В этой главе обсуждается содержание C. elegans в лаборатории. Темы включают приобретение штаммов червей из Центра генетики Caenorhabditis (CGC), методы культивирования и переноса, деконтаминацию запасов, синхронизацию и стадирование культур, а также порядок замораживания червей для длительного хранения и извлечения их из замороженного состояния.

2. Получение штаммов из Центра генетики

CGC был основан в Университете Миссури, Колумбия, в 1979 г. В 1992 г. CGC переехал из Миссури в университет. Миннесота, Сент-Пол. Финансируется по контракту с Национальным институтом здравоохранения, Национальным центром исследовательских ресурсов. (NIH NCRR), основной задачей CGC является предоставление C.elegans и информацию для ученых, начинающих или продолжающих исследования с использованием штамма C. elegans . CGC стремится приобретать и иметь в наличии для распространения запасы, представляющие по крайней мере один мутантный аллель каждого опубликованного генные и все хромосомные перестройки (дефициты, дупликации, транслокации, инверсии). Кроме того, многие дикие доступны изоляты C. elegans и нескольких видов, тесно связанных с C. elegans .CGC поддерживает актуальный библиографический список всех статей, обзоров и книг, в которых обсуждаются C. elegans . The Worm Breeder’s Gazette (WBG), информационный бюллетень, издаваемый три раза в год, доступен в печатном виде на CGC за небольшую двухлетнюю абонентскую плату, и он доступен бесплатно в Интернете. WBG содержит обновление библиографии C. elegans , объявления и новости, каталог исследователей C. elegans и рефераты, представленные C.elegans исследователей, которые кратко описывают свою текущую работу.

Работы по поддержанию генетической номенклатуры C. elegans и генетической карты выполняются CGC в рамках субподряда под руководством Джонатана Ходжкина. в Лаборатории молекулярной биологии MRC, Кембридж, Англия. Второй субподряд помогает Леону Эйвери (Юго-Западная Медицинская Center, Техасский университет, Даллас) поддерживают C.elegans World Wide Web WWW Server (http://www.eatworms.swmed) в качестве источника информации о C. elegans , включая услуги CGC и описания доступных штаммов.

Дикого типа и более 3000 мутантных штаммов C. elegans бесплатно доступны исследователям в образовательных учреждениях или некоммерческих организациях. Для получения штаммов отправьте письменный запрос (письмо, факс или электронная почта) с описанием желаемых штаммов, генов или аллелей и кратким изложением предполагаемого использование червей.Укажите в запросе имя, полный почтовый адрес и номера телефонов запрашивающего лица. штамм(ы).

Исследователи в коммерческих или коммерческих организациях должны заплатить взнос в размере 100 долларов плюс почтовые расходы за каждый штамм заказали черви или бактерии. «Форма заказа для коммерческого сектора» доступна в CGC; заполненная форма должна быть получена CGC перед отправкой штаммов в коммерческие организации.

Все запросы на штаммы или информацию следует направлять по адресу: Caenorhabditis Genetics Center, University of Minnesota, 250 Biological Sciences Center, 1445 Gortner Avenue, St. Paul, MN 55108-1095 USA. Запросы также можно отправлять по факсу [(612) 625-5754] или по электронной почте [[email protected]].

При получении запроса на штамм CGC отправит ответ, подтверждающий получение заказа.Запрошенный Штаммы либо размораживают из морозильной камеры, либо извлекают из голодной чашки, хранящейся в инкубаторе при 11°C. Животных каждой линии помещают в чашки Петри со свежеприготовленной средой для роста нематод (NGM), которые были покрыты E. coli в качестве источника пищи и позволяли размножаться в течение нескольких дней. Отмечают видимый фенотип стада, чтобы подтвердить, что соответствует опубликованному описанию. Затем чашки Петри оборачивают парафильмом и отправляют заказчику по почте.Занимает 7-10 дней на получение, обработку и заполнение заявки на штамм. Если запрошенный штамм имеет чувствительный к температуре летальный фенотипу, поголовью дают голодать при допустимой температуре перед отправкой чашек, что требует дополнительных усилий. 3-4 дня. Это приводит к формированию термостойких личинок дауэра (см. Генетическое картирование и манипуляции — Введение и основы).

отправляются на чашки Петри NGM, при этом черви все еще питаются E.coli OP50 (или голодали, как упоминалось выше). Пластины отправляются в почтовых мешках с пузырчатой ​​подкладкой почтовым отправлением первого класса или авиапочтой. почтовые расходы расходы оплачивает CGC, за исключением коммерческих заказов. Штаммы могут быть отправлены через Federal Express, если заказчик предоставляет CGC с номером счета Federal Express для выставления счетов за курьерские расходы. Штаммы, отправленные за пределы США, имеют Соединенные Штаты На посылку наклеена наклейка почтовой таможни (CN22).На наклейке указано, что в упаковке содержится «непатогенный, непаразитические биологические образцы, не представляющие коммерческой ценности». Иногда таможенные органы других стран требуют чтобы к пакету применялась дополнительная информация. В таких случаях запрашивающая сторона должна предоставить CGC необходимые Информация.

отправляются с информационным листом штамма, в котором указаны генотип, фенотип, условия культивирования и происхождение. фонда, а также библиографическую ссылку.Заявителей просят сообщить CGC дату получения штаммов. и их состояние по прибытии. CGC следует указывать в любой публикации, полученной в результате использования штаммов, приобретенных из ЦГК.

3. Приготовление питательной среды

3.1. Подготовка источника бактериальной пищи

Хотя C. elegans можно содержать аксенинально (Avery, 1993), это сложно, и животные растут очень медленно. C. elegans обычно выращивают в моноксениальной среде в лаборатории с использованием штамма E. coli OP50 в качестве источника пищи (Brenner, 1974). E. coli OP50 является ауксотрофом по урацилу, рост которого ограничен на чашках NGM. Ограниченный бактериальный газон желателен, потому что он позволяет для облегчения наблюдения и лучшего спаривания червей. Заквасочная культура E. coli OP50 может быть получена из CGC или извлечена из чашек червей. Используйте стартовую культуру для выделения одиночных колоний на чашке с штрихами богатой среды, такой как агар LB [10 г бакто-триптона, 5 г бакто-дрожжей, 5 г NaCL, 15 г агара, H ₂ O на 1 литр, pH 7,5] (Byerly et al. , 1976). Используя одну колонию с посевов, асептически инокулируйте насыщенный бульон, такой как бульон L [10 г бакто-триптона, 5 г бактодрожжей, 5 г NaCl, H ₂ O на 1 литр, pH до 7.0 с использованием 1 М NaOH. Разлить по 100 мл во флаконы с завинчивающейся крышкой на 250 мл и автоклавировать. Бутылки со средой могут хранить при комнатной температуре в течение нескольких месяцев (Byerly et al., 1976)]. Позвольте инокулированным культурам расти в течение ночи при 37°C. После этого раствор E. coli OP50 готов к использованию в чашках с NGM для посева. Планшет E. coli OP50 и жидкая культура должны храниться при температуре 4°C и могут использоваться в течение нескольких месяцев.

3.2. Подготовка чашек Петри NGM

C. elegans хранится в лаборатории на агаризованной среде для роста нематод (NGM), которую асептически разливают в чашки Петри. (Бреннер, 1974). Доступны чашки Петри нескольких размеров, которые можно приобрести в таких компаниях, как Nunc или Falcon. Меньшие тарелки (диаметром 35 мм) пригодятся для вязок или при употреблении дорогих препаратов.Пластины среднего размера (диаметром 60 мм) подходят для общее поддержание штамма, а чашки большего размера (диаметром 100 мм) полезны для выращивания большего количества червей, таких как для определенных мутантных экранов. Агаровую среду NGM можно легко и асептически разливать в чашки Петри с помощью перистальтического шприца. насос. CGC использует дозатор жидкости Wheaton Unispense (Wheaton Science Products). Этот насос можно отрегулировать так, чтобы постоянная количество агара NGM распределяют в каждую чашку Петри.Постоянное количество агара в чашках снижает потребность в перефокусировке микроскопа при переключении с одной пластины на другую. При желании лекарственные препараты (например, левамизол, стрептомицин или нистатин) можно добавлять в раствор NGM непосредственно перед его заливкой (Caldicott et al., 1994).

Протокол 1. Подготовка планшетов NGM

• Оборудование и реактивы

• Методы

  1. Смешайте 3 г NaCl, 17 г агара и 2. 5 г пептона в 2-литровой колбе Эрленмейера. Добавьте 975 мл H ₂ O. Накройте горлышко колбы алюминиевой фольгой. Автоклав в течение 50 мин.

  2. Охладите колбу в водяной бане при 55°C в течение 15 мин.

  3. Добавьте 1 мл 1 М CaCl ₂ , 1 мл 5 мг/мл холестерина в этаноле, 1 мл 1 М MgSO ₄ и 25 мл 1 М буфера KPO ₄ .Встряхните, чтобы хорошо перемешать.

  4. Используя стерильные процедуры, распределите раствор NGM в чашки Петри с помощью перистальтического насоса. Заполните чашки на 2/3 агаром.

  5. Оставьте чашки при комнатной температуре на 2–3 дня перед использованием, чтобы можно было обнаружить загрязняющие вещества и дать избыток влаги. испариться.Планшеты, хранящиеся в герметичном контейнере при комнатной температуре, можно использовать в течение нескольких недель.

При использовании дорогих препаратов или при скрининге большого количества животные. Для 24-луночных планшетов используйте 1,5 мл агара NGM и посев с E.coli OP50 газон (Hartman and Herman, 1982). 96-луночные планшеты можно заполнить 50 мкл 1% (вес/вес) суспензии E. coli OP50 в среде S (см. протокол 2) (Hirsh et al., 1976). 96-луночные планшеты также можно заполнить 50 мкл жидкости NGM с E. coli HB101 в каждую лунку. Для этого упакованные клетки E. coli HB101 суспендируют в 4-кратном их объеме жидкости NGM, предполагая, что 1 г клеток равен 1 мл. Затем один объем суспензии E. coli добавляют к 24 объемам жидкости NGM (Ralph Clover, личное сообщение). E. coli HB101 можно приобрести в CGC. Следует следить за тем, чтобы черви не заползали между лунками; только один штамм C. elegans следует использовать на титрационном микропланшете, чтобы исключить возможность смешивания штаммов.

Используя стерильную технику, нанесите приблизительно 0,05 мл жидкой культуры E. coli OP50 на маленькие или средние чашки NGM или 0,1 мл на большие чашки NGM с помощью пипетки.При желании дроп можно распространять с помощью наконечника пипетки или стеклянной палочки. Распространение создаст большую лужайку, которая может помочь в визуализации червей. Брать следите за тем, чтобы газон не расстилался до краев тарелки; держать газон в центре. Черви, как правило, тратят больше всего времени в бактериях. Если газон доходит до краев тарелки, черви могут ползти по бокам тарелки, высохнуть и умереть. Разрешить E.coli OP50 для выращивания в течение ночи при комнатной температуре или при 37°C в течение 8 часов (охладите чашки до комнатной температуры перед добавлением червей). Засеянные пластины, хранящиеся в герметичном контейнере, останутся можно использовать 2-3 недели.

4. Культивирование

4.1. Перенос червей, выращенных на чашках NGM.

C. elegans является прозрачным и может быть визуализирован с помощью препаровального стереомикроскопа, оснащенного источником проходящего света. CGC использует модель Wild Leitz M5A или модель Zeiss SV6. Стандартные 10-кратные окуляры и объективы с увеличением от 0,6 до 5 крат (общее увеличение от 6X до 50X) широко используются.

