Перевод к другому работодателю по инициативе работника / КонсультантПлюс

Перевод к другому работодателю по инициативе работника

Вопрос:

Как оформляется перевод к другому работодателю по инициативе работника? Какие документы и сроки? Может ли текущий работодатель отказать в переводе по просьбе работника согласно ст. 72.1 ТК РФ?

Ответ:

Такой перевод может быть осуществлен на основе согласованного волеизъявления трех сторон: работника, прежнего и будущего работодателей.

Они могут выразить свою волю любым способом, в т.ч. путем составления трехстороннего соглашения либо обмена письмами. Обычно такое согласование начинается с оформления будущим работодателем письменного приглашения, адресованного работнику. На основании этого приглашения работник обращается к своему работодателю с заявлением о прекращении трудового договора в связи с переводом к другому работодателю. К заявлению прилагается копия письменного приглашения на работу к другому работодателю.

Перевод работника по его просьбе или с его согласия на постоянную работу к другому работодателю предполагает прекращение трудового договора с прежним работодателем (п. 5 ч. 1 ст. 77 ТК РФ) и заключение трудового договора с новым работодателем. При таком переводе заменяется одна из сторон трудового договора – работодатель.

В случае прекращения трудового договора в порядке перевода к другому работодателю у нового работодателя возникает обязанность принять на работу приглашенного работника в течение одного месяца со дня увольнения с прежнего места работы (ч. 4 ст. 64 ТК РФ). В данном случае закон прямо называет прекращение трудового договора с прежним работодателем увольнением. Очевидно, что это увольнение по инициативе работника.

По общему правилу указывать в заявлении об увольнении дату расторжения трудового договора или дату такого заявления нормы ТК РФ не требуют. Работодатель обязан уволить работника в срок, указанный в заявлении в случаях, предусмотренных ч. 3 ст.

80 ТК РФ. На увольнение в порядке перевода к другому работодателю это правило не распространяется.

Статья 72.1 ТК РФ также не предусматривает обязанность работодателя уволить работника в порядке перевода конкретной датой, даже если таковая указана в заявлении последнего. Более того, сам по себе факт подачи работником заявления об увольнении в порядке перевода вообще не обязывает работодателя к прекращению трудового договора. Это вытекает из правил ч. 1 и ч. 6 ст. 80 ТК РФ, предусмотревших следующие условия увольнения:

а) при обращении за расторжением трудового договора по своей инициативе работник должен соблюсти двухнедельный срок предупреждения работодателя;

б) если по истечении этого срока трудовой договор не расторгнут, и работник не настаивает на увольнении, то действие трудового договора продолжается.

Однако по истечении срока предупреждения об увольнении работник имеет право прекратить работу. В этом случае работодатель обязан выдать работнику трудовую книжку и произвести с ним окончательный расчет (ч.

5 ст. 80 ТК РФ).

Таким образом, обязанность работодателя уволить работника в связи с переводом к другому работодателю возникает в связи со сложным юридическим фактом – подачей заявления об увольнении (с соблюдением двухнедельного срока предупреждения) и прекращением работы по истечении этого срока.

Изложенное дает основание полагать, что при соблюдении работником этих условий работодатель не вправе отказать ему в переводе согласно ст. 72.1 ТК РФ.

Правовое обоснование:

Регулирование трудовых отношений может осуществляться путем заключения работниками и работодателями трудовых договоров (ст. 9 ТК РФ).

Трудовой договор – соглашение между работодателем и работником (ст. 56 ТК РФ)

В соответствии с ч. 2 ст. 72.1 ТК РФ по письменной просьбе работника или с его письменного согласия может быть осуществлен перевод работника на постоянную работу к другому работодателю.

При этом трудовой договор по прежнему месту работы прекращается (п. 5 ч. 1 ст. 77 ТК РФ). Новый работодатель не вправе отказать в заключении трудового договора лицу, приглашенному в порядке перевода от другого работодателя. Данное правило действует в течение одного месяца со дня увольнения с прежнего места работы (ст. 64 ТК РФ).

Согласно ст. 80 ТК РФ, работник имеет право расторгнуть трудовой договор, предупредив об этом работодателя в письменной форме не позднее чем за две недели, если иной срок не установлен ТК РФ или иным федеральным законом. Течение указанного срока начинается на следующий день после получения работодателем заявления работника об увольнении. По соглашению между работником и работодателем трудовой договор может быть расторгнут и до истечения срока предупреждения об увольнении. По истечении срока предупреждения об увольнении работник имеет право прекратить работу. В последний день работы работодатель обязан выдать работнику трудовую книжку, другие документы, связанные с работой, по письменному заявлению работника и произвести с ним окончательный расчет.

Открыть полный текст документа

МДОБУ детский сад №11 “Березка”

 

Правила внутреннего трудового распорядка

муниципального дошкольного образовательного бюджетного

учреждения центра развития ребенка – детского сада № 11

«Березка» Октябрьского района

 

II. Порядок приема, перевода и увольнения работников

 

2.1. Порядок приема на работу:

2.1.1. Работники реализуют свое право на труд путем заключения трудового договора.

2.1.2. Трудовой договор заключается на неопределенный срок.

Заключение срочного трудового договора допускается, когда трудовые отношения не могут быть установлены на неопределенный срок с учетом характера предстоящей работы или условий ее выполнения по основаниям, предусмотренным ч. 1 ст. 59 ТК РФ. В случаях, предусмотренных ч. 2 ст. 59 ТК РФ, срочный трудовой договор может заключаться по соглашению сторон трудового договора без учета характера предстоящей работы и условий ее выполнения.

2.1.3. При заключении трудового договора в нем по соглашению сторон может быть предусмотрено условие об испытании работника в целях проверки его соответствия поручаемой работе (ст. 70 ТК РФ).

Испытание при приеме на работу не устанавливается для:

беременных женщин и женщин, имеющих детей в возрасте до полутора лет;

лиц, не достигших возраста восемнадцати лет;

лиц, окончивших образовательные учреждения начального, среднего и высшего профессионального образования, имеющие государственную аккредитацию и впервые поступающих на работу по полученной специальности в течение одного года со дня окончания образовательного учреждения;

лиц, избранных на выборную должность на оплачиваемую работу;

лиц, приглашенных на работу в порядке перевода от другого работодателя по согласованию между работодателями;

лиц, заключающих трудовой договор на срок до двух месяцев;

иных лиц в случаях, предусмотренных ТК РФ, иными федеральными законами, коллективным договором.

2.1.4. Срок испытания не может превышать трех месяцев, а для руководителя учреждения, его заместителей, главного бухгалтера и его заместителя, руководителя структурного подразделения – не более шести месяцев.

2.1.5. Трудовой договор составляется в письменной форме и подписывается сторонами в двух экземплярах, один из которых хранится в образовательном учреждении, другой – у работника.

2.1.6. Прием педагогических работников на работу производится с учетом требований, предусмотренных ст. 331 ТК РФ и ст. 46 федерального закона “Об образовании в Российской Федерации” (от 29.12.2012 N 273-ФЗ).

2.1.7. При заключении трудового договора лицо, поступающее на работу, предъявляет работодателю в соответствии со ст. 65 ТК РФ:

– паспорт или иной документ, удостоверяющий личность;

– трудовую книжку, за исключением случаев, когда трудовой договор заключается впервые или работник поступает на работу на условиях совместительства;

– страховое свидетельство государственного пенсионного страхования;

– документы воинского учета – для военнообязанных и лиц, подлежащих призыву на военную службу;

– документ об образовании, о квалификации или наличии специальных знаний – при поступлении на работу, требующую специальных знаний или специальной подготовки.

– справку о наличии (отсутствии) судимости и (или) факта уголовного преследования по реабилитирующим основаниям, выданную в порядке и по форме, которые устанавливаются федеральным органом исполнительной власти, осуществляющим функции по выработке и реализации государственной политики и нормативно-правовому регулированию в сфере внутренних дел, – при поступлении на работу, связанную с деятельностью, к осуществлению которой в соответствии с ТК РФ, иным федеральным законом не допускаются лица, имеющие или имевшие судимость, подвергающиеся или подвергшиеся уголовному преследованию (далее – справка уголовного характера).

Лица, поступающие на работу в образовательное учреждение, обязаны также предоставить личную медицинскую книжку, содержащую сведения об отсутствии противопоказаний по состоянию здоровья для работы в образовательном учреждении (ч. 1 ст. 213 ТК РФ).

2.1.8. Запрещается требовать от лица, поступающего на работу, документы помимо предусмотренных ТК РФ, иными федеральными законами, указами Президента Российской Федерации и постановлениями Правительства Российской Федерации (ч. 3 ст. 65 ТК РФ).

2.1.9. При заключении трудового договора впервые трудовая книжка и страховое свидетельство государственного пенсионного страхования оформляются работодателем (ч. 4 ст. 65 ТК РФ).

2.1.10. Работники имеют право работать на условиях внутреннего и внешнего совместительства в порядке, предусмотренном ТК РФ.

2.1.11. Прием на работу оформляется приказом работодателя, изданным на основании заключенного трудового договора. Содержание приказа работодателя должно соответствовать условиям заключенного трудового договора.

Приказ работодателя о приеме на работу объявляется работнику под роспись в трехдневный срок со дня фактического начала работы. По требованию работника работодатель обязан выдать ему надлежаще заверенную копию указанного приказа.

2.1.12. Трудовой договор, не оформленный в письменной форме, считается заключенным, если работник приступил к работе с ведома или по поручению работодателя или его представителя. При фактическом допущении работника к работе работодатель обязан оформить с ним трудовой договор в письменной форме не позднее трех рабочих дней со дня фактического допущения работника к работе (ст. 67 ТК РФ).

2.1.13. В соответствии со ст. 66 ТК РФ работодатель ведет трудовые книжки на каждого работника, проработавшего у него свыше пяти дней, в случае, когда работа у данного работодателя является для работника основной.

Форма, порядок ведения и хранения трудовых книжек, а также порядок изготовления бланков трудовых книжек и обеспечения ими работодателей устанавливаются  нормативными правовыми актами Российской Федерации.

2.1.14. Трудовые книжки работников хранятся в учреждении. Бланки трудовых книжек и вкладыши к ним хранятся как документы строгой отчетности.

2.1.15. С каждой записью, вносимой на основании приказа  в трудовую книжку о выполняемой работе, переводе на другую постоянную работу и увольнении, работодатель обязан ознакомить ее владельца под роспись в личной карточке, в которой повторяется запись, внесенная в трудовую книжку.

Наименование должностей, профессий или специальностей и квалификационные требования к ним должны соответствовать наименованиям и требованиям, указанным в квалификационных справочниках, утверждаемых в установленном порядке, если в соответствии с ТК РФ, иными федеральными законами с выполнением работ по определенным должностям, профессиям, специальностям связано предоставление компенсаций и льгот либо наличие ограничений (ч. 2 ст. 57 ТК РФ).

2.1.16. При приеме на работу  работодатель обязан ознакомить работника под роспись с правилами внутреннего трудового распорядка, иными локальными нормативными актами, непосредственно связанными с трудовой деятельностью работника, коллективным договором (ч. 3 ст. 68 ТК РФ).

 

2.2. Гарантии при приеме на работу:

2.2.1. Запрещается необоснованный отказ в заключении трудового договора (ст. 64 ТК РФ).

2.2.2. Какое бы то ни было прямое или косвенное ограничение прав или установление прямых или косвенных преимуществ при заключении трудового договора в зависимости от пола, расы, цвета кожи, национальности, языка, происхождения, имущественного, социального и должностного положения, возраста, места жительства (в том числе наличия или отсутствия регистрации по месту жительства или пребывания), а также других обстоятельств, не связанных с деловыми качествами работников, не допускается, за исключением случаев, предусмотренных федеральным законом.

2.2.3. Запрещается отказывать в заключение трудового договора женщинам по мотивам, связанным с беременностью или наличием детей.

Запрещается отказывать в заключение трудового договора работникам, приглашенным в письменной форме на работу в порядке перевода от другого работодателя, в течение одного месяца со дня увольнения с прежнего места работы.

2.2.4. По требованию лица, которому отказано в заключение трудового договора, работодатель обязан сообщить причину отказа в письменной форме.

2.2.5. Отказ в заключение трудового договора может быть обжалован в судебном порядке.

 

2.3. Изменение условий трудового договора и перевод на другую работу:

2.3.1. Изменение определенных сторонами условий трудового договора, в том числе перевод на другую работу, допускается только по соглашению сторон трудового договора, за исключением случаев, предусмотренных ТК РФ (ст. 74 ТК РФ). Соглашение об изменении определенных сторонами условий трудового договора заключается в письменной форме и оформляется дополнительным соглашением к трудовому договору (ст. 72 ТК РФ).

Изменение условий (содержания) трудового договора возможно по следующим основаниям:

а) изменение определенных сторонами условий трудового договора по причинам, связанным с изменением организационных или технологических условий труда;

б) перевод на другую работу (постоянное или временное изменение трудовой функции работника или структурного подразделения, в котором он работает).

2.3.2. В случае, когда по причинам, связанным с изменением организационных или технологических условий труда, определенные сторонами условия трудового договора не могут быть сохранены, допускается их изменение по инициативе работодателя, за исключением изменения трудовой функции работника (ст. 74 ТК РФ).

К числу таких причин могут относиться:

реорганизация учреждения (слияние, присоединение, разделение, выделение, преобразование), а также внутренняя реорганизация в учреждении;

изменения в осуществлении образовательного процесса в учреждении (сокращение количества  групп). 

О предстоящих изменениях определенных сторонами условий трудового договора, а также о причинах, вызвавших необходимость таких изменений, работодатель обязан уведомить работника в письменной форме не позднее чем за два месяца.

2.3.3. Перевод на другую работу – постоянное или временное изменение трудовой функции работника и (или) структурного подразделения, в котором работает работник (если структурное подразделение было указано в трудовом договоре), при продолжении работы у того же работодателя, а также перевод на работу в другую местность вместе с работодателем. Перевод на другую работу допускается только с письменного согласия работника (ст. ст. 72.1, 72.2 ТК РФ).

2.3.4. Перевод на другую постоянную работу в пределах одного образовательного учреждения оформляется приказом работодателя, на основании которого делается запись в трудовой книжке работника.

2.3.5. По соглашению сторон трудового договора, заключаемого в письменной форме, работник может быть временно переведен на другую работу  на срок до одного года, а в случае, когда такой перевод осуществляется для замещения временно отсутствующего работника, за которым сохраняется место работы, – до выхода этого работника на работу.

Если по окончании срока перевода прежняя работа работнику не предоставлена, а он не потребовал ее предоставления и продолжает работать, то условие соглашения о временном характере перевода утрачивает силу и перевод считается постоянным.

2.3.6. Перевод на не обусловленную трудовым договором работу без согласия работника возможен только в исключительных случаях, предусмотренных ст. 72.2 ТК РФ.

      При этом перевод на работу, требующую более низкой квалификации, допускается только с письменного согласия работника.

2.3.7. Исполнение работником обязанностей временно отсутствующего работника (отпуск, болезнь, повышение квалификации и т.д.) возможно только с согласия работника, которому работодатель поручает эту работу, и на условиях, предусмотренных ст. ст. 60.2, 72.2, 151 ТК РФ – без освобождения от основной работы или путем временного перевода на другую работу.

2.3.8. Перевод работника на другую работу в соответствии с медицинским заключением  производится в порядке, предусмотренном ст. ст. 73, 182, 254 ТК РФ.

2.3.9. Работодатель обязан в соответствии со ст. 76 ТК РФ отстранить от работы (не допускать к работе) работника:

появившегося на работе в состоянии алкогольного, наркотического или иного токсического опьянения;

не прошедшего в установленном порядке обучение и проверку знаний и навыков в области охраны труда;

не прошедшего в установленном порядке обязательный медицинский осмотр (обследование), а также обязательное психиатрическое освидетельствование в случаях, предусмотренных федеральными законами и иными нормативными правовыми актами Российской Федерации;

при выявлении в соответствии с медицинским заключением, выданным в порядке, установленном федеральными законами и иными нормативными правовыми актами Российской Федерации, противопоказаний для выполнения работником работы, обусловленной трудовым договором;

по требованию органов или должностных лиц, уполномоченных федеральными законами и иными нормативными правовыми актами Российской Федерации;

в других случаях, предусмотренных федеральными законами и иными нормативными правовыми актами Российской Федерации.

 

2.4. Прекращение трудового договора:

2.4.1. Прекращение трудового договора может иметь место только по основаниям, предусмотренным трудовым законодательством.

2.4.2. Трудовой договор может быть в любое время расторгнут по соглашению сторон трудового договора (ст. 78 ТК РФ).

2.4.3. Срочный трудовой договор прекращается с истечением срока его действия (ст. 79 ТК РФ).

О прекращении трудового договора в связи с истечением срока его действия работник должен быть предупрежден в письменной форме не менее чем за три календарных дня до увольнения, за исключением случаев, когда истекает срок действия срочного трудового договора, заключенного на время исполнения обязанностей отсутствующего работника.

Трудовой договор, заключенный на время выполнения определенной работы, прекращается по завершении этой работы.

Трудовой договор, заключенный на время исполнения обязанностей отсутствующего работника, прекращается с выходом этого работника на работу.

2.4.4. Работник имеет право расторгнуть трудовой договор, предупредив об этом работодателя в письменной форме не позднее чем за две недели (14 календарных дней), если иной срок не установлен ТК РФ или иным федеральным законом. Течение указанного срока начинается на следующий день после получения работодателем заявления работника об увольнении.

