Характеристика на общественного деятеля образец: Типовая характеристика на активиста общественной организации
Типовая характеристика на активиста общественной организации
Вконтакте
Google+
Одноклассники
Здравствуйте, в этой статье мы постараемся ответить на вопрос: «Типовая характеристика на активиста общественной организации». Также Вы можете бесплатно проконсультироваться у юристов онлайн прямо на сайте.
За время учебы показала отличные знания по всем учебным дисциплинам. Однако предпочтение отдает социально-гуманитарным наукам. Наиболее выражены познавательные способности ученицы к освоению новых информационных технологий, английскому языку, обществознанию, праву.
Зарекомендовала себя ответственным и добросовестным работником. Татьяна Геннадьевна- талантливый сценарист и постановщик культурно-досуговых мероприятий. Умеет заинтересовать и увлечь детей своей кружковой работой. Имеет почётные грамоты и благодарности. Артистична. Любит петь и танцевать.
Характеристика. Примеры характеристик
Сведения о работе. Данный раздел содержит информацию о стаже работы, о начале работы и ее окончании (в случае если работник уже не работает в данной организации), о кадровых передвижениях в рамках компании, которая выдает характеристику. Необходимо отметить трудовые достижения и профессиональные навыки лица.
Самбурская Кристина Вячеславовна обладает богатым багажом знаний по тем направлениям, в которых работает она и весь отдел, разбирается в нормативно-правовой документации, а также умеет находить общий язык с органами местного самоуправления.
Существует несколько причин, по которым руководитель составляет характеристику на работника своего подразделения или организации. В основе оценки качества образования конкретного обучающегося и деятельности образовательного учреждения в целом лежит компетентный диалог основных заказчиков на качество образования – родительской и профессиональной общественности.
Характеристика с места работы (образцы и примеры составления)
Родители восприняли эту идею скептически, выслушали, из вежливости записали пару советов. Но через несколько дней начались звонки с просьбой назвать книгу, чтобы они ее почитали целиком, или получить еще пару советов, так как то, что я дала на собрании, сработало и дети менялись на глазах. А поделилась с ними я советами из книги «Как говорить, чтобы подростки слушали…».
Замужем. Взаимоотношения в семье дружные и уважительные. Родители отмечены «Благодарственным письмом» главы Исетского района за воспитание детей. Татьяна Геннадьевна имеет трёх дочерей. Старшая – студентка Тюменского ВУЗа, средняя и младшая учатся в 3 и 8 классах.
Большое место отводит Маша социально-значимой деятельности, участие в разработке и реализации социальных проектов отмечено грамотами и благодарственными письмами.
Полные сведения об образовании. Когда и какой вуз был окончен, в каком городе, какая специальность и квалификация были присвоены.
Характеристика на общественного деятеля образец
Личностные характеристики. Данная информация, наверное, является самой значимой частью всей характеристики. Она может содержать различные сведения, касающиеся личных качеств лица.
Это, пожалуй, самая точная характеристика взаимоотношений администрации общества и профсоюзной организации. Москва, 2002 Мальцева Э. Социально-демографические характеристики респондентов оставались. Публикации по темам: «Банк идей гражданских активистов» (38). У меня если и есть личностные характеристики этой барышни, то очень неприличные. Адыгея, где проживает большая часть активистов организации.
Мария занимает активную жизненную и общешкольную позицию. В школьном ученическом самоуправлении является министром по работе со СМИ; является редактором газеты «Школьный курьер».
Какие типы фирм могут заплатить вам не задумываясь работа и бизнес — повысить производительность как создать фермерское хозяйство в украине признаки заражения вашего компьютера вирусами как самостоятельно провести мелкий ремонт сантехники? Самостоятельное строительство печки.
Данный документ подписывает руководитель организации. Его подпись – свидетельство подлинности представленной информации. Написать характеристику может другой человек, который лучше знаком с увольняющимся сотрудником.
Соседи Архипова Мария Викторовна, проживающая по адресу:_ и Макаренко Илья Алекесеевич проживающий по адресу:_, отзываются об Афанасенко Павле Ивановиче положительно, характеризуя его, как вежливого, общительного и доброго человека. Афанасенко Павел Иванович поддерживает хорошие отношения с соседями, принимает участие в общественных делах и имеет хорошые семейные отношения.
Анастасия Любимова добросовестно относится к выполнению общественных поручений. По характеру Анастасия скромная, целеустремленная, самостоятельная, дружелюбная, добрая. Ценит во взаимоотношениях чувство взаимопонимания и доверия.
Бытовая характеристика имеет важное значение в случаях возбуждения уголовного дела, когда отзывы окружающих людей могут повлиять на дальнейшую судьбу человека. В других случаях такая характеристика может понадобиться при рассмотрении прав опеки и усыновления.
С третьего класса занимается спортивной аэробикой и достигла высоких результатов в этой области, является призером Кубка Оренбургской области по фитнес-аэробике.
Предоставляет информацию о названии организации, которая эту характеристику выдает, и общие сведения о работнике: фамилию и инициалы, семейное положение, дату рождения, занимаемую в организации должность, общий стаж работы, полученные государственные награды, степени и звания.
Напоминаем, что характеристику следует оформлять на бланке организации с печатью, датой и подписью руководителя.
Кристина Вячеславовна зарекомендовала себя на протяжении пяти лет как честный, ответственный сотрудник, который вовремя приходит в музей, выглядит подобающе заместителю руководителя отдела, имеет отличные рабочие отношения со своими коллегами и руководством.
Это может быть как сотрудник кадрового отдела, так и непосредственно руководитель организации. Помимо этого обязательно нужно проставить дату выдачи документа.
В большинстве случаев характеристика на работника составляется его непосредственным, прямым начальником. Разумеется, руководитель любого предприятия или подразделения знает, как писать характеристики, и понимает, что необходимо указать достоинства, положительные качества сотрудника как работника, а также как просто человека.
ФИО обучается в МБОУ «Сидоровская школа» с первого класса. За время обучения показывает хорошие знания по всем общеобразовательным предметам. Любит рисовать, петь, танцевать.
Все материалы, размещенные на сайте, созданы авторами сайта либо размещены пользователями сайта и представлены на сайте исключительно для ознакомления. Авторские права на материалы принадлежат их законным авторам.
Принимает активное участие в школьных, районных и областных мероприятиях. Зарекомендовала себя ответственным и добросовестным работником и руководителем. У работников Дома культуры между собой дружеские взаимоотношения, благодаря её организаторским способностям и коммуникабельности, она является наставником, другом и советчиком.
Имена соседей, а также их точные адреса и данные должны быть указаны в том же порядке, в каком они встречаются в самой характеристике. Следует предусмотреть поля, так как в дальнейшем характеристика будет подшиваться к делу.
Одна из главных задач ОП РФ на форуме — получить обратную связь от представителей третьего сектора Поволжья в рамках выполнения поручений Президента относительно создания всероссийского единого реестра НКО и принятия дополнительных мер стимулирования социально ориентированных НКО.
Процедура составления и оформления
На Иванова Ивана Ивановича, 1972 г.р. Адрес проживания: От Петрова Петра Петровича. Иванов Иван Иванович и его супруга Иванова Екатерина Александровна проживают по указанному адресу, начиная с 1990 года. За все это время Иванов И.И. зарекомендовал себя как примерный гражданин, поддерживающий хорошие отношения как в семье, так и в общении с соседями.
Руководитель организации должен быть ознакомлен с принципами написания характеристики для награждения, которая должна соответствовать основным стандартам официальной письменной речи.
Характеристика специалиста по работе с молодёжью Рассветовского сельского Дома культуры Созоновой Татьяны Фёдоровны.
Я читаю все Ваши постинги и представить не могу, как у них что-то может получиться? Надеюсь, что и не получится. Всё будет хорошо.
Потребуется стандартный лист бумаги, а также ручка с синей, либо черной пастой. Следует предусмотреть поля, так как в дальнейшем характеристика будет подшиваться к делу.
Наличие образца характеристики для награждения является необходимой деталью в работе любой организации.
Поскольку характеристику можно писать для предоставления в иные организации и для определенных целей внутри фирмы данные документы делят на внешние и внутренние. Внешние характеристики пишутся для подачи в иные организации, инстанции, в вышестоящие органы. Внутренние нужны для ведения дел в пределах самой компании.
Во-вторых, награде может быть удостоен не просто хороший работник, а человек, имеющий определенные заслуги. Все эти заслуги должны быть четко прописаны в характеристике в соответствии с принятыми законами о наградах или ведомственными положениями.
В качестве волонтера Фонда Антонина Валерьевна зарекомендовала себя как человека ответственного, бескорыстного, живо реагирующего на чужую боль и беды.
Отправляя материал на сайт, автор безвозмездно, без требования авторского вознаграждения, передает редакции права на использование материалов в коммерческих или некоммерческих целях, в частности, право на воспроизведение, публичный показ, перевод и переработку произведения, доведение до всеобщего сведения — в соотв. с ГК РФ. (ст. 1270 и др.).
Характеристика на ученика-активиста, общественника. Описываются участия в НПК, активная во всех отношениях позиция ученика из сельской школы. Предназначена для классных руководителей.
Пример характеристики для награждения почетной грамотой работника
История профессиональной деятельности. Здесь указывают, с какого времени человек находится на этом месте, далее перечисляются все места работы, должности и время, в течение которого он работал на тех или иных местах.
Так как характеристика сотрудника для награждения считается официальным документом, она должна быть обязательно подписана руководителем организации, а затем заверена печатью.
Людмила Александровна работает в Рассветовском Доме культуры 15 лет. Образование среднее специальное. Окончила Тобольское училище искусств и культуры имени А.А. Алябьева по специальности педагог-организатор культурно-досуговых мероприятий. 8 лет занимала должность специалиста по работе с молодёжью, 5 лет работала художественным руководителем Рассветовского Дома культуры. С 2012 года заведующая ДК.
Вконтакте
Google+
Одноклассники
Похожие записи:
Образцы писем с вопросами в государственные органы от имени компании
Дорогие читатели! Наши статьи рассказывают о типовых способах решения юридических вопросов, но каждый случай носит уникальный характер.
Если вы хотите узнать, как решить именно Вашу проблему – обращайтесь в форму онлайн-консультанта справа или звоните по телефонам, представленным на сайте. Это быстро и бесплатно!
Доверенность на ИП образец бланк
Интересует вопрос, как написать правильно письмо? Изучение формата и тона подачи официального запроса – необходимый жизненный навык. К счастью, деловые письма обычно пишут по определенному шаблону. Как только вы изучите правильную технику, с написанием писем не будет проблем. В статье рассмотрены правила деловой переписки и примеры оформления. Прежде всего, нужно относиться с заботой и уважением к собеседнику.
Хорошее отношение к получателю письма в большинстве случаев поможет решить рабочие вопросы. Интересует, как написать правильно письмо? Большинство деловых писем соответствуют установленному, простому в освоении формату. Его вы можете адаптировать для любого типа текста. Такой документ всегда должен содержать дату, информацию об отправителе и получателе и еще несколько основных параграфов. Официальные письма включают в себя письма-заявления, сопроводительные письма, рекомендательные письма, письма об отставке, письма-подтверждения, письма-запросы, корректирующие письма и письма-жалобы.
Несмотря на разную целевую аудиторию, все эти документы имеют сходство, когда дело доходит до форматирования и стиля. Вы хотите попасть на собеседование или встречу, но не знаете, как написать правильно письмо? Далее вы найдете советы по оформлению формальных писем, чтобы сообщение передавалось правильным образом.
Разберем, как правильно написать письмо-просьбу. Этот документ относится к некоммерческому типу. Чаще всего одна компания обращается с просьбой к другой об оказании какой-либо услуги. Целью могут служить: просьба описать продукцию, согласование каких-либо действий, встреча командированного и т. Такое письмо является официальным и должно быть написано с соблюдением правил деловой корреспонденции:. Этот одностраничный документ чаще всего отправляют вместе с резюме. Его цель состоит в том, чтобы убедить менеджера по персоналу рассмотреть ваше резюме.
Ситуация такова, что российские работодатели не придают большого значения таким документам. Они рассмотрят ваше резюме в любом случае. Это связано с низким качеством написания подобных документов. Чаще всего соискатели не могут грамотно составить сопроводительное письмо. Но есть и хорошая сторона. Из-за этого при правильном оформлении документа вы получите дополнительный шанс приема на работу.
Цель — привлечение внимания к резюме. Нужно сделать так, чтобы работодатель захотел ознакомиться с ним. Юмор уместен только для творческих должностей. Не нужно писать шутку, если вы не уверены в ней. Как правильно написать сопроводительное письмо? Любому предпринимателю нужно знать, как правильно вести документальное обращение в налоговую инспекцию. Компании регулярно должны отчитываться о движении денежных средств.
Для подачи документов также необходимо сопроводительное письмо. Как правильно написать письмо в налоговую. Чтобы изложить информацию в документе, прежде всего нужно руководствоваться правилами деловой переписки:. Для каждого отдельного случая письмо в налоговую пишется по-разному. Например, обсуждение сроков уплаты налогов, список отправляемых документов, уведомление о смене реквизитов компании и т. Такие письма могут использоваться в суде, необходимо изложить всю требуемую информацию.
Каждый гражданин России имеет право свободы слова и может обращаться в любые государственные органы с вопросами, которые относятся к их компетенции. Это значит, что президенту тоже можно отправить письмо. Как правильно написать письмо президенту РФ? Для этого нужно зайти на его официальный сайт и найти нужный раздел. Вам предоставят перечень вариантов, выберите нужный. Также на сайте вы найдете все необходимые требования для написания письма.
Составить подобный документ совсем не сложно:. Можно отправить письмо в электронном виде или почтой. Адрес для отправления почтовых писем вы найдете на официальном сайте. В соответствии с законами РФ обращение президенту должно быть рассмотрено в течение 30 дней с момента получения. Этот документ представляет собой предложение о совместной работе двух компаний на взаимовыгодных условиях. Главная задача письма заключается в том, чтобы потенциальный партнер проявил заинтересованность и предпринял дальнейшие действия.
Такие документы могут быть началом перед заключением договора или сделки. Если письмо заинтересует, получатель свяжется с вами для запроса коммерческого предложения или для других задач. Большинство людей забывают перепроверить в готовом документе грамматические ошибки. Этот важный шаг не следует пропускать, поскольку в деловых письмах безграмотность непростительна. Автор Сурина Наталья March 12, Обсудить 0. Основы написания письма Прежде всего, нужно относиться с заботой и уважением к собеседнику.
Структура делового письма Реквизиты отправителя должны быть в шапке письма Ф. Далее нужно указать то же о получателе, кроме контактов. После заголовка идет основная часть. Тело является центральной частью письма, и оно должно быть передано не более чем в трех абзацах. Если у вас больше, значит, вы не лаконичны. Прочитайте еще раз и уберите лишнее. Заявите о намерении написать письмо в первом абзаце.
Во втором приведите конкретные примеры, которые подчеркнут ваше желание для составления документа. В последнем абзаце основной части приведите изложение о выгодах сотрудничества с вами. Это всего лишь один пример, в статье будет подробно рассмотрено, как написать правильно письмо, образцы документов. В конце указывается подпись отправителя. Если это юридическое лицо, то нужно поставить печать и подпись уполномоченного лица. Какие бывают официальные письма Официальные письма включают в себя письма-заявления, сопроводительные письма, рекомендательные письма, письма об отставке, письма-подтверждения, письма-запросы, корректирующие письма и письма-жалобы.
