Содержание

Оформляем правильно трудовую книжку — Профсоюз работников здравоохранения РФ

​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​​

27.01.2016

Вопрос:

Куда следует обратиться, если после увольнения работодатель не выдает трудовую книжку и не выплачивает заработную плату за отработанное время?

Ответ:

В соответствии со ст. 80 Трудового кодекса Российской Федерации в последний день работы работодатель обязан выдать работнику трудовую книжку, другие документы, связанные с работой, по письменному заявлению работника и произвести с ним окончательный расчет.

В случае нарушения работодателем трудового законодательства следует обращаться в Государственную инспекцию труда или органы прокуратуры.

В частности, в случае непроизведения окончательного расчета с работником денежные средства могут быть взысканы в судебном порядке – как самостоятельно бывшим работником, так и по иску прокурора с учетом полномочий, предоставленных ему ч.

1 ст. 45 Гражданского процессуального кодекса Российской Федерации.


 

Вопрос:

В моей трудовой книжке закончилось место для записей. Работники отдела кадров заявили мне, что я должен заплатить за вкладыш в трудовую книжку. Прошу разъяснить, должен ли я платить за вкладыш, или организация обязана предоставить его бесплатно?

Ответ:

Трудовые книжки и вкладыши в них приобретаются работодателем за плату, поэтому он может потребовать от работника возместить понесенные им расходы. В соответствии с п. 34, 47, 48 Правил ведения и хранения трудовых книжек, изготовления бланков трудовой книжки и обеспечения ими работодателей, утвержденных Постановлением Правительства РФ от 16.04.2003 N 225, плата не взимается в следующих случаях:

1) при массовой утрате работодателем трудовых книжек работников в результате чрезвычайных ситуаций;

2) при неправильном первичном заполнении трудовой книжки и вкладыша;

3) в случае порчи трудовой книжки и вкладыша не по вине работника.

Таким образом, вы должны оплатить стоимость вкладыша в трудовую книжку.


 

Вопрос:

Я работаю длительное время на одном рабочем месте по трудовой книжке. В связи с тяжелым материальным положением хочу устроиться на работу по совместительству. Могу ли я в этом случае иметь несколько трудовых книжек?

Ответ:

В соответствии с ч. 1 ст. 66 ТК РФ трудовая книжка установленного образца является основным документом о трудовой деятельности и трудовом стаже работника. Это положение нашло закрепление в п. 2 Правил ведения и хранения трудовых книжек и обеспечения ими работодателей, утвержденных Постановлением Правительства РФ от 16.04.2003 N 225 “О трудовых книжках”.

Из анализа ст. 66 ТК РФ следует, что работник вправе иметь только одну трудовую книжку, которая ведется по месту его основной работы. Однако это не означает, что работник не может работать по совместительству у другого работодателя. Согласно ч. 1 ст.

282 ТК РФ совместительство – выполнение работником другой регулярной оплачиваемой работы на условиях трудового договора в свободное от основной работы время. Заключение трудового договора по совместительству допускается с неограниченным числом работодателей, если иное не предусмотрено федеральным законом (ч. 2 ст. 282 ТК РФ). В соответствии с ч. 5 ст. 66 ТК РФ по желанию работника сведения о работе по совместительству вносятся в трудовую книжку по месту основной работы на основании документа, подтверждающего работу по совместительству. Для этого работник должен обратиться с соответствующей просьбой и представить документы, подтверждающие факт работы по совместительству и содержащие сведения о месте работы с указанием структурного подразделения, трудовой функции, дате начала работы, реквизитах приказа (распоряжения), согласно которому оформлен прием на работу. 


 

Вопрос:

В организацию устраивается работник на условиях внешнего совместительства. Обязан ли он представить трудовую книжку? Как внести в нее запись о работе по совместительству?

Ответ:

Перечень документов, которые необходимо предъявить при приеме на работу по совместительству, определен ст. 283 Трудового кодекса. Трудовая книжка в нем не значится. Более того, запись о работе по совместительству в трудовой в принципе может не производиться. Она делается только по желанию самого работника. Но даже если таковое у него имеется, внесение записи не является “головной болью” работодателя по месту работы по совместительству. Согласно ст. 66 Трудового кодекса сведения о работе по совместительству вносятся в трудовую книжку работника по месту его основной работы. К работодателю, у которого работник трудится по совместительству, он разве что может обратиться с просьбой выдать документ, подтверждающий данный факт. Это может быть копия приказа о приеме на работу либо просто справка, в которой должны быть указаны реквизиты данного приказа. 


 

Вопрос:

Работник был уволен, однако восстановлен на работе по решению суда. Как правильно в этом случае внести записи в трудовую книжку?

Ответ:

В ст. 106 Закона от 2 октября 2007 г. N 229-ФЗ “Об исполнительном производстве” говорится, что содержащееся в исполнительном документе требование о восстановлении на работе незаконно уволенного работника считается фактически исполненным если:

– работник допущен к исполнению прежних трудовых обязанностей;

– отменен приказ (распоряжение) об увольнении сотрудника.

Таким образом, при восстановлении сотрудника на работе речь не идет о заключении с ним нового трудового договора. Напротив, после отмены приказа об увольнении продолжает действовать ранее заключенный трудовой договор. В свою очередь, если приказ, на основании которого сделана запись в трудовой книжке, отменен, то и сама запись больше не является действительной. Следовательно, после отмены приказа об увольнении следует также признать недействительной и внесенную в трудовую книжку запись о прекращении трудового договора (п. 30 Правил, утв. Постановлением Правительства РФ от 16 апреля 2003 г. N 225).

Для этого необходимо в разделе “Сведения о работе” после соответствующей последней записи в нем указать последующий порядковый номер и дату внесения записи, а в графе 3 записать: “Запись за номером таким-то недействительна” (п. 1.2 Инструкции, утв. Постановлением Минтруда России от 10 октября 2003 г. N 69). В графе 4 при этом дается ссылка на приказ (распоряжение) или иное решение работодателя о восстановлении на работе.

Работник имеет право потребовать выдачи дубликата трудовой книжки без внесения в него записи, признанной недействительной (п. 33 Правил). На титульной странице прежней трудовой книжки при этом записывается: “Взамен выдан дубликат” – с указанием его серии и номера. В свою очередь в правом верхнем углу первой страницы дубликата делается надпись: “Дубликат” (п. 1.2 Инструкции).


 

Вопрос:

Сотрудник принят на работу на время основного ежегодного оплачиваемого отпуска одного из работников. Нужно ли делать запись в его трудовой книжке, что он принят на должность находящегося в отпуске сотрудника?

С несколькими работниками организации заключены срочные трудовые договоры. Если по истечении срока действия таких договоров у того или иного работника появляются новые обязанности, с ним опять заключается срочный трудовой договор. Не являются ли подобные действия организации нарушением законодательства?

Ответ:

Трудовая книжка – это основной документ о трудовой деятельности и трудовом стаже работника (ст. 66 ТК). Правила ведения и хранения трудовых книжек, изготовления бланков трудовой книжки и обеспечения ими работодателей утверждены Постановлением Правительства РФ от 16 апреля 2003 г. N 225. Согласно п. 4 Правил в трудовую книжку вносятся сведения о работнике, выполняемой им работе, переводе на другую постоянную работу и об увольнении работника, а также основания прекращения трудового договора и сведения о награждении за успехи в работе.

Таким образом, сам факт принятия сотрудника на работу по трудовому договору непременно должен быть отражен в его трудовой книжке. При этом, как разъяснили представители Федеральной службы по труду и занятости в Письме от 6 апреля 2010 г. N 937-6-1*, запись о сроке трудового договора в трудовой книжке не производится. Между тем в данном случае то обстоятельство, что работник принят на должность сотрудника, находящегося в отпуске, определяет срочность соответствующего трудового договора: срок его действия истекает с выходом основного работника из отпуска.

Так, трудовой договор может быть заключен либо на неопределенный срок, либо на определенный срок, не превышающий пяти лет (ст. 58 ТК). Срочный трудовой договор, то есть на определенный срок, может быть заключен, когда трудовые отношения не могут быть установлены на неопределенный срок с учетом характера предстоящей работы или условий ее выполнения. В Письме от 18 декабря 2008 г. N 6963-ТЗ** представители Роструда указали, что перечень оснований для заключения с работником срочного трудового договора предусмотрен ст. 59 Трудового кодекса и он носит закрытый характер. Но из ее положений следует, что в том числе срочный трудовой договор может быть заключен на время исполнения обязанностей отсутствующего работника, за которым в соответствии с трудовым законодательством, локальными нормативными актами, трудовым договором сохраняется место работы, как это имеет место в случае отпуска (ст. 114 ТК).

*Федеральная служба по труду и занятости

ПИСЬМО от 6 апреля 2010 г. №937-6-1.

В Правовом управлении Федеральной службы по труд и занятости рассмотрено письмо. Сообщаем следующее. В случае приема на время исполнения обязанностей отсутствующего работника, за которым в соответствии с трудовым законодательством и иными нормативными правовыми актами, содержащими нормы трудового права, коллективным договором, соглашениями, локальными нормативными актами, трудовым договором, сохраняется место работы, с работников заключается срочный трудовой договор.

Срок трудового договора определяется при его заключении и указывается в трудовом договоре.

В трудовой книжке запись о сроке трудового договора не производится.

Начальник Управления правового обеспечения
Федеральной службы по труду и занятости
А.В.Анохин

** Федеральная служба по труду и занятости

ПИСЬМО от 18 декабря 2008 г. N 6963-ТЗ

<…> О порядке заключения срочных трудовых договоров. Сообщаем следующее.

Случаи, когда с работником должен быть заключен срочный трудовой договор, а также случаи, когда договор может быть заключен на определенный срок по соглашению сторон, предусмотрены в ст. 59 Трудового кодекса РФ.

Трудовые обязанности работника составляют содержание его трудовой функции, а также трудового договора в целом.

Случаи, предусмотренные в ст. 59 Трудового кодекса РФ, связаны либо с категорией работника, либо с характером выполняемой работы.

Изменение обязанностей работника может означать либо изменение его трудовой функции (в этом случае можно говорить о другой должности или о другой работе), либо изменение объема работы без изменения трудовой функции.

В первом случае по окончании трудового договора следует определить, изменяется ли должность или вид работы, и принять решение в соответствии со ст. 59 Трудового кодекса РФ.

Во втором случае заключение с работником нового срочного трудового договора возможно, если с учетом ст. 59 Трудового кодекса РФ был правильно выбран именно срочный трудовой договор.

Начальник Управления правового обеспечения
Федеральной службы по труду и занятости
И.И.ШКЛОВЕЦ


 

Вопрос:

Что делать если работодатель утерял трудовую книжку, но вкладыш от нее сохранился? Что в данном случае делать работодателю и работнику.

Ответ:

Работодатель обязан по письменному заявлению работника оформить ему новую трудовую книжку.

Обоснование: Согласно ст. 65 ТК РФ в случае отсутствия у лица, поступающего на работу, трудовой книжки в связи с ее утратой, повреждением или по иной причине работодатель обязан по письменному заявлению этого лица (с указанием причины отсутствия трудовой книжки) оформить новую трудовую книжку.


 

Вопрос:

Что делать если титульный лист трудовой книжки не соответствует паспортным данным работникам? При приеме на работу нового работника при сверке документов было установлено, что отчество, указанное в трудовой книжке (ГеннадЬевич), не соответствует паспорту работника, где прописано отчество (ГеннадИевич). Трудовая книжка выдана уже более 10 лет назад.

Ответ:

Согласно п. 26 Правил ведения и хранения трудовых книжек, изготовления бланков трудовой книжки и обеспечения ими работодателей (утв. Постановлением Правительства РФ от 16.04.2003 N 225) изменение записей о фамилии, имени, отчестве и дате рождения производится работодателем по последнему месту работы на основании паспорта, свидетельства о рождении, о браке, о расторжении брака, об изменении фамилии, имени, отчества и других документов. 


 

Вопрос:

Что делать если в трудовую книжку вписана неправильная должность? В трудовой книжке, а также других документах (касающиеся заработной платы) была вписана не та должность, которую занимал сотрудник. Возникла необходимость внести изменения в трудовую книжку, однако работодателя уже не существует.

Ответ:

В соответствии с п. 27 Постановления Правительства РФ от 16 апреля 2003 г. №225 «О трудовых книжках» в случае выявления неправильной или неточной записи в трудовой книжке исправление ее может производиться работодателем по новому месту работы на основании официального документа работодателя, допустившего ошибку. Работодатель обязан в этом случае оказать работнику при его обращении необходимую помощь.

Если организация, которая произвела неправильную или неточную запись, реорганизована, исправление производится ее правопреемником, а в случае ликвидации организации – работодателем по новому месту работы на основании соответствующего документа (п.28 Постановления Правительства № 225).

Реализуя Постановление Правительства РФ от 8 июля 1997 г. № 835 «О первичных учетных документах» Госкомстат РФ Постановлением от 5 января 2004 г. № 1 «Об утверждении унифицированных форм первичной учетной документации по учету труда и его оплаты»  утвердил  унифицированные формы  первичной документации в том числе по учету кадров (№ Т-1 “Приказ (распоряжение) о приеме работника на работу”, № Т-1а “Приказ (распоряжение) о приеме работников на работу”, № Т-2 “Личная карточка работника” и другие).

Срок хранения документов установлен Перечнем типовых управленческих архивных документов, образующихся в процессе деятельности государственных органов, органов местного самоуправления и организаций, с указанием сроков хранения, утвержденным Приказом Минкультуры РФ от 25.08.2010 г. № 558.

Согласно указанному Перечню приказы, распоряжения и документы к ним по личному составу, по оплате труда, премированию, различным выплатам хранятся 75 лет.


 

Вопрос:

Что делать если работодатель не возвращает трудовую книжку? Работник был уволен, однако трудовая книжка ему возвращена не была. Работодатель это обосновывает болезнью главного бухгалтера.