2.4.5. По соглашению между работником и работодателем трудовой договор может быть расторгнут и до истечения срока предупреждения об увольнении (ст. 80 ТК РФ).

В случаях, когда заявление работника об увольнении по его инициативе (по собственному желанию) обусловлено невозможностью продолжения им работы (зачисление в образовательное учреждение, выход на пенсию и другие случаи), работодатель обязан расторгнуть трудовой договор в срок, указанный в заявлении работника.

2.4.6. До истечения срока предупреждения об увольнении работник имеет право в любое время отозвать свое заявление. Увольнение в этом случае не производится, если на его место не приглашен в письменной форме другой работник, которому в соответствии с ТК РФ и иными федеральными законами не может быть отказано в заключение трудового договора.

По истечении срока предупреждения об увольнении работник имеет право прекратить работу.

Если по истечении срока предупреждения об увольнении трудовой договор не был расторгнут, и работник не настаивает на увольнении, то действие трудового договора продолжается.

2.4.7. Работник, заключивший договор с условием об испытательном сроке, имеет право расторгнуть трудовой договор в период испытания, предупредив об этом работодателя в письменной форме за три дня (ч. 4 ст. 71 ТК РФ).

2.4.8. Увольнение по результатам аттестации работников, а также в случаях сокращения численности или штата работников учреждения допускается, если невозможно перевести работника с его согласия на другую работу.

Причинами увольнения работников, в том числе педагогических работников, по п. 2 ч. 1 ст. 81 ТК РФ, могут являться:

– реорганизация учреждения;

– исключение из штатного расписания некоторых должностей;

– сокращение численности работников;

– уменьшение количества  групп;

2.4.9. Ликвидация или реорганизация образовательного учреждения, которая может повлечь увольнение работников в связи сокращением численности или штата работников, осуществляется, как правило, по окончании учебного года.

2.4.10. В соответствии с п. 8 ч. 1 ст. 81 ТК РФ трудовой договор может быть прекращен за совершение работником, выполняющим воспитательные функции, аморального проступка, несовместимого с продолжением данной работы.

Аморальным проступком является виновное действие или бездействие, которое нарушает основные моральные нормы общества и противоречит содержанию трудовой функции педагогического работника (например, поведение, унижающее человеческое достоинство, нахождение в состоянии алкогольного или наркотического опьянения и т.п.).

Допускается увольнение только тех работников, которые занимаются воспитательной деятельностью, и независимо от того, где совершен аморальный проступок (по месту работы или в быту).

Если аморальный проступок совершен работником по месту работы и в связи с исполнением им трудовых обязанностей, то такой работник может быть уволен с работы при условии соблюдения порядка применения дисциплинарных взысканий, установленного ст. 193 ТК РФ.

Если аморальный проступок совершен работником вне места работы или по месту работы, но не в связи с исполнением им трудовых обязанностей, то увольнение работника не допускается позднее одного года со дня обнаружения проступка работодателем (ч. 5 ст. 81 ТК РФ).

2.4.11. Помимо оснований, предусмотренных ст. 81 ТК РФ и иными федеральными законами, дополнительными основаниями прекращения трудового договора с педагогическим работником в соответствии со ст. 336 ТК РФ являются:

– повторное в течение одного года грубое нарушение устава образовательного учреждения;

– применение, в том числе однократное, методов воспитания, связанных с физическим и (или) психическим насилием над личностью обучающегося, воспитанника.

2.4.12.  Трудовой договор с работником образовательного учреждения подлежит прекращению по обстоятельствам, не зависящим от воли сторон ( ст. 83 ТК РФ – пункт 10 ст. 77 ТК РФ), а именно возникновение установленных ТК РФ, иным федеральным законом и исключающих возможность исполнения работником обязанностей по трудовому договору ограничений на занятие определёнными видами трудовой деятельности.

Трудовой договор с работником образовательного учреждения прекращается вследствие нарушения установленных ТК РФ (аб.6,ч.1, ст. 84 ТК РФ – пункт 11 ст. 77 ТК РФ), а именно правил его заключения в нарушение установленных ТК РФ, иными федеральными законами ограничений на занятие определенными видами трудовой деятельности.

В силу общего ограничения на занятие любой трудовой деятельностью в сферах деятельности, относящихся к несовершеннолетним, работодатель при наличии таких ограничений не вправе осуществлять перевод таких работников на другую работу в том же образовательном учреждении.

Прекращение трудового договора оформляется приказом  работодателя (ст. 84.1 ТК РФ).

С приказом  работодателя о прекращении трудового договора работник должен быть ознакомлен под роспись. По требованию работника работодатель обязан выдать ему надлежащим образом заверенную копию указанного приказа.

2.4.13. Днем прекращения трудового договора во всех случаях является последний день работы работника, за исключением случаев, когда работник фактически не работал, но за ним в соответствии с ТК РФ или иным федеральным законом сохранялось место работы (должность).

2.4.14. В день прекращения трудового договора работодатель обязан выдать работнику его трудовую книжку с внесенной в нее записью об увольнении и произвести с ним окончательный расчет.

Запись в трудовую книжку об основании и о причине прекращения трудового договора должна быть произведена в точном соответствии с формулировками ТК РФ или иного федерального закона и со ссылкой на соответствующие статью, часть статьи, пункт статьи ТК РФ или иного федерального закона.

2.4.15. При получении трудовой книжки в связи с увольнением работник расписывается в личной карточке и в книге учета движения трудовых книжек и вкладышей к ним.

 

процедура оформления, приказ, запись в трудовой, последствия

Для перевода сотрудника в рамках одного предприятия на другую должность, согласно Трудовому Кодексу РФ, необходимо составить дополнительное трудовое соглашение к уже существующему. Таким образом осуществляется перевод в рядовой ситуации. Но это не всегда бывает возможным.

Когда с помощью перевода оформить специалиста в той же организации не удается, используют другую форму — через увольнение с последующим приемом по переводу. Чаще это касается тех случаев, когда трудовое соглашение носит временный характер. В других ситуациях использовать такую форму нецелесообразно, поскольку она скрывает много подводных камней и сотрудник в конечном итоге может остаться без работы.

Нормативное регулирование

Перевод посредством увольнения является нормой и регулируется Трудовым Кодексом РФ. При оформлении процедуры опираются на конкретные статьи и пункты ТК:

• Пункт 5, часть 1, статья 77 ТК РФ,
• Часть 1, пункт 7, статья 77 ТК РФ,
• Статья 127 ТК РФ, абзац 1,
• Пункт 72.1 ТК РФ.

Запись в трудовой книжке при переводе сотрудника в другую организацию

Основания для прекращения трудового договора

Как оформить перевод через увольнение в одной организации

Формально перевод посредством увольнения выглядит так же, как при переводе посредством увольнения в другую организацию. Отличительной особенностью процедуры является отсутствие трехстороннего соглашения. Здесь требуется только предложение настоящего работодателя и согласие или отказ сотрудника. Оформляется увольнение только с согласия сотрудника.

Но здесь есть один момент: в чрезвычайных ситуациях на предприятии, согласно трудовому кодексу, работника могут перевести на другую должность и без его согласия.

Все эти ситуации в ТК РФ описаны. Опираясь на них, работодатель имеет полное право на такое действие. При переводе в другую организацию этот закон не действует.

Необходимые документы

• Письменное уведомление работодателя с предложением новой вакансии,
• Согласие сотрудника, заверенное так же письменно,
• При чрезвычайной ситуации подтверждение данного факта документально,
• Приказ начальника об увольнении на основании согласия сотрудника (или чрезвычайных обстоятельств).

Приказ об увольнении переводом

Процедура

Процедура такой формы перевода практически не отличается от аналогичной процедуры перевода к другому работодателю. Алгоритм:

1. Устное соглашение сторон,
2. Письменное соглашение сотрудника,
3. Начальник издает приказ об увольнении в форме перевода на другую должность, указывая основание для увольнения, стандартная форма Т-8,
4. Сотрудник должен ознакомлен с приказам и поставить свою подпись,
5. Составляют новое трудовое соглашение,
6. Выполняются необходимые записи (увольнение и оформление в новой должности): в трудовой, в журнале регистрации, в личном деле работника, в его личной карточке,
7. Выполняется полный расчет,
8. Выплачиваются все начисления и компенсации.

Запись в трудовой

Запись в трудовой книжке выполняется аналогично той, которую вносят при переводе сотрудника в другую организацию, т. е. она содержит ссылку на нормативы ТК РФ и формулировку «перевод через увольнение». Отличие от аналогичного случая в том, что принимающей стороной будет прописан текущий работодатель, но стой же пометкой «принят на работу переводом в ___ должности».

У записей при таком увольнении существует четко установленная структура, т. е. канон (клише), от которого отступать недопустимо. Ссылка на ТК РФ обязательна.

Образец записи в трудовую о переводе

Стаж и отпуск при таком увольнении

Две причины, по которым такой перевод является нежелательным, поскольку стаж прерывается и заслуженный отпуск, если сотрудник им не успел воспользоваться, так же теряет актуальность. Отпуск на новой должности придется зарабатывать заново.

Такой казус будет компенсирован материально, т. е. предприятие выплачивает деньги (компенсацию) за неиспользованный отпуск. Все, как при формальном увольнении.

Нормы законодательства при увольнении по переводу и выплате компенсации

Возможен ли перевод без увольнения

Перевод через увольнение, являясь законным, остается все же крайней мерой, т. е. его осуществляют при невозможности оформления простого перевода. Перевод без увольнения оформляют чаще, и это нормально.

При переводе без увольнения не прерывается трудовой стаж, не теряется заслуженный отпуск, т. е. сохраняются все права сотрудника. Увольнение для перевода применяют только тогда, когда перевод без увольнения становится невозможным, например — срочное трудовое соглашение.

Уход в связи с отказом от перевода на другую должность

Увольнение при отказе сотрудника от перевода на другую должность имеет законные основания: ч. 1 п. 7 ст. 77 ТК РФ. Несмотря на то, что 72 статья ТК РФ допускает перевод сотрудника только с его письменного согласия, часто возникают факторы непреодолимой силы. В этих ситуациях работодатель имеет полное право уволить сотрудника, который отказался от предложенной должности. Почему так происходит?

Здесь очень важен момент соблюдения ТК работодателем и сотрудником соответственно:

• Если предвидятся изменения на предприятии, работодатель обязан уведомить о них сотрудника за 2 месяца до этого момента. Не только уведомить, но и обосновать письменно,
• Работодатель обязан предложить сотруднику все возможные аналогичные вакансии,
• Если новые условия труда и предложенные вакансии сотрудника не устраивают, то трудовой договор расторгается на основании п. 7 ч. 1 ст. 77 ТК РФ.
• Выплата выходного пособия сотруднику является обязательной (она составляет среднюю сумму двух последних трудовых недель).

Причиной увольнения при отказе сотрудника может быть и состояние его здоровья, когда работодатель обязан перевести его на более легкий труд в результате заболевания или состояния, требующего легкой формы труда: беременность, детский возраст и т. д. Отказ сотрудника от новой должности или отсутствие новой вакансии могут быть причиной его увольнения на законных основаниях.

К сожалению, иногда эта форма увольнения является уловкой работодателя, когда нет оснований лишить его занимаемой должности законно. Работодатель может предложить сотруднику должность с меньшим окладом, на других условиях. Под предлогом отказа работника увольняют с занимаемой должности. Такие действия являются административным нарушением, если противоречат действительному трудовому соглашению.

Перевод на другую должность по личному заявлению и его нюансы — в видео ниже:

Порядок увольнения дистанционного работника | Интерактивный портал службы труда и занятости населения министерства труда и социального развития Краснодарского края

Прекратить трудовой договор с дистанционным работником можно по общим основаниям, так же как и с другими сотрудниками (ст. 77 ТК РФ). На дистанционных работников распространяется действие трудового законодательства и иных актов, содержащих нормы трудового права (ч. третья ст. 312.1 ТК РФ). Это значит, что когда вы решаете уволить такого сотрудника в связи с сокращением численности (штата), убедитесь, что он не относится к категории, которую запрещено увольнять. Например, на попечении работника находятся несовершеннолетние дети, которых он воспитывает без родителей (ст. 261 ТК РФ). Выясните, имеет ли он преимущественное право на то, чтобы остаться на работе (ст. 179 ТК РФ).Обратите внимание на то, что дистанционный работник не перемещается вместе с организацией. Следовательно, с ним нельзя расторгнуть трудовой договор в связи с отказом от перевода на работу в другую местность вместе с работодателем (п. 9 ч. первой ст. 77 ТК РФ).
     
Помимо общих оснований в трудовом договоре о дистанционной работе, можно установить дополнительные основания увольнения по инициативе работодателя, которых в Трудовом кодексе РФ нет (ч. первая ст. 312.5 ТК РФ). Они должны иметь четкие, ясные и конкретные формулировки, чтобы избежать спорных ситуаций и двоякого толкования условий договора.

Кроме того, дополнительные основания для увольнения по инициативе работодателя обязательно должны быть связаны с функциями, обязанностями сотрудника. Практика выработала несколько типичных оснований увольнения дистанционного работника, которые наиболее часто включают в трудовые договоры. Это, в частности:

– неоднократное, более трех раз, несоблюдение сроков выполнения порученной сотруднику работы или несоответствия ее результатов требованиям, закрепленным в трудовом договоре;
– неоднократное, более трех раз, нарушение сроков представления отчетов о выполненной работе;
– отказ сотрудника от использования в работе средств защиты информации, предоставленных или рекомендованных работодателем, и др.
     
Представляется крайне сложным уволить дистанционных работников за прогул, что объясняется невозможностью доказать сам факт прогула. Характер дистанционной работы предполагает выполнение трудовой функции вне места нахождения работодателя и вне стационарного рабочего места. Здесь главным условием является использование сотрудником сети Интернет для взаимодействия с организацией (ч. первая ст. 312.1 ТК РФ). Фактически характер дистанционных трудовых отношений приближен к договору возмездного оказания услуг, когда оплачивается результат работы, а не время, затраченное на ее исполнение. Дистанционный работник вправе самостоятельно определять режим рабочего времени и времени отдыха, если иное не предусмотрено в трудовом договоре (ч. первая ст. 312.4 ТК РФ). То есть все зависит от того, какой режим рабочего времени и его контроля установлены трудовым договором для дистанционного работника.
     
Нередко возникает ситуация, когда необходимо обеспечить участие дистанционного сотрудника в производственном процессе одновременно с работниками на стационарных рабочих местах. Тогда в трудовом договоре можно конкретизировать режим рабочего времени (ч. первая ст. 312.4 ТК РФ). Например, установить пятидневную рабочую неделю (40 часов) с двумя выходными днями. В таком случае работодатель может уволить сотрудника за прогул при условии, что будет соблюдена процедура такого увольнения (ст. 84.1, 193 ТК РФ).
     
Прекращение трудового договора с удаленным сотрудником можно оформить как традиционным способом (на бумаге), так и электронным. Бумажный вариант заключается в обмене документами через обычную почту посредством заказных писем с уведомлением об их вручении адресату (гл. 49.1 ТК РФ). На практике многие работодатели приглашают дистанционного работника  приехать в офис, чтобы подписать необходимые бумаги. 

Если дистанционный работник и работодатель договорились о взаимодействии путем обмена электронными документами, они оба должны иметь усиленные квалифицированные электронные подписи (ч. четвертая ст. 312.1 ТК РФ, ч. 1 ст. 5 Федерального закона от 6 апреля 2011 г. № 63-ФЗ). При этом каждая из сторон обязана направлять другой подтверждение о получении ею электронных документов. Срок для отправки подтверждения устанавливается трудовым договором (ч. четвертая ст. 312.1 ТК РФ).

Удаленный работник присылает вам заявление на увольнение в электронном виде, заверив его усиленной квалифицированной подписью.Приказ об увольнении направляется ему также в форме электронного документа (ч. вторая ст. 312.5 ТК РФ).

Однако даже при наличии усиленных квалифицированных подписей полностью отказаться от составления документов на бумаге не получится. Работодатель обязан выслать дистанционному работнику заказным письмом с уведомлением о вручении бумажную копию приказа об увольнении, оформленную надлежащим образом (ч. вторая ст. 312.5 ТК РФ). Причем сделать это нужно непосредственно в день прекращения трудового договора.

Дата составления приказа и день увольнения могут совпадать с датой отправки приказа по электронной и обычной почте, поскольку сотрудник предварительно был ознакомлен с документом в электронной форме.
     
Если на дистанционного работника велась трудовая книжка, то при увольнении необходимо внести в нее соответствующую запись, которая оформляется в общем порядке. В случае когда расторжение договора происходит по дополнительным основаниям, укажите не только пункт и часть статьи Трудового кодекса, но и пункт трудового договора. 

Затем получите от сотрудника согласие на отправку трудовой книжки по почте в форме электронного документа с электронной подписью или в бумажном виде (ч. шестая ст. 84.1 ТК РФ). В день увольнения выслать сотруднику трудовую книжку заказным письмом с уведомлением (п. 36 Правил, утвержденных постановлением Правительства РФ от 16 апреля 2003 г. № 225 (далее – Правила ведения и хранения трудовых книжек)). Если же он присутствует в день увольнения в офисе, выдать трудовую книжку на руки.

Если трудовая книжка направляется дистанционному работнику с его согласия по почте, в книге учета движения трудовых книжек и вкладышей в них нужно сделать об этом отметку (п. 40, 41 Правил ведения и хранения трудовых книжек). 
     