Похожие статьи Можно ли вернуть товар без чека? Как сделать это правильно? Что делать, если потерял паспорт: подробная инструкция В каких лесах растет белый гриб? Когда собирать белый гриб? Грибные места Гриб свинуха: фото, описание, польза и вред. Как готовить свинухи? Мировой рекорд по задержке дыхания под водой и на суше. Подводное плавание с задержкой дыхания Самые известные люди России Что ответить на “спасибо”? Варианты ответов: пожалуйста, не стоит благодарности, рад был помочь.
Как написать правильно письмо? Образец оформления
Письмо-запрос — особая форма делового послания, которое составляется в тех случаях, когда одна заинтересованная сторона желает получить от второй стороны какую-либо информацию. Составляться запрос может по самым разным поводам, с целью получения:. Письма-запросы могут являться началом долгого плодотворного сотрудничества, а также, в случае уже налаженных деловых связей хорошим методом воздействия на партнеров при их слишком медленной или недостаточно эффективной работе. Письмо-запрос несколько похож на письмо-просьбу, но их основное различие в том, что запрос имеет более официальный и строгий характер и может касаться только тех аспектов, которые имеют прямое отношение к функциональной деятельности фирмы.
В любой сфере деятельности даже при отличной организации работы и внимательном отношении к клиентам время от времени возникают противоречия с ними. Как результат, поступают жалобы, в том числе письменные.
Когда компания перестает пользоваться услугами прежнего банка и открывает счет в новом, она обязана предупредить контрагентов. Партнерам и клиентам компании направляют письмо о смене банковских реквизитов организации, образец такого письма скачивайте в приложении. При заключении договора обе стороны сделки указывают сведения о себе, в частности, банковские данные. Это необходимо для безналичных взаиморасчетов с контрагентом.
Характеристика на работника с места работы
Среди самых распространенных выделяют:. Важно знать, как правильно составить документ, где взять его образец. Заявление см. В связи с правками в законодательство, юридическая информация в данной статье могла потерять актуальность! Поощрением может выступать премия, почетная грамота, повышение звания. Документ должен быть лаконичным, грамотным, информативным, правдивым. Как его правильно оформить? Чаще всего его подают для защиты определенных прав сотрудника или для получения некоторых льгот. Наиболее распространенные ситуации, когда применяется аналогичный документ:. Например, принято решение лишить водительских прав нарушителя ПДД.
Ходатайство с места работы
Рекомендательное письмо организации для организации – это отзыв одной компании о другой, оценка ее надежности как партнера, качества предлагаемых товаров либо предоставляемых услуг, уровня профессионализма рабочего персонала и т. Наличие рекомендательных писем организации способствует формированию положительного имиджа компании и повышению ее конкурентоспособности. Затем сразу начинается основной текст письма, который пишется в произвольной форме. Здесь одна компания выделяет положительные моменты сотрудничества с другой компанией, оценивает уровень профессионализма ее сотрудников, дает свои рекомендации воспользоваться услугами этой организации и т. В конце рекомендательного письма компании ставится подпись руководителя компании – составителя письма, которая скрепляется печатью организации, указывается его должность, ФИО.
We were glad when the postman left us your letter today.
Как его правильно оформить? Чаще всего его подают для защиты определенных прав сотрудника или для получения некоторых льгот. Наиболее распространенные ситуации, когда применяется аналогичный документ:. Например, принято решение лишить водительских прав нарушителя ПДД.
Характеристика на общественного деятеля образец
Доверенность на получение товара выписывается в тех случаях, когда доверитель не имеет возможности в силу занятости или по другим причинам получить товар лично. Доверенность на получение товара внутри организации обычно выписывается на сотрудников, уполномоченных получать товарно-материальные ценности от лица компании: менеджеров по закупкам, руководителей отдела поставок, логистов, экспедиторов и т. Такая доверенность может быть оформлена с правом передоверия, но предоставляется это право доверителями крайне редко. Во-первых, поскольку проконтролировать лицо, на которое оформляется передоверие значительно сложнее, а во-вторых, доверенности, по которым представителям дается такое право, необходимо обязательно заверять у нотариуса.
ПОСМОТРИТЕ ВИДЕО ПО ТЕМЕ: Волеизъявление Человека о вступление в свои права и обязанности!Если вы хотите оставить комментарий с оценкой , то вам необходимо оценить документ вверху страницы. Спасибо, ваша оценка учтена. Также вы можете оставить комментарий к своей оценке. И добавьте Договор-Юрист. Сайт Договор-Юрист.
Как писать ответы на жалобы
Жалоба, как документ, представляет собой какое-либо обращение с целью обратить внимание на факт, который вызвал определённые претензии у лица, которое и написало жалобу. Пример ответа на письменную жалобу, как правило, также требует письменной формы. В некоторых случаях, должным образом отреагировать на жалобу и дать развёрнутый ответ на обращение в виде жалобы закон ставит в обязанность тому, к кому такое обращение направлено. Традиционно жалобы в организации направляются клиентами таких компаний, которые недовольны или работниками самой компании, или качеством оказанных ими услуг, или качеством проданного товара. Направляя жалобу, клиент просит руководство компании разобраться в возникшем конфликте, по возможности уладить его, наказать виновного, либо возместить вред. Письменное обращение в соответствии с правилами в сфере защиты потребителей, руководство компании, которому направлено письменное обращение, не может игнорировать. Это является самостоятельным нарушением норм закона.
Совместно с обращением в трудовую инспекцию можно направить жалобу и в органы прокуратуры. Данная инстанция занимается вопросами, касающимися нарушения личных и трудовых прав граждан.
Важнейший инструмент, который служит подтверждением законности документа — печать нотариуса. Он производится не только для государственных структур, но и для частных компаний. Квалифицированный юрист не может продолжать свою работу без этого важного атрибута. Для ведения правовой нотариальной практики каждый нотариус должен иметь в наличии свою индивидуальную печать с гербом России.
Деловая репутация организации образец письма
В любой сфере деятельности даже при отличной организации работы и внимательном отношении к клиентам время от времени возникают противоречия с ними. Как результат, поступают жалобы, в том числе письменные. Игнорировать их или рассматривать ненадлежащим образом никак нельзя, поскольку это может привести к серьезным последствиям, если ваше письмо будет использовано адресатом для защиты своих прав в вышестоящих организациях или в суде. С целью упростить вам задачу подготовки грамотного ответа на жалобу составлен данный материал.
Многие российские граждане время от времени задавались вопросом, а не обратиться ли напрямую к Путину, написав письмо президенту РФ? Эта статья-руководство даст ответы на наиболее частые вопросы, связанные с написанием обращений, жалоб или сообщений о коррупции в письменном виде в адрес Президента России. Конституция Российской Федерации закрепляет права граждан России на свободу слова, как бы пафосно или буднично это не звучало.
В ряде случаев возникают обстоятельства, когда в силу объективных причин в Устав Общества с ограниченной ответственностью необходимо вносить определенные изменения.
Интересует вопрос, как написать правильно письмо? Изучение формата и тона подачи официального запроса – необходимый жизненный навык. К счастью, деловые письма обычно пишут по определенному шаблону. Как только вы изучите правильную технику, с написанием писем не будет проблем.
Представитель самого малого бизнеса — ИПшник-самозанятый. Занимаюсь мебелью из дерева, но иногда приходится в налоговой и в банках торчать больше, чем в мастерской. Образец характеристики с места работы довольно востребован. Характеристика с места работы — это вполне официальный документ, который составляется по просьбе самого работника или по запросу от внешних источников, например, судебных органов, из организации — нового места работы сотрудника и прочее. Еще характеристика может быть составлена для использования внутри самой организации. Например, для решения вопроса о продвижении по службе, для аттестации, награждения и т. Также она может понадобиться в ряде других случаев.
Поощрения в профессиональной и трудовой сфере предполагают составление такого документа, как характеристика для награждения работника. Это не совсем характеристика с места работы, которая применяется для предъявления в государственные органы и организации или для перевода. При составлении документа для награждения работника необходимо учитывать: уровень награды государственная, муниципальная, ведомственная, локальная от организации и т. Поскольку универсальный образец характеристики для награждения работника привести затруднительно с учетом существования различных уровней наград и за различные достижения в профессиональной деятельности, размещенный ниже пример можно адаптировать под конкретную ситуацию.
Музей книги Научной библиотеки ТГУ
Музей книги Научной библиотеки ТГУ
Заведующий отделом рукописей и книжных памятников – Конев Кирилл Александрович, кандидат исторических наук
Адрес: 634050, г. Томск, пр. Ленина, 34 а, Научная библиотека, старое здание, ауд. 8.
Заявки на экскурсии принимает Экскурсионно-просветительский центр музеев ТГУ по телефону 8 (382-2) 529-834.
Экспозицию Музея книги при отделе рукописей и книжных памятников Научной библиотеки ТГУ открывает витрина с уникальными материалами, относящимися к начальному периоду истории Сибири и Томска. Рукописный сборник исторического характера XVII в. раскрыт на странице, где дана характеристика Сибири того времени. В виде свитков представлены делопроизводственные документы XVII в., а рядом – написанная в Тобольске в 1715 г. рукопись Григория Новицкого «Краткое описание о народе остяцком», являющаяся первой монографией о коренных жителях Сибири.
Как образец русской лицевой рукописи конца XVII в. показано сочинение Козьмы Индикоплова «Христианская топография»; дополняют раздел рукописные документы на пергаменте и бересте.
Ранние западноевропейские и славяно-русские издания XV–XVI вв. представлены сочинением Михаила Каркано «Собрание проповедей о пороках», напечатанным в Базеле в 1479 г., и сочинением Конрада Геснера «История животных», изданным в 1555 г. Показан экземпляр «Библии», изданной Иваном Федоровым в Остроге в 1581 г.
Из западноевропейских и русских научных изданий XVI–XVIII вв. посетители могут увидеть сочинения Себастьяна Мюнстера «Начала математики…» (1555), Мелентия Смотрицкого «Грамматика…» (1648) и Леонтия Магницкого «Арифметика…» (1703). Хронологически этот раздел продолжают труды Г.Ф. Миллера «Описание Сибирского царства» (1750) и С.П. Крашенинникова «Описание Камчатки» (1756). Эпоха Просвещения представлена сочинениями Вольтера и Ж.-Ж. Руссо, а также первым томом «Энциклопедии…» Даламбера и Дидро, издававшейся с 1751 по 1780 год.
Значительная часть экспозиции отведена изданиям по истории и литературе России конца XVIII–XIX вв. Особое место среди них занимают те, что были напечатаны в Тобольске в типографии В. Корнильева. Их дополняет рукопись сочинения П.А. Словцова «Историческое обозрение Сибири» (1830-е). В соседней витрине размещены «Роспись государственным преступникам, приговором Верховного уголовного суда, осуждаемым к разным казням и наказаниям» (1826), а также книги из библиотеки декабриста-томича Г.С. Батенькова.
Представлены книги из библиотеки поэта В.А. Жуковского, на страницах которых сохранились его пометы и записи на полях, а также беглый перевод между строк текста. Одну из витрин занимают прижизненные издания произведений А.С. Пушкина: отдельные главы романа «Евгений Онегин» (1825–1832), экземпляр поэмы «Руслан и Людмила» (1828) и другие. Показаны сочинения Н.В. Гоголя и Н.Г. Чернышевского с дарственными надписями профессору словесности Санкт-Петербургского университета А.В. Никитенко. Рядом с первым изданием сборника Л.Н. Толстого «Военные рассказы» (1856) помещена его фотография с дарственной надписью томичу П.А. Буткееву.
Как образец полиграфического искусства конца XIX в. представлен труд Н.П. Кондакова «История и памятники византийской эмали», изданный Звенигородским в 1894 г. Рядом – миниатюрные книги, среди которых «Божественная комедия» А. Данте размером 54 х 35 мм, напечатанная в Милане в 1878 г.
В экспозиции уделено внимание культурной жизни Томска конца XIX в. Среди экспонатов – книги и документы из собрания директора Томского реального училища Г.К. Тюменцева, в том числе сборник сибирского писателя-народника Н.И. Наумова «Сила солому ломит. Рассказы из быта сибирских крестьян».
Представлены и подлинные документы, относящиеся ко времени основания и открытия в 1888 г. Императорского Томского университета – первого высшего учебного заведения в Сибири. Рядом в витрине «Книга почетных гостей университета», раскрытая на странице с автографом цесаревича Николая Александровича – будущего императора Николая II, посетившего университет 6 июля 1891 г.
Завершают экспозицию материалы из архивов известного путешественника, общественного деятеля Сибири Г.Н. Потанина, сибирского просветителя П.И. Макушина и писателя Г.М. Маркова.
Оригинальные живописные и графические работы художников XIX–XX вв., портреты жертвователей на строительство университета, основателя библиотеки и устроителя первого университета в Сибири В.М. Флоринского дополняют экспозицию музея и создают визуальный контекст для ее восприятия.
|
Документы – Министерство культуры Российской Федерации
Какие критерии распределения должностей работников учреждений культуры по квалификационным уровням внутри профессиональных квалификационных групп для установления различных размеров должностных окладов по должностям, имеющим разные требования к квалификации?
Согласно Единым рекомендациям по установлению на федеральном, региональном и местном уровнях систем оплаты труда работников государственных и муниципальных учреждений, ежегодно утверждаемым решением Российской трехсторонней комиссии по регулированию социально-трудовых отношений (далее – Единые рекомендации), органам государственной власти субъектов Российской Федерации и органам местного самоуправления рекомендуется при изменении (совершенствовании) систем оплаты труда работников учреждений предусматривать установление минимальных окладов (минимальных должностных окладов), минимальных ставок заработной платы по профессиональным квалификационным группам (квалификационным уровням ПКГ).
По должностям служащих, не включенным в ПКГ, размеры окладов (должностных окладов) рекомендуется устанавливать в зависимости от сложности труда.
Статьей 144 Трудового кодекса Российской Федерации (далее – ТК РФ) определено, что профессионально-квалификационной группы – это группы профессий рабочих и должностей служащих, сформированные с учетом сферы деятельности на основе требований к уровню квалификации, которые необходимы для осуществления соответствующей деятельности.
Отнесение профессий рабочих и должностей служащих к той, или иной ПКГ осуществляется с учетом вида экономической деятельности по определенным критериям в соответствии с приказом Минздравсоцразвития России от 06.08.2007 № 525 «О профессиональных квалификационных группах и утверждении критериев отнесения профессий рабочих и должностей служащих к профессиональным квалификационным группам» (далее – Приказ № 525) и на основании требований к квалификации, предусмотренных квалификационными характеристиками.
Согласно Приказу № 525 профессии рабочих и/или должности служащих, входящие в одну ПКГ, могут быть структурированы по квалификационным уровням этой ПКГ в зависимости от сложности выполняемых работ и уровня квалификационной подготовки, необходимой для работы по профессии рабочего или занятия должности служащего.
Одна и та же профессия рабочего или должность служащего может быть отнесена к разным квалификационным уровням в зависимости от сложности выполняемой работы, а также с учетом дополнительных показателей квалификации, подтвержденных сертификатом, квалификационной категорией, стажем работы и другими документами, сведениями.
Обращаем внимание, что в порядке исключения отдельные должности служащих, имеющие важное социальное значение, могут быть отнесены к ПКГ исходя из более высокого уровня требований к квалификации, необходимого для занятия соответствующих должностей служащих.
Учитывая изложенное, в одной ПКГ может устанавливаться, должностное категорирование с учетом требований к квалификации, которое может образовывать новый оклад.
Следует отметить, что ряд должностей служащих не входят в состав ПКГ, однако, это не является препятствием для включения должности в штатное расписание организации.
