь добавляли на 30 минут в 96-луночные планшеты для ELISA (Corning), предварительно покрытые в течение ночи при 4 °C 2 мкг мл -1 ACE2 человека в PBS. Планшеты промывали и определяли связывание RBD с использованием вторичного козьего антимышиного IgG (Southern Biotech 1030-04). После промывки добавляли субстрат pNPP и планшеты считывали при 405 нм. Процент ингибирования рассчитывали как: (1 – (ОП образец – ОП отрицательный контроль )/(ОП положительный контроль – – ОП отрицательный контроль )) × 100%, где ОП образец

, 3 ОП neg ctrl и OD pos ctrl представляют собой оптическую плотность образца, отрицательного контроля и положительного контроля соответственно.

Ингибирование спайк-опосредованного слияния клеток

Анализы ингибирования слияния клеток проводили, как описано McCallum et al. 80 . Клетки Vero E6 высевали в 96-луночные планшеты по 15000 клеток на лунку в 70 мкл DMEM с высоким содержанием глюкозы и 2,4% FBS (Hyclone). Через 16 часов при 37 °C с 8% CO 2 клетки трансфицировали следующим образом: на 10 лунок 0,57 мкг плазмиды SARS-CoV-2-S-D19_pcDNA3.1 смешивали с 1,68 мкл X-tremeGENE HP в 30 мкл ОПТИМ. После 15-минутной инкубации смесь разбавляли 1:10 в среде DMEM и добавляли по 30 мкл на лунку.Были приготовлены четырехкратные серийные разведения антител и добавлены к клеткам с начальной концентрацией 20 мкг мл -1 . На следующий день в каждую лунку добавляли по 30 мкл 5-кратного концентрированного DRAQ5 в DMEM и инкубировали в течение 2 ч при 37°С. С помощью оборудования Cytation 5 для анализа было получено девять изображений каждой лунки.

Профилактическая защита S2H97 у сирийских хомяков

Мы использовали проверенную модель инфекции SARS-CoV-2 сирийского золотого хомяка 81,82 для проверки профилактической эффективности S2H97.Эксперименты проводились в помещениях с высокой степенью защиты A3 и BSL3+ Института KU Leuven Rega (3CAPS) по лицензиям AMV 30112018 SBB 219 2018 0892 и AMV 23102017 SBB 219 20170589 в соответствии с институциональными инструкциями.

Сирийские хомяки ( Mesocricetus auratus ) были приобретены в Janvier Laboratories. Хомяков содержали по двое в вентилируемых клетках-изоляторах (IsoCage N Biocontainment System, Tecniplast) со свободным доступом к корму, воде и обогащению клетки (деревянный брусок).Условия содержания и экспериментальные процедуры были одобрены этическим комитетом экспериментов на животных KU Leuven (лицензия P065-2020). Размер выборки из 6 хомяков был определен таким образом, чтобы иметь значительную разницу не менее 1 log (уровень вирусной РНК) (величина эффекта d = 2,004) между контрольной и экспериментальной группами с использованием двустороннего t -критерия. с мощностью 80% и альфа-каналом 0,05, рассчитанным с помощью программного обеспечения G*Power 3.1. Самок хомячков в возрасте от шести до десяти недель рандомизировали для введения 25 мг кг -1 антитела S2H97 или 20 мг кг -1 изотипического контроля человека посредством внутрибрюшинной инъекции. Приблизительно за 5 ч до заражения животных анестезировали изофлураном, чтобы можно было взять образец крови из яремной вены для количественного определения антител. Через сорок восемь часов после инъекции антитела хомяков инфицировали интраназально 1,89 × 10 6 TCID 50 вируса SARS-CoV-2 в 50 мкл инокулята. Вирус заражения представлял собой уханьский изолят SARS-CoV-2 от февраля 2020 г. (EPI_ISL_407976), пассированный на клетках Vero E6. Исходный титр пассажа 6 определяли конечным разведением клеток Vero E6 по методу Рида и Мюнха 83 , выраженным как 50% инфекционная доза культуры ткани (TCID 50 ).

