ТК РФ Статья 133.1. Установление размера минимальной заработной платы в субъекте Российской Федерации / КонсультантПлюс

ТК РФ Статья 133.1. Установление размера минимальной заработной платы в субъекте Российской Федерации

(введена Федеральным законом от 20.04.2007 N 54-ФЗ)

КонсультантПлюс: примечание.

О выявлении конституционно-правового смысла ч. 1 – 4 ст. 133.1 см. Постановления КС РФ от 11.04.2019 N 17-П, от 16.12.2019 N 40-П.

В субъекте Российской Федерации региональным соглашением о минимальной заработной плате может устанавливаться размер минимальной заработной платы в субъекте Российской Федерации.

Размер минимальной заработной платы в субъекте Российской Федерации может устанавливаться для работников, работающих на территории соответствующего субъекта Российской Федерации, за исключением работников организаций, финансируемых из федерального бюджета.

Размер минимальной заработной платы в субъекте Российской Федерации устанавливается с учетом социально-экономических условий и величины прожиточного минимума трудоспособного населения в соответствующем субъекте Российской Федерации.

Размер минимальной заработной платы в субъекте Российской Федерации не может быть ниже минимального размера оплаты труда, установленного федеральным законом.

Размер минимальной заработной платы в субъекте Российской Федерации обеспечивается:

организациями, финансируемыми из бюджетов субъектов Российской Федерации, – за счет средств бюджетов субъектов Российской Федерации, внебюджетных средств, а также средств, полученных от предпринимательской и иной приносящей доход деятельности;

организациями, финансируемыми из местных бюджетов, – за счет средств местных бюджетов, внебюджетных средств, а также средств, полученных от предпринимательской и иной приносящей доход деятельности;

другими работодателями – за счет собственных средств.

Разработка проекта регионального соглашения о минимальной заработной плате и заключение указанного соглашения осуществляются трехсторонней комиссией по регулированию социально-трудовых отношений соответствующего субъекта Российской Федерации в порядке, установленном статьей 47 настоящего Кодекса.

После заключения регионального соглашения о минимальной заработной плате руководитель уполномоченного органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации предлагает работодателям, осуществляющим деятельность на территории этого субъекта Российской Федерации и не участвовавшим в заключении данного соглашения, присоединиться к нему. Указанное предложение подлежит официальному опубликованию вместе с текстом данного соглашения. Руководитель уполномоченного органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации уведомляет об опубликовании указанных предложения и соглашения федеральный орган исполнительной власти, осуществляющий функции по выработке государственной политики и нормативно-правовому регулированию в сфере труда.

Если работодатели, осуществляющие деятельность на территории соответствующего субъекта Российской Федерации, в течение 30 календарных дней со дня официального опубликования предложения о присоединении к региональному соглашению о минимальной заработной плате не представили в уполномоченный орган исполнительной власти субъекта Российской Федерации мотивированный письменный отказ присоединиться к нему, то указанное соглашение считается распространенным на этих работодателей со дня официального опубликования этого предложения и подлежит обязательному исполнению ими. К указанному отказу должны быть приложены протокол консультаций работодателя с выборным органом первичной профсоюзной организации, объединяющей работников данного работодателя, и предложения по срокам повышения минимальной заработной платы работников до размера, предусмотренного указанным соглашением.

В случае отказа работодателя присоединиться к региональному соглашению о минимальной заработной плате руководитель уполномоченного органа исполнительной власти субъекта Российской Федерации имеет право пригласить представителей этого работодателя и представителей выборного органа первичной профсоюзной организации, объединяющей работников данного работодателя, для проведения консультаций с участием представителей сторон трехсторонней комиссии по регулированию социально-трудовых отношений соответствующего субъекта Российской Федерации. Представители работодателя, представители выборного органа первичной профсоюзной организации и представители указанной трехсторонней комиссии обязаны принимать участие в этих консультациях.

Копии письменных отказов работодателей от присоединения к региональному соглашению о минимальной заработной плате направляются уполномоченным органом исполнительной власти субъекта Российской Федерации в соответствующий территориальный орган федерального органа исполнительной власти, уполномоченного на осуществление федерального государственного контроля (надзора) за соблюдением трудового законодательства и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права.

(в ред. Федеральных законов от 18.07.2011 N 242-ФЗ, от 28.06.2021 N 220-ФЗ)

КонсультантПлюс: примечание.

О выявлении конституционно-правового смысла ч. 11 ст. 133.1 см. Постановления КС РФ от 11.04.2019 N 17-П, от 16.12.2019 N 40-П.

Месячная заработная плата работника, работающего на территории соответствующего субъекта Российской Федерации и состоящего в трудовых отношениях с работодателем, в отношении которого региональное соглашение о минимальной заработной плате действует в соответствии с частями третьей и четвертой статьи 48 настоящего Кодекса или на которого указанное соглашение распространено в порядке, установленном частями шестой – восьмой настоящей статьи, не может быть ниже размера минимальной заработной платы в этом субъекте Российской Федерации при условии, что указанным работником полностью отработана за этот период норма рабочего времени и выполнены нормы труда (трудовые обязанности).

Открыть полный текст документа

С 1 января 2021 года минимальный размер оплаты труда составляет 12 792 рубля | Правительство Республики Крым

Соответствующий федеральный закон подписан Президентом России Владимиром Путиным

С 1 января 2021 года минимальный размер оплаты труда составляет 12 792 рубля. Федеральным законом «О внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации» внесены изменения в статью 1 Федерального закона от 19 июня 2000 года № 82-ФЗ «О минимальном размере оплаты труда».

Минимальный размер оплаты труда на очередной год устанавливается федеральным законом в текущем году и исчисляется исходя из величины медианной заработной платы, рассчитанной федеральным органом исполнительной власти, осуществляющим функции по формированию официальной статистической информации о социальных, экономических, демографических, экологических и других общественных процессах в Российской Федерации, за предыдущий год.

С 2021 года соотношение минимального размера оплаты труда и медианной заработной платы устанавливается в размере 42 процентов. Соотношение МРОТ и медианной заработной платы пересматривается не реже одного раза в пять лет исходя из условий социально-экономического развития Российской Федерации. МРОТ на очередной год устанавливается в размере не ниже величины прожиточного минимума трудоспособного населения в целом по Российской Федерации на очередной год и не ниже МРОТ, установленного на текущий год. 

Исчисление медианной заработной платы осуществляется на основании методики, определяемой федеральным органом исполнительной власти, осуществляющим функции по формированию официальной статистической информации о социальных, экономических, демографических, экологических и других общественных процессах в Российской Федерации.

Справка: В соответствии со ст. 133 Трудового кодекса Российской Федерации минимальный размер оплаты труда устанавливается одновременно на всей территории Российской Федерации федеральным законом и не может быть ниже величины прожиточного минимума трудоспособного населения.

Минимальный размер оплаты труда, установленный федеральным законом, обеспечивается организациями, финансируемыми из федерального бюджета: 
– за счет средств федерального бюджета, внебюджетных средств, а также средств, полученных от предпринимательской и иной приносящей доход деятельности, организациями, финансируемыми из бюджетов субъектов Российской Федерации,
– за счет средств бюджетов субъектов Российской Федерации, внебюджетных средств, а также средств, полученных от предпринимательской и иной приносящей доход деятельности, организациями, финансируемыми из местных бюджетов,

– за счет средств местных бюджетов, внебюджетных средств, а также средств, полученных от предпринимательской и иной приносящей доход деятельности, другими работодателями,
– за счет собственных средств.

Месячная заработная плата работника, полностью отработавшего за этот период норму рабочего времени и выполнившего нормы труда (трудовые обязанности), не может быть ниже минимального размера оплаты труда.

По информации пресс-службы Министерства труда и социальной защиты РК

Администрация муниципального образования г. Бодайбо и района. О минимальном размере оплаты труда

26 апреля 2021 г.

О минимальном размере оплаты труда

Минимальный размер оплаты труда (МРОТ) применяется для регулирования оплаты труда и определения размеров пособий по временной нетрудоспособности, по беременности и родам, а также для иных целей обязательного социального страхования.

Право работника на получение заработной платы не ниже МРОТ гарантируется ТК РФ, в соответствии со ст. 133 ТК РФ утвержденный МРОТ действует на территории всей страны и не может быть менее прожиточного минимума трудоспособного населения.

МРОТ прописан в Федеральном законе “О минимальном размере оплаты труда” от 19.06.2000 N 82-ФЗ и подлежит ежегодной индексации.

МРОТ на очередной год устанавливается федеральным законом в текущем году и исчисляется исходя из величины медианной заработной платы, рассчитанной Росстатом за предыдущий год. Проект федерального закона об установлении МРОТ на очередной год подлежит обсуждению с Российской трехсторонней комиссией по регулированию социально-трудовых отношений в порядке, предусмотренном трудовым законодательством. МРОТ на очередной год устанавливается в размере не ниже величины прожиточного минимума трудоспособного населения в целом по РФ на очередной год и не ниже МРОТ, установленного на текущий год.

Федеральным законом от 29.12.2020 N 473-ФЗ “О внесении изменений в отдельные законодательные акты Российской Федерации” установлен минимальный размер оплаты труда с 1 января 2021 года в сумме 12 792 рубля в месяц.

В соответствии со статьей 133.1 Трудового кодекса РФ в субъекте РФ региональным соглашением может устанавливаться размер минимальной заработной платы, не распространяющийся на организации, финансируемые из федерального бюджета. Размер минимальной заработной платы в субъекте РФ не может быть ниже МРОТ, установленного федеральным законом.

Месячная заработная плата работника, полностью отработавшего за этот период норму рабочего времени и выполнившего нормы труда (трудовые обязанности), не может быть ниже минимального размера оплаты труда (статья 133 ТК РФ).

Разъясняем, что в случае, если работодателем при расчете заработной платы применяется меньший размер районного коэффициента, Вы вправе обратиться в прокуратуру города с заявлением о принятии мер прокурорского реагирования, а также обратиться с жалобой в Государственную инспекцию труда в Иркутской области (и.о. руководителя–Данилина Л.И., адрес: ул. Софьи Перовской, д. 30, г. Иркутск).

Информация подготовлена с использованием справочной информации, собранной специалистами КонсультантПлюс.

 

И.о. прокурора города

младший советник юстиции Э.И. Шафиков

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Радиочастотная термокоагуляция под контролем стереоэлектроэнцефалографии (RF-TC под контролем SEEG) при лекарственно-устойчивой фокальной эпилепсии: результаты 10-летнего опыта – Бурдиллон – 2017 – Эпилепсия

В то время как принципы стереотаксической хирургии были впервые введены в начале 20 века , 1 разработка и применение этой концепции в нейрохирургии произошло во второй половине этого столетия. 2, 3 Вскоре после этого появилась идея использовать эту технику для лечения повреждений с помощью радиочастотных (RF) волн, и первая статья, сообщающая об этом Эффект на эпилепсию был опубликован в 1965 году.4 Первоначально лечение эпилепсии не было основной целью этой процедуры, которая была направлена ​​на лечение неуправляемых поведенческих расстройств путем выборочной амигдалотомии. Было предложено несколько методов поражения, но использование радиочастотного нагрева остается наиболее популярным из-за его внутренних преимуществ5. традиционная хирургия при мезиальной височной эпилепсии (MTLE).7-9 Однако из-за довольно неутешительных результатов этой техники в MTLE по сравнению с результатами традиционной хирургии, от этой техники почти полностью отказались. Эти ранние результаты были получены в ходе процедур единичного поражения под руководством неинвазивных исследований, которые мы начали в 2004 году10 для повторного исследования результатов стереотаксической хирургии при лечении фокальной эпилепсии с использованием стереофонической электроэнцефалографии (SEEG) записи иктальной активности для управления радиочастотной термокоагуляцией (RF-TC). ).12 Этот метод предлагает следующие несколько преимуществ13: (1) термокоагуляция может быть нацелена на зону начала припадка, очерченную записями SEEG; (2) множественные поражения могут быть выполнены между соседними контактами электродов SEEG; (3) электроды, используемые для выполнения термокоагуляции, имплантированы для SEEG, так что выполнение термо-SEEG не увеличивает хирургический риск, связанный с имплантацией электродов как таковой; (4) термо-SEEG может предшествовать функциональное картирование через кортикальную стимуляцию, тем самым предотвращая возникновение неврологического дефицита после поражения; и (5) процедура не требует анестезии.

С момента первой публикации RF-TC под контролем SEEG> 10 лет назад, большинство исследований, 14, 15, за исключением недавнего ретроспективного анализа 89 невыбранных случаев, 16 были сосредоточены на обнадеживающих результатах в коротких сериях пациентов с пороками развития коры головного мозга ( MCD), которые трудно поддаются хирургическому вмешательству.

В настоящем исследовании мы сообщаем о когорте из 162 последовательных пациентов, которые прошли RF-TC под контролем SEEG, чтобы лучше оценить безопасность процедуры и ее влияние на контроль приступов и возможные факторы, включая факторы, связанные с эпилепсией, а также связанные с процедурой факторы, которые могут быть связаны с этими результатами.17

Материалы и методы

Пациенты

Все включенные пациенты прошли RF-TC под контролем SEEG в неврологической и нейрохирургической больнице им. Пьера Вертхаймера, Лионский университет, Франция, с 01/2003 по 12/2013.

Все они страдали лекарственно-устойчивой фокальной эпилепсией и прошли предоперационное обследование I фазы, которое включало долгосрочное видео-ЭЭГ-мониторинг кожи головы, нейропсихологическое тестирование с высоким разрешением 1.5Т (до 2007 г.) или 3Т магнитно-резонансная томография (МРТ) и метаболическая томография 18F-фтордезоксиглюкоза-позитронно-эмиссионная томография (FDG-PET). Некоторым пациентам также была проведена иктальная однофотонная эмиссионная компьютерная томография (ОФЭКТ) и магнитно-источникная визуализация интериктальной пароксизмальной активности с использованием магнитоэнцефалографии (МЭГ).

Долгосрочный внутричерепный мониторинг ЭЭГ с использованием инвазивного исследования фазы II SEEG был проведен у всех пациентов этого исследования либо потому, что данные, полученные в ходе неинвазивных исследований фазы I, не были достаточно согласованы, чтобы предложить прямое хирургическое вмешательство, либо потому, что эпилепсия была вызвана MCD, плохо доступным для хирургической резекции для которых RF-TC под контролем SEEG может представлять собой паллиативный терапевтический вариант.18

В конце исследования SEEG возможности для RF-TC под контролем SEEG систематически обсуждались в соответствии как с локализацией эпилептической зоны, так и с данными функционального картирования во время коллегиального заседания. Пациенты считались подходящими, когда вся или большая часть эпилептической зоны была доступна для RF-TC (процедура, направленная на предотвращение возможного хирургического вмешательства) и когда эпилептическая сеть, хотя и односторонняя, была широко распространена или включала красноречивые или глубокие и недоступные области ( вариант паллиативного лечения, когда операция была невозможна).Когда RF-TC не давал результатов, эквивалентных ожидаемым после обычной операции, включая временные улучшения, операция по эпилепсии проводилась в течение первого года после SEEG.

Стандартные протоколы утверждения, регистрации и согласия пациентов

Пациенты были проинформированы о целях и рисках записи SEEG, функционального картирования с помощью корковой стимуляции, RF-TC и подписали письменное согласие. У детей согласие было получено от родителей.В соответствии с французским законодательством, публикация данных, собранных анонимно для этого исследования, которые не повлияли на рутинное ведение пациентов, не требовали декларирования или представления в совет по этике исследований и не требовали информированного согласия пациента.

Выбор площадок термо-СЭЭГ

Процедура

SEEG подробно описывалась в предыдущих публикациях.10, 11 Всем пациентам была проведена постимплантационная МРТ, на которой были видны все электроды и их контакты.Участок записи SEEG считался подходящим для RF-TC, если биполярные записи через два соседних контакта одного и того же электрода, расположенные в кортикальном сером веществе на постимплантационной МРТ, демонстрировали либо спайк-волновые разряды, либо быструю картину низкой амплитуды в начале судороги. Каждый выбранный участок для RF-TC под контролем SEEG сначала был протестирован с помощью низко- и высокочастотных биполярных электрических стимуляций между двумя соседними контактами с нарастающей интенсивностью до максимум 3 мА. Сайт был признан мишенью RF-TC при условии, что во время стимуляции не возникало неврологических побочных эффектов.Это правило не применялось только к двум пациентам с катастрофическим развитием эпилепсии, которым была проведена RF-TC, несмотря на двигательные симптомы, спровоцированные стимуляцией (см. Осложнения).

Порядок работы

RF-TC, управляемый SEEG, состоял из RF-TC, передаваемых между двумя смежными контактами, расположенными в каждой выбранной цели. В течение 10–20 с использовалось напряжение 50 В / сила тока 120 мА, что вызывало повышение локальной температуры до 78–82 ° C и поражение около 100 мм ³ на мишень.19 Когда несколько RF-TC проводились на одной и той же дорожке электрода, это приводило к сливающимся очагам, как показано на рисунке 1. Во время процедуры RF-TC пациенты проходили клиническую оценку в реальном времени у невролога. Контроль активности SEEG проводили сразу после RF-TC. Удаление электродов было выполнено в конце процедуры (за исключением трех пациентов, у которых требовалась дополнительная запись для оценки влияния RF-TC на судороги), и пациенты были выписаны через 24 часа клинического наблюдения по поводу эпилепсии. отделение.

После многократной RF-TC МРТ, выполненной при лобно-фокальной корковой дисплазии.

Система генератора повреждений представляла собой модель RFG-3, произведенную Radionics (Radionics Medical Products, Берлингтон, Массачусетс, США), а электроды были произведены Dixi (Dixi Medical, Безансон, Франция). Электроды имели от 5 до 18 контактов, размеры каждого контакта составляли 2 мм в длину и 0,8 мм в диаметре (расстояние между контактами 1.5 мм).

Продолжение

Частота приступов и возможные побочные эффекты процедуры RF-TC под контролем SEEG проспективно собирались через 2 месяца, 12 месяцев, а затем один раз в год после RF-TC под контролем SEEG. Во время каждого визита спонтанные жалобы пациентов на нарушения памяти, внимания и речи оценивались и дополнялись обычными тестами в рамках неврологической оценки. Систематической нейропсихологической оценки не проводилось.После минимального периода наблюдения в течение 2 месяцев хирургическое вмешательство по эпилепсии было предложено пациентам, у которых не прекратились приступы после РЧ-ТС под контролем SEEG и у которых соотношение между риском послеоперационного дефицита и ожидаемым исходом приступов считалось благоприятным в соответствии с окончательное заключение дооперационной оценки, включая SEEG.