Одновременно сообщаем, что ТК РФ предоставляет работодателю право самостоятельно определять штатное расписание, наименования должностей и трудовых функций работников в соответствии с Уставом учреждения.
Исключение составляют наименования должностей, профессий или специальностей и квалификационные требования к ним, выполнение работ которых связаны с предоставлением компенсаций и льгот либо наличием ограничений. В этом случае наименование этих должностей, профессий или специальностей и квалификационные требования к ним должны соответствовать наименованиям и требованиям, указанным в квалификационных справочниках и профессиональных стандартах (статья 57 ТК РФ).
Дополнительно сообщаем, что в соответствии с частью 1 статьи 144 ТК РФ системы оплаты труда (в том числе тарифные системы оплаты труда) работников государственных и муниципальных учреждений устанавливаются:
в государственных учреждениях субъектов Российской Федерации – коллективными договорами, соглашениями, локальными нормативными актами в соответствии с федеральными законами и иными нормативными правовыми актами Российской Федерации, законами и иными нормативными правовыми актами субъектов Российской Федерации;
в муниципальных учреждениях – коллективными договорами, соглашениями, локальными нормативными актами в соответствии с федеральными законами и иными нормативными правовыми актами Российской Федерации, законами и иными нормативными правовыми актами субъектов Российской Федерации, и нормативными правовыми актами органов местного самоуправления.
Таким образом, вопросы о порядке и условиях оплаты труда работников государственных учреждений субъектов Российской Федерации и муниципальных учреждений, в том числе вопросы установления систем оплаты труда, относятся к компетенции соответственно органов государственной власти субъектов Российской Федерации и органов местного самоуправления.
Карамзин Николай Михайлович — биография писателя, личная жизнь, фото, портреты, книги
Николай Михайлович Карамзин — великий русский писатель, крупнейший литератор эпохи сентиментализма. Писал художественную прозу, лирику, пьесы, статьи. Реформатор русского литературного языка. Создатель «Истории государства Российского» — одного из первых фундаментальных трудов по истории России.
«Любил грустить, не зная о чем…»
Карамзин родился 1 (12) декабря 1766 года в селе Михайловка Бузулукского уезда Симбирской губернии. Вырос в деревне отца, потомственного дворянина. Интересно, что род Карамзиных имеет тюркские корни и происходит от татарского Кара-мурзы (аристократического сословия).
О детстве писателя известно немного. В 12 лет его отправляют в Москву в пансион профессора Московского университета Иоганна Шадена, где молодой человек получает первое образование, изучает немецкий и французский языки. Еще через три года он начинает посещать лекции знаменитого профессора эстетики, просветителя Ивана Шварца в Московском университете.
В 1783 году по настоянию отца Карамзин поступает на службу в Преображенский гвардейский полк, но вскоре выходит в отставку и уезжает в родной Симбирск. В Симбирске происходит важное для молодого Карамзина событие — он вступает в масонскую ложу «Золотого венца». Это решение сыграет свою роль чуть позже, когда Карамзин вернется в Москву и сойдется со старым знакомым их дома — масоном Иваном Тургеневым, а также писателями и литераторами Николаем Новиковым, Алексеем Кутузовым, Александром Петровым. Тогда же начинаются первые попытки Карамзина в литературе — он участвует в издании первого русского журнала для детей — «Детское чтение для сердца и разума». Четыре года, проведенных им в обществе московских масонов, оказали серьезное влияние на его творческое развитие. В это время Карамзин много читает популярных тогда Руссо, Стерна, Гердера, Шекспира, пробует переводить.
«В кружке Новикова началось образование Карамзина, не только авторское, но и нравственное».
Человек пера и мысли
В 1789 году следует разрыв с масонами, и Карамзин отправляется путешествовать по Европе. Он объехал Германию, Швейцарию, Францию и Англию, останавливаясь преимущественно в больших городах, центрах европейского просвещения. Карамзин посещает Иммануила Канта в Кёнигсберге, становится свидетелем Великой французской революции в Париже.
Именно по результатам этой поездки он пишет знаменитые «Письма русского путешественника». Эти очерки в жанре документальной прозы быстро обрели популярность у читателя и сделали Карамзина известным и модным литератором. Тогда же, в Москве, из-под пера литератора появляется на свет повесть «Бедная Лиза» — признанный образец русской сентиментальной литературы. Многие специалисты по литературоведению считают, что именно с этих первых книг начинается современная русская литература.
«В начальный период его литературной деятельности Карамзину был свойствен широкий и политически довольно неопределенный «культурный оптимизм», вера в спасительное влияние успехов культуры на человека и общество. Карамзин уповал на прогресс наук, мирное улучшение нравов. Он верил в безболезненное осуществление идеалов братства и гуманности, пронизывавших литературу XVIII века в целом».
В противовес классицизму с его культом разума, по следам французских литераторов Карамзин утверждает в русской литературе культ чувств, чувствительности, сострадания. Новые «сентиментальные» герои важны прежде всего способностью любить, отдаваться чувствам. «Ах! Я люблю те предметы, которые трогают мое сердце и заставляют меня проливать слезы нежной скорби!» («Бедная Лиза»).
«Бедная Лиза» лишена морали, дидактизма, назидательности, автор не поучает, а пытается вызвать у читателя сопереживание героям, что отличает повесть от прежних традиций классицизма.
«Бедная Лиза» потому и была принята русской публикой с таким восторгом, что в этом произведении Карамзин первый у нас высказал то «новое слово», которое немцам сказал Гёте в своем «Вертере».
Николай Карамзин на памятнике «Тысячелетие России» в Великом Новгороде. Скульпторы Михаил Микешин, Иван Шредер. Архитектор Виктор Гартман. 1862
Джованни Баттиста Дамон-Ортолани. Портрет Н.М. Карамзина. 1805. ГМИИ им. А.С. Пушкина
Памятник Николаю Карамзину в Ульяновске. Скульптор Самуил Гальберг. 1845
Тогда же начинается и реформа литературного языка — Карамзин отказывается от старославянизмов, населявших письменный язык, ломоносовской высокопарности, от использования церковнославянской лексики и грамматики. Это сделало «Бедную Лизу» легкой и приятной повестью для чтения. Именно сентиментализм Карамзина стал фундаментом развития дальнейшей русской литературы: от него отталкивался романтизм Жуковского и раннего Пушкина.
«Карамзин сделал литературу гуманною».
Одна из важнейших заслуг Карамзина — обогащение литературного языка новыми словами: «благотворительность», «влюбленность», «вольнодумство», «достопримечательность», «ответственность», «подозрительность», «утонченность», «первоклассный», «человечный», «тротуар», «кучер», «впечатление» и «влияние», «трогательный» и «занимательный». Именно он ввел в обиход слова «промышленность», «сосредоточить», «моральный», «эстетический», «эпоха», «сцена», «гармония», «катастрофа», «будущность» и другие.
«Писатель-профессионал, один из первых в России имевший смелость сделать литературный труд источником существования, выше всего ставивший независимость собственного мнения».
В 1791 году начинается деятельность Карамзина-журналиста. Это становится важной вехой в истории русской литературы — Карамзин основывает первый русский литературный журнал, отца-основателя нынешних «толстых» журналов — «Московский журнал». На его страницах выходит ряд сборников и альманахов: «Аглая», «Аониды», «Пантеон иностранной словесности», «Мои безделки». Эти публикации сделали сентиментализм основным литературным течением в России конца XIX века, а Карамзина — его признанным лидером.
Но скоро следует глубокое разочарование Карамзина в прежних ценностях. Уже через год после ареста Новикова закрывается журнал, после смелой карамзинской оды «К Милости» милости «сильных мира» лишается сам Карамзин, едва не попав под следствие.
«Доколе гражданин покойно, без страха может засыпать, и всем твоим подвластным вольно по мыслям жизнь располагать; …доколе всем даешь свободу и света не темнишь в умах; доколь доверенность к народу видна во всех твоих делах: дотоле будешь свято чтима… спокойствия твоей державы ничто не может возмутить».
Большую часть 1793–1795 годов Карамзин проводит в деревне и выпускает сборники: «Аглая», «Аониды» (1796). Он задумывает издать нечто в роде хрестоматии по иностранной литературе «Пантеон иностранной словесности», но с большим трудом пробивается через цензурные запреты, не допускавшие печатать даже Демосфена и Цицерона…
Разочарование во Французской революции Карамзин выплескивает в стихах:
Но время, опыт разрушают
Воздушный замок юных лет…
…И вижу ясно, что с Платоном
Республик нам не учредить…
В эти годы Карамзин все больше переходит от лирики и прозы к публицистике и развитию философских идей. Даже «Историческое похвальное слово императрице Екатерине II», составленное Карамзиным при восшествии на престол императора Александра I — преимущественно публицистика. В 1801–1802 годах Карамзин работает в журнале «Вестник Европы», где пишет в основном статьи. На практике его увлечение просвещением и философией выражается в написание трудов на исторические темы, все более создавая знаменитому литератору авторитет историка.
Первый и последний историограф
Указом от 31 октября 1803 года император Александр I дарует Николаю Карамзину звание историографа. Интересно, что титул историографа в России после смерти Карамзина не возобновлялся.
С этого момента Карамзин прекращает всякую литературную работу и в течение 22 лет занимается исключительно составлением исторического труда, знакомого нам как «История государства Российского».
Алексей Венецианов. Портрет Н.М. Карамзина. 1828. ГМИИ им. А.С. Пушкина
Карамзин ставит себе задачу составить историю для широкой образованной публики, не быть исследователем, а «выбрать, одушевить, раскрасить» все «привлекательное, сильное, достойное» из русской истории. Важный момент — труд должен быть рассчитан и на иностранного читателя, чтобы открыть Россию Европе.
В работе Карамзин пользовался материалами Московской коллегии иностранных дел (особенно духовными и договорными грамотами князей, и актами дипломатических сношений), Синодальным хранилищем, библиотеками Волоколамского монастыря и Троицко-Сергиевой лавры, частными собраниями рукописей Мусина-Пушкина, Румянцева и А.И. Тургенева, составившего коллекцию документов папского архива, а также многими другими источниками. Важной частью работы стало изучение древних летописей. В частности, Карамзин обнаружил ранее неизвестную науке летопись, названную Ипатьевской.
В годы работы над «Историей…» Карамзин в основном жил в Москве, откуда выезжал только в Тверь и в Нижний Новгород, на время занятия Москвы французами в 1812 году. Лето он обыкновенно проводил в Остафьеве, имении князя Андрея Ивановича Вяземского. В 1804 году Карамзин женился на дочери князя, Екатерине Андреевне, родившей писателю девятерых детей. Она стала второй женой писателя. Впервые писатель женился в 35 лет, в 1801 году на Елизавете Ивановне Протасовой, умершей через год после свадьбы от послеродовой горячки. От первого брака у Карамзина осталась дочь Софья, будущая знакомая Пушкина и Лермонтова.
Главным общественным событием жизни писателя в эти годы стала «Записка о древней и новой России в ее политическом и гражданском отношениях», написанная в 1811 году. В «Записке…» отражались взгляды консервативных слоев общества, недовольных либеральными реформами императора. «Записка…» была передана императору. В ней, некогда либерал и «западник», как сказали бы сейчас, Карамзин предстает в роли консерватора и пытается доказать, что никаких фундаментальных преобразований проводить в стране не нужно.
И вот в феврале 1818 года Карамзин выпускает в продажу первые восемь томов своей «Истории государства Российского». Тираж в 3000 экземпляров (огромный для того времени) распродается в течение месяца.
«Все, даже светские женщины, бросились читать историю своего отечества, дотоле им неизвестную. Она была для них новым открытием. Древняя Россия, казалось, найдена Карамзиным, как Америка — Колумбом».
«История государства Российского» стало первым трудом, ориентированным на самого широкого читателя, благодаря высоким литературным достоинствам и научной скрупулезности автора. Исследователи сходятся во мнении, что этот труд одним из первых способствовал становлению национального самосознания в России. Книга была переведена на несколько европейских языков.
Несмотря на огромную многолетнюю работу, Карамзин не успел дописать «Историю…» до своего времени — начала XIX века. После первого издания были выпущены еще три тома «Истории…». Последним оказался 12-й том, описывающий события Смутного времени в главе «Междоцарствие 1611–1612». Книга вышла уже после смерти Карамзина.
Карамзин был целиком человеком своей эпохи. Утверждение в нем монархических взглядов к концу жизни сблизило писателя с семьей Александра I, последние годы он провел рядом с ними, проживая в Царском Селе. Смерть Александра I в ноябре 1825 и последующие события восстания на Сенатской площади стали настоящим ударом для писателя. Николай Карамзин скончался 22 мая (3 июня) 1826 года в Санкт-Петербурге, похоронен он на Тихвинском кладбище Александро-Невской лавры.
Известные лидеры
У каждого человека есть свои прототипы для наследования, кумиры или просто люди, жизнеописания которых мотивируют действовать. В мировой истории найдется не один пример биографий известных людей, после прочтения которых вдохновляешься абсолютно на любые поступки. Нередко это люди которые жили века назад, но есть и наши современники.
Для одних это спортсмены, для других – политики, для третьих – успешные предприниматели. Но объединяет их всех одно – это лидеры. И даже сегодня, когда мир быстро меняется, порой по истечении нескольких столетий после смерти таких деятелей, их идеи продолжают оставаться актуальными и способствовать сплочению людей. А разве не это задача настоящего лидера?
Содержание:
Политические лидеры
Профессиональные политики, умелые государственные деятели подарили истории наибольшее количество известных лидеров. Причиной тому специфика области, где такие люди довольно часто вершили судьбу мира, а их имена постоянно были на слуху. Кроме того, для достижения успеха в политике требуется харизма, твердость духа и, как правило, отличные ораторские способности.
Уинстон Спенсер Леонард Черчилль (1874-1965) – британский государственный, политический и военный деятель, премьер-министр Великобритании в 1940-1945 и 1951-1955 гг. Журналист, писатель, ученый. Лауреат Нобелевской премии по литературе. Величайший британец в истории по данным опроса проведенного ВВС в 2002 г.
У. Черчилль – человек необычайной энергии и эрудиции. Он работал во многих министерствах, имел непосредственное влияние на разработку планов военных действий во время двух мировых воен. Читая его «Вторую мировую войну», не перестаешь удивляться тому, с какой детальностью автор описывает дипломатические перипетии конца 30-х гг., а уже на следующей странице дает полное техническое описание магнитной мины. Как лидер, Черчилль принимал активное участие во всем и интересовался всем, что прямо или косвенно относилось к управлению государством. Он был прекрасным оратором – его выступления по радио в годы войны (например, известное «Это было их лучшее время») собирали огромные аудитории, вселяя в людей оптимизм и гордость за Британию. Многие речи британского политика остаются образцом ораторского искусства, а отдельные фразы стали крылатыми.
«Успех нельзя гарантировать, его можно только заслужить»
Франклин Делано Рузвельт (1882-1945) – американский государственно-политический деятель, 32-й президент США, единственный президент в истории страны, избиравшийся на высшую государственную должность 4 раза подряд. Автор экономической программы «Новый курс», которая помогла Соединенным Штатам выйти из Великой Депрессии, а также один из последовательных вдох-новителей идеи создания ООН.
Ф. Рузвельт – пример лидера способного в трудное время объединить самых разных людей ради достижения общей цели. Прикованный к инвалидному креслу вследствие перенесенной болезни, этот политик сумел собрать команду из многих специалистов и добился поддержки в Конгрессе реформ направленных на оздоровление экономики. Администрация Рузвельта дала убежище многим евреям-беженцам из Германии, после прихода там к власти нацистов. Обладающий незаурядным мужеством, целеустремленностью и твердым характером, этот деятель имел огромное влияние на международную политику в 30-х – I половине 40-х гг. ХХ века.