Ответ:

Работодатель обязан был выдать трудовую книжку и произвести с расчет в день увольнения.

Обоснование: При прекращении трудового договора выплата всех сумм, причитающихся работнику от работодателя, производится в день увольнения работника. Если работник в день увольнения не работал, то соответствующие суммы должны быть выплачены не позднее следующего дня после предъявления уволенным работником требования о расчете.


 

Вопрос:

Что делать если работник скрыл от работодателя, что он совместитель? При оформлении трудовых отношений работник не предоставил трудовую книжку, объяснив это тем, что она утрачена. Работодатель в соответствии с требованием трудового законодательства оформил новую трудовую книжку, работник принят в организацию в качестве основного работника. Однако впоследствии выяснилось, что работник уже имеет основное место работы у другого работодателя, когда работник принес свою трудовую книжку с записью об увольнении с другого места работы.

Ответ:

В соответствии с трудовым законодательством работник может работать только по одной основной работе. В остальных местах может иметь работу по совместительству. Следовательно, при наличии у работника основной работы, где ведется его трудовая книжка, работа у любого другого работодателя является работой по совместительству.

Считаем, что независимо от того как был принят работник, между организацией и работником сложились трудовые отношения по совместительству. Данный факт должен быть отражен в трудовом договоре (приложении к трудовому договору) с указанием, когда для работника трудовой договор стал основным.

Внесенная Вами в новую трудовую книжку запись является недействительной, так как работодатель совместителя не вправе вносить в трудовую книжку записи о работе. Кроме того, данная запись не отражает факт совместительства.

Если изменения в трудовой договор вносится, не будут, и работник будет продолжать работу в качестве совместителя, трудовую книжку следует вернуть работнику и запись в нее не вносить.


 

Вопрос:

Что делать если в трудовой книжке нарушена нумерация?

Ответ:

Исправление неверно указанного номера записи в трудовой книжке возможно путем признания всей записи под соответствующим номером недействительной и внесения правильной записи.

Согласно п. 30 Правил ведения и хранения трудовых книжек, изготовления бланков трудовой книжки и обеспечения ими работодателей, утвержденными постановлением Правительства РФ от 16. 04.2003 N 225 “О трудовых книжках” изменение записей производится путем признания их недействительными и внесения правильных записей.


 

Вопрос:

Что делать если работодатель не выдает трудовую книжку необходимую работнику для оформления пенсии? Для оформления пенсии необходимо представление трудовой книжки в пенсионный фонд, однако работодатель выдавать ее отказывается.

Ответ:

Действия работодателя правомерны, поскольку трудовое законодательство предусматривает только один случай ее выдачи – при увольнении. Чтобы решить данный вопрос работник вправе сослаться на ст. 62 Трудового кодекса РФ и потребовать от работодателя выдать ему заверенную копию трудовой книжки.

Обоснование: Раздел 4 Правил ведения и хранения трудовых книжек, изготовления бланков трудовой книжки и обеспечения ими работодателей, утвержденных постановлением Правительства РФ от 16 апреля 2003 г. № 225 «О трудовых книжках» регламентирует выдачу трудовой книжки только при увольнении работника.

Согласно ст.62 ТК РФ по письменному заявлению работника работодатель обязан не позднее трех рабочих дней со дня подачи этого заявления выдать работнику копии документов, связанных с работой, в том числе выписку из трудовой книжки.

Новости

30.05.2021

Обязательные книги учета работодателя

Согласно трудовому законодательству трудовая книжка установленного образца является основным документом о трудовой деятельности и трудовом стаже работника.

К работодателю применяются требования не только по ведению трудовых книжек и правильному внесению сведений в них, а также по их хранению и учету.

Так, Постановлением Правительства РФ от 16.04.2003 № 225 «О трудовых книжках» утверждены Правила ведения и хранения трудовых книжек, изготовления бланков трудовой книжки и обеспечения ими работодателей (далее – Правила).

Пунктом 40 указанных Правил на работодателя возлагаются обязанности по ведению двух книг учета, а именно: приходно-расходной книги по учету бланков трудовой книжки и вкладыша в нее, и книга учета движения трудовых книжек и вкладышей в них.

Рассматривая необходимость ведения книги учета движения трудовых книжек и вкладышей в них – работодатели, как правило, с трудностями не сталкиваются. Действительно, редко встречаются случаи, когда работодатель (с трудоустроенными работниками) такую книгу не ведет, ведь она является основным учетным документом о сдаче-получении трудовых книжек.

Вместе с тем, в подавляющем большинстве, работодатели не знают о требовании законодательства к ним по ведению приходно-расходной книги по учету бланков трудовой книжки и вкладыша в нее. Рассматривая эту норму в совокупности с п. 44 Правил, согласно которой работодатель обязан постоянно иметь в наличии необходимое количество бланков трудовой книжки и вкладышей в нее, получаем ситуацию, что трудоустраиваемому лицу не обязательно предоставлять своему будущему работодателю бланк трудовой книжки – он уже должен иметься у работодателя.

Следует отметить, что работодатель фактически должен осуществлять только учет и хранение бланков трудовой книжки и вкладышей в нее, а также, при необходимости, их предоставление трудоустраиваемому лицу, в то время как расходы на их приобретение он может компенсировать себе в порядке п. 47 Правил, в соответствии с которым при выдаче работнику трудовой книжки или вкладыша в нее работодатель взимает с него плату, размер которой определяется размером расходов на их приобретение, за исключением случаев, предусмотренных пунктами 34 и 48 настоящих Правил (массовая утрата, утрата в связи с ЧС, неправильное заполнение работодателем и т.д.).


Нормативные акты в делопроизводстве и архивном деле

О трудовых книжках

(в ред. Постановлений Правительства РФ от 06.02.2004 №51, от 01.03.2008 №132, от 19.05.2008 №373)

В соответствии со статьей 66 Трудового кодекса Российской Федерации Правительство Российской Федерации постановляет:

1. Утвердить прилагаемые:

форму трудовой книжки и форму вкладыша в трудовую книжку;

Правила ведения и хранения трудовых книжек, изготовления бланков трудовой книжки и обеспечения ими работодателей.

2. Установить, что трудовые книжки нового образца вводятся в действие с 1 января 2004 г.

Имеющиеся у работников трудовые книжки ранее установленного образца действительны и обмену на новые не подлежат.

3. Министерству финансов Российской Федерации:

а) утвердить образцы трудовой книжки и вкладыша в нее, а также технические требования к изготовлению их бланков;

б) обеспечить на подведомственных предприятиях изготовление по единому образцу бланков трудовой книжки и вкладыша в нее;

в) утвердить порядок обеспечения работодателей бланками трудовой книжки и вкладыша в нее.

4. Министерству здравоохранения и социального развития Российской Федерации:

а) утвердить инструкцию по заполнению трудовых книжек;

б) давать разъяснения по вопросам применения Правил, утвержденных настоящим Постановлением. (п. 4 в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

5. Органам исполнительной власти субъектов Российской Федерации провести необходимую работу по введению в организациях, находящихся на их территории, трудовых книжек и вкладышей в них нового образца.

Председатель Правительства

Российской Федерации
М.КАСЬЯНОВ
Утверждена

Постановлением Правительства
Российской Федерации
от 16 апреля 2003 г. №225

Форма трудовой книжки

Утверждена

Постановлением Правительства
Российской Федерации
от 16 апреля 2003 г. №225

Форма вкладыша в трудовую книжку

Утверждены

Постановлением Правительства
Российской Федерации
от 16 апреля 2003 г. №225

Правила Ведения и хранения трудовых книжек, изготовления бланков трудовой книжки и обеспечения ими работодателей

(в ред. Постановлений Правительства РФ от 06.02.2004 №51, от 01.03.2008 №132, от 19.05.2008 №373)

I. Общие положения

1. Настоящие Правила устанавливают порядок ведения и хранения трудовых книжек, а также порядок изготовления бланков трудовой книжки и обеспечения ими работодателей.

2. Трудовая книжка является основным документом о трудовой деятельности и трудовом стаже работника.

3. Работодатель (за исключением работодателей – физических лиц, не являющихся индивидуальными предпринимателями) ведет трудовые книжки на каждого работника, проработавшего у него свыше пяти дней, если работа у данного работодателя является для работника основной.

Работодатель – физическое лицо, являющийся индивидуальным предпринимателем, обязан вести трудовые книжки на каждого работника в порядке, установленном Трудовым кодексом Российской Федерации и иными нормативными правовыми актами Российской Федерации.

Работодатель – физическое лицо, не являющийся индивидуальным предпринимателем, не имеет права производить записи в трудовых книжках работников и оформлять трудовые книжки работникам, принимаемым на работу впервые. (п. 3 в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132)  (см. текст в предыдущей редакции)

4. В трудовую книжку вносятся сведения о работнике, выполняемой им работе, переводе на другую постоянную работу и об увольнении работника, а также основания прекращения трудового договора и сведения о награждении за успехи в работе.

5. Сведения о взысканиях в трудовую книжку не вносятся, за исключением случаев, когда дисциплинарным взысканием является увольнение.

6. Трудовые книжки ведутся на государственном языке Российской Федерации, а на территории республики в составе Российской Федерации, установившей свой государственный язык, оформление трудовых книжек может наряду с государственным языком Российской Федерации вестись и на государственном языке этой республики.

7. Работодатель обязан по письменному заявлению работника не позднее трех рабочих дней со дня его подачи выдать работнику копию трудовой книжки или заверенную в установленном порядке выписку из трудовой книжки.  (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

II. Ведение трудовых книжек

8. Оформление трудовой книжки работнику, принятому на работу впервые, осуществляется работодателем в присутствии работника не позднее недельного срока со дня приема на работу.

9. В трудовую книжку при ее оформлении вносятся следующие сведения о работнике:

а) фамилия, имя, отчество, дата рождения (число, месяц, год) – на основании паспорта или иного документа, удостоверяющего личность;

б) образование, профессия, специальность – на основании документов об образовании, о квалификации или наличии специальных знаний (при поступлении на работу, требующую специальных знаний или специальной подготовки).

10. Все записи о выполняемой работе, переводе на другую постоянную работу, квалификации, увольнении, а также о награждении, произведенном работодателем, вносятся в трудовую книжку на основании соответствующего приказа (распоряжения) работодателя не позднее недельного срока, а при увольнении – в день увольнения и должны точно соответствовать тексту приказа (распоряжения).

11. Все записи в трудовой книжке производятся без каких-либо сокращений и имеют в пределах соответствующего раздела свой порядковый номер.

12. С каждой вносимой в трудовую книжку записью о выполняемой работе, переводе на другую постоянную работу и увольнении работодатель обязан ознакомить ее владельца под роспись в его личной карточке, в которой повторяется запись, внесенная в трудовую книжку. (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

Форма личной карточки утверждается Федеральной службой государственной статистики. (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

13. Трудовая книжка заполняется в порядке, утверждаемом Министерством здравоохранения и социального развития Российской Федерации. (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

14. Записи в трудовую книжку о причинах прекращения трудового договора вносятся в точном соответствии с формулировками Трудового кодекса Российской Федерации или иного федерального закона.

15. При прекращении трудового договора по основаниям, предусмотренным статьей 77 Трудового кодекса Российской Федерации (за исключением случаев расторжения трудового договора по инициативе работодателя и по обстоятельствам, не зависящим от воли сторон (пункты 4 и 10 этой статьи)), в трудовую книжку вносится запись об увольнении (прекращении трудового договора) со ссылкой на соответствующий пункт части первой указанной статьи. (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

16. При расторжении трудового договора по инициативе работодателя в трудовую книжку вносится запись об увольнении (прекращении трудового договора) со ссылкой на соответствующий пункт статьи 81 Трудового кодекса Российской Федерации.

17. При прекращении трудового договора по обстоятельствам, не зависящим от воли сторон, в трудовую книжку вносится запись об основаниях прекращения трудового договора со ссылкой на соответствующий пункт статьи 83 Трудового кодекса Российской Федерации.

18. При прекращении трудового договора по другим основаниям, предусмотренным Трудовым кодексом Российской Федерации или иными федеральными законами, в трудовую книжку вносится запись об увольнении (прекращении трудового договора) со ссылкой на соответствующие статью, пункт Трудового кодекса Российской Федерации или иного федерального закона.

19. При прекращении трудового договора с работником, осужденным в соответствии с приговором суда к лишению права занимать определенные должности или заниматься определенной деятельностью и не отбывшим наказание, в трудовую книжку вносится запись о том, на каком основании, на какой срок и какую должность он лишен права занимать (какой деятельностью лишен права заниматься).

20. Сведения о работе по совместительству (об увольнении с этой работы) по желанию работника вносятся по месту основной работы в трудовую книжку на основании документа, подтверждающего работу по совместительству.

21. В трудовую книжку по месту работы также вносится с указанием соответствующих документов запись:

а) о времени военной службы в соответствии с Федеральным законом «О воинской обязанности и военной службе», а также о времени службы в органах внутренних дел, Государственной противопожарной службе Министерства Российской Федерации по делам гражданской обороны, чрезвычайным ситуациям и ликвидации последствий стихийных бедствий, учреждениях и органах уголовно-исполнительной системы, органах налоговой полиции, органах по контролю за оборотом наркотических средств и психотропных веществ и таможенных органах; (пп. «а» в ред. Постановления Правительства РФ от 19.05.2008 №373) (см. текст в предыдущей редакции)

б) о времени обучения на курсах и в школах по повышению квалификации, по переквалификации и подготовке кадров.