Помимо трудовой книжки запись об увольнении вносится в личную карточку сотрудника, которого нужно ознакомить с ней под роспись (п. 12, 41 Правил ведения и хранения трудовых книжек). Соблюсти это требование возможно путем обмена электронными документами (ч. пятая ст. 312.1 ТК РФ). Такой вариант приравнивается к ознакомлению сотрудника под личную роспись. Программное обеспечение, применяемое для кадрового учета, должно позволять ведение личных карточек в электронном виде.
     
В последний день работы сотрудника выплатите ему окончательный расчет, выдайте справку о сумме заработка и специальных периодов за текущий и два предшествующих увольнению года (ч. пятая ст. 80 ТК РФ, п. 3 ч. 2 ст. 4.1 Федерального закона от 29 декабря 2006 г. № 255-ФЗ). Если выдать справку лично невозможно, отправьте работнику уведомление о том, что он должен либо сам явиться за справкой в бухгалтерию, либо написать письмо о том, что желает получить ее по почте.
     
Если дистанционному работнику понадобятся документы, связанные с работой, то заявление об их выдаче он может отправить работодателю в электронном виде (ч. четвертая ст. 84.1, ч. шестая ст. 312.1 ТК РФ). Работодатель в течение трех рабочих дней со дня подачи такого заявления должен выслать копии запрошенных документов, заверенные надлежащим образом (ч. восьмая ст. 312.1 ТК РФ). По просьбе работника эти копии можно направить заказным письмом с уведомлением или в форме электронного документа.

ГКУ КК “Центр занятости населения Каневского района”

Увольнение переводом

Один из специфических вариантов прекращения сотрудничества с работником – увольнение в порядке перевода в другую организацию. Оно происходит с учетом особых правил и требует создания определенного количества дополнительных документов. Для минимизации рисков споров с работником необходимо строго придерживаться закрепленных законодательством процедур увольнения переводом.

Также смотрите:

Основания для расторжения трудового договора по переводу

Законодательство допускает перевод сотрудника на работу от текущего нанимателя к другому работодателю (ч. 2 ст. 72.1 ТК РФ). При этом делают прекращение трудового договора по прежнему месту работы в порядке перевода (п. 5 ч. 1 ст. 77 ТК РФ).

Особенности подобной категории увольнений таковы:

• наличие добровольного волеизъявления 3-х сторон – старого и нового нанимателя, сотрудника;
• возможность для работника провести увольнение переводом по договоренности – как с отработкой, так и без нее. Например, можно согласовать период работы до ухода в 1-2 дня или неделю либо вообще покинуть компанию одной датой;
• отсутствуют ограничения на подобный вариант прекращения трудовых отношений для какой-либо категории сотрудников, так как он не связан с инициативой администрации компании.

Для проведения подобного расторжения трудовых отношений должно быть достигнуто соглашение о том, чтобы сделать перевод через увольнение между сотрудником, текущим и новым работодателем. Оно может быть закреплено двумя способами:

1. Получение текущим работодателем заявления или письма-предложения о переводе от нового нанимателя и передача последнему ответа в форме письма-согласия.
2. Заключение между сотрудником и двумя работодателями трехстороннего соглашения.

После того, как договоренность достигнута и оформлена одним из указанным способов, начинают процедуру увольнения переводом в другую организацию.

Как проходит документальное оформление соглашения о переводе

В зависимости от выбранного варианта достижения договоренности меняется документооборот.

Обмен письмами-согласиями

В этом случае нужно соблюсти следующие процедуры:

• Сотрудник пишет в администрацию своей компании заявление в произвольной форме о желании перевестись к другому работодателю.

Типовой формы такого документа не установлено. Но он обязательно должен включать:

1. Ф.И.О. и название должности трудящегося.
2. Просьбу на увольнение в порядке перевода на другое предприятие.
3. Предполагаемую дату расставания.

Лучше приложить к нему приглашение на работу от нового работодателя.

• Потенциальный наниматель направляет текущему работодателю письмо-предложение в произвольной форме.

Оно должно содержать следующие данные:

1. Наименование компании.
2. Ф.И.О. и должность сотрудника, которого планируют принять.
3. Предложение перевести работающего.
4. Срок на одобрение со стороны текущего нанимателя и указание на форму, в какой оно должно быть дано.
5. Дату, с которой работник приступит к новой работе, а также наименование его должности.
6. Подписи уполномоченных лиц.

• В случае отсутствия возражений на перевод текущий работодатель направляет ответ в виде письма-согласия в произвольной форме.

В нем указывают:

1. Дату и входящий номер письма-предложения, на который дают ответ.
2. Информацию о том, что от сотрудника получено заявление на перевод.
3. Предполагаемую дату, на которую компания согласна отпустить своего работника.

Описанный вариант довольно трудоемок и занимает много времени, поэтому на практике чаще применяют иной способ – с применением трехстороннего соглашения.

Соглашение 3-х сторон

Его заключают в письменном виде все участники процесса. Подобный документ тоже не имеет установленного образца и оформляется в произвольном виде. Он должен содержать следующие данные:

1. Идентификационную информацию об участниках соглашения – работодателях, сотруднике.
2. Четкое подтверждения намерения, а также условия будущего перевода, включающие даты увольнения со старого места и приема на новое, будущую должность и основание со ссылкой на п. 5 ч. 1 ст. 77 ТК РФ.
3. Дополнительные условия, если стороны посчитают их существенными.

Как проходит процедура увольнения переводом

После оформления согласия всех участников одним из приведенных выше способов увольнение в порядке перевода оформляют по стандартной схеме:

1. Издание приказа об увольнении на оговоренную участниками дату.

Он может быть составлен в свободной форме или с применением бланка № Т-8.

В качестве основания для прекращения трудовых отношений указывают формулировку – «Перевод работника по его просьбе (с его согласия) на работу к другому работодателю, п. 5 ч. 1 ст. 77 ТК РФ».

Также указывают реквизиты документов, которыми подтверждено достижение взаимного согласия на перевод.

С приказом работника знакомят под роспись.

2. Оформляют трудовую книжку, вносят данные в регистр сведений о трудовой деятельности.

Формулировка причины ухода работника должна быть аналогична той, что приведена в приказе, с обязательной ссылкой на п. 5 ч. 1 ст. 77 ТК РФ.

Если сотруднику ведут книжку в бумажном виде, он расписывается в ней после внесения последней записи. Кроме того, запись об увольнении переводом вносят в личную карточку работника.

3. В день увольнения с работником проводят полный расчет.

Он включает:

• зарплату за отработанное до увольнения время;
• компенсацию неиспользованных дней отпуска;
• иные выплаты, предусмотренные политикой организации.

Если сотрудник в этот день не работал, то эти суммы должны быть выплачены не позднее следующей за днем увольнения даты (ч. 1 ст. 140 ТК РФ).

В КонсультантПлюс есть ГОТОВОЕ РЕШЕНИЕ по теме этой статьи. Бесплатный доступ на 2 дня. 

4. Работнику в последний его трудовой день выдают документы, связанные с работой:

• трудовая книжка (если ведется) или форма СТД-Р;
• справка о зарплате за 2 года до года увольнения;
• выписка из формы СЗВ-СТАЖ – о страховом стаже сотрудника;
• выписка из формы СЗВ-М;
• выписка из расчета по страховым взносам – в части персонифицированных данных о застрахованном лице;
• справка о полученных доходах и удержанных налогах (2-НДФЛ).

Итоги

Увольнение в порядке перевода – это процедура, имеющая нюансы оформления. Основное то, что необходимо достичь и задокументировать согласие трех сторон – нынешнего и будущего работодателя, а также самого сотрудника.

Автономность и операционная концепция для самоудаления космического корабля: обнаружение состояния, запуск удаления и пассивация

https://doi.org/10.1016/j.actaastro.2019.07.014Получить права и контент

Основные моменты

•

Введение проект «Технология самоудаления космических аппаратов».

•

Операционные концепции для независимого модуля утилизации после миссии.

•

Функциональная архитектура модуля утилизации после миссии.

•

Автономное обнаружение статуса и запуск удаления для утилизации после миссии.

•

Полный список методов пассивации.

Реферат

Растущее количество космического мусора представляет угрозу для космических аппаратов будущего на околоземной орбите. Технология самоудаления космических аппаратов TeSeR – это инновационный проект одиннадцати европейских партнеров, координируемый Airbus Defense & Space в рамках HORIZON2020 Европейской комиссии с целью разработки модуля удаления, который может быть доставлен на орбиту космическими аппаратами будущего. любого размера и массы на любую орбиту, соединенные между собой только стандартизированным интерфейсом.В начале 2019 года прототип уже должен продемонстрировать основные функции на земле. В этом документе представлена ​​концепция миссии и эксплуатации, а также функциональная архитектура и представлены соображения автономности при проектировании всего модуля утилизации после миссии с упором на три области: обнаружение статуса основного космического корабля с помощью разработанного модуля утилизации после миссии. , запуск удаления модулем утилизации после миссии в случае потери связи с наземной станцией и неисправности главного космического корабля, а также варианты пассивации главного космического корабля и самого модуля утилизации после миссии.

Ключевые слова

Утилизация после миссии

Уменьшение образования космического мусора

Устойчивое развитие

Автономные операции

Самоудаление

TeSeR

Пассивация

Обнаружение статуса

Автономность на борту

© 2019 Авторы. Опубликовано Elsevier Ltd от имени IAA.

Рекомендуемые статьи

Ссылки на статьи

Спиновая биохимия модулирует образование активных форм кислорода (АФК) с помощью радиочастотных магнитных полей

Abstract

Исследовано влияние слабых магнитных полей на биологическое производство активных форм кислорода (АФК) из внутриклеточного супероксида (O ₂ ^{• –} ) и внеклеточной перекиси водорода (H ₂ O ₂ ). in vitro с клетками гладких мышц легочной артерии крысы (rPASMC).Уменьшение концентраций O ₂ ^{• –} и увеличение H ₂ O ₂ наблюдалось в присутствии радиочастоты 7 МГц (RF) при 10 мкТл _RMS и статических магнитных полях 45 мкТл. . Мы предполагаем, что продукция O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ в некоторых метаболических процессах происходит посредством синглет-триплетной модуляции ферментов семихинон флавин (FADH ^• ) и O ₂ ^{• –} спин-коррелированные радикальные пары.Продукты спин-радикальных пар модулируются радиочастотными магнитными полями 7 МГц, которые предположительно разделяют сверхтонкие взаимодействия флавинов во время спиновой когерентности. Сверхтонкое разделение RF-флавинов приводит к увеличению продуктов синглетного состояния H ₂ O ₂ , что создает клеточный окислительный стресс и действует как вторичный мессенджер, влияющий на пролиферацию клеток. Это исследование демонстрирует взаимодействие между продукцией O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ под влиянием магнитных полей RF и подчеркивает тонкое влияние низкочастотных магнитных полей на окислительный метаболизм, передачу сигналов ROS и клеточную рост.

Образец цитирования: Usselman RJ, Hill I, Singel DJ, Martino CF (2014) Спиновая биохимия модулирует производство активных форм кислорода (ROS) с помощью радиочастотных магнитных полей. PLoS ONE 9 (3): e93065. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0093065

Редактор: Йорг Ланговски, Немецкий онкологический исследовательский центр, Германия

Поступила: 9 сентября 2013 г .; Одобрена: 28 февраля 2014 г .; Опубликовано: 28 марта 2014 г.

Авторские права: © 2014 Usselman et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа была частично поддержана правительством США, но не защищена авторским правом США. Дополнительного внешнего финансирования для этого исследования получено не было. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.

Введение

Одна из величайших задач в области химической и физической биологии – преодолеть разрыв в знаниях между атомным и клеточным уровнями [1]. Сосредоточенная на биологическом интерфейсе квантов и классиков, развивающаяся область, называемая квантовой биологией, обещала предложить новые и убедительные идеи фундаментальных лежащих в основе клеточных процессов с точки зрения квантовых явлений [2], [3].Следуя этой парадигме, мы представляем новую методологию косвенного исследования возможных квантовых эффектов в биологических системах с применением статических и переменных магнитных полей, которые вызывают изменения в магниточувствительных парах свободных радикалов в биохимических реакциях. Некоторые данные свидетельствуют о влиянии такого воздействия на морфологию клеток, кривые роста и экспрессию белков, подразумевая лежащее в основе метаболическое влияние [4] – [7]. Влияние слабых магнитных полей на клеточные метаболические процессы недостаточно изучено, и мало что известно о том, как магнитные поля влияют на скорость реакции в окислительном метаболизме [8] – [10].Эта работа направлена ​​на выяснение биологических реакций, которые чувствительны к радиочастотным (RF) магнитным полям, включающим производство активных форм кислорода (ROS), которые предположительно возникают из пар свободных радикалов с коррелированной спиновой связью.

Во многих биологических процессах реакционная способность молекулярного кислорода и образование кислородных радикалов являются следствием окислительного дыхания [11], [12]. Большинство организмов разработали защитные ферментные системы, которые опосредуют продукцию АФК.Одним из первых шагов в производстве ROS является одноэлектронное восстановление молекулярного кислорода (O ₂ ), которое приводит к образованию супероксида (O ₂ ^{• –} ). Супероксид часто является прекурсором для других разновидностей АФК, таких как перекись водорода (H ₂ O ₂ ), пероксинитрит (ONOO ^–), липидные и гидроксильные радикалы ( ^• OH) [13], в которых наблюдается избыточное производство O ₂ ^{• –} часто приводит к окислительному стрессу. Однако в нормальных физиологических условиях роль O ₂ ^{• –} начинает проявляться как важная сигнальная молекула, которая контролирует определенные биохимические реакции и метаболические пути [12].Центральный принцип этой парадигмы состоит в том, что многие клеточные процессы способны производить O ₂ ^{• –} , тогда как большая часть поколения H ₂ O ₂ образуется исключительно из предшественника O ₂ ^{• –} . Связь между потреблением O ₂ ^{• –} и производством H ₂ O ₂ может включать восстановленный фермент флавин, который переносит электрон для активации молекулярного кислорода в O ₂ ^{• –} , который затем либо высвобождается или ферментативно превращается в H ₂ O ₂ [11], [14].В принципе, эта реакция может включать магниточувствительную спин-коррелированную радикальную пару между семихиноном флавина (FADH ^• ) и O ₂ ^{• –} , которая может быть опосредована слабыми магнитными полями [15] – [17].

Основной задачей современной биоэлектромагнетизма является выяснение молекулярных механизмов и взаимодействий между биологическими системами и электромагнитными полями [18]. Механизм спин-коррелированных пар радикалов (SCRPM) предлагает наиболее правдоподобное объяснение того, как магнитные поля могут влиять на биохимические реакции [8], [19], [20].В частности, передача экситонной энергии при фотосинтезе хорошо описана в SCRPM [21], [22]. Совсем недавно предположили, что SCRPM играет роль в магниторецепции, которая включает в себя навигацию птиц [23] и плодовых мух [24], витамин B _12, -зависимые ферменты [20] и продукцию АТФ [25]. Считается, что в той или иной форме магниторецепторы присутствуют в организмах, от магнитотаксических и фотосинтетических бактерий до насекомых, птиц и млекопитающих, хотя подробные активированные биохимические пути еще предстоит доказать экспериментально и полностью понять [26].

За исключением пары фотоиндуцированных криптохромом радикалов как возможного магниторецептора при восприятии птиц, преобладание эффектов магнитного поля в физиологических условиях in vivo ставится под сомнение [27]. Более того, попытки экспериментов по воспроизводимости оспаривают опубликованные результаты по эффектам магнитного поля в продукции АТФ и ферментов B ₁₂ [28], [29]. Имея в виду это предостережение, мы предполагаем, что на широкое распространение продукции свободных радикалов в клеточном метаболизме могут в некоторой степени влиять магнитные поля через SCRPM.В частности, формирование спин-коррелированных состояний радикальной пары между ферментом FADH ^• и O ₂ ^{• –} может быть изменено радиочастотными магнитными полями [11], [15]. Мы предполагаем, что радиочастотные магнитные поля могут влиять на спиновую динамику в парах свободных радикалов во время клеточного метаболизма и тем самым определять выходы продуктов O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ , которые связаны с синглет-триплетными состояниями в свободнорадикальной биохимии.

Чтобы проверить эти идеи, мы исследовали in vitro влияние магнитных полей на биологическое производство внутриклеточного O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ в гладкомышечных клетках легочной артерии крыс (rPASMC) .Более конкретно, клетки подвергали воздействию контролируемого статического магнитного поля (SMF) 45 мкТл (аналогично естественным полям окружающей среды) или SMF в сочетании с перпендикулярно приложенными слабыми радиочастотными магнитными полями 10 мкТл _RMS на 7 МГц. В дальнейшем мы будем называть контрольную группу SMF, а группу, подвергшуюся воздействию 7 МГц, – RF. Чтобы выяснить связь между потреблением O ₂ ^{• –} и производством H ₂ O ₂ , были проведены клеточные анализы для одновременного измерения O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ с и без приложенных радиочастотных магнитных полей.Наши результаты показывают, что радиочастотные магнитные поля влияют не только на распределение продуктов АФК, но и на скорость роста клеток. Взятые вместе, это исследование демонстрирует взаимодействие между производством O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ под влиянием магнитных полей RF и подчеркивает тонкое влияние низкочастотных магнитных полей на окислительный метаболизм, передачу сигналов ROS, и рост клеток.