«Счастье заключается в радости достижения цели и острых ощущениях творческого усилия»
Нельсон Ролилахла Мандела (1918-2013) – 8 президент и первый чернокожий президент ЮАР, известный борец за права человека и против апартеида. За свою деятельность был осужден и провел в тюрьме 27 лет, с 1962 по 1990 г. Нобелевский лауреат премии мира в 1993 г., почетный член более 50 международных уни-верситетов.
Н. Мандела – отличный пример транзакционного лидерства. Посвятив свою жизнь идее достижения чернокожим населением ЮАР равных с белыми прав, он выступал за мирные трансформации, но не гнушался доказывать правоту, проводя диверсионные акты усилиями вооруженного крыла Африканского Национального Конгресса (АНК). После победы на президентских выборах в 1994 г. Н. Мандела назначил своего главного политического оппонента из Национальной партии Ф. де Клерка первым заместителем, желая завершить начавшийся в 90-х процесс урегулирования. Сегодня этот политический деятель является одним из авторитетнейших борцов против ВИЧ-СПИДА.
«Если у вас есть мечта, ничто не помешает вам воплотить ее в жизнь, пока вы не сдаетесь»
Маргарет Хильда Тэтчер (1925-2013) – премьер-министр Великобритании в 1979-1990 гг. Единственная женщина, занимавшая эту должность, а также первая женщина премьер-министр европейского государства. Автор жестких экономических мер по оздоровлению экономики, получивших название «тэт-черизм». Получила прозвище «Железная леди» за упорство, с которым проводила свою политику и за постоянную критику советского руководства.
Стиль руководства М. Тэтчер, который лучше всего характеризует ее лидерские качества, был близким к авторитарному. Она – типичная бизнес-леди: рассудительная, логичная, холодная к эмоциям, но в тоже время имеющая женский взгляд на проблему. Решительность, с которой велась Фолклендская война, выдает в ней уверенного политика, а письма, которые она сама подписывала для семьи каждого погибшего – мать. Конфликт с ИРА, человеческие жертвы, покушения на жизни премьера и ее мужа, непростые отношения с СССР – это неполный список того, с чем довелось столкнуться М. Тэтчер. Как она справилась с этими вызовами, рассудит история. Интересен лишь один факт – железная леди была равнодушна к феминизму, стараясь всей своей жизнью показать, что никакой дискриминации нет, а для того чтобы добиться чего-нибудь достаточно быть лучше чем все остальные.
«Если хочешь, чтобы было что-то сказано – попроси об этом мужчину; если хочешь, чтобы что-то было сделано – попроси женщину»
Бизнес-лидеры
Бизнес, в отличие от политики, это та сфера, где слово «успех» применяется по отношению к известным людям гораздо чаще. Каждый хочет быть успешным, отчасти этим и объясняется популярность книг, написанных знаменитыми бизнесменами. Лидеры в экономической сфере зачастую бывают смелыми новаторами, рискованными авантюристами и оптимистами, способными увлечь своей идеей.
Джон Дэвисон Рокфеллер (1839-1937) – американский предприниматель, филантроп, первый долларовый миллиардер в истории человечества. Основатель «Standard Oil», Чикагского университета, Рокфеллеровского института медицинских исследований и Фонда Рокфеллера, который занимался благотворительностью, жертвуя огромные суммы на борьбу с болезнями и образование.
Дж. Рокфеллер был грамотным управителем. На первых порах существования его нефтяной компании, он отказался от выплаты зарплат деньгами, премируя сотрудников акциями компании. Это делало их заинтересованными в успехе дела, ведь прибыль каждого напрямую зависела от доходов компании. О дальнейшем этапе его карьеры – поглощении других компаний – ходит много не самых приятных слухов. Но обращаясь к фактам, можно судить о Дж. Рокфеллере как о религиозном лидере – с детства он перечислял 10% своих доходов баптистской церкви, жертвовал на развитие медицины и христианским общинам, а в своих интервью неоднократно подчеркивал, что заботится о благе соотечественников.
««Ваше благополучие зависит от ваших собственных решений»»
Генри Форд (1863-1947) – американский изобретатель, промышленник, владелец и основатель «Ford Motor Company». Первым применил промышленный конвейер для производства автомобилей, благодаря чему машины «форд» были некоторое время самыми доступными на рынке. Написал книгу «Моя жизнь, мои достижения», которая стала основой для такого политэкономического явления как «фордизм».
Г. Форд, без сомнения, был одним из тех людей, которые оказали наибольшее влияние на промышленное развитие мира в ХХ веке. О. Хаксли в своей антиутопии «О дивный новый мир» начало потребительского общества связывает с именем Форда, которого мир будущего считает богом. Управленческие решения Г. Форда были во многом революционными (увеличение заработной платы почти в 2 раза позволило собрать лучших специалистов), что диссонировало с авторитарным стилем лидерства, что проявлялось в желании все решения принимать самому и полностью контролировать рабочий процесс, противостоянием с профсоюзами, а также антисемитским мировоззрением. В результате этого компания к концу жизни промышленника была на грани банкротства.
«Время не любит, когда его тратят впустую»
«Всё можно сделать лучше, чем делалось до сих пор»
Сергей Михайлович Брин (род. 1973) – американский предприниматель и ученый в области вычислительной техники, информационных технологий и экономики. Разработчик и сооснователь поисковой системы Google и компании Google Inc. Выходец из СССР, ныне занимает 21 место в списке самых богатых людей планеты.
В целом ведущий скромный образ жизни и не являющийся публичной личностью, С. Брин известен как один из наиболее авторитетных мировых специалистов в области технологий поиска и IT. В данное время руководит специальными проектами в Google Inc. С. Брин выступает за защиту права на публичный доступ к информации, свободу и открытость в Интернете. Особую популярность у интернет-сообщества сыскал после того как выступил против радикальных программ борьбы с онлайн-пиратством, инициированных правительством США.
«Не важно, богатый или нет, я – счастлив, потому что я наслаждаюсь тем, что делаю. И это на самом деле главное богатство»
Стивен Пол Джобс (1955-2011) – американский предприниматель, разработчик и сооснователь компаний Apple, NeXT и анимационной компании Pixar. Возглавлял разработку программного обеспечения для iMac, iTunes, iPod, iPhone и iPad. По мнению многих журналистов Джобс – «отец цифровой революции».
Сегодня имя Стива Джобса является таким же успешным маркетинговым знаком, как и надкушенное яблоко. Биографии основателя Apple продаются многомиллионными тиражами, благодаря чему выигрывает и продукция компании. В этом, в некоторой мере, весь Джобс: успех его компании и продукции – заслуга не только качества, но и набора спланированных до мелочей действий в маркетинге, продажах, службе поддержки. Многие критиковали его за авторитарный стиль управления, агрессивные действия по отношению к конкурентам, стремление к тотальному контролю продукции даже после её реализации покупателю. Но не из-за этого ли «эпплмания» стала настоящим культурным веянием начала ХХI века?
«Инновация отличает лидера от догоняющего»
Лидерство в культуре
Не вдаваясь в философский диспут относительно влияния массовой культуры на цивилизационное развитие человечества, отметим тот факт, что именно лидеры в этой сферы чаще всего становятся предметом обожания и наследования, понятными и простыми, такими же, как и рядовой член общества. Причиной этому сама массовость понятия поп-культуры и ее доступность.
Энди Уорхол (1928-1987) – американский художник, продюсер, дизайнер, писатель, коллекционер, издатель журналов, кинорежиссёр, культовая персона в истории поп-арт-движения и современного искусства в целом. Уорхол второй в мире художник по объему продаж после Пабло Пикассо.
Влияние Э. Уорхола с его работами как гимном эпохе массового потребления имели огромное влияние на развитие культуры 60-х гг. и остаются такими по сей день. Многие модельеры и дизайнеры считают его заслуги перед миром моды просто титаническими. С именем художника прочно связаны такие понятия как богемный образ жизни и эпатаж. Несомненно, даже сегодня работы Уорхола не теряют своей популярности и остаются очень дорогими, а многие культурные деятели продолжают наследовать его стилю.
«Самое красивое в Токио — McDonald’s. Самое красивое в Стокгольме — McDonald’s. Самое красивое во Флоренции — McDonald’s. В Пекине и Москве пока нет ничего красивого»
Джон Уинстон Леннон (1940-1980) – британский рок-музыкант, певец, поэт, композитор, художник, писатель. Один из основателей и участник группы «The Beatles». Политический активист, проповедовал идеи равенства и братства людей, мира, свободы. Согласно исследованию ВВС занимает 8 строчку в рейтинге ве-личайших британцев за всю историю.
Дж. Леннон был одним из самых известных духовных лидеров и вдохновителей для молодежного движения хиппи, активным проповедником мирного разрешения любых существующих в мире конфликтов. Большое количество молодых музыкантов восхищались его талантом и деятельностью. Леннон за вклад в мировую культуру и общественную деятельность был удостоен Ордена Британской империи. Творчество группы, а также сольная карьера оказали огромное влияние на развитие культуры ХХ века, а песни справедливо занимают места в списке лучших произведений из числа когда-либо написанных.
«Жизнь – это то, что происходит с тобой, пока ты оживлённо строишь другие планы»
Майкл Джозеф Джексон (1958-2009) – американский артист, автор и исполнитель песен, танцор, композитор, хореограф, филантроп, предприниматель. Cамый успешный исполнитель в истории поп-музыки, обладатель 15 премий Грэмми и сотен других. 25 раз занесён в Книгу рекордов Гиннесса; в мире продано порядка миллиарда копий альбомов Джексона.
М. Джексон человек, который вознес музыкальную индустрию и хореографические постановки на качественно новый уровень. Число поклонников его таланта измеряется миллионами людей со всего мира. Без преувеличения, этот человек – одна из самых значимых личностей поп-культуры нашего времени, который своей жизнью и творчеством во многом определил ее развитие.
«У тебя может быть величайший в мире талант, но если не будешь готовиться и работать по плану, всё пойдет прахом»
Спортивные лидеры
Спорт – одна из сфер массовой культуры. Чтоб достичь успеха в этой области, нужно обладать талантом, выделяться физическими или умственными способностями, но нередки случаи, когда успеха достигали и те, кто упорно шел к цели путем изнуряющих тренировок и полной самоотдачи. Это делает спорт предметом идеализации, ведь он знает больше всего примеров, когда мальчишка из бразильских трущоб или выходец из семьи неблагополучных африканских эмигрантов достигал вершин, становясь кумиром для миллионов таких же детей во все мире.
Эдсон Арантис ду Насименту (более известен как Пеле) (род. 1940) – бразильский футболист, предприниматель, футбольный функционер. Участник четырёх чемпионатов мира по футболу, 3 из которых Бразилия выиграла. Лучший футболист XX века по версии футбольной Комиссии ФИФА, лучший спортсмен XX века по версии Международного Олимпийского комитета. Является одним из 100 наиболее влиятельных людей мира по версии журнала Time.
История успеха футболиста Пеле наиболее точно подходит под заглавное описание мальчишки из трущоб. Многие достижения бразильца остаются уникальными до сегодня, его имя знают практически все дети, гоняющие во дворе мяч. Для почитателей его гения пример Пеле это не только образец одного из величайших игроков в футбол, но и успешного бизнесмена, общественного деятеля, превратившего детское увлечение в дело жизни.
«Успех не случайность. Это тяжелая работа, настойчивость, обучение, изучение, жертвоприношение и прежде всего, любовь, к тому, что вы делаете или учитесь делать»
Майкл Джеффри Джордан (род. 1963) – известный американский баскетболист, атакующий защитник. Один из лучших баскетболистов мира на этой позиции. Многократный победитель чемпионата НБА, двукратный чемпион Олимпийских игр. Сегодня владеет БК «Charlotte Bobcats». Специально для М. Джордана «Nike» разработала марку обуви «Air Jordan», которая сегодня популярна во всем мире.
Согласно исследованиям, опубликованным в статье под названием «Эффект Джордана» в журнале Fortune, экономическое влияние бренда под названием «Майкл Джордан» было оценено в $ 8 миллиардов. М. Джордан – культовая фигура для баскетбола, американских и мировых почитателей этой игры. Именно он сыграл огромную роль в популяризации этого вида спорта.
«Границы, так же как и страхи, чаще всего оказываются просто иллюзиями»
Мохаммед Али (Кассиус Марcеллус Клей) (род. 1942) – американский про-фессиональный боксёр-тяжеловес, один из самых известных и узнаваемых боксёров в истории мирового бокса. Спортивная персона века по версии ВВС, посол доброй воли ЮНИСЕФ, благотворительный деятель, отличный оратор.
Один из самых известных боксеров «золотой эры бокса», Мохаммед Али является примером того, как талантливый человек, даже потеряв все, продолжая упорно над собой работать, снова достигает вершины. Три его боя с Джо Фрейзером входят в число лучших боксерских поединков всех времен и, без сомнения, известны всем почитателям этого вида спорта. Даже после окончания карьеры, Мохаммед Али остался одним из самых узнаваемых спортсменов ХХ века, о нем написано множество книг, газетных и журнальных статей, снято больше десятка фильмов.
«Всё время переживать из-за прошлых ошибок – самая грубая ошибка»
Военные лидеры
Сегодня благодаря стремительному развитию технологий, в том числе военных, места для военного гения в истории осталось не так и много. Но еще столетие назад от полководцев и военачальников порой зависели судьбы отдельных государств и мира в целом.
Александр III Великий Македонский (356-323 гг. до н. э.) – македонский царь с 336 до н. э. из династии Аргеадов, полководец, создатель мировой державы. Учился у Аристотеля философии, политике, этике, литературе. Уже в античности за Александром закрепилась слава одного из величайших полководцев в истории.
Александр Македонский, чей военный и дипломатический таланты не вызывают со-мнения, был прирожденным лидером. Недаром молодой правитель снискал любовь среди своих солдат и уважение среди врагов в столь юном возрасте (умер в 32 года): он всегда держался просто, отвергал роскошь и предпочитал терпеть те же неудобства в многочисленных походах, что и его войска, не нападал ночью, был честен в переговорах. Эти черты – сборный образ любимых всеми нами в детстве персонажей книг и фильмов, героев, идеализированных в мировой культуре.
«Филиппу я обязан тем, что живу, а Аристотелю тем, что живу достойно»
Наполеон I Бонапарт (1769-1821) – император Франции в 1804-1815 гг., великий полководец и государственный деятель, военный теоретик, мыслитель. Первым выделил артиллерию в отдельный род войск, стал применять артподготовку.
Отдельные битвы, выигранные Наполеоном, вошли в учебники по военному делу как образцы искусства ведения боевых действий. Император намного опередил своих современников во взглядах на тактику и стратегию войны, управление государством. Сама его жизнь – свидетельство того, как можно воспитать в себе лидера, сделав это задачей жизни. Не будучи высокого происхождения, не выделяясь среди сверстников по военной школе особыми талантами, Наполеон стал одной из немногих культовых личностей в мировой истории благодаря постоян-ному саморазвитию, небывалому трудолюбию и неординарному мышлению.
«Лидер – это торговец надеждой»
Павел Степанович Нахимов (1802-1855) – русский флотоводец, адмирал. Совершил кругосветное плавание в команде М. П. Лазарева. Разбил турецкий флот в Синопском сражении во время Крымской войны. Кавалер многих наград и орденов.