Для переноса C. elegans с одной чашки Петри на другую используется несколько методов. Быстрым и удобным методом является «дробление», при котором стерилизованный скальпель или шпатель используется для перемещения куска агара со старой тарелки на новую тарелку. Обычно в куске агара содержатся сотни червей. Черви выползут из куска и расползутся по бактериальной лужайке новой тарелки. Этот метод хорошо работает для перенос червей, которые зарылись в агар или которых трудно собрать по отдельности (например, на голодной тарелке).То Метод фрагментирования хорош для передачи гомозиготных особей, но не рекомендуется, если популяция гетерозиготна или если запас должен поддерживаться путем спаривания.

Другой метод переноса большого количества гельминтов заключается в использовании полосок стерилизованной фильтровальной бумаги, обрезанных до ½–¼ дюйма. шириной и длиной 2-3 см. Простерилизованную фильтровальную бумагу осторожно кладут на чашку Петри, где она впитывает влагу и собирает до червей.Затем фильтровальную бумагу прикасаются к свежей пластине NGM, где черви откладываются. Выбросьте фильтровальную бумагу после использовать. Этот метод также подходит для переноса гомозиготных особей, но не рекомендуется, если популяция гетерозиготна. или должны поддерживаться путем спаривания.

Третий метод — сбор отдельных животных с помощью червячного сборщика. Червячный захват можно сделать, установив 1-дюймовый кусок 32-го калибра. платиновую проволоку в наконечник пипетки Pasture или в держатель бактериологической петли.Платиновая проволока быстро нагревается и остывает и его можно часто прожигать (между переносами), чтобы избежать загрязнения запасов червей. Конец проволоки, используемый для захвата черви вверх, можно слегка сплющить молотком и затем подпилить наждачной шкуркой, чтобы убрать острые края; острые точки могут проделайте отверстия в червях и убейте их или сделайте отверстия в агаре. Кончик проволоки можно оформить по своему вкусу. Немного люди предпочитают сплющенный конец, а другие предпочитают небольшой изгиб, образующий крючок.Требуется небольшой опыт работы с червем сборщик, чтобы не делать дырок в агаре. Черви заползают в норы, из-за чего их трудно увидеть или выбрать.

Чтобы выбрать червя, обнаруженного под препаровальным микроскопом, медленно опустите кончик проволоки и осторожно проведите кончиком по сторону червяка и поднимите вверх. Другой метод заключается в том, чтобы получить каплю E. coli OP50 на конце сборщика, прежде чем осторожно прикоснуться ею к верхней части выбранного червя.Червь прилипнет к бактериям. Этим методом можно собирать несколько животных одновременно, хотя черви, оставленные слишком долго на кирке, высохнут и умрут. К положить собранного червя на свежую тарелку, медленно опустить наконечник червя, осторожно коснуться поверхности агара и удерживать это там, чтобы позволить червю уползти от сборщика.

4.2. Частота переноса

Частота пересадки червей зависит от их генотипа, температуры, при которой вы их выращиваете, и что вы планируете с ними делать. Гетерозиготы и спаривающиеся особи следует передавать через каждые 1-3 поколения; легче перенесите их, если вы сделаете это до того, как тарелки истощились. Если вы хотите перевести отдельных животных из голодающего тарелке, возможно, вам будет проще сначала разбить тарелку на куски, а затем выбрать отдельных животных после того, как они выползут из тарелки. кусок и в бактериальный газон.Если животные находятся на стадии дауэра (см. Генетическое картирование и манипуляции — Введение и основы), вам может потребоваться подождать день, прежде чем собирать; черви разовьются из стадии дауэра, и фенотипы можно будет оценить. При пересадке гетерозиготных стад, которые плохо сбалансированы, лучше всего пересаживать только одного червя в каждую новую чашку. Этот позволяет вам оценить потомство перенесенного червя и подтвердить, что вы действительно перенесли гетерозиготу. Поддерживать брачные стада (стадии с самцами и гермафродитами) передают 6-8 взрослых самцов и 3-4 молодых взрослых гермафродитов за тарелка.Вы можете позволить гомозиготным особям голодать в течение нескольких недель между переносами. Подвои, выращенные при 25°C, погибнут на несколько дней раньше, чем идентичные подвои, выращенные при 16°C. Можно хранить исходные чашки при температуре 11°C или 16°C в течение нескольких месяцев между переносами. Чтобы пластина не высыхала, оберните ее полоской парафильма. Альтернативно, вы можете передавать свои запасы каждые 1-2 дня, чтобы у вас был источник животных на каждом этапе развития.

4.

Поголовье C. elegans лучше всего поддерживать при температуре от 16°C до 25°C, чаще всего при 20°C. C. elegans растет в 2,1 раза быстрее при 25°C, чем при 16°C, и в 1,3 раза быстрее при 20°C, чем при 16°C (Maniatis et al., 1982). Эта вариация периодов роста может быть полезна при планировании экспериментов.

Обратите внимание на особые требования к росту (например,г., чувствительность к температуре или неисправность дауэра) и соответствующим образом поддерживайте свои запасы. Такая информация включена в информационный лист штамма, который отправляется с каждым штаммом, отправленным из CGC.

Складские тарелки не нужно хранить в закрытом контейнере. Со временем они высохнут, но это не будет проблемой, если вы переносите животных до того, как тарелки достигнут этого состояния. Если вы храните тарелки в закрытом контейнере, обязательно следите за признаками повышенной влажности.Хотя и редко, черви могут ползать (или переноситься в каплях воды) из одной пластины на другую в таких условиях, что приводит к смешению штаммов.

При заливке или высеве пластин или при переносе червей лучше всего соблюдать время, в течение которого крышка будет снята. минимум. Это сокращает загрязнение. Если у вас на тарелке плесень, аккуратно оберните тарелку полоской парафильма. и утилизировать его.Не снимайте крышку с загрязненного планшета, иначе вы рискуете загрязнить другие планшеты. Если вы должны перевести с загрязненной тарелки, см. ниже раздел «Очистка загрязненных запасов».

Пометьте дно чашки Петри названием штамма и датой. Не маркируйте только крышку, так как она может быть случайно отделена Снизу. Отбракованные планшеты следует поместить в полиэтиленовый пакет и автоклавировать.

5.Рост

Большие количества C. elegans можно выращивать в жидкой среде. Жидкие культуры C. elegans обычно выращивают на среде S с использованием концентрированной E. coli OP50 в качестве источника пищи (Lewis and Fleming, 1995). Часто лучше выращивать только одно поколение червей в жидкости, прежде чем черви будут собраны. При выращивании червей для более чем в одном поколении перенаселенность часто может привести к образованию дауэра, несмотря на наличие пищи.

Ночные культуры E. coli OP50, выращенные в LB или другой богатой бульонной среде, следует использовать для приготовления концентрированного осадка бактерий. Концентрированная пеллета можно хранить при температуре 4°C в течение нескольких недель или в морозильной камере при температуре -70°C в течение неопределенного времени. Рекомендуется иметь в наличии большое количество концентрированной E. coli OP50, чтобы можно было добавлять пищу по мере необходимости. Количество необходимого корма будет зависеть от исходного инокулята червей. и продолжительность выращивания червей.Для справки: вы можете вырастить партию жидкой культуры объемом 250 мл путем инокуляции с червями, извлеченными из 4 больших (100 мм) чашек Петри и выращиваемых в течение 4-5 дней. Первоначально предоставляется упакованная E. coli OP50 из 2-литровой культуры. Культуру червя контролируют и при необходимости добавляют дополнительные E. coli OP50.

Протокол 2. Приготовление жидкой культуры C. elegans

• Реактивы

  • S Базальный [5. 85 г NaCl, 1 г K ₂ HPO ₄ , 6 г KH ₂ PO ₄ , 1 мл холестерина (5 мг/мл в этаноле), H ₂ O на 1 литр. Стерилизовать автоклавированием.]

  • 1 M цитрат калия pH 6,0 [20 г моногидрата лимонной кислоты, 293,5 г моногидрата трикалия цитрата, H ₂ O на 1 литр.Стерилизовать автоклавированием.]

  • Раствор микроэлементов [1,86 г динатрия ЭДТА, 0,69 г FeSO ₄ •7 H ₂ O, 0,2 г MnCl2•4 H ₂ O, 0,29 г ZnSO ₄ • 5,07 H _{2 O, 2 O г CuSO 4 •5 H 2 O, H 2 O на 1 л. Стерилизовать автоклавированием. Хранить в темноте.]}

  • S Среда [1 литр S Basal, 10 мл 1 М цитрата калия pH 6, 10 мл раствора микроэлементов, 3 мл 1 М CaCl ₂ , 3 мл 1 М MgSO ₄ . Добавьте компоненты, используя стерильную технику; не автоклавировать.]

• Методы

  1. Добавьте 250 мл S Medium в стерилизованную 1-2-литровую колбу.

  2. Инокулируйте среду S концентрированным осадком E. coli OP50, приготовленным из 2–3 литров ночной культуры.

  3. Промойте каждую из 4 больших чашек с C. elegans (только что очищенной от бактерий) 5 мл среды S и добавьте в колбу на 250 мл.

  4. Поставьте колбу на шейкер при 20°C. Используйте довольно сильное встряхивание, чтобы культура была хорошо насыщена кислородом.

  5. Культуры следует контролировать, проверяя каплю культуры под микроскопом. Если запасы пищи исчерпаны (решение больше не мутнеет) добавьте более концентрированный E.coli OP50 суспендировали в среде S. Когда в каждой капле будет много взрослых особей, культура готова к сбору. Это обычно 4 или 5 день.

  6. Поставьте колбу на лед на 15 минут, чтобы черви осели.

  7. Аспирируйте большую часть жидкости из колбы.

  8. Перенесите оставшуюся жидкость в стерильную коническую центрифужную пробирку объемом 50 мл и центрифугируйте в течение не менее 2 мин при 1150 × g для получения осадка. черви. Молодые личинки могут занять более 2 минут, чтобы гранулы.

  9. Аспирируйте оставшуюся жидкость.

Черви, собранные при выращивании в жидкой культуре, обычно длиннее и тоньше, чем черви, выращенные в чашках Петри, и склонны держать свои яйца. Количество полученных имаго, личинок и яиц зависит от используемого штамма червей, количества бактерий при условии и продолжительности выращивания культуры. Свежеочищенные культуры дадут червей, равных половине веса используемые бактерии (Lewis and Fleming, 1995).

6. Очистка зараженных

Иногда запасы C. elegans могут контаминироваться другими бактериями, дрожжами или плесенью. Легко избавить ваши запасы червей от загрязняющих веществ. Большинство загрязняющие вещества не повредят червей. (На самом деле черви любят карабкаться по гифам грибов и раскачиваться туда-сюда!) Гораздо легче подсчитывать фенотипы и делать переводы, когда ваши поголовья чисты.Плесень можно удалить путем измельчения (протокол 3) и поочередно пересаживая, позволяя червям уползти от загрязнения. Бактериальные загрязнения и дрожжи легко удаляется обработкой раствором гипохлорита, который убивает загрязняющее вещество и всех червей, не защищенных яичная скорлупа. Это можно сделать, используя всю зараженную чашку (Протокол 4), или это можно сделать быстро, используя одну гермафродит (Протокол 5).

Протокол 3. Удаление загрязнений плесенью с пластин C. elegans

• Методы

  1. Простерилизуйте скальпель или шпатель в пламени и удалите кусок агара с загрязненной пластины. Снимите крышку загрязненную пластину только до тех пор, пока это необходимо.