Спиновая биохимия

Существует значительный теоретический и экспериментальный интерес к спиновым эффектам, которые возникают в результате свободнорадикальных биохимических реакций [14], [16], [17], [30]; в частности, реакция активации молекулярного кислорода восстановленными флавинами и, как следствие, генерация связанных активных АФК [11], [31].Лаборатория Шультена взяла фундаментальные идеи, разработанные в предыдущей работе [16], [17], [23], и применила их значение к примеру биологической функции in vivo , в частности роли криптохрома как магниторецептора в случае магнитное зондирование птиц [15]. Следуя химии флавинов, предложенной Мэсси [11], Соловьев постулировал схему реакции, которая включает связанный с ферментом нейтральный кофактор флавина FADH ^• и O ₂ ^{• –} в качестве спин-коррелированных радикальных пар в передаче сигналов криптохрома. [15].Аналогичная реакция была также теоретически смоделирована в контексте глюкозооксидазы и спин-орбитального взаимодействия в радикальных парах FADH ^• / O ₂ ^{• –} [32] – [34]. Hogben et al. Компания критически оценила возможность реализации FADH. Основываясь на теоретических основаниях, Оксфордская группа обобщила различные предложенные схемы реакций и выразила сомнение в применимости различных вариантов этой модели в контексте передачи сигналов криптохрома.Что касается окисления FADH ₂ реакцией O ₂ (рис. 1B в [35]), авторы заявляют, что реакция является магниточувствительной в принципе, но по-прежнему скептически относятся к образованию достаточной спиновой корреляции. В качестве отправной точки мы подумали, что было бы полезно использовать эту спиновую биохимию для лучшего понимания общих эффектов магнитных полей в экспериментальной физической биологии. Таким образом, план заключался в использовании клеточных анализов, чтобы продемонстрировать, что метаболические пути, участвующие в производстве пероксида O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ , являются магниточувствительными реакциями, как предсказывает спин-коррелированный радикал. парная биохимия, см. ниже .

Рис. 1. Общая схема реакции включает спиновую биохимию связанного с ферментом восстановленного флавина и молекулярного кислорода.

Магнитные поля RF модулируют скорость взаимного превращения синглет-триплетных спин-коррелированных радикальных пар. Это влияние нарушает гомеостаз АФК и, следовательно, распределения продуктов H ₂ O ₂ и O ₂ ^{• –} , которые были измерены отдельными спектроскопическими методами.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0093065.g001

На рисунке 1 представлена ​​общая схема реакции, которая включает спиновую биохимию связанного с ферментом восстановленного флавина (FADH ₂ ) и O ₂ . Одиночный электрон переносится от FADH ₂ к O ₂ и дает FADH ^• и O ₂ ^{• –} свободнорадикальную геминатную пару со спиновой корреляцией в триплетном состоянии. Радиочастотное магнитное поле 7 МГц (10 мкТл _{среднеквадратичное значение} ) разъединяет сверхтонкие взаимодействия флавинов во время спиновой когерентности и, таким образом, опосредует взаимное преобразование между синглетным и триплетным состояниями.Электронно-ядерный двойной резонанс недавно был выполнен на серии флавиновых ферментов, и было обнаружено, что флавиновые связи имеют анизотропные сверхтонкие связи с полосой пропускания 7–35 МГц [36]. Здесь мы предполагаем, что спиновые пары с частотой сверхтонкого резонанса 7 МГц сдвигают равновесие спиновых пар в синглетное состояние, сохраняя вероятность и приводя к увеличению синглетных продуктов (H ₂ O ₂ ) за счет триплетные изделия (О ₂ ^{• –} ).В триплетном состоянии O ₂ ^{• –} высвобождается из пары радикалов, «заключенной в клетку» фермента и затем может реагировать с циклическими спиновыми зондами гидроксиламина, что измеряется спектроскопией электронного парамагнитного резонанса (ЭПР). Синглетное состояние образует химическую связь, которая приводит к образованию C (4a) -гидропероксида флавина. Добавление протона образует нейтральный гидропероксид и приводит к высвобождению перекиси водорода, что измеряется флуоресценцией Amplex Red Ultra.

Достаточность использования одной частоты колебаний 7 МГц на нижнем конце диапазона широкополосной сверхтонкой связи флавинов (7–35 МГц) основывается на предположении, что одна из спиновых пар (O ₂ ^{• –} ) лишено сверхтонких взаимодействий, и, таким образом, общее сверхтонкое взаимодействие должно быть уменьшено [15], [37].Предполагаемое снижение сверхтонкого взаимодействия в значительной степени зависит от локальной среды или диапазона сред, принимаемых парой спиновых радикалов, как и ожидается в сложных клеточных системах. В контексте прикладной системы Ritz et al. использовал широкополосную радиочастоту и одну частоту 7 МГц, чтобы продемонстрировать эффекты зеемановского (1,3 МГц при 45 мкТл) и, предположительно, сверхтонкого (7 МГц) резонанса, соответственно, для птичьего магнитного компаса [16], [38]. В нашей работе цель состояла в том, чтобы отделить Зееман (1,3 МГц при 45 мкТл SMF) от резонансов сверхтонкой связи (7–35 МГц) и попытаться исследовать исключительно энергии сверхтонкой связи.Следуя ранее опубликованным значениям экспериментальных параметров, статическое магнитное поле, частота колебаний и амплитуда были специально выбраны для обеспечения наиболее вероятного успеха для получения отклика магнитного поля. Многие биологические молекулы демонстрируют константы сверхтонкого расщепления в диапазоне 0,1–35 МГц [36], [38], и поэтому мы предполагаем, что частота 7 МГц, скорее всего, влияет на клеточные химические реакции, в которых участвуют биомолекулы со сверхтонкими связями равной энергии [36], [37].Чтобы полностью разделить вклады от зеемановской и сверхтонкой связи, необходимо оценить зависимость магнитного поля, частоты и интенсивности, что выходит за рамки данной статьи.

Чтобы описать нарушение гомеостаза АФК, которое приводит к изменениям распределения продукта под действием радиочастотных магнитных полей, мы используем новые методы, которые являются новаторскими расширениями и приложениями магнитного резонанса с определением выхода продукта (PYDMR) [39]. Разумное объяснение наблюдаемых результатов следующее: (1) восстановленный флавин и молекулярный кислород образуют промежуточную спин-коррелированную пару свободных радикалов FADH ^• / O ₂ ^{• –} ; 2) сверхтонкие переходы радикальной пары модулируют спиновую корреляцию между ними; (3) на скорость межсистемного пересечения синглетных и триплетных состояний свободных радикалов влияет модуляция спиновой корреляции магнитным полем; (4) измеренные выходы продуктов АФК относительно различаются из-за изменений синглетной и триплетной вероятностей; следовательно, равновесие АФК в ячейках фундаментально изменяется экспериментальными осциллирующими магнитными полями при соответствующих условиях.На рисунке 2 показана простая диаграмма резонансных переходов RF, которые могут изменять выходы продуктов для связанных триплетных (O ₂ ^{• –} ) и синглетных (H ₂ O ₂ ) состояний. Следует отметить, что начальные состояния радикальной пары могут быть определены по изменению относительного выхода продукта невозмущенных образцов (случай SMF). Если исходное состояние радикальной пары находится в триплетном состоянии, то триплетные продукты должны уменьшаться, а синглетные продукты увеличиваться, наоборот .

Рис. 2. Схематическая иллюстрация демонстрирует синглет-триплетные переходы, которые влияют на кинетику эффективной скорости межсистемного пересечения (k _ISC ) в радикальной паре.

Линии синусоиды представляют собой радиочастотные переходы, которые влияют на эффективную скорость межсистемного пересечения. Радикальные пары, которые начинаются в триплетном состоянии, приводят к увеличению выхода синглетных продуктов с сопутствующим уменьшением триплетных продуктов, и наоборот .

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0093065.g002

Общие представленные схемы реакции и PYDMR действительны для оксидаз, но не ограничиваются этим семейством ферментов. Потенциально другой спиновый биохимический процесс может присутствовать в клеточном метаболизме, потому что SCRPM не зависит от какой-либо конкретной химической идентичности радикалов [40]. Однако частоты, амплитуды и ориентационная зависимость осциллирующих полей, которые возмущают динамику радикальных пар, существенно зависят от химического окружения локального фермента (флавина) [37], [38], [41].Таким образом, мы ожидаем, что 7 МГц находится в пределах широкополосного диапазона (0,1–35 МГц) сверхтонких взаимодействий для некоторых флавиновых ферментов, и, таким образом, флавоэнзимы оксидазы должны быть чувствительны к приложенным статическим и осциллирующим магнитным полям, используемым в этой работе. Для определенного типа фермента требуется полная квантово-механическая обработка с соответствующим спиновым гамильтонианом для расчета, среди других теоретических параметров, энергии зеемановского и сверхтонкого резонанса [16], [42]. Мы хотели бы подчеркнуть, что наши рассуждения являются грубым упрощением сложных ферментативных процессов АФК в окислительно-восстановительной биохимии [43], но упрощенной общей модели достаточно для рационализации эффектов магнитного поля в окислительном метаболизме.Можно представить себе эффект разветвления, при котором изменение на несколько процентов исходных продуктов реакции ферментативного процесса АФК может усилить другие биохимические пути [40].

Материалы и методы

Химические реактивы

Циклические гидроксиламины 1-гидрокси-4-метокси-2,2,6,6-тетраметилпиперидин (TM-H) и 5- (диэтоксифосфорил) -5-метил-1-пирролин-N-оксид (DEPMPO) были приобретены в Enzo Life Sciences (Сан-Диего, Калифорния, США). Каталаза, супероксиддисмутаза, конъюгированная с полиэтиленгликолем (PEG-SOD), диэтилдитиокарбамат (DDC), диэтилентриаминпентауксусная кислота (DTPA), дифенилениодония хлорид (DPI) и 4-амино-2,2,6,6-тетраметилпиперидин-1-оксил (TEMPO) были приобретены у Sigma-Aldrich (St.Луис, Миссури, США). Паракват был получен от Fisher Scientific (Санта-Клара, Калифорния, США). Исходные растворы циклического гидроксиламина (10 мМ) готовили в продутом аргоном 0,9% NaCl, обработанном 0,1 мМ DTPA. Исходные растворы готовили ежедневно и хранили на ледяной бане в атмосфере аргона, чтобы избежать автоокисления. Определенное торговое оборудование, инструменты или материалы указаны в этом документе. Такая идентификация не подразумевает рекомендации или одобрения Национального института стандартов и технологий, а также не подразумевает, что идентифицированные продукты обязательно являются лучшими из доступных для этой цели.

Культура клеток

Клетки гладких мышц легочной артерии крысы (rPASMC), выделенные, как описано ранее [44], [45], культивировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM) (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки ( FBS) (ATCC, Манассас, Вирджиния, США) при 37 ° C с 5% CO ₂ . Все процедуры с животными были одобрены Комитетом по институциональному уходу и использованию животных Университета Невады (протокол № 00365) в соответствии с Руководством по уходу и использованию лабораторных животных Национального института здравоохранения (1996).Клетки культивировали в колбе размером 75 см ³ для увеличения числа клеток и уравновешивания клеток до слияния. Через 2–3 дня клетки достигли слияния, и затем клетки высевали в 6-луночные культуральные планшеты с плотностью 3,5 × 10 ³ клеток / см ² .

Система экспонирования магнитного поля клеточной культуры

Начальный фоновый SMF внутри инкубаторов, в основном из-за магнитного поля Земли, варьировался от 25 до 60 мкТл, измеренный гауссметром (IDR-321, Integrity Design, VT, США) по всем 3 осям, и поэтому требовалось три -осевая компенсация для создания однородного предварительно заданного SMF в объемах, предназначенных для культуральных пластин в инкубаторе.Для этих экспериментов были сконструированы два трехосных набора квадратных катушек в конфигурации Гельмгольца (рис. 3). Первый набор допускал одновременное воздействие на три 6-луночных планшета для культивирования клеток в качестве контроля SMF 45 мкТл. Второй набор служил для воздействия на клетки SMF 45 мкТл и перпендикулярно приложенных магнитных полей 7 МГц. В обоих случаях SMF 45 мкТл был ориентирован перпендикулярно плоскости роста клеток. Имитационное воздействие проводилось только для магнитных полей постоянного тока, потому что эквивалентное имитационное воздействие для РЧ полей, РЧ катушка под напряжением в контрольном инкубаторе с экранированным РЧ магнитным полем, представляет собой серьезную техническую проблему.Экспериментальное воздействие включало обе группы, помещенные в отдельные трехосные катушки, содержащие одну ВЧ-петлю петли Гельмгольца в отдельных инкубаторах. Катушка RF не была запитана для управляющего SMF и была запитана для группы RF.

Рис. 3. На схеме показана экспериментальная установка для воздействия магнитного поля.

( A ) Трехмерное представление трехосного набора, используемого для управления статическими и переменными электромагнитными полями.Квадратные пары катушек в конфигурации Гельмгольца геометрически выровнены для управления статическим магнитным полем (SMF) и компенсации флуктуаций окружающих магнитных полей в (1) горизонтальном (X) направлении, (2) горизонтальном (Y) направлении и (3) вертикальное (Z) направление. На этой схеме также показано размещение квадратной катушки в конфигурации Гельмгольца для генерации ВЧ магнитных полей (4). Клетка Фарадея также использовалась в радиочастотных экспериментах, чтобы окружить установку, чтобы минимизировать радиочастотные отражения, но для ясности она не показана на этой диаграмме.( B ) На этом рисунке показано направление магнитных полей относительно биологических образцов. (1) трехосный набор квадратных катушек в конфигурации Гельмгольца для генерации SMF во всех трех измерениях; (2) квадратные катушки в конфигурации Гельмгольца для генерации ВЧ в горизонтальном (Y) направлении; (3) индивидуальный 6-луночный планшет; (4) отдельные скважины; (5) питательная среда; и (6) клетка Фарадея.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0093065.g003

Каждая квадратная катушка (25 см с каждой стороны) состояла из 20 витков эмалированного медного провода 22 AWG.Каждая пара квадратных катушек была выровнена по оси и разделена на 12 см, чтобы получить конфигурацию Гельмгольца [46]. Каждая пара катушек в конфигурации Гельмгольца индивидуально приводилась в действие источником питания (HP 6205C Dual, Hewlett-Packard, Пало-Альто, Калифорния). Резистивная схема была запитана по витой паре, чтобы добиться необходимого компенсирующего SMF в желаемом направлении. SMF были отрегулированы соответствующим образом в изоцентре каждого трехосного набора, как измерено гауссметром для каждой оси.Квадратная катушка с одним витком (сторона 12,5 см) в конфигурации Гельмгольца была построена внутри одного из трехосных наборов, чтобы наложить магнитные поля в радиочастотном диапазоне также на покрытые эмалью медные провода 22 AWG (рис. 3). Геометрический центр этой ВЧ-катушки был совмещен с центром трехосного набора, используемого для компенсации SMF. Функциональный генератор (HP33120A, Hewlett-Packard, Пало-Альто, Калифорния) установил магнитный сигнал 7 МГц, и величина, зарегистрированная в предназначенном для культивирования объеме, составила 10 ± 3 мкТл (RMS) после усиления мощности.Заземленная клетка Фарадея (сторона 40 см) окружала трехосный ВЧ набор, чтобы удерживать сигнал в объеме воздействия SMF-RF и исключать вредные фоновые сигналы. Радиочастотный сигнал измерялся круглым датчиком, состоящим из 2 витков покрытых эмалью медных проводов 22 AWG, радиусом 1,5 см, которые были подключены непосредственно к осциллографу через витую пару , питающую коаксиальный кабель. Приложенный электрический ток измерялся падением напряжения на резисторе 2 Ом, включенном последовательно с ВЧ катушкой.

Фоновое изменяющееся во времени магнитное поле было измерено в центре трехосных наборов внутри инкубатора в том месте, где должен был проводиться эксперимент, с помощью гаусс-метра (IDR-210, Integrity Design, VT) во всех трех случаях. топоры. Проведенные измерения напоминали предыдущие наблюдения [47], где преобладающая спектральная величина была зарегистрирована на частоте 60 Гц и была ниже 2 мкТл для всех случаев. Температуру и концентрацию CO ₂ поддерживали на уровне 37 ° C и 5% соответственно с помощью инкубаторов Binder CB-150.В ходе экспериментов разброс параметров окружающей среды был минимальным. Инкубаторы использовались исключительно для этих экспериментов и не открывались во время экспозиций.

Эксперименты по пролиферации и жизнеспособности клеток

Влияние воздействия магнитного поля на пролиферацию клеток определяли непосредственно путем подсчета количества клеток после каждой точки терминации. Для анализа подсчета клеток 6-луночные планшеты засевали с концентрацией 3.5 × 10 ³ клеток / см ² для rPASMC. Начальное время ( t ₀ ), когда началось магнитное воздействие, было определено как 24 часа после первоначального посева клеток. В каждой конечной точке ( t ₁ = день 2, t ₂ = день 3) клетки из 3 лунок были дважды подсчитаны с помощью гемоцитометра (VWR, Сан-Франциско, Калифорния, США) с сопутствующей жизнеспособностью клеток. оценивается методом исключения трипанового синего. В типичном эксперименте по жизнеспособности клеток участвовали клетки, которые осторожно собирали и смешивали с 0.4% раствор трипанового синего (Invitrogen). Полученную суспензию клеток подсчитывали под фазово-контрастным инвертированным микроскопом. Жизнеспособные клетки с интактными клеточными мембранами исключали краситель и подсчитывали с помощью гемоцитометра.