Лидерские качества и навыки П. С. Нахимова наиболее полно проявились во время руководства им обороной Севастополя. Он лично объезжал передовые позиции, благодаря чему имел величайшее нравственное влияние на солдат и матросов, а также гражданское население, мобилизованное на защиту города. Талант руководителя, умноженный на энергичность и умение к каждому находить подход, сделали Нахимова «отцом-благодетелем» для подчиненных.
«Из трех способов действовать на подчиненных: наградами, страхом и примером – последний есть вернейший»
Отзывы, комментарии и предложения
Приведенный выше список выдающихся лидеров из разных областей – лишь малая часть материала в данном направлении. Вы можете высказать свое мнение или написать о личности, которая является примером для вас, воспользовавшись формой ниже.
Сергей Крутькопримеров характеризации: 5 способов выявить персонажей
Характеризация – как сделать вымышленного персонажа похожим на настоящего, живого, дышащего человека – непросто. Помимо физического описания персонажей, вам необходимо передать их мотивы, цели, характеры и недостатки, чтобы персонажи стали действительно трехмерными. Вот 5 примеров характеристик, которые показывают, как раскрыть жизненно важные качества ваших персонажей:
1: Изучите богатые примеры прямой характеристики
В художественной литературе есть два основных типа характеристик.Когда автор описывает персонажа читателю явно, через рассказчика или глазами другого персонажа, это называется прямой характеристикой .
Этот тип повествования сообщает нам точную информацию, например, как выглядит персонаж или как он видит мир. Вот богатый пример из книги Габриэля Гарсиа Маркеса « Любовь во время холеры » (1985), описание стареющей Фермины Даса:
‘Ее стильный наряд казался неуместным для почтенной бабушки, но он подходил к ее фигуре – длиннокостная, все еще стройная и прямая, упругие руки без единой возрастной отметки, стально-голубые волосы стрижены косо на щеке. .Ее ясные миндалевидные глаза и врожденное высокомерие – вот все, что осталось от свадебного портрета, но то, чего она была лишена возрастом, она с лихвой компенсировала характером и трудолюбием »(стр. 25-26)
Маркес прямо рассказывает нам как о внешности Фермины, так и о ее характере (ее «врожденном высокомерие» и «трудолюбии»). Описание прямое и ясное, не позволяя сделать вывод.
2: Используйте более тонкое косвенное изображение персонажей
Второй тип называется косвенной характеристикой , потому что он неявный ( показывает , а не говорит ).Мы понимаем персонажа через действия, ответы и реплики диалога. Автор не говорит, что «Том был очень злым человеком», но показывает, что гнев Тома в самом разгаре.
В рассказе Алисы Манро «Измерения», собранном в книге Too Much Happiness (2009), автор использует тонкую косвенную характеристику. Дори, главная героиня, работает горничной в отеле. На первых страницах Манро характеризует Дори глазами ее коллег:
«Они сказали ей, что она должна пройти обучение для работы за столом, пока она еще молода и прилично выглядит.Но она была довольна тем, что сделала. Она не хотела разговаривать с людьми »(стр.1)
Эта косвенная характеристика показывает, что Дори охраняется. Позже мы узнаем, что Дори была замужем с детьми, но ее муж убил их, полагая, что Дори уехала навсегда, когда она покинула их дом в разгар жаркого спора.
Манро тонко использует косвенное построение персонажей на протяжении всей истории, поскольку Дори вспоминает нарастание убийства. Манро демонстрирует контролирующее, ревнивое и угрожающее поведение Ллойда через диалог:
Он хотел знать, о чем они говорили, она и Мэгги.
«Не знаю. Не важно.”
«Это забавно. Две женщины едут в машине. Я впервые об этом услышал. Две женщины
ни о чем не говорят. Она хочет нас разлучить ».
«Кто? Мэгги? «
« Я знаю женщину такого же типа ».
«Какие?»
«Она такая».
«Не говори глупостей».
«Осторожно. Не называй меня глупым. (стр.12)
Вместо того, чтобы сказать «Ллойд был опасно ревнивым и агрессивным», Манро показывает это своими словами. Это имеет более тонкий эффект, позволяя нам интерпретировать и связывать слова и поступки персонажей самостоятельно.
Создавайте интригующих персонажей
Создавайте подробные профили персонажей, назначайте аватары и наблюдайте за развитием вашей истории.
НАЧАТЬ СЕЙЧАС3: Использование диалогов для раскрытия личностей и интересов персонажей
Диалог содержит множество элементов, которые помогают характеризовать. Вы можете показать, что движет вашими персонажами:
- Содержание диалога – о чем говорят персонажи и как они это говорят
- Жесты и язык тела (например, персонаж, который слегка касается чьего-либо плеча, демонстрирует знакомство и непринужденность, в отличие от осторожного сигнала разговора со скрещенными руками )
В романе Зэди Смит « Белые зубы » (2000) автор создает красочный персонаж Гортензию Боуден, набожную ямайку, живущую в Лондоне.Смит раскрывает смелый характер Гортензии, а также ее контролирующий подход к воспитанию своей дочери Клары в диалоге:
‘Если Гортензия Боуден увидела свою дочь, задумчиво сидящую у зарешеченного окна и слушающую удаляющийся шум двигателя, в то время как страницы Новой Библии перелистывались на ветру, она вскинула голову и поблагодарила ее. помните, что только 144 000 Свидетелей Иеговы будут сидеть в суде Господа в Судный День.
[…]
«Некоторые люди, – фыркнув, заявила Гортензия, – совершили такую кучу грехов, это конец года, чтобы они строили глаза Иегове». Чтобы быть ближе к Иегове, нужно приложить усилия. Это требует преданности и преданности делу. Блаженны чистые сердцем, ибо только они увидят Бога. Матфея 5: 8 ″. ’(Стр. 30)
Через диалог Смит передает степень и крайность благочестия Гортензии. Акцент Гортензии добавляет дополнительную характеристику, показывая, что персонаж по-прежнему близок к своим ямайским корням, несмотря на изменение географии.
Благодаря такому типу характеризации на основе диалогов мы приходим к «познанию» персонажа. Мы уже чувствуем, что у Гортензии есть еще библейские цитаты и еще больше браней в адрес Клары.
4: Показать персонажей через их действия
Не только то, что персонаж явно думает или говорит, формирует наше представление о нем. Это также элементы действия, от таких мелких деталей, как язык тела, до более масштабных действий.
Вот, например, в книге Тони Моррисон Jazz (1992) она показывает парикмахера Вайолет как перегруженную, но находчивую женщину, описывая ее бесконечный поток ежедневных задач:
«Когда приходит покупатель, и Вайолет намазывает мыльной пеной тонкие седые волосы, бормоча« Ха, милосердие »в подходящих перерывах в потоке откровений старушки, Вайолет восстанавливает шнур, которым дверца печи крепится к петле, и репетирует просьбу месяца еще три дня арендодателю.»(Стр. 16)
Эти небольшие действия говорят о многом, демонстрируя трудолюбивый и дальновидный характер Вайолет. Действия маленьких персонажей, подобные этим, могут не иметь прямого отношения к основным сюжетным точкам романа. Однако эта косвенная характеристика дает нам контекст для других, более важных действий персонажей. Зная, что Вайолет планирует свое следующее действие, даже когда занята последним, мы можем предположить, например, что она будет ориентирована на действия в других ситуациях, таких как конфликт.
5: Покажите читателям самые сокровенные мысли своих персонажей
Показ читателям мыслей ваших персонажей дает полезное представление об их личностях, желаниях и целях. Вы можете, например, противоречить тому, что говорит персонаж, его личными, рассказанными мыслями, чтобы показать лживую или двуличную личность.
Писательница-модернист Вирджиния Вульф превосходно показывает психологию своих персонажей. Стиль повествования, называемый «поток сознания», позволяет ей время от времени показывать мимолетные ассоциации своих персонажей.
Здесь, например, Кларисса Дэллоуэй, главная героиня сериала Миссис Дэллоуэй (1925), вспоминает Питера Уолша, человека, который отказался выйти замуж. Повествование от третьего лица явно следует личным мыслям Клариссы:
«Ибо они могут быть разлучены на сотни лет, она и Петр; она никогда не писала письма, а у него были сухие палочки; но внезапно это нахлынуло на нее, если бы он был со мной сейчас, что бы он сказал? – иногда какие-то зрелища возвращают его к ней спокойно, без былой горечи; что, возможно, было наградой за заботу о людях; они вернулись в середине Санкт-Петербурга.Джеймс Парк в прекрасное утро – действительно, они сделали. »(Стр. 4)
Через эту личную мысль и воспоминания мы видим, как персонаж учился и рос. Вульф показывает нам, насколько глубоко Кларисса формирует привязанность к другим, а также ее саморефлексивный характер.
В заключение, объедините прямую и косвенную характеристику. Используйте диалоги, действия и мысли персонажей, потому что это создаст более богатые и подробные портреты персонажей в ваших текстах.
Присоединяйтесь к новелле сейчас, чтобы обсудить детали персонажей с помощью Поиска идей или получить полезные отзывы о ваших характеристиках от сообщества Now Novel.
Характеристика стандартизированного отбора проб дыхания для автономного использования в полевых условиях
Анализ выдыхаемого воздуха традиционно выполняется с помощью двух механизмов: онлайн-анализ с помощью масс-спектрометрии с реакцией переноса протона (PTR-MS) или масс-спектрометрии с протонной трубкой (SIFT- MS), который обеспечивает анализ летучих веществ в реальном времени без предварительного концентрирования. Однако эти методы трудны для полевого или клинического применения, так как требуют специального оборудования на месте сбора.И наоборот, автономный анализ, сбор выдыхаемого воздуха в контейнере, таком как мешок, и последующий перенос летучих веществ в адсорбирующую трубку для концентрации и хранения более удобны для сбора проб в полевых условиях или за ее пределами с более поздним переносом в аналитическую лабораторию. лаборатория.
Мешки для выдыхаемого воздуха, такие как ALTEF или Tedlar, продолжают доминировать в области исследований выдыхаемого воздуха в автономном режиме. Однако мешки представляют собой несколько источников изменчивости [1–7]. Например, мешки с выдыхаемым дыханием зависят от соблюдения субъектом протокола выдоха для сбора данных о выдыхаемом дыхании [8].Кроме того, было показано, что мешки для дыхания «негерметичны» и требуют дополнительного насоса для переноса летучих из мешка в адсорбирующую трубку [7]. В результате мешки для выдыхаемого воздуха могут давать нерегулярные пробы выдыхаемого воздуха, если не принять меры. Чтобы уменьшить источники вариабельности, наблюдаемые с образцами выдыхаемого воздуха из мешка, был разработан респираторный коллектор для анализа in vitro (ReCIVA) для сбора выдыхаемого воздуха в автономном режиме.
ReCIVA был разработан для последовательного сбора выдыхаемого воздуха непосредственно в пробирки для термодесорбции (TD) для последующего автономного анализа с помощью газовой хроматографии-масс-спектрометрии (GG-MS).Используя силиконовую маску для лица, выдыхаемый CO 2 отслеживается в режиме реального времени на предмет активации насоса для проб и динамического отбора проб выдыхаемого воздуха. Мониторинг в реальном времени позволяет выполнять разносторонний отбор проб из различных частей выдыхаемого воздуха, таких как нижние дыхательные пути, верхние дыхательные пути, весь выдох и т. Д. Кроме того, два отдельных банка насосов в ReCIVA позволяют собирать до четырех дублирующих образцов дыхательных путей, например пробы всех нижних дыхательных путей или нижних и верхних дыхательных путей. Функции, связанные с пробоотборником ReCIVA, предназначены для уменьшения вариабельности, связанной с образцами выдыхаемого воздуха, обеспечивая при этом оптимальную универсальность для исследователя.
Хотя ReCIVA представляет собой значительный шаг к последовательному отбору проб выдыхаемого воздуха, денежные требования для ReCIVA велики по сравнению с мешками выдыхаемого воздуха. Например, необходимы значительные инвестиции в само устройство и связанные с ним расходные материалы (одноразовые маски), предположительно, удерживая его от широкого использования во многих лабораториях. В результате остается много вопросов, связанных с пробоотборником ReCIVA.
Первоначальная работа с использованием ReCIVA, выполненная Дораном и др. , предоставила доказательства для рекомендуемых параметров отбора проб, таких как фракция дыхания, объем пробы и скорость сбора, а также наблюдение потенциальных фоновых загрязнителей [9].Это исследование является отправной точкой для дальнейших исследований пробоотборника ReCIVA для исследовательского использования, таких как снижение фона, эффективность различных адсорбционных трубок, повторное использование масок ReCIVA, сравнение результатов с мешками для выдыхаемого воздуха и возможность создания дубликатов пробирок из ReCIVA. банки.
В этой рукописи будут рассмотрены некоторые дополнительные вопросы, связанные с ReCIVA. Используя выдыхаемый изопрен (2-метил-1,3-бутадиен) в качестве репрезентативного анализируемого вещества, пробирки Tenax TA и Tenax / Carbograph 5TD (5TD) были оценены на предмет согласованности отбора проб с использованием устройства ReCIVA и мешков для выдыхаемого воздуха.Представленные здесь данные подтверждают дополнительные исследования использования пробоотборника ReCIVA для автономных исследований выдыхаемого воздуха.
Участники
Все добровольцы-участники (n = 12 в эксперименте, всего 19 участников) для экспериментов были здоровыми мужчинами, некурящими в пределах нашего исследовательского центра. Идеально для использования одних и тех же 12 участников для всех экспериментов, из-за ограниченной доступности пришлось использовать 19 участников. Поскольку цель этого исследования заключалась в оценке платформ для отбора проб, а не в увязке летучих профилей с физиологическими параметрами, институциональный наблюдательный совет исследовательской лаборатории ВВС США посчитал это исследование использованием не для человека (FWR20170161N).Таким образом, участники были проинформированы о процедуре и могли отказаться от нее в любое время, но письменного согласия не требовалось.
Все добровольцы воздерживались от еды и питья, за исключением воды, более чем за час до участия в экспериментах. Перед входом в лабораторию все участники ненадолго прополоскали рот фильтрованной водой (Брита, Окленд, Калифорния, США). Добровольцы сидели прямо в расслабленном положении более пяти минут до того, как набрать выдыхаемый воздух.При всех сборах дыхания участники оставались в расслабленном вертикальном положении сидя [10].
Пробирки для термодесорбции
Все образцы собирали на предварительно обработанных пробирках для термодесорбции Tenax TA (35/60 меш) из нержавеющей стали или Tenax / Carbograph 5TD (Markes International, Южный Уэльс, Великобритания). Предварительное кондиционирование выполняли на Markes International TC-20 с потоком азота не менее 85 мл -1 (99,999%) при 320 ° C в течение 1 ч, как рекомендовано производителем. Все пробирки закрывали латунными колпачками, снабженными наконечником из политетрафторэтилена, и хранили при температуре окружающей среды до использования.