За хомяками наблюдали внешний вид, поведение и вес. На 4-й день после заражения хомяков усыпляли путем внутрибрюшинной инъекции 500 мкл Dolethal (200 мг мл -1 пентобарбитала натрия, Vétoquinol SA). Легкие собирали, гомогенизировали путем разрушения гранул (Precellys) в 350 мкл буфера RLT (RNeasy Mini kit, Qiagen) и центрифугировали (10 000 об/мин, 5 мин, 4 °C) для осаждения клеточного дебриса. РНК экстрагировали с использованием набора NucleoSpin (Macherey-Nagel) в соответствии с инструкциями производителя.Количественную ПЦР с обратной транскрипцией (ОТ-кПЦР) проводили на платформе LightCycler96 (Roche) с использованием набора iTaq Universal Probes One-Step RT-qPCR Kit (Bio-Rad) с праймерами N2 и зондами, нацеленными на нуклеокапсид 81 . Стандарты кДНК SARS-CoV-2 (IDT) использовали для экспрессии копий вирусного генома на мг ткани. Для количественного определения инфекционных частиц SARS-CoV-2 проводили титрование по конечной точке на конфлюэнтных клетках Vero E6 в 96-луночных планшетах. Вирусные титры рассчитывали, как указано выше, и выражали как TCID 50 на мг ткани.Уровни циркулирующих антител измеряли с помощью мезомасштабного мостового ELISA с использованием моноклонального антитела против мутации LS человека в качестве захвата и моноклонального антитела против Ch3 человека в качестве обнаружения. Техники, выполняющие количественную оценку РНК, вирусов и антител, не знали группы обработки обработанных образцов. Уровни РНК и вируса сравнивали в группе лечения и в контроле с помощью двустороннего критерия Манна-Уитни, за исключением двух животных, получавших лечение, с неопределяемым уровнем S2H97 во время заражения вирусом.

Конкурентные серологические анализы блокирования связывания

Блокирование связывания антител сывороткой проводили, как описано Piccoli et al. 15 . Вкратце, антитела IgG1 человека биотинилировали с использованием набора для твердофазного биотинилирования EZ-link NHS-PEO (Pierce). Каждое меченое антитело тестировали на связывание с RBD с помощью ELISA, и концентрацию для каждого эксперимента по конкуренции антител выбирали для достижения 80% максимального связывания (EC 80 ). 96-луночные планшеты для ELISA (Corning) предварительно покрывали в течение ночи при 4 °C 1 мкг мл -1 мышиного Fc-меченого антигена RBD (Sino Biological) в PBS.Немеченую сыворотку или плазму серийно разбавляли и добавляли в планшеты для ELISA на 30 минут с последующим добавлением биотинилированного антитела против RBD в его концентрации EC 80 . После 30-минутной инкубации планшеты промывали и определяли связывание антител с использованием стрептавидина, конъюгированного со щелочной фосфатазой (Jackson ImmunoResearch). Планшеты промывали, добавляли субстрат pNPP (Sigma-Aldrich) и планшеты считывали при 405 нм. Процент ингибирования связывания антител рассчитывали как: (1–(OD образец – OD отрицательный контроль ) / (OD положительный контроль – OD отрицательный контроль )) × 100.