22. Соответствующие записи, внесенные в трудовую книжку лиц, освобожденных от работы (должности) в связи с незаконным осуждением либо отстраненных от должности в связи с незаконным привлечением к уголовной ответственности, установленными соответственно оправдательным приговором либо постановлением (определением) о прекращении уголовного дела за отсутствием события преступления, за отсутствием в деянии состава преступления или за недоказанностью их участия в совершении преступления, признаются недействительными. Работодатель по письменному заявлению работника выдает ему дубликат трудовой книжки без записи, признанной недействительной. Дубликат трудовой книжки выдается указанным лицам в порядке, установленном настоящими Правилами.

В трудовые книжки лиц, отбывших исправительные работы без лишения свободы, вносится по месту работы запись о том, что время работы в этот период не засчитывается в непрерывный трудовой стаж. Указанная запись вносится в трудовые книжки по окончании фактического срока отбытия наказания, который устанавливается по справкам органов внутренних дел.

При увольнении осужденного с работы в установленном порядке и поступлении его на новое место работы соответствующие записи вносятся в трудовую книжку в той организации, в которую он был принят или направлен.

23. При восстановлении в установленном порядке непрерывного трудового стажа в трудовую книжку работника вносится по последнему месту работы запись о восстановлении непрерывного трудового стажа с указанием соответствующего документа.

24. В трудовую книжку вносятся следующие сведения о награждении (поощрении) за трудовые заслуги:

а) о награждении государственными наградами, в том числе о присвоении государственных почетных званий, на основании соответствующих указов и иных решений;

б) о награждении почетными грамотами, присвоении званий и награждении нагрудными знаками, значками, дипломами, почетными грамотами, производимом работодателями; (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

в) о других видах поощрения, предусмотренных законодательством Российской Федерации, а также коллективными договорами, правилами внутреннего трудового распорядка, уставами и положениями о дисциплине. (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

25. Записи о премиях, предусмотренных системой оплаты труда или выплачиваемых на регулярной основе, в трудовые книжки не вносятся.

III. Внесение изменений и исправлений в трудовую книжку. Дубликат трудовой книжки

26. Изменение записей о фамилии, имени, отчестве и дате рождения, а также об образовании, профессии и специальности работника производится работодателем по последнему месту работы на основании паспорта, свидетельства о рождении, о браке, о расторжении брака, об изменении фамилии, имени, отчества и других документов.

27. В случае выявления неправильной или неточной записи в трудовой книжке исправление ее производится по месту работы, где была внесена соответствующая запись, либо работодателем по новому месту работы на основании официального документа работодателя, допустившего ошибку. Работодатель обязан в этом случае оказать работнику при его обращении необходимую помощь.

28. Если организация, которая произвела неправильную или неточную запись, реорганизована, исправление производится ее правопреемником, а в случае ликвидации организации – работодателем по новому месту работы на основании соответствующего документа.

Если неправильная или неточная запись в трудовой книжке произведена работодателем – физическим лицом, являющимся индивидуальным предпринимателем, и деятельность его прекращена в установленном порядке, исправление производится работодателем по новому месту работы на основании соответствующего документа. (абзац введен Постановлением Правительства РФ от 01.03.2008 №132)

29. Исправленные сведения должны полностью соответствовать документу, на основании которого они были исправлены. В случае утраты такого документа либо несоответствия его фактически выполнявшейся работе исправление сведений о работе производится на основании других документов, подтверждающих выполнение работ, не указанных в трудовой книжке.

Свидетельские показания не могут служить основанием для исправления внесенных ранее записей, за исключением записей, в отношении которых имеется судебное решение, а также случаев, предусмотренных пунктом 34 настоящих Правил.

30. В разделах трудовой книжки, содержащих сведения о работе или сведения о награждении, зачеркивание неточных или неправильных записей не допускается.

Изменение записей производится путем признания их недействительными и внесения правильных записей.

В таком же порядке производится изменение записи об увольнении работника (переводе на другую постоянную работу) в случае признания увольнения (перевода) незаконным.

31. Лицо, утратившее трудовую книжку, обязано немедленно заявить об этом работодателю по последнему месту работы. Работодатель выдает работнику дубликат трудовой книжки не позднее 15 дней со дня подачи работником заявления.

32. При оформлении дубликата трудовой книжки, осуществляемом в соответствии с настоящими Правилами, в него вносятся:

а) сведения об общем и (или) непрерывном стаже работы работника до поступления к данному работодателю, подтвержденном соответствующими документами; (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

б) сведения о работе и награждении (поощрении), которые вносились в трудовую книжку по последнему месту работы.

Общий стаж работы записывается суммарно, то есть указывается общее количество лет, месяцев, дней работы без уточнения работодателя, периодов работы и должностей работника. (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

Если документы, на основании которых вносились записи в трудовую книжку, не содержат полных сведений о работе в прошлом, в дубликат трудовой книжки вносятся только имеющиеся в этих документах сведения.

33. При наличии в трудовой книжке записи об увольнении или переводе на другую работу, признанной недействительной, работнику по его письменному заявлению выдается по последнему месту работы дубликат трудовой книжки, в который переносятся все произведенные в трудовой книжке записи, за исключением записи, признанной недействительной.

Трудовая книжка оформляется в установленном порядке и возвращается ее владельцу.

В таком же порядке выдается дубликат трудовой книжки, если трудовая книжка (вкладыш) пришла в негодность (обгорела, порвана, испачкана и т.п.).

34. При массовой утрате работодателем трудовых книжек работников в результате чрезвычайных ситуаций (экологические и техногенные катастрофы, стихийные бедствия, массовые беспорядки и другие чрезвычайные обстоятельства) трудовой стаж этих работников устанавливается комиссией по установлению стажа, создаваемой органами исполнительной власти субъектов Российской Федерации. В состав такой комиссии включаются представители работодателей, профсоюзов или иных уполномоченных работниками представительных органов, а также других заинтересованных организаций.

Установление факта работы, сведений о профессии (должности) и периодах работы у данного работодателя осуществляется комиссией на основании документов, имеющихся у работника (справка, профсоюзный билет, учетная карточка члена профсоюза, расчетная книжка и т. п.), а в случае их отсутствия – на основании показаний двух и более свидетелей, знающих работника по совместной с ним деятельности у одного работодателя или в одной системе. (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

Если работник до поступления к данному работодателю уже работал, комиссия принимает меры к получению документов, подтверждающих этот факт. (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

По результатам работы комиссии составляется акт, в котором указываются периоды работы, профессия (должность) и продолжительность трудового стажа работника.

Работодатель на основании акта комиссии выдает работнику дубликат трудовой книжки.

В случае если документы не сохранились, стаж работы, в том числе установленный на основании свидетельских показаний, может быть подтвержден в судебном порядке.

IV. Выдача трудовой книжки при увольнении (прекращении трудового договора)

35. При увольнении работника (прекращении трудового договора) все записи, внесенные в его трудовую книжку за время работы у данного работодателя, заверяются подписью работодателя или лица, ответственного за ведение трудовых книжек, печатью работодателя и подписью самого работника (за исключением случаев, указанных в пункте 36 настоящих Правил). (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

Если трудовая книжка заполнялась на государственном языке Российской Федерации и на государственном языке республики в составе Российской Федерации, заверяются оба текста.

Работодатель обязан выдать работнику в день увольнения (последний день работы) его трудовую книжку с внесенной в нее записью об увольнении.

При задержке выдачи работнику трудовой книжки по вине работодателя, внесении в трудовую книжку неправильной или не соответствующей федеральному закону формулировки причины увольнения работника работодатель обязан возместить работнику не полученный им за все время задержки заработок. Днем увольнения (прекращения трудового договора) в этом случае считается день выдачи трудовой книжки. О новом дне увольнения работника (прекращении трудового договора) издается приказ (распоряжение) работодателя, а также вносится запись в трудовую книжку. Ранее внесенная запись о дне увольнения признается недействительной в порядке, установленном настоящими Правилами.

36. В случае если в день увольнения работника (прекращения трудового договора) выдать трудовую книжку невозможно в связи с отсутствием работника либо его отказом от получения трудовой книжки на руки, работодатель направляет работнику уведомление о необходимости явиться за трудовой книжкой либо дать согласие на отправление ее по почте. Пересылка трудовой книжки почтой по указанному работником адресу допускается только с его согласия.

Со дня направления указанного уведомления работодатель освобождается от ответственности за задержку выдачи работнику трудовой книжки.

37. В случае смерти работника трудовая книжка после внесения в нее соответствующей записи о прекращении трудового договора выдается на руки одному из его родственников под расписку или высылается по почте по письменному заявлению одного из родственников.

V. Вкладыш в трудовую книжку

38. В случае если в трудовой книжке заполнены все страницы одного из разделов, в трудовую книжку вшивается вкладыш, который оформляется и ведется работодателем в том же порядке, что и трудовая книжка.

Вкладыш без трудовой книжки недействителен.

39. При выдаче каждого вкладыша в трудовой книжке ставится штамп с надписью «Выдан вкладыш» и указывается серия и номер вкладыша.

VI. Учет и хранение трудовых книжек

40. С целью учета трудовых книжек, а также бланков трудовой книжки и вкладыша в нее, у работодателей ведутся: (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

а) приходно-расходная книга по учету бланков трудовой книжки и вкладыша в нее;

б) книга учета движения трудовых книжек и вкладышей в них.

Формы указанных книг утверждаются Министерством здравоохранения и социального развития Российской Федерации. (в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

41. В приходно-расходную книгу по учету бланков трудовой книжки и вкладыша в нее, которая ведется бухгалтерией организации, вносятся сведения обо всех операциях, связанных с получением и расходованием бланков трудовой книжки и вкладыша в нее, с указанием серии и номера каждого бланка.

В книге учета движения трудовых книжек и вкладышей в них, которая ведется кадровой службой или другим подразделением организации, оформляющим прием и увольнение работников, регистрируются все трудовые книжки, принятые от работников при поступлении на работу, а также трудовые книжки и вкладыши в них с указанием серии и номера, выданные работникам вновь.

При получении трудовой книжки в связи с увольнением работник расписывается в личной карточке и в книге учета движения трудовых книжек и вкладышей в них.

Приходно-расходная книга по учету бланков трудовой книжки и вкладыша в нее и книга учета движения трудовых книжек и вкладышей в них должны быть пронумерованы, прошнурованы, заверены подписью руководителя организации, а также скреплены сургучной печатью или опломбированы.

42. Бланки трудовой книжки и вкладыша в нее хранятся в организации как документы строгой отчетности и выдаются лицу, ответственному за ведение трудовых книжек, по его заявке.

По окончании каждого месяца лицо, ответственное за ведение трудовых книжек, обязано представить в бухгалтерию организации отчет о наличии бланков трудовой книжки и вкладыша в нее и о суммах, полученных за оформленные трудовые книжки и вкладыши в них, с приложением приходного ордера кассы организации. Испорченные при заполнении бланки трудовой книжки и вкладыша в нее подлежат уничтожению с составлением соответствующего акта.

43. Трудовые книжки и дубликаты трудовых книжек, не полученные работниками при увольнении либо в случае смерти работника его ближайшими родственниками, хранятся до востребования у работодателя (в организации или у физического лица, являющегося индивидуальным предпринимателем) в соответствии с требованиями к их хранению, установленными законодательством Российской Федерации об архивном деле. (п. 43 в ред. Постановления Правительства РФ от 01.03.2008 №132) (см. текст в предыдущей редакции)

44. Работодатель обязан постоянно иметь в наличии необходимое количество бланков трудовой книжки и вкладышей в нее.

VII. Ответственность за соблюдение порядка ведения трудовых книжек

45. Ответственность за организацию работы по ведению, хранению, учету и выдаче трудовых книжек и вкладышей в них возлагается на работодателя.

Ответственность за ведение, хранение, учет и выдачу трудовых книжек несет специально уполномоченное лицо, назначаемое приказом (распоряжением) работодателя.

За нарушение установленного настоящими Правилами порядка ведения, учета, хранения и выдачи трудовых книжек должностные лица несут ответственность, установленную законодательством Российской Федерации.

VIII. Изготовление бланков трудовой книжки и обеспечение ими работодателей

46. Изготовление бланков трудовой книжки и вкладыша в нее и обеспечение ими работодателей на платной основе осуществляются в порядке, утверждаемом Министерством финансов Российской Федерации.

Бланки трудовой книжки и вкладыша в нее имеют соответствующую степень защиты.

47. При выдаче работнику трудовой книжки или вкладыша в нее работодатель взимает с него плату, размер которой определяется размером расходов на их приобретение, за исключением случаев, предусмотренных пунктами 34 и 48 настоящих Правил.

48. В случае неправильного первичного заполнения трудовой книжки или вкладыша в нее, а также в случае их порчи не по вине работника стоимость испорченного бланка оплачивается работодателем.


Поддержание C. elegans

Тереза ​​Стирнагл
Caenorhabditis Центр генетики Миннесотского университета, Миннеаполис, Миннесота 55455 США

В этой главе обсуждается содержание C. elegans в лаборатории. Темы включают приобретение штаммов червей из Центра генетики Caenorhabditis (CGC), методы культивирования и переноса, деконтаминацию запасов, синхронизацию и стадирование культур, а также порядок замораживания червей для длительного хранения и извлечения их из замороженного состояния.

2. Получение штаммов из Центра генетики

Caenorhabditis (CGC)

CGC был основан в Университете Миссури, Колумбия, в 1979 г. В 1992 г. CGC переехал из Миссури в университет. Миннесота, Сент-Пол. Финансируется по контракту с Национальным институтом здравоохранения, Национальным центром исследовательских ресурсов. (NIH NCRR), основной задачей CGC является предоставление C.elegans и информацию для ученых, начинающих или продолжающих исследования с использованием штамма C. elegans . CGC стремится приобретать и иметь в наличии для распространения запасы, представляющие по крайней мере один мутантный аллель каждого опубликованного генные и все хромосомные перестройки (дефициты, дупликации, транслокации, инверсии). Кроме того, многие дикие доступны изоляты C. elegans и нескольких видов, тесно связанных с C. elegans .CGC поддерживает актуальный библиографический список всех статей, обзоров и книг, в которых обсуждаются C. elegans . The Worm Breeder’s Gazette (WBG), информационный бюллетень, издаваемый три раза в год, доступен в печатном виде на CGC за небольшую двухлетнюю абонентскую плату, и он доступен бесплатно в Интернете. WBG содержит обновление библиографии C. elegans , объявления и новости, каталог исследователей C. elegans и рефераты, представленные C.elegans исследователей, которые кратко описывают свою текущую работу.