План эксперимента и сбор выдыхаемого воздуха: тест 1
Тест 1 был выполнен с использованием контрольного программного обеспечения ReCIVA v. 1.30 и новейших масок ReCIVA (маски изготовлены в июне 2017 г., Owlstone Medical, Кембридж, Великобритания). Пожалуйста, обратитесь к дополнительным данным 1 (доступны в Интернете по адресу stacks.iop.org/JBR/14/016009/mmedia) для краткого описания экспериментального плана. Двенадцати участникам случайным образом был назначен тип адсорбирующей трубки; шесть участников Tenax TA и шесть участников 5TD для сбора выдыхаемого воздуха.Для участников, отнесенных к группе адсорбционных трубок Tenax TA, выдыхаемый воздух собирался с помощью двух отдельных механизмов, мешков с выдыхаемым дыханием и пробоотборника ReCIVA, в то время как участники, отнесенные к группе трубок 5TD, выполняли сбор только с устройства ReCIVA. Для группы Tenax TA, непосредственно до и после использования устройства ReCIVA, дыхательные мешки ALTEF объемом 1 л, прикрепленные к мундштуку, были заполнены в конце выдоха с использованием нашего установленного протокола выдоха [11–13]. Вкратце, добровольцев проинструктировали сделать вдох, выдохнуть до точки, при которой они обычно сделали бы еще один вдох, а их живот был напряженным (дыхательный объем легких), и заполнить мешок оставшимся вдохом в легких (функциональная остаточная емкость).Выдыхаемый воздух (550 мл) немедленно адсорбировался на термодесорбционные трубки при 200 мл мин. -1 , такая же скорость потока, как на устройстве ReCIVA, с использованием насоса Gilian GilAir Plus (Sensidyne LP, Санкт-Петербург, Флорида, США). . Скорость потока, нагнетаемая насосом GilAIR, проверялась перед переносом дыхания каждого добровольца из мешка с использованием неанализированной трубки Tenax TA TD и монитора скорости потока DryCal Bios Defender 510, поскольку исторически насос отклоняется от заданного значения с течением времени (Mesa Labs, Лейквуд, Колорадо, США).Пожалуйста, обратитесь к дополнительным данным 2, где представлена схема установки для проверки скорости потока GilAir Plus, измеренных скоростей потока насоса GilAir и расчетного времени отбора проб для передачи 550 мл выдыхаемого воздуха на трубку адсорбента через насос GilAir. . Процент CO 2 для каждого дыхательного мешка был определен с помощью насоса MultiRAE Lite, а процент выдыхаемого CO 2 , измеренный из каждого выдыхаемого мешка для дыхания, предоставлен в дополнительных данных 2 (B) (RAE Systems, Сан-Хосе, Калифорния , СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ АМЕРИКИ).
Между дыхательными мешками были собраны дублированные образцы дыхания, один в ReCIVA Bank A и один в ReCIVA Bank B, были собраны с использованием нового устройства ReCIVA (Owlstone Medical). ReCIVA был настроен для двух сборов пробирок путем размещения двух чистых 3,5-дюймовых твердых стержней из нержавеющей стали × 0,25 дюйма в положениях проксимальнее рта участника и термодесорбционных трубок в дистальных положениях, как рекомендовано производителем. Пожалуйста, обратитесь к дополнительным данным 3 (A) для схемы установки отбора проб.Воздух для дыхания медицинского класса подавался в маску со скоростью 40 л мин -1 с использованием контроллера массового расхода Alicat Scientific MCP-100 SLPM и контролировался вручную на протяжении всего эксперимента с помощью программного обеспечения FlowVision SC v. 1.3.28.0 (AirGas, Radnor, PA , США, Alicat Scientific, Тускон, Аризона, США). Пожалуйста, обратитесь к дополнительным данным 3 (B) для иллюстрации общей настройки ReCIVA. Маска была прикреплена к участнику с помощью головных ремней, поставляемых с ReCIVA, и отрегулирована до удобного положения. Управляющее программное обеспечение ReCIVA (v.1.30, Owlstone Medical) был настроен для сбора 550 мл выдыхаемого воздуха из нижних дыхательных путей в две пробирки TD по 200 мл минимум -1 каждая. Остальные настройки ReCIVA были рекомендованы производителем устройства и представлены в дополнительных данных 4 (A). Перед сбором выдыхаемого воздуха ReCIVA участников проинструктировали дышать только через рот, делая обычные медленные вдохи. Участники, случайно отнесенные к группе адсорбентных трубок 5TD, участвовали только в сборах выдыхаемого воздуха ReCIVA, как описано выше, с использованием дубликатов пробирок 5TD, по одной трубке в каждом банке, расположенной дистальнее рта, в устройстве ReCIVA (дополнительные данные 3 (A)) .Пожалуйста, обратитесь к дополнительным данным 5 для получения сводной информации о группах участников и количестве образцов выдыхаемого воздуха, полученных от каждого участника. Все пробирки TD хранили при 4 ° C до анализа и прогона на оборудовании TD-GC-MS в тот же день [12].
Все маски ReCIVA, использованные во время Эксперимента 1, собирали выдыхаемый воздух (день 0) для удаления фонового загрязнения силоксаном этиловым спиртом, как описано ниже. Силоксановый фон маски и остаточный этанол оценивали с использованием стеклянной головки на 4-й день, как описано в следующем разделе.Пожалуйста, обратитесь к дополнительным данным 1 для краткого описания экспериментального плана Теста 1.
Сбор контрольных и фоновых проб
Контрольные пробы из помещения были собраны путем пропускания 550 мл комнатного воздуха лаборатории через пробирки TD с помощью насоса GilAir Plus (200 мл мин -1 , дополнительные данные 2 (C)). Фоновые образцы были собраны из воздуха для дыхания медицинского класса путем наполнения мешков ALTEF объемом 1 л воздухом и загрузки 550 мл через насос GilAir в пробирки TD, как описано выше (дополнительные данные 2 (C)).Фоновые образцы маски ReCIVA были собраны с использованием совершенно новой маски, надежно прикрепленной к чистой стеклянной головке, в которую подавалось 40 л мин. -1 воздуха медицинского качества. См. Дополнительные данные 4 (B) для рисунка, иллюстрирующего настройку сбора фона маски. Воздух внутри маски (550 мл) собирали из банка А с использованием функции «Всегда включен» программного обеспечения ReCIVA, как описано Дораном и др. (MVAP Medical Supplies, Ньюбери Парк, Калифорния, США, дополнительные данные 4 (C) ) [9]. Все контрольные и фоновые термодесорбционные пробирки были проанализированы методом TD-GC-MS в тот же день, что и сбор [12].
Измерения скорости потока ReCIVA
Скорость потока для каждого типа адсорбентной трубки (Tenax TA и 5TD) и банка (A и B дистальнее рта) измеряли индивидуально, помещая чистые твердые стержни из нержавеющей стали в три из четырех пробоотборников. порты ReCIVA (два проксимальных и один дистальный по отношению к стеклянной головке). В оставшийся порт добавляли чистую восстановленную трубку адсорбента, Tenax TA или 5TD, и отслеживали поток с открытого конца трубки TD, подключенной к DryCal Defender через отверстие, вырезанное в маске ReCIVA.Пожалуйста, обратитесь к дополнительным данным 4 (D) для рисунка, изображающего установку для измерения расхода ReCIVA. Каждый банк был протестирован индивидуально (n = 5 на банк для каждого типа пробирки TD) при 200 мл мин. -1 с использованием настроек ReCIVA ‘Always On’, приведенных в дополнительных данных 4 (C), для коллекции 1420 мл (приблизительно 100 измерений ). Измеренные скорости потока собирали непрерывно с помощью программного обеспечения DryCal Pro (версия 1.3, Mesa Labs).
План эксперимента и сбор выдыхаемого воздуха: тест 2
Тест 2 был выполнен точно так же, как описано выше для теста 1.Тем не менее, Тест 2 был приобретен с обновленным управляющим программным обеспечением ReCIVA (версия 1.46) и новыми масками ReCIVA (маски, произведенные в марте 2018 г., Owlstone Medical). Пожалуйста, обратитесь к дополнительным данным 1 для краткого описания экспериментального плана Теста 2. Все маски, использованные во время сбора выдыхаемого воздуха ReCIVA для Теста 2, были сохранены для удаления фонового загрязнения силоксаном путем запекания, как описано ниже. Маски оценивали на удаление силоксана с использованием стеклянной головки, как описано ранее для фоновых образцов маски ReCIVA.Дополнительные данные 5 представляют собой сводку групп и образцов, взятых у каждого участника из теста 2. Все термодесорбционные трубки были запущены на оборудовании TD-GC-MS в тот же день, что и сбор [12].
Оценка удаления фонового загрязнения и очистки
Удаление фонового загрязнения силоксаном проводилось двумя отдельными методами. Во-первых, маски, оставшиеся после испытания 1 с использованием устройства ReCIVA (n = 12), немедленно подвергали процедуре промывки этанолом (дополнительные данные 6).Вкратце, маски и фильтры полностью погружали дважды (60 мин и 45 мин) в 100% этиловый спирт, меняя растворитель для каждой промывки (Decon Laboratories, Пруссия, Пенсильвания, США) [14, 15]. Объемный растворитель удаляли домашним сжатым воздухом. Оставшийся растворитель удаляли помещением в вакуум примерно на три дня (Labconco, Канзас-Сити, Миссури, США). Маски были повторно оценены на предмет удаления фоновых силоксанов и остаточного растворителя, как описано выше, для фоновых образцов маски ReCIVA через четыре дня после первоначального сбора (дополнительные данные 1, 4 (B) и 4 (C)).Образцы для оценки очистки были проанализированы с помощью TD-GC-MS, как описано в следующем разделе, в тот же день, что и сбор [12].
Во-вторых, маски, сохраненные из теста 2 с использованием устройства ReCIVA (n = 12), были подвергнуты протоколу запекания масок (дополнительные данные 6). фильтры были удалены из оставленных масок после сбора выдыхаемого воздуха ReCIVA, и силиконовая часть масок была запечена при 200 ° C в течение примерно 68 часов. Маски охлаждали до комнатной температуры и снова вставляли фильтры.Повторно собранные маски оценивали на предмет удаления фонового загрязнения силоксаном, как описано выше для фоновых образцов масок ReCIVA (дополнительные данные 1, 4 (B) и 4 (C)). Пробирки TD помещали при 4 ° C до начала анализа TD-GC-MS в тот же день, что и сбор.
Ручная калибровка расхода ReCIVA
Расходы ReCIVA были откалиброваны для каждого типа пробирки TD и банка ReCIVA путем регулировки расхода в программном обеспечении ReCIVA (версия 1.46) до тех пор, пока не было измерено 200 мл мин. -1 на DryCal Защитник.Откалиброванные скорости потока были проверены (n = 5 на банк ReCIVA на тип пробирки TD) для коллекций объемом 1420 мл (приблизительно 100 отдельных измерений), как описано выше для измерений скорости потока ReCIVA. Для сборов выдыхаемого воздуха с использованием откалиброванных скоростей потока необходимо отрегулировать общий объем сбора на пробирку, чтобы получить объем 550 мл на каждой пробирке TD. Расчет и скорректированные объемы показаны в дополнительных данных 7.
План эксперимента и сбор выдыхаемого воздуха: тест 3
Тест 3 был выполнен, как описано выше для теста 1 и теста 2.Тем не менее, Тест 3 был проведен с использованием определенных калиброванных скоростей потока для каждого типа пробирки TD и банка ReCIVA с уменьшенными объемами сбора, как показано в дополнительных данных 7, контрольном программном обеспечении ReCIVA v. 1.46 и новых масках ReCIVA (маски, произведенные в марте 2018 г., Owlstone Medical). Пожалуйста, обратитесь к дополнительным данным 1 для краткого обзора экспериментального плана Теста 3 и дополнительным данным 4 (E), (F) для конкретных настроек Теста 3 ReCIVA. Все используемые маски ReCIVA были запечены, как описано выше, для удаления примесей силоксана перед сбором выдыхаемого воздуха.Группы участников и образцы выдыхаемого воздуха, собранные у каждого участника, представлены в дополнительных данных 5. Все образцы дыхания и контрольные образцы были проанализированы на приборах TD-GC-MS, как описано ниже, в день сбора [12].
Анализ TD-GC-MS
Вся термодесорбция проводилась на Markes International TD-100xr, прикрепленном к системе Trace Ultra-ISQ GC-MS (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA). Пробирки TD продували азотом (99,999%) в течение 1 мин при 20 мл мин. -1 перед начальной десорбцией, выполняемой при 310 ° C в течение 10 мин на холодной ловушке Markes International Air Toxics.Десорбцию ловушкой проводили при 315 ° C со скоростью нагрева 40 ° C с -1 в течение 5 мин. Ловушку продували в течение 1 мин при 50 мл мин -1 с температурой проточного тракта 180 ° C. Разделение на выходе ловушки составляло 5 мл мин. -1 (общее соотношение разделения 3,64: 1). Двадцать пять частей на миллион внутреннего стандарта 1,4-дифторбензола добавляли в каждую термодесорбционную трубку перед начальной десорбцией с помощью TD-100xr (Restek, Bellefonte, PA, USA). Хроматографические разделения проводились при постоянном потоке гелия 2 мл мин -1 (99.999%) на колонке для ГХ Rxi-624Sil 60 m × 0,32 мм ID × 1,80 μ m df (Restek). Градиент ГХ проводили с выдержкой при 40 ° C в течение 1 мин, затем линейным увеличением при 10 ° C мин. -1 до 240 ° C в течение 20 мин. Температуру поддерживали на уровне 240 ° C в течение дополнительных 20 минут. Ионы генерировались ионизацией электронным ударом 70 эВ при температуре 275 ° C. Детектирование одиночного квадраполя проводилось в диапазоне 35–300 m / z с 0,154 сканированием с −1 . Все данные были получены в случайном порядке с помощью программного обеспечения TraceFinder EFS (v.3.2, Thermo Scientific). Неизвестные силоксаны были предварительно идентифицированы путем сравнения спектров с библиотекой масс-спектров NIST 11 (версия 2.0, Национальный институт стандартов и технологий, Гейтерсбург, Мэриленд). Данные ГХ-МС визуализировали и проверяли вручную с помощью программного пакета Xcalibur (версия 3.0.63, Thermo Scientific).
Калибровка и количественное определение изопрена (2-метил-1,3-бутадиен)
Калибровочные кривые были построены для изопрена для каждого тестового эксперимента из пользовательского 0.Баллон со сжатым газом изопрена 99 ppm для испытаний 1 и 2 и 1,10 ppm для испытания 3 (Linde Gas North America LLC, Альфа, Нью-Джерси, США, Scott Medical Products, Пламстедвилль, Пенсильвания, США). Вкратце, кривая для Теста 1 находилась в диапазоне от 15,314 до 918,824 нг изопрена для Tenax TA и от 15,314 до 459,412 нг для пробирок 5TD. Для Теста 2 калибровочная кривая находилась в диапазоне от 0 нг до 918,824 нг изопрена для Tenax TA и от 0 нг до 1,071 мкг г для пробирок 5TD. Для Теста 3 калибровка охватывала диапазон от 0 нг до 1,071 мкМ г для Tenax TA и от 0 нг до 918.824 нг для пробирок 5TD. Калибровочные кривые были скорректированы так, чтобы охватить как линейный диапазон, так и значения изопрена на основании предварительного тестирования. Каждый стандарт индивидуально вносили в отдельные термодесорбционные пробирки с помощью газонепроницаемого шприца (Hamilton, Reno, NV, USA) и загрузочной установки Markes International Standard, дополненной потоком 60 мл -1 азота (99,999%) [16, 17 ]. Пробирки запускали, как описано выше. Площади пиков для изопрена (Q-ион m / z 67) и 1,4-дифторбензола (внутренний стандарт, Q-ион m / z 114) были табулированы с использованием программного обеспечения TraceFinder EFS.Рассчитывали нормализованное отношение отклика внутреннего стандарта (площадь изопрена / площадь внутреннего стандарта) и наносили на него график в зависимости от теоретической концентрации изопрена. Пожалуйста, обратитесь к дополнительным данным 8 для обзора калибровочных кривых каждой тестовой калибровки. Количество изопрена в каждой пробирке для образца рассчитывали путем ввода неизвестного нормированного содержания внутреннего стандарта изопрена в уравнение линейной аппроксимации для каждой калибровочной кривой. Рабочие характеристики прибора оценивались с использованием стандарта перед каждым анализом ГХ-МС на основании% разницы от калибровки, как указано в методе EPA TO-15/17 [18, 19].