Отбор мутантов, устойчивых к моноклональным антителам VSV-SARS-CoV-2

Химеру VSV-SARS-CoV-2 S использовали для отбора мутантов, устойчивых к моноклональным антителам SARS-CoV-2 (MARM), как описано ранее 1, 84 . Вкратце, MARM были извлечены путем выделения бляшек на клетках Vero E6 (ATCC, CRL-1586) с указанным моноклональным антителом в наложении. Концентрацию моноклонального антитела в оверлее определяли анализом нейтрализации при множественности множественности 100. Ускользающие клоны очищали от бляшек на клетках Vero (ATCC, CCL-81) в присутствии моноклонального антитела, а бляшки в агарозных вставках амплифицировали на Клетки MA104 (подарок H. B. Greenberg (Стэнфордская школа медицины)) с моноклональным антителом, присутствующим в среде. Вирусные запасы амплифицировали на клетках MA104 при MOI 0,01 в среде 199, содержащей 2% FBS и 20 мМ HEPES, pH 7,7 (Millipore Sigma), при 34°C. Вирусные супернатанты собирали при выраженном цитопатическом воздействии и очищали от клеточного дебриса центрифугированием при 1000 g в течение 5 мин. Аликвоты хранили при температуре -80 °C. Вирусную РНК экстрагировали из мутантных вирусов VSV-SARS-CoV-2 с использованием набора RNeasy Mini (Qiagen) и S амплифицировали с использованием набора OneStep RT-PCR Kit (Qiagen).Мутации идентифицировали секвенированием по Сэнгеру (Genewiz). Их устойчивость была подтверждена последующей вирусной инфекцией в присутствии или в отсутствие антител. Вкратце, клетки Vero высевали в 12-луночные планшеты на ночь. Вирус серийно разбавляли с помощью DMEM и клетки инфицировали при 37 °C в течение 1 часа. Клетки культивировали с покрытием из агарозы в присутствии или в отсутствие моноклональных антител при 34°С в течение 2 дней. Планшеты сканировали на биомолекулярном сканере, и экспрессия eGFP показана через 48 ч после инфицирования.Выбранная S2X58 мутация S494L не показана на рис. 3а, так как ее влияние на экспрессию RBD было ниже вычислительного фильтра глубокого мутационного сканирования.

Анализ приспособленности вирусной репликации

Клетки Vero E6 (ATCC, CRL-1586) высевали по 1 × 10 6 клеток на лунку в 6-луночные планшеты. Клетки инфицировали с MOI 0,02, химерами дикого типа и четырьмя мутантными VSV-SARS-CoV-2 S, смешанными с равными (0,20) частотами. После инкубации в течение 1 ч монослои клеток промывали 3 раза HBBS и инкубировали культуры в течение 72 ч во влажных инкубаторах при 34 °C.Для пассирования вирусов-потомков смесь вирусов непрерывно пассировали 4 раза в клетках Vero E6 при MOI 0,02. Образцы клеточной РНК из каждого пассажа экстрагировали с использованием набора RNeasy Mini (QIAGEN) и подвергали секвенированию следующего поколения, как описано ранее, для подтверждения введения и частоты замен 84 .

Моделирование молекулярной динамики

Полная информация о рабочем процессе и анализе молекулярной динамики доступна на GitHub: https://github.com/choderalab/rbd-ab-contact-analysis.Комплекс RBD-S309 был сконструирован из PDB 7JX3 (цепи A, B и R). 7JX3 был сначала усовершенствован с использованием ISOLDE 67 . Уточнение включало корректировку нескольких ротамеров, переворачивание нескольких пептидных связей, исправление нескольких слабо разделенных вод и встраивание отсутствующей петли длиной в четыре остатка. Хотя гликан N343 N -ацетилглюкозамин (NAG) присутствовал в 7JX3, для конструирования сложного гликана по N343 использовали ISOLDE. Полный образец гликозилирования был определен из ссылок. 85,86 .Структура гликана, использованная для N343 (FA2G2), соответствует наиболее стабильному конформеру, полученному в результате многомикросекундного моделирования молекулярной динамики кумулятивной выборки 87 . Базовый остаток NAG в FA2G2 был совмещен с соответствующей заглушкой NAG в модели RBD-S309, и любые полученные коллизии были уточнены в ISOLDE. Тот же процесс был повторен для кристаллической структуры RBD-S2H97.