Работы по поддержанию генетической номенклатуры C. elegans и генетической карты выполняются CGC в рамках субподряда под руководством Джонатана Ходжкина. в Лаборатории молекулярной биологии MRC, Кембридж, Англия. Второй субподряд помогает Леону Эйвери (Юго-Западная Медицинская Center, Техасский университет, Даллас) поддерживают C.elegans World Wide Web WWW Server (http://www.eatworms.swmed) в качестве источника информации о C. elegans , включая услуги CGC и описания доступных штаммов.

Дикого типа и более 3000 мутантных штаммов C. elegans бесплатно доступны исследователям в образовательных учреждениях или некоммерческих организациях. Для получения штаммов отправьте письменный запрос (письмо, факс или электронная почта) с описанием желаемых штаммов, генов или аллелей и кратким изложением предполагаемого использование червей.Укажите в запросе имя, полный почтовый адрес и номера телефонов запрашивающего лица. штамм(ы).

Исследователи в коммерческих или коммерческих организациях должны заплатить взнос в размере 100 долларов плюс почтовые расходы за каждый штамм заказали черви или бактерии. «Форма заказа для коммерческого сектора» доступна в CGC; заполненная форма должна быть получена CGC перед отправкой штаммов в коммерческие организации.

Все запросы на штаммы или информацию следует направлять по адресу: Caenorhabditis Genetics Center, University of Minnesota, 250 Biological Sciences Center, 1445 Gortner Avenue, St. Paul, MN 55108-1095 USA. Запросы также можно отправлять по факсу [(612) 625-5754] или по электронной почте [[email protected]].

При получении запроса на штамм CGC отправит ответ, подтверждающий получение заказа.Запрошенный Штаммы либо размораживают из морозильной камеры, либо извлекают из голодной чашки, хранящейся в инкубаторе при 11°C. Животных каждой линии помещают в чашки Петри со свежеприготовленной средой для роста нематод (NGM), которые были покрыты E. coli в качестве источника пищи и позволяли размножаться в течение нескольких дней. Отмечают видимый фенотип стада, чтобы подтвердить, что соответствует опубликованному описанию. Затем чашки Петри оборачивают парафильмом и отправляют заказчику по почте.Занимает 7-10 дней на получение, обработку и заполнение заявки на штамм. Если запрошенный штамм имеет чувствительный к температуре летальный фенотипу, поголовью дают голодать при допустимой температуре перед отправкой чашек, что требует дополнительных усилий. 3-4 дня. Это приводит к формированию термостойких личинок дауэра (см. Генетическое картирование и манипуляции — Введение и основы).

Штаммы

отправляются на чашки Петри NGM, при этом черви все еще питаются E.coli OP50 (или голодали, как упоминалось выше). Пластины отправляются в почтовых мешках с пузырчатой ​​подкладкой почтовым отправлением первого класса или авиапочтой. почтовые расходы расходы оплачивает CGC, за исключением коммерческих заказов. Штаммы могут быть отправлены через Federal Express, если заказчик предоставляет CGC с номером счета Federal Express для выставления счетов за курьерские расходы. Штаммы, отправленные за пределы США, имеют Соединенные Штаты На посылку наклеена наклейка почтовой таможни (CN22).На наклейке указано, что в упаковке содержится «непатогенный, непаразитические биологические образцы, не представляющие коммерческой ценности». Иногда таможенные органы других стран требуют чтобы к пакету применялась дополнительная информация. В таких случаях запрашивающая сторона должна предоставить CGC необходимые Информация.

Штаммы

отправляются с информационным листом штамма, в котором указаны генотип, фенотип, условия культивирования и происхождение. фонда, а также библиографическую ссылку.Заявителей просят сообщить CGC дату получения штаммов. и их состояние по прибытии. CGC следует указывать в любой публикации, полученной в результате использования штаммов, приобретенных из ЦГК.

3. Приготовление питательной среды

3.1. Подготовка источника бактериальной пищи

Хотя C. elegans можно содержать аксенинально (Avery, 1993), это сложно, и животные растут очень медленно. C. elegans обычно выращивают в моноксениальной среде в лаборатории с использованием штамма E. coli OP50 в качестве источника пищи (Brenner, 1974). E. coli OP50 является ауксотрофом по урацилу, рост которого ограничен на чашках NGM. Ограниченный бактериальный газон желателен, потому что он позволяет для облегчения наблюдения и лучшего спаривания червей. Заквасочная культура E. coli OP50 может быть получена из CGC или извлечена из чашек червей. Используйте стартовую культуру для выделения одиночных колоний на чашке с штрихами богатой среды, такой как агар LB [10 г бакто-триптона, 5 г бакто-дрожжей, 5 г NaCL, 15 г агара, H 2 O на 1 литр, pH 7,5] (Byerly et al. , 1976). Используя одну колонию с посевов, асептически инокулируйте насыщенный бульон, такой как бульон L [10 г бакто-триптона, 5 г бактодрожжей, 5 г NaCl, H 2 O на 1 литр, pH до 7.0 с использованием 1 М NaOH. Разлить по 100 мл во флаконы с завинчивающейся крышкой на 250 мл и автоклавировать. Бутылки со средой могут хранить при комнатной температуре в течение нескольких месяцев (Byerly et al., 1976)]. Позвольте инокулированным культурам расти в течение ночи при 37°C. После этого раствор E. coli OP50 готов к использованию в чашках с NGM для посева. Планшет E. coli OP50 и жидкая культура должны храниться при температуре 4°C и могут использоваться в течение нескольких месяцев.

3.2. Подготовка чашек Петри NGM

C. elegans хранится в лаборатории на агаризованной среде для роста нематод (NGM), которую асептически разливают в чашки Петри. (Бреннер, 1974). Доступны чашки Петри нескольких размеров, которые можно приобрести в таких компаниях, как Nunc или Falcon. Меньшие тарелки (диаметром 35 мм) пригодятся для вязок или при употреблении дорогих препаратов.Пластины среднего размера (диаметром 60 мм) подходят для общее поддержание штамма, а чашки большего размера (диаметром 100 мм) полезны для выращивания большего количества червей, таких как для определенных мутантных экранов. Агаровую среду NGM можно легко и асептически разливать в чашки Петри с помощью перистальтического шприца. насос. CGC использует дозатор жидкости Wheaton Unispense (Wheaton Science Products). Этот насос можно отрегулировать так, чтобы постоянная количество агара NGM распределяют в каждую чашку Петри.Постоянное количество агара в чашках снижает потребность в перефокусировке микроскопа при переключении с одной пластины на другую. При желании лекарственные препараты (например, левамизол, стрептомицин или нистатин) можно добавлять в раствор NGM непосредственно перед его заливкой (Caldicott et al., 1994).

Протокол 1. Подготовка планшетов NGM

  • Оборудование и реактивы

  • Методы

    1. Смешайте 3 г NaCl, 17 г агара и 2. 5 г пептона в 2-литровой колбе Эрленмейера. Добавьте 975 мл H 2 O. Накройте горлышко колбы алюминиевой фольгой. Автоклав в течение 50 мин.

    2. Охладите колбу в водяной бане при 55°C в течение 15 мин.

    3. Добавьте 1 мл 1 М CaCl 2 , 1 мл 5 мг/мл холестерина в этаноле, 1 мл 1 М MgSO 4 и 25 мл 1 М буфера KPO 4 .Встряхните, чтобы хорошо перемешать.

    4. Используя стерильные процедуры, распределите раствор NGM в чашки Петри с помощью перистальтического насоса. Заполните чашки на 2/3 агаром.

    5. Оставьте чашки при комнатной температуре на 2–3 дня перед использованием, чтобы можно было обнаружить загрязняющие вещества и дать избыток влаги. испариться.Планшеты, хранящиеся в герметичном контейнере при комнатной температуре, можно использовать в течение нескольких недель.

При использовании дорогих препаратов или при скрининге большого количества животные. Для 24-луночных планшетов используйте 1,5 мл агара NGM и посев с E.coli OP50 газон (Hartman and Herman, 1982). 96-луночные планшеты можно заполнить 50 мкл 1% (вес/вес) суспензии E. coli OP50 в среде S (см. протокол 2) (Hirsh et al., 1976). 96-луночные планшеты также можно заполнить 50 мкл жидкости NGM с E. coli HB101 в каждую лунку. Для этого упакованные клетки E. coli HB101 суспендируют в 4-кратном их объеме жидкости NGM, предполагая, что 1 г клеток равен 1 мл. Затем один объем суспензии E. coli добавляют к 24 объемам жидкости NGM (Ralph Clover, личное сообщение). E. coli HB101 можно приобрести в CGC. Следует следить за тем, чтобы черви не заползали между лунками; только один штамм C. elegans следует использовать на титрационном микропланшете, чтобы исключить возможность смешивания штаммов.

Используя стерильную технику, нанесите приблизительно 0,05 мл жидкой культуры E. coli OP50 на маленькие или средние чашки NGM или 0,1 мл на большие чашки NGM с помощью пипетки.При желании дроп можно распространять с помощью наконечника пипетки или стеклянной палочки. Распространение создаст большую лужайку, которая может помочь в визуализации червей. Брать следите за тем, чтобы газон не расстилался до краев тарелки; держать газон в центре. Черви, как правило, тратят больше всего времени в бактериях. Если газон доходит до краев тарелки, черви могут ползти по бокам тарелки, высохнуть и умереть. Разрешить E.coli OP50 для выращивания в течение ночи при комнатной температуре или при 37°C в течение 8 часов (охладите чашки до комнатной температуры перед добавлением червей). Засеянные пластины, хранящиеся в герметичном контейнере, останутся можно использовать 2-3 недели.

4. Культивирование

C. elegans на чашках Петри.

4.1. Перенос червей, выращенных на чашках NGM.

C. elegans является прозрачным и может быть визуализирован с помощью препаровального стереомикроскопа, оснащенного источником проходящего света. CGC использует модель Wild Leitz M5A или модель Zeiss SV6. Стандартные 10-кратные окуляры и объективы с увеличением от 0,6 до 5 крат (общее увеличение от 6X до 50X) широко используются.

Для переноса C. elegans с одной чашки Петри на другую используется несколько методов. Быстрым и удобным методом является «дробление», при котором стерилизованный скальпель или шпатель используется для перемещения куска агара со старой тарелки на новую тарелку. Обычно в куске агара содержатся сотни червей. Черви выползут из куска и расползутся по бактериальной лужайке новой тарелки. Этот метод хорошо работает для перенос червей, которые зарылись в агар или которых трудно собрать по отдельности (например, на голодной тарелке).То Метод фрагментирования хорош для передачи гомозиготных особей, но не рекомендуется, если популяция гетерозиготна или если запас должен поддерживаться путем спаривания.

Другой метод переноса большого количества гельминтов заключается в использовании полосок стерилизованной фильтровальной бумаги, обрезанных до ½–¼ дюйма. шириной и длиной 2-3 см. Простерилизованную фильтровальную бумагу осторожно кладут на чашку Петри, где она впитывает влагу и собирает до червей.Затем фильтровальную бумагу прикасаются к свежей пластине NGM, где черви откладываются. Выбросьте фильтровальную бумагу после использовать. Этот метод также подходит для переноса гомозиготных особей, но не рекомендуется, если популяция гетерозиготна. или должны поддерживаться путем спаривания.

Третий метод — сбор отдельных животных с помощью червячного сборщика. Червячный захват можно сделать, установив 1-дюймовый кусок 32-го калибра. платиновую проволоку в наконечник пипетки Pasture или в держатель бактериологической петли.Платиновая проволока быстро нагревается и остывает и его можно часто прожигать (между переносами), чтобы избежать загрязнения запасов червей. Конец проволоки, используемый для захвата черви вверх, можно слегка сплющить молотком и затем подпилить наждачной шкуркой, чтобы убрать острые края; острые точки могут проделайте отверстия в червях и убейте их или сделайте отверстия в агаре. Кончик проволоки можно оформить по своему вкусу. Немного люди предпочитают сплющенный конец, а другие предпочитают небольшой изгиб, образующий крючок.Требуется небольшой опыт работы с червем сборщик, чтобы не делать дырок в агаре. Черви заползают в норы, из-за чего их трудно увидеть или выбрать.

Чтобы выбрать червя, обнаруженного под препаровальным микроскопом, медленно опустите кончик проволоки и осторожно проведите кончиком по сторону червяка и поднимите вверх. Другой метод заключается в том, чтобы получить каплю E. coli OP50 на конце сборщика, прежде чем осторожно прикоснуться ею к верхней части выбранного червя.Червь прилипнет к бактериям. Этим методом можно собирать несколько животных одновременно, хотя черви, оставленные слишком долго на кирке, высохнут и умрут. К положить собранного червя на свежую тарелку, медленно опустить наконечник червя, осторожно коснуться поверхности агара и удерживать это там, чтобы позволить червю уползти от сборщика.