Оценка времени продувки адсорбционной трубки и влияния влажности
Время продувки адсорбционной трубки оценивали двумя отдельными методами. Сначала в десять пробирок каждого типа адсорбента (Tenax TA или 5TD) добавляли 20 мл стандарта изопрена (61,25 нг), как описано выше для построения калибровочной кривой. Пробирки TD подвергали либо 15 мин (n = 5), либо 1 мин (n = 5) продувке азотом при 20 мл мин -1 на TD-100xr перед первичной десорбцией с последующей TD-GC- Анализ МС, как описано выше.Во-вторых, шесть участников выполнили сбор ReCIVA из 550 мл дыхательных путей из нижних дыхательных путей при 200 мл мин -1 (нескорректированная скорость потока) дважды в течение одного дня, как описано для теста 2. Каждый сбор проводился либо с Tenax TA, либо с 5TD. пробирки помещают в оба банка, A и B, в положениях, удаленных от рта, как описано ранее и изображено в дополнительных данных 3 (A). Каждый набор пробирок запускался либо с продувкой азотом в течение 1 минуты (образцы банка B), либо с продувкой азотом в течение 15 минут (образцы банка A) при 20 мл мин -1 перед первичной десорбцией в системе термодесорбции.Анализ ТД-ГХ-МС выполняли, как описано выше. Площади пиков, время удерживания и полная ширина на полувысоте (FWHM) пиков изопрена и 1,4-дифторбензола были сведены в таблицу с использованием программных пакетов TraceFinder EFS и Xcalibur.
Относительное количественное определение
Относительное количественное определение среди загрязняющих веществ было рассчитано путем сравнения нормализованных площадей загрязняющих веществ по внутреннему стандарту (внутренний стандарт: 1,4-дифторбензол, m / z 114, этиловый спирт (m / z 46), силоксановые загрязнители: RT 7,13 m / z 75, РТ 8.12 m / z 147, RT 10,82 m / z 207, RT 11,91 m / z 221, RT 13,89 m / z 281, RT 15,17 m / z 207 и RT 16,65 m / z 73). Площадь всех пиков определяли с помощью программного пакета TraceFinder EFS.
Статистический анализ
Базовый статистический анализ выполняли с использованием пакета программного обеспечения Prism GraphPad (версия 8.1.1 (224), Graphpad Software Inc., Ла-Джолла, Калифорния, США). Линейное смешанное моделирование проводилось в программном пакете R (v. 3.4) с использованием пакета LME [20]. Для учета корреляции среди повторяющихся лиц использовалось линейное смешанное моделирование.
Загрязнение силоксаном через устройство сбора ReCIVA: тест 1 и 2
Хотя цель этого исследования состояла в том, чтобы охарактеризовать свойства пробоотборника дыхания ReCIVA применительно к результатам выдыхаемого воздуха, ручная проверка исходных данных из теста ReCIVA 1 Коллекции выдыхаемого воздуха (контрольное программное обеспечение ReCIVA v. 1.30, маски изготовлены в июне 2017 г.) на обоих типах адсорбционных трубок обнаружили значительно большие площади (p <0,0001), за исключением загрязнения при RT 16,65 на трубках 5TD p = 0.7085 фоновых силоксанов в образцах, собранных на устройстве ReCIVA, по сравнению с контрольными образцами (рисунки 1 (A), (B)). Аналогичным образом, образцы выдыхаемого воздуха ReCIVA Test 2, собранные с помощью программного обеспечения ReCIVA v. 1.46 на масках ReCIVA, изготовленных в марте 2018 г., содержали значительно большие площади пиков загрязнения при RT 7,13 и RT 8,12 по сравнению с контрольными образцами на обоих протестированных типах пробирок TD (p <0,0001, цифры 1 (C), (D)). Поскольку это были два основных пика силоксана, обнаруженные в масках из Теста 2, p-значения были получены только для загрязнения при RT 7.13 и РТ 8.12. Эти данные свидетельствуют о снижении общего количества силоксановых фоновых пиков по мере того, как процесс изготовления маски со временем совершенствуется. Однако силоксановый фон все еще присутствует выше уровней контрольной пробы.
Увеличить Уменьшить Сбросить размер изображения
Рисунок 1. Сводка нормализованного содержания фоновых соединений по внутреннему стандарту, полученного в ходе теста ReCIVA Test 1 (ReCIVA Software v.1.30, маски изготовлены в июне 2017 г.) (A) Tenax TA (n = 6 за сеанс) и (B) 5TD (n = 6 за сеанс) и ReCIVA Test 2 (ReCIVA Software v.1.46, маски изготовлены в марте 2018 г.) (C) Термодесорбционные трубки Tenax TA (n = 6 за сеанс) и (D) 5TD (n = 6 за сеанс). Проценты означают% уменьшение силоксанового фона после очистки. Планки погрешностей представляют собой доверительный интервал 95%. Все p-значения между образцами оценки выдыхаемого воздуха и очищения равны p <0,05 по t-критерию Стьюдента.Данные показывают, что снижение уровня силоксанового фона может быть достигнуто с помощью промывки масок этанолом и нагревания масок при 200 ° C в течение примерно 68 часов.
Загрузить рисунок:
Стандартный образ Изображение высокого разрешенияЧтобы попытаться уменьшить наблюдаемое загрязнение силоксаном, маски были сохранены после сбора выдыхаемого воздуха каждым участником с помощью устройства ReCIVA и очищены двумя различными методами: промывкой этиловым спиртом (маски для теста 1) и запеканием (маски для теста 2), как указано в дополнительных данных. 6.Оценка фона после каждого протокола очистки проводилась с использованием стеклянной головки, как показано в дополнительных данных 4 (B). На рисунке 1 показано, что очистка может уменьшить площадь фонового пика силоксана с 78,4% до 99,9% с помощью промывки этанолом и с 58,8% до 100,0% путем запекания (% = 1- (нормализованная площадь оценки очистки / нормализованная площадь тестового выдыхаемого воздуха). в силоксановом фоне было получено протоколом промывки этиловым спиртом, увеличение более чем на 85% по сравнению с образцами выдыхаемого воздуха, остаточный этанол сохранялся в образцах для оценки очистки, что указывает на необходимость принятия дополнительных мер для использования этого метода для очистки (дополнительные данные 9 ).В совокупности эти результаты показывают, что протоколы очистки могут снизить загрязнение силоксаном, вызванное масками ReCIVA. Однако очистка масок запеканием предпочтительнее мытья этиловым спиртом из-за стойкости этанола в соответствии с протоколом очистки.
Сравнение выдыхаемого изопрена через банки ReCIVA
Преимуществом пробоотборника ReCIVA является возможность одновременно брать несколько образцов от одного участника. Чтобы проверить, можно ли получить дубликаты образцов нижних дыхательных путей через банки насосов ReCIVA (A и B) дистальнее рта участников, изопрен был определен количественно во всех образцах ReCIVA в обоих протестированных типах адсорбционных трубок, Tenax TA и 5TD, а также в трех отдельных тестовых коллекциях. .На рисунке 2 (A) показан график в виде квадратов и усов количественных значений изопрена в каждом тесте. Данные показывают, что присутствуют статистически схожие количества изопрена, банк A по сравнению с банком B, из теста 1, собранного с помощью контрольного программного обеспечения ReCIVA v. 1.30 (рисунок 2 (A) слева). Однако было обнаружено статистически значимое различие между тестируемыми типами пробирок TD, Tenax и пробирками 5TD, с использованием контрольного программного обеспечения ReCIVA v. 1.30. Была выдвинута гипотеза, что причина наблюдаемой разницы между типами трубок TD, обнаруженная во время Испытания 1, может быть результатом неправильной скорости потока, примененной к трубкам TD программным обеспечением устройства ReCIVA (v.1.30). Чтобы проверить эту гипотезу, были определены скорости потока примерно по 100 измерениям (1420 мл). На рисунке 2 (B) слева показано, что общий средний расход, независимо от типа трубки TD, применяемый устройством ReCIVA во время Теста 1 (программное обеспечение v.1.30), имеет статистически более низкий расход (p <0,0001), чем заданное значение 200 мл мин −1 . Кроме того, существует статистическая разница между измеренными средними расходами между банками A и B, причем банк B обеспечивает более высокую скорость потока, чем банк A, независимо от типа трубки TD, испытанной во время испытания 1 (рисунок 2 (B) слева).Разница в скорости потока между банками дополнительно подчеркивается во время Теста 1, в частности, на пробирках Tenax TA TD, путем нанесения на график значений дельта-изопрена между банками (банк B-A). Рисунок 2 (C) слева показывает, что существует значительная разница в изопрене, обнаруженном между банками (абсолютное значение дельты), при этом большее количество изопрена обнаруживается в пробирках, загруженных банком B, по сравнению с банком A (необработанная дельта) для пробирок Tenax, тогда как пробирки 5TD не показывают та же тенденция при линейном смешанном моделировании. Взятые вместе, эти результаты демонстрируют, что отклонения в скорости потока, обеспечиваемые устройством ReCIVA с использованием управляющего программного обеспечения v.1.30, может учитывать изменчивость измеренного изопрена во время Теста 1.
Увеличить Уменьшить Сбросить размер изображения
Рис. 2. (A) График количественного определения изопрена (нг), проанализированного с помощью банка насосов ReCIVA, типа адсорбционной трубки и теста ReCIVA (n = 6 на график для каждого теста). Усы обозначают мин. И макс. (B) График средней скорости потока, обеспечиваемой пробоотборником ReCIVA для отдельных пробирок TD (n = 5, на тип пробирки на банк).Измерения для испытаний 1 и 2, ReCIVA был установлен на 200 мл мин -1 . Измерения для Теста 3 представляют собой откалиброванные вручную скорости потока (Tenax A: 164 мл минимум -1 , Tenax B: 168 мл минимум -1 , 5TD A: 197 мл минимум -1 и 5TD 200 мл минимум −1 ), чтобы довести поток ReCIVA до 200 мл минимум −1 в целом. Пунктирная линия указывает заданный / целевой поток 200 мл мин. -1 , * указывает статистическое отличие от 200 мл мин. -1 заданное значение / целевое значение (p <0.05), а планки ошибок обозначают 95% доверительный интервал. (C) График дельты между банками (банк B-A, абсолютное значение и необработанная дельта) для изопрена среди тестов ReCIVA (n = 6 на график для каждого теста). Усы обозначают мин. И макс. Значимость определялась с помощью t-критерия Стьюдента, парного t-критерия и, при необходимости, с помощью линейного смешанного моделирования. Данные показывают, что статистически схожие значения изопрена могут быть получены среди банков и типов пробирок TD при использовании откалиброванных скоростей потока и обновленного управляющего программного обеспечения ReCIVA.Кроме того, откалиброванные скорости потока уменьшают смещение ReCIVA между банками для пробирок Tenax и 5TD.
Загрузить рисунок:
Стандартный образ Изображение высокого разрешенияВо время исследования данных Теста 1 с производителем ReCIVA, Owlstone Medical, связались по поводу результатов. Было предложено, чтобы обновление программного обеспечения с версии 1.30 до версии 1.46 уменьшило наблюдаемые различия в скорости потока. Для тестирования обновленного программного обеспечения был проведен второй тест, Test 2, с программным обеспечением ReCIVA v.1,46. На рисунке 2 (B) в центре показано, что скорость потока с обновленным программным обеспечением значительно отличается от заданного значения 200 мл мин -1 для обоих банков с пробирками Tenax TA (банк A: p = 0,0107, банк B: p = 0,0002). в то время как только банк A с трубками 5TD значительно отличается от заданного значения (банк A: p = 0,0148, банк B: p = 0,0754). Кроме того, банк B с программным обеспечением ReCIVA v. 1.46 имел значительно более высокую измеренную скорость потока, чем обнаруженный в банке A, независимо от типа тестируемой трубки TD, аналогично результатам, полученным во время теста 1 (рисунок 2 (B) слева и в центре ).Количественные значения изопрена на выдохе из Теста 2 показывают, что пробирки Tenax TA TD имеют значительную разницу в измерении изопрена между банками ReCIVA (p = 0,0091), в то время как 5TD нет (p = 0,8015, рис. 2 (A) в центре). Данные предполагают смещение для большего количества изопрена в банке B, что показано расчетными значениями дельта-изопрена в банке B-A, может быть очевидным на пробирках 5TD (p = 0,0026, рис. 2 (C) в центре). Сравнение двух типов пробирок TD из Теста 2 показывает незначительную разницу (p = 0,2321) в общих измеренных значениях изопрена (рис. 2 (A) в центре).В совокупности эти данные иллюстрируют обновление управляющего программного обеспечения ReCIVA с версии 1.30 до версии 1.46, улучшившее согласованность между двумя различными типами пробирок TD. Однако измеренные значения расхода остаются статистически несовместимыми с уставкой. Кроме того, количественные показатели выдыхаемого изопрена не дают аналогичных результатов для банков ReCIVA для пробирок Tenax TA TD.
Хотя в обновленном управляющем программном обеспечении ReCIVA (v. 1.46) улучшены некоторые характеристики скорости потока и количества изопрена, вариабельность и различия в скорости потока между банками ReCIVA сохраняются.Поскольку скорость потока, по-видимому, играла роль в наблюдаемых различиях между банками, была выдвинута гипотеза, что ручная калибровка скорости потока путем регулировки скорости потока в настройках программного обеспечения управления ReCIVA (v. 1.46) до измеренной скорости потока 200 мл мин. -1 , уменьшит различия между типами пробирок TD и банками ReCIVA. Чтобы проверить эту гипотезу, скорости потока в контрольном программном обеспечении ReCIVA (версия 1.46) были вручную скорректированы до измеренной скорости потока 200 мл мин -1 , в результате чего были откалиброваны скорости потока для каждого типа пробирок и группы (Tenax bank A: 180 мл минимум -1 , Tenax банк B: 182 мл минимум -1 , 5TD банк A: 197 мл минимум -1 и 5TD банк B: 200 мл минимум -1 , рисунок 2 (B) Правильно).Выдох, собранный с использованием этих скоростей потока насоса ReCIVA (Тест 3) и соответствующих уменьшенных объемов сбора (Tenax A: 495 мл, Tenax B: 501 мл, 5TD A: 542 мл и 5TD B: 550 мл, дополнительные данные 7), в результате в статистически схожих количествах изопрена в обоих банках ReCIVA независимо от типа пробирки TD (Tenax: p = 0,3869, 5TD: p = 0,3131, рисунок 2 (A) справа) без значимых значений дельта изопрена между банками (p> 0,05, рисунок 2 ( В) право). Кроме того, не было существенной разницы в измеренном выдыхаемом изопрене между двумя тестируемыми адсорбентными трубками (p = 0.3824, рисунок 2 (A) справа). В целом, данные, представленные на рисунке 2, показывают, что версия программного обеспечения управления ReCIVA играет важную роль в скорости сбора выдыхаемого воздуха. Кроме того, обновленное программное обеспечение с ручной калибровкой скорости потока ReCIVA для каждого банка ReCIVA и типа пробирки TD позволяет получать наиболее согласованные результаты с устройства ReCIVA.