  2. Поместите кусочек агара на край чистой засеянной тарелки. Позвольте червям выползти из куска и через газон E. coli OP50 на противоположную сторону пластины.

  3. Как только черви достигнут другой стороны тарелки, выберите отдельных животных с помощью червячного сборщика (или возьмите еще один кусок с помощью обожженного скальпеля или шпателя) и поместите его на край другой чистой тарелки.

  4. Повторить шаг 3.

Протокол 4. Приготовление яиц: удаление бактериальных или дрожжевых загрязнений с чашек для C. elegans

• Реактивы

• Методы

  1. Используйте загрязненный C. elegans запасные пластины, на которых много беременных гермафродитов. ^† Промойте чашки стерильным раствором H ₂ O. Несколько раз нанесите H ₂ O на чашку, чтобы отделить червей и яйца, застрявшие в бактериях.

  2. Соберите жидкость в стерильную коническую центрифужную пробирку объемом 5 мл с крышкой. Добавьте H ₂ O к общему количеству 3.5 мл.

  3. Смешайте 0,5 мл 5 н. NaOH с 1 мл отбеливателя. Сделайте этот раствор свежим непосредственно перед использованием! Добавить в центрифужную пробирку с червями.

  4. Хорошо встряхните или встряхивайте пробирку в течение нескольких секунд. Повторяйте встряхивание/встряхивание каждые 2 минуты в общей сложности 10 минут.

  5. Вращайте пробирку в настольной центрифуге в течение 30 секунд при 1300 x g для осаждения выпущенных яиц.

  6. Аспират до 0,1 мл.

  7. Добавьте стерильный H ₂ O к 5 мл. Хорошо встряхните или взболтайте в течение нескольких секунд.

  8. Повторите шаги 5 и 6.

  9. Используйте пипетку Пастера, чтобы перенести яйца в оставшихся 0,1 мл жидкости на край чистой чашки NGM, засеянной Э. coli OP50 газон.

  10. На следующий день яйца вылупятся, и личинки заползут на газон E. coli OP50. Перенесите вылупившихся личинок на чистую пластину NGM, засеянную газоном.

Протокол 5.Капельное приготовление яиц: мелкомасштабный метод удаления бактериальных или дрожжевых загрязнений

• Реактивы

• Методы

  1. Приготовьте смесь 1 н. NaOH: отбеливатель в соотношении 1:1. Нанесите каплю этого раствора на край чистой пластины NGM, засеянной E.coli OP50 газон.

  2. Поместите в каплю несколько беременных гермафродитов. Раствор убьет загрязнителей и гермафродитов, но впитается в пластину до вылупления эмбрионов.

  3. На следующий день личинки заползут в E.coli OP50 газон. Перенесите их на чистую чашку NGM, засеянную газоном E. coli OP50.

Протокол 6. Получение синхронных культур C. elegans

• Реактивы

  • M9 Буфер [3 г KH ₂ PO ₄ , 6 г Na ₂ HPO ₄ , 5 г NaCl, 1 мл 1 M MgSO ₄ , H 7 л от 9 O до 900. Стерилизовать автоклавированием.]

• Методы

  1. В асептических условиях перенесите аксенизированные яйца в 250 мл буфера M9 в 1-2-литровую колбу и дайте инкубироваться в течение ночи при 20°C, используя довольно сильное встряхивание, чтобы получить голодающих животных L1.

  2. Поместите колбу на лед на 15 минут, чтобы черви осели

  3. Аспирировать большую часть жидкости из колбы (чтобы удалить весь феромон дауэра, накопившийся во время голодания)

  4. Перенесите оставшуюся жидкость в стерильную коническую центрифужную пробирку объемом 50 мл и центрифугируйте не менее 2 мин при 1150 x g для получения осадка. черви.

  5. Аспирируйте оставшуюся жидкость.

  6. Перенесите червей в 250 мл S Basal, инокулированного концентрированной E. coli OP50, в 1-2-литровую колбу.

  7. Монитор путем проверки капли культуры под микроскопом.Добавляйте больше еды по мере необходимости. При 20°C личинки среднего L1 можно собирать примерно через 8 часов, личинки среднего L2 примерно через 18 часов, личинки среднего L3 примерно через 18 часов. 25 часов, а личинки середины L4 — примерно 37 часов (Sulston and Hodgkin, 1988).

Если требуется небольшое количество синхронизированных животных, яйца можно добавить в тонкий слой буфера М9 в чашку Петри диаметром 60 мм. тарелку и оставляли расти на ночь.Затем голодающих животных L1 можно поместить в чашки Петри с засеянным NGM и синхронно рост начнется с повторного введения пищи. За животными следует наблюдать с помощью микроскопа и собирать их в желаемое время. этапы.

Популяцию дауэровских животных можно получить путем добавления в жидкую культуру феромона, индуцирующего дауэр (Vanfleteren, 1980). Дауэры также можно получить, оставив жидкую культуру расти в течение нескольких дней после того, как культура будет очищена от бактерий.Дауэры можно отделить от других стадий, обработав 1% SDS в течение 30 мин во вращающейся трубке, а затем один раз промыв. с H ₂ O и один раз с буфером M9.

7. Замораживание и восстановление запасов

Caenorhabditis elegans можно заморозить и хранить в течение неопределенного времени в жидком азоте (-196 °C) (Brenner, 1974). Ключом к успешной заморозке является использование животных на правильной стадии развития, добавление глицерина к замораживание среды и постепенное охлаждение до -80°С. Лучше всего переносят замораживание только что умершие от голода молодые личинки (стадия L1-L2). Сытые животные, взрослые особи, яйца и дауэры не выживают Что ж. Лучше всего использовать несколько чашек с червями, которые только что истощили газон E. coli OP50 и содержат много животных L1-L2. Используют 15% конечного объема глицерина в растворе для замораживания.Во время замораживания желательно снижение температуры на 1°C в минуту. Этого можно добиться, поместив червей (в пробирки для заморозки) в пенопластовом контейнере при -80°С. Контейнер из пенополистирола может быть либо коммерческим транспортировочным ящиком (со стенками толщиной не менее ¾ дюйма), либо небольшим пенопластовым контейнером. коробка с прорезями для хранения флаконов. Через 12 или более часов при температуре -80°C флаконы для замораживания следует переместить в постоянное место хранения в морозильной камере для длительного хранения.

CGC использует два раствора для замораживания C.elegans : жидкий раствор для замораживания (Brenner, 1974) и раствор для замораживания мягкого агара (Leon Avery, личное сообщение). Для длительного хранения запасов в жидком азоте, Рекомендуется использовать жидкий замораживающий раствор. При использовании этого раствора черви оседают на дно морозильной камеры и никакие жизнеспособные животные не могут быть легко извлечены без оттаивания всего содержимого флакона. Мягкий раствор для замораживания агара полезно для замораживания рабочих запасов C.Элеганс . Добавление агара помогает удерживать червей во взвешенном состоянии в растворе. Небольшая ложка замороженного содержимого может принять, а остаток можно оставить во флаконе и вернуть в морозильник для дальнейшего использования. Флаконы, замороженные с использованием мягкого агара Замораживающий раствор следует хранить при температуре -80°C. При хранении в жидком азоте содержимое становится слишком твердым, и флакон нужно будет нагреть, прежде чем его можно будет удалите ложку содержимого.Период прогрева сокращает количество случаев извлечения живых червей из флакона. При хранении при -80°С нет необходимости нагревать флакон; содержимое достаточно мягкое, чтобы его можно было использовать сразу. Извлекаем червей 3-4 раз из каждого флакона с мягким агаром.

Червей можно замораживать в криопробирках объемом 1,8 мл. CGC использует Nunc Cryotube Vials (№ 65234) с внутренней резьбой и замораживает шесть флаконов. каждого полученного штамма.Два флакона замораживают с использованием раствора для замораживания мягкого агара и хранят при температуре -80°C для использования в качестве рабочих запасов. Четыре флакона замораживают с использованием Liquid Freezing Solution; один размораживается как тестер, а другой три помещаются как минимум в два разных резервуара с жидким азотом. Для выполнения запросов на деформацию рабочие запасы, которые хранятся на −80°C. Когда последний флакон с запасом, хранящимся при температуре -80°C, опустошается, червей снова замораживают, используя раствор для замораживания мягкого агара, чтобы заменить эти флаконы.В теории, запасы, хранящиеся в жидком азоте, никогда не понадобятся, поскольку запасы мягкого агара постоянно заменяются по мере их использования. истощены.

Извлечение C. elegans из запасов, хранящихся в жидком азоте, составляет 35-45% от общего количества замороженных животных. Это число уменьшается лишь незначительно после многих лет хранения в жидком азоте. Восстановление запасов, хранящихся при температуре -80 ° C в течение многих лет (> 10), не так высоко, как при использовании жидкого азота, но черви могут безопасно храниться таким образом в течение многих лет (CGC, неопубликованные данные).Из Конечно, сбой питания может привести к потере всех запасов, хранящихся при температуре -80°C, поэтому очень разумно хранить хотя бы одну копию всех запасов в жидком азоте. Некоторые мутантные штаммы (особенно некоторые Мутанты Dpy) не выживают при замораживании так же хорошо, как животные дикого типа.

Протокол 7. Замораживание C. elegans с использованием жидкого замораживающего раствора

• Оборудование и реактивы

• Методы

  1. Используйте одну большую, 2-3 средних или 5-6 маленьких чашек NGM, в которых содержится много недавно голодающих животных L1-L2.Промойте пластины 0,6 мл S-буфера для каждого флакона, который вы будете замораживать. Соберите жидкость в стерильную пробирку.

  2. Добавьте равный объем буфера S + 30% глицерина. Хорошо перемешать.

  3. Аликвоту по 1,0 мл смеси в криопробирки по 1,8 мл, помеченные названием штамма и датой.

  4. Упакуйте криопробирки в небольшую пенопластовую коробку с прорезями для микропробирок или используйте коммерческий пенопластовый транспортировочный ящик.

  5. Поместите коробку в морозильную камеру при температуре -80°C на ночь (или не менее чем на 12 часов).

  6. На следующий день переместите флаконы в их постоянные морозильные камеры.Разморозьте один флакон в качестве тестера, чтобы проверить, насколько хорошо черви пережили замораживание (см. протокол 9).

Протокол 8. Замораживание C. elegans с использованием раствора для замораживания мягкого агара

• Оборудование и реактивы

  • Раствор для замораживания мягкого агара [0.58 г NaCl, 0,68 г KH ₂ PO ₄ , 30 г глицерина, 0,56 мл 1 М NaOH, 0,4 г агара, H ₂ O до 100 мл (автоклав)]

• Методы

  1. Растопите раствор для замораживания мягкого агара в автоклаве или микроволновой печи и поместите в водяную баню с температурой 50°C не менее чем на 15 минут.

  2. Используйте одну большую, 2-3 средних или 5-6 маленьких чашек NGM, в которых содержится много недавно голодающих животных L1-L2. Промойте пластины 0,6 мл S-буфера для каждого флакона, который вы будете замораживать. Соберите жидкость в стерильную пробирку с крышкой и поместите на лед на 15 минут.

  3. Добавьте в пробирку равный объем раствора для замораживания мягкого агара.Хорошо перемешать.

  4. Аликвоты по 1 мл смеси в криопробирки по 1,8 мл, маркированные названием штамма и датой.

  5. Упакуйте криопробирки в небольшую пенопластовую коробку с прорезями для микропробирок или используйте коммерческий пенопластовый транспортировочный ящик.

  6. Поместите коробку в морозильную камеру при температуре -80°C на ночь (или не менее чем на 12 часов).