Очищенные гликозилированные комплексы RBD-S309 и RBD-S2H97 были подготовлены для моделирования с использованием tleap от AmberTools20 88 .Были указаны все соответствующие дисульфидные мостики и ковалентные связи в гликановых структурах. Гликозилированные белки были параметризованы с помощью силовых полей Amber ff14SB 89 и GLYCAM_06j-1 90 . Системы сольватировали с использованием жесткой воды TIP3P, модель 91 , в усеченном октаэдрическом блоке с 2,2 нм растворителем со всех сторон. Форма и размер ящика для растворителя были выбраны таким образом, чтобы белковый комплекс не взаимодействовал с его периодическим изображением. Затем сольватированные системы нейтрализовали 0.15 M NaCl с использованием параметров одновалентных ионов Li/Merz для модели воды TIP3P (12-6 наборов для нормального использования) 92 . Виртуальные связи были добавлены между цепочками, которые должны отображаться вместе, чтобы облегчить постобработку траекторий.

Каждая система была минимизирована по энергии с допуском энергии 10 кДж моль −1 и уравновешена пять раз независимо с использованием OpenMMTools 0.20.0 (https://github.com/choderalab/openmmtools) Интегратор BAOAB Langevin 93 для 20 нс в ансамбле NPT ( P = 1 атм, T = 310 K) с шагом по времени 4.0 фс, частота столкновений 1,0 пс -1 и допуск относительного ограничения 1 × 10 -5 . Массы атомов водорода были установлены на 4,0 а.е.м. путем переноса массы от связанных тяжелых атомов, связи с водородом были ограничены, а движение центра масс не удалялось. Давление контролировалось баростатом Монте-Карло молекулярного масштаба с интервалом обновления 25 шагов. Несвязанные взаимодействия обрабатывали с помощью метода Particle Mesh Ewald 94 с отсечкой в ​​реальном пространстве, равной 1.0 нм и допуск относительной погрешности OpenMM по умолчанию, равный 0,0005, с автоматическим выбором шага сетки. Впоследствии симуляции были упакованы в исходные данные для производственной симуляции на [email protected] 95,96 . Использовались параметры по умолчанию, если не указано иное.

Уравновешенные структуры (пять на комплекс) использовались для запуска параллельных распределенных молекулярно-динамических симуляций на [email protected] 95,96 . Моделирование проводилось с OpenMM 7.4.2 (скомпилировано в [email protected] core22 0.0,13). При моделировании добычи использовался тот же интегратор Ланжевена, что и для уравновешивания NPT, описанного выше. Всего на [email protected] было создано 5000 и 4985 независимых моделей молекулярной динамики для RBD-S309 и RBD-S2H97 соответственно. Конформационные снимки (кадры) сохранялись с интервалом 1 нс на кадр для последующего анализа. Окончательные наборы данных содержали 1,1 мс и 623,7 мкс совокупного времени моделирования для RBD-S309 и RBD-S2H97 соответственно. Этот набор данных о траектории (без растворителя) доступен в Центре молекулярной структуры и терапии MolSSI COVID-19 (https://covid.molssi.org//simulations/#foldinghome-simulations-of-the-sars-cov-2-spike-rbd-bound-to-monoclonal-antibody-s309 и https://covid. molssi.org//simulations/# складные-домашние-симуляции-сарс-ков-2-шип-rbd-связанный-к-моноклональному-антителу-s2h97).

Первые 100 нс каждой траектории были отброшены (чтобы обеспечить релаксацию от кристаллической структуры), что дало общее время моделирования 644,3 и 262,9 мкс, используемое для анализа систем RBD-S309 и RBD-S2H97 соответственно. Все траектории имели структуры растворенных веществ, выровненные по их первому кадру и центрированные с использованием MDTraj 97 .Остатки считались находящимися на границе раздела, если они находились в пределах 10 Å от любого остатка Fab/RBD антитела (за исключением гликанов RBD N343, где учитывались все остатки гликанов). Минимальное расстояние тяжелых атомов между каждой парой остатков интерфейса вычислялось для каждого кадра (1 нс) с использованием MDAnalysis 98,99 . Тесный контакт считали, если минимальное расстояние между парой остатков было менее 3,5 Å (если один из остатков был гидрофобным, использовали отсечку 4,5 Å). Вклад каждого остатка RBD в тесные контакты рассчитывали в процентах путем суммирования количества тесных контактов для конкретного остатка RBD и нормирования на общее количество тесных контактных взаимодействий по всем кадрам каждой симуляции.