Сравнение изопрена с помощью образцов мешков ReCIVA и ALTEF
Выдыхаемый воздух для анализа в автономном режиме чаще всего собирался в мешки, такие как Tedlar, ALTEF и т. Д., Для исследовательских целей.Чтобы определить, производит ли ReCIVA количество изопрена, аналогичное этому стандартному методу сбора, образцы выдыхаемого воздуха были собраны через полипропиленовые мешки ALTEF до и после сбора ReCIVA для каждого теста с использованием пробирок Tenax TA TD. На рис. 3 слева и в центре показано значительное уменьшение количества изопрена из пробоотборника ReCIVA по сравнению с подобранными мешками для выдыхаемого воздуха из Теста 1 (программное обеспечение ReCIVA v. 1.30) и Теста 2 (программное обеспечение ReCIVA v. 1.46). Однако данные, собранные с использованием откалиброванных скоростей потока на ReCIVA (Test 3 ReCIVA software v.1,46) не являются статистически значимыми из образцов мешков ALTEF (p = 0,1534, рисунок 3 справа). Эти данные дополнительно подчеркивают улучшение данных, собранных с помощью устройства ReCIVA с откалиброванными расходами. Кроме того, эти результаты предполагают, что образцы, собранные устройством ReCIVA, могут давать сравнимые количества изопрена, как в мешках для выдыхаемого воздуха.
Увеличить Уменьшить Сбросить размер изображения
Рисунок 3. График количественных значений изопрена в пробирках Tenax для всех трех тестов, собранных с помощью пробоотборника ReCIVA (n = 12 на участок) и из мешков выдыхаемого воздуха ALTEF (n = 12 на участок, по 1 до и после n = 6). Усы обозначают мин. И макс. p-значения были определены линейным смешанным моделированием. Результаты показывают, что калибровка скорости потока на устройстве ReCIVA позволяет получить статистически схожие результаты между пробоотборником ReCIVA и мешками для выдыхаемого воздуха ALTEF. * Указывает расчетные значения, поскольку количества были выше калибровочной кривой.
Загрузить рисунок:
Стандартный образ Изображение высокого разрешенияОценка времени продувки трубки TD по результатам выдыхаемого воздуха
В то время как трубки Tenax / Carbograph 5TD могут обеспечивать более широкий охват соединения (C 4 –C 30 ) по сравнению с другими трубками адсорбента, такими как Tenax TA (C 6 –C 30 ) адсорбент карбографа, содержащийся в пробирках 5TD, может вызывать эффекты, соответствующие воде или влажности, полученным во время отбора проб. Распространенным методом уменьшения воздействия воды на адсорбирующий материал TD является продолжительная сухая продувка перед первичной десорбцией газом высокой чистоты, таким как азот или гелий, в течение длительного периода времени.Для получения предварительных результатов, касающихся использования увеличенного времени продувки для потенциального снижения воздействия влажности, было проведено два эксперимента.
Сначала стандарт изопрена был добавлен в пробирки каждого типа TD, Tenax и 5TD, и подвергнут сухой продувке в течение 1 мин или 15 мин при 20 мл мин. -1 перед первичной десорбцией. Данные показывают для обоих типов пробирок TD статистически значимое снижение содержания изопрена (5TD p = 0,0079, Tenax p <0,0001) и внутреннего стандарта 1,4-дифторбензола (5TD p = 0.0079, Tenax p <0,0001) площади необработанных пиков с временем продувки 15 мин (дополнительные данные 10 (A)). Точно так же второй эксперимент, в котором использовался выдыхаемый воздух, собранный на устройстве ReCIVA с пробирками Tenax и 5TD, с длительностью сухой продувки 1 или 15 минут, показал значительное снижение как изопрена (5TD p = 0,0062, Tenax p <0,0029), так и Необработанные площади пиков 1,4-дифторбензола (5TD p <0,0001, Tenax p = 0,0002) (дополнительные данные 5 и 10 (B)). В совокупности эти результаты предполагают, что увеличенное время сухой продувки, равное 15 мин, может вызвать прорыв летучих веществ из пробирки TD.
Признаки наличия воды или влажности при газохроматографическом разделении могут проявляться в виде уширения пиков и сдвигов времени удерживания соединений в необработанных данных [21]. Чтобы определить, присутствовали ли доказательства воздействия воды или влажности в образцах выдыхаемого воздуха, полученных для оценки времени продувки, для каждого образца определяли полную ширину на полувысоте (FWHM) и пиковое время удерживания для изопрена. Результаты показывают, что сухая продувка в течение 1 мин значительно снижает FWHM для обоих типов трубок (5TD p <0.0001, Tenax p = 0,0126, дополнительные данные 10 (C)), в то время как не наблюдается значительных изменений времени удерживания изопрена среди времен продувки для каждого типа пробирки TD (5TD p = 0,1017, Tenax p = 0,3409, дополнительные данные 10 (D )). Кроме того, время удерживания изопрена среди инъекций показало общее RSD ≤0,4% для любого набора тестируемых параметров. Однако из-за относительно короткого периода времени для этих экспериментов невозможно было оценить влияние на общее обслуживание прибора, которое может быть вызвано избытком воды, собранной во время отбора проб.В совокупности эти данные предполагают, что увеличенное время сухой продувки может не подходить для снижения влажности трубок из-за прорыва. Однако первоначальные результаты с использованием выдыхаемого воздуха, собранного с помощью устройства ReCIVA, предполагают, что влияние влажности или воды на хроматографию может быть незначительным или отсутствовать вовсе, независимо от типа пробирки TD, о чем свидетельствуют постоянные значения FWHM и времени удерживания в образцах выдыхаемого воздуха.
Первоначальная проверка исходных данных о выдыхаемом выдохе Теста 1 из проб, собранных с помощью устройства ReCIVA, показала большое количество силоксанового загрязнения, исходящего от силикона масок ReCIVA.Однако это не первое исследование по обнаружению фоновых силоксанов [9]. Doran и др. наблюдали значительное увеличение содержания некоторых силоксанов, таких как гексаметилциклотрисилоксан и гексаметилдисилоксан, по сравнению с контролем воздуха в помещении [9]. Смягчение силоксанового фона необходимо для выявления потенциальных соэлюируемых соединений при этих временах удерживания. Литература предполагает, что органический растворитель может удалить наблюдаемое загрязнение силоксаном [14, 15]. Было показано, что замачивание в этиловом спирте снижает содержание силоксана более чем на 78% (рисунок 1) [14, 15].Однако процедуры удаления спиртового растворителя оказались недостаточными. Эти результаты приводят к увеличению содержания этилового спирта более чем на 85% после процедуры спиртовой промывки (дополнительные данные 9). в качестве альтернативы маски, оставленные после сбора выдыхаемого воздуха после испытания 2, подвергали протоколу выпечки. При использовании протокола выпечки без добавления растворителя к маскам было достигнуто более чем 94% снижение наиболее преобладающего фонового загрязнения силоксаном (рис. 1). Хотя оба метода очистки уменьшают силоксановый фон, связанный с масками ReCIVA, необходимо изучить дополнительные стратегии удаления, такие как запекание маски и / или автоклавирование, чтобы удалить весь остаточный растворитель из масок ReCIVA, когда метод промывки этанолом используется для очистки и / или стерилизация.Таким образом, процедура запекания маски рекомендуется для удаления примесей силоксана из новых масок, как показано в Тесте 3, когда новые маски запекаются перед сбором выдыхаемого воздуха, в то время как комбинация двух методов очистки может быть подходящей для многократного использования масок. Однако данные, подтверждающие многократное использование масок в соответствии с протоколом стерилизации, по-прежнему необходимы.
Хотя значительный силоксановый фон, связанный с масками ReCIVA, наблюдался не только в этом исследовании, но и в других, данные показывают снижение общего фонового загрязнения на основе даты производства маски ReCIVA [9].Например, маски, использованные в тесте 1 и тесте 2, были изготовлены с интервалом примерно в девять месяцев, но маски, используемые в тесте 2, имеют значительно меньшее общее количество силоксановых фоновых пиков (рисунок 1). Эти данные свидетельствуют о том, что производитель маски осведомлен о фоновом загрязнении и, похоже, работает над смягчением проблемы до такой степени, что процедуры очистки могут быть в конечном итоге ненужными.
Результаты показывают, что скорость потока, подаваемая устройством ReCIVA к трубкам TD, напрямую влияет на согласованность результатов выдыхаемого воздуха, оцениваемых с помощью количеств изопрена, полученных этим методом сбора.Хотя неудивительно, что скорости потока отличаются от Tenax TA к трубкам 5TD, поскольку скорость потока частично контролируется сопротивлением потоку адсорбирующего материала трубки TD, эффект, который версия программного обеспечения управления ReCIVA играет в регулировании скорости потока, удивителен. Кроме того, данные показывают, что обновленное управляющее программное обеспечение ReCIVA (версия 1.46) не обеспечивает установленную скорость потока 200 мл мин -1 ни для пробирок Tenax TA TD, ни для рекомендованных пробирок 5TD, для которых откалибровано устройство ReCIVA.Результаты показывают, что для каждого типа пробирки TD и каждого банка ReCIVA, используемого для сбора, следует рассмотреть дополнительную внутреннюю калибровку потока, а до начала новых исследований с использованием ReCIVA необходимо установить самое современное программное обеспечение управления ReCIVA. устройство для сбора. Следует отметить, что данные в этой рукописи были сгенерированы с использованием одного блока ReCIVA из нескольких партий пробирок TD с неизвестной датой калибровки скорости потока производителем. Следовательно, для полной характеристики вариабельности, связанной с результатами пробоотборника дыхания ReCIVA и скоростями потока, потребуются дополнительные эксперименты с несколькими модулями ReCIVA, контролирующими потенциальные эффекты партии пробирок TD.Вероятно, что другие блоки ReCIVA могут иметь другие скорости потока по сравнению с протестированным, в зависимости от типа / партии адсорбционной трубки и банка ReCIVA, что затрудняет сравнение результатов между различными блоками ReCIVA без “ внутренней ” калибровки потока перед сбором на сравнивать каждый ReCIVA. Однако доказательства, подтверждающие эту гипотезу, еще не получены.
Результаты показывают, что при использовании обновленного управляющего программного обеспечения ReCIVA и «внутренней» калибровки потока создаются дублирующиеся образцы с использованием одного типа адсорбционной трубки и могут быть созданы для одной коллекции выдыхаемого воздуха ReCIVA.Примечательно, что полученные здесь результаты и выводы основаны только на количестве изопрена. Изопрен был выбран в качестве репрезентативного соединения для этого исследования из-за относительно высокого содержания, обнаруженного в выдыхаемом воздухе, возможности получить коммерчески доступный чистый газовый стандарт для калибровки и в целом большой объем работы, который был выполнен с выдыхаемым изопреном. [22–31]. Хотя данные показывают, что скорость потока играет роль в результатах, определенных ReCIVA по изопрену, часть общей вариабельности результатов может соответствовать индивидуальным различиям в выдыхаемом изопрене [23, 27–31].Например, результаты изопрена из дыхательных мешков, собранных до отбора проб ReCIVA, показывают широкий диапазон концентраций (Тест 2: 236,6–543,2 нг, Тест 3: 66,2–279,3 нг). Чтобы учесть этот потенциальный фактор, если двигаться вперед, если изопрен будет использоваться в качестве репрезентативного соединения для этих типов экспериментов, рекомендуется использовать большее количество участников для отбора проб.
В то время как другие показали, что с помощью анализа дыхания с использованием PTR-MS значения изопрена могут изменяться при незначительных движениях или маневрах дыхания человека, таких как изменение позы или задержка дыхания, эти исследования проводились с относительно короткими окнами сбора (≤2 мин) с анализом в реальном времени [10, 32].Сборы с помощью устройства ReCIVA для нашего теста показали образцы, собранные в течение семи минут (425 с) и в среднем более 85 выдохов. Следовательно, изменения количества выдыхаемого изопрена от дыхания к дыханию в результате изменения позы или задержки дыхания будут иметь лишь небольшое влияние на общий изопрен, обнаруживаемый в течение более длительного времени сбора (дополнительные данные 11). Хотя предполагается, что другие, менее распространенные соединения в выдыхаемом воздухе будут действовать так же, как изопрен, эти эксперименты должны быть выполнены для дальнейших открытий.
Наконец, для этих наборов тестов ReCIVA участникам были даны простые инструкции, такие как нормальные медленные вдохи и выдохи только через рот. Таким образом, частота дыхания и глубина дыхания регулировались только этими простыми инструкциями. В настоящее время неизвестно, какое влияние эти и другие параметры, такие как дыхание через нос, измененный состав газа, предоставленный испытуемому, пол и т. Д., Могут иметь на результаты выдыхаемого воздуха, полученные с помощью пробоотборника ReCIVA. Однако эти данные предоставляют дополнительные доказательства для дальнейшего исследования ReCIVA для сбора выдыхаемого воздуха.Результаты демонстрируют полезность коллектора дыхания ReCIVA для обеспечения постоянного выдыхаемого воздуха на адсорбирующей среде, устраняя подводные камни, связанные со сбором дыхания в мешках, и при этом получают сопоставимые результаты с образцами, собранными с помощью стандартных мешков для дыхания.
Исследований использования респираторного коллектора для анализа in vitro было немного. Представленные данные подтверждают использование погружения в этиловый спирт и высокотемпературного обжига для уменьшения силоксанового фона, связанного с масками ReCIVA.Кроме того, результаты подчеркивают некоторые различия, связанные с использованием пробоотборника ReCIVA, и подходы к устранению несоответствий. Данные показывают, что скорость потока, применяемая устройством ReCIVA, должна быть проверена и отрегулирована до сбора образцов, чтобы обеспечить наиболее согласованные результаты среди образцов. В совокупности результаты демонстрируют, что пробоотборник ReCIVA представляет собой значительный шаг на пути к стандартизированному отбору проб выдыхаемого воздуха для автономного анализа, и необходимы дальнейшие исследования для улучшения общего отбора проб выдыхаемого воздуха.
Субподряд ВВС США (FA8650-17-6891) с UES Inc. обеспечил поддержку этой работы. Мнения, толкования, выводы и рекомендации принадлежат авторам и не обязательно одобряются правительством США. Авторы хотели бы поблагодарить г-на Грегори Садберри и г-жу Тенику Дирмонд за их поддержку этой рукописи. Кроме того, авторы хотели бы поблагодарить Патрика Гордона из Owlstone Medical за предоставленную оценку производительности ReCIVA через.h5 после теста ReCIVA 1.
Характеристика фекальной микробиоты с помощью высокопроизводительного секвенирования выявляет стабильное микробное сообщество во время хранения
Abstract
Работа с биологическими образцами и их обработка имеют решающее значение при характеристике состава кишечной микробиоты между различными экологическими нишами или заболеваниями. В частности, воздействие на образцы фекалий комнатной температуры или длительное хранение в условиях глубокого замораживания может изменить состав микробиоты.Таким образом, мы хранили образцы фекалий при комнатной температуре и контролировали стабильность микробиоты в течение суток. Мы также исследовали стабильность микробиоты в образцах фекалий в течение шестимесячного периода хранения при -80 ° C. Поскольку на стабильность фекальной микробиоты может влиять кишечное заболевание, мы проанализировали двух здоровых людей из контрольной группы и двух пациентов с синдромом раздраженного кишечника (СРК). Мы использовали высокопроизводительное пиросеквенирование гена 16S рРНК для характеристики микробиоты в образцах фекалий, хранящихся при комнатной температуре или -80 ° C в шести и семи временных точках соответственно.Состав микробных сообществ у пациентов с СРК и здоровых контролей определялся и сравнивался с использованием программы Quantitative Insights Into Microbial Ecology (QIIME). Состав микробиоты в образцах фекалий, хранящихся в течение разного времени при комнатной