  7. На следующий день переместите флаконы в их постоянные морозильные камеры. Возьмите мерную ложку замороженной смеси из одного флакона в качестве пробы. проверить, насколько хорошо черви пережили замораживание (см. протокол 10).

Протокол 9.Размораживание C. elegans , замороженных с помощью Liquid Freezing Solution

• Методы

  1. Достаньте флакон из морозильной камеры и дайте ему оттаять при комнатной температуре, пока весь лед не превратится в жидкость.

  2. Вылейте содержимое на одну большую чашку NGM с E.coli OP50 газон. Вы должны увидеть, как черви извиваются уже через несколько минут.

  3. Через 2–3 дня перенесите 10–15 животных по отдельности в отдельные чашки. Разрешить животным размножаться в течение одного поколения и оценивайте потомство по правильному фенотипу.

Протокол 10.Размораживание C. elegans , замороженных с использованием раствора для замораживания мягкого агара

• Методы

  1. Достаньте флакон из морозильной камеры при температуре -80 °C и перенесите в небольшую пенопластовую коробку с прорезями для микропробирок.

  2. Работайте быстро, чтобы раствор во флаконе не растаял.Подожгите маленькую ложку или шпатель и используйте его, чтобы удалить 1/4–1/3 мл замороженного раствора. Поместите раствор на пластину NGM с газоном E. coli OP50.

  3. Как можно быстрее верните флакон в морозильную камеру при температуре -80°C.

  4. Через несколько минут вы должны увидеть извивающихся червей.Через 2-3 дня перенесите 10-15 животных по отдельности в отдельные чашки. Разрешить животным размножаться в одном поколении и оценить потомство по правильному фенотипу.

Автор выражает благодарность Роберту Херману, Энн Ругви и Тодду Старичу за их комментарии.

Эйвери, Л.(1993). Генетика 133 , 897. Абстрактный

Бреннер, С. (1974). Генетика 77 , 71. Абстрактный

Байерли, Л., Кассада, Р.К., и Рассел, Р.Л. (1976). Дев. биол. 51 , 23. Абстрактный Статья

Калдикотт, И. М., Ларсен П.Л. и Риддл Д.Л. (1994). В кн.: Клеточная биология: лабораторный справочник . (Сан-Диего: Academic Press), стр. 389.

Хартман, П.С. и Герман Р.К. (1982). Генетика 102 , 159. Абстрактный

Хирш Д., Оппенгейм Д. и Класс М. (1976).Дев. биол. 49 , 200. Абстрактный Статья

Льюис, Дж.А. и Флеминг, Дж.Т. (1995). В: Методы клеточной биологии, Vol. 48 , H.F. Epstein and D.C. Shakes, eds. (Сан-Диего: Academic Press), с. 3.

Маниатис, Т., Фрич, Э.Ф. и Самбрук Дж. (1982). Молекулярное клонирование: лабораторное пособие. (Нью-Йорк: Колд-Спринг-Харбор Лабораторная пресса), с. 68.

Рогальский, Т.М. и Риддл, Д.Л. (1988). Генетика 118 , 61. Абстрактный

Салстон, Дж. и Ходжкин, Дж. (1988).В: Нематода Caenorhabditis elegans , W.B. Вуд, изд. (Нью-Йорк: Лабораторное издательство Колд-Спринг-Харбор), с. 587.

Ванфлетерен, младший (1980). В: Нематоды как биологические модели, Vol. 2 , Б.М. Цукерман, изд. (Нью-Йорк: Academic Press), с. 47.

%PDF-1.4 % 475 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 475 137 0000000016 00000 н 0000003092 00000 н 0000003232 00000 н 0000005062 00000 н 0000005307 00000 н 0000005391 00000 н 0000005478 00000 н 0000005608 00000 н 0000005764 00000 н 0000005820 00000 н 0000005907 00000 н 0000006015 00000 н 0000006071 00000 н 0000006195 00000 н 0000006251 00000 н 0000006365 00000 н 0000006421 00000 н 0000006583 00000 н 0000006639 00000 н 0000006738 00000 н 0000006839 00000 н 0000006994 00000 н 0000007100 00000 н 0000007221 00000 н 0000007277 00000 н 0000007391 00000 н 0000007447 00000 н 0000007503 00000 н 0000007623 00000 н 0000007679 00000 н 0000007735 00000 н 0000007791 00000 н 0000007906 00000 н 0000007962 00000 н 0000008088 00000 н 0000008144 00000 н 0000008200 00000 н 0000008256 00000 н 0000008406 00000 н 0000008462 00000 н 0000008552 00000 н 0000008663 00000 н 0000008719 00000 н 0000008828 00000 н 0000008884 00000 н 0000008995 00000 н 0000009051 00000 н 0000009107 00000 н 0000009263 00000 н 0000009318 00000 н 0000009451 00000 н 0000009607 00000 н 0000009700 00000 н 0000009793 00000 н 0000009849 00000 н 0000009905 00000 н 0000010016 00000 н 0000010072 00000 н 0000010173 00000 н 0000010229 00000 н 0000010328 00000 н 0000010384 00000 н 0000010491 00000 н 0000010547 00000 н 0000010645 00000 н 0000010701 00000 н 0000010757 00000 н 0000010849 00000 н 0000010949 00000 н 0000011004 00000 н 0000011059 00000 н 0000011174 00000 н 0000011230 00000 н 0000011286 00000 н 0000011431 00000 н 0000011486 00000 н 0000011596 00000 н 0000011692 00000 н 0000011817 00000 н 0000011872 00000 н 0000011927 00000 н 0000011982 00000 н 0000012084 00000 н 0000012139 00000 н 0000012243 00000 н 0000012341 00000 н 0000012455 00000 н 0000012510 00000 н 0000012639 00000 н 0000012694 00000 н 0000012810 00000 н 0000012865 00000 н 0000012920 00000 н 0000012975 00000 н 0000013090 00000 н 0000013145 00000 н 0000013261 00000 н 0000013316 00000 н 0000013426 00000 н 0000013480 00000 н 0000013534 00000 н 0000013588 00000 н 0000013867 00000 н 0000013939 00000 н 0000013962 00000 н 0000015869 00000 н 0000016726 00000 н 0000016907 00000 н 0000017117 00000 н 0000017337 00000 н 0000018201 00000 н 0000018259 00000 н 0000018282 00000 н 0000020548 00000 н 0000020571 00000 н 0000022639 00000 н 0000022662 00000 н 0000024607 00000 н 0000024630 00000 н 0000026547 00000 н 0000026570 00000 н 0000028486 00000 н 0000028589 00000 н 0000028645 00000 н 0000028668 00000 н 0000030859 00000 н 0000030882 00000 н 0000032819 00000 н 0000033734 00000 н 0000033813 00000 н 0000034740 00000 н 0000035558 00000 н 00000

00000 н 00000

%PDF-1. 4 % 654 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 654 361 0000000016 00000 н 0000007573 00000 н 0000013967 00000 н 0000014127 00000 н 0000014212 00000 н 0000014340 00000 н 0000014424 00000 н 0000014597 00000 н 0000014670 00000 н 0000014817 00000 н 0000014890 00000 н 0000014978 00000 н 0000015068 00000 н 0000015141 00000 н 0000015214 00000 н 0000015387 00000 н 0000015460 00000 н 0000015558 00000 н 0000015672 00000 н 0000015863 00000 н 0000015936 00000 н 0000016064 00000 н 0000016260 00000 н 0000016333 00000 н 0000016442 00000 н 0000016547 00000 н 0000016713 00000 н 0000016786 00000 н 0000016936 00000 н 0000017074 00000 н 0000017147 00000 н 0000017272 00000 н 0000017345 00000 н 0000017509 00000 н 0000017582 00000 н 0000017670 00000 н 0000017758 00000 н 0000017945 00000 н 0000018018 00000 н 0000018132 00000 н 0000018263 00000 н 0000018451 00000 н 0000018524 ​​00000 н 0000018686 00000 н 0000018805 00000 н 0000018992 00000 н 0000019065 00000 н 0000019215 00000 н 0000019345 00000 н 0000019532 00000 н 0000019605 00000 н 0000019678 00000 н 0000019862 00000 н 0000019970 00000 н 0000020079 00000 н 0000020152 00000 н 0000020266 00000 н 0000020339 00000 н 0000020457 00000 н 0000020530 00000 н 0000020691 00000 н 0000020785 00000 н 0000020899 00000 н 0000020972 00000 н 0000021098 00000 н 0000021171 00000 н 0000021292 00000 н 0000021365 00000 н 0000021552 00000 н 0000021657 00000 н 0000021752 00000 н 0000021825 00000 н 0000021898 00000 н 0000022008 00000 н 0000022081 00000 н 0000022183 00000 н 0000022256 00000 н 0000022329 00000 н 0000022402 00000 н 0000022518 00000 н 0000022591 00000 н 0000022700 00000 н 0000022773 00000 н 0000022893 00000 н 0000022966 00000 н 0000023070 00000 н 0000023143 00000 н 0000023257 00000 н 0000023330 00000 н 0000023403 00000 н 0000023476 00000 н 0000023549 00000 н 0000023736 00000 н 0000023841 00000 н 0000023944 00000 н 0000024017 00000 н 0000024131 00000 н 0000024204 00000 н 0000024322 00000 н 0000024395 00000 н 0000024538 00000 н 0000024611 00000 н 0000024713 00000 н 0000024786 00000 н 0000024922 00000 н 0000024995 00000 н 0000025104 00000 н 0000025177 00000 н 0000025342 00000 н 0000025443 00000 н 0000025552 00000 н 0000025625 00000 н 0000025698 00000 н 0000025823 00000 н 0000025896 00000 н 0000025969 00000 н 0000026042 00000 н 0000026114 00000 н 0000026313 00000 н 0000026433 00000 н 0000026564 00000 н 0000026637 00000 н 0000026751 00000 н 0000026824 00000 н 0000026942 00000 н 0000027014 00000 н 0000027141 00000 н 0000027213 00000 н 0000027338 00000 н 0000027410 00000 н 0000027544 00000 н 0000027616 00000 н 0000027760 00000 н 0000027832 00000 н 0000027904 00000 н 0000028022 00000 н 0000028110 00000 н 0000028238 00000 н 0000028310 00000 н 0000028421 00000 н 0000028493 00000 н 0000028604 00000 н 0000028676 00000 н 0000028785 00000 н 0000028857 00000 н 0000029047 00000 н 0000029118 00000 н 0000029189 00000 н 0000029348 00000 н 0000029432 00000 н 0000029526 00000 н 0000029597 00000 н 0000029701 00000 н 0000029772 00000 н 0000029873 00000 н 0000029944 00000 н 0000030015 00000 н 0000030086 00000 н 0000030184 00000 н 0000030278 00000 н 0000030349 00000 н 0000030463 00000 н 0000030534 00000 н 0000030605 00000 н 0000030677 00000 н 0000030816 00000 н 0000030888 00000 н 0000031002 00000 н 0000031074 00000 н 0000031192 00000 н 0000031264 00000 н 0000031375 00000 н 0000031447 00000 н 0000031565 00000 н 0000031637 00000 н 0000031745 00000 н 0000031817 00000 н 0000031941 00000 н 0000032013 00000 н 0000032085 00000 н 0000032158 00000 н 0000032272 00000 н 0000032345 00000 н 0000032463 00000 н 0000032536 00000 н 0000032688 00000 н 0000032761 00000 н 0000032936 00000 н 0000033049 00000 н 0000033145 00000 н 0000033218 00000 н 0000033330 00000 н 0000033403 00000 н 0000033517 00000 н 0000033590 00000 н 0000033717 00000 н 0000033790 00000 н 0000033917 00000 н 0000033990 00000 н 0000034063 00000 н 0000034188 00000 н 0000034261 00000 н 0000034373 00000 н 0000034446 00000 н 0000034570 00000 н 0000034643 00000 н 0000034716 00000 н 0000034789 00000 н 0000034862 00000 н 0000034976 00000 н 0000035049 00000 н 0000035167 00000 н 0000035240 00000 н 0000035385 00000 н 0000035458 00000 н 0000035569 00000 н 0000035642 00000 н 0000035752 00000 н 0000035825 00000 н 0000035974 00000 н 0000036074 00000 н 0000036180 00000 н 0000036253 00000 н 0000036326 00000 н 0000036465 00000 н 0000036538 00000 н 0000036611 00000 н 0000036728 00000 н 0000036823 00000 н 0000036896 00000 н 0000036969 00000 н 0000037089 00000 н 0000037162 00000 н 0000037235 00000 н 0000037308 00000 н 0000037422 00000 н 0000037495 00000 н 0000037613 00000 н 0000037686 00000 н 0000037858 00000 н 0000037948 00000 н 0000038040 00000 н 0000038113 00000 н 0000038259 00000 н 0000038332 00000 н 0000038474 00000 н 0000038547 00000 н 0000038620 00000 н 0000038731 00000 н 0000038804 00000 н 0000038906 00000 н 0000038979 00000 н 0000039082 00000 н 0000039155 00000 н 0000039272 00000 н 0000039345 00000 н 0000039455 00000 н 0000039528 00000 н 0000039638 00000 н 0000039711 00000 н 0000039784 00000 н 0000039857 00000 н 0000039930 00000 н 0000040033 00000 н 0000040106 00000 н 0000040209 00000 н 0000040282 00000 н 0000040385 00000 н 0000040458 00000 н 0000040561 00000 н 0000040634 00000 н 0000040737 00000 н 0000040810 00000 н 0000040883 00000 н 0000040979 00000 н 0000041083 00000 н 0000041156 00000 н 0000041229 00000 н 0000041346 00000 н 0000041419 00000 н 0000041529 00000 н 0000041602 00000 н 0000041726 00000 н 0000041799 00000 н 0000041921 00000 н 0000041994 00000 н 0000042116 00000 н 0000042189 00000 н 0000042313 00000 н 0000042386 00000 н 0000042497 00000 н 0000042570 00000 н 0000042643 00000 н 0000042716 00000 н 0000042831 00000 н 0000042904 00000 н 0000042977 00000 н 0000043071 00000 н 0000043187 00000 н 0000043260 00000 н 0000043333 00000 н 0000043439 00000 н 0000043512 00000 н 0000043619 00000 н 0000043692 00000 н 0000043800 00000 н 0000043873 00000 н 0000043997 00000 н 0000044070 00000 н 0000044177 00000 н 0000044250 00000 н 0000044362 00000 н 0000044435 00000 н 0000044543 00000 н 0000044616 00000 н 0000044732 00000 н 0000044805 00000 н 0000044950 00000 н 0000045023 00000 н 0000045138 00000 н 0000045211 00000 н 0000045355 00000 н 0000045428 00000 н 0000045543 00000 н 0000045616 00000 н 0000045689 00000 н 0000045762 00000 н 0000045874 00000 н 0000045947 00000 н 0000046048 00000 н 0000046121 00000 н 0000046255 00000 н 0000046328 00000 н 0000046438 00000 н 0000046511 00000 н 0000046630 00000 н 0000046703 00000 н 0000046813 00000 н 0000046886 00000 н 0000046993 00000 н 0000047066 00000 н 0000047183 00000 н 0000047256 00000 н 0000047361 00000 н 0000047434 00000 н 0000047541 00000 н 0000047614 00000 н 0000047688 00000 н 0000047762 00000 н 0000047969 00000 н 0000048151 00000 н 0000048776 00000 н 0000049588 00000 н 0000049811 00000 н 0000049885 00000 н 0000050109 00000 н 0000050900 00000 н 0000050980 00000 н 0000051899 00000 н 0000007713 00000 н 0000013943 00000 н трейлер ] >> startxref 0 %%EOF 655 0 объект > эндообъект 1013 0 объект > ручей HU{TRySb:jNEMr,Igl&&>xj1SN۞G6mn9″”!i1c;EBl 2-K4c9=νWZ WVn;K6?\=w{kN?}KH htXJ. Ʈ#>gD&7 7QPzLOČ` hq!8f>NR2u̩ͫ͏{rX..`P(,I :%*DiJVңk)4T7>_қx?NȶR|0(f4ei3m5hvLJƃ#nULυU)G/Ɋ -|R#U’l;j|>3B46v!m6`T}2)L”#GKǨ:`6