4.2. Частота переноса

Частота пересадки червей зависит от их генотипа, температуры, при которой вы их выращиваете, и что вы планируете с ними делать. Гетерозиготы и спаривающиеся особи следует передавать через каждые 1-3 поколения; легче перенесите их, если вы сделаете это до того, как тарелки истощились. Если вы хотите перевести отдельных животных из голодающего тарелке, возможно, вам будет проще сначала разбить тарелку на куски, а затем выбрать отдельных животных после того, как они выползут из тарелки. кусок и в бактериальный газон.Если животные находятся на стадии дауэра (см. Генетическое картирование и манипуляции — Введение и основы), вам может потребоваться подождать день, прежде чем собирать; черви разовьются из стадии дауэра, и фенотипы можно будет оценить. При пересадке гетерозиготных стад, которые плохо сбалансированы, лучше всего пересаживать только одного червя в каждую новую чашку. Этот позволяет вам оценить потомство перенесенного червя и подтвердить, что вы действительно перенесли гетерозиготу. Поддерживать брачные стада (стадии с самцами и гермафродитами) передают 6-8 взрослых самцов и 3-4 молодых взрослых гермафродитов за тарелка.Вы можете позволить гомозиготным особям голодать в течение нескольких недель между переносами. Подвои, выращенные при 25°C, погибнут на несколько дней раньше, чем идентичные подвои, выращенные при 16°C. Можно хранить исходные чашки при температуре 11°C или 16°C в течение нескольких месяцев между переносами. Чтобы пластина не высыхала, оберните ее полоской парафильма. Альтернативно, вы можете передавать свои запасы каждые 1-2 дня, чтобы у вас был источник животных на каждом этапе развития.

4.

3. Общие советы по уходу за товаром

Поголовье C. elegans лучше всего поддерживать при температуре от 16°C до 25°C, чаще всего при 20°C. C. elegans растет в 2,1 раза быстрее при 25°C, чем при 16°C, и в 1,3 раза быстрее при 20°C, чем при 16°C (Maniatis et al., 1982). Эта вариация периодов роста может быть полезна при планировании экспериментов.

Обратите внимание на особые требования к росту (например,г., чувствительность к температуре или неисправность дауэра) и соответствующим образом поддерживайте свои запасы. Такая информация включена в информационный лист штамма, который отправляется с каждым штаммом, отправленным из CGC.

Складские тарелки не нужно хранить в закрытом контейнере. Со временем они высохнут, но это не будет проблемой, если вы переносите животных до того, как тарелки достигнут этого состояния. Если вы храните тарелки в закрытом контейнере, обязательно следите за признаками повышенной влажности.Хотя и редко, черви могут ползать (или переноситься в каплях воды) из одной пластины на другую в таких условиях, что приводит к смешению штаммов.

При заливке или высеве пластин или при переносе червей лучше всего соблюдать время, в течение которого крышка будет снята. минимум. Это сокращает загрязнение. Если у вас на тарелке плесень, аккуратно оберните тарелку полоской парафильма. и утилизировать его.Не снимайте крышку с загрязненного планшета, иначе вы рискуете загрязнить другие планшеты. Если вы должны перевести с загрязненной тарелки, см. ниже раздел «Очистка загрязненных запасов».

Пометьте дно чашки Петри названием штамма и датой. Не маркируйте только крышку, так как она может быть случайно отделена Снизу. Отбракованные планшеты следует поместить в полиэтиленовый пакет и автоклавировать.

5.Рост

C. elegans в жидкой среде

Большие количества C. elegans можно выращивать в жидкой среде. Жидкие культуры C. elegans обычно выращивают на среде S с использованием концентрированной E. coli OP50 в качестве источника пищи (Lewis and Fleming, 1995). Часто лучше выращивать только одно поколение червей в жидкости, прежде чем черви будут собраны. При выращивании червей для более чем в одном поколении перенаселенность часто может привести к образованию дауэра, несмотря на наличие пищи.

Ночные культуры E. coli OP50, выращенные в LB или другой богатой бульонной среде, следует использовать для приготовления концентрированного осадка бактерий. Концентрированная пеллета можно хранить при температуре 4°C в течение нескольких недель или в морозильной камере при температуре -70°C в течение неопределенного времени. Рекомендуется иметь в наличии большое количество концентрированной E. coli OP50, чтобы можно было добавлять пищу по мере необходимости. Количество необходимого корма будет зависеть от исходного инокулята червей. и продолжительность выращивания червей.Для справки: вы можете вырастить партию жидкой культуры объемом 250 мл путем инокуляции с червями, извлеченными из 4 больших (100 мм) чашек Петри и выращиваемых в течение 4-5 дней. Первоначально предоставляется упакованная E. coli OP50 из 2-литровой культуры. Культуру червя контролируют и при необходимости добавляют дополнительные E. coli OP50.

Протокол 2. Приготовление жидкой культуры C. elegans

  • Реактивы

    • S Базальный [5. 85 г NaCl, 1 г K 2 HPO 4 , 6 г KH 2 PO 4 , 1 мл холестерина (5 мг/мл в этаноле), H 2 O на 1 литр. Стерилизовать автоклавированием.]

    • 1 M цитрат калия pH 6,0 [20 г моногидрата лимонной кислоты, 293,5 г моногидрата трикалия цитрата, H 2 O на 1 литр.Стерилизовать автоклавированием.]

    • Раствор микроэлементов [1,86 г динатрия ЭДТА, 0,69 г FeSO 4 •7 H 2 O, 0,2 г MnCl2•4 H 2 O, 0,29 г ZnSO 4 • 5,07 H 2 O, 2 O г CuSO 4 •5 H 2 O, H 2 O на 1 л. Стерилизовать автоклавированием. Хранить в темноте.]

    • S Среда [1 литр S Basal, 10 мл 1 М цитрата калия pH 6, 10 мл раствора микроэлементов, 3 мл 1 М CaCl 2 , 3 мл 1 М MgSO 4 . Добавьте компоненты, используя стерильную технику; не автоклавировать.]

  • Методы

    1. Добавьте 250 мл S Medium в стерилизованную 1-2-литровую колбу.

    2. Инокулируйте среду S концентрированным осадком E. coli OP50, приготовленным из 2–3 литров ночной культуры.

    3. Промойте каждую из 4 больших чашек с C. elegans (только что очищенной от бактерий) 5 мл среды S и добавьте в колбу на 250 мл.

    4. Поставьте колбу на шейкер при 20°C. Используйте довольно сильное встряхивание, чтобы культура была хорошо насыщена кислородом.

    5. Культуры следует контролировать, проверяя каплю культуры под микроскопом. Если запасы пищи исчерпаны (решение больше не мутнеет) добавьте более концентрированный E.coli OP50 суспендировали в среде S. Когда в каждой капле будет много взрослых особей, культура готова к сбору. Это обычно 4 или 5 день.

    6. Поставьте колбу на лед на 15 минут, чтобы черви осели.

    7. Аспирируйте большую часть жидкости из колбы.

    8. Перенесите оставшуюся жидкость в стерильную коническую центрифужную пробирку объемом 50 мл и центрифугируйте в течение не менее 2 мин при 1150 × g для получения осадка. черви. Молодые личинки могут занять более 2 минут, чтобы гранулы.

    9. Аспирируйте оставшуюся жидкость.

Черви, собранные при выращивании в жидкой культуре, обычно длиннее и тоньше, чем черви, выращенные в чашках Петри, и склонны держать свои яйца. Количество полученных имаго, личинок и яиц зависит от используемого штамма червей, количества бактерий при условии и продолжительности выращивания культуры. Свежеочищенные культуры дадут червей, равных половине веса используемые бактерии (Lewis and Fleming, 1995).

6. Очистка зараженных

C. elegans запасов

Иногда запасы C. elegans могут контаминироваться другими бактериями, дрожжами или плесенью. Легко избавить ваши запасы червей от загрязняющих веществ. Большинство загрязняющие вещества не повредят червей. (На самом деле черви любят карабкаться по гифам грибов и раскачиваться туда-сюда!) Гораздо легче подсчитывать фенотипы и делать переводы, когда ваши поголовья чисты.Плесень можно удалить путем измельчения (протокол 3) и поочередно пересаживая, позволяя червям уползти от загрязнения. Бактериальные загрязнения и дрожжи легко удаляется обработкой раствором гипохлорита, который убивает загрязняющее вещество и всех червей, не защищенных яичная скорлупа. Это можно сделать, используя всю зараженную чашку (Протокол 4), или это можно сделать быстро, используя одну гермафродит (Протокол 5).

Протокол 3. Удаление загрязнений плесенью с пластин C. elegans

  • Методы

    1. Простерилизуйте скальпель или шпатель в пламени и удалите кусок агара с загрязненной пластины. Снимите крышку загрязненную пластину только до тех пор, пока это необходимо.

    2. Поместите кусочек агара на край чистой засеянной тарелки. Позвольте червям выползти из куска и через газон E. coli OP50 на противоположную сторону пластины.

    3. Как только черви достигнут другой стороны тарелки, выберите отдельных животных с помощью червячного сборщика (или возьмите еще один кусок с помощью обожженного скальпеля или шпателя) и поместите его на край другой чистой тарелки.

    4. Повторить шаг 3.

Протокол 4. Приготовление яиц: удаление бактериальных или дрожжевых загрязнений с чашек для C. elegans

  • Реактивы

  • Методы

    1. Используйте загрязненный C. elegans запасные пластины, на которых много беременных гермафродитов. Промойте чашки стерильным раствором H 2 O. Несколько раз нанесите H 2 O на чашку, чтобы отделить червей и яйца, застрявшие в бактериях.

    2. Соберите жидкость в стерильную коническую центрифужную пробирку объемом 5 мл с крышкой. Добавьте H 2 O к общему количеству 3.5 мл.

    3. Смешайте 0,5 мл 5 н. NaOH с 1 мл отбеливателя. Сделайте этот раствор свежим непосредственно перед использованием! Добавить в центрифужную пробирку с червями.

    4. Хорошо встряхните или встряхивайте пробирку в течение нескольких секунд. Повторяйте встряхивание/встряхивание каждые 2 минуты в общей сложности 10 минут.

    5. Вращайте пробирку в настольной центрифуге в течение 30 секунд при 1300 x g для осаждения выпущенных яиц.

    6. Аспират до 0,1 мл.

    7. Добавьте стерильный H 2 O к 5 мл. Хорошо встряхните или взболтайте в течение нескольких секунд.

    8. Повторите шаги 5 и 6.

    9. Используйте пипетку Пастера, чтобы перенести яйца в оставшихся 0,1 мл жидкости на край чистой чашки NGM, засеянной Э. coli OP50 газон.

    10. На следующий день яйца вылупятся, и личинки заползут на газон E. coli OP50. Перенесите вылупившихся личинок на чистую пластину NGM, засеянную газоном.

Протокол 5.Капельное приготовление яиц: мелкомасштабный метод удаления бактериальных или дрожжевых загрязнений

  • Реактивы

  • Методы

    1. Приготовьте смесь 1 н. NaOH: отбеливатель в соотношении 1:1. Нанесите каплю этого раствора на край чистой пластины NGM, засеянной E.coli OP50 газон.

    2. Поместите в каплю несколько беременных гермафродитов. Раствор убьет загрязнителей и гермафродитов, но впитается в пластину до вылупления эмбрионов.

    3. На следующий день личинки заползут в E.coli OP50 газон. Перенесите их на чистую чашку NGM, засеянную газоном E. coli OP50.

Протокол 6. Получение синхронных культур C. elegans

  • Реактивы

    • M9 Буфер [3 г KH 2 PO 4 , 6 г Na 2 HPO 4 , 5 г NaCl, 1 мл 1 M MgSO 4 , H 7 л от 9 O до 900. Стерилизовать автоклавированием.]

  • Методы

    1. В асептических условиях перенесите аксенизированные яйца в 250 мл буфера M9 в 1-2-литровую колбу и дайте инкубироваться в течение ночи при 20°C, используя довольно сильное встряхивание, чтобы получить голодающих животных L1.

    2. Поместите колбу на лед на 15 минут, чтобы черви осели

    3. Аспирировать большую часть жидкости из колбы (чтобы удалить весь феромон дауэра, накопившийся во время голодания)

    4. Перенесите оставшуюся жидкость в стерильную коническую центрифужную пробирку объемом 50 мл и центрифугируйте не менее 2 мин при 1150 x g для получения осадка. черви.

    5. Аспирируйте оставшуюся жидкость.

    6. Перенесите червей в 250 мл S Basal, инокулированного концентрированной E. coli OP50, в 1-2-литровую колбу.

    7. Монитор путем проверки капли культуры под микроскопом.Добавляйте больше еды по мере необходимости. При 20°C личинки среднего L1 можно собирать примерно через 8 часов, личинки среднего L2 примерно через 18 часов, личинки среднего L3 примерно через 18 часов. 25 часов, а личинки середины L4 — примерно 37 часов (Sulston and Hodgkin, 1988).

Если требуется небольшое количество синхронизированных животных, яйца можно добавить в тонкий слой буфера М9 в чашку Петри диаметром 60 мм. тарелку и оставляли расти на ночь.Затем голодающих животных L1 можно поместить в чашки Петри с засеянным NGM и синхронно рост начнется с повторного введения пищи. За животными следует наблюдать с помощью микроскопа и собирать их в желаемое время. этапы.

Популяцию дауэровских животных можно получить путем добавления в жидкую культуру феромона, индуцирующего дауэр (Vanfleteren, 1980). Дауэры также можно получить, оставив жидкую культуру расти в течение нескольких дней после того, как культура будет очищена от бактерий.Дауэры можно отделить от других стадий, обработав 1% SDS в течение 30 мин во вращающейся трубке, а затем один раз промыв. с H 2 O и один раз с буфером M9.

7. Замораживание и восстановление запасов

C. elegans .

Caenorhabditis elegans можно заморозить и хранить в течение неопределенного времени в жидком азоте (-196 °C) (Brenner, 1974). Ключом к успешной заморозке является использование животных на правильной стадии развития, добавление глицерина к замораживание среды и постепенное охлаждение до -80°С. Лучше всего переносят замораживание только что умершие от голода молодые личинки (стадия L1-L2). Сытые животные, взрослые особи, яйца и дауэры не выживают Что ж. Лучше всего использовать несколько чашек с червями, которые только что истощили газон E. coli OP50 и содержат много животных L1-L2. Используют 15% конечного объема глицерина в растворе для замораживания.Во время замораживания желательно снижение температуры на 1°C в минуту. Этого можно добиться, поместив червей (в пробирки для заморозки) в пенопластовом контейнере при -80°С. Контейнер из пенополистирола может быть либо коммерческим транспортировочным ящиком (со стенками толщиной не менее ¾ дюйма), либо небольшим пенопластовым контейнером. коробка с прорезями для хранения флаконов. Через 12 или более часов при температуре -80°C флаконы для замораживания следует переместить в постоянное место хранения в морозильной камере для длительного хранения.