Флуорометрическое определение H

₂ O ₂ Производство

Cellular H ₂ O ₂ продуцирование измеряли с помощью флуорометрического анализа Amplex Ultra Red, связанного с пероксидазой хрена (HRP-AUR; Invitrogen). Клетки засевали, как описано в экспериментах по пролиферации клеток (см. Выше), а затем подвергали воздействию магнитных полей SMF и RF на время эксперимента.При t ₁ и t _{2 , среду} аспирировали, клетки промывали PBS плюс 100 мкМ DTPA и инкубировали в течение 2 часов с DMEM, содержащей 2% FBS, 10 мкМ AUR и 0,2 ед. / Мл. HRP. Флуоресценцию резоруфина собирали на флюоресцентном микропланшет-ридере Gemini (Molecular Devices, Саннивейл, Калифорния). Количество клеток, содержание белка и флуоресценцию резоруфина измеряли в одних и тех же точках завершения. H ₂ O ₂ продукцию нормализовали по общему содержанию белка и количеству клеток.H ₂ O ₂ калибровочные кривые с HRP-AUR при одинаковой напряженности РЧ магнитного поля не показали никаких различий по сравнению с контрольными SMF, тем самым демонстрируя, что РЧ поля не взаимодействуют с анализом обнаружения H ₂ O ₂ .

Измерения супероксида

Все измерения внутриклеточного супероксида rPASMC проводили в среде DMEM, содержащей 2% FBS и 0,1 мМ DTPA. Для анализа супероксида клетки высевали в концентрации 3.5 × 10 ³ клеток / см ² и выдерживали в условиях SMF и RF в течение 3 дней ( t ₂ ) без нарушения. На 3 день клетки (~ 90% конфлюэнтности) промывали фосфатно-солевым буфером (PBS), который содержал 0,1 мМ DTPA, а затем клетки инкубировали в течение 60 минут при 37 ° C в 220 мкл DMEM, 2% FBS, 0,1 мМ DTPA и 0,5 мМ TM-H. Эксперименты проводились в присутствии и в отсутствие параквата (200 мкМ), PEG-SOD (50 единиц / мл), DDC (10 мкМ), DPI (10 мкМ), как указано ниже.После этого планшеты ненадолго выдерживали на льду до тех пор, пока забуференные клетки не собирали скребком и не замораживали в жидком азоте (по 100 мкл каждый). На этом этапе образцы клеток были готовы для низкотемпературной спектроскопии ЭПР и сканировались на наличие парамагнитного сигнала TM-H.

Спектроскопия электронного парамагнитного резонанса (ЭПР)

Спектры ЭПР в непрерывном режиме (CW) циклического гидроксиламина TM-H с rPASMC и без него были зарегистрированы на ∼9,2–9,3 ГГц на спектрометре Bruker X-диапазона с резонатором Bruker ER4102ST TE ₁₀₂ и охлаждаемым жидким азотом. газовая система.Спектры были получены при следующих рабочих условиях: 108 К, амплитуда модуляции 0,5 мТл при модуляции 100 кГц, микроволновая мощность 2 мВт, постоянная времени 128 мс и среднее значение пяти сканирований шириной 15,0 мТл. Стандартная кривая 4-гидрокси-ТЕМПО (Sigma Aldrich) с концентрациями от 10 до 200 мкМ была построена для количественного определения относительной концентрации свободного радикала нитроксида TM-H по амплитуде сигнала [13], [48] ], Рис. 4. Первоначально супероксидный радикал был измерен методом ЭПР в бесклеточной системе циклического гидроксиламина TM-H (0.5 мМ) и систему генерации ксантиноксидазы-супероксид, которая содержала ксантиноксидазу (10 мЕд / мл), ксантин (100–400 мкМ) и DTPA (0,1 мМ). Концентрация свободных радикалов циклического гидроксиламина рассчитывалась путем сравнения отношения высоты центрального пика (вставка к рис. 4) сигнала ЭПР с отношениями высоты центрального пика для сигнала от стандарта TEMPO (10–200 мкМ), записанного в тех же условиях [ 13]. Поскольку клеточная среда содержит несколько парамагнитных металлических центров, которые могут влиять на скорость релаксации спиновых зондов, сравнение TEMPO и T-HM является только качественным.Фоновый контрольный сигнал внеклеточной среды, взятый в те же моменты времени, что и для систем RF-клеток, вычитали из всех образцов циклического гидроксиламина TM-H.

Рис. 4. Сигнал ЭПР свободных радикалов нитроксила, которые были образованы при взаимодействии спинового зонда T-MH с циклическими гидроксиламинами в системе генерации ксантиноксидазы-супероксид, содержащей 10 мЕд / мл ксантиноксидазы, ксантин (100–400 мкМ) и DTPA ( 0,1 мМ).

Эффективность спинового зонда TM-H сравнивали с высотой пика стандартных концентраций нитроксида TEMPO.Для тех же концентраций прореагировавшего ксантина и TEMPO наклон высоты пика TM-H был 1/14 больше.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0093065.g004

Определение белка

Для расчета концентрации белка в популяции клеток клетки из 6-луночного планшета O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ анализов промывали дважды 1 мл буфера PBS. Затем 250 мкл буфера для анализа радиоиммунопреципитации (RIPA) добавляли в чашку и инкубировали на льду в течение 5 минут.Лизат хранили замороженным до дальнейшего использования. Лизат размораживали на льду и центрифугировали при 8000 × g в течение 10 мин. 20 мкл супернатанта добавляли к 200 мкл рабочего реагента бицинхониновой кислоты (BCA) (Pierce BCA Protein Assay Kit) в 96-луночном планшете. Планшет инкубировали при 37 ° C в течение 30 минут и оптическую плотность измеряли при 562 нм. Концентрацию белка рассчитывали по стандартной кривой.

Статистический анализ

Статистический анализ был выполнен с использованием одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с минимальным уровнем достоверности 0.05 для статистической значимости. Каждый эксперимент проводился как минимум 3 раза с минимум тремя образцами на точку завершения (день 2 или день 3) за эксперимент. Представленные данные представляют собой репрезентативные образцы проведенных экспериментов. Все эксперименты проводились полудвойным слепым методом. Как для ЭПР, так и для оптической спектроскопии образцы были подготовлены и закодированы одним исследователем, данные были собраны другим исследователем (слепым), а затем окончательные результаты были нормализованы по концентрации белка и подсчету клеток первоначальным составителем.

Результаты

Слабые магнитные поля 7 МГц усиливают пролиферацию клеток rPASMC

Число клеток

rPASMC прогрессивно увеличивалось в течение периода экспериментального культивирования (1-3 дня). Усиленная пролиферация клеток наблюдалась при непрерывном приложении 45 мкТл SMF и 7 МГц 10 мкТл _RMS по сравнению с контрольной группой только с 45 мкТл SMF. Магнитные поля RF увеличивали пролиферацию клеток до 40% на 2-й день и 45% на 3-й день по сравнению с контрольной группой SMF (рис.5а). Жизнеспособность клеток, оцененная методом исключения трипанового синего, не показала значимости в окрашивании между группами SMF и RF. В целом, кривые клеточного роста показывают, что приложенные радиочастотные магнитные поля не влияли на жизнеспособность клеток по сравнению с контролем, но действительно оказывали статистически значимое влияние на профили клеточного роста.

Рисунок 5. РЧ-индуцированная пролиферация клеток и выработка перекиси водорода показаны для rPASMC и выше по сравнению с контрольными образцами.

После того, как клетки достигли> 90% слияния, РЧ электромагнитное поле было включено в день 0. (A) РЧ магнитные поля 7 МГц усилили рост клеток на ~ 40% на 2 день и ~ 45% на 3 день, как определено прямой подсчет и метод исключения трипанового синего. Данные представляют собой репрезентативную выборку из 3 независимых экспериментов. (B) Продукция H ₂ O ₂ также измерялась для сравнения с пролиферацией клеток. Электромагнитные поля РЧ увеличили продукцию H ₂ O ₂ на ~ 50% на 2 и 3 дни воздействия, как определено с помощью анализа AUR.Данные нормализованы для управления SMF.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0093065.g005

Комбинация магнитных полей увеличивает H

₂ O ₂ Производство в rPASMC

В попытке связать пролиферацию клеток с продукцией H ₂ O ₂ для воздействия SMF и RF, количество клеток и H ₂ O ₂ измеряли одновременно в одних и тех же точках завершения в течение 2 и 3 дней. 5b сравнивает номера управляющих ячеек SMF с примененными номерами ячеек RF и управляющего SMF H ₂ O ₂ с RF H ₂ O ₂ .rPASMC, подвергнутый воздействию магнитных полей RF, произвел на ~ 50% больше H ₂ O ₂ по сравнению с контролем SMF для обеих точек завершения. Результаты здесь демонстрируют увеличенное количество H ₂ O ₂ для обоих дней прекращения для RF образцов с аналогичным количеством H ₂ O ₂ , продуцируемых каждый день, пропорционально увеличению количества клеток.

Каталазу добавляли в качестве отрицательного контроля в концентрации 40 единиц / мл. Добавление внешней каталазы подавляло влияние радиочастотного магнитного поля на продукцию H ₂ O ₂ , при этом каталаза приводила уровни радиочастотных магнитных полей H ₂ O ₂ к продукции, близкие к контрольным уровням (данные не показаны).Диэтилдитиокарбамат (DDC 10 мкМ) и полиэтиленгликоль-супероксиддисмутаза (PEG-SOD 50 U / мл) были использованы в качестве положительных контролей и показали снижение H ₂ O ₂ и увеличение H ₂ O ₂ производства соответственно (данные не показаны). Использование PEG-SOD демонстрирует, что происхождение продукции H ₂ O ₂ , вероятно, находится во внутриклеточном источнике, который выщелачивается из клетки и обнаруживается во внеклеточной среде.

Паракват

и DPI использовали для индукции окислительного стресса в rPASMC in vitro .Фотомикроскопия показала, что воздействие на клетки параквата (200 мкМ) и DPI (10 мкМ) не изменяло клеточную морфологию или жизнеспособность в течение двух часов лечения ксенобиотиками. Паракват незначительно снижает продукцию H ₂ O ₂ , тогда как у DPI было небольшое увеличение продукции H ₂ O ₂ по сравнению с контрольными образцами SMF на rPASMC in vitro (рис. 6a). Однако совокупный набор данных (рис. 6a, b) демонстрирует, что магнитные поля RF модулируют общую тенденцию производства H ₂ O ₂ независимо от параквата и DPI.Базовый уровень для радиочастотных магнитных полей и ксенобиотиков примерно на 30-40% больше, чем для контрольных групп SMF. В целом, эти результаты предполагают, что радиочастотные магнитные поля вызывают увеличение продукции H ₂ O ₂ , но не показывают предпочтительных эффектов на индуцированную паракватом / DPI продукцию H ₂ O ₂ .

Рис. 6. Увеличение радиочастотных магнитных полей H ₂ O ₂ производство в rPASMC независимо от параквата и DPI.

( A ) Контроль параквата (200 мкМ) немного снижает продукцию H ₂ O ₂ , а DPI (10 мкМ) немного увеличивает H ₂ O ₂ по сравнению с контрольными клетками SMF ( B ) Радиочастотные магнитные поля не оказывают предпочтительного воздействия на производство параквата / DPI, индуцированного H ₂ O ₂ .ВЧ магнитное поле в целом увеличивает производство H ₂ O ₂ в rPASMC на 30-40%, как видно из (B) RF по сравнению с (A) контролем SMF. Данные представляют собой представление трех независимых экспериментов.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0093065.g006

Обнаружение O

₂ ^{• –} с помощью ЭПР и спиновых зондов циклического гидроксиламина

Чтобы определить качественную эффективность спинового зонда гидроксиламина, TM-H реагировал с O ₂ ^{• –} , продуцируемым в бесклеточной системе ксантиноксидазой [48].На рис. 4 показана линейная зависимость амплитуды сигнала ЭПР среднего пика TM-H от концентрации ксантина (100–400 мкМ) и демонстрируется верность циклического гидроксиламина в качестве спинового зонда для обнаружения супероксида. Аналогичный эксперимент был проведен с использованием спин-ловушки DEPMPO (10 мМ), и результат не дал видимого сигнала ЭПР выше шума в течение экспериментального периода времени. Окислительно-восстановительная химия циклических гидроксиламинов оказалась более эффективной для взаимодействия с O ₂ ^{• –} , а интенсивность сигнала радикала была больше и длилась значительно дольше, чем у традиционных спиновых ловушек (данные не показаны) [48].Чтобы продемонстрировать, что поток O ₂ ^{• –} можно контролировать и впоследствии обнаруживать с помощью TM-H, к бесклеточной системе ксантин / ксантиноксидаза была добавлена ​​СОД (50 Ед / мл). Накопление O ₂ ^{• –} было заблокировано СОД, и соответствующая амплитуда сигнала ЭПР TM-H уменьшилась на 40% (рис. 7а).

Рис. 7. Спектры ЭПР циклических гидроксиламинов в бесклеточном контроле и пример RF-экспериментов по обнаружению супероксида.

(A) ПЭГ-СОД (50 Ед / мл) подавляет сигнал ЭПР до 40% в бесклеточной системе ксантин / ксантиноксидаза.(B) Контрольные и нормированные на RF спектры ЭПР. Спиновый зонд TM-H реагирует с внутриклеточным супероксидом, давая свободный радикал нитроксида, который определяется методом ЭПР. RF образцы имеют более низкую интенсивность сигнала ЭПР по сравнению с контролем, что указывает на более низкую межклеточную концентрацию супероксида.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0093065.g007

В системах rPASMC на рисунке 7b показано сравнение обнаружения O ₂ ^{• –} со спиновым датчиком TM-H для SMF и RF магнитные поля.Обработка данных включает вычитание фона TM-H из среды, а амплитуда сигнала была нормализована по количеству клеток и концентрациям белка. Спектры ЭПР показаны для типичных данных нормализованных циклических свободных радикалов гидроксиламин-нитроксид, измеренных в образцах клеток, по крайней мере, в трех независимых экспериментах.

Потребление супероксида увеличивается за счет внешних радиочастотных магнитных полей

Чтобы лучше понять, как магнитные поля RF опосредуют образование O ₂ ^{• –} , ЭПР циклических гидроксиламинов сравнивали с контрольными клетками, подвергнутыми воздействию SMF и RF.На рисунке 8 показано, что магнитные поля RF значительно снижают концентрацию O ₂ ^{• –} на 40% в rPASMC по сравнению с SMF. Снижение обнаруженной базальной концентрации O ₂ ^{• –} подразумевает либо увеличение потребления, либо снижение производства O ₂ ^{• –} . Соответствующее уменьшение содержания O ₂ ^{• –} разновидностей с сопутствующим увеличением H ₂ O ₂ подразумевает модуляцию распределения продуктов АФК, индуцированную радиочастотами.

Рис. 8. РЧ электромагнитные поля и ксенобиотики оказали значительное влияние на обнаруженный клетками супероксид.

( A ) RF первоначально уменьшило количество обнаруженного супероксида по сравнению с контролем SMF на 40%. В образцах параквата (200 мкМ) O ₂ ^{• –} изначально подавлялся на 60% по сравнению с контролем SMF, а эффекты усиливались магнитными полями RF на 50% по сравнению с контролем Paraquat. ( B ) В DPI (20 мкМ) увеличилось O ₂ ^{• –} продукция на 200% по сравнению с контролем SMF, тогда как супероксид RF DPI был снижен на 50% по сравнению с контролем DPI.Данные показывают типичные результаты, наблюдаемые как минимум в трех независимых экспериментах.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0093065.g008

Химические вещества, которые контролируют производство супероксида, были использованы для изучения возможного механизма действия магнитного поля RF. Паракват, который обычно индуцирует продукцию O ₂ ^{• –} , ингибирует концентрации O ₂ ^{• –} на 60% в контроле SMF по сравнению с базальными клетками, а радиочастотные магнитные поля дополнительно усиливают это подавление на 50. % по сравнению с контролем параквата.DPI (20 мкМ) увеличивал продукцию O ₂ ^{• –} на 200% по сравнению с контролем SMF, тогда как супероксид RF DPI был снижен на 50% по сравнению с контролем DPI. 50 единиц PEG-SOD / мл снижали внутриклеточные концентрации O ₂ ^{• –} , тогда как ингибитор SOD DDC (10 мкМ) увеличивал концентрации O ₂ ^{• –} для SMF, как и ожидалось (данные не показаны). Воздействие радиочастотного излучения дополнительно усилило подавление O ₂ ^{• –} с помощью PEG-SOD и еще больше увеличило распространение O ₂ ^{• –} с помощью DDC.Мы интерпретируем ингибирование сигнала ЭПР TM-H с помощью PEG-SOD как демонстрацию того, что спин-зонд нацелен на внутриклеточные супероксиды, что согласуется с предыдущими наблюдениями [48]. Эти результаты предполагают, что продукция rPASMC O ₂ ^{• –} была уменьшена паракватом и PEG-SOD и увеличена с помощью DPI и DDC в SMF. Несмотря на увеличение или уменьшение O ₂ ^{• –} в образцах ксенобиотиков, все образцы показали повышенное уменьшение измеренного O ₂ ^{• –} магнитными полями RF.