%PDF-1.6 % 3162 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 3162 77 0000000016 00000 н 0000003450 00000 н 0000003804 00000 н 0000003850 00000 н 0000004040 00000 н 0000004418 00000 н 0000004663 00000 н 0000004818 00000 н 0000004975 00000 н 0000005132 00000 н 0000005289 00000 н 0000005446 00000 н 0000005603 00000 н 0000005761 00000 н 0000005918 00000 н 0000006076 00000 н 0000006232 00000 н 0000006390 00000 н 0000006548 00000 н 0000006706 00000 н 0000006865 00000 н 0000007024 00000 н 0000007183 00000 н 0000007342 00000 н 0000007501 00000 н 0000007660 00000 н 0000007819 00000 н 0000007978 00000 н 0000008137 00000 н 0000008296 00000 н 0000008455 00000 н 0000008613 00000 н 0000009003 00000 н 0000009551 00000 н 0000009970 00000 н 0000010009 00000 н 0000010286 00000 н 0000010531 00000 н 0000010578 00000 н 0000010657 00000 н 0000010908 00000 н 0000011618 00000 н 0000012159 00000 н 0000012728 00000 н 0000013332 00000 н 0000013915 00000 н 0000014465 00000 н 0000014950 00000 н 0000015533 00000 н 0000018228 00000 н 0000029304 00000 н 0000029466 00000 н 0000029628 00000 н 0000029790 00000 н 0000029952 00000 н 0000030114 00000 н 0000030276 00000 н 0000030438 00000 н 0000030600 00000 н 0000030762 00000 н 0000030924 00000 н 0000031086 00000 н 0000031248 00000 н 0000031410 00000 н 0000031572 00000 н 0000031734 00000 н 0000031896 00000 н 0000032058 00000 н 0000032220 00000 н 0000032382 00000 н 0000032544 00000 н 0000032706 00000 н 0000032868 00000 н 0000033030 00000 н 0000033192 00000 н 0000003214 00000 н 0000001877 00000 н трейлер ]>> startxref 0 %%EOF 3238 0 объект >поток xb“`b`\π

Пять законов библиотечного дела

5 законов библиотечного дела  – это теория, предложенная С.Р. Ранганатан в 1931 г., подробно изложив принципы работы библиотечной системы. Пять законов библиотечного дела называются набором норм, представлений и руководств по надлежащей практике библиотечного дела. Многие библиотекари во всем мире принимают их как основу своей философии. Доктор С.Р. Ранганатан разработал Пять законов библиотечного дела в 1924 году. Утверждения, воплощающие эти законы, были сформулированы в 1928 году. Эти законы были впервые опубликованы в классической книге Ранганатана под названием «Пять законов библиотечного дела» в 1931 году.

Эти законы:

Эти законы библиотековедения являются «фундаментальными законами» библиотековедения. Они применимы к любой проблеме в области библиотечного дела, библиотечного обслуживания и библиотечной практики. Эти законы подобны горшку с океанами. До их провозглашения у предмета библиотечного дела не было философии.Эти законы дали философскую основу, гарантирующую вечное будущее предмету библиотечного дела, профессии библиотечного дела и использованию библиотек. Эти законы обеспечили научный подход к предмету библиотечного дела. Несмотря на то, что С.Р. Ранганатан предложил пять законов библиотечного дела еще до наступления цифровой эпохи, они по-прежнему актуальны и актуальны сегодня.¹

Примечание

• Следствием четвертого закона библиотечного дела является «Экономьте время персонала»
• В современном контексте термин “книга” следует использовать в более широком контексте для обозначения “Ресурса”.

• Первый закон: книги предназначены для использования
• Последствия
• Открытый доступ
• Местоположение
• Часы работы библиотеки
• Здание библиотеки и мебель
• Политика выбора книг
• Библиотечные методы
• Реклама
• Персонал библиотеки
• Справочная служба
• Второй закон: у каждого читателя своя книга
• Последствия/обязательства
• Обязательства государства
• Обязанности администрации библиотеки
• Обязанности сотрудников библиотеки
• Обязанности Читателя
• Третий закон: каждой книге свой читатель
• Последствия
• Открытый доступ
• Выбор книг
• Устройство полок
• Легкий доступ
• Каталогизация
• Справочная служба
• Реклама
• Служба расширения
• Четвертый закон: экономьте время читателя
• Последствия
• Открытый доступ
• Местоположение
• Расположение на полках, классификация и каталогизация
• Направляющие для стеллажей
• Выдача и возврат
• Справочная служба
• Служба документации
• Персонал библиотеки
• Пятый закон: библиотека — это растущий организм
• Последствия
• Сбалансированный рост
• Отказ от старых (устаревших) и сохранение ценных книг
• Выбор схемы классификации
• Выбор кода каталога
• Модернизация
• Посох
• Здание библиотеки – задел на будущее
• Гарантии
• Варианты пяти законов библиотечного дела
• Пять законов библиотечного дела Статьи и новости
• Книга «Пять законов библиотечного дела» С. Р. Ранганатан (оцифрованная книга)
• Пять законов библиотечного дела Инфографика
• Викторина «Пять законов библиотечного дела»

ПЕРВЫЙ ЗАКОН: КНИГИ ПРЕДНАЗНАЧЕНЫ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

Книга — проводник, друг и философ. Писатель пишет книгу, чтобы выразить свои мысли. Таким образом, основная цель письма состоит в том, чтобы передать содержащуюся в нем мысль. Для этого необходимо сдать книги в пользование. Таким образом, первый закон действительно требует, чтобы все усилия были направлены на то, чтобы все книги, хранящиеся в библиотеке, использовались, потому что она создана для использования.Первый закон «Книги предназначены для использования» делает акцент на использовании книг, а не на их хранении. Когда-то книги хранились в закрытом доступе, чтобы предотвратить кражу, но это препятствовало их свободному использованию и выдаче во временное пользование. Первый закон библиотечного дела «книги предназначены для использования» означает, что книги в библиотеках не должны быть закрыты для пользователей.

Первый закон — книги предназначены для использования — это один из пяти законов библиотечного дела, который Ранганатан назвал «тривиальным трюизмом» в своей работе «Библиотечное дело и научный метод». очевидно верно и не говорит ничего нового или интересного. Итак, здесь д-р С. Р. Рангангатан имеет в виду, что Первый Закон — Книги предназначены для использования — очевидно истинен и понятен. Ранганатан говорит в этой работе:

. Прежде чем перейти к рассмотрению этих факторов, следует сказать несколько слов о замечании о том, что Первый закон — книги предназначены для использования — является тривиальным трюизмом.Первый закон большинства наук в равной степени таков. Например, первый закон движения Ньютона гласит: «Всякое тело сохраняется в своем состоянии покоя, если оно не вынуждено изменить это состояние под действием приложенных сил». Разве это не трюизм?