CGC использует два раствора для замораживания C.elegans : жидкий раствор для замораживания (Brenner, 1974) и раствор для замораживания мягкого агара (Leon Avery, личное сообщение). Для длительного хранения запасов в жидком азоте, Рекомендуется использовать жидкий замораживающий раствор. При использовании этого раствора черви оседают на дно морозильной камеры и никакие жизнеспособные животные не могут быть легко извлечены без оттаивания всего содержимого флакона. Мягкий раствор для замораживания агара полезно для замораживания рабочих запасов C.Элеганс . Добавление агара помогает удерживать червей во взвешенном состоянии в растворе. Небольшая ложка замороженного содержимого может принять, а остаток можно оставить во флаконе и вернуть в морозильник для дальнейшего использования. Флаконы, замороженные с использованием мягкого агара Замораживающий раствор следует хранить при температуре -80°C. При хранении в жидком азоте содержимое становится слишком твердым, и флакон нужно будет нагреть, прежде чем его можно будет удалите ложку содержимого.Период прогрева сокращает количество случаев извлечения живых червей из флакона. При хранении при -80°С нет необходимости нагревать флакон; содержимое достаточно мягкое, чтобы его можно было использовать сразу. Извлекаем червей 3-4 раз из каждого флакона с мягким агаром.

Червей можно замораживать в криопробирках объемом 1,8 мл. CGC использует Nunc Cryotube Vials (№ 65234) с внутренней резьбой и замораживает шесть флаконов. каждого полученного штамма.Два флакона замораживают с использованием раствора для замораживания мягкого агара и хранят при температуре -80°C для использования в качестве рабочих запасов. Четыре флакона замораживают с использованием Liquid Freezing Solution; один размораживается как тестер, а другой три помещаются как минимум в два разных резервуара с жидким азотом. Для выполнения запросов на деформацию рабочие запасы, которые хранятся на −80°C. Когда последний флакон с запасом, хранящимся при температуре -80°C, опустошается, червей снова замораживают, используя раствор для замораживания мягкого агара, чтобы заменить эти флаконы.В теории, запасы, хранящиеся в жидком азоте, никогда не понадобятся, поскольку запасы мягкого агара постоянно заменяются по мере их использования. истощены.

Извлечение C. elegans из запасов, хранящихся в жидком азоте, составляет 35-45% от общего количества замороженных животных. Это число уменьшается лишь незначительно после многих лет хранения в жидком азоте. Восстановление запасов, хранящихся при температуре -80 ° C в течение многих лет (> 10), не так высоко, как при использовании жидкого азота, но черви могут безопасно храниться таким образом в течение многих лет (CGC, неопубликованные данные).Из Конечно, сбой питания может привести к потере всех запасов, хранящихся при температуре -80°C, поэтому очень разумно хранить хотя бы одну копию всех запасов в жидком азоте. Некоторые мутантные штаммы (особенно некоторые Мутанты Dpy) не выживают при замораживании так же хорошо, как животные дикого типа.

Протокол 7. Замораживание C. elegans с использованием жидкого замораживающего раствора

  • Оборудование и реактивы

  • Методы

    1. Используйте одну большую, 2-3 средних или 5-6 маленьких чашек NGM, в которых содержится много недавно голодающих животных L1-L2.Промойте пластины 0,6 мл S-буфера для каждого флакона, который вы будете замораживать. Соберите жидкость в стерильную пробирку.

    2. Добавьте равный объем буфера S + 30% глицерина. Хорошо перемешать.

    3. Аликвоту по 1,0 мл смеси в криопробирки по 1,8 мл, помеченные названием штамма и датой.

    4. Упакуйте криопробирки в небольшую пенопластовую коробку с прорезями для микропробирок или используйте коммерческий пенопластовый транспортировочный ящик.

    5. Поместите коробку в морозильную камеру при температуре -80°C на ночь (или не менее чем на 12 часов).

    6. На следующий день переместите флаконы в их постоянные морозильные камеры.Разморозьте один флакон в качестве тестера, чтобы проверить, насколько хорошо черви пережили замораживание (см. протокол 9).

Протокол 8. Замораживание C. elegans с использованием раствора для замораживания мягкого агара

  • Оборудование и реактивы

    • Раствор для замораживания мягкого агара [0.58 г NaCl, 0,68 г KH 2 PO 4 , 30 г глицерина, 0,56 мл 1 М NaOH, 0,4 г агара, H 2 O до 100 мл (автоклав)]

  • Методы

    1. Растопите раствор для замораживания мягкого агара в автоклаве или микроволновой печи и поместите в водяную баню с температурой 50°C не менее чем на 15 минут.

    2. Используйте одну большую, 2-3 средних или 5-6 маленьких чашек NGM, в которых содержится много недавно голодающих животных L1-L2. Промойте пластины 0,6 мл S-буфера для каждого флакона, который вы будете замораживать. Соберите жидкость в стерильную пробирку с крышкой и поместите на лед на 15 минут.

    3. Добавьте в пробирку равный объем раствора для замораживания мягкого агара.Хорошо перемешать.

    4. Аликвоты по 1 мл смеси в криопробирки по 1,8 мл, маркированные названием штамма и датой.

    5. Упакуйте криопробирки в небольшую пенопластовую коробку с прорезями для микропробирок или используйте коммерческий пенопластовый транспортировочный ящик.

    6. Поместите коробку в морозильную камеру при температуре -80°C на ночь (или не менее чем на 12 часов).

    7. На следующий день переместите флаконы в их постоянные морозильные камеры. Возьмите мерную ложку замороженной смеси из одного флакона в качестве пробы. проверить, насколько хорошо черви пережили замораживание (см. протокол 10).

Протокол 9.Размораживание C. elegans , замороженных с помощью Liquid Freezing Solution

  • Методы

    1. Достаньте флакон из морозильной камеры и дайте ему оттаять при комнатной температуре, пока весь лед не превратится в жидкость.

    2. Вылейте содержимое на одну большую чашку NGM с E.coli OP50 газон. Вы должны увидеть, как черви извиваются уже через несколько минут.

    3. Через 2–3 дня перенесите 10–15 животных по отдельности в отдельные чашки. Разрешить животным размножаться в течение одного поколения и оценивайте потомство по правильному фенотипу.

Протокол 10.Размораживание C. elegans , замороженных с использованием раствора для замораживания мягкого агара

  • Методы

    1. Достаньте флакон из морозильной камеры при температуре -80 °C и перенесите в небольшую пенопластовую коробку с прорезями для микропробирок.

    2. Работайте быстро, чтобы раствор во флаконе не растаял.Подожгите маленькую ложку или шпатель и используйте его, чтобы удалить 1/4–1/3 мл замороженного раствора. Поместите раствор на пластину NGM с газоном E. coli OP50.

    3. Как можно быстрее верните флакон в морозильную камеру при температуре -80°C.

    4. Через несколько минут вы должны увидеть извивающихся червей.Через 2-3 дня перенесите 10-15 животных по отдельности в отдельные чашки. Разрешить животным размножаться в одном поколении и оценить потомство по правильному фенотипу.

Автор выражает благодарность Роберту Херману, Энн Ругви и Тодду Старичу за их комментарии.

Эйвери, Л.(1993). Генетика 133 , 897. Абстрактный

Бреннер, С. (1974). Генетика 77 , 71. Абстрактный

Байерли, Л., Кассада, Р.К., и Рассел, Р.Л. (1976). Дев. биол. 51 , 23. Абстрактный Статья

Калдикотт, И. М., Ларсен П.Л. и Риддл Д.Л. (1994). В кн.: Клеточная биология: лабораторный справочник . (Сан-Диего: Academic Press), стр. 389.

Хартман, П.С. и Герман Р.К. (1982). Генетика 102 , 159. Абстрактный

Хирш Д., Оппенгейм Д. и Класс М. (1976).Дев. биол. 49 , 200. Абстрактный Статья

Льюис, Дж.А. и Флеминг, Дж.Т. (1995). В: Методы клеточной биологии, Vol. 48 , H.F. Epstein and D.C. Shakes, eds. (Сан-Диего: Academic Press), с. 3.

Маниатис, Т., Фрич, Э.Ф. и Самбрук Дж. (1982). Молекулярное клонирование: лабораторное пособие. (Нью-Йорк: Колд-Спринг-Харбор Лабораторная пресса), с. 68.

Рогальский, Т.М. и Риддл, Д.Л. (1988). Генетика 118 , 61. Абстрактный

Салстон, Дж. и Ходжкин, Дж. (1988).В: Нематода Caenorhabditis elegans , W.B. Вуд, изд. (Нью-Йорк: Лабораторное издательство Колд-Спринг-Харбор), с. 587.

Ванфлетерен, младший (1980). В: Нематоды как биологические модели, Vol. 2 , Б.М. Цукерман, изд. (Нью-Йорк: Academic Press), с. 47.

%PDF-1.4 % 475 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 475 137 0000000016 00000 н 0000003092 00000 н 0000003232 00000 н 0000005062 00000 н 0000005307 00000 н 0000005391 00000 н 0000005478 00000 н 0000005608 00000 н 0000005764 00000 н 0000005820 00000 н 0000005907 00000 н 0000006015 00000 н 0000006071 00000 н 0000006195 00000 н 0000006251 00000 н 0000006365 00000 н 0000006421 00000 н 0000006583 00000 н 0000006639 00000 н 0000006738 00000 н 0000006839 00000 н 0000006994 00000 н 0000007100 00000 н 0000007221 00000 н 0000007277 00000 н 0000007391 00000 н 0000007447 00000 н 0000007503 00000 н 0000007623 00000 н 0000007679 00000 н 0000007735 00000 н 0000007791 00000 н 0000007906 00000 н 0000007962 00000 н 0000008088 00000 н 0000008144 00000 н 0000008200 00000 н 0000008256 00000 н 0000008406 00000 н 0000008462 00000 н 0000008552 00000 н 0000008663 00000 н 0000008719 00000 н 0000008828 00000 н 0000008884 00000 н 0000008995 00000 н 0000009051 00000 н 0000009107 00000 н 0000009263 00000 н 0000009318 00000 н 0000009451 00000 н 0000009607 00000 н 0000009700 00000 н 0000009793 00000 н 0000009849 00000 н 0000009905 00000 н 0000010016 00000 н 0000010072 00000 н 0000010173 00000 н 0000010229 00000 н 0000010328 00000 н 0000010384 00000 н 0000010491 00000 н 0000010547 00000 н 0000010645 00000 н 0000010701 00000 н 0000010757 00000 н 0000010849 00000 н 0000010949 00000 н 0000011004 00000 н 0000011059 00000 н 0000011174 00000 н 0000011230 00000 н 0000011286 00000 н 0000011431 00000 н 0000011486 00000 н 0000011596 00000 н 0000011692 00000 н 0000011817 00000 н 0000011872 00000 н 0000011927 00000 н 0000011982 00000 н 0000012084 00000 н 0000012139 00000 н 0000012243 00000 н 0000012341 00000 н 0000012455 00000 н 0000012510 00000 н 0000012639 00000 н 0000012694 00000 н 0000012810 00000 н 0000012865 00000 н 0000012920 00000 н 0000012975 00000 н 0000013090 00000 н 0000013145 00000 н 0000013261 00000 н 0000013316 00000 н 0000013426 00000 н 0000013480 00000 н 0000013534 00000 н 0000013588 00000 н 0000013867 00000 н 0000013939 00000 н 0000013962 00000 н 0000015869 00000 н 0000016726 00000 н 0000016907 00000 н 0000017117 00000 н 0000017337 00000 н 0000018201 00000 н 0000018259 00000 н 0000018282 00000 н 0000020548 00000 н 0000020571 00000 н 0000022639 00000 н 0000022662 00000 н 0000024607 00000 н 0000024630 00000 н 0000026547 00000 н 0000026570 00000 н 0000028486 00000 н 0000028589 00000 н 0000028645 00000 н 0000028668 00000 н 0000030859 00000 н 0000030882 00000 н 0000032819 00000 н 0000033734 00000 н 0000033813 00000 н 0000034740 00000 н 0000035558 00000 н 00000

00000 н 00000

00000 н 0000092501 00000 н 0000003288 00000 н 0000005039 00000 н трейлер ] >> startxref 0 %%EOF 476 0 объект > эндообъект 477 0 объект > эндообъект 610 0 объект > ручей HVoU?3}>x`[email protected],-PL0&~s b!vvln[`P”$F%AD”Fsgekl̹ιwg