Результаты

Первичным результатом было отсутствие приступов через 2 месяца и через 1 год после RF-TC под контролем SEEG. Все пациенты, перенесшие операцию по поводу эпилепсии в течение первого года наблюдения, были классифицированы как не избавившиеся от приступов через 1 год, включая тех, у кого не было приступов через 2 месяца после RF-TC под контролем SEEG, но которые в конечном итоге перенесли операцию по эпилепсии. .

Вторичным результатом была оценка респондентов. Пациенты были классифицированы как ответившие, если снижение частоты приступов составило ≥50% по сравнению с 3-месячным периодом, предшествующим SEEG, и как неответчики, если нет. Для этого результата данные были проанализированы с использованием подхода с переносом последнего наблюдения, в котором пациенты, перенесшие операцию по поводу эпилепсии в течение первого года наблюдения, могли считаться ответившими на лечение, если они достигли снижения частоты приступов на ≥50% по сравнению с исходным уровнем ранее. операция.

Послеоперационное наблюдение за пациентами, которым была проведена RF-TC под контролем SEEG перед традиционной хирургической резекцией зоны начала припадка, составляло не менее 2 лет, и их исход оценивался с использованием классификации Энгеля.20

Статистический анализ

Исходные клинические характеристики (пол пациента, пациенты, возраст и продолжительность эпилепсии), боковое и анатомическое расположение поражения (лобное, височное, теменное, затылочное, островное и многодолевое), данные МРТ и количество участков RF-TC сравнивались между пациентами без приступов и без приступов, а также между респондентами и не респондентами с использованием хи-квадрат или точного критерия Фишера и тестов Стьюдента t или тестов Манна-Уитни, когда это было необходимо.Характеристики МРТ были разделены на четыре группы: отрицательные результаты МРТ, склероз гиппокампа, фокальная корковая дисплазия и другие поражения. Взаимодействие между ответом на RF-TC и этими переменными дополнительно оценивали с использованием модели логистической регрессии, в которой только значимые предикторы при p <0,1 сохранялись в окончательной модели с уровнем значимости, установленным на p <0,05.

Анализ выживаемости Каплана-Мейера использовался для расчета вероятности отсутствия припадков в различные моменты времени.Статистика реализована на Matlab R2011a v7.12.0 (MathWorks, Inc., Натик, Массачусетс, США).

Результаты

Исходные характеристики пациентов

С 2003 по 2013 год 162 пациента (72 женщины и 90 мужчин) прошли RF-TC под контролем SEEG в нашем отделении. Средний возраст составлял 28 ± 12 лет (стандартное отклонение [SD]; диапазон 4-59). Средняя продолжительность заболевания составила 24 ± 11 (стандартное отклонение) лет (диапазон 4–58).

У пятидесяти пяти пациентов была височная эпилепсия; 107 человек страдали вневисочной эпилепсией. В последней группе эпилептогенная зона, по оценке SEEG, была расположена в лобной доле у ​​46 пациентов, в теменной доле у ​​18, в коре островка у 8 и в затылочной доле у ​​6. Двадцать два пациента. имел мультифокальную эпилепсию, и у пяти пациентов происхождение оставалось неизвестным.

Как показано в таблице 1, МРТ была нормальной у 55 пациентов и показала эпилептогенное поражение у 107 пациентов.

Таблица 1. Данные МРТ

Данные МРТ (n = 162)
МРТ-отрицательная эпилепсия	55
Очаговая корковая дисплазия	44
Склероз гиппокампа	26
Пососудистая	8
DNET / ганглиоглиома	6
Неверное форматирование	6
Гетеротопия	5
Клубень	5
Посттравматический	3
Постинфекционные	2
Кавернома	2

Согласно окончательному заключению дооперационной оценки, включая SEEG, 61 пациенту была назначена операция по поводу эпилепсии (в том числе 2 – для радиохирургии гамма-ножом).

Как показано на блок-схеме (рис. 2), результат через 2 месяца был доступен для 162 процедур. Пятьдесят пациентов (27%) получили пользу от другой процедуры в течение года после RF-TC (47 перенесли традиционную кортэктомию, одному сделали операцию гамма-ножом, а у 2 была проведена вторая RF-TC под контролем SEEG с последующим наблюдением <1 года. ).

Блок-схема.

Эффективность

Больные без припадков

Через два месяца после RF-TC под контролем SEEG у 25% (n = 41) пациентов приступы исчезли.Пятьдесят пациентов прошли новую процедуру (рис. 1) до 1 года наблюдения. Результаты анализа намерения лечиться через 12 месяцев после процедуры показали, что у 7% (n = 11) пациентов не было припадков. Стоит отметить, что пять пациентов, классифицированных как неэффективные RF-TC, которые перенесли операцию в течение первого года после RF-TC под контролем SEEG, не имели приступов до операции.

Респонденты

респондеров (то есть пациенты с улучшением эпилепсии> 50%) составили 67% (n = 108) пациентов через 2 месяца после RF-TC под контролем SEEG.Поскольку только у 6 из 50 пациентов, перенесших еще одну процедуру в течение первого года после RF-TC под контролем SEEG, улучшение не произошло, мы выполнили анализ с переносом последнего наблюдения. Через 12 месяцев 48% (n = 78) пациентов ответили на лечение.

Факторы, влияющие на эффективность

Данные

МРТ и продолжительность эпилепсии, которые, как известно, являются важными факторами, влияющими на результаты хирургического лечения эпилепсии, а также количество коагуляций во время RF-TC под контролем SEEG, напрямую связанное с объемом поражения, были рассмотрены как потенциальные факторы, влияющие на эффективность.Статистически значимой разницы в эффективности между этими тремя параметрами через 12 месяцев не было, учитывая анализ последнего наблюдения, перенесенный на будущее.

Однако мы обнаружили статистически значимую связь между анатомическим расположением SEEG RF-TC и результатами. Когда процедура затрагивала затылочную область, вероятность того, что пациент ответит на лечение через 12 месяцев, была значительно выше (p = 0,007, отношение шансов [OR] 6,8237, 95% доверительный интервал [CI] 1.4–65,5).

Безопасность

Шесть (3,2%) из 186 процедур привели к побочным эффектам, которые были классифицированы в зависимости от продолжительности (временный или постоянный) и ожидаемого (ожидаемого или нет) симптомов (таблица 2). Все неврологические нарушения RF-TC после проведения SEEG, кроме одного, были временными; четверо из этих шести пациентов полностью выздоровели от своих неврологических нарушений. Ни у одного пациента не наблюдалось увеличения частоты приступов.

Таблица 2.Осложнения после термо-SEEG

	Место ответственной термокоагуляции	Вид дефицита	Длительность дефицита	Ожидаемый дефицит
Пациент 1	Центральный район	Плечо-лицевой паралич	Переходный процесс	Ожидается
Пациент 2	Центральный район	Паралич кисти	Навсегда	Ожидается
Пациент 3	Парацентральная долька	Паралич голеностопного сустава	Навсегда	Ожидается
Пациент 4	Insula	Ощущение песка во рту	Переходный процесс	Неожиданно
Пациент 5	SMA	Гемипарез	Переходный процесс	Неожиданно
Пациент 6	Крышка лобная левая	Частичная афазия	Переходный процесс	Неожиданно

Пациенты 1 и 2 продемонстрировали кратковременный двигательный дефицит после электростимуляции, выполняемой между контактами, подходящими в качестве мишеней. Эти два пациента были проинформированы о рисках двигательного дефицита RF-TC под контролем SEEG, но сохранили свой выбор пройти RF-TC под контролем SEEG. У этих двух пациентов было несколько фокальных моторных припадков в день, и соотношение риска и пользы считалось приемлемым. В одном случае двигательный дефицит RF-TC под контролем SEEG был временным (полное выздоровление через 6 месяцев), тогда как в другом дефицит восстановился только частично.

Дефицит RF-TC под контролем SEEG у пациента 3 был усилением ранее существовавшего дефицита.У нее действительно наблюдалось обострение двигательного дефицита во время электростимуляции, но поскольку соответствующий электродный контакт был идеально расположен в зоне иктального начала, коагуляция, тем не менее, была проведена с согласия пациента. Паралич голеностопного сустава был частичным, и у пациента по-прежнему наблюдается незначительный двигательный дефицит мышц тыльного сгибания стопы через 1 год при ненормальной ходьбе.

Пациент 4 заметил ощущение песка во рту через 2 дня после процедуры RF-TC под контролем SEEG.Этот симптом, который не был замечен медперсоналом и самим пациентом во время сеанса стимуляции, исчез через 3 месяца.

Области, вызывающие дефицит у пациентов 5 и 6, было трудно оценить клинически во время стимуляции. Поражения RF-TC могли быть ответственны за локальный отек, охватывающий большую площадь, чем та, которая исследовалась с помощью электростимуляции во время записи видео-SEEG у этих двух пациентов.

Продолжение

Долгосрочное наблюдение респондентов

У респондентов через 1 год наблюдения (рис.3), у которых не проводилось никакого другого хирургического вмешательства (n = 42), средний период наблюдения составил 5,4 года (от 2 до 10 лет). 58% пациентов (n = 24) сохранили свой статус. Из 42% пациентов, которые не считались оставшимися респондентами, 16% были потеряны для последующего наблюдения. Средняя задержка ухудшения эпилептического статуса составила 3,5 года (от 2 до 6 лет). Через 10 лет 13% пациентов остались ответчиками.

Анализ Каплана-Мейера респондентов через 1 год.

Несколько процедур RF-TC под руководством SEEG

Семь из 24 процедур RF-TC под контролем SEEG были предприняты, потому что коагуляция иктальной зоны после первой процедуры считалась слишком ограниченной (из-за слишком ограниченной пространственной выборки фокуса). Напротив, 17 других множественных процедур были выполнены с явной целью выполнения второй RF-TC под контролем SEEG, поскольку обычная операция определенно не подходила.Мы сравнили в последней группе из 17 пациентов результат второй процедуры у 10 пациентов, у которых через 12 месяцев после первой процедуры улучшилось состояние, и у тех, у кого этого не произошло (n = 7). Вероятность улучшения после второй процедуры была значительно выше у пациентов, у которых улучшилось состояние после первой процедуры (p = 1,2 × 10 ^-5 , t -val = 7,5). Все пациенты, кроме одного, у которых было улучшение после первой процедуры, ответили на лечение после второй.

Хирургия после RF-TC под контролем SEEG – Прогностическая ценность RF-TC под контролем SEEG

Девяносто одному пациенту была проведена традиционная операция по поводу эпилепсии после RF-TC под контролем SEEG.Поскольку все хирургические процедуры были выполнены> 2 месяцев после RF-TC под контролем SEEG, мы использовали 2-месячный результат после RF-TC под SEEG, чтобы оценить, может ли результат этой процедуры быть прогностическим фактором успеха хирургического вмешательства при эпилепсии. . Мы обнаружили высокую долю истинных положительных результатов (n = 41) и несколько ложных срабатываний (n = 3). Положительная прогностическая ценность ответа на лечение через 2 месяца после RF-TC под контролем SEEG и классификация по шкале Энгеля I или II после операции составила 93%. Ложноотрицательные (n = 26) и истинно отрицательные (n = 21) были в одном диапазоне, что приводит к низкой отрицательной прогностической ценности (40%). Таким образом, отсутствие ответа на лечение является ненадежным индикатором для прогнозирования исхода операции (таблица 3).

Таблица 3. Таблица сопряженности

	Благоприятный исход операции	Неблагоприятный исход операции
Благоприятный исходный исход RF-TC	41	3
Неблагоприятный исходный исход ТК РФ	26	21

Обсуждение

Наши результаты, собранные на большой выборке за 10-летний период, подтверждают, что RF-TC под контролем SEEG является безопасным методом, 9 во многих случаях эффективным. Более двух третей пациентов показали кратковременное улучшение, и 48% из них ответили на лечение через 1 год наблюдения. Через 10 лет 13% пациентов сохранили этот статус.

У пациентов с лекарственно-устойчивой эпилепсией вероятность достижения отсутствия приступов при последующем лечении противоэпилептическими препаратами невысока.21, 24 Некоторые результаты позволяют предположить, что до 16% этих пациентов могут избавиться от приступов через 12 месяцев после начала приема нового препарата. , и это, а также сокращение изъятий на 50–99% произошло еще в 21%.22 Тем не менее, эти результаты были основаны на когортах, которые также включали пациентов с первичной генерализованной эпилепсией, и не принимали во внимание причины неудач. 23 Таким образом, решающее значение имеют альтернативные методы лечения, и RF-TC под контролем SEEG может, таким образом, рассматриваться как основной вариант лечения. паллиативное лечение у пациентов, которым не подходит обычное хирургическое вмешательство. В отличие от других паллиативных методов лечения, таких как стимуляция блуждающего нерва (снижение на 30–63% при> 50% приступов) 28, 29 или глубокая стимуляция головного мозга переднего ядра таламуса (снижение на 54% при> 50% приступов) , 29 RF-TC под контролем SEEG – это фокальное лечение, избирательно нацеленное на эпилептогенную зону (как и радиохирургия).30, 31 Лазерная термическая абляция (LTA) под контролем МРТ является альтернативным вариантом для выполнения очагового термического поражения. Хотя количество опубликованных исследований использования LTA при эпилепсии остается ограниченным и сосредоточено в основном на височно-мезенальных структурах и перивентрикулярной гетеротопии, 31–34 этот подход может представлять собой полезный терапевтический вариант. По сравнению с RF-TC под контролем SEEG, основное ограничение этого стереотаксического подхода LTA состоит в том, что невозможно получить внутричерепную запись в рамках той же стереотаксической процедуры для нацеливания на эпилептогенную зону. Более того, LTA может выполняться только при однократном проникновении зонда, так что множественные поражения на отдельных участках требуют использования нескольких зондов, каждый из которых является очень дорогостоящим. Напротив, размер поражения, полученный с помощью LTA, может быть больше, чем размер, достигаемый с помощью RF-TC, что можно рассматривать как важную дополнительную ценность для некоторых пациентов. В целом, оба подхода могут дополнять друг друга, особенно у пациентов с временным улучшением после RF-TC, у которых LTA может позволить увеличить размер термического поражения.

Ограничение нашей работы связано с тем, что в течение 10-летнего периода исследования мы наблюдали изменения в нашей практике. Действительно, в течение первых лет RF-TC под контролем SEEG, как правило, предлагалась большому количеству пациентов, почти как стандарт для всех односторонних эпилепсий. Таким образом, в 2003 г. 77,8% всех пациентов, обследованных с помощью SEEG (n = 14/18), лечились с помощью RF-TC под контролем SEEG, в том числе 43% – с височной эпилепсией. Напротив, только 38% всех пациентов, обследованных с помощью SEEG (n = 13/35), прошли RF-TC под контролем SEEG в 2013 году, и все они страдали вневисочной эпилепсией.Результаты RF-TC при височной эпилепсии постепенно считаются более низкими, чем ожидаемые после передней височной лобэктомии. За тот же период мы выполнили кортикальную резекцию у пяти пациентов, у которых не было приступов после RF-TC, в первую очередь потому, что данные SEEG предполагали, что эпилептогенная сеть значительно превышала объем поражения RF-TC. В соответствии с прогрессивной эволюцией нашей практики, хирургическое вмешательство при эпилепсии больше не проводится пациентам, у которых после RF-TC под контролем SEEG не происходит приступов припадков.

При постоянном дефиците 1,1% и преходящих побочных эффектах 2,4% RF-TC под контролем SEEG может считаться самой безопасной процедурой хирургического лечения лекарственно-устойчивой фокальной эпилепсии. Относительно трех пациентов, у которых возник неожиданный неврологический дефицит после RF-TC, можно предложить разные объяснения. Во-первых, отек в объеме, превышающем объем мишени, при котором стимуляция заключила, что RF-TC под контролем SEEG будет безопасным, может объяснить неожиданный временный дефицит.Во-вторых, стимуляция областей, где индуцированное клиническое нарушение трудно проверить, имеет плохую прогностическую ценность в отношении дефицита RF-TC после SEEG.

Модификация противоэпилептической лекарственной терапии у респондентов обычно не проводилась в течение года после RF-TC под контролем SEEG. Таким образом, пациенты класса I Энгеля через 1 год могут рассматриваться как пациенты, у которых эпилептическая сеть была повреждена в достаточной степени, чтобы стать чувствительными к лекарствам.

Единственным значимым прогностическим фактором эффективности RF-TC под контролем SEEG было затылочное расположение цели.Вероятно, это связано с функционально высоким риском традиционной хирургии в этой области, что приводит к проведению SEEG RF-TC в ограниченных эпилептогенных зонах. Хотя исходная частота приступов, включая частоту фокальных припадков с вторичной генерализацией, может быть важным предиктором, мы не включили эту переменную в анализ, потому что изменение частоты приступов после RF-TC анализировалось в процентах (0–24 %; 25–49%, 50–74%, 75–99%, 100%), независимо от абсолютного значения исходной частоты приступов.Хотя количество наших пациентов было слишком ограниченным, чтобы провести надлежащий статистический анализ результатов RF-TC на основе SEEG, необработанные данные предполагают более высокую эффективность через 12 месяцев для дизэмбриопластических нейроэпителиальных опухолей (DNET) / ганглиоглиомы (n = 6, 83%). без приступов и 100% ответивших через 12 месяцев). Таким образом, RF-TC под контролем SEEG кажется особенно подходящим в качестве паллиативного лечения лекарственно-устойчивой эпилепсии, связанной с этими поражениями, когда они плохо доступны для хирургии.