Последствия

• Открытый доступ — Открытый доступ к книгам расширяет возможности их использования. В этой системе каждому читателю разрешается подойти к полке и выбрать интересующую его книгу. В случае, если он не найдет нужной интересующей его книги, он может выбрать какую-нибудь другую с полки.
• Местоположение – Библиотека должна быть расположена недалеко от центральной площади. Если это институциональная библиотека, то она должна располагаться недалеко от центра институционального комплекса. Если это публичная библиотека, то она должна быть в центре города.
• Часы работы библиотеки – Первый закон требует, чтобы библиотека была открыта в течение долгих часов и в те часы, которые больше всего подходят ее посетителям.
• Здание библиотеки и мебель – Должно быть функциональное здание библиотеки с приятным естественным и электрическим освещением, успокаивающим интерьером, красивой мебелью, удобными стульями и т. д.
• Политика выбора книг – Следует приобретать книги, отвечающие потребностям читателей. Книги должны быть привлекательными, чтобы они доставляли читателю удовольствие.
• Библиотечные методы – Надлежащая каталогизация и классификация книг необходимы для продвижения использования книг.
• Публичность – Первый закон требует широкой огласки каждой книги в библиотеке. Например, библиотекарь может вывести список новых дополнений и последних поступлений через Службу текущей осведомленности (CAS) или Службы выборочного распространения информации (SDI).
• Персонал библиотеки – Библиотека не может соответствовать ожиданиям первого закона, если ее персонал не внимателен и весел, и не заботится о книгах и читателях. Читатели должны рассматриваться как клиенты. Некоторые читатели застенчивы и не осведомлены о сложных библиотечных приемах. Сотрудники библиотеки должны помочь таким пользователям найти нужную книгу. Это не только удовлетворит читателей, но и улучшит использование библиотеки.
• Справочная служба – Справочная служба направлена ​​на установление правильного контакта между нужным читателем и нужной книгой в нужное время.Коллекция библиотечных ресурсов не будет использоваться полностью, если библиотекарь-справочник не приложит усилий, чтобы помочь пользователям использовать ресурсы библиотеки. Это личное служение приведет к более широкому использованию книг.

ВТОРОЙ ЗАКОН: КАЖДЫЙ ЧИТАЕТ СВОЮ КНИГУ

Второй закон библиотечного дела гласит: «Каждый читатель — свою книгу». Этот закон подразумевает, что «книги предназначены для всех» или «книги для всех». Второй закон подчеркивал демократизацию библиотеки, где каждый читатель имеет равное право получить интересующую его книгу.Второй закон закрепил некоторые обязанности или обязанности государства, библиотечного управления, библиотечного персонала и читателей. Библиотека должна обслуживать всех посетителей, независимо от их возраста, расы или экономического положения.

Этот закон предполагает, что каждый член сообщества должен иметь возможность получать необходимые материалы. Д-р Ранганатан считал, что все люди из всех социальных слоев имеют право на библиотечное обслуживание и что основой пользования библиотекой является образование, на которое имеют право все.Эти права не обошлись без некоторых важных обязательств как для библиотек/библиотекарей, так и для посетителей библиотек. Библиотекари должны иметь отличные знания из первых рук о людях, которых они будут обслуживать. Коллекции должны отвечать особым интересам сообщества, а библиотеки должны широко продвигать и рекламировать свои услуги, чтобы привлечь широкий круг читателей.

Второй закон библиотечного дела «каждый читатель — свою книгу» означает, что библиотекари обслуживают широкий круг посетителей, приобретают литературу в соответствии с обширным набором потребностей, а не судят о том, что конкретно посетители предпочитают читать.У всех разные вкусы и различия, и мы должны уважать это.

Возможное отсутствие физического объекта хранения знаний не ослабляет силу второго принципа Ранганатана; это, безусловно, имеет отношение к СМИ во всех формах, включая Интернет.

Последствия / обязательства

• Обязательства государства – Когда мы говорим “Каждый читатель – свою книгу” или “Книги для всех”, автоматически появляется государство или правительство.У государства есть определенные обязательства перед своими гражданами, и одно из них — предоставить равные возможности для чтения. Ранганатан обсудил обязательства государства по трем главам. (i) Финансы — предоставление финансирования путем предоставления грантов и взимания платы за пользование библиотекой (по выбору Ранганатана), (ii) Законодательство — принятие библиотечного законодательства и (iii) Координация — деятельности по обеспечению «Книги для всех»
• Обязанности библиотечного управления – Второй закон должен кое-что сказать библиотечному руководству в отношении подбора книг и персонала.Библиотека имеет ограниченное финансирование. Поэтому желательно знать требования читателей, прежде чем выбирать книги. Точно так же руководство библиотеки должно подбирать сотрудников для своей библиотеки, обладающих профессиональной компетентностью и миссионерским рвением.
• Обязанности библиотечного персонала – Библиотечный персонал должен быть ориентирован на сотрудничество и служение. Сотрудники библиотеки должны стать мостом между читателем и книгой, только тогда у каждого читателя будет своя книга. Когда читатель входит в библиотеку, персонал библиотеки должен протянуть ему руку помощи.Второй закон решительно поддерживает программу обучения пользователей в библиотеках.
• Обязанности Читателя – Второй Закон предполагает, что Читатели также выполняют некоторые обязанности. Читатели должны быть дисциплинированными и следовать правилам и положениям. Читатели должны воздерживаться от вырезания страниц из книг, хранения книг после установленного срока и т. д. Все подобные действия равносильны тому, что другие читатели не допускаются к своим книгам.

ТРЕТИЙ ЗАКОН: КАЖДОЙ КНИГЕ СВОИ ЧИТАТЕЛИ

Третий закон предписывает каждой книге своего читателя.Акцент делается на книге. Этот закон требует, чтобы каждая книга в библиотеке нашла своего читателя. Это означает, что их пользователи должны максимально использовать книги.

Этот принцип тесно связан со вторым законом, но он фокусируется на самом предмете, предполагая, что у каждого предмета в библиотеке есть человек или люди, которые сочтут этот предмет полезным. Д-р Ранганатан утверждал, что библиотека может разработать множество методов, гарантирующих, что каждый элемент найдет своего читателя. Один метод включал основные правила доступа к коллекции, в первую очередь необходимость открытых полок.

Третий закон библиотечного дела «каждая книга — свой читатель» означает, что библиотечные книги имеют место в библиотеке, даже если меньшая демографическая группа выберет их для чтения.

Поэтому необходимо принять меры для обеспечения успешного выполнения требования Третьего закона. Факторы, которые следует учитывать в связи с этим, обсуждаются ниже:

Последствия

• Открытый доступ – Это один из самых эффективных способов гарантировать, что читатели увидят максимальное количество книг.Бывает и так, что читатель переходит к полкам в поисках книги и в процессе поиска выбирает еще много книг.
• Выбор книг – Полностью учитывайте вкусы и требования клиентов библиотеки. Трудности третьего закона можно свести к минимуму, приняв взвешенную политику отбора книг. Если правильно подобрать книги, то они обязательно найдут своего читателя
• Расположение на полках – Если книги расставить так, чтобы предметы располагались в соответствии со степенью взаимного родства, то каждая книга имела бы более высокую вероятность получить своих читателей.
• Легкий доступ – Книги должны быть расположены в пределах легкой досягаемости для читателей. Было замечено, что чаще всего используются книги, находящиеся в пределах удобной досягаемости читателей. Для удобства доступа полки не должны быть выше 6,5 футов.
• Каталогизация – Надлежащая каталогизация книг очень важна, так как даже если на полках могут быть хорошо спланированные и расставленные книги, сами по себе они не годятся. Запись серии и статьи с перекрестными ссылками очень полезны для привлечения внимания читателей.Аналитические записи повышают вероятность того, что составная книга найдет своего читателя.
• Справочная служба – Справочный библиотекарь должен знать о мире книг и пытаться найти читателя для каждой из них. Библиотекарь-справочник должен выступать в роли агента по поиску каждой книги.
• Публичность – Публичность – очень мощное оружие для привлечения читателей в библиотеку и тем самым увеличения шансов каждой книги найти своего читателя. Например, о поступлении новых книг можно довести до сведения читателей, разместив их у входа в библиотеку, или сообщив читателям через электронный информационный бюллетень, или распространив информацию о них через дескриптор библиотеки в Твиттере. .
• Дополнительная служба – Библиотека привлекает читателей, превращаясь в культурный и общественный центр. Библиотека делает это путем организации выставок, музыкальных концертов, магических шоу, празднования местных и национальных праздников и т. д. Как только люди приходят на эти мероприятия, библиотека может попытаться объединить книги и читателей.

ЧЕТВЕРТЫЙ ЗАКОН: ЭКОНОМЬТЕ ВРЕМЯ ЧИТАТЕЛЯ

Четвертый закон гласит: «Экономьте время читателя».” Пользователя библиотеки следует считать занятым человеком. Необходимо, чтобы читатель был удовлетворен, а читатель удовлетворен в наибольшей степени, если экономится его время, т. е. если он получает необходимую услугу в минимально возможное время.

Этот закон является признанием того, что одним из преимуществ библиотечного обслуживания является его способность эффективно удовлетворять потребности пользователей библиотеки. С этой целью д-р С.Р. Ранганатан рекомендовал использовать соответствующие бизнес-методы для улучшения управления библиотекой. Он заметил, что сосредоточение библиотечной коллекции в одном месте дает явные преимущества.Он также отметил, что превосходный персонал будет включать не только тех, кто обладает сильными справочными навыками, но и сильными техническими навыками в каталогизации, перекрестных ссылках, заказе, присоединении и распространении материалов.

Четвертый закон библиотечного дела «экономит время пользователя» означает, что все посетители должны иметь возможность легко и быстро находить нужный им материал.

Последствия

• Открытый доступ – В закрытом доступе книги зря тратят время.В открытом доступе экономится время читателей. Если открытого доступа нет, то читатель должен сделать выбор книг через поиск в библиотечном каталоге. Затем читатель запрашивает у сотрудников библиотеки книгу, которую он искал в каталоге. Персонал ищет нужную книгу, и если персонал не может отследить книгу, то читателю снова нужно искать в каталоге. Этих проблем можно избежать, если обеспечить открытый доступ, когда читатели могут сами подойти к полкам для поиска своей книги.
• Расположение — Расположение библиотеки имеет большое значение. Он должен располагаться в центре, чтобы к нему был удобный доступ для обслуживаемого сообщества. Для институциональной библиотеки она должна быть в центре учреждения, для публичной библиотеки она должна быть в центре города. Расположенная в центре библиотека экономит время пользователей при ее посещении.
• Расположение на полках, классификация и каталогизация – В библиотеке должны использоваться надлежащие схемы классификации.Книги должны располагаться на полках в соответствии с классификационным номером. Регулярное выпрямление полки также важно. Чтобы сэкономить время читателей, библиотечный каталог должен быть нацелен на предоставление различных подходов к пользователям. Он должен включать аналитические записи для составных книг.
• Справочники по стеллажам — Чтобы сэкономить время читателя, в библиотеке должна быть эффективная система стеллажей для стеллажей. Может быть весьма полезно держать его у входа в комнату для хранения, весь план комнаты с указанием положения книжных стеллажей и классов книг в них.
• Выдача и возврат – Большинство читателей хотят читать книгу дома. Для этого библиотека должна выдать книги читателям. Следует использовать методы экономии времени для распространения книг, чтобы пользователю не приходилось тратить больше времени на выдачу (или возврат) книги.
• Справочная служба – Справочная служба устанавливает контакт между книгой и читателем, предоставляя справочную службу и справочную службу дальнего действия, тем самым экономя время читателя.
• Служба документации – Значительное количество времени читателей тратится на поиск литературы. Таким образом, библиотека должна предоставлять всесторонние или выборочные, в зависимости от необходимости, услуги по документации, включая услуги SDI, чтобы сэкономить время читателя.
• Библиотечный персонал – Библиотечный персонал должен сотрудничать. Они должны помочь читателям найти свой документ, помня о послании Четвертого закона, то есть экономить время читателя.