%PDF-1. 4 % 654 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 654 361 0000000016 00000 н 0000007573 00000 н 0000013967 00000 н 0000014127 00000 н 0000014212 00000 н 0000014340 00000 н 0000014424 00000 н 0000014597 00000 н 0000014670 00000 н 0000014817 00000 н 0000014890 00000 н 0000014978 00000 н 0000015068 00000 н 0000015141 00000 н 0000015214 00000 н 0000015387 00000 н 0000015460 00000 н 0000015558 00000 н 0000015672 00000 н 0000015863 00000 н 0000015936 00000 н 0000016064 00000 н 0000016260 00000 н 0000016333 00000 н 0000016442 00000 н 0000016547 00000 н 0000016713 00000 н 0000016786 00000 н 0000016936 00000 н 0000017074 00000 н 0000017147 00000 н 0000017272 00000 н 0000017345 00000 н 0000017509 00000 н 0000017582 00000 н 0000017670 00000 н 0000017758 00000 н 0000017945 00000 н 0000018018 00000 н 0000018132 00000 н 0000018263 00000 н 0000018451 00000 н 0000018524 ​​00000 н 0000018686 00000 н 0000018805 00000 н 0000018992 00000 н 0000019065 00000 н 0000019215 00000 н 0000019345 00000 н 0000019532 00000 н 0000019605 00000 н 0000019678 00000 н 0000019862 00000 н 0000019970 00000 н 0000020079 00000 н 0000020152 00000 н 0000020266 00000 н 0000020339 00000 н 0000020457 00000 н 0000020530 00000 н 0000020691 00000 н 0000020785 00000 н 0000020899 00000 н 0000020972 00000 н 0000021098 00000 н 0000021171 00000 н 0000021292 00000 н 0000021365 00000 н 0000021552 00000 н 0000021657 00000 н 0000021752 00000 н 0000021825 00000 н 0000021898 00000 н 0000022008 00000 н 0000022081 00000 н 0000022183 00000 н 0000022256 00000 н 0000022329 00000 н 0000022402 00000 н 0000022518 00000 н 0000022591 00000 н 0000022700 00000 н 0000022773 00000 н 0000022893 00000 н 0000022966 00000 н 0000023070 00000 н 0000023143 00000 н 0000023257 00000 н 0000023330 00000 н 0000023403 00000 н 0000023476 00000 н 0000023549 00000 н 0000023736 00000 н 0000023841 00000 н 0000023944 00000 н 0000024017 00000 н 0000024131 00000 н 0000024204 00000 н 0000024322 00000 н 0000024395 00000 н 0000024538 00000 н 0000024611 00000 н 0000024713 00000 н 0000024786 00000 н 0000024922 00000 н 0000024995 00000 н 0000025104 00000 н 0000025177 00000 н 0000025342 00000 н 0000025443 00000 н 0000025552 00000 н 0000025625 00000 н 0000025698 00000 н 0000025823 00000 н 0000025896 00000 н 0000025969 00000 н 0000026042 00000 н 0000026114 00000 н 0000026313 00000 н 0000026433 00000 н 0000026564 00000 н 0000026637 00000 н 0000026751 00000 н 0000026824 00000 н 0000026942 00000 н 0000027014 00000 н 0000027141 00000 н 0000027213 00000 н 0000027338 00000 н 0000027410 00000 н 0000027544 00000 н 0000027616 00000 н 0000027760 00000 н 0000027832 00000 н 0000027904 00000 н 0000028022 00000 н 0000028110 00000 н 0000028238 00000 н 0000028310 00000 н 0000028421 00000 н 0000028493 00000 н 0000028604 00000 н 0000028676 00000 н 0000028785 00000 н 0000028857 00000 н 0000029047 00000 н 0000029118 00000 н 0000029189 00000 н 0000029348 00000 н 0000029432 00000 н 0000029526 00000 н 0000029597 00000 н 0000029701 00000 н 0000029772 00000 н 0000029873 00000 н 0000029944 00000 н 0000030015 00000 н 0000030086 00000 н 0000030184 00000 н 0000030278 00000 н 0000030349 00000 н 0000030463 00000 н 0000030534 00000 н 0000030605 00000 н 0000030677 00000 н 0000030816 00000 н 0000030888 00000 н 0000031002 00000 н 0000031074 00000 н 0000031192 00000 н 0000031264 00000 н 0000031375 00000 н 0000031447 00000 н 0000031565 00000 н 0000031637 00000 н 0000031745 00000 н 0000031817 00000 н 0000031941 00000 н 0000032013 00000 н 0000032085 00000 н 0000032158 00000 н 0000032272 00000 н 0000032345 00000 н 0000032463 00000 н 0000032536 00000 н 0000032688 00000 н 0000032761 00000 н 0000032936 00000 н 0000033049 00000 н 0000033145 00000 н 0000033218 00000 н 0000033330 00000 н 0000033403 00000 н 0000033517 00000 н 0000033590 00000 н 0000033717 00000 н 0000033790 00000 н 0000033917 00000 н 0000033990 00000 н 0000034063 00000 н 0000034188 00000 н 0000034261 00000 н 0000034373 00000 н 0000034446 00000 н 0000034570 00000 н 0000034643 00000 н 0000034716 00000 н 0000034789 00000 н 0000034862 00000 н 0000034976 00000 н 0000035049 00000 н 0000035167 00000 н 0000035240 00000 н 0000035385 00000 н 0000035458 00000 н 0000035569 00000 н 0000035642 00000 н 0000035752 00000 н 0000035825 00000 н 0000035974 00000 н 0000036074 00000 н 0000036180 00000 н 0000036253 00000 н 0000036326 00000 н 0000036465 00000 н 0000036538 00000 н 0000036611 00000 н 0000036728 00000 н 0000036823 00000 н 0000036896 00000 н 0000036969 00000 н 0000037089 00000 н 0000037162 00000 н 0000037235 00000 н 0000037308 00000 н 0000037422 00000 н 0000037495 00000 н 0000037613 00000 н 0000037686 00000 н 0000037858 00000 н 0000037948 00000 н 0000038040 00000 н 0000038113 00000 н 0000038259 00000 н 0000038332 00000 н 0000038474 00000 н 0000038547 00000 н 0000038620 00000 н 0000038731 00000 н 0000038804 00000 н 0000038906 00000 н 0000038979 00000 н 0000039082 00000 н 0000039155 00000 н 0000039272 00000 н 0000039345 00000 н 0000039455 00000 н 0000039528 00000 н 0000039638 00000 н 0000039711 00000 н 0000039784 00000 н 0000039857 00000 н 0000039930 00000 н 0000040033 00000 н 0000040106 00000 н 0000040209 00000 н 0000040282 00000 н 0000040385 00000 н 0000040458 00000 н 0000040561 00000 н 0000040634 00000 н 0000040737 00000 н 0000040810 00000 н 0000040883 00000 н 0000040979 00000 н 0000041083 00000 н 0000041156 00000 н 0000041229 00000 н 0000041346 00000 н 0000041419 00000 н 0000041529 00000 н 0000041602 00000 н 0000041726 00000 н 0000041799 00000 н 0000041921 00000 н 0000041994 00000 н 0000042116 00000 н 0000042189 00000 н 0000042313 00000 н 0000042386 00000 н 0000042497 00000 н 0000042570 00000 н 0000042643 00000 н 0000042716 00000 н 0000042831 00000 н 0000042904 00000 н 0000042977 00000 н 0000043071 00000 н 0000043187 00000 н 0000043260 00000 н 0000043333 00000 н 0000043439 00000 н 0000043512 00000 н 0000043619 00000 н 0000043692 00000 н 0000043800 00000 н 0000043873 00000 н 0000043997 00000 н 0000044070 00000 н 0000044177 00000 н 0000044250 00000 н 0000044362 00000 н 0000044435 00000 н 0000044543 00000 н 0000044616 00000 н 0000044732 00000 н 0000044805 00000 н 0000044950 00000 н 0000045023 00000 н 0000045138 00000 н 0000045211 00000 н 0000045355 00000 н 0000045428 00000 н 0000045543 00000 н 0000045616 00000 н 0000045689 00000 н 0000045762 00000 н 0000045874 00000 н 0000045947 00000 н 0000046048 00000 н 0000046121 00000 н 0000046255 00000 н 0000046328 00000 н 0000046438 00000 н 0000046511 00000 н 0000046630 00000 н 0000046703 00000 н 0000046813 00000 н 0000046886 00000 н 0000046993 00000 н 0000047066 00000 н 0000047183 00000 н 0000047256 00000 н 0000047361 00000 н 0000047434 00000 н 0000047541 00000 н 0000047614 00000 н 0000047688 00000 н 0000047762 00000 н 0000047969 00000 н 0000048151 00000 н 0000048776 00000 н 0000049588 00000 н 0000049811 00000 н 0000049885 00000 н 0000050109 00000 н 0000050900 00000 н 0000050980 00000 н 0000051899 00000 н 0000007713 00000 н 0000013943 00000 н трейлер ] >> startxref 0 %%EOF 655 0 объект > эндообъект 1013 0 объект > ручей HU{TRySb:jNEMr,Igl&&>xj1SN۞G6mn9″”!i1c;EBl 2-K4c9=νWZ WVn;K6?\=w{kN?}KH htXJ. Ʈ#>gD&7 7QPzLOČ` hq!8f>NR2u̩ͫ͏{rX..`P(,I :%*DiJVңk)4T7>_қx?NȶR|0(f4ei3m5hvLJƃ#nULυU)G/Ɋ -|R#U’l;j|>3B46v!m6`T}2)L”#GKǨ:`6

%PDF-1.6 % 3162 0 объект > эндообъект внешняя ссылка 3162 77 0000000016 00000 н 0000003450 00000 н 0000003804 00000 н 0000003850 00000 н 0000004040 00000 н 0000004418 00000 н 0000004663 00000 н 0000004818 00000 н 0000004975 00000 н 0000005132 00000 н 0000005289 00000 н 0000005446 00000 н 0000005603 00000 н 0000005761 00000 н 0000005918 00000 н 0000006076 00000 н 0000006232 00000 н 0000006390 00000 н 0000006548 00000 н 0000006706 00000 н 0000006865 00000 н 0000007024 00000 н 0000007183 00000 н 0000007342 00000 н 0000007501 00000 н 0000007660 00000 н 0000007819 00000 н 0000007978 00000 н 0000008137 00000 н 0000008296 00000 н 0000008455 00000 н 0000008613 00000 н 0000009003 00000 н 0000009551 00000 н 0000009970 00000 н 0000010009 00000 н 0000010286 00000 н 0000010531 00000 н 0000010578 00000 н 0000010657 00000 н 0000010908 00000 н 0000011618 00000 н 0000012159 00000 н 0000012728 00000 н 0000013332 00000 н 0000013915 00000 н 0000014465 00000 н 0000014950 00000 н 0000015533 00000 н 0000018228 00000 н 0000029304 00000 н 0000029466 00000 н 0000029628 00000 н 0000029790 00000 н 0000029952 00000 н 0000030114 00000 н 0000030276 00000 н 0000030438 00000 н 0000030600 00000 н 0000030762 00000 н 0000030924 00000 н 0000031086 00000 н 0000031248 00000 н 0000031410 00000 н 0000031572 00000 н 0000031734 00000 н 0000031896 00000 н 0000032058 00000 н 0000032220 00000 н 0000032382 00000 н 0000032544 00000 н 0000032706 00000 н 0000032868 00000 н 0000033030 00000 н 0000033192 00000 н 0000003214 00000 н 0000001877 00000 н трейлер ]>> startxref 0 %%EOF 3238 0 объект >поток xb“`b`\π

Пять законов библиотечного дела

ПЯТЬ ЗАКОНОВ БИБЛИОТЕЧНОГО НАУКА КНИГА С.Р. РАНГАНАТАН (ЦИФРОВАЯ КНИГА)


ПЯТЬ ЗАКОНОВ БИБЛИОТЕЧНОЙ НАУКИ ИНФОГРАФИКА⁵


Список инфографики по пяти законам библиотечного дела из инфографики библиотек и информатики. Обратите внимание, что в этой инфографике, созданной Университетом Южной Калифорнии, допущена небольшая опечатка: Второй закон указан как Третий закон, а Третий закон ошибочно указан как Второй закон.

ВИКТОРИНА ПО ПЯТИ ЗАКОНАМ БИБЛИОТЕЧНОГО НАУКИ

Список вопросов, ответов и викторин по пяти законам библиотечного дела из вопросов библиотечного дела и информатики Вопросы ответы викторины.Пожалуйста, посетите эту коллекцию и найдите вопросы, приведенные ниже под заголовком «Раздел II», где вы также найдете их URL-адреса. наличие ответов и дополнительных пояснений.
  • Что называется набором норм, представлений и руководств по хорошей практике в библиотечном деле? [(a) Каноны каталогизации (b) Классификация двоеточий (c) Пять законов (d) Пять законов библиотечного дела]
  • В каком году вышла книга «Пять законов библиотечного дела»? [(а) 1928 (б) 1931 (в) 1932 (г) 1933]
  • Определите, какой из пяти законов библиотечного дела Ранганатан назвал «тривиальным трюизмом» в своей работе «Библиотечное дело и научный метод» [(1) Первый закон (2) Второй закон (3) Третий закон (4) Пятый закон ]
ССЫЛКИ

1.Ранганатан, С. Р. (Шияли Рамамрита), 1892–1972 гг. Пять законов библиотечного дела; Edward Goldston, Ltd.: Лондон, 1931.

2. Рубин, Ричард Э. Основы библиотеки и информатики. 2-е изд.; Издательство Нила-Шумана: Нью-Йорк, 2004.

3. Пять законов библиотечного дела. Википедия. https://en.wikipedia.org/wiki/Five_laws_of_library_science (по состоянию на 10 сентября 2017 г.)

4. Коннауэй, Линн Силипиньи и Икшель М. Фаниель. 2014. Переупорядочивание Ранганатана: изменение поведения пользователей, изменение приоритетов.Дублин, Огайо: OCLC Research.http://www.oclc.org/content/dam/research/publications/library/2014/oclcresearch-reordering-ranganathan-2014.pdf.

5. Университет Южной Калифорнии, Школа бизнеса им. Маршалла. Доктор С.Р. Пять законов библиотечного дела Ранганатана. http://librarysciencegrade.usc.edu/resources/infographics/dr-s-r-ranganathans-five-laws-of-library-science/ (по состоянию на 17 сентября 2017 г.)

6. Аспе, Рон. Сохраняются ли исходные 5 законов библиотечного дела в цифровом мире? http://блог.lucidea.com/do-the-original-5-laws-of-library-science-hold-up-in-a-digital-world (по состоянию на 20 сентября 2017 г.)