Доступность материалов

Библиотеки мутантов SARS-CoV-2 RBD (#1000000172) и немутантной родительской плазмиды (#166782) доступны на Addgene. Другие материалы, созданные в ходе этого исследования, будут предоставляться по запросу и могут потребовать заключения соглашения о передаче материала.

Сводка отчета

Дополнительную информацию о дизайне исследования можно найти в Сводке отчета об исследовании природы, связанной с этим документом.

BG – Отношения – Анализ противоположных судеб стай саранчи на равнинах Северной Америки и Восточной Азии

Conte, L. : О саранче Скалистых гор, Acad. Нац. наук, 29, 121–131, 1877. Криддл, Н.: Борьба с саранчой в прерийных провинциях: с отчетом о нашествиях саранчи в Западной Канаде в 1919 г., Министерство сельского хозяйства, Оттава, Канада, Entomol. Branch Circ., 13, 1–20, 1920. Доусон, Г. М. : Заметки о саранче на северо-западе в 1876 г., Can. Нац., 8, 119–134, 1876. Демпси, Х.: Письмо епископа Грандина, Альберта. Rev., 21, 8–11, 1973. Garcia, M. : Melanoplus spretus, Animal Diversity Web Музея зоологии Мичиганского университета, доступно по адресу: http://animaldiversity. ummz.umich.edu/accounts/Melanoplus_spretus/, 2000. Гилберт, Р.O. : Статистические методы мониторинга загрязнения окружающей среды, Van Nostrand Reinhold Co, 320 стр., 1987. Gumbel, EJ : Статистическая теория экстремальных значений и некоторые практические приложения, Серия прикладной математики, 33, Министерство торговли США, Национальное бюро стандартов, 1954. Хуанг, Х.и Zhu, E.L. : Краткий отчет об уничтожении саранчи летом 2001 г., Plant Protection Technology and Extension, 21, 46, 2001 (на китайском языке). IPCC : Резюме для политиков об изменении климата, 2007 г. : основы физических наук, издательство Кембриджского университета, 2007 г. Джонсон, Д.L. : Пространственная автокорреляция, пространственное моделирование и улучшения методологии исследования кузнечиков, Can. Энтомол., 121, 579–588, 1989. Johnson, DL : Идентификация кузнечиков и методы борьбы с ними для защиты сельскохозяйственных культур и окружающей среды, опубликовано Saskatchewan Pulse Growers, and Agriculture and Agri-Food Canada, Программа снижения риска пестицидов, Центр борьбы с вредителями, Оттава, 42 стр., 2008. Жюльен, Х. : дневник Анри Жюльена, 1874 г., доступно по адресу: http://www.ourheritage.net/julien_pages/Julien1. html, 2012 г. Лю, Х.В. и Дин, Ю.Х. : Анализ ежедневных изменений количества осадков в сезон паводков в Северном Китае, Атмос. Sci., 34, 12–22, 2010 (на китайском языке). Локвуд, Дж. А. : Саранча: разрушительный подъем и загадочное исчезновение насекомого, сформировавшего американскую границу, Basic Books, 2004. Локвуд, Дж. и ДеБрей, Л. Д. : Решение проблемы внезапного и необъяснимого исчезновения саранчи Скалистых гор, Melanoplus spretus , Уолш, Окрестности.Энтомол., 19, 1194–1205, 1990. Локвуд, Дж. А. и Шелл, С. П. : Динамика вспышек пастбищных кузнечиков, Orthoptera: Acrididae в экорегионе Западных равнин: эруптивный, градиентный, оба или ни один?, J. Orthopt. рез., 4, 35–48, 1995. млн лет назад, Ю.-К. : Динамика численности восточной перелетной саранчи Locusta migratoria manilensis в Китае, Acta Entomol.Sinica, 8, 1–40, 1958 (на китайском языке). млн лет назад, Ю.