ПЯТЫЙ ЗАКОН: БИБЛИОТЕКА — ЭТО РАСТАЮЩИЙ ОРГАНИЗМ

Пятый закон гласит: «Библиотека — это растущий организм.«Библиотека — это социальный институт, и она будет расти как организм. Библиотека будет расти с точки зрения документов, читателей и сотрудников. Природа органического роста может быть либо ростом как тела ребенка, либо ростом как тела взрослого. Рост новой библиотеки будет соответствовать росту ребенка во всех аспектах. В случае служебной библиотеки, когда ее рост достигнет взрослой стадии, рост будет происходить с точки зрения замены старых книг на новые книги и новые пользователи будут постоянно заменять старых пользователей.

Этот закон больше сосредоточивался на необходимости внутренних изменений, чем на изменениях в самой среде. Д-р Ранганатан утверждал, что библиотечные организации должны приспосабливаться к росту персонала, физической коллекции и количеству посетителей. Это включало возможность расширения физического здания, зон для чтения, стеллажей и места для каталога.

Пятый закон библиотечного дела «библиотека — это растущий организм» означает, что библиотека должна быть постоянно меняющимся учреждением, а не статичным в своем мировоззрении.Книги, методы и физическая библиотека должны со временем обновляться.

Последствия

• Сбалансированный рост – Коллекция должна расширяться во всех предметных областях с учетом потребностей и потребностей всех читателей, насколько это возможно.
• Отбрасывание старых (устаревших) и сохранение ценных книг – Отсейте старые, устаревшие и неиспользуемые книги, чтобы освободить место для новых дополнений. Однако библиотекари должны принимать необходимые меры для сохранения ценных материалов.
• Выбор схемы классификации – Мы должны использовать схему классификации, которая способна достаточно хорошо противостоять натиску знаний.
• Выбор кода каталога – Мы должны использовать код каталога, который может обеспечить обработку всех видов уже приобретенных библиотечных материалов, а также новых материалов, которые, вероятно, будут приобретены в будущем.
• Модернизация – Библиотекам, возможно, придется подумать о компьютеризации различных хозяйственных операций, таких как комплектование, распространение, каталогизация и т. д.
• Персонал – Когда библиотека растет, санкционированный персонал на каком-то этапе становится недостаточным. Так что в это время следует подумать об увеличении штата. Любой стандарт штатного расписания должен быть принят библиотеками, тогда библиотека сможет получить необходимый персонал.
• Здание библиотеки – задел на будущее – При планировании и проектировании здания библиотеки необходимо предусмотреть расширение здания как по горизонтали, так и по вертикали.В библиотеке должно быть достаточно места как для настоящего, так и для будущего.
• Меры предосторожности – По мере увеличения числа читателей обостряется проблема кражи книг из библиотеки, особенно в системе открытого доступа. Таким образом, необходимы некоторые меры безопасности, такие как вход и выход должны быть через одни ворота, окна должны быть зарешечены, а все считыватели должны быть проверены перед выходом.

Библиотекарь Майкл Горман (родился 6 марта 1941 года, Уитни, Оксфордшир), библиотекарь британского происхождения, библиотечный ученый и редактор/писатель, бывший президент Американской библиотечной ассоциации в 2005–2006 годах и редактор AACR2), и Уолт Кроуфорд рекомендовал следующие законы в дополнение к пяти законам Ранганатана в «Библиотеках будущего: мечты, безумие и реальности» [Американская библиотечная ассоциация, 1995], (стр.8) Позже Горман повторил их в своей небольшой книге «Наши исключительные сильные стороны» [Американская библиотечная ассоциация, 1998].

1. Библиотеки служат человечеству.

2. Уважайте все формы передачи знаний.

3. Разумно используйте технологии для повышения качества обслуживания.

4. Защитить свободный доступ к знаниям.

5. Уважай прошлое и создавай будущее.

В 2004 году библиотекарь Алиреза Норузи рекомендовал применить законы Ранганатана к Сети в своей статье «Применение законов Ранганатана к Сети»:

1.Веб-ресурсы предназначены для использования.

2. У каждого пользователя есть свой веб-ресурс.

3. У каждого веб-ресурса свой пользователь.

4 Экономьте время пользователя.

5. Сеть — это растущий организм.

В 2008 году библиотекарь Кэрол Симпсон рекомендовала отредактировать закон Ранганатана из-за разнообразия средств массовой информации. Следующие были:

1. Медиа предназначены для использования.

2. У каждого патрона своя информация.

3. У каждого носителя свой пользователь.

4. Экономьте время посетителя.

5. Библиотека — это растущий организм.

ПЯТЬ ЗАКОНОВ БИБЛИОТЕЧНОГО НАУКА СТАТЬИ И НОВОСТИ

Изменение порядка Ranganathan: изменение поведения пользователей, изменение приоритетов ⁴

Отчет об исследовании OCLC, подготовленный Линн Силипиньи Коннауэй, доктором философии, и Икшелем Фаниэлем, доктором философии.

В этом отчете предполагается, что «Пять законов библиотечного дела» Шияли Рамамриты Ранганатана можно переупорядочить и интерпретировать, чтобы отразить современные библиотечные ресурсы и услуги, а также поведение, которое люди демонстрируют при взаимодействии с ними.

Хотя авторы, старший научный сотрудник Линн Силипиньи Коннауэй и младший научный сотрудник Икшел Фаниел, считают, что пять законов Ранганатана по-прежнему актуальны сегодня, их намерение состоит в том, чтобы помочь развить как работу, выполняемую библиотекарями, так и восприятие библиотек и библиотекарей. Изменяя то, как мы думаем о пяти законах с точки зрения интерпретации и порядка важности, Линн и Икшел надеются отразить текущие ресурсы и услуги, доступные для использования, и поведение, которое демонстрируют люди, взаимодействуя с ними.

Цель этой публикации — предоставить своевременный и актуальный контекст для законов Ранганатана, на который современные библиотекари, библиотечные исследователи и специалисты по информации могут ссылаться, когда они думают о внесении изменений в практику и разработке программ для будущих исследований.

Основные моменты

• Сегодняшние пользователи библиотек призывают библиотекарей перейти от простой декларации «сэкономить время читателя»; удовлетворение потребностей современных пользователей требует внедрения библиотечных систем и служб в их существующие рабочие процессы
• Наша современная перефразировка фразы «каждый человек — его или ее книга» — это знание своего сообщества и его потребностей
• Основное значение фразы «книги предназначены для использования» по-прежнему относится к доступу; однако наша интерпретация сосредоточена на развитии физической и технической инфраструктуры, необходимой для доставки материалов
.
• Наша интерпретация принципа «каждая книга — свой читатель» направлена ​​на повышение возможности обнаружения, доступа и использования ресурсов в рамках существующих рабочих процессов пользователей
• Мы согласны с тем, что «библиотека — это растущий организм», и предлагаем увеличить долю внимания пользователей

ПЯТЬ ЗАКОНОВ БИБЛИОТЕЧНОГО НАУКА КНИГА С.Р. РАНГАНАТАН (ЦИФРОВАЯ КНИГА)

ПЯТЬ ЗАКОНОВ БИБЛИОТЕЧНОЙ НАУКИ ИНФОГРАФИКА⁵

ВИКТОРИНА ПО ПЯТИ ЗАКОНАМ БИБЛИОТЕЧНОГО НАУКИ

• Что называется набором норм, представлений и руководств по хорошей практике в библиотечном деле? [(a) Каноны каталогизации (b) Классификация двоеточий (c) Пять законов (d) Пять законов библиотечного дела]
• В каком году вышла книга «Пять законов библиотечного дела»? [(а) 1928 (б) 1931 (в) 1932 (г) 1933]
• Определите, какой из пяти законов библиотечного дела Ранганатан назвал «тривиальным трюизмом» в своей работе «Библиотечное дело и научный метод» [(1) Первый закон (2) Второй закон (3) Третий закон (4) Пятый закон ]

2. Рубин, Ричард Э. Основы библиотеки и информатики. 2-е изд.; Издательство Нила-Шумана: Нью-Йорк, 2004.

3. Пять законов библиотечного дела. Википедия. https://en.wikipedia.org/wiki/Five_laws_of_library_science (по состоянию на 10 сентября 2017 г.)

4. Коннауэй, Линн Силипиньи и Икшель М. Фаниель. 2014. Переупорядочивание Ранганатана: изменение поведения пользователей, изменение приоритетов.Дублин, Огайо: OCLC Research.http://www.oclc.org/content/dam/research/publications/library/2014/oclcresearch-reordering-ranganathan-2014.pdf.

5. Университет Южной Калифорнии, Школа бизнеса им. Маршалла. Доктор С.Р. Пять законов библиотечного дела Ранганатана. http://librarysciencegrade.usc.edu/resources/infographics/dr-s-r-ranganathans-five-laws-of-library-science/ (по состоянию на 17 сентября 2017 г.)

6. Аспе, Рон. Сохраняются ли исходные 5 законов библиотечного дела в цифровом мире? http://блог.lucidea.com/do-the-original-5-laws-of-library-science-hold-up-in-a-digital-world (по состоянию на 20 сентября 2017 г.)

7. С. Р. Ранганатан. Библиотековедение и научный метод. http://nopr.niscair.res.in/bitstream/123456789/28515/1/ALIS%204%281%29%2019-32.pdf

• Название статьи: Пять законов библиотечного дела
• Автор: Салман Хайдер
• Название веб-сайта: Библиотечные исследования и информационные технологии
• URL-адрес: https://www.librarianshipstudies.com/2017/09/five-laws-of-library-science.html

ОБРАТНАЯ СВЯЗЬ

Помогите нам улучшить эту статью! Свяжитесь с нами с вашим отзывом. Вы можете использовать раздел комментариев ниже или связаться с нами в социальных сетях.

По просьбе библиотечных специалистов мы сделали доступной информацию о пяти законах библиотечного дела на некоторых популярных языках, таких как испанский, французский, немецкий, итальянский, русский, хинди, китайский и японский.Если один из этих языков является вашим родным языком, пожалуйста, проверьте перевод на свой язык и предложите нам, если требуются какие-либо изменения.

Эта мультимедийная статья «Пять законов библиотечного дела» широко обсуждается, высоко оценивается, цитируется, упоминается и имеет гиперссылки. Некоторые места, где это обсуждается и упоминается, приведены ниже.