Обсуждение

Целью данной работы было определение эффектов радиочастотного магнитного поля на продукцию АФК в окислительных метаболических процессах, которые потенциально включают спин-коррелированные радикальные пары. Стратегия заключалась в том, чтобы проанализировать концентрации O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ с приложенными радиочастотными полями и без них, а также сопоставить распределение продуктов со скоростью пролиферации клеток. SCRPM использовался для обоснования изменений в распределении продуктов ROS с помощью PYDMR с применением радиочастотных магнитных полей.Мы предположили, что на распределение продуктов ROS будет влиять RF-опосредованная взаимопревращение синглет-триплетов. Постулируется, что модель спиновой пары включает связанный с ферментом семихинон флавин и супероксидные свободные радикалы с синглетными продуктами, образующими H ₂ O ₂ , и триплетными продуктами, образующими O ₂ ^{• –} . Наша новая методология и экспериментальные результаты косвенно подтверждают механизм спиновой биохимии между флавоэнзимами с кислородом и позволяют начать рассмотрение некоторых нерешенных вопросов о реакциях флавина и кислорода; е.г., выделение некоторыми флавоэнзимами O ₂ ^{• –} [14].

Сольвьев и др. и другие недавно предложили связь между O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ для получения криптохромного магниторецептора, который включает спин-коррелированные радикальные пары между O ₂ ^{• –} и FADH ^• [15] – [17], [49]. Для производства АФК при нормальном клеточном метаболизме мы предлагаем другую схему реакции, первоначально предложенную Мэсси, которая основана на активации молекулярного кислорода (O ₂ ) восстановленными флавоферментами (E – Fl _{красный} H ₂ ) [11 ], [34]:

Этот механизм реакции инициируется процессом протонной передачи заряда, который уравновешивает анионный FADH ^– для переноса электрона на триплетный молекулярный кислород O ₂ с образованием спин-коррелированной пары радикалов; я.е., FADH ^• и O ₂ ^{• –} (рис. 1). Спин-коррелированная радикальная пара изначально находится в триплетном состоянии, поскольку в процессе переноса электрона не происходит изменения спинового состояния [34], [35]. В слабом SMF сверхтонкий механизм заполняет все четыре спиновых состояния в квазистационарном населенном пункте с отношениями S ₀ : T ₊ : T ₀ : T _– = 2 / 9∶2 / 9 ∶3 / 9∶2 / 9 [50], [51]. Следовательно, вероятность равновесного заполнения, что радикальная пара останется в одном из трех триплетных состояний, равна 7/9 (2/9 для синглетного состояния), потому что SMF ниже сверхтонких энергий, и все четыре состояния остаются связанными.Радиочастотные магнитные поля влияют на скорость рекомбинации синглет-триплетного взаимопревращения, которая определяет выход продуктов реакции, процесс, аналогичный квантовым и химическим эффектам Зенона [52], [53]. Во время спиновой когерентности радиочастотные магнитные поля разъединяют взаимодействия флавин-сверхтонкие и, таким образом, модулируют скорость взаимного превращения, которая изменяет равновесное значение между вероятностями синглетного и триплетного состояний, рис. 2 [34] – [36], [39]. Продолжительность спиновой корреляции должна сохраняться достаточно долго (> 1 мкс), чтобы магнитные поля RF могли оказывать значительное влияние на выход реакции [35], ситуация, которая подвергалась сомнению для радикальных пар, свободных в растворе, но возможна в пределах фермента. карман [35], [54].

Мы выдвинули гипотезу, что 7 МГц (10 мкТл _{среднеквадратичное значение} ) применяемые радиочастотные магнитные поля отделяют сверхтонкие взаимодействия, а не зеемановские резонансы (1,3 МГц при SMF 45 мкТл), между O ₂ ^{• –} и FADH ^• free- радикальные пары [16], [35], [38]. При приложении ВЧ магнитного поля 7 МГц вероятность того, что спиновая пара находится в синглетном состоянии, увеличивается за счет вероятности занятия конфигураций с триплетным состоянием, рис. 1 и 2. Следовательно, количество триплетного состояния O ₂ ^{• –} , высвобожденного из фермента, должно было уменьшиться , результат, который был измерен с помощью спин-зонда TM-H и спектроскопии ЭПР, рис.7b. Спин-пары в синглетном состоянии образуют химическую связь, которая приводит к образованию разновидностей гидропероксидного аниона флавина-C (4a), квазистабильного продукта, который считается активированной формой кислорода и может превращаться, среди других путей реакции [11] , [14], в нейтральный гидропероксид с добавкой протона [14]. Нейтральный гидропероксид диссоциирует с образованием окисленного FAD и H ₂ O ₂ , где высвобожденный H ₂ O ₂ измеряли с помощью флуоресцентного анализа. Синглетные продукты (H ₂ O ₂ ) спин-парной реакции являются диамагнитными, что обычно запрещено по спину для продуктов триплетных состояний из-за сохранения спина во время переноса электрона [15], [34], [ 35].Увеличение заселенности синглетных состояний спин-радикальной пары привело к наблюдаемому увеличению производства H ₂ O ₂ и сопутствующему увеличению потребления O ₂ ^{• –} ; т.е. уменьшение обнаруженного O ₂ ^{• –} .

Хотя наша работа напрямую не исследует конкретные ферменты, участвующие в механизме спин-радикальной пары per se , мы попытались измерить связь между воздействием магнитного поля RF на потребление O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ путем рационализации наших результатов с помощью постулируемого механизма реакции, рис.1. План состоял в том, чтобы развить более широкое понимание спиновой биохимии, связанной с радиочастотными магнитными полями и общих эффектов радиочастотных магнитных полей в биологии. В биологических системах контролируемое производство АФК считается важным опосредованным действием в физиологических и патологических процессах [55] – [57]. Считается, что взаимодействие между генерацией АФК и системами обратной связи регулирует многие биологические процессы с продуктами АФК в качестве сигнальных агентов. В частности, O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ редокс-регуляция в путях Nox была связана со многими клеточными процессами, включая дифференцировку и пролиферацию клеток [58].

Индуцированное радиочастотным магнитным полем увеличение клеточной пролиферации с сопутствующим увеличением продукции H ₂ O ₂ для rPASMC показано на рисунке 5. Радиочастотные магнитные поля увеличили рост клеток на ~ 40% и увеличили H ₂ O ₂ продукция на ∼50% по сравнению с контролем. Этот результат свидетельствует о том, что увеличение продукции H ₂ O ₂ под воздействием радиочастотных магнитных полей влияет на один или несколько основных ферментативных путей, продуцирующих АФК, которые регулируют рост клеток.Мы предполагаем, что радиочастотные эффекты увеличенной продукции H ₂ O ₂ создают среду окислительного стресса и, таким образом, запускают механизм роста в клетках rPASMC, аналогичный повышенной экспрессии Nox4 [59]. H ₂ O ₂ был признан вторичным посредником в окислительно-восстановительных переключателях на основе тиолов [60], [61] и чувствительной тиоловой трансдукции [62], где повышающая регуляция Nox4 приводит к увеличению H ₂ O ₂ передача сигналов, которая может приводить к повышенной клеточной пролиферации в гладкомышечных клетках [63], [64].

Чтобы исследовать более прямую роль эффектов радиочастотного магнитного поля на активность НАДФН-оксидазы, мы ввели паракват и DPI в попытке выделить пути реакции НАДФН-оксидазы ROS. В анализах H ₂ O ₂ отличительной чертой этих результатов является то, что совокупная базовая линия для всех измеренных образцов была значительно больше (30-40%) с приложенными радиочастотными магнитными полями (рис. 5) по сравнению с Группы SMF. H ₂ O ₂ измерения показали минимальные эффекты ксенобиотиков в SMF и продемонстрировали повышенную продукцию H ₂ O ₂ , аналогичную контрольному образцу RF.Для анализов O ₂ ^{• –} паракват показал снижение продукции O ₂ ^{• –} на 40% по сравнению с производством базальных клеток, что в отличие от нормальной продукции индуцированных АФК для этого химического вещества. Рисунок 8 [65]. DPI показал увеличение продукции O ₂ ^{• –} по сравнению с производством базальных клеток. RF продемонстрировал дальнейшее усиление подавления концентрации O ₂ ^{• –} паракватом и DPI на 40% и 58%, соответственно, по сравнению с исходными уровнями SMF.В отсутствие ксенобиотиков разумной интерпретацией является то, что O ₂ ^{• –} действует как прекурсор для производства H ₂ O ₂ , а радиочастотные магнитные поля увеличивают потребление супероксида, что приводит к наблюдаемому увеличению H ₂ O ₂ производство. Однако возникают трудности при интерпретации эффектов параквата и DPI на путь НАДФН-оксидазы ROS в сочетании с приложенными радиочастотными магнитными полями. Мы наблюдали небольшую корреляцию с тенденциями снижения содержания параквата в O ₂ ^{• –} и H ₂ O ₂ ; однако мы ожидаем значительного увеличения H ₂ O ₂ с RF и DPI.Другими словами, нет статистически значимых изменений в производстве H ₂ O ₂ с добавлением параквата, DPI и приложенных радиочастотных магнитных полей, которые могут быть связаны с механизмом спиновой пары. В свете этих наблюдений мы не можем исключить влияние RF на активность НАДФН-оксидазы, но результаты показывают, что никакие биохимические эффекты спиновых пар в НАДФН-оксидаз не могут быть приписаны ингибиторам.

Мы предполагаем, что флавоэнзимы, включая оксидазы и монооксидазы, являются ферментами окислительного метаболизма, на которые, скорее всего, влияют спиновая биохимия и радиочастотное воздействие экспериментального статического магнитного поля, амплитуды и частоты.В частности, глюкозооксидаза, как альтернатива ферментным системам Nox, представляет собой флавоэнзим, который можно исследовать на предмет спиновой биохимии путем измерения распределения продуктов АФК как функции концентраций глюкозы в среде, а не использования ингибиторов [34]. Другая интерпретация общих результатов может быть объяснена радиочастотными эффектами от другого источника АФК, такого как митохондрии, которые служат магниторецепторами для производства АФК через SCPRM. Мы склонны предположить, что существует влияние на перекрестное взаимодействие митохондрий с НАДФН-оксидазами посредством RF-индуцированных изменений продукции ROS в митохондриях [56], но для подтверждения этого утверждения необходимы прямые экспериментальные доказательства.В настоящее время проводятся эксперименты с другими химическими ингибиторами, чтобы выделить конкретный метаболический путь, связанный с радиочастотными магнитными эффектами в метаболизме.

Мы предположили, что спин-коррелированные пары радикалов O ₂ ^{• –} и FADH ^• являются источником продукции ROS, опосредованной радиочастотными магнитными полями во время окислительного метаболизма. Наши экспериментальные распределения продуктов реакции ROS могут быть поняты с помощью SCPRM в режиме сверхтонкой энергии взаимодействия с этими статическими и осциллирующими магнитными полями [38].Влияние на продукцию ROS, которое приводит к изменениям в пролиферации клеток, по-видимому, является результатом повышенных уровней H ₂ O ₂ , которые действуют как молекулы вторичного обмена сообщениями. Радиочастотная ориентация, амплитуда магнитного поля и эксперименты с широкополосной частотой необходимы для дальнейшего подтверждения механизма спиновых радикальных пар в биохимических процессах и для исследования других спин-коррелированных механизмов и молекул радикальных пар, которые могут присутствовать в окислительном метаболизме и генерации АФК. Текущие эксперименты не включали в себя настоящий эксперимент «вне резонанса», где приложение ВЧ частоты не находится в резонансе со сверхтонкими связями.Наши эксперименты описывают случай, когда имеется «включено» или «выключено» приложенное воздействие магнитного поля RF с частотой 7 МГц, где мы предполагаем резонанс сверхтонкой связи. Исследования различных параметров магнитного поля и их зависимостей дадут более полное описание профиля эффекта магнитного поля в биохимических и клеточных процессах, и в этой новой области исследований могут быть разработаны дополнительные протоколы биохимической и клеточной инженерии.

Заключение

Основная цель этой работы состояла в том, чтобы измерить радиочастотные магнитные эффекты на окислительный метаболизм, который производит ROS, и подтвердить изменения в выходах продуктов реакции в контексте рациональной спин-биохимической модели.Представленные здесь результаты демонстрируют связь между потреблением супероксида и производством перекиси водорода, которая была опосредована радиочастотными магнитными полями, которая была очерчена в контексте SCRPM. Считается, что распределение продуктов АФК происходит за счет развязки сверхтонких энергий, которые модулируют синглет-триплетные состояния и, таким образом, определяют выход продуктов реакции. Считается, что вторичный эффект увеличения производства перекиси водорода создает окислительный стресс на клетки, что приводит к увеличению пролиферации клеток.Из-за косвенного измерения спиновых эффектов в метаболизме мы не можем исключить другие возможные механизмы эффектов магнитного поля в производстве АФК и пролиферации клеток.

При почти повсеместном распространении излучаемой неионизирующей магнитной энергии, присутствующей в окружающей среде, понимание нетеплового воздействия широкополосного радиочастотного излучения на окислительный метаболизм было бы явно полезным и важным с точки зрения общественной безопасности [66] – [68] . В отличие от механизма спиновых пар, измерения удельного поглощенного излучения (SAR) макроскопического нагрева ткани представляют собой наивный подход к биомагнитным РЧ-взаимодействиям, поскольку они игнорируют физику нанометров и спиновую химию, которые потенциально могут иметь глубокие биологические эффекты.В дополнение к проблемам безопасности или потенциальным преимуществам, новые области технологических разработок в области медицинского и электронного взаимодействия с биологическими системами могут быть реализованы путем выявления, понимания и мониторинга метаболических процессов, на которые влияют магнитные поля RF. В более общем плане, более глубокое понимание спиновых биохимических процессов возможно путем выяснения эффектов магнитных полей в биологии и реализации принципов спин-радикального парного механизма в более широких областях экспериментального дизайна.Представленная здесь методология формулирует один путь, который может адресовать связь между атомным и клеточным уровнями, где реакции клеточного магнитного поля выходят за рамки квантового / классического интерфейса.

Благодарности

RJU благодарит Сандру и Гарета Итон из Денверского университета за использование одного из их спектрометров ЭПР X-диапазона. Мы благодарим Лукаса Портелли за внимательное чтение рукописи и помощь в создании рисунка 3.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: RJU CFM.Проведены эксперименты: RJU IH CFM. Проанализированы данные: RJU CFM. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: RJU CFM. Написал статью: RJU. Спин-коррелированный механизм и теория радикальных пар: RJU DJS CFM.