-К. : Исследование районов, пораженных восточной перелетной саранчой, Science Press of China, Пекин, 335 стр., 1965 (на китайском языке). Nadarajah, S. : Экспоненциальное распределение Гамбеля с климатическими приложениями, Environmetrics, 17, 13–23, 2006. Packard, AS : Отчет о саранче Скалистых гор и других насекомых, которые повреждают или могут повредить полевые и садовые культуры в западных штатах и ​​​​территориях, Общество натуралистов, Академия наук Пибоди, Отчет Геологической службы США за 1875 г. , 1877 г. , 585–815, 1878 г. Пиллсбери, Дж., Riley, CV, и Pusey, P. : Саранча Скалистых гор, или кузнечик, представляет собой отчет о работе конференции губернаторов нескольких западных штатов и территорий, вместе с несколькими другими джентльменами, состоявшейся в Омахе, Небраска, 25 и 26 октября 1876 г. рассмотреть вопрос о саранче; также краткое изложение лучших средств, известных в настоящее время для противодействия злу., RP Studley, 59 стр., 1876 г. Рен, К.G. and Tang, T.C. : Анализ динамики популяций и тенденций будущих вспышек восточной перелетной саранчи в провинции Хэбэй, Entomol. Знай., 40, 80–82, 2003 (на китайском языке). Рен, Г. , Го, Дж., и Сюй, М. : Климатические изменения материкового Китая за последние полвека, Acta Meteorol. Sinica, 63, 942–956, 2005 (на китайском языке). Ригерт, П.W. : Век саранчи и ипотеки, Prairie Forum, 2, 121–126, 1977. Riegert, PW : От мышьяка до ДДТ: история энтомологии в Западной Канаде, University of Toronto Press, 1980. Райли, CV : Саранча в Соединенных Штатах: в частности, трактат о саранче Скалистых гор или так называемом кузнечике, который встречается к востоку от Скалистых гор, с практическими рекомендациями по ее уничтожению, Рэнд МакНалли, 1877 г. . Ritzema, HP : частотный и регрессионный анализ, публикация 16, Международный институт мелиорации и улучшения земель, ILRI, Wageningen, 175–224, 1994. Стиге, Л. К., Чан, К.-С., Чжан, З., Франк, Д., и Стенсет, Н. К. : Тысячелетний китайский временной ряд показывает климатическое воздействие десятилетней динамики саранчи, П.Натл. акад. науч. США, 104, 16188–16193, https://doi.org/10.1073/pnas.0706813104, 2007 г. Томас Р., Найт К. и Найт Р. В. : Вековые тенденции количества, частоты и интенсивности осадков в США, B. Am. метеорол. Соц., 79, 231–241, 1998. Восе, Р.С., Шмойер Р.Л., Штойер П.М., Петерсон Т.С., Хейм Р., Карл Т.Р. и Эйшайд Дж.К. : Глобальная историческая климатологическая сеть, GHCN: долгосрочная месячная температура, осадки, давление на уровне моря и Данные о давлении на станции, https://doi. org/10.3334/CDIAC/cli.ndp041, версия 2, http://ncdc.noaa.gov/ghcn, 2008 г. Wu, FZ, Ma, SJ и Zhu, HF : Восточная перелетная саранча, в: Encyclopedia of Agriculture in China, Hexapod Book, China Agriculture Press, Редакция Энциклопедии сельского хозяйства в Китае, Пекин, 73–78, 1990 г. (на китайском языке). Ву, Р.-Ф., Хо, З.Г., и Лу, Цзы. G. : Климатологическая причина и долгосрочный прогноз появления восточноазиатской перелетной саранчи в Китае, J. Nat. Disast., 15, 71–78, 2006 г. (на китайском языке). Xue, ZX и Qin, YS : Обзоры развития пестицидной промышленности Китая, Jiangsu Chemical Industry, 28, 5–7, 2000 (на китайском языке). Yu, G., Shen, H., and Liu, J. : Влияние изменения климата на исторические вспышки саранчи в Китае, J. Geophys. Рез.-Атмос., 114, D18104, https://doi.org/10.1029/2009JD011833, 2009. Zhang, DE : Объединение метеорологических данных Китая за последние 3000 лет, Fenghuang Press и Jiangsu Education Press, Нанкин, 2004 г. (на китайском языке). Чжан М. и Канг Л. : Генетическое расхождение среди географических популяций перелетной саранчи в Китае, Sci. Китай сер. C, 48, 551–564, 2005 (на китайском языке). Чжан, З. и Ли, Д. : Возможная связь между вспышками восточной перелетной саранчи, Locusta migratoriua manilensis Мейен в Китае, и эпизодами Эль-Ниньо, Ecol.Res., 14, 267–270, 1999 (на китайском языке). Чжао, З. : Атрибуция потепления климата в Китае в 20 веке, Clim. Окружающая среда. Res., 10, 808–817, 2005 (на китайском языке).