Некоторые имплантации электродов SEEG были разработаны в соответствии с апостериорной ошибочной гипотезой о локализации эпилептогенного очага, поэтому для RF-TC можно было использовать только один электрод (часто расположенный на границе поля исследования). Следовательно, область второй процедуры RF-TC, управляемой SEEG, сильно отличалась от первой, и результаты второй процедуры RF-TC, управляемой SEEG, не зависели от результатов предыдущей процедуры. И наоборот, когда первоначальная имплантация была основана на правильной гипотезе о локализации эпилептогенного фокуса и привела к диагностике мультифокальной иктальной зоны начала или фокальной, но не доступной для хирургии зоны, обе процедуры RF-TC под контролем SEEG имели подобная картина и улучшение в первые недели после первой RF-TC под контролем SEEG оказались предикторами хорошего результата второй процедуры.Более того, мы показали, что улучшение в первые месяцы после RF-TC под контролем SEEG является прогностическим, с высокой прогностической ценностью (93%), хорошего исхода после традиционной кортэктомии у пациентов, подходящих для операции. Таким образом, контроль приступов через 2 месяца после RF-TC под контролем SEEG теперь обычно принимается во внимание в качестве терапевтического теста в нашей повседневной деятельности перед любым хирургическим решением. SEEG, как правило, является золотым стандартом для исследований фазы II из-за низкого уровня сложности и высокой способности исследовать глубокие области по сравнению с субдуральными сеточными электродами.34–37. В то время как классический подход франко-итальянской школы заключается в выполнении резекционной хирургии через несколько недель после SEEG, 38 других бригад проводят операцию во время абляции электродов. Однако RF-TC под контролем SEEG оказался подходом с низкой заболеваемостью для прогнозирования последующего результата резекции и, таким образом, может привести к отсроченной резекционной операции через несколько недель после SEEG. Помимо ситуации с эпилептогенной зоной, доступной для полного или субтотального поражения RF-TC, но с локализацией, влекущей за собой высокий риск функционального дефицита после операции по эпилепсии (т.например, перивентрикулярная гетеротопия или инсулярная иктальная зона начала…), RF-TC под контролем SEEG может быть основным терапевтическим вариантом, когда задействована большая эпилептическая сеть (мультифокальные иктальные начала), недоступная для хирургического вмешательства. Множественные поражения, выполненные в отдаленных местах такой сети, могут привести к ее функциональному нарушению. Хотя, по нашему опыту, такой подход не приводит к длительному избавлению от припадков, может произойти значительное улучшение. В случае рецидива приступа повторение RF-TC под контролем SEEG может быть хорошим вариантом, с тем преимуществом, что данные, полученные во время повторного SEEG, предоставляют информацию о возможной модификации эпилептической сети, которая может помочь определить оптимальную цель. .

В заключение следует отметить, что благоприятное соотношение риска и пользы RF-TC под контролем SEEG по сравнению с традиционным хирургическим вмешательством и другими паллиативными методами лечения предполагает расширение показаний к RF-TC под контролем SEEG, либо для пациентов, для которых операция является рискованной, либо даже нет. выполнимо, или как прогностический тест перед резекционной операцией.

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет конфликта интересов по поводу данной статьи. Мы подтверждаем, что ознакомились с позицией журнала по вопросам, связанным с этической публикацией, и подтверждаем, что данный отчет соответствует этим руководящим принципам.

Плюсы и минусы МРТ / МРЗ в сверхвысоком поле для человеческого приложения

https://doi.org/10.1016/j.pnmrs.2018.06.001Получить права и контент

Основные

•

Магниты размером с человека теперь достигли 7T для клинических приложений МРТ.

•

Исследовательские магнитно-резонансные системы человека достигли 10,5 Тл, на горизонте – 11,7 Тл.

•

Более высокие магнитные поля повсеместно повышают чувствительность МРТ и МРТ.

•

Такие проблемы, как неоднородность радиочастотного поля и нагрев тканей, могут препятствовать получению высококачественных изображений.

•

Некоторые приложения особенно выигрывают от сильных магнитных полей за счет повышенной контрастности.

Реферат

Магнитно-резонансная томография и спектроскопические методы широко используются на людях как для клинической диагностики, так и в таких областях фундаментальных исследований, как когнитивная нейровизуализация.В последние годы стали доступны новые системы магнитно-резонансной томографии человека, работающие в статических магнитных полях 7 Тл или выше (частота протонов ≥300 МГц). Визуализация объектов размером с человека на таких высоких частотах представляет несколько проблем, включая неоднородные радиочастотные поля, артефакты повышенной восприимчивости и более высокое депонирование радиочастотной энергии в ткани. На другой стороне шкалы – увеличение отношения сигнал / шум или контраст / шум, которые позволяют визуализировать более тонкие структуры и обнаруживать меньшие физиологические эффекты.В этом обзоре представлен обзор некоторых из последних методологических разработок в области МРТ / МРС сверхвысокого поля человека, а также связанных с ними клинических и научных приложений. Особое внимание уделяется методам, которые особенно выигрывают от изменения физических характеристик в сильных магнитных полях, включая методы визуализации с взвешиванием по восприимчивости и фазового контраста, визуализацию с X-ядрами, МР-спектроскопию, визуализацию CEST, а также функциональную МРТ. Кроме того, будут обсуждены более общие методологические разработки, такие как параллельная передача и коррекция движения, которые необходимы для использования всего потенциала более высоких магнитных полей, и будет представлен обзор соответствующих физиологических соображений воздействия сильного магнитного поля человека.

Ключевые слова

MRI

MRS

Сверхвысокое поле

7Tesla

Human

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

© 2018 Авторы. Опубликовано Elsevier BV

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

Микроструктура и механические свойства пленок Zr – Si – N, полученных с помощью высокочастотного распыления: Journal of Vacuum Science & Technology A: Vol 20, No.

3

ZrN and ZrSiN Пленки были приготовлены в аппарате для высокочастотного распыления, который имеет пару мишеней, обращенных друг к другу (так называемое высокочастотное распыление).Пленки осаждались на кремниевые пластины без приложения смещения или нагрева подложки, чтобы исследовать только эффект добавления кремния к пленкам нитрида переходного металла. Содержание циркония, азота и кремния в пленках определяли с помощью электронно-зондового микроанализатора. Помимо рентгеновской дифракции, были проведены исследования просвечивающей электронной микроскопии. Для наблюдения с помощью просвечивающей электронной микроскопии с высоким разрешением использовался просвечивающий электронный микроскоп автоэмиссионного типа, который обеспечивает двухточечное разрешение 0.1 нм. Образцы наблюдали как параллельно, так и перпендикулярно поверхности пленки, что представляло собой вид в плоскости и поперечный разрез соответственно. Чтобы исследовать взаимосвязь между механическими свойствами и микроструктурой пленок, твердость измеряли с помощью системы наноиндентирования при комнатной температуре. Нагрузка была выбрана так, чтобы глубина отпечатка не превышала 60 нм (не более 5% толщины пленки), чтобы можно было пренебречь влиянием подложки. Твердость пленок увеличивается с небольшими добавками Si, достигая максимального значения 35 ГПа примерно при 3 ат.% Si. Тенденция к росту столбчатых зерен была наиболее сильной вокруг этого состава, тогда как зерна становились равноосными выше 5 ат. % Si. Пленки, содержащие 12,8% Si и показавшие наименьшую твердость 18 ГПа, состоят из зерен нанокристаллов. Присутствие нанокристаллов ZrN, внедренных в Si3N4, в настоящей работе не наблюдалось. Механизм упрочнения из-за добавления небольшого количества Si в ZrN в настоящее время не может быть определен. Размер зерна и остаточное напряжение могут вносить незначительный вклад в упрочнение.Постулируется возможность упрочнения твердого раствора из-за атомистической деформации, такой как наличие атомов азота в интерстициальных узлах или других точечных дефектах, и ее следует изучить дополнительно.

Ингибиторы FLT3 при остром миелоидном лейкозе | Журнал гематологии и онкологии

1.

Rowe JM, Tallman MS. Как я лечу острый миелоидный лейкоз. Кровь. 2010. 116 (17): 3147–56.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

2.

Li YXQ, Lv N, Wang L, Zhao H, Wang X, Guo J, Chen C, Li Y, Yu L. Клинические последствия исследований метилирования ДНК по всему геному при остром миелоидном лейкозе. J Hematol Oncol. 2017; 10 (1): 41.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

3.

CY-C HY-C, Lin C-C, Kuo Y-Y, Hou H-A, Tzeng Y-S, Kao C-J, Chuang P-H, Tseng M-H, Hsiao T-H, Chou W-C, Tien H-F. Отдельные биологические последствия мутации Asxl1 и ее роли в лейкемогенезе выявлены с помощью модели нокаутированных мышей.J Hematol Oncol. 2017; 10 (1): 139.

Артикул CAS Google ученый

4.

Hackl HAK, Wieser R. Молекулярные и генетические изменения, связанные с резистентностью к терапии и рецидивом острого миелоидного лейкоза. J Hematol Oncol. 2017; 10 (1): 51.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

5.

Qin Y-ZWY, Xu L-P, Zhang X-H, Chen H, Han W, Chen Y-H, Wang F-R, Wang J-Z, Chen Y, Mo X-D, Zhao X-S, Chang Y-J, Liu K-Y, Huang X-J.Динамика уровней транскрипта RUNX1-RUNX1T1 после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток позволяет прогнозировать рецидив у пациентов с острым миелоидным лейкозом t (8; 21). J Hematol Oncol. 2017; 10 (1): 44.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

6. Сайгин

ГУ. Новые методы лечения острого миелоидного лейкоза. J Hematol Oncol. 2017; 10 (1): 93.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

7.

Stone RMMP, Larson RA, Capdeville R. Midostaurin: его одиссея от открытия до утверждения для лечения острого миелоидного лейкоза и развитого системного мастоцитоза. Blood Adv. 2018; 2 (4): 444–53.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

8.

Hatcher JMWE, Sim T, Stone RM, Liu S, Griffin JD, Gray NS. Открытие высокоэффективного и селективного ингибитора pan-FLT3 инденоиндолона 1 типа. ACS Med Chem Lett. 2016; 7 (5): 476–81.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

9.

Галлогли ММЛХ, Купер Б.В. Мидостаурин: новое терапевтическое средство для пациентов с острым миелоидным лейкозом с мутацией FLT3 и системным мастоцитозом. Adv Hematol. 2017; 8 (9): 245–61.

CAS Статья Google ученый

10.

Nguyen BWA, Young DJ, Ma H, Li L, Levis M, Brown P, Small D.Активирующие мутации FLT3 проявляют дифференциальную чувствительность к множественным ингибиторам тирозинкиназы. Oncotarget. 2017; 8 (7): 10931–44.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

11.

FR MM, Halfter H, Matsumura I, Schmidt R, Muller C, Gruning W, Kratz-Albers K, Serve S, Steur C, Buchner T, Kienast J, Kanakura Y, Berdel WE, Serve H. Мутации Flt3 от пациентов с острым миелоидным лейкозом вызывают трансформацию клеток 32D, опосредованную путями Ras и STAT5.Кровь. 2000. 96 (12): 3907–14.

Google ученый

12.

Лю Т. И., Сабато П., Гоббуру СП, Грир Дж. М., Райт Дж. Дж., Смит Б. Д., Пратц К. В., Рудек М. А.. Рекомендации по дозировке сорафениба при остром миелоидном лейкозе на основе зависимости экспозиция-FLT3. Clin Trans Sci. 2018; 11 (4): 435–43.

Артикул CAS Google ученый

13.

Мэтью НРБФ, Браун Л., О’Салливан Д., Томас С., Уотерхаус М., Мюллер Т.А., Ханке К., Тароми С., Апостолова П., Иллерт А.Л., Мельчингер В., Дюкесн С., Шмитт-Графф А., Оссвальд L, Yan KL, Weber A, Tugues S, Spath S, Pfeifer D, Follo M, Claus R, Lubbert M, Rummelt C, Bertz H, Wasch R, Haag J, Schmidts A, Schultheiss M, Bettinger D, et al.Сорафениб способствует активности трансплантата против лейкемии у мышей и людей за счет продукции IL-15 в клетках лейкемии, мутантных по FLT3-ITD. Nat Med. 2018; 24 (3): 282–91.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

14.

Lange AJE, Lange J, Dworacki G, Nowak D, Simiczyjew A, Mordak-Domagala M, Sedzimirska M. Противорецидивный эффект сорафениба после аллоТГСК связан с повышенной аллореактивностью и накоплением CD8 + PD-1 + (CD279 +) лимфоциты в костном мозге.PLoS One. 2018; 13 (1): e01

.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

15.

Zhao WZT, Qu B, Wu X, Zhu X, Meng F, Gu Y, Shu Y, Shen Y, Sun Y, Xu Q. Сорафениб индуцирует апоптоз в клетках HL60, ингибируя опосредованное Src-киназой фосфорилирование STAT3 . Противораковые препараты. 2011. 22 (1): 79–88.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

16.

Feldmann FSB, Martens S, Vandenabeele P, Fulda S. Сорафениб подавляет терапевтическую индукцию некроптоза в клетках острого лейкоза. Oncotarget. 2017; 8 (40): 68208–20.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

17.

Muppidi MRPS, Griffiths EA, Thompson JE, Ford LA, Freyer CW, Wetzler M, Wang ES. Терапия децитабином и сорафенибом при остром миелоидном лейкозе с мутантным FLT-3 ITD. Клин Лимфома Миелома Лейк. 2015; 15 (Прил.): S73–9.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

18.

Ravandi FAM, Grunwald MR, Rudek MA, Rajkhowa T., Richie MA, Pierce S, Daver N, Garcia-Manero G, Faderl S, Nazha A, Konopleva M, Borthakur G, Burger J, Kadia T, Dellasala S, Andreeff M, Cortes J, Kantarjian H, Levis M. Исследование фазы 2 азацитидина плюс сорафениба у пациентов с острым миелоидным лейкозом и внутренней тандемной дупликационной мутацией FLT-3. Кровь. 2013. 121 (23): 4655–62.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

19.

Махди AJGD, Чакраборти М., Рис А., Коннер С., Уилсон К., Реймент Р., Альварес С. Успешное молекулярно-целевое лечение ОМЛ во время беременности азацитидином и сорафенибом без неблагоприятных исходов для плода. Br J Haematol. 2018; 180 (4): 603–4.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

20.

Uy GLMS, Лауманн К., Маркучи Дж., Чжао В., Левис М.Дж., Клепин HD, Баер М.Р., Пауэлл Б.Л., Вестервельт П., ДеАнджело Д.Д., Сток В., Сэнфорд Б., Блюм В.Г., Блумфилд CD, Стоун Р.М., Ларсон Р.А. Исследование фазы 2, включающее сорафениб в химиотерапию пожилых людей с острым миелоидным лейкозом с мутацией FLT3: CALGB 11001. Blood Adv. 2017; 1 (5): 331–40.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

21.

Röllig CSH, Hüttmann A, Noppeney R, Müller-Tidow C, Krug U, Baldus CD, Brandts CHKV, Einsele H, Krämer A, Schäfer-Eckart K, Neubauer A, Burchert A, Giagounidis A, Krause SW, Mackensen A, Aulitzky W., Herbst R, Hänel M, Kiani A, Frickhofen N, Kullmer J, Kaiser U, Link H, Geer T, Reichle A, Junghanß C, Repp R, Heits F, Dürk H, Hase J, Klut IM, Illmer T, Bornhäuser M, Schaich M, Parmentier S, Görner M, Thiede C, von Bonin M, Schetelig J, Kramer M, Berdel WE, Ehninger G.Добавление сорафениба по сравнению с плацебо к стандартной терапии у пациентов в возрасте 60 лет и младше с впервые диагностированным острым миелоидным лейкозом (SORAML): многоцентровое, фаза 2, рандомизированное контролируемое исследование. Ланцет Онкол. 2015; 16 (16): 1691–9.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

22.

Tschan-Plessl AHJ, Heim D, Medinger M, Passweg JR, Gerull S. Синергетический эффект сорафениба и cGvHD у пациентов с FLT3-ITD + AML высокого риска позволяет долгосрочно контролировать заболевание после аллогенной трансплантации.Ann Hematol. 2015; 94 (11): 1899–905.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

23.

Сюань ЛВИ, Хуанг Ф, Цзян Э, Дэн Л, Ву Б, Фан З, Лян Х, Сюй Н, Йе Дж, Лин Р, Инь Ц, Чжан И, Сунь Дж, Хан М, Хуан Х , Лю К. Влияние сорафениба на исходы пациентов с острым миелоидным лейкозом FLT3-ITD, перенесших аллогенную трансплантацию гемопоэтических стволовых клеток. Рак. 2018; 124 (9): 1954–63.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

24.

Brunner AMLS, Fathi AT, Wadleigh M, Ho VT, Collier K, Connolly C, Ballen KK, Cutler CS, Dey BR, El-Jawahri A, Nikiforow S, McAfee SL, Koreth J, Deangelo DJ, Alyea EP, Antin JH , Спитцер Т.Р., Стоун Р.М., Сойфер Р.Дж., Чен Ю.Б. Трансплантация гемопоэтических клеток с поддерживающей терапией сорафенибом и без нее для пациентов с острым миелоидным лейкозом FLT3-ITD в первой полной ремиссии. Br J Haematol. 2016; 175 (3): 496–504.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

25.

Battipaglia GRA, Massoud R, El Cheikh J, Jestin M, Antar A, Ahmed SO, Rasheed W., Shaheen M, Belhocine R, Brissot E, Dulery R, ​​Eder S, Giannotti F, Isnard F, Lapusan S, Rubio MT, Vekhoff A, Aljurf M, Legrand O, Mohty M, Bazarbachi A. Эффективность и возможность сорафениба в качестве поддерживающего агента после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток для Fms-подобной тирозинкиназы 3-мутировавшего острого миелоидного лейкоза. Рак. 2017; 123 (15): 2867–74.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

26.

Ruella MKS, Shestova O, Fraietta JA, Qayyum S, Zhang Q, Maus MV, Liu X, Nunez-Cruz S, Klichinsky M, Kawalekar OU, Milone M, Lacey SF, Mato A, Schuster SJ, Kalos M, June CH , Гилл С., Васик М.А. Добавление ингибитора BTK ибрутиниба к Т-клеткам рецептора химерного антигена против CD19 (CART19) улучшает ответы против лимфомы из клеток мантии. Clin Cancer Res. 2016; 22 (11): 2684–96.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

27.