Ссылки, цитаты и ссылки

• Стандарты управления сельскохозяйственной информацией (AIMS), Продовольственная и продовольственная и сельскохозяйственная организация Объединенных Наций (ФАО), Италия.http://aims.fao.org/activity/blog/five-laws-library-science-detailing-principles-operating-library-system
• Матур, П. (2019). Обобщение в старшей библиотеке Королевской школы. Правительство Австралии, Департамент образования Нового Южного Уэльса. https://education.nsw.gov.au/teaching-and-learning/professional-learning/scan/past-issues/vol-38–2019/genrefication—the-kings-school-senior-library (доступ 3 апреля 2020 г.).
• UCLA (Калифорнийский университет в Лос-Анджелесе), «Семинар: специальные вопросы информационных исследований: библиотечное дело коренных народов» — https://ccle.ucla.edu/course/view/20S-INFSTD289-4?section=1 (по состоянию на 5 апреля 2020 г.).
• Университет Теннесси, Ноксвилл, «Виртуальная реальность и образование: от классных комнат до библиотек» http://volweb.utk.edu/~amihailo/vrsurvey.html (по состоянию на 5 апреля 2020 г.).
• Knowledge Quest (Журнал Американской ассоциации школьных библиотекарей), «Сохраните время читателя», https://knowledgequest.aasl.org/save-the-time-of-the-reader/ (по состоянию на 5 апреля 2020).
• Колледж Густава Адольфа, США, https://folkelore.blog.gustavus.edu/2019/10/10/library-matters-libraries-matter-infrastructure-part-one/ 

LinkedIn

• Адриано Силва, старший библиотекарь и специалист по информационным технологиям, Biblioteca Pública Municipal do Porto / Публичная библиотека Порту, Португалия — Отлично! Я люблю это! Специально часть “реклама”
• Дженнифер Клоссон, техник библиотеки в программе READ города Сан-Диего по обучению грамоте, США. Есть ли у автоматических библиотек те же самые пять законов?
• Салман Хайдер — Да, конечно.Эти пять законов являются фундаментальными руководящими принципами библиотечного дела, которые по-прежнему актуальны в современных беспилотных библиотеках, а также в отношении цифровых ресурсов. Для беспилотных библиотек более актуален вариант пяти законов, данный моим Майклом Горманом, который также описан в статье блога Librarianship Studies.
• Флорика Кампеану, Ricercatore/technologo presso Istituto Nazionale Di Economia Agraria, Италия — Все библиотеки, без библиотекарей или с одним или тысячами библиотекарей, полезны для своих читателей/пользователей.Ранганатан и его последователи сосредотачиваются на них
• Виктория Франку, библиотекарь Центральной университетской библиотеки Бухареста, Бухарест, Румыния — Законы Ранганатана по-прежнему действуют и будут действовать всегда. Я помню даму из Финляндии, представлявшую доклад по этому поводу на международной конференции двадцать лет назад. Знаменательно, что мы сейчас обсуждаем пять правил, не так ли?
• Дурайсами Гнанасекаран, библиотекарь Анандского института высоких технологий. Каким бы ни был формат контента/услуг, предоставляемых в библиотеках, не имеет значения, укомплектована библиотека или нет, пять законов SRR применяются всегда, начиная с Пяти законов. являются фундаментальными руководящими принципами библиотечного дела, как правильно указал Салман Хайдер.
• Читра Карунанаяке, менеджер по библиотечному обслуживанию, репатриационный госпиталь Конкорд, библиотека, Университет Монаш, Сидней, Австралия. Прежде чем я начал заниматься в библиотеке, я прочитал «Пять законов» Ранганатана, и это вдохновило меня начать свою карьеру в библиотечном деле. Я думаю, что эти законы по-прежнему действуют и применимы к любой библиотеке.
• Чампика Махантеге, библиотекарь Национального института управления бизнесом (NIBM), Шри-Ланка — Очень полезная информация…
• Виджая Виджаяпрабхакар, администратор библиотеки последипломной библиотеки Виджая, Университет Аннамалая, Бангалор, Индия — [LinkedIn] — Да, конечно, эти законы очень ценны и применимы ко всем видам библиотек
• Олугбенга Чарльз Оке, сертифицированный специалист в области архивов и информации, Нигерийская фондовая биржа (NSE), Нигерия. Я бы скорее назвал эти законы принципами, на которых основываются услуги, предоставляемые библиотекарями и информатиками.Эти принципы очень ценны даже в этом столетии.
• Тревор Сихосана, старший библиотекарь в Кейптауне, библиотека Скоттсдене, Университет Квазулу-Натал, Кейптаун, Южная Африка. Спустя десять лет после того, как я прочитал о них в колледже, я до сих пор ссылаюсь на них как на основу того, как мы предоставляем службу, особенно во времена, когда я чувствую себя сорванным.
• Ратемо Мозес, библиотекарь Университета Кисии, Кения. Мне нравятся законы, они вдохновили меня заняться той карьерой, которой я занимаюсь.Благодаря Ранганатану.
• Ума Магесвари Кришнан, директор библиотеки Малайского университета, Куала-Лумпур, Малайзия — Очень ценная информация.
• Мари Томлин, LSC и менеджер электронных ресурсов в Нортумберленде, Университет Нортумбрии, Северный Ситон, Нортумберленд, Соединенное Королевство — Это чрезвычайно интересно. Я занят изучением информатики MSc. Я буду изучать эти законы дальше.
• Тобулайефа Ариайе, библиотекарь, Государственный университет дельта-информации Access International Limited (NG), Нигерия — Пять законов библиотечного дела являются основой, на которой строится вся деятельность библиотекаря/информатика.
• Веллингтон Соко, библиотекарь Педагогического колледжа Домаси, Малави. Действительно, краеугольный камень библиотеки.
• Донна Келлион, библиотекарь по цифровой грамотности в библиотеках Регионального совета Маккея, Университет Чарльза Стерта, Маккей, Австралия. Я не считаю, что законы требуют пересмотра, кроме термина «книги». Независимо от того, находятся ли ресурсы, к которым мы направляем наших пользователей, в печатном виде, открыты онлайн или скрыты в недрах базы данных, мы все равно должны направлять их к их «книге».
• Сабрина Миллер, Публичная библиотека Эдмонтона, Канада — «Библиотека — это растущий организм» — безусловно! Вот почему они не устарели, пока мы находим творческие, инновационные способы оставаться актуальными в служении нашим сообществам. Мы больше не только о книгах!

18 Кодекс США § 2257 – Требования к ведению учета | Кодекс США | Закон США

Для даты вступления в силу этого подраздела, указанного в подразд. (f)(4)(A), см. раздел 312 Pub.L. 101–647, указанная в качестве даты вступления в силу поправки 1990 г., примечание ниже.

2006 г. — Подразд. (а). Паб. L. 109–248, §502(a)(1), добавлено «цифровое изображение, цифровое или компьютерное изображение реального человека, изображение» после «видеозапись».

Подразд. (е)(1). Паб. Законодательство L. 109–248, §502(a)(2), добавлено в конце: «В этом абзаце термин «копия» включает каждую страницу веб-сайта, на которой появляются материалы, описанные в подразделе (a)».

Подразд. (е)(5). Паб. Л.109–248, §502(a)(3), добавлен абз. (5).

Подразд. (час). Паб. L. 109–248, §502(a)(4), добавлен пп. (h) и вычеркнут бывший подпункт. (h), в котором определены «фактическое поведение откровенно сексуального характера», «документ, удостоверяющий личность», «производит» и «исполнитель».

2003 — Подразд. (г)(2). Паб. L. 108–21, § 511 (a) (1), заменено «этой главы или главы 71» на «этого раздела».

Подразд. (ч)(3). Паб. L. 108–21, §511(a)(2), после слова «видеокассета» добавлено «созданное компьютером изображение, цифровое изображение или изображение».

Подразд. (я). Паб. L. 108–21, §511 (a) (3), заменены «не более 5 лет» на «не более 2 лет» и «10 лет» на «5 лет».

1994 — пп. (е), (ж). Паб. Л. 103–322 вычеркнуты пп. (f) и (g) в соответствии с Pub. л. 100–690. подразд. (f) уполномочил Генерального прокурора издавать правила для выполнения этого раздела и подраздела. (g) определены «фактическое поведение откровенно сексуального характера», «документ, удостоверяющий личность», «производит» и «исполнитель».

1990 — Подразд. (а)(1).Паб. L. 101–647, §301(b), «1 ноября 1990 г.» заменено на «6 февраля 1978 г.».

Подразд. (г). Паб. L. 101–647, §311, замененные абз. (1) и (2) для бывших пар. (1) и (2), которые были по существу одинаковыми и вычеркнуты из п. (3) следующего содержания: «При судебном преследовании любого лица, к которому применяется подпункт (а), за преступление, нарушающее подпункт 2251(а) настоящего раздела, элементом которого является создание визуального изображения несовершеннолетнего участие или помощь другому лицу в совершении откровенно сексуального поведения, в котором этот элемент должен быть установлен путем демонстрации того, что исполнитель по смыслу этого раздела является несовершеннолетним —

«(A) доказательство того, что лицо не соблюдает положения подраздела (a) или (b) настоящего раздела, касающиеся создания и ведения записей, или постановления, изданного в соответствии с ним, создает опровержимую презумпцию того, что такой исполнитель был несовершеннолетним; и

«(B) доказательство того, что лицо не выполнило положения подраздела (e) настоящего раздела в отношении заявления, требуемого этим подразделом, приводит к опровержимой презумпции того, что каждый исполнитель в деле был несовершеннолетним.

Подразд. (е). Паб. L. 101–647, §311, замененные абз. (1) и (2) для бывших пар. (1) и (2), которые были по существу одинаковыми и вычеркнуты из п. (3) следующего содержания: «При любом судебном преследовании лица за правонарушение, нарушающее статью 2252 настоящего раздела, элементом которого является транспортировка, отправка по почте или распространение визуального изображения с использованием несовершеннолетнего, участвующего в откровенно сексуальное поведение, и в котором этот элемент должен быть установлен путем демонстрации того, что исполнитель по смыслу этого раздела является несовершеннолетним, доказательство того, что материал, в котором содержится визуальное изображение, не содержал заявление, требуемое в соответствии с этим разделом создает опровержимую презумпцию того, что такой исполнитель был несовершеннолетним.

Подразд. (е). Паб. L. 101–647, §311, добавлен пп. (f) в отношении незаконных действий и бездействия.

Подразд. (г). Паб. L. 101–647, §311, добавлен пп. (g) в отношении выпуска правил.

Подсек. (Привет). Паб. L. 101–647, §311, добавлены пп. (з) и (и).

Обзор текущего состояния технологий улавливания и хранения диоксида углерода

Abstract

Проблемы глобального потепления и изменения климата вызвали глобальные усилия по концентрация углекислого газа в атмосфере (CO ₂ ).Улавливание и хранение двуокиси углерода (CCS) считается важной стратегией для достижения целей по сокращению выбросов CO ₂ . В этом документе рассматриваются и обсуждаются различные аспекты CCS, включая современные технологии улавливания CO ₂ , разделения, транспортировки, хранения, утечек, мониторинга и анализа жизненного цикла. Выбор конкретной технологии улавливания CO ₂ в значительной степени зависит от типа электростанции CO ₂ и используемого топлива. Среди этих процессов разделения CO ₂ абсорбция является наиболее зрелой и широко применяемой из-за ее более высокой эффективности и более низкой стоимости.Трубопровод считается наиболее жизнеспособным решением для транспортировки больших объемов CO ₂ . Среди этих геологических формаций для хранения CO ₂ повышенная нефтеотдача является зрелой и практикуется в течение многих лет, но ее экономическая целесообразность для антропогенных источников должна быть продемонстрирована. Растет интерес к хранению CO ₂ в соленых водоносных горизонтах из-за их огромной потенциальной емкости, и несколько проектов находятся в стадии разработки для демонстрации его жизнеспособности.Существует множество препятствий для развертывания CCS, в том числе отсутствие четкого экономического обоснования инвестиций в CCS и отсутствие надежных экономических стимулов для поддержки дополнительных высоких капитальных и эксплуатационных затрат на весь процесс CCS.

Ключевые слова

Пост-сгорание

Pre-сгорание

договариваний

CO ₂

CO ₂ Разделение

Транспорт

Геологическое хранение

Утечка и мониторинг

Рекомендуемые статьи Статьи (0)

Copyright © 2014 Авторы.