%PDF-1.4 % 20 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 20 97 0000000016 00000 н 0000002305 00000 н 0000002468 00000 н 0000002620 00000 н 0000003242 00000 н 0000003467 00000 н 0000003759 00000 н 0000004154 00000 н 0000013620 00000 н 0000014110 00000 н 0000014894 00000 н 0000023544 00000 н 0000024166 00000 н 0000024607 00000 н 0000025039 00000 н 0000025481 00000 н 0000026401 00000 н 0000026860 00000 н 0000027259 00000 н 0000028177 00000 н 0000028486 00000 н 0000031390 00000 н 0000031956 00000 н 0000032289 00000 н 0000032936 00000 н 0000033385 00000 н 0000033576 00000 н 0000034028 00000 н 0000034730 00000 н 0000034974 00000 н 0000042186 00000 н 0000042581 00000 н 0000043004 00000 н 0000043694 00000 н 0000043993 00000 н 0000044514 00000 н 0000044901 00000 н 0000045765 00000 н 0000052777 00000 н 0000052877 00000 н 0000053192 00000 н 0000053715 00000 н 0000053885 00000 н 0000054143 00000 н 0000054444 00000 н 0000055130 00000 н 0000055711 00000 н 0000056119 00000 н 0000058949 00000 н 0000059538 00000 н 0000059982 00000 н 0000060004 00000 н 0000061572 00000 н 0000061928 00000 н 0000062202 00000 н 0000062788 00000 н 0000063432 00000 н 0000065073 00000 н 0000065332 00000 н 0000065737 00000 н 0000066141 00000 н 0000066498 00000 н 0000069326 00000 н 0000069348 00000 н 0000070788 00000 н 0000070810 00000 н 0000072143 00000 н 0000072923 00000 н 0000073295 00000 н 0000073675 00000 н 0000073931 00000 н 0000079299 00000 н 0000079321 00000 н 0000080654 00000 н 0000081325 00000 н 0000081469 00000 н 0000083833 00000 н 0000084187 00000 н 0000084472 00000 н 0000084494 00000 н 0000085956 00000 н 0000085979 00000 н 0000087317 00000 н 0000087547 00000 н 0000087759 00000 н 0000087782 00000 н 0000089059 00000 н 0000089082 00000 н 00000 00000 н 00000 00000 н 0000091085 00000 н 0000097203 00000 н 0000100569 00000 н 0000103934 00000 н 0000109555 00000 н 0000002764 00000 н 0000003220 00000 н трейлер ] >> startxref 0 %%EOF 21 0 объект > >> эндообъект 22 0 объект `Dz-#_m_}g) /У (С.