Ссылки

1. 1. Bucci M, Goodman C, Sheppard TL (2010) Десятилетие химической биологии. Nat Chem Biol 6: 847–854.
2. 2. Болл П. (2011) Рассвет квантовой биологии. Природа 474: 272–274.
3. 3. Lambert N, Chen YN, Cheng YC, Li CM, Chen GY и др.(2013) Квантовая биология. Физика природы 9: 10–18.
4. 4. Lacy-Hulbert A, Metcalfe JC, Hesketh R (1998) Биологические реакции на электромагнитные поля. FASEB Journal 12: 395–420.
5. 5. Leszczynski D, Joenvaara S, Reivinen J, Kuokka R (2002) Нетепловая активация стрессового пути hsp27 / p38MAPK излучением мобильного телефона в эндотелиальных клетках человека: молекулярный механизм эффектов, связанных с раком и гематоэнцефалическим барьером. Дифференциация 70: 120 – U121.
6. 6.Martino CF, Perea H, Hopfner U, Ferguson VL, Wintermantel E (2010) Влияние слабых статических магнитных полей на эндотелиальные клетки. Биоэлектромагнетизм 31: 296–301.
7. 7. Ю ИБ, Яо К., Ву В., Ван К.Дж., Чен Г.Д. и др. (2008) Влияние воздействия радиочастотного поля 1,8 ГГц на экспрессию Hsps и фосфорилирование MAPK в эпителиальных клетках хрусталика человека. Клеточные исследования 18: 1233–1235.
8. 8. Окано Х (2008) Эффекты статических магнитных полей в биологии: роль свободных радикалов.Границы биологических наук 13: 6106–6125.
9. 9. Сеспедес О, Иномото О, Кай С., Нибу Ю., Ямагути Т. и др. (2010) Влияние радиочастотного магнитного поля на молекулярную динамику и захват железа клеточными белками. Биоэлектромагнетизм 31: 311–317.
10. 10. Волков Н.Д., Томази Д., Ван Г.Дж., Васька П., Фаулер Д.С. и др. (2011) Влияние воздействия радиочастотного сигнала сотового телефона на метаболизм глюкозы в головном мозге. Журнал Американской медицинской ассоциации 305: 808–813.
11. 11.Massey V (1994) Активация молекулярного кислорода флавинами и флавопротеинами. Журнал биологической химии 269: 22459–22462.
12. 12. Buetler TM, Krauskopf A, Ruegg UT (2004) Роль супероксида как сигнальной молекулы. Новости физиологических наук 19: 120–123.
13. 13. Дикалов С., Гриндлинг К.К., Харрисон Д.Г. (2007) Измерение активных форм кислорода в сердечно-сосудистых исследованиях. Гипертония 49: 717–727.
14. 14. Чайен П., Фраайе М.В., Маттеви А. (2012) Загадочная реакция флавинов с кислородом.Тенденции в биохимических науках 37: 373–380.
15. 15. Соловьев И.А., Шультен К. (2009) Магниторецепция через криптохром может включать супероксид. Биофизический журнал 96: 4804–4813.
16. 16. Ритц Т., Вильчко Р., Хор П.Дж., Роджерс К.Т., Стаппут К. и др. (2009) Магнитный компас птиц основан на молекуле с оптимальной чувствительностью к направлению. Биофизический журнал 96: 3451–3457.
17. 17. Маеда К., Хенбест КБ, Синтолези Ф., Купров И., Роджерс К.Т. и др.(2008) Модель химического компаса магниторецепции птиц. Природа 453: 387 – U338.
18. 18. Challis LJ (2005) Механизмы взаимодействия между радиочастотными полями и биологической тканью. Биоэлектромагнетизм: S98 – S106.
19. 19. Engstrom S (2006) Влияние магнитного поля на реакции свободных радикалов. В: Гринебаум Б., Барнс Ф., редакторы. Справочник по биологическому воздействию на электромагнитные поля. С. 157–168.
20. 20. Гриссом CB (1995) Эффекты магнитного поля в биологии – обзор возможных механизмов с акцентом на рекомбинацию радикальных пар.Химические обзоры 95: 3–24.
21. 21. Бланкеншип Р.Э., Шаафсма Т.Дж., Парсон В.В. (1977) Эффекты магнитного поля на промежуточных парах радикалов в бактериальном фотосинтезе. Biochimica Et Biophysica Acta 461: 297–305.
22. 22. Hoff AJ, Rademaker H, Vangrondelle R, Duysens LNM (1977) Зависимость выхода триплетного состояния от магнитного поля в реакционных центрах фотосинтетических бактерий. Biochimica Et Biophysica Acta 460: 547–554.
23. 23. Ritz T, Adem S, Schulten K (2000) Модель магниторецепции на основе фоторецепторов у птиц.Биофизический журнал 78: 707–718.
24. 24. Gegear RJ, Casselman A, Waddell S, Reppert SM (2008) Криптохром опосредует светозависимую магниточувствительность у дрозофилы. Nature 454: 1014 – U1061.
25. 25. Бучаченко А.Л., Кузнецов Д.А., Орлова М.А., Маркарян А.А. (2005) Магнитный изотопный эффект магния при фосфорилировании фосфоглицераткиназы. Слушания Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 102: 10793–10796.
26. 26.Johnsen S, Lohmann KJ (2005) Физика и нейробиология магниторецепции. Nature Reviews Neuroscience 6: 703–712.
27. 27. Хор П.Дж. (2012) Влияют ли слабые магнитные поля на биохимические реакции? Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 109: 1357–1358.
28. 28. Кротти Д., Силкстоун Дж., Поддар С., Рэнсон Р., Прина-Мелло А. и др. (2012) Пересмотр эффектов магнитных изотопов и поля на продукцию аденозинтрифосфата креатинкиназой (том 109, стр. 1437, 2011).Труды Национальной академии наук Соединенных Штатов Америки 109: 7126–7126.
29. 29. Jones AR, Woodward JR, Scrutton NS (2009) Исследования эффекта магнитного поля фотолиза непрерывной волны со свободными и связанными с белками алкилкобаламинами. Журнал Американского химического общества 131: 17246–17253.
30. 30. Ведж С.Дж., Лау Дж.С.С., Фергюсон К.А., Норман С.А., Хор П.Дж. и др. (2013) Спин-синхронизация в низкочастотной реакции приводит к обнаружению магнитного резонанса.Физическая химия Химическая физика 15: 16043–16053.
31. 31. Ghisla S, Massey V (1989) Механизмы реакций, катализируемых флавопротеинами. Европейский журнал биохимии 181: 1–17.
32. 32. Минаев Б.Ф., Минаева В.А. (2008) Спин-зависимое связывание дикислорода с гемом и перенос заряда механизма усиления спин-орбитального взаимодействия. Україна Биоорганика Акта 2: 56–64.
33. 33. Минаев Б.Ф., Минаева В.О., Агрен Х. (2012) Спин-орбитальное связывание в ферментативных реакциях и роль спина в биохимии.В: Leszczynski J, редактор. Справочник по вычислительной химии: Springer, Нидерланды. С. 1067–1093.
34. 34. Prabhakar R, Siegbahn PEM, Minaev BF, Agren H (2002) Активация триплетного диоксида кислорода глюкозооксидазой: спин-орбитальное связывание в супероксид-ионе. Журнал физической химии B 106: 3742–3750.
35. 35. Hogben HJ, Efimova O, Wagner-Rundell N, Timmel CR, Hore PJ (2009) Возможное участие супероксида и диоксида кислорода с криптохромом в магниторецепции птиц: происхождение зеемановских резонансов, наблюдаемых с помощью спектроскопии ЭПР in vivo.Письма о химической физике 480: 118–122.
36. 36. Schleicher E, Wenzel R, Ahmad M, Batschauer A, Essen LO, et al. (2010) Электронное состояние флавопротеидов: исследования с протонным электронно-ядерным двойным резонансом. Прикладной магнитный резонанс 37: 339–352.
37. 37. Cintolesi F, Ritz T, Kay CWM, Timmel CR, Hore PJ (2003) Анизотропная рекомбинация иммобилизованной фотоиндуцированной радикальной пары в магнитном поле 50 мкТл: модельный птичий фотомагниторецептор.Химическая физика 294: 385–399.
38. 38. Ритц Т., Талау П., Филлипс Дж. Б., Вильчко Р., Вильчко В. (2004) Резонансные эффекты указывают на механизм радикальной пары для птичьего магнитного компаса. Природа 429: 177–180.
39. 39. Окадзаки М., Саката С., Конака Р., Шига Т. (1987) Электронно-спиновой резонанс, определяемый выходом продукта, на зависящее от магнитного поля фотовосстановление хинонов в мицеллярном растворе SDS. Журнал химической физики 86: 6792–6800.
40. 40. Маклаучлан К. (1992) Опасны ли магнитные поля окружающей среды? Мир физики 5: 41–45.
41. 41. Swanson MA, Usselman RJ, Frerman FE, Eaton GR, Eaton SS (2008) Железно-серный кластер флавопротеин-убихинон оксидоредуктазы с переносом электрона является акцептором электронов для флавопротеина с переносом электрона. Биохимия 47: 8894–8901.
42. 42. Кэнфилд Дж. М., Белфорд Р. Л., Дебруннер П. Г., Шультен К. Дж. (1994) Теория возмущений, рассматривающая осциллирующие магнитные поля в механизме радикальной пары. Химическая физика 182: 1–18.
43. 43. Imlay JA (2013) Молекулярные механизмы и физиологические последствия окислительного стресса: уроки на модельной бактерии.Nature Reviews Microbiology 11: 443–454.
44. 44. Форрест А.С., Джойс Т.С., Хюбнер М.Л., Айон Р.Дж., Вивчар М. и др. (2012) Повышенная активность кальций-активируемых хлоридных каналов, кодируемых TMEM16A, связана с легочной гипертензией. Американский журнал физиологии-клеточной физиологии 303: C1229 – C1243.
45. 45. Gosens R, Stelmack GL, Dueck G, McNeill KD, Yamasaki A и др. (2006) Роль кавеолина-1 в активации киназы p42 / p44 MAP и пролиферации гладких мышц дыхательных путей человека.Американский журнал физиологии клеток легких и молекулярной физиологии 291: L523 – L534.
46. 46. Фрикс В.М., Каради Г.Г., Венец Б.А. (1994) Сравнение калибровочных систем для оборудования для измерения магнитного поля. IEEE Transactions on Power Delivery 9: 100–106.
47. 47. Portelli LA, Schomay TE, Barnes FS (2013) Неоднородное фоновое магнитное поле в биологических инкубаторах является потенциальным фактором, влияющим на экспериментальную изменчивость и воспроизводимость. Биоэлектромагнетизм 34: 337–348.
48. 48. Дикалов С.И., Кирилюк И.А., Воинов М., Григорьев И.А. (2011) ЭПР-детекция клеточного и митохондриального супероксида с использованием циклических гидроксиламинов. Исследования свободных радикалов 45: 417–430.
49. 49. Нисснер С., Дензау С., Стаппут К., Ахмад М., Пайхл Л. и др. (2013) Магниторецепция: активированный криптохром 1a согласуется с магнитной ориентацией у птиц. Интерфейс J R Soc 10: 20130638.
50. 50. Коэн А.Е. (2009) Наномагнитный контроль межсистемного пересечения.Журнал физической химии A 113: 11084–11092.
51. 51. Schulten K, Wolynes PG (1978) Полуклассическое описание движения электронного спина в радикалах, включая эффект перескока электронов. Журнал химической физики 68: 3292–3297.
52. 52. Коминис И.К. (2009) Квантовый эффект Зенона объясняет магниточувствительные реакции ионно-радикальных пар. Physical Review E 80 ..
53. 53. Якунин И.Н., Бердинский В.Л. (2010) Химический зено-эффект в обменно-связанных радикальных парах: 1.Триплетные радикальные пары. Российский журнал физической химии B 4: 210–216.
54. 54. Адаир Р.К. (1999) Влияние очень слабых магнитных полей на реформирование радикальных пар. Биоэлектромагнетизм 20: 255–263.
55. 55. Фишер А.Б. (2009) Редокс-сигнализация через клеточные мембраны. Антиоксиданты и редокс-сигналы 11: 1349–1356.
56. 56. Дикалов С. (2011) Перекрестная связь митохондрий с НАДФН-оксидазами. Свободная радикальная биология и медицина 51: 1289–1301.
57. 57. Mates JM, Segura JA, Alonso FJ, Marquez J (2008) Внутриклеточный окислительно-восстановительный статус и окислительный стресс: последствия для пролиферации клеток, апоптоза и канцерогенеза. Архив токсикологии 82: 273–299.
58. 58. Бедард К., Краузе К.Х. (2007) Семейство NOX производящих АФК НАДФН-оксидаз: физиология и патофизиология. Physiological Reviews 87: 245–313.
59. 59. Дикалов С.И., Дикалова А.Е., Бикинеева А.Т., Шмидт HHHW, Харрисон Д.Г. и др.(2008) Определенные роли Nox1 и Nox4 в базальном и стимулированном ангиотензином II производстве супероксида и перекиси водорода. Свободная радикальная биология и медицина 45: 1340–1351.
60. 60. Paulsen CE, Carroll KS (2010) Управление сетями передачи сигналов окислительно-восстановительного потенциала с помощью регулирующих цистеиновых переключателей. ACS Chemical Biology 5: 47–62.
61. 61. Брандес Н., Шмитт С., Якоб У. (2009) Редокс-переключатели на основе тиолов в эукариотических белках. Антиоксиданты и редокс-сигналы 11: 997–1014.
62. 62. Чен К., Крейдж С.Е., Кини Дж.Ф. (2009) Нижестоящие мишени и внутриклеточная компартментализация в передаче сигналов nox. Антиоксиданты и редокс-сигналы 11: 2467–2480.
63. 63. Stone JR, Yang SP (2006) Перекись водорода: сигнальный мессенджер. Антиоксиданты и редокс-сигналы 8: 243–270.
64. 64. Старрок А., Кэхилл Б., Норман К., Хьюкстедт Т.П., Хилл К. и др. (2006) Трансформирующий фактор роста-бета 1 индуцирует NOx4 NAD (P) H оксидазу и зависимую от активных форм кислорода пролиферацию в гладкомышечных клетках легочной артерии человека.Американский журнал физиологии клеток легких и молекулярной физиологии 290: L661 – L673.
65. 65. Miller RL, Sun GY, Sun AY (2007) Цитотоксичность параквата в микроглиальных клетках: участие PKC-дельта- и ERK1 / 2-зависимой НАДФН-оксидазы. Исследование мозга 1167: 129–139.
66. 66. Безопасность IICoE (2005) Стандарт IEEE для уровней безопасности в отношении воздействия на человека радиочастотного электромагнитного поля, от 3 кГц до 300 ГГц. IEEE STD C95.1.
67. 67. Vorst A, Rosen A, Kotsuka Y (2006) RF / микроволновое взаимодействие с биологическими тканями.Хобокен, штат Нью-Джерси: John Wiley & Sons: IEEE.
68. 68. Гринебаум Б., Барнс Ф.С. (2006) Справочник по биологическим эффектам электромагнитных полей: CRC Press.

Общение с родителями о вакцинации: основа для профессионалов здравоохранения | BMC Pediatrics

1.

Андре Ф.Е., Буи Р., Бок Х.Л., Клеменс Дж., Датта С.К., Джон Т.Дж .: Вакцинация значительно снижает заболеваемость, инвалидность, смертность и несправедливость во всем мире. Bull World Health Organ.2008, 86: 140-146. 10.2471 / BLT.07.040089.

CAS Статья PubMed Google ученый

2.

Самад Л., Батлер Н., Пекхэм С., Бедфорд Х .: Неполная иммунизация в младенчестве: материнские причины. Вакцина. 2006, 24: 6823-6829. 10.1016 / j.vaccine.2006.06.039.

Артикул PubMed Google ученый

3.

Фалагас М.Э., Заркадулия Э. Факторы, связанные с неоптимальным соблюдением вакцинации у детей в развитых странах: систематический обзор.Curr Med Res Opin. 2008, 24: 1719-1741. 10.1185 / 030079085692.

Артикул PubMed Google ученый

4.

Смит П.Дж., Чу С.Ю., Баркер Л.Э .: Дети, не получившие вакцины: кто они и где живут ?. Педиатрия. 2004, 114: 187-195. 10.1542 / peds.114.1.187.

Артикул PubMed Google ученый

5.

Густ Д.А., Дарлинг Н., Кеннеди А., Шварц Б. Родители, сомневающиеся в вакцинах: какие вакцины и почему.Педиатрия. 2008, 122: 718-725. 10.1542 / peds.2007-0538.

Артикул PubMed Google ученый

6.

Кеннеди А.М., ЛаВейл К., Новак Дж., Баскет М., Ландри С. Уверенность в вакцинах в США: понимание восприятия родителей. Aff Health (Миллвуд). 2011, 30: 1-9.

Артикул Google ученый

7.

Brown KF, Kroll JS, Hudson MJ, Ramsay M, Green J, Long SJ, Vincent CA, Fraser G, Sevdalis N: Факторы, лежащие в основе решений родителей о комбинированной детской вакцинации, включая MMR: систематический обзор.Вакцина. 2010, 28: 4235-4248. 10.1016 / j.vaccine.2010.04.052.

Артикул PubMed Google ученый

8.

Томас М., Кохли В., Кинг Д.: Препятствия на пути иммунизации детей: результаты исследования по оценке потребностей. Служба домашнего здравоохранения, Q.2004, 23: 19-39.

CAS Статья PubMed Google ученый

9.

Роджерс Р., Пилигрим А: Рациональное несоблюдение правил иммунизации детей: личные счета родителей и специалистов первичной медико-санитарной помощи.1993, Лондон: Управление санитарного просвещения

Google ученый

10.

Левандовски С., Эккер УКХ, Сейфер К.М., Шварц Н., Кук Дж .: Дезинформация и ее исправление: постоянное влияние и успешное устранение дефектов. Психологическая наука в интересах общества. 2012, 13: 106-131. 10.1177 / 15212451018.

Артикул PubMed Google ученый

11.

Джексон С., Cheater FM, Рид И.: Систематический обзор потребностей родителей в поддержке принятия решений, принимающих решения о здоровье ребенка.Ожидайте здоровья. 2008, 11: 232-251. 10.1111 / j.1369-7625.2008.00496.x.

Артикул PubMed Google ученый

12.

Полторак М., Лич М., Фэрхед Дж., Касселл Дж .: «Обсуждение вакцины MMR» и варианты вакцинации: этнографическое исследование в Брайтоне. Soc Sci Med. 2005, 61: 709-719. 10.1016 / j.socscimed.2004.12.014.

Артикул PubMed Google ученый

13.

Hobson-West P: «Слепое доверие может быть самым большим риском из всех»: организованное сопротивление вакцинации детей в Великобритании.Sociol Health Illn. 2007, 29: 198-215. 10.1111 / j.1467-9566.2007.00544.x.

Артикул PubMed Google ученый

14.

Браунли Дж., Хоусон А: «Скачки веры» и MMR: эмпирическое исследование доверия. Социология. 2005, 39: 221-239.

Артикул Google ученый

15.

Кемпе А., Дейли М.Ф., Макколи М.М., Крейн Л.А., Сух Калифорния, Кеннеди А.М., Баскет М.М., Стокли С.К., Донг Ф., Баббел К.И. и др.: Распространенность родительских опасений по поводу детских вакцин: опыт врачи первичной медико-санитарной помощи.Am J Prev Med. 2011, 40: 548-555. 10.1016 / j.amepre.2010.12.025.

Артикул PubMed Google ученый

16.

Бетч С., Брюэр Н.Т., Брокард П., Дэвис П., Гайсмайер В., Хаасе Н., Лиск Дж., Ренкевиц Ф., Реннер Б., Рейна В.Ф. и др.: Возможности и проблемы Web 2.0 для принятия решений о вакцинации. Вакцина. 2012, 30: 3727-3733. 10.1016 / j.vaccine.2012.02.025.

Артикул PubMed Google ученый

17.

Sturm LA, Zimet GD, Klausmeier T: Беседа с обеспокоенными родителями по поводу иммунизации. От нуля до трех. 2010, 30: 11-18.

Google ученый

18.

Тенррейро К.Н.: Эффективные по времени стратегии для обеспечения коммуникации риска / пользы вакцины. J Pediatr Nurs. 2005, 20: 469-476. 10.1016 / j.pedn.2005.06.012.

Артикул PubMed Google ученый

19.

Центры по контролю и профилактике заболеваний: беседы с родителями о вакцинах для младенцев: стратегии для медицинских работников.http://www.cdc.gov/vaccines/spec-grps/hcp/conv-materials.htm,

20.

Хили К.М., Пикеринг Л.К.: Как общаться с родителями, которые не решаются на вакцинацию. Педиатрия. 2011, 127 (Приложение 1): S127-S133.