Metzelder SKST, Lubbert M, Ditschkowski M, Gotze K, Scholl S, Meyer RG, Dreger P, Basara N, Fey MF, Salih HR, Finck A, Pabst T., Giagounidis A, Kobbe G, Wollmer E, Finke J, Neubauer A, Burchert A. Долгосрочная выживаемость пациентов с острым миелоидным лейкозом, леченных сорафенибом, с FLT3-ITD-положительным рецидивом после трансплантации аллогенных стволовых клеток. Eur J Cancer. 2017; 8 (6): 233–9.

Артикул Google ученый

28.

Mendel DBLA, Xin X, Louie SG, Christensen JG, Li G, Schreck RE, Abrams TJ, Ngai TJ, Lee LB, Murray LJ, Carver J, Chan E, Moss KG, Haznedar JO, Sukbuntherng J , Блейк Р.А., Сан Л., Тан Ч, Миллер Т., Ширазиан С., МакМахон Дж., Черрингтон Дж. М..Противоопухолевая активность in vivo SU11248, нового ингибитора тирозинкиназы, нацеленного на фактор роста эндотелия сосудов и рецепторы фактора роста тромбоцитов: определение фармакокинетической / фармакодинамической взаимосвязи. Clin Cancer Res. 2003. 9 (1): 327–37.

CAS PubMed PubMed Central Google ученый

29.

О’Фаррелл АМАТ, Юен Х.А., Нгай Т.Дж., Луи С.Г., Йи К.В., Вонг Л.М., Хонг В., Ли Л.SU11248 – это новый ингибитор тирозинкиназы FLT3 с высокой активностью in vitro и in vivo. Кровь. 2003. 101 (9): 3597–605.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

30.

О’Фаррелл AMFJ, Fiedler W, Serve H, Paquette RL, Cooper MA, Yuen HA, Louie SG, Kim H, Nicholas S, Heinrich MC, Berdel WE, Bello C, Jacobs M, Scigalla P, Мэннинг У.С., Келси С., Черрингтон Дж. М.. Новаторское клиническое исследование фазы I демонстрирует ингибирование фосфорилирования FLT3 с помощью SU11248 у пациентов с острым миелоидным лейкозом.Clin Cancer Res. 2003. 9 (15): 5465–76.

CAS PubMed PubMed Central Google ученый

31.

Yee KWSM, O’Farrell AM, Town AR, McGreevey L, Bainbridge T., Cherrington JM, Heinrich MC. Синергетический эффект SU11248 с цитарабином или даунорубицином на FLT3 ITD-положительные лейкозные клетки. Кровь. 2004. 104 (1): 4202–9.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

32.

Teng CLYC, Hwang WL, Tsai JR, Liu HC, Hwang GY, Hsu SL. Эффекторные механизмы индуцированной сунитинибом остановки, дифференцировки и апоптоза клеточного цикла G1 в клетках HL60 и KG-1 человека острого миелоидного лейкоза. Ann Hematol. 2013. 92 (3): 301–13.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

33.

Fiedler WKS, Kebenko M, Janning M, Krauter J, Schittenhelm M, Gotze K, Weber D, Gohring G, Teleanu V, Thol F, Heuser M, Dohner K, Ganser A, Dohner H, Schlenk RF .Исследование фазы I / II сунитиниба и интенсивной химиотерапии у пациентов старше 60 лет с острым миелоидным лейкозом и активирующими мутациями FLT3. Br J Haematol. 2015. 169 (5): 694–700.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

34.

Fiedler WSH, Dohner H, Schwittay M, Ottmann OG, O’Farrell AM, Bello CL, Allred R, Manning WC, Cherrington JM, Louie SG, Hong W, Brega NM, Massimini G, Scigalla P, Бердел В.Е., Хоссфельд Д.К.Исследование фазы 1 SU11248 для лечения пациентов с рефрактерным или резистентным острым миелоидным лейкозом (AML) или пациентов, не поддающихся традиционной терапии этого заболевания. Кровь. 2005. 105 (3): 986–93.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

35.

Маршалл Дж.Л.К., Дикен Дж., Бхаргава П., Фогельзанг, штат Нью-Джерси, Ризви Н., Лухтала Т., Бойлан С., Дордал М., Робертсон П., Хокинс М.Дж., Ратейн М.Дж. Фаза I испытания перорально вводимого CEP-701, нового ингибитора тирозинкиназы, связанного с рецептором нейротрофина.Исследуйте новые наркотики. 2005. 23 (1): 31–7.

CAS Статья Google ученый

36.

Levis MAJ, Tse KF, Zheng R, Baldwin BR, Smith BD, Jones-Bolin S, Ruggeri B, Dionne C, Small D. Ингибитор тирозинкиназы, нацеленный на FLT3, цитотоксичен для лейкозных клеток in vitro и in vivo. Кровь. 2002. 99 (11): 3885–91.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

37.

Hexner EOMJ, Prchal J, Roboz GJ, Baer MR, Ritchie EK, Leibowitz D, Demakos EP, Miller C, Siuty J, Kleczko J, Price L, Jeschke G, Weinberg R, Basu T, Pahl HL, Orazi A, Najfeld V, Маркиоли Р., Голдберг Дж. Д., Сильверман Л. Р., Хоффман Р. Исследование повышения дозы лестуртиниба I фазы у пациентов с миелофиброзом. Лимфома лейка. 2015; 56 (9): 2543–51.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

38.

Knapper SBA, Littlewood T, Kell WJ, Agrawal S, Chopra R, Clark R, Levis MJ, Small D.Фаза 2 испытания ингибитора FLT3 лестуртиниба (CEP701) в качестве терапии первой линии для пожилых пациентов с острым миелоидным лейкозом, не подходящим для интенсивной химиотерапии. Кровь. 2006. 108 (10): 3262–70.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

39.

Smith BDLM, Beran M, Giles F, Kantarjian H, Berg K, Murphy KM, Dauses T., Allebach J, Small D. Одноагентный CEP-701, новый ингибитор FLT3, проявляет биологическую и клиническую активность. у пациентов с рецидивирующим или рефрактерным острым миелоидным лейкозом.Кровь. 2004. 103 (10): 3669–76.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

40.

Levis MRF, Wang ES, Baer MR, Perl A, Coutre S, Erba H, Stuart RK, Baccarani M, Cripe LD, Tallman MS, Meloni G, Godley LA, Langston AA, Amadori S, Lewis ID , Наглер А., Стоун Р., Йи К., Адвани А., Доуэр Д., Виктор-Енджейчак В., Юлиуссон Г., Литцов М.Р., Петерсдорф С., Санс М., Кантарджиан Н.М., Сато Т., Треммель Л., Бенсен-Кеннеди Д.М. и др.Результаты рандомизированного исследования спасительной химиотерапии с последующим лечением лестуртинибом у пациентов с мутантным ОМЛ FLT3 при первом рецидиве. Кровь. 2011. 117 (12): 3294–301.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

41.

Knapper SRN, Gilkes A, Hills RK, Gale RE, Cavenagh JD, Jones G, Kjeldsen L, Grunwald MR, Thomas I, Konig H, Levis MJ, Burnett AK. Рандомизированная оценка добавления ингибитора киназы лестуртиниба к химиотерапии первой линии при ОМЛ с мутацией FLT3.Кровь. 2017; 129 (9): 1143–54.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

42.

Griswold IJSL, La Rosee P, Demehri S, Heinrich MC, Braziel RM, McGreevey L, Haley AD, Giese N, Druker BJ, Deininger MW. Влияние MLN518, двойного ингибитора FLT3 и KIT на нормальный и злокачественный гемопоэз. Кровь. 2004. 104 (9): 2912–8.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

43.

Kelly LMYJ, Boulton CL, Apatira M, Li J, Sullivan CM, Williams I, Amaral SM, Curley DP, Duclos N, Neuberg D, Scarborough RM, Pandey A, Hollenbach S, Abe K, Lokker NA, Gilliland DG, Giese NA. CT53518, новый селективный антагонист FLT3 для лечения острого миелолейкоза (AML). Раковая клетка. 2002; 1 (5): 421–32.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

44.

ДеАнджело DJSR, Хини М.Л., Нимер С.Д., Пакетт Р.Л., Клисович Р.Б., Калиджури М.А., Купер М.Р., Лесерф Дж.М., Кароль М.Д., Шенг С., Холфорд Н., Куртин П.Т., Друкер Б.Дж., Генрих М.С.Клинические результаты фазы 1 с тандутинибом (MLN518), новым антагонистом FLT3, у пациентов с острым миелогенным лейкозом или миелодиспластическим синдромом высокого риска: безопасность, фармакокинетика и фармакодинамика. Кровь. 2006. 108 (12): 3674–81.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

45.

Schittenhelm MMKK, Yee KW, Heinrich MC. Ингибитор FLT3 тандутиниб (ранее MLN518) обладает независимым от последовательности синергетическим действием с цитарабином и даунорубицином.Клеточный цикл. 2009. 8 (16): 2621–30.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

46.

Левис М. Мидостаурин одобрен для лечения ОМЛ с мутацией FLT3. Кровь. 2017; 129 (26): 3403–6.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

47.

Walker ARWH, Walsh K, Bhatnagar B, Vasu S, Garzon R, Canning R, Geyer S, Wu YZ, Devine SM, Klisovic R, Blum W., Marcucci G.Мидостаурин, бортезомиб и МЭК при рецидивирующем / рефрактерном остром миелоидном лейкозе. Лимфома лейка. 2016; 57 (9): 2100–8.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

48.

Рамсинг Дж., Вестервельт П., Макбрайд А., Штокерл-Гольдштейн К., Видж Р., Фиала М., Уй Дж., Кашен А., Диперсио Дж. Ф., Аббуд С. Н.. Фаза I исследования кладрибина, цитарабина, гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (режим CLAG), а также мидостаурина и полностью транс-ретиноевой кислоты при рецидивирующем / рефрактерном ОМЛ.Int J Hematol. 2014; 99 (3): 272–8.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

49.

Stone RMFT, Paquette R, Schiller G, Schiffer CA, Ehninger G, Cortes J, Kantarjian HM, DeAngelo DJ, Huntsman-Labed A, Dutreix C, del Corral A, Giles F. Исследование фазы IB исследования Ингибитор киназы FLT3 мидостаурин с химиотерапией у молодых недавно диагностированных взрослых пациентов с острым миелоидным лейкозом. Лейкемия. 2012. 26 (9): 2061–8.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

50.

Stone RMMS, Sanford BL, Laumann K, Geyer S, Bloomfield CD, Thiede C, Prior TW, Dohner K, Marcucci G, Lo-Coco F, Klisovic RB, Wei A, Sierra J, Sanz MA, Brandwein JM, de Witte T, Niederwieser D, Appelbaum FR, Medeiros BC, Tallman MS, Krauter J, Schlenk RF, Ganser A, Serve H, Ehninger G, Amadori S, Larson RA, Dohner H. Мидостаурин плюс химиотерапия острого миелоидного лейкоза с мутацией FLT3. N Engl J Med. 2017; 377 (5): 454–64.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

51.

Kampa-Schittenhelm KMHM, Akmut F, Dohner H, Dohner K, Schittenhelm MM. Хизартиниб (AC220) является мощным ингибитором тирозинкиназы второго поколения класса III, который демонстрирует отчетливый профиль ингибирования в отношении мутантных изоформ-FLT3, -PDGFRA и -KIT. Молочный рак. 2013; 12:19.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

52.

Zarrinkar PPGR, Cramer MD, Gardner MF, Brigham D, Belli B, Karaman MW, Pratz KW, Pallares G, Chao Q, Sprankle KG, Patel HK, Levis M, Armstrong RC, James J, Bhagwat SS .AC220 – это уникальный мощный и селективный ингибитор FLT3 для лечения острого миелоидного лейкоза (AML). Кровь. 2009. 114 (14): 2984–92.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

53.

Альтман Дж. К. Ф. Дж., Пратц К. В., Трон Д., Кортес Дж. Э., Таллман М. С.. Фаза 1 исследования хизартиниба в сочетании с индукционной и консолидационной химиотерапией у пациентов с впервые диагностированным острым миелоидным лейкозом. Am J Hematol.2018; 93 (2): 213–21.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

54.

Sandmaier BMKS, Oran B, Gammon G, Trone D, Frankfurt O. Результаты исследования фазы 1 хизартиниба в качестве поддерживающей терапии у субъектов с острым миелоидным лейкозом в стадии ремиссии после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток. Am J Hematol. 2018; 93 (2): 222–31.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

55.

Кортес JEKH, Форан JM, Гирдаладзе D, Зоделава M, Бортакур G, Гаммон G, Trone D, Armstrong RC, James J, Levis M. Исследование фазы I хизартиниба, вводимого ежедневно пациентам с рецидивирующим или рефрактерным острым миелоидным лейкозом независимо от FMS -подобная тирозинкиназа 3 – статус внутренней тандемной дупликации. J Clin Oncol. 2013. 31 (29): 3681–7.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

56.

Cortes JE, DH и PA.Окончательные результаты фазы 2 открытого исследования эффективности и безопасности монотерапии хизартинибом (AC220) у пациентов старше 60 лет с FLT3 ITD положительным или отрицательным рецидивирующим / рефрактерным острым миелоидным лейкозом. Тезисы ежегодного собрания ASH. 2012; 48: 2012.

Google ученый

57.

Levis MJ, DH, EA PA. Окончательные результаты фазы 2 открытого исследования эффективности и безопасности монотерапии хизартинибом (AC220) у пациентов с FLT3-ITD-положительным или отрицательным рецидивирующим / рефрактерным острым миелоидным лейкозом после второй линии химиотерапии или трансплантации гемопоэтических стволовых клеток.Тезисы ежегодного собрания ASH. 2012; 673.

58.

TM CJE, Schiller GJ, Trone D, Gammon G, Goldberg SL, Perl AE, MarieJP MG, Kantarjian HM, Levis MJ. Фаза 2b: исследование 2 схем дозирования монотерапии хизартинибом при FLT3-ITD-мутированном, рецидивирующем или рефрактерном AML. Кровь. 2018; 132 (6): 598–607.

Google ученый

59.

Cooper TMCJ, Eckroth E, Malvar J, Sposto R, Gaynon P, Chang BH, Gore L, August K, Pollard JA, DuBois SG, Silverman LB, Oesterheld J, Gammon G, Magoon D, Annesley C. , Браун П.А.Фаза I исследования хизартиниба в сочетании с химиотерапией при рецидиве детской лейкемии: терапевтические достижения в исследовании детской лейкемии и лимфомы (TACL). Clin Cancer Res. 2016; 22 (16): 4014–22.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

60.

Kampa-Schittenhelm KMFJ, Haeusser LA, Illing B, Pavlovsky AA, Blumenstock G, Schittenhelm MM. Креноланиб представляет собой ингибитор тирозинкиназы I типа, который ингибирует мутантные изоформы KIT D816, преобладающие при системном мастоцитозе и лейкемии основного фактора связывания.Oncotarget. 2017; 8 (47): 82897–909.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

61.

Циммерман EITD, Буабуннам Дж., Ху С., Орвик С., Робертс М.С., Янке Л.Дж., Рамачандран А., Стюарт К.Ф., Инаба Х., Бейкер С.Д. Креноланиб активен против моделей лекарственно-устойчивого FLT3-ITD-положительного острого миелоидного лейкоза. Кровь. 2013. 122 (22): 3607–15.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

62.

Wang ES RMS, Tallman MS, Walter RB, Eckardt JR, Collins R. Креноланиб, TKI типа I FLT3, можно безопасно комбинировать с индукционной химиотерапией цитарабином и антрациклином, что дает высокие показатели ответа у пациентов с недавно диагностированным острым миелоидным мутантом FLT3. лейкоз (ОМЛ). Кровь. 2016; 128 (22): 1071.

63.

Ван Э.С., MST RMS, Уолтер РБ, Каранес К., Джайн В., Коллинз Р.Х. Низкая частота рецидивов у пациентов младше 60 лет с впервые диагностированным острым миелоидным лейкозом (AML) с мутацией FLT3, получавших химиотерапию креноланибом и цитарабином / антрациклином.Кровь. 2017; 130: 566.

Google ученый

64.

Iyer SP, Jethava Y, Karanes C, Eckardt JR, Collins R. Исследование безопасности спасительной химиотерапии высокими дозами Ara-C / митоксантрона (HAM) и креноланиба FLT3-TKI типа I при первом рецидиве / первичной рефрактерной AML. Кровь. 2016; 128 (22): 3983.

Google ученый

65.

Maro Ohanian HMK, Borthakur G, Kadia TM, Konopleva M, Garcia-Manero G, Estrov Z, Ferrajoli A, Takahashi K, Jabbour EJ, Daver N, Kornblau SM, Wierda WG, Burger JA, Naqvi K , Benton CB, Bose P, Eckardt JR, Ravandi F, Cortes JE.Эффективность ингибитора FLT3 типа I, креноланиба, с идарубицином и высокими дозами Ara-C при многократно рецидивирующем / рефрактерном FLT3 + AML. Кровь. 2016; 128: 2744.

Артикул CAS Google ученый

66.

Jasleen K, Randhawa HMK, Borthakur G, Thompson PA, Konopleva M, Daver N, Pemmaraju N, Jabbour E, Kadia TM, Estrov Z, Ramachandran A, Paradela J, Andreef M, Levis M, Ravandi F , Cortes JE. Результаты исследования фазы II креноланиба у пациентов с рецидивирующим / рефрактерным острым миелоидным лейкозом (Pts) с активирующими мутациями FLT3.Кровь. 2014; 124: 389.

Google ученый

67.

Jetani H, Garcia-Cadenas I, Nerreter T, Thomas S, Rydzek J, Meijide JB, Bonig H, Herr W, Sierra J, Einsele H, Hudecek M. CAR Т-клетки, нацеленные на FLT3, обладают высокой активностью. против FLT3 (-) ITD (+) AML и действуют синергетически с ингибитором FLT3 креноланибом. Лейкемия. 2018; 32 (5): 1168–79.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

68.

Cucchi DGJDB, Kaspers GJL, Janssen J, Ossenkoppele GJ, de Haas V, Zwaan CM, van den Heuvel-Eibrink MM, Philippe J, Csikos T, Kwidama Z, de Moerloose B, de Bont E, Lissenberg-Witte BI, Zweegman S, Verwer F, Vandepoele K, Schuurhuis GJ, Sonneveld E, Cloos J. Аллельное соотношение FLT3-ITD на основе РНК связано с исходом и ответом ex vivo на ингибиторы FLT3 при ОМЛ у детей. Кровь. 2018; 131 (22): 2485–9.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

69.

Mori MKN, Ueno Y, Yamada M, Tanaka R, Saito R, Shimada I, Mori K, Kuromitsu S. Гилтеритиниб, ингибитор FLT3 / AXL, проявляет противолейкемическую активность на мышиных моделях острого миелоидного лейкоза с мутацией FLT3. Исследуйте новые наркотики. 2017; 35 (5): 556–65.

CAS Статья Google ученый

70.

Perl AEAJ, Cortes J, Smith C, Litzow M, Baer MR, Claxton D, Erba HP, SG, Goldberg S, Jurcic JG, Larson RA, Liu C, Ritchie E, Schiller G, Spira AI, Strickland SA, Tibes R, Ustun C, Wang ES, Stuart R, Röllig C, Neubauer A, Martinelli G, Bahceci E, Levis M.Селективное ингибирование FLT3 гильтеритинибом при рецидивирующем / рефрактерном остром миелоидном лейкозе: многоцентровое открытое исследование, проводимое впервые на людях, фаза 1/2. Ланцет Онкол. 2017; 18 (8): 1061–75.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

71.

Usuki KST, Kobayashi Y, Miyamoto T, Iida H, Morita S, Bahceci E, Kaneko M, Kusano M, Yamada S, Takeshita S, Miyawaki S, Naoe T. Клинический профиль гильтеритиниба у японских пациентов с рецидивирующий / рефрактерный ОМЛ – открытое исследование фазы 1.Cancer Sci. 2018; 109 (10): 3235–44.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

72.

Tarabadkar ESTH, Blom A, Parvathaneni U, Olencki T., Nghiem P, Bhatia S. Клиническая польза от ингибиторов тирозинкиназы при метастатической карциноме из клеток Меркеля: серия случаев с участием 5 пациентов. Am J Case Rep. 2018; 19: 505–11.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

73.

vdHT OS. Кабозантиниб в лечении запущенной почечно-клеточной карциномы у взрослых после предшествующей таргетной терапии сосудистым эндотелиальным фактором роста: доказательства и опыт клинических испытаний. Ther Adv Urol. 2018; 10 (3): 109–23.

Артикул CAS Google ученый

74.

Лу JWWA, Liao HA, Chen CY, Hou HA, Hu CY, Tien HF, Ou DL, Lin LI. Кабозантиниб избирательно цитотоксичен для клеток острого миелоидного лейкоза с внутренней тандемной дупликацией FLT3 (FLT3-ITD).Cancer Lett. 2016; 376 (2): 218–25.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

75.

Fathi ATBT, Hernandez D, Amrein PC, Ballen KK, McMasters M, Avigan DE, Joyce R, Logan EK, Hobbs G, Brunner AM, Joseph C, Perry AM, Burke M, Behnan T., Foster J , Бергерон М.К., Моран Дж.А., Рамос А.Ю., Сом Т.Т., Рэй Дж., Фишман К.М., МакГрегор К.Л., Коннолли К., Нойберг Д.С., Левис М.Дж. Кабозантиниб хорошо переносится при остром миелоидном лейкозе и эффективно ингибирует вызывающую резистентность мутацию FLT3 / тирозинкиназного домена / F691.Рак. 2018; 124 (2): 306–14.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

76.

Czardybon WWR, Golas A, Galezowski M, Sabiniarz A, Dolata I, Salwinska M, Guzik P, Zawadzka M, Gabor-Worwa E, Winnik B, Zurawska M, Kolasinska E, Wincza E, Buga Danielewicz M, Majewska E, Mazan M, Dubin G, Noyszewska-Kania M, Jablonska E, Szydlowski M, Sewastianik T, Pula B, Szumera-Cieckiewicz A, Prochorec-Sobieszek M, Madro E, Lech-Maranda Karanda E Тамбурини Дж. И др.Новый двойной пан-PIM / FLT3 ингибитор SEL24 демонстрирует широкий терапевтический потенциал при остром миелоидном лейкозе. Oncotarget. 2018; 9 (24): 16917–31.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

77.

Lee HKKH, Lee IY, Lee J, Lee J, Jung DS, Lee SY, Park SH, Hwang H, Choi JS, Kim JH, Kim SW, Kim JK, Cools J, Koh JS, Song HJ . G-749, новый ингибитор киназы FLT3, может преодолеть лекарственную устойчивость для лечения острого миелоидного лейкоза.Кровь. 2014. 123 (14): 2209–19.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

78.

Li Z, Wang X, Eksterowicz J, Gribble MW Jr, Alba GQ, Ayres M, Carlson TJ, Chen A, Chen X, Cho R, Connors RV, DeGraffenreid M, Deignan JT, Duquette J, Fan П, Фишер Б., Фу Дж., Хуард Дж. Н., Кайзерман Дж., Киган К. С., Ли К., Ли К., Ли Й, Лян Л., Лю В., Лайвли С. Е., Ло М. С., Ма Дж., Макминн Д. Л., Михалик Дж. Т. и др. Открытие AMG 925, двойного ингибитора киназ FLT3 и CDK4 с преимущественным сродством к активированному состоянию FLT3.J Med Chem. 2014. 57 (8): 3430–49.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

79.

Киган К.Л.К., Ли З., Ма Дж., Рагейнс М., Коберли С., Холленбэк Д., Экстерович Дж., Лян Л., Вайднер М., Хуард Дж., Ван Х, Альба Дж., Орф Дж., Ло МС, Чжао С. , Ngo R, Chen A, Liu L, Carlson T, Queva C, McGee LR, Medina J, Kamb A, Wickramasinghe D, Dai K. Доклиническая оценка AMG 925, двойного ингибитора киназы FLT3 / CDK4 для лечения острого миелоидного лейкоза.Mol Cancer Ther. 2014; 13 (4): 880–9.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

80.

Ma HSNB, Duffield AS, Li L, Galanis A, Williams AB, Brown PA, Levis MJ, Leahy DJ, Small D. Ингибитор киназы FLT3 TTT-3002 преодолевает как активирующие мутации, так и мутации устойчивости к лекарствам в FLT3 при острой болезни. миелоидный лейкоз. Cancer Res. 2014. 74 (18): 5206–17.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

81.

млн лет HNB, Li L, Greenblatt S, Williams A, Zhao M, Levis M, Rudek M, Duffield A, Small D. TTT-3002 – новый ингибитор тирозинкиназы FLT3 с активностью против FLT3-ассоциированных лейкозов in vitro и in vivo. . Кровь. 2014. 123 (10): 1525–34.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

82.

Yamaura TNT, Uda K, Ogura H, Shin W, Kurokawa N, Saito K, Fujikawa N, Date T, Takasaki M, Terada D, Hirai A, Akashi A, Chen F, Adachi Y, Ishikawa Y , Хаякава Ф., Хагивара С., Наое Т., Киёи Х.Новый необратимый ингибитор FLT3, FF-10101, демонстрирует превосходную эффективность против клеток AML с мутациями FLT3. Кровь. 2018; 131 (4): 426–38.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

83.

Альварадо Й.К.Х., Лутра Р., Раванди Ф., Бортакур Дж., Гарсия-Манеро Дж., Коноплева М., Эстров З., Андрефф М., Кортес Дж. Э. Лечение ингибитором FLT3 у пациентов с острым миелоидным лейкозом с мутацией FLT3 связано с развитием вторичных мутаций домена FLT3-тирозинкиназы.Рак. 2014; 120 (14): 2142–9.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

84.

Baker SDZE, Wang YD, Orwick S, Zatechka DS, Buaboonnam J, Neale GA, Olsen SR, Enemark EJ, Shurtleff S, Rubnitz JE, Mullighan CG, Inaba H. Появление мутаций поликлонального домена тирозинкиназы FLT3 во время последовательной терапии сорафенибом и сунитинибом при FLT3-ITD-положительном остром миелоидном лейкозе. Clin Cancer Res. 2013. 19 (20): 5758–68.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

85.

Ishiko JMM, Matsumura I, Shibayama H, Sugahara H, Scholz G, Serve H, Kanakura Y. Роли остатков тирозина 845, 892 и 922 в конститутивной активации мутанта мышиного домена киназы FLT3. Онкоген. 2005. 24 (55): 8144–53.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

86.

Dayal NO-TC, Hernandez DE, Sooreshjani MA, Carter-Cooper BA, Lapidus RG, Sintim HO. Двойной ингибитор FLT3 / TOPK с активностью против вторичных мутаций FLT3-ITD эффективно подавляет линии клеток острого миелоидного лейкоза. Future Med Chem. 2018; 10 (7): 823–35.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

87.

He YSL, Xu Y, Fu L, Li Y, Bao X, Fu H, Xie C, Lou L. Комбинированное ингибирование передачи сигналов PI3Kdelta и FLT3 проявляет синергетическую противоопухолевую активность и преодолевает приобретенную лекарственную устойчивость в FLT3 -активированный острый миелоидный лейкоз.Cancer Lett. 2018; 420: 49–59.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

88.

Ouchida ATLY, Geng J, Najafov A, Ofengeim D, Sun X, Yu Q, Yuan J. Синергетический эффект нового ингибитора аутофагии и Quizartinib усиливает гибель раковых клеток. Cell Death Dis. 2018; 9 (2): 138.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

89.

G-CI JH, Nerreter T, Thomas S, Rydzek J, Meijide JB, Bonig H, Herr W, Sierra J, Einsele H, Hudecek M. CAR Т-клетки, нацеленные на FLT3, обладают сильной активностью против FLT3 (-) ITD (+ ) AML и действуют синергетически с ингибитором FLT3 креноланибом. Лейкемия. 2018; 32 (5): 1168–79.

Артикул CAS Google ученый

90.

Topp MSGN, Stein AS, Zugmaier G, O’Brien S, Bargou RC, Dombret H, Fielding AK, Heffner L, Larson RA, Neumann S, Foa R, Litzow M, Ribera JM, Rambaldi A, Шиллер Г., Брюггеманн М., Хорст Х.А., Холланд С., Джиа С., Маниар Т., Хубер Б., Нагорсен Д., Форман С.Дж., Кантарджиан Х.М.Безопасность и активность блинатумомаба для взрослых пациентов с рецидивирующим или рефрактерным острым лимфобластным лейкозом B-предшественником: многоцентровое исследование фазы 2 в одной группе. Ланцет Онкол. 2014. 16 (1): 57–66.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

91.

Лю BSY, Лю Д. Последние разработки в области клинического применения антител к PD-1 и PD-L1 для иммунотерапии рака. J Hematol Oncol. 2017; 10 (1): 174.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

92.

Лю BSY, Лю Д. Клинические испытания CAR-T-клеток в Китае. J Hematol Oncol. 2017; 10 (1): 166.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

93.

Fan MLM, Gao L, Geng S, Wang J, Wang Y, Yan Z, Yu L. Химерные антигенные рецепторы для адоптивной Т-клеточной терапии при остром миелоидном лейкозе. J Hematol Oncol. 2017; 10 (1): 151.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

94.

Diggs LPHE. Применение иммуногистохимических анализов PD-L1 для прогнозирования ответа ингибитора PD-1 / PD-L1. Biomark Res. 2017; 5 (1): 12.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

95.

Zhang CLJ, Zhong JF, Zhang X. Engineering CAR-T клетки. Biomark Res. 2017; 5 (1): 22.

PubMed Статья PubMed Central Google ученый

96.

Цинь ЛЗР, Ли П.Включение функциональных элементов увеличивает противоопухолевую способность CAR Т-клеток. Exp Hematol Oncol. 2017; 6 (1): 28.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

97.

Wei GDL, Wang J, Hu Y, Huang H. Успехи CD19-направленных химерных антиген-рецептор-модифицированных Т-клеток при рефрактерном / рецидивирующем остром лимфобластном лейкозе. Exp Hematol Oncol. 2017; 6 (1): 10.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

98.

Zhang XYY, Fan D, Xiong D. Разработка биспецифических антител и их применение в борьбе с иммунитетом от опухолей. Exp Hematol Oncol. 2017; 6 (1): 12.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

99.

Kantarjian HSA, Gokbuget N, Fielding AK, Schuh AC, Ribera JM, Wei A, Dombret H, Foa R, Bassan R, Arslan O, Sanz MA, Bergeron J, Demirkan F, Lech-Maranda E, Rambaldi A, Thomas X, Horst HA, Bruggemann M, Klapper W, Wood BL, Fleishman A, Nagorsen D, Holland C, Zimmerman Z, Topp MS.Блинатумомаб в сравнении с химиотерапией при запущенном остром лимфобластном лейкозе. N Engl J Med. 2017; 376 (9): 836–47.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

100.

Lichtenegger FSKC, Haubner S, Köhnke T, Subklewe M. Последние разработки в иммунотерапии острого миелоидного лейкоза. J Hematol Oncol. 2017; 10 (1): 142.

PubMed Статья CAS PubMed Central Google ученый

101.

июнь CHOCR, Kawalekar OU, Ghassemi S, Milone MC. CAR-Т-клеточная иммунотерапия рака человека. Наука. 2018; 359 (6382): 1361–5.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

102.

Июнь ЧСМ. Терапия химерными антигенными рецепторами. N Engl J Med. 2018; 379 (1): 64–73.

CAS PubMed Статья PubMed Central Google ученый

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Джои Галло Статистика, фэнтези и новости

	30 июля 2021 г.	New York Yankees активировал LF Joey Gallo.
	29 июля 2021 г.	New York Yankees обменяли RHP Гленна Отто, 2B Джоша Х. Смита, SS Ezequiel Duran и 2B Тревора Ховера на Texas Rangers на LHP Joely Rodriguez, LF Joey Gallo и наличные.
	12 июля 2021 г.	LF Джои Галло назначен в Американскую лигу All-Stars.
	4 ноября 2019 г.	Техасские рейнджеры активировали Джоуи Галло из списка травмированных за 60 дней.
	4 ноября 2019 г.	Техасские рейнджеры активировали Джоуи Галло из списка травмированных за 60 дней.
	4 ноября 2019 г.	Техасские Рейнджерс активировали Джоуи Галло из 60-дневного списка травмированных.
	20 сентября 2019	Texas Rangers перевели Джоуи Галло из 10-дневного списка раненых в 60-дневный список раненых.Восстановление после операции на правом запястье.
	25 июля 2019	Техасские рейнджеры поместили Джоуи Галло в 10-дневный список травмированных с обратной силой по 24 июля 2019 года. Выздоравливающий после операции на правом запястье.
	25 июня 2019	Texas Rangers активировал CF Joey Gallo из 10-дневного списка травмированных.
	19 июня 2019	«Техасские рейнджеры» отправили Джоуи Галло на реабилитацию в «АЗЛ Рейнджерс».
	2 июня 2019 г.	Техасские Рейнджерс поместили Джоуи Галло в список 10-дневных травмированных.Левая косая деформация.
	29 августа 2017 г.	Техасские Рейнджерс активировали Джоуи Галло из списка 7-дневных травмированных.
	22 августа 2017	Texas Rangers поместили 3B Джои Галло в список инвалидов с 7-дневным сроком действия.Сотрясение.
	25 октября 2016 г.	3B Джои Галло назначен на Навегантес-дель-Магалланес.
	11 октября 2016 г.	Техасские Рейнджеры активировали 3B Джои Галло.
	6 октября 2016 г.	Техасские Рейнджерс переназначили 3B Джои Галло в низшие лиги.
	6 сентября 2016 г.	Texas Rangers отозвали 3B Джои Галло из Round Rock Express.
	2 августа 2016	Texas Rangers выбрала 3B Joey Gallo в пользу Round Rock Express.
	26 июля 2016 г.	Техасские Рейнджеры отозвали Джоуи Галло из Раунд Рок Экспресс.
	28 мая 2016 г.	Texas Rangers выбрала 3B Joey Gallo в пользу Round Rock Express.
	23 мая 2016 г.	Техасские Рейнджеры отозвали Джоуи Галло из Раунд Рок Экспресс.
	19 мая 2016 г.	Round Rock Express активировал 3B Joey Gallo из 7-дневного списка инвалидов.
	1 мая 2016 г.	Round Rock Express поместил Джои Галло 3B в список инвалидов с 7-дневным сроком действия.
	21 марта 2016 г.	Texas Rangers выбрала 3B Joey Gallo в пользу Round Rock Express.
	15 октября 2015 г.	Статус состава Джои Галло изменен на Texas Rangers.
	8 октября 2015 г.	Техасские Рейнджерс переназначили 3B Джои Галло в низшие лиги.
	1 сентября 2015 г.	Texas Rangers отозвали 3B Джои Галло из Round Rock Express.
	30 июня 2015 г.	Texas Rangers выбрала 3B Joey Gallo в пользу Round Rock Express.
	29 июня 2015 г.	3B Джои Галло назначен в TEX South Division All-Stars.
	2 июня 2015 г.	Техасские Рейнджерс выбрали контракт Джои Галло с Frisco RoughRiders.
	25 апреля 2015 г.	Статус в составе Джои Галло изменен на Frisco RoughRiders.
	8 апреля 2015 г.	Frisco RoughRiders поместили 3B Джои Галло в список инвалидов с 7-дневным сроком действия.
	23 января 2015 г.	Техасские Рейнджеры пригласили 3B Джои Галло, не входящего в состав, на весеннюю тренировку.
	16 июня 2014 г.	3B Джои Галло назначен в олимпиаду Каролинской лиги.
	8 июня 2014 г.	3B Джои Галло назначен на Фриско Бездельников из Миртл-Бич Пеликанс.
	1 апреля 2014 г.	3B Джои Галло назначен Пеликанам Миртл-Бич из Хикори Кроудадс.
	3 марта 2014 г.	3B Джои Галло назначен в команду «Техасские рейнджеры».
	8 августа 2013 г.	Hickory Crawdads активировал 3B Joey Gallo из 7-дневного списка инвалидов.
	1 августа 2013 г.	Хикори Кроудадс отправил 3B Джои Галло на реабилитацию в AZL Rangers.
	11 июля 2013 г.	Hickory Crawdads поместил 3B Джои Галло в список инвалидов на 7 дней.
	17 июня 2013 г.	3B Джои Галло назначен в SAL North Division All-Stars.
	3 апреля 2013 г.	3B Джои Галло назначен Гикори Кроудадс из индейцев Спокана.
	9 марта 2013 г.	3B Джои Галло назначен в команду «Техасские рейнджеры».
	16 августа 2012 г.	Джоуи Галло назначен индейцам Спокана из AZL Rangers.
	20 июня 2012 г.	Джои Галло назначен на AZL Rangers из Texas Rangers.
	12 июня 2012 г.	Техасские Рейнджерс подписали 3B Джои Галло.

Структура защитного протеазного комплекса нематод H-gal-GP и его сохранение у паразитов аскариды

Abstract

Инфекции паразитами круглых червей являются основной причиной болезней человека и домашнего скота во всем мире и угрозой для глобальной продовольственной безопасности.В настоящее время борьба с болезнями зависит от глистогонных препаратов, к которым аскариды становятся все более устойчивыми. Альтернативным подходом является борьба с вакцинацией, и «скрытые антигены», компоненты кишечника червя, не встречающиеся у инфицированного хозяина, были использованы для производства Barbervax, первой коммерческой вакцины от обитающей в кишечнике нематоды любого хозяина. Здесь мы представляем структуру H-gal-GP, скрытого антигена из Haemonchus contortus , червя Barber’s Pole и основного компонента Barbervax.Мы демонстрируем его новую архитектуру, состав и топологию субъединиц, гибкость и неоднородность с помощью криоэлектронной микроскопии, масс-спектрометрии и моделирования. Важно отметить, что мы демонстрируем, что комплексы с такой же архитектурой присутствуют у других паразитов аскариды Strongylid, включая анкилостомоз человека. Это предполагает общее происхождение и возможность разработки единой вакцины со скрытым антигеном.

Информация об авторе

Паразиты круглые черви вызывают заболевания как среди животных, так и среди людей, включая анкилостомоз (анкилостомоз человека), поражающий более 500 миллионов человек в год, и трихостронгилиды, наносящие значительный вред здоровью животных и продукции животноводческой отрасли во всем мире.Несмотря на их распространенность, многие аспекты роста паразитов аскариды и гомеостаза изучены плохо. Например, мы до сих пор не понимаем, как эти паразиты переваривают свою пищу (часто кровь) и поглощают питательные вещества, чтобы избежать распознавания иммунной системой, не выпуская разрушающие ферменты в кровоток. В этом исследовании мы впервые определили структуру гликопротеинового комплекса Haemonchus , содержащего галактозу (H-gal-GP), и показали, как он действует как эффективный механизм пищеварения, способный улавливать гемоглобин и направлять его в различные ферменты для обработки.Более того, мы впервые показываем, что это сохраняется у других важных паразитов круглых червей (таксономический отряд Strongylida), что указывает на общий механизм пищеварения. Важно отметить, что H-gal-GP является активным ингредиентом вакцины Barbervax, и сохранение этого комплекса среди различных паразитов может открыть новые возможности для разработки универсальной вакцины против этих разрушительных паразитов круглых червей.

Образец цитирования: Scarff CA, Thompson RF, Newlands GFJ, Jamson AH, Kennaway C, da Silva VJ, et al.(2020) Структура защитного протеазного комплекса нематод H-gal-GP и его сохранение у паразитов круглых червей. PLoS Pathog 16 (4): e1008465. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008465

Редактор: Джуди Саканари, Калифорнийский университет, Сан-Франциско, США

Поступила: 3 октября 2019 г .; Принята к печати: 6 марта 2020 г .; Опубликовано: 9 апреля 2020 г.

Авторские права: © 2020 Scarff et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Доступность данных: Крио-ЭМ реконструкции H-gal-GP и H-sialgal-GP депонированы в банке данных EM под кодами доступа EMD-4975 и EMD-4976 соответственно. Координаты PDB для модели H-gal-GP хранятся в банке данных белков под кодом доступа 6ROW.Все остальные наборы данных доступны у авторов по запросу.

Финансирование: Спонсоры не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи. Эта работа была профинансирована Шотландской государственной научно-аналитической службой по вопросам сельского хозяйства и окружающей среды (RESAS) для G.F.J.N. И W.D.S. C.A.S. финансируется грантом WT Institutional Strategic Support Fund Grant (204825 / Z / 16 / Z). Wellcome Trust финансировал R.T. через стипендию для аспирантов (096685 / Z / 11 / Z).Обновление микроскопов Titan Krios и камеры F20 Ceta финансировалось Университетом Лидса (награда UoL ABSL) и Wellcome Trust (108466 / Z / 15 / Z).

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.

Введение

Паразиты круглых червей, особенно виды желудочно-кишечного тракта, являются наиболее важной причиной болезней домашнего скота, поражающих малоимущих людей в мире, вызывая значительное снижение эффективности производства [1, 2] и, как таковые, представляют угрозу для глобальной продовольственной безопасности.Они также являются важными причинами ветеринарных заболеваний в странах с высоким уровнем дохода, которые обходятся австралийской овцеводческой промышленности> 430 миллионов долларов в год [3, 4]. Анкилостомоз, вызываемый анкилостомозом, является одним из наиболее распространенных паразитарных заболеваний человека в мире и вызывает анемию и недоедание среди беднейших слоев населения. Болезнь поражает более 500 миллионов человек в тропических и субтропических регионах мира [5], и 5 миллиардов человек во всем мире подвержены риску заражения [6]. В прошлом паразиты аскариды в значительной степени контролировались антигельминтными препаратами широкого спектра действия, но теперь устойчивость к ним является обычным явлением [7–9].Срочно нужны альтернативные методы борьбы. Одним из подходов является вакцинация, при которой изучается использование скрытых антигенов, компонентов кишечника червя, с которыми иммунная система хозяина не сталкивается напрямую. На сегодняшний день коммерчески доступны только две вакцины от любых паразитов круглых червей любого хозяина (Bovilis Huskvac и Barbervax для овец и коз), а вакцина на основе антигенов, экспрессируемых в кишечнике анкилостомоза, находится в фазе I клинических испытаний [10].

Barbervax – это вакцина со скрытым антигеном, специфичная для Haemonchus contortus , широко известного как червь Barber’s Pole, гематофагная нематода, паразитирующая на сычуге (истинном желудке) овец и коз. Н . contortus – нематодная «Немезида» систем производства мелких жвачных животных в тропических и субтропических регионах мира [11]. Barbervax содержит смесь интегральных мембранных гликопротеиновых антигенов, выделенных из кишечных клеток взрослого человека Haemonchus , с сапонином в качестве адъюванта. Основным компонентом Barbervax является H-gal-GP ( Haemonchus, галактоза, содержащий гликопротеиновый комплекс), который обладает высокой защитой при испытаниях вакцины для овец [12–14].H-gal-GP располагается в просвете щеточной каймы кишечника нематод и переваривает гемоглобин и альбумин овцы, основные компоненты кровяной муки Haemonchus [12-15]. Комбинация SDS-PAGE, N-концевого секвенирования и скрининга библиотеки кДНК показала, что H-gal-GP состоит в основном из семейств двух аспартилпротеаз (PEP 1 или 2), четырех металлопротеаз (MEP 1, 2, 3 или 4) и несколько цистеиновых протеиназ (ЦП) [16–18]. Как денатурированный иммуноген, H-gal-GP обладает гораздо меньшей защитой, что позволяет предположить, что важны конформационные эпитопы или что критический защитный антигенный сайт находится на границе раздела между двумя или более субъединицами [17, 18].Попытки защиты с помощью рекомбинантных форм составляющих ферментов были безуспешными, даже при доставке в комбинации [17, 19, 20]. Barbervax содержит нативный антиген, очищенный от взрослых паразитов.

H-gal-GP тесно связан с другим комплексом Haemonchus , который также является высокопротективным антигеном, H-sialgal-GP [21]. H-gal-GP очищается путем связывания с лектином арахиса, который предпочтительно связывает галактозил (β-1,3) N-ацетилгалактозамин, в то время как H-сиалгал-GP связывается с лектином якалина, который предпочтительно связывает сиалированные версии этого гликана.H-sialgal-GP отличается от H-gal-GP тем, что в нем отсутствует компонент 230 кДа, что, как показало N-концевое секвенирование, содержит MEP 1, 2 и 4 [21]. Однако MEP 1, 2 и 3 были идентифицированы в H-sialgal-GP с помощью ЖХ-МС-МС (таблица S2). Данные о последовательностях предполагают, что другие важные паразитические нематоды, вероятно, содержат комплексы, аналогичные H-gal-GP и H-sialgal-GP, включая Ancylostoma ceylanicum , которая поражает как собак, так и человека, Teladorsagia circusiccta , которая поражает овец и коз, Ostertagia ostertagi , поражающая крупный рогатый скот, и Ascaris suum , поражающая свиней [18].

Учитывая важность H-gal-GP в вакцине со скрытым антигеном Barbervax, мы стремились определить четвертичную структуру комплекса, чтобы сообщить о его функции. Здесь мы раскрываем структуру H-gal-GP с помощью криоэлектронной микроскопии (крио-ЭМ) и используем EM с негативным окрашиванием, чтобы показать, что T . около , O . ostertagi и A . ceylanicum все имеют комплексы с аналогичной общей архитектурой. Выявленная здесь четвертичная структура H-gal-GP предполагает, что она функционирует как эффективный механизм деградации, и показывает, почему рекомбинантные составляющие не являются эффективной вакциной.Его эффективность в качестве иммуногена и сохранение у разных видов дает надежду на создание новых вакцин и ингибиторов против круглых червей, имеющих важное значение для человека и ветеринарии.

Результаты

Крио-ЭМ структура H-gal-GP

Комплекс

H-gal-GP экстрагировали и очищали из детергентных экстрактов мембран Haemonchus contortus с помощью аффинной хроматографии с лектином арахиса, как описано ранее [21]. Крио-ЭМ сетки были подготовлены, как описано в методах, с частицами, показывающими хорошее распределение во льду и низкий уровень агрегации (S1A фиг.).Визуальный осмотр необработанных микрофотографий H-gal-GP показал три различных вида, два вида сбоку и вид с торца, причем полученные классы показали, что эти виды представляли 15%, 30% и 31% частиц соответственно (рис. 1A и S1B. Инжир). Средние двухмерные значения были хорошо определены и демонстрировали четкие особенности вторичной структуры. Трехмерная классификация и уточнение дали карту плотности электромагнитного излучения с глобальным разрешением 4,5 Å с более высоким разрешением в пределах ядра комплекса (рис. 1, рис. S1B, фильм S1 и таблица S1).

Рис. 1. Крио-ЭМ структура H-gal-GP при глобальном разрешении 4,5 Å.

A Типичные средние 2D-класса для двух видов сбоку и с торца. B Типичная область электронной плотности, показывающая наличие плотности для более объемных аминокислот. Плотность ЭМ для H-gal-GP, окрашенная в соответствии с местным разрешением, если смотреть со стороны C и конца D , наложенная на плотность ЭМ из второй карты с глобальным разрешением 6,2 Å (светло-серый), содержащей второе крыло плотности.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008465.g001

После трехмерной классификации стало очевидно, что в наборе данных присутствует значительная неоднородность. Окончательная реконструкция H-gal-GP с глобальным разрешением 4,5 Å (рис. 1) была извлечена из примерно 60% частиц путем классификации с маскированием основной области ядра. Без маскирования была получена вторая реконструкция с глобальным разрешением 6,2 Å, содержащая дополнительную плотность (30% набора данных о частицах; рис. 1 и рис. S1C).Реконструкция показала, что H-gal-GP, насколько нам известно, имеет новую архитектуру, центральное основание с двумя «крыльями» и аркой, дающей начало полости в центре комплекса. Реконструкция имеет длину ~ 260 Å, ширину ~ 110 Å и высоту ~ 150 Å, размер полости составляет приблизительно 60 Å ³ . Основание имеет ряд каналов, соединяющихся с центральной полостью. Два крыла плотности, хотя и похожи, имеют небольшие различия в объеме и форме и имеют значительно более низкое разрешение, чем ядро ​​комплекса.На усредненных двухмерных изображениях крылья менее четко очерчены, чем основание или арка, что позволяет предположить, что они гибкие или композиционно неоднородные, что согласуется с результатами трехмерной классификации. Плохо разрешенная плотность также может быть замечена выступающей из основания в средних значениях класса 2D, которая не разрешена в 3D-реконструкции. Эта плотность более подробно рассматривается ниже.

Обработка данных, полученных из отдельного сбора данных для родственного H-sialgal-GP, дала почти идентичную трехмерную реконструкцию с разрешением ~ 7 Å (см. S1D и S1E Рис.).Таким образом, четвертичная структура H-сиалгал-GP и H-gal-GP очень похожа, что согласуется с сохранением последовательности между комплексами.

Идентификация, моделирование и установка подразделений

Предыдущий анализ компонентов H-gal-GP был проведен с использованием SDS-PAGE и N-концевого секвенирования. Чтобы подтвердить идентичность субъединиц, присутствующих при очистке H-gal-GP и H-sialgal-GP, их анализировали с помощью SDS-PAGE с последующей экстракцией полос геля, триптическим гидролизом и тандемным масс-спектрометрическим анализом жидкостной хроматографии, где это возможно (S2 Рис. и таблица S2).Все MEP, кроме MEP4, были идентифицированы в препаратах H-sialgal-GP, а также PEP1 и PEP2 и цистеиновая протеаза, белок, содержащий домен пептидазы C1A (Genbank: CDJ88569.1) с MEP4, идентифицированный только в H-gal-GP [ 17]. Информация о третичной структуре не доступна ни для одной из субъединиц H-gal-GP, однако поиски BLAST [22] показали, что они демонстрируют значительное сходство последовательностей с ранее решенными кристаллическими структурами других видов. Поэтому моделирование выполнялось с помощью Phyre2, веб-сервера моделирования белков [23], который создавал модели для MEP1, MEP2, MEP3, MEP4, паразитарного пепсиногена (PEP1), аспартил протеазы (PEP2) и белка, содержащего домен CP пептидазы C1A.Полученные модели показали хороший охват первичной последовательности и высокие значения достоверности (таблица S3). Все модели для каждого из MEP были очень похожи (S2, рис.). Консервативность последовательностей между MEP составляет приблизительно 60%, и множественное выравнивание последовательностей показывает, что они имеют высококонсервативные области [18]. Единственное поразительное различие между MEPs состоит в том, что MEP4 имеет N-концевую вставку из примерно 100 остатков, что не может быть смоделировано (таблица S3). Полученные в результате модели гомологии были вставлены в реконструкцию вручную с уточнением твердого тела, которое впоследствии было проведено в UCSF Chimera [24].После стыковки модели были уточнены с помощью гибкой подгонки молекулярной динамики (MDFF) [25]. Обе аспартилпротеазы (PEP1 и PEP2) хорошо вписываются в дугу, которая недостаточно велика для размещения какой-либо из металлопротеаз (рис. 2). Модель PEP1 была прикреплена к карте, поскольку модель для PEP2 была почти идентична. Поскольку все модели MEP были похожи по третичной структуре, четыре копии MEP3 были состыкованы с центральной базой. Подгонка MEP3 к сердцевине H-gal-GP показала очень хорошее согласие с полученной картой (рис. 2).Одиночный КП был размещен с разумной договоренностью в крыле. Плотность EM между плотностью, заполненной моделью PEP1 и моделями MEP3, вероятно, вмещает богатую цистеином область в PEP1, которая не включена в модель PEP1 (остатки 107–143, таблица S3).

Рис. 2. Подбор субъединицы к плотности ЭМ H-gal-GP.

A EM плотность одностороннего H-gal-GP (карта 4,5 Å), сопоставленная с моделями аспартил-протеазы PEP 1 (красный), MEP3 (темно-синий) и цистеиновой протеазы (голубой). Обрезанный вид A через центр комплекса H-gal-GP ( B ) и обрезанный, чтобы показать только два домена MEP3 ( C ). D Карта H-gal-GP при просмотре с основания, показывающая подгонку субъединиц MEP. Подходящие субъединицы комплекса H-gal-GP при взгляде сбоку ( E ) и основания ( F ) и окрашены в красный (PEP1), голубой (цистеиновая протеаза) и оранжевый, синий, зеленый и серый цвета для четырех MEP .

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008465.g002

Масса H-gal-GP ранее оценивалась как приблизительно 1 МДа по калибровке нативных синих гелей [16].Известно, что H-gal-GP сильно гликозилирован, но масса гликанов, оцененная на основе предыдущих исследований [16, 18], и массы субъединиц, стыкованных с плотностью EM, позволяют предположить, что H-gal-GP составляет только приблизительно 0,5 МДа по массе ( см. таблицу S4). Расхождение в расчетах массы для нативных гелей, скорее всего, связано с большой центральной полостью, из-за которой комплекс работает на гелях медленнее, чем более компактная структура той же массы.

Функциональность и локализация H-gal-GP

H-gal-GP представляет собой мультиферментный протеазный комплекс, который переваривает кровяную муку Haemonchus [15, 26].Аспартил- и тиол-протеазы способны расщеплять интактные белки, такие как гемоглобин и сывороточный альбумин, основные компоненты кровяной муки Haemonchus , примерно на 20-членные пептиды. Эти 20-мерные пептиды представляют собой идеальный размер субстрата для MEP, что способствует их высокоэффективной деградации. Например, аспартилпротеазы, расположенные в верхней части дуги (рис. 2 и 3), вероятно, сначала расщепляют гемоглобин на пептиды, а металло- и цистеиновые протеазы завершают разложение.Предлагаемые активные центры PEP1 выступают в центральную полость комплекса (фиг. 3), размеры которой достаточно велики для размещения гемоглобина (Hb) или альбумина (S3 фиг.). Исследования на нематодах человека показали, что аспартил протеаза расщепляет интактный гемоглобин на фрагменты, которые затем перевариваются CP и MEP [27]. Близость различных ферментов в тесной и определенной организации позволила бы продуктам расщепления передаваться последовательно и быстро, обеспечивая высокоэффективное разложение.Каналы, проходящие через центр основания, позволят фрагментам Hb проникать в активные сайты MEP и выходить через нижнюю часть основания. Анализ предполагаемых сайтов расщепления пептида (pH> 2) в овечьем бета-гемоглобине (номер доступа P02075) с использованием программы Peptide Cutter (https://web.expasy.org/peptide_cutter/) [28] показывает, что самый большой пептидный фрагмент генерируемый типичной аспартилпротеазой, будет иметь длину 21 аминокислоту. Это оптимальный размер для дальнейшей обработки членами семейства нейтральных металлоэндопептидаз M13, согласно классификации пептидазной базы данных MEROPS (https: // www.ebi.ac.uk/merops/) [29].

Рис. 3. H-gal-GP – это мультиферментный протеазный аппарат.

вид сверху комплекса H-gal-GP с удаленной дугой и активными сайтами субъединиц, показанными в виде красных и желтых сфер. B Тот же вид, что и в A , но только с активными сайтами и картой, показанными с каналами, которые позволят субстрату получить доступ к активному сайту MEP и продуктам, которые должны быть переданы через комплекс, отмеченный стрелками. C вид сбоку комплекса H-gal-GP, показывающий домены PEP1 (желтый), MEP3 (темно-синий) и CP (голубой) с активными сайтами, выделенными красными сферами, и областью связывания цинка, выделенной желтым. D Модель PEP1, подходящая для плотности EM, с выделенным каталитическим мотивом (красный) и откидной створкой активного центра (зеленый). E Модель CP соответствует плотности электромагнитного излучения, активный участок выделен красным.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008465.g003

H-gal-GP экстрагируется непосредственно из мембран, а MEP 1 и 3 содержат элементы, типичные для интегральных мембранных белков типа II, что позволяет предположить, что H-gal Основание -GP встроено в мембрану щеточной каймы кишечных клеток червей, но протеомный анализ показывает, что их N-концевые трансмембранные области отщепляются от зрелого комплекса H-gal-GP [17].Это расщепление поддерживается картой плотности EM, которая не показывает никакой плотности вокруг N-конца пристыкованной MEP3. Учитывая отсутствие мицеллы детергента в реконструкции или дополнительном гидрофобном участке, который может вмещать липидный бислой, комплекс, вероятно, будет ассоциирован с мембраной. Логично, если основание связано с мембраной и связанными с ней транспортерами, это позволит продуктам расщепления эффективно транспортироваться через мембрану. Более того, наложение карты на более низкий порог или фильтрацию нижних частот показывает дополнительную плотность в H-gal-GP, которая выступает из основания и может действовать как якорь мембраны.Это могло бы объяснить, почему H-gal-GP связан с мембранной фракцией и экстрагируется только в присутствии детергента (рис. 4).

Рис. 4. Плотность выступа указывает на положение анкера мембраны.

Двукрылая карта плотности H-gal-GP EM показана на A с различными уровнями контура (слева направо, UCSF Chimera Volume Viewer Level 0,07, 0,04 и 0,018, соответственно). При уменьшении уровней контуров наблюдается выступание плотности за пределы основания. На самых низких показанных уровнях контура этот выступ выглядит как гладкий плотный шар, что указывает на присутствие мицеллы детергента. B H-gal-GP EM карта плотности, фильтрация нижних частот с разрешением 15 Å.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008465.g004

Гибкость и неоднородность

2D и последующая 3D классификация частиц H-gal-GP выявила значительную неоднородность в наборе данных. Наряду с показанным выше одностворчатым (карта 4,5 Å) и двукрылым (карта 6,2 Å) H-gal-GP, трехмерная классификация привела к классу, содержащему плотность в центральной полости, соответствующую размеру подложки, и классу отсутствует сводчатый проход (что составляет 11% и 9% окончательной стопки частиц соответственно, S4 Рис).Наряду с композиционной неоднородностью, описанной выше, снижение разрешения в крыльях предполагает, что существует также конформационная гетерогенность в H-gal-GP. Для изучения молекулярных движений было реализовано многочастичное уточнение, которое определяет различные части карты как твердые тела, которые могут двигаться независимо друг от друга, с анализом главных компонентов, определяющим движения, которые объясняют наибольшее движение [30]. После разделения комплекса на шесть тел примерно 18% дисперсии объясняется первыми тремя основными компонентами дисперсии, что указывает на большую конформационную гетерогенность.Карты плотностей реконструированных тел, расположенные вдоль этих основных компонентов, показывают, что они соответствуют значительному движению крыльев и некоторому скручивающему и боковому движению в арке (Рис. 5 и S2 Movie). Роль этого большого движения неизвестна и может быть преувеличена из-за того, что комплекс больше не находится в естественной мембранной среде. Однако мы могли бы предположить, что это движение может способствовать начальному улавливанию субстрата и эффективному переносу продуктов через комплекс и через клеточную мембрану.

Архитектура H-gal-GP сохраняется в аналогичных комплексах у других круглых червей

Чтобы исследовать, сохраняется ли архитектура H-gal-GP у круглых червей, аналогичные препараты были сделаны из других паразитов нематод (таксономический отряд Strongylida), Tc-gal-GP из T . около , Oo-gal-GP из O . ostertagi и Ac-gal-GP из A . ceylanicum . В голубых нативных гелях из них были обнаружены комплексы аналогичного размера (фиг. 6А), которые затем были исследованы с помощью микроскопии отрицательного окрашивания.Средние значения изображения окрашивания H-gal-GP были, как и ожидалось, очень похожи на таковые для крио-ЭМ, что указывает на то, что окрашивание не приводило к артефактам при этом разрешении, хотя были отмечены предпочтительные ориентации на углеродной подложке и вид с торца, показанный на рис. 1 (левая колонка) наблюдалась редко. Средние изображения для Tc-gal-GP, Oo-gal-GP и Ac-gal-GP были получены безреференсными методами в IMAGIC-5 или RELION 3.0, и все показали комплексы с общей архитектурой, аналогичной H-gal-GP. (Рис 6). Базовая архитектура явно консервативна между препаратами разных видов, что согласуется с высоким сходством последовательностей, что предполагает сходные пути пищеварения у всех трех паразитов, несмотря на O . ostertagi и T . циркумцинкта не питаются кровью. Тандемный масс-спектрометрический анализ с помощью жидкостной хроматографии (ЖХ / МС / МС) комплекса Ac-gal-GP выявил несколько семейств протеаз, прямо аналогичных тем, которые идентифицированы как часть комплекса H-gal-GP (таблица S5). Хотя общая архитектура комплексов подобна, подход негативного окрашивания не позволяет детально рассмотреть различные комплексы с более тонкими различиями, которые могут иметь место между вариантами видов.Внутри Ac-gal плотность крыла, по-видимому, изгибается вниз и более размыта, чем у H-gal-GP и других родственных комплексов. Потребуются дальнейшие исследования для оценки сохранности структурных особенностей, которые могут позволить использовать универсальный вакцинный подход.

Рис. 6. Комплекс gal-GP сохраняется у круглых червей.

Комплексы с аналогичным размером и архитектурой H-gal-GP обнаружены у других паразитов круглых червей Strongylida. A Голубой нативный гель PAGE H . contortus H-gal-GP (дорожка 2), Oo-gal-GP (дорожка 3), Tc-gal-GP (дорожка 4) и Ac-gal-GP (дорожка 5). Дорожка 1 – стандарты молекулярной массы. Виды с торца и виды сбоку независимо уточненных сумм классов по данным EM отрицательного окрашивания для B H-gal-GP (из H . contortus ), C Oo-gal-GP (из O . ostertagi ), D Tc-gal-GP (из T . через ) и E Ac-gal-GP (из A . ceylanicum ) соответственно.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008465.g006

Обсуждение

Это первое описание протеазного комплекса новой архитектуры, консервативного у паразитов круглых червей (таксономический отряд Strongylida), который необходим для поглощения питательных веществ и является основным компонентом вакцины Barbervax. Расположение этого большого протеазного комплекса дает новые сведения о том, как эти паразиты могут переваривать кровяную муку, используя протеолитические ферменты, встроенные в клетку кишечника.Размещение протеолитических ферментов в одном большом комплексе может быть более эффективным процессом и позволит сохранить эти ферменты для длительного повторного использования, а не выводить их из организма. Архитектура обеспечивает последовательный путь переваривания, облегчая размещение продуктов от начального переваривания для последующего переваривания следующим ферментом на пути. Размер и форма гемоглобина (<70 Å ³ ) и альбумина (≈ 110 Å на 80 Å на 80 Å) соответствуют каждому входу (или частичному попаданию) через центральную камеру, и мы предполагаем, что расщепление протеазами происходит в камеры, и полученные фрагменты белка попадают в клетку через более узкое отверстие в основании комплекса.Домены пепсиногена расположены в верхней части комплекса и превращают альбумин в пептиды размером около 20 аминокислот, что является идеальной длиной субстрата для нижележащих MEP. Архитектура также ограничивает самопротеолиз, а мембрана-якорь гарантирует, что комплекс или перевариваемые субстраты не будут потеряны с экскрецией. Мембрана кишечника имеет значительный матричный слой размером ~ 50 Å, который согласуется с комплексом H-gal-GP, находящимся на поверхности мембраны и не внедренным, оставляя центральную полость открытой над матричным слоем.Заякоривание комплекса в мембране также важно для предотвращения обнаружения хозяина, поскольку высвобождение пищеварительных белков с помощью Haemonchus в кровоток хозяина позволит создать иммунный ответ против паразита. Следовательно, паразиты, возможно, развили средства эффективного переваривания гемоглобина и альбумина, которые скрывают необходимые ферменты от хозяина.

Экономическое значение H-gal-GP подчеркивается превосходной защитой, которую он дает при использовании в качестве вакцины [17].Антитела, связывающиеся с конформационными эпитопами около входа в главную полость, будут препятствовать доступу к субстрату (S3 фиг.), И действительно, антисыворотки от овец, иммунизированных H-gal-GP, ингибируют переваривание гемоглобина и альбумина in vitro [15]. Такие конформационные эпитопы будут существовать только в нативном комплексе, что объясняет гораздо более низкую защиту после иммунизации отдельными субъединицами [17, 19]. Поскольку комплекс расположен на микровиллярной поверхности кишечника паразита, он не распознается хозяином во время инфекции и поэтому является так называемым «скрытым» антигеном.Поскольку на паразита не оказывалось давление отбора, чтобы справиться с иммунным ответом, направленным на H-gal-GP, индуцированный иммунитет является искусственным, что объясняет, почему он более эффективен, чем естественный иммунитет, приобретенный овцами после заражения Haemonchus [31].

Комплекс H-gal-GP является проверенной мишенью для вакцины для Haemonchus , и наличие комплексов аналогичной архитектуры у других экономически и медицински важных паразитов предполагает общее происхождение и потенциал для разработки единой вакцины со скрытым антигеном.Более того, это первое структурное свидетельство того, как эти паразитические черви могут эффективно связывать ферменты, необходимые для разложения пищи хозяина, без запуска иммунного ответа хозяина. Важно отметить, что не все эти паразиты аскариды питаются кровью, поэтому можно предположить, что этот большой протеазный комплекс не только способен переваривать и транспортировать кровяную муку, но и может быть адаптирован для различных субстратов. Следовательно, этот комплекс эволюционировал, чтобы перевернуть ряд субстратов в различных стронгилидах и может представлять собой общий и ранее неизвестный механизм поглощения питательных веществ.

Материалы и методы

Приготовление H-gal-GP, H-сиалгал-GP, Tc-gal-GP Oo-gal-GP и Ac-gal-GP

Комплексы очищали с использованием лектин-агарозы арахиса и якалина, как описано ранее [18, 21, 32], и хранили при -20 ° C.

Электрофорез в полиакриламидном геле

Электрофорез в геле

Blue Native проводили, как описано в Smith et al . 1999 [16]. Для невосстанавливающих белков SDS-PAGE разделяли в невосстанавливающих условиях на градиентных гелях NuPage 4–12% (Life Technologies) в соответствии с инструкциями производителя.Затем природные гели окрашивали кумасси синим R250.

LC-ESI-MS / MS и поиск в базе данных для Ac-gal-GP

белков (~ 7,5 мкг), составляющих A . Комплекс ceylanicum разделяли невосстанавливающим 1D SDS-PAGE и визуализировали с помощью Coomassie Blue R250. Отдельные полосы образца вырезали вертикально из гелей 1D SDS-PAGE, и полученные полоски геля разрезали горизонтально на 25 равных гелевых срезов глубиной 2,5 мм. Затем срезы геля обрабатывали с использованием стандартных процедур обесцвечивания, восстановления, алкилирования и трипсинолиза в геле [33].Дайджесты переносили во флаконы с образцами для ВЭЖХ и недолго хранили при + 4 ° C до тех пор, пока не потребовалось провести анализ жидкостной хроматографии, электрораспылительной ионизации и тандемной масс-спектрометрии (LC-ESI-MS / MS). Жидкостную хроматографию выполняли с использованием системы нано-ВЭЖХ Ultimate 3000 (Dionex) и поточного МС-анализа с помощью тандемного масс-спектрометра с трехмерной ионной ловушкой (amaZon-ETD, Bruker Daltonics). Параметры для тандемного МС-анализа были основаны на описанных ранее [34]. Развернутые данные МС / МС в формате .mgf (общий формат Mascot) были импортированы в ProteinScape V3.1 (Bruker Daltonics) программное обеспечение для анализа протеомных данных для последующего анализа баз данных. Базы данных, включая родственную частичную H . Поиск геномной последовательности contortus и общедоступной базы данных NCBInr (с использованием eukaryota в качестве параметра таксономического поиска) проводился с использованием поискового алгоритма Mascot V2.3 (Matrix Science). Параметры поиска талисмана задавались в соответствии с опубликованными инструкциями [35]. Баллы поиска молекулярной массы, полученные для идентификации отдельных белков, проверялись вручную и считались значимыми только в том случае, если а) два пептида были сопоставлены для каждого белка, и b) каждый сопоставленный пептид содержал непрерывную представленную серию ионов « b » или « y ». минимум из четырех смежных аминокислотных остатков.

LC-ESI-MS / MS и поиск в базе данных H-gal-GP / H-sialgal-GP

Образцы

(1 мг / мл) были разделены с помощью SDS-PAGE и визуализированы с помощью окрашивания InstantBlue (Expedeon). Представляющие интерес полосы белка вырезали и обрабатывали, как для Ac-gal-GP. Расщепление белков анализировали с помощью LC-ESI-MS / MS на системе NanoAcquity UHPLC-Xevo (Waters, Манчестер, Великобритания) в центре масс-спектрометрии факультета биологических наук Университета Лидса, Великобритания. Спектры МС / МС были запрошены в PEAKs, а поиск в базе данных выполнен по SWISS-PROT H . contortus база данных. Соответствие пептидного спектра учитывалось, если у них была вероятность ложного обнаружения <1%, а положительная идентификация белка производилась, если были идентифицированы два уникальных пептида на белок.

Электронная микроскопия отрицательного окрашивания

Для отрицательного окрашивания использовали 3 мкл раствора (~ 50 мкг / мл) на сетках из углеродной фольги, облученные УФ-излучением в течение 45 минут непосредственно перед использованием, с последующим окрашиванием 1% ^w / _v уранилацетатом [36]. Сетки исследовали на микроскопе Technai T12, работающем при 120 кВ и снабженном нитью LaB6.Изображения были записаны с увеличением 30,000 x на камеру Gatan Ultrascan 2k x 2k, что дало 4,4 Å на пиксель. Oo-gal-GP и Tc-gal-GP исследовали на микроскопе JEOL 1200, снабженном нитью LaB6 и работающем при 80 кВ. Изображения были записаны с увеличением 40,000x на пленку Kodak SO 163 и обработаны в проявителе D19. Пленки были оцифрованы с помощью NIKON Coolscan с размером пикселя 2,5 Å. Расфокусировка мишени составляла от -0,7 до -1 мкм. Ac-gal-GP исследовали на микроскопе Technai F20, работающем при 200 кВ и оснащенном камерой Ceta.Изображения были записаны с увеличением 30 000 раз и размером пикселя 3,6 Å. Данные были собраны с использованием Boxer (Oo-gal-GP и Tc-gal-GP) и EMAN2 [37] ³⁶ (H-gal-GP, Ac-gal-GP). Изображения, показывающие деградацию, большую расфокусировку или дрейф, были удалены. Было 8 221 H-гал-ГП, 10 932 О-гал-ГП, 10 043 Тс-гал-ГП и 4955 Ас-гал-ГП. Стеки подвергались итерациям выравнивания и уточнения без ссылок в IMAGIC-5 [38] или RELION [39].

Криоэлектронная микроскопия

Сетки

готовили с помощью Vitrobot Mark IV, нанося 3 мкл раствора (1 мг / мл) на сетки Quantifoil R2 / 1 из углерода Cu 300 меш (Agar Scientific, Великобритания), разряженные светом в течение 60 секунд перед использованием (Cressington 208, Cressington Scientific Instruments, Великобритания).Сетки промокали ватманом №. 1 фильтровальную бумагу (Agar Scientific, Великобритания) в течение 6 секунд при силе 6, 8 ° C и влажности 100% и мгновенно заморозить в жидком этане. Данные были записаны на FEI Titan Krios (лаборатория биоструктуры Astbury, Университет Лидса), работающем при 300 кВ, с прямым электронным детектором FEI Falcon III. Микрофотографии были записаны с помощью программного обеспечения автоматического сбора данных EPU при 75000-кратном увеличении, что дало конечную выборку объекта 1,065 Å / пиксель, с общей дозой электронов 65 e / Å ² и расфокусировкой цели 1.2–3,2 мкм [40] ³ .

Крио-ЭМ обработка изображений

Сводная информация об обработке изображений приведена в таблице S1. Обработка изображений проводилась с помощью конвейера RELION 3.0 [39]. Средние значения с коррекцией дрейфа для каждого фильма были созданы с использованием реализации MotionCor2 [41] в RELION, а функция передачи контраста каждого фильма была определена с помощью gCTF [42]. Приблизительно 1400 частиц были собраны вручную и классифицированы с использованием безреференсной двухмерной классификации [43]. Полученные двумерные изображения среднего класса использовались в качестве шаблонов для автоматического выбора частиц.Частицы были классифицированы с использованием нескольких раундов как безреференсной двухмерной классификации, так и трехмерной классификации. Первоначальная модель для 3D-классификации была создана из подмножества данных в RELION и отфильтрована до разрешения 60 Å для исходной модели. После каждого раунда лучшие классы / класс переводились на следующий этап классификации. Постобработка использовалась для соответствующей маскировки модели, оценки и корректировки B-фактора карт [44]. Окончательное разрешение одностворчатых, двукрылых и H-сиалгал-GP реконструкций H-gal-GP определялось с использованием корреляции оболочек Фурье «золотого стандарта» (FSC = 0.143) критерий. Локальное разрешение оценивалось с использованием функции локального разрешения [45] в RELION. Для изучения молекулярных движений было реализовано многочастичное уточнение [30].

Моделирование и подгонка подблока

Модели для каждой из белковых субъединиц, идентифицированных как присутствующие в комплексах H-gal-GP / H-sialgal-GP с помощью анализа LC-ESI-MS / MS, были созданы с помощью Phyre2, веб-сервера для моделирования белков, который использует удаленное определение гомологии. методы построения 3D-моделей [23]. Полученные трехмерные модели были помещены на карту плотности H-gal-GP с использованием подгонки твердого тела в UCSF Chimera [24].После стыковки модели димера MEP3 и PEP1 были уточнены с использованием метода гибкой подгонки молекулярной динамики (MDFF) [25], реализованного в VMD [46]. Эти модели также подвергались итеративным циклам уточнения и построения моделей в PHENIX и Coot соответственно [47, 48]. Окончательная статистика для моделей представлена ​​в таблице S6. Рисунки были созданы в UCSF Chimera [24] и PyMOL [49].

Вспомогательная информация

S1 Рис. Сбор и обработка данных Cryo-EM.

A Репрезентативная крио-ЭМ микрофотография H-gal-GP, демонстрирующая хорошее распределение частиц и ряд различных изображений во льду. B репрезентативных классов H-gal-GP, созданных в RELION, которые были выбраны для трехмерного уточнения (масштабная полоса представляет 20 нм). Кривые корреляции Фурье-оболочки (FSC) для карт C, H-gal-GP и D, H-gal-GP однокрылых карт после обработки и E FSC-кривая H-sialgal-GP после обработки карта. Разрешение соответствует критерию 0,143. F Наложение карт плотности ЭМ для двукрылого H-gal-GP (желтый) и H-sialgal-GP (серый).

https: // doi.org / 10.1371 / journal.ppat.1008465.s001

(TIF)

S2 Рис. Идентификация и моделирование субъединиц. Гель H-gal-GP и H-сиалгал-GP в SDS-PAGE, выполняемый в восстанавливающих условиях с дорожками, переданными M-маркером, S-H-сиалгал-GP, G-H-gal-Gp.

Полосы, извлеченные и проанализированные с помощью LC-ESI-MS / MS, обозначены буквами a-e. Наложение моделей, рассчитанных с помощью Phyre2, для B, PEP, C MEP и результата подгонки MDFF D MEP3 на карту H-gal-GP EM.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008465.s002

(TIF)

S3 Рис. Сравнение субстрата и антитела к H-gal-GP.

EM-карта плотности H-gal-GP, на которой показаны модели PEP1 (фиолетовый), MEP3 (темно-синий) и CP (голубой), стыкованные с картой с гемоглобином овцы (ID PDB: 2qu0), расположенным слева, и интактным антителом расположен справа (ID PDB: 1igt, отфильтровано с разрешением 10 Å) для сравнения размеров. Это подчеркивает дополнительный размер субстрата гемоглобина к центральной полости и способность антитела перекрывать сайт связывания.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008465.s003

(TIF)

S4 Рис. EM-карты для H-gal-GP, полученные с помощью 3D-классификации, демонстрируют неоднородность.

Показаны четыре карты, представляющие четыре верхних класса из классификации, в которой набор данных был разделен на восемь классов. Наблюдаются двукрылые и однокрылые карты H-gal-GP, а также карта, показывающая плотность внутри полости, и карта без арочного проема.

https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1008465.s004

(TIF)

Благодарности

Мы благодарим лабораторию биоструктуры Astbury, масс-спектрометрию факультета биологических наук в Лидсе и коллег за поддержку. Эта работа посвящена доктору Кеннауэю и профессору Тринику и их ценному вкладу в исследование. Мы благодарим Элисон Моррисон, Исследовательский институт Моредана, за предоставленный материал для паразитов.

Ссылки

1. 1. Перри Б.Д., Рэндольф Т.Ф., Макдермотт Дж. Дж., Сонс К. Р., Торнтон П. К..Инвестирование в здоровье животных для борьбы с бедностью. Международный научно-исследовательский институт животноводства. 2002; Найроби, Кения: 148 с.
2. 2. Nieuwhof G, Bishop S. Стоимость основных эндемических болезней овец в Великобритании и потенциальные выгоды от снижения воздействия болезней. Зоотехния. 2005; 81: 23–9.
3. 3. Келли Дж. Изучение влияния желудочно-кишечного нематодоза у овец мериноса на Северное плоскогорье Нового Южного Уэльса и его значение для комплексной борьбы с паразитами.Докторская диссертация, Университет Новой Англии, Армидейл, Новый Южный Уэльс, Австралия. 2011.
4. 4. Сакетт Д., Холмс П., Эбботт К., Джефкотт С., М. Б. Оценка экономической стоимости эндемических заболеваний для рентабельности австралийских производителей крупного рогатого скота и овец. Опубликован финальный отчет проекта AHW.087. Опубликован финальный отчет по проекту AHW087. 2006; Мясо и животноводство Австралии.: Http://www.mla.com.au/Research-and-development/Search-RD-reports.
5. 5. Вос Т., Барбер Р.М., Белл Б., Бертоцци-Вилла А, Бирюков С., Боллигер И. и др.Глобальная, региональная и национальная заболеваемость, распространенность и годы, прожитые с инвалидностью для 301 острого и хронического заболевания и травмы в 188 странах, 1990–2013 гг .: систематический анализ для исследования глобального бремени болезней 2013 г. The Lancet. 2015; 386 (9995): 743–800. https://doi.org/10.1016/S0140-6736(15)60692-4.
6. 6. Пуллан Р.Л., Брукер С.Дж. Глобальные пределы и население, подверженное риску заражения гельминтами, передаваемыми через почву, в 2010 г. Паразиты и переносчики. 2012; 5: 81–. pmid: 22537799.
7. 7. Саргисон Н.Д., Джексон Ф., Бартли DJ, Уилсон DJ, Стенхаус Л.Дж., Пенни CD. Наблюдения за появлением множественной антигельминтной устойчивости у стад овец на юго-востоке Шотландии. Ветеринарная паразитология. 2007. 145 (1–2): 65–76. Epub 2006/12/01. pmid: 17134836.
8. 8. Соутелло Р.Г., Сено М.С., Амаранте А.Ф. Устойчивость к глистогонам нематод крупного рогатого скота на северо-западе штата Сан-Паулу, Бразилия. Ветеринарная паразитология. 2007. 148 (3–4): 360–4. Epub 2007/07/28.pmid: 17656022.
9. 9. Плейфорд М., Смит А., Лав С., Безье Р., П. К., Дж. Н. Б. Распространенность и серьезность противогельминтной резистентности у овечьих желудочно-кишечных нематод в Австралии (2009–2012) Австралийский ветеринарный журнал 2014; 92 464–71. pmid: 25424758
10. 10. Diemert DJ, Bottazzi ME, Plieskatt J, Hotez PJ, Bethony JM. Уроки на критическом пути: разработка вакцин против гельминтов человека. Тенденции паразитологии. 2018; 34 (9): 747–58. pmid: 30064902
11. 11.Эмери DL, Hunt PW, Le Jambre LF. Haemonchus contortus: тогда и сейчас и куда дальше? Международный журнал паразитологии. 2016; 46 (12): 755–69. pmid: 27620133
12. 12. Нокс Д.П., Редмонд Д.Л., Ньюлендс Г.Ф., Скуче П.Дж., Петтит Д., Смит В.Д. Природа и перспективы белков мембран кишечника в качестве кандидатов в вакцины против Haemonchus contortus и других трихостронгилоидов жвачных животных. Международный журнал паразитологии. 2003. 33 (11): 1129–37. pmid: 13678629
13. 13.ЛеЖамбре Л.Ф., Виндон Р.Г., Смит В.Д. Вакцинация против Haemonchus contortus: эффективность гликопротеинов кишечной мембраны нативных паразитов у ягнят мериносовой породы, пасущихся на загрязненных пастбищах. Ветеринарная паразитология. 2008. 153 (3–4): 302–12. Epub 2008/03/14. pmid: 18337013.
14. 14. Newton SE, Meeusen EN. Прогресс и новые технологии в разработке вакцин против паразитов желудочно-кишечных нематод овец. Иммунология паразитов. 2003. 25 (5): 283–96. Epub 2003/09/13. pmid: 12969446.
15. 15. Ekoja SE, Smith WD. Антитела овец, иммунизированных против Haemonchus contortus H-gal-GP, ингибируют гемоглобиназную активность этого протеазного комплекса. Иммунология паразитов. 2010; 32 (11-12): 731-8. pmid: 21039613
16. 16. Смит С.К., Петтит Д., Newlands GFJ, Редмонд Д.Л., Скуче П.Дж., Нокс Д.П. и др. Дальнейшая иммунизация и биохимические исследования комплексом защитных антигенов микровиллярной мембраны кишечника Haemonchus contortus. Иммунология паразитов.1999. 21 (4): 187–99. pmid: 10320616
17. 17. Смит В. Д., Ньюлендс Г. Ф., Смит С. К., Петтит Д., Скуче П. Дж.. Металлоэндопептидазы щеточной каймы кишечника Haemonchus contortus как защитные антигены для овец. Иммунология паразитов. 2003. 25 (6): 313–23. Epub 2003/09/26. pmid: 14507329.
18. 18. Newlands GFJ, Skuce PJ, Nisbet AJ, Redmond DL, Smith SK, Pettit D, et al. Молекулярная характеристика семейства металлоэндопептидаз из щеточной каймы кишечника Haemonchus contortus.Паразитология. 2006. 133 (3): 357–68. Epub 06/01. pmid: 16740178
19. 19. Смит В.Д., Скуче П.Дж., Ньюлендс Г.Ф., Смит С.К., Петтит Д. Аспартил-протеазы из щеточной каймы кишечника Haemonchus contortus в качестве защитных антигенов для овец. Иммунология паразитов. 2003. 25 (11–12): 521–30. Epub 2004/04/01. pmid: 15053773.
20. 20. Cachat E, Newlands GF, Ekoja SE, McAllister H, Smith WD. Попытки иммунизировать овец против Haemonchus contortus с использованием коктейля рекомбинантных протеаз, полученных из защитного антигена H-gal-GP.Иммунология паразитов. 2010. 32 (6): 414–9. Epub 2010/05/27. pmid: 20500672.
21. 21. Смит В. Д., Смит С. К., Петтит Д., Ньюлендс Г. Ф., Скуче П. Дж.. Относительные защитные свойства трех фракций мембранных гликопротеинов Haemonchus contortus. Иммунология паразитов. 2000. 22 (2): 63–71. Epub 2000/01/29. pmid: 10652118.
22. 22. Альтшул С.Ф., Гиш В., Миллер В., Майерс Е. В., Липман Д. Д.. Базовый инструмент поиска локального выравнивания. Журнал молекулярной биологии. 1990. 215 (3): 403–10. pmid: 2231712
23. 23.Келли Л.А., Мезулис С., Йейтс С.М., Васс М.Н., Штернберг М.Дж. Веб-портал Phyre2 для моделирования, прогнозирования и анализа белков. Протоколы природы. 2015; 10: 845. pmid: 25950237
24. 24. Петтерсен Э.Ф., Годдард Т.Д., Хуанг С.К., Коуч Г.С., Гринблатт Д.М., Мэн Э.С. и др. UCSF Chimera – система визуализации для исследовательских исследований и анализа. Журнал вычислительной химии. 2004. 25 (13): 1605–12. pmid: 15264254
25. 25. Trabuco LG, Villa E, Mitra K, Frank J, Schulten K.Гибкая подгонка атомных структур к картам электронной микроскопии с использованием молекулярной динамики. Структура (Лондон, Англия: 1993). 2008. 16 (5): 673–83. pmid: 18462672.
26. 26. Уильямсон А.Л., Бриндли П.Дж., Нокс Д.П., Хотез П.Дж., Лукас А. Пищеварительные протеазы нематод, питающихся кровью. Тенденции паразитологии. 2003. 19 (9): 417–23. pmid: 12957519
27. 27. Ранджит Н., Жан Б., Гамильтон Б., Стензел Д., Лоутер Дж., Пирсон М. и др. Протеолитическая деградация гемоглобина в кишечнике человека Hookworm Necator americanus.Журнал инфекционных болезней. 2009; 199: 904–12. pmid: 19434933
28. 28. Гастайгер Э. Х.С., Гаттикер А., Дюво С., Уилкинс М.Р., Аппель Р.Д., Байрох А. Инструменты идентификации и анализа белков на сервере ExPASy. В: Уокер Дж. М., редактор. Справочник протоколов протеомики: Humana Press; 2005.
29. 29. Роулингс Н.Д., Барретт А.Дж., Томас П.Д., Хуанг Х, Бейтман А., Финн Р.Д. База данных протеолитических ферментов, их субстратов и ингибиторов MEROPS на 2017 год и сравнение с пептидазами в базе данных PANTHER.Исследования нуклеиновых кислот. 2017; 46 (D1): D624 – D32.
30. 30. Накане Т., Киманиус Д., Линдаль Е., Шерес ШВ. Характеристика молекулярных движений в данных крио-ЭМ одиночных частиц с помощью многокомпонентного уточнения в RELION. eLife. 2018; 7: e36861. pmid: 29856314
31. 31. Nisbet AJ, Meeusen EN, González JF, Piedrafita DM. Глава восьмая – Иммунитет к Haemonchus contortus и разработка вакцины. В кн .: Гассер Р.Б., Самсон-Химмельстьерна Г.В., ред. Успехи паразитологии. 93: Academic Press; 2016 г.п. 353–96. https://doi.org/10.1016/bs.apar.2016.02.011 pmid: 27238008
32. 32. Смит В. Д., Петтит Д., Смит С. К.. Исследования перекрестной защиты с гликопротеиновыми антигенами кишечной мембраны из Haemonchus contortus и Teladorsagia Circсincta. Иммунология паразитов. 2001. 23 (4): 203–11. Epub 2001/04/12. pmid: 11298297.
33. 33. Шевченко А., Вильм М., Ворм О., Манн М. Масс-спектрометрическое секвенирование белков из окрашенных серебром полиакриламидных гелей. Аналитическая химия. 1996. 68 (5): 850–8.pmid: 8779443
34. 34. Batycka M, Inglis NF, Cook K, Adam A, Fraser-Pitt D, Smith DGE, et al. Сверхбыстрое тандемное масс-спектрометрическое сканирование в сочетании с жидкостной хроматографией на монолитной колонке увеличивает производительность протеомного анализа. Быстрые коммуникации в масс-спектрометрии. 2006. 20 (14): 2074–80. pmid: 16773668
35. 35. Тейлор Г.К., Гудлетт ДР. Правила, регулирующие идентификацию белков с помощью масс-спектрометрии. Быстрые коммуникации в масс-спектрометрии. 2005; 19 (23): 3420–.pmid: 16252315
36. 36. Уокер М., Найт П., Триник Дж. Отрицательное окрашивание молекул миозина. Журнал молекулярной биологии. 1985. 184 (3): 535–42. pmid: 2413217
37. 37. Тан Г., Пэн Л., Болдуин П.Р., Манн Д.С., Цзян В., Рис И. и др. EMAN2: расширяемый пакет обработки изображений для электронной микроскопии. Журнал структурной биологии. 2007. 157 (1): 38–46. pmid: 16859925
38. 38. ван Хеель М., Харауз Г., Орлова Е.В., Шмидт Р., Шац М. Новое поколение системы обработки изображений IMAGIC.Журнал структурной биологии. 1996. 116 (1): 17–24. pmid: 8742718
39. 39. Zivanov J, Nakane T, Forsberg BO, Kimanius D, Hagen WJH, Lindahl E, et al. Новые инструменты для автоматизированного определения криоЭМ структуры высокого разрешения в РЕЛИОН-3. eLife. 2018; 7: e42166. pmid: 30412051
40. 40. Томпсон РФ, Иаданза М.Г., Хескет Э.Л., Роусон С., Рэнсон Н.А. Сбор, предварительная обработка и оперативный анализ данных для криоэлектронной микроскопии одиночных частиц с высоким разрешением.Протоколы природы. 2019; 14 (1): 100–18. pmid: 30487656
41. 41. Zheng SQ, Palovcak E, Armache JP, Verba KA, Cheng Y, Agard DA. MotionCor2: анизотропная коррекция движения, вызванного лучом, для улучшенной криоэлектронной микроскопии. Природные методы. 2017; 14: 331. https://www.nature.com/articles/nmeth.4193#supplementary-information. pmid: 28250466
42. 42. Чжан К. Gctf: Определение и коррекция CTF в реальном времени. Журнал структурной биологии. 2016; 193 (1): 1–12. pmid: 26592709.
43. 43. Scheres SHW. РЕЛИОН: реализация байесовского подхода к определению крио-ЭМ структуры. Журнал структурной биологии. 2012; 180 (3): 519–30. pmid: 23000701.
44. 44. Шерес Ш.В., Чен С. Предотвращение переобучения при определении крио-ЭМ структуры. Природные методы. 2012; 9: 853. https://www.nature.com/articles/nmeth.2115#supplementary-information. pmid: 22842542
45. 45. Kucukelbir A, Sigworth FJ, Tagare HD. Количественная оценка местного разрешения карт плотности крио-ЭМ.Природные методы. 2013; 11: 63. https://www.nature.com/articles/nmeth.2727#supplementary-information. pmid: 24213166
46. 46. Хамфри В., Далке А., Шультен К. VMD: Визуальная молекулярная динамика. Журнал молекулярной графики. 1996. 14 (1): 33–8. pmid: 8744570
47. 47. Афонин П. В. и др., Уточнение реального пространства в PHENIX для крио-ЭМ и кристаллографии. 2018. Acta Crystallogr . Раздел . Д . Структура . Био .74, 531–544.
48. 48. Эмсли П. и Коутан К. Кут: инструменты построения моделей для молекулярной графики. 2014. Acta Crystallogr . Раздел . Д Биол . Кристаллогр . 60, 2126–2132.
49. 49. DeLano WL. Система молекулярной графики PyMOL, версия 2.0. Шредингер, 2018.