7. С. Р. Ранганатан. Библиотековедение и научный метод. http://nopr.niscair.res.in/bitstream/123456789/28515/1/ALIS%204%281%29%2019-32.pdf



ИНФОРМАЦИЯ О ЦИТИРОВАНИИ
  • Название статьи: Пять законов библиотечного дела
  • Автор: Салман Хайдер
  • Название веб-сайта: Библиотечные исследования и информационные технологии
  • URL-адрес: https://www.librarianshipstudies.com/2017/09/five-laws-of-library-science.html



ОБРАТНАЯ СВЯЗЬ

Помогите нам улучшить эту статью! Свяжитесь с нами с вашим отзывом. Вы можете использовать раздел комментариев ниже или связаться с нами в социальных сетях.

По просьбе библиотечных специалистов мы сделали доступной информацию о пяти законах библиотечного дела на некоторых популярных языках, таких как испанский, французский, немецкий, итальянский, русский, хинди, китайский и японский.Если один из этих языков является вашим родным языком, пожалуйста, проверьте перевод на свой язык и предложите нам, если требуются какие-либо изменения.


Эта мультимедийная статья «Пять законов библиотечного дела» широко обсуждается, высоко оценивается, цитируется, упоминается и имеет гиперссылки. Некоторые места, где это обсуждается и упоминается, приведены ниже.

Ссылки, цитаты и ссылки


  • Стандарты управления сельскохозяйственной информацией (AIMS), Продовольственная и продовольственная и сельскохозяйственная организация Объединенных Наций (ФАО), Италия.http://aims.fao.org/activity/blog/five-laws-library-science-detailing-principles-operating-library-system
  • Матур, П. (2019). Обобщение в старшей библиотеке Королевской школы. Правительство Австралии, Департамент образования Нового Южного Уэльса. https://education.nsw.gov.au/teaching-and-learning/professional-learning/scan/past-issues/vol-38–2019/genrefication—the-kings-school-senior-library (доступ 3 апреля 2020 г.).
  • UCLA (Калифорнийский университет в Лос-Анджелесе), «Семинар: специальные вопросы информационных исследований: библиотечное дело коренных народов» — https://ccle.ucla.edu/course/view/20S-INFSTD289-4?section=1 (по состоянию на 5 апреля 2020 г.).
  • Университет Теннесси, Ноксвилл, «Виртуальная реальность и образование: от классных комнат до библиотек» http://volweb.utk.edu/~amihailo/vrsurvey.html (по состоянию на 5 апреля 2020 г.).
  • Knowledge Quest (Журнал Американской ассоциации школьных библиотекарей), «Сохраните время читателя», https://knowledgequest.aasl.org/save-the-time-of-the-reader/ (по состоянию на 5 апреля 2020).
  • Колледж Густава Адольфа, США, https://folkelore.blog.gustavus.edu/2019/10/10/library-matters-libraries-matter-infrastructure-part-one/ 


LinkedIn


  • Адриано Силва, старший библиотекарь и специалист по информационным технологиям, Biblioteca Pública Municipal do Porto / Публичная библиотека Порту, Португалия — Отлично! Я люблю это! Специально часть “реклама”
  • Дженнифер Клоссон, техник библиотеки в программе READ города Сан-Диего по обучению грамоте, США. Есть ли у автоматических библиотек те же самые пять законов?
  • Салман Хайдер — Да, конечно.Эти пять законов являются фундаментальными руководящими принципами библиотечного дела, которые по-прежнему актуальны в современных беспилотных библиотеках, а также в отношении цифровых ресурсов. Для беспилотных библиотек более актуален вариант пяти законов, данный моим Майклом Горманом, который также описан в статье блога Librarianship Studies.
  • Флорика Кампеану, Ricercatore/technologo presso Istituto Nazionale Di Economia Agraria, Италия — Все библиотеки, без библиотекарей или с одним или тысячами библиотекарей, полезны для своих читателей/пользователей.Ранганатан и его последователи сосредотачиваются на них
  • Виктория Франку, библиотекарь Центральной университетской библиотеки Бухареста, Бухарест, Румыния — Законы Ранганатана по-прежнему действуют и будут действовать всегда. Я помню даму из Финляндии, представлявшую доклад по этому поводу на международной конференции двадцать лет назад. Знаменательно, что мы сейчас обсуждаем пять правил, не так ли?
  • Дурайсами Гнанасекаран, библиотекарь Анандского института высоких технологий. Каким бы ни был формат контента/услуг, предоставляемых в библиотеках, не имеет значения, укомплектована библиотека или нет, пять законов SRR применяются всегда, начиная с Пяти законов. являются фундаментальными руководящими принципами библиотечного дела, как правильно указал Салман Хайдер.
  • Читра Карунанаяке, менеджер по библиотечному обслуживанию, репатриационный госпиталь Конкорд, библиотека, Университет Монаш, Сидней, Австралия. Прежде чем я начал заниматься в библиотеке, я прочитал «Пять законов» Ранганатана, и это вдохновило меня начать свою карьеру в библиотечном деле. Я думаю, что эти законы по-прежнему действуют и применимы к любой библиотеке.
  • Чампика Махантеге, библиотекарь Национального института управления бизнесом (NIBM), Шри-Ланка — Очень полезная информация…
  • Виджая Виджаяпрабхакар, администратор библиотеки последипломной библиотеки Виджая, Университет Аннамалая, Бангалор, Индия — [LinkedIn] — Да, конечно, эти законы очень ценны и применимы ко всем видам библиотек
  • Олугбенга Чарльз Оке, сертифицированный специалист в области архивов и информации, Нигерийская фондовая биржа (NSE), Нигерия. Я бы скорее назвал эти законы принципами, на которых основываются услуги, предоставляемые библиотекарями и информатиками.Эти принципы очень ценны даже в этом столетии.
  • Тревор Сихосана, старший библиотекарь в Кейптауне, библиотека Скоттсдене, Университет Квазулу-Натал, Кейптаун, Южная Африка. Спустя десять лет после того, как я прочитал о них в колледже, я до сих пор ссылаюсь на них как на основу того, как мы предоставляем службу, особенно во времена, когда я чувствую себя сорванным.
  • Ратемо Мозес, библиотекарь Университета Кисии, Кения. Мне нравятся законы, они вдохновили меня заняться той карьерой, которой я занимаюсь.Благодаря Ранганатану.
  • Ума Магесвари Кришнан, директор библиотеки Малайского университета, Куала-Лумпур, Малайзия — Очень ценная информация.
  • Мари Томлин, LSC и менеджер электронных ресурсов в Нортумберленде, Университет Нортумбрии, Северный Ситон, Нортумберленд, Соединенное Королевство — Это чрезвычайно интересно. Я занят изучением информатики MSc. Я буду изучать эти законы дальше.
  • Тобулайефа Ариайе, библиотекарь, Государственный университет дельта-информации Access International Limited (NG), Нигерия — Пять законов библиотечного дела являются основой, на которой строится вся деятельность библиотекаря/информатика.
  • Веллингтон Соко, библиотекарь Педагогического колледжа Домаси, Малави. Действительно, краеугольный камень библиотеки.
  • Донна Келлион, библиотекарь по цифровой грамотности в библиотеках Регионального совета Маккея, Университет Чарльза Стерта, Маккей, Австралия. Я не считаю, что законы требуют пересмотра, кроме термина «книги». Независимо от того, находятся ли ресурсы, к которым мы направляем наших пользователей, в печатном виде, открыты онлайн или скрыты в недрах базы данных, мы все равно должны направлять их к их «книге».
  • Сабрина Миллер, Публичная библиотека Эдмонтона, Канада — «Библиотека — это растущий организм» — безусловно! Вот почему они не устарели, пока мы находим творческие, инновационные способы оставаться актуальными в служении нашим сообществам. Мы больше не только о книгах!


18 Кодекс США § 2257 – Требования к ведению учета | Кодекс США | Закон США

Ссылки в тексте

Для даты вступления в силу этого подраздела, указанного в подразд. (f)(4)(A), см. раздел 312 Pub.L. 101–647, указанная в качестве даты вступления в силу поправки 1990 г., примечание ниже.

Поправки

2006 г. — Подразд. (а). Паб. L. 109–248, §502(a)(1), добавлено «цифровое изображение, цифровое или компьютерное изображение реального человека, изображение» после «видеозапись».

Подразд. (е)(1). Паб. Законодательство L. 109–248, §502(a)(2), добавлено в конце: «В этом абзаце термин «копия» включает каждую страницу веб-сайта, на которой появляются материалы, описанные в подразделе (a)».

Подразд. (е)(5). Паб. Л.109–248, §502(a)(3), добавлен абз. (5).

Подразд. (час). Паб. L. 109–248, §502(a)(4), добавлен пп. (h) и вычеркнут бывший подпункт. (h), в котором определены «фактическое поведение откровенно сексуального характера», «документ, удостоверяющий личность», «производит» и «исполнитель».

2003 — Подразд. (г)(2). Паб. L. 108–21, § 511 (a) (1), заменено «этой главы или главы 71» на «этого раздела».

Подразд. (ч)(3). Паб. L. 108–21, §511(a)(2), после слова «видеокассета» добавлено «созданное компьютером изображение, цифровое изображение или изображение».

Подразд. (я). Паб. L. 108–21, §511 (a) (3), заменены «не более 5 лет» на «не более 2 лет» и «10 лет» на «5 лет».

1994 — пп. (е), (ж). Паб. Л. 103–322 вычеркнуты пп. (f) и (g) в соответствии с Pub. л. 100–690. подразд. (f) уполномочил Генерального прокурора издавать правила для выполнения этого раздела и подраздела. (g) определены «фактическое поведение откровенно сексуального характера», «документ, удостоверяющий личность», «производит» и «исполнитель».

1990 — Подразд. (а)(1).Паб. L. 101–647, §301(b), «1 ноября 1990 г.» заменено на «6 февраля 1978 г.».

Подразд. (г). Паб. L. 101–647, §311, замененные абз. (1) и (2) для бывших пар. (1) и (2), которые были по существу одинаковыми и вычеркнуты из п. (3) следующего содержания: «При судебном преследовании любого лица, к которому применяется подпункт (а), за преступление, нарушающее подпункт 2251(а) настоящего раздела, элементом которого является создание визуального изображения несовершеннолетнего участие или помощь другому лицу в совершении откровенно сексуального поведения, в котором этот элемент должен быть установлен путем демонстрации того, что исполнитель по смыслу этого раздела является несовершеннолетним —

«(A) доказательство того, что лицо не соблюдает положения подраздела (a) или (b) настоящего раздела, касающиеся создания и ведения записей, или постановления, изданного в соответствии с ним, создает опровержимую презумпцию того, что такой исполнитель был несовершеннолетним; и

«(B) доказательство того, что лицо не выполнило положения подраздела (e) настоящего раздела в отношении заявления, требуемого этим подразделом, приводит к опровержимой презумпции того, что каждый исполнитель в деле был несовершеннолетним.

Подразд. (е). Паб. L. 101–647, §311, замененные абз. (1) и (2) для бывших пар. (1) и (2), которые были по существу одинаковыми и вычеркнуты из п. (3) следующего содержания: «При любом судебном преследовании лица за правонарушение, нарушающее статью 2252 настоящего раздела, элементом которого является транспортировка, отправка по почте или распространение визуального изображения с использованием несовершеннолетнего, участвующего в откровенно сексуальное поведение, и в котором этот элемент должен быть установлен путем демонстрации того, что исполнитель по смыслу этого раздела является несовершеннолетним, доказательство того, что материал, в котором содержится визуальное изображение, не содержал заявление, требуемое в соответствии с этим разделом создает опровержимую презумпцию того, что такой исполнитель был несовершеннолетним.

Подразд. (е). Паб. L. 101–647, §311, добавлен пп. (f) в отношении незаконных действий и бездействия.

Подразд. (г). Паб. L. 101–647, §311, добавлен пп. (g) в отношении выпуска правил.

Подсек. (Привет). Паб. L. 101–647, §311, добавлены пп. (з) и (и).

Обзор текущего состояния технологий улавливания и хранения диоксида углерода

https://doi.org/10.1016/j.rser.2014.07.093Get rights and content

Abstract

Проблемы глобального потепления и изменения климата вызвали глобальные усилия по концентрация углекислого газа в атмосфере (CO 2 ).Улавливание и хранение двуокиси углерода (CCS) считается важной стратегией для достижения целей по сокращению выбросов CO 2 . В этом документе рассматриваются и обсуждаются различные аспекты CCS, включая современные технологии улавливания CO 2 , разделения, транспортировки, хранения, утечек, мониторинга и анализа жизненного цикла. Выбор конкретной технологии улавливания CO 2 в значительной степени зависит от типа электростанции CO 2 и используемого топлива. Среди этих процессов разделения CO 2 абсорбция является наиболее зрелой и широко применяемой из-за ее более высокой эффективности и более низкой стоимости.Трубопровод считается наиболее жизнеспособным решением для транспортировки больших объемов CO 2 . Среди этих геологических формаций для хранения CO 2 повышенная нефтеотдача является зрелой и практикуется в течение многих лет, но ее экономическая целесообразность для антропогенных источников должна быть продемонстрирована. Растет интерес к хранению CO 2 в соленых водоносных горизонтах из-за их огромной потенциальной емкости, и несколько проектов находятся в стадии разработки для демонстрации его жизнеспособности.Существует множество препятствий для развертывания CCS, в том числе отсутствие четкого экономического обоснования инвестиций в CCS и отсутствие надежных экономических стимулов для поддержки дополнительных высоких капитальных и эксплуатационных затрат на весь процесс CCS.

Ключевые слова

Пост-сгорание

Pre-сгорание

договариваний

CO 2

CO 2 Разделение

Транспорт

Геологическое хранение

Утечка и мониторинг

Рекомендуемые статьи Статьи (0)

Copyright © 2014 Авторы.