Артикул PubMed Google ученый

21.

Гальперин С.А.: Как управлять родителями, неуверенными в вакцинации. Канадский журнал CME. 2000, 12: 62-75.

Google ученый

22.

Эванс М., Стоддарт Х., Кондон Л., Фриман Э., Гриззелл М., Маллен Р.: Взгляды родителей на иммунизацию MMR: исследование фокус-группы. Br J Gen Pract. 2001, 51: 904-910.

CAS PubMed PubMed Central Google ученый

23.

Лич М., Фэрхед Дж .: Проблемы, связанные с вакцинацией: глобальная наука, здоровье детей и общество. 2007, Лондон: Earthscan

Google ученый

24.

Гийом Л.Р., Бат, Пенсильвания: Влияние страха на здоровье на информационные потребности родителей и предпочтительные источники информации: тематическое исследование страха перед вакциной MMR. Информатика здравоохранения J. 2004, 10: 5-22. 10.1177 / 1460458204040664.

Артикул Google ученый

25.

Купер Л.З., Ларсон Х.Дж., Кац С.Л.: Защита общественного доверия к иммунизации. Педиатрия. 2008, 122: 149-153. 10.1542 / педс.2008-0987.

Артикул PubMed Google ученый

26.

Редселл С.А., Бедфорд Х., Сиривардена А.Н., Коллиер Дж., Аткинсон П.: Восприятие посетителями медицинских учреждений своей роли во всеобщей программе иммунизации детей и их стратегии общения с родителями. Исследования и разработки в области первичной медико-санитарной помощи. 2010, 11: 51-60. 10.1017 / S14634236099.

Артикул Google ученый

27.

Опель Д. Д., Робинсон Дж. Д., Херитэдж Дж., Корфиатис С., Тейлор Дж. А., Менджионе-Смит Р.: Характеристика методов общения поставщиков услуг по иммунизации во время посещений медико-санитарного надзора с родителями, сомневающимися в вакцинации: пилотное исследование.Вакцина. 2012, 30: 1269-1275. 10.1016 / j.vaccine.2011.12.129.

Артикул PubMed Google ученый

28.

Густ Д.А., Браун С., Шиди К., Хиббс Б., Уивер Д., Новак Г.: Отношение к иммунизации и верования среди родителей: помимо дихотомической точки зрения. Am J Health Behav. 2005, 29: 81-92. 10.5993 / AJHB.29.1.7.

Артикул PubMed Google ученый

29.

Бенин А.Л., Вислер-Шер Д.Д., Колсон Э., Шапиро Э.Д., Холмбо Э.С.: Качественный анализ принятия решений матерями о вакцинах для младенцев: важность доверия.Педиатрия. 2006, 117: 1532-1541. 10.1542 / peds.2005-1728.

Артикул PubMed Google ученый

30.

Даунс Дж. С., де Брюин В. Б., Фишхофф Б. Понимание и решения родителей о вакцинации. Вакцина. 2008, 26: 1595-1607. 10.1016 / j.vaccine.2008.01.011.

Артикул PubMed Google ученый

31.

Хинман А.Р .: Как врачам и медсестрам поступать с людьми, которые не хотят вакцинации ?.Может J Общественное здравоохранение. 2000, 91: 248-251.

CAS PubMed Google ученый

32.

Кассионос Дж .: Вакцинация завтрашнего дня: необходимость повышения показателей иммунизации. J Fam Health Care. 2010, 20: 13-16.

Google ученый

33.

Киммел СР: Мать, которая отказывается вакцинировать своего ребенка. Я семейный врач. 2003, 67: 651-

PubMed Google ученый

34.

МакГриви Д: Риски и преимущества одиночной вакцины против тройной вакцины MMR: как медицинские работники могут успокоить родителей ?. J R Soc Promot Health. 2005, 125: 84-86. 10.1177 / 146642400512500212.

Артикул Google ученый

35.

Лоуренс Г.Л., Халл Б., Макинтайр С.Р., Макинтайр П.Б.: Причины неполной иммунизации среди австралийских детей: национальный опрос родителей. Врач Ост Фам. 2004, 33: 568-571.

PubMed Google ученый

36.

Фрид Г.Л., Кларк С.Дж., Бутчарт А.Т., Сингер Д.К., Дэвис М.М.: Проблемы безопасности родительских вакцин в 2009 году. Педиатрия. 2010, 125: 654-659. 10.1542 / педс.2009-1962.

Артикул PubMed Google ученый

37.

Национальный комитет по обеспечению качества: Состояние качества медицинской помощи. 2010, Национальный: Комитет по обеспечению качества, Вашингтон, округ Колумбия

Google ученый

38.

Демпси А.Ф., Шаффер С., Сингер Д., Бутчарт А., Дэвис М., Фрид Г.Л.: Альтернативные предпочтения графика вакцинации среди родителей маленьких детей. Педиатрия. 2011, 128: 848-856. 10.1542 / peds.2011-0400.

Артикул PubMed Google ученый

39.

Opel DJ, Taylor JA, Mangione-Smith R, Colomon C, Zhao C, Catz S, Martin D: Достоверность и надежность опроса для выявления родителей, не решающихся на вакцинацию. Вакцина. 2011, 29: 6598-6605.10.1016 / j.vaccine.2011.06.115.

Артикул PubMed Google ученый

40.

Пирс А., Ло С, Эллиман Д., Коул Т.Дж., Бедфорд Н: Группа по здоровью детей, проведенная в когортном исследовании тысячелетия: Факторы, связанные с введением вакцины против кори, эпидемического паротита и краснухи (MMR) и использованием одноантигенных вакцин в современная когорта Великобритании: проспективное когортное исследование. BMJ. 2008, 336: 754-757. 10.1136 / bmj.39489.5^.25.

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

41.

Джессоп Л.Дж., Келлехер С.К., Муррин С., Лотия Дж., Кларк А.Т., О’Махони Д., Фэллон У. Б., Джонсон Г., Бери Г., Мерфи А.В.: Руководящая группа когортного исследования Lifeways: детерминанты частичной или нулевой первичной иммунизации. Arch Dis Child. 2010, 95: 603-605. 10.1136 / adc.2009.161810.

CAS Статья PubMed Google ученый

42.

Стефанофф П., Мамелунд С.Е., Робинсон М., Неттерлид Э, Туэллс Дж., Бергсакер М.Р., Хейбель Х., Ярвуд Дж.: Отслеживание отношения родителей к вакцинации в европейских странах: Проект по безопасности вакцин, отношениям, обучению и коммуникации ( VACSATC).Вакцина. 2010, 28: 5731-5737. 10.1016 / j.vaccine.2010.06.009.

Артикул PubMed Google ученый

43.

Халл Б.П., Дей А., Махаджан Д., Мензис Р.И., Макинтайр ПБ: Годовой отчет об охвате иммунизацией, 2009 г. Commun Dis Intell. 2011, 35: 132-148.

Google ученый

44.

Центры по контролю и профилактике заболеваний: охват вакцинацией детей в возрасте 19–35 месяцев на национальном уровне и уровне штата – США, 2010 г.MMWR Morb Mortal Wkly Rep.2011, 60: 1157-1163.

Google ученый

45.

Миллер Дж .: Какие «стили» принятия решений используют родители при рассмотрении вопроса о вакцинации своего ребенка комбинированной вакциной против кори, эпидемического паротита и краснухи (MMR). 2008 г., магистерская работа, Университет Лидса

Google ученый

46.

Брюэр Н.Т., Фазекас К.И.: Предикторы приемлемости вакцины против ВПЧ: систематический обзор, основанный на теории.Предыдущая Мед. 2007, 45: 107-114. 10.1016 / j.ypmed.2007.05.013.

Артикул PubMed Google ученый

47.

Томпсон Дж. У., Тайсон С., Кард-Хиггинсон П., Джейкобс Р. Ф., Уиллер Дж. Г., Симпсон П., Бост Дж. Э., Райан К. В., Салмон Д. А.: Влияние добавления философских исключений на показатели иммунизации детей. Am J Prev Med. 2007, 32: 194-201. 10.1016 / j.amepre.2006.10.014.

Артикул PubMed Google ученый

48.

Энтвистл В.А., Картер С.М., Тревена Л., Флиткрофт К., Ирвиг Л., Маккаффри К., Салкельд Г.: Общение по поводу скрининга. BMJ. 2008, 337: a1591-10.1136 / bmj.a1591.

Артикул PubMed Google ученый

49.

Сильверман Дж, Курц С., Дрейпер Дж .: Навыки общения с пациентами. 2005, Оксфорд, Великобритания: Radcliffe Publishing

Google ученый

50.

Керридж И., Лоу М., Стюарт К.: Этика и право для медицинских работников.2009, Сидней: Federation Press, 3

Google ученый

51.

Роллник С., Батлер С.К., Киннерсли П., Грегори Дж., Маш Б.: Мотивационное интервью. BMJ. 2010, 340: c1900-10.1136 / bmj.c1900.

Артикул PubMed Google ученый

52.

Leask J, Braunack-Mayer AJ, Kerridge I. Согласие и участие общественности в эпоху расширенной иммунизации детей. J Педиатр детского здоровья.2011, 47: 603-607. 10.1111 / j.1440-1754.2011.02160.x.

Артикул PubMed Google ученый

53.

Брайант К.А., Уэсли Г.К., Вуд Дж. А., Хайнс С., Маршалл Г.С.: Использование стандартизированных пациентов для изучения стратегий общения врачей при решении проблемы отказа от вакцины: пилотное исследование. Вакцина. 2009, 27: 3616-3619. 10.1016 / j.vaccine.2009.03.048.

Артикул PubMed Google ученый

54.

Дэвис Т.К., Фредриксон Д.Д., Арнольд К.Л., Кросс Дж.Т., Хьюмистон С.Г., Грин К.В., Боккини Дж.А.: Коммуникация между рисками и преимуществами детских вакцин в условиях частной практики: национальное исследование. Педиатрия. 2001, 107: E17-10.1542 / peds.107.2.e17.

CAS Статья PubMed Google ученый

55.

Департамент здравоохранения: иммунизация против инфекционных заболеваний, 2006 г. (Зеленая книга). Под редакцией: Солсбери Д., Рамзи М., Ноукс К.2012 г., Лондон, Обновлено 31 августа 2012 г.

Google ученый

56.

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов Министерства здравоохранения и социальных служб США: Сообщение о рисках и преимуществах: руководство для пользователя, основанное на фактических данных. Отредактировано: Fischhoff B, Brewer NT, Downs JS. Silver Spring MD

57.

Национальный совет медицинских исследований в области здравоохранения: Общие рекомендации для практикующих врачей по предоставлению информации пациентам. 1994, Канберра: Австралийское Содружество

Google ученый

58.

Ваннис К.С., Лосось Д.А., Шуй И., Омер С.Б., Кисснер Дж., Эдвардс К.М., Спаркс Р., Деккер С.Л., Кляйн Н.П., Густ Д.А.: Отношение и убеждения родителей, обеспокоенных вакцинами: влияние времени получения информации о иммунизации. Педиатрия. 2011, 127 (Приложение 1): S120-S126.

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

59.

Уоллес К., Лик Дж., Тревена Л.Дж .: Влияние веб-помощников по принятию решений на отношение родителей к вакцинации MMR: исследование до и после.BMJ. 2006, 332: 146-149. 10.1136 / bmj.38678.681840.68.

Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

60.

Джексон C, Cheater FM, Peacock R, Leask J, Trevena L: Оценка помощи при принятии решения по MMR через Интернет для поддержки принятия информированных решений родителями в Великобритании: исследование осуществимости до и после. Health Education J. 2010, 69: 74-83. 10.1177 / 0017896

3146.

Артикул Google ученый

1. 61.

   Jackson C, Shourie S, Cheater FM, Bekker H, Harrison W., Tubeuf S, Edlin R, Bleasby B, McAleese E, Hammond L, Schweiger MS: Внедрение веб-сайта для принятия решения по MMR (комбинированная вакцина против кори, эпидемического паротита и краснухи). ) в повседневную практику в рамках первичной медико-санитарной помощи: предварительное исследование. 6-е ежегодное научное собрание Общества поведенческой медицины. 2010, Великобритания: Лидс

   Google ученый

2. 62.

   Trevena LJ, Barratt A, Butow P, Caldwell P: систематический обзор общения с пациентами о доказательствах.J Eval Clin Pract. 2006, 12: 13-23. 10.1111 / j.1365-2753.2005.00596.x.

   Артикул PubMed Google ученый

3. 63.

   Липкус И.М.: Цифровые, словесные и визуальные форматы передачи рисков для здоровья: предлагаемые передовые практики и будущие рекомендации. Принятие решений в медицине. 2007, 27: 696-713. 10.1177 / 0272989X07307271.

   Артикул PubMed Google ученый

4. 64.

   Волошин С., Шварц Л.М.: Обмен данными о пользе и вреде лечения: рандомизированное исследование.Ann Intern Med. 2011, 155: 87-96.

   Артикул PubMed Google ученый

5. 65.

   Trevena L, Zikmund-Fisher BJ, Edwards A, Timmermans D, Peters E, Lipkus IM, King J, Lawson M, Galesic M, Han P, Volk R, Llewellyn-Thomas H, et al: Представляя Вероятности. Обновление справочного документа сотрудничества по международным стандартам поддержки принятия решений (IPDAS). Глава C. 2012, http://ipdas.ohri.ca/resources.html,

   Google ученый

6. 66.

   Али Х., Сил Х., Уорд К., Цвар Н.: Фотография говорит тысячу слов: оценка графического ресурса по поствакцинальной помощи в Австралии. Aust J Prim Health. 2010, 16: 246-251. 10.1071 / PY10002.

   Артикул PubMed Google ученый

7. 67.

   Lundahl B, Burke BL: Эффективность и применимость мотивационного интервью: удобный для практики обзор четырех метаанализов. J Clin Psychol. 2009, 65: 1232-1245. 10.1002 / jclp.20638.

   Статья PubMed Google ученый

8. 68.

   ДиКлементе CC, Марден Веласкес М: Мотивационное интервью и этапы изменений. Мотивационное интервью. Отредактировано: Miller WR, Rollnick S. 2002, New York: The Guilford Press, 201-216. 2

   Google ученый

9. 69.

   Джексон К., Cheater FM: Какой самый эффективный способ поддержать информированное принятие родителями решения о вакцине MMR.2007 г., отчет представлен в Министерство здравоохранения (Премия «Инициатива общественного здравоохранения»)

   Google ученый

10. 70.

    Leask J: Как врачи общей практики убеждают родителей вакцинировать своих детей? Исследование с использованием стандартных сценариев. N S W Бюллетень по общественному здравоохранению. 2009, 20: 119-124. 10.1071 / NB08064.

    Артикул PubMed Google ученый

11. 71.

    Ролник С., Миллер В. Р., Батлер С. Б.: Мотивационное интервью в сфере здравоохранения.2008, Нью-Йорк: Гилфорд Пресс

    Google ученый

12. 72.

    Wood N: Клиники по побочным эффектам иммунизации. N S W Бюллетень по общественному здравоохранению. 2003, 14: 25-27. 10.1071 / NB03007.

    Артикул PubMed Google ученый

13. 73.

    Leask J: Нацельтесь на сидящих за забором. Природа. 2011, 473: 443-445.

    CAS PubMed Google ученый

14. 74.

    Миллс Э., Джадад А.Р., Росс К., Уилсон К.: Систематический обзор качественных исследований, изучающих убеждения и отношение родителей к вакцинации детей, выявляет общие препятствия для вакцинации. J Clin Epidemiol. 2005, 58: 1081-1088. 10.1016 / j.jclinepi.2005.09.002.

    Артикул PubMed Google ученый

15. 75.

    Tickner S, Leman PJ, Woodcock A: Факторы, лежащие в основе неоптимальной иммунизации детей. Вакцина. 2006, 24: 7030-7036.10.1016 / j.vaccine.2006.06.060.

    Артикул PubMed Google ученый

16. 76.

    Гидденс A: Последствия современности. 1990, Стэнфорд: издательство Стэнфордского университета

    Google ученый

17. 77.

    Samad L, Tate AR, Dezateux C, Peckham C, Butler N, Bedford H: Различия в факторах риска для частичной и нулевой иммунизации в первый год жизни: проспективное когортное исследование.BMJ. 2006, 332: 1312-1313. 10.1136 / bmj.332.7553.1312.

    Артикул PubMed PubMed Central Google ученый

18. 78.

    Хауэллс Р.Дж., Дэвис Х.А., Сильверман Д.Д., Арчер Дж.С., Меллон А.Ф.: Оценка навыков консультации врачей в педиатрических условиях: Инструмент оценки педиатрических консультаций. Arch Dis Child. 2010, 95: 323-329. 10.1136 / adc.2008.146191.

    CAS Статья PubMed Google ученый

19. 79.

    Шефер А., Брисс П., Родевальд Л., Бернье Р., Стрикас Р., Юсуф Н., Ндиай С., Вильямс С., Паппайоану М., Хинман А.Р.: Повышение уровня охвата иммунизацией: обзор литературы, основанный на фактах. Epidemiol Rev.1999, 21: 96-142. 10.1093 / oxfordjournals.epirev.a017992.

    CAS Статья PubMed Google ученый

20. 80.

    Национальный институт здравоохранения и клинического совершенства: Руководство NICE в области общественного здравоохранения 21: сокращение различий в использовании иммунизации (включая таргетные вакцины) среди детей и молодых людей в возрасте до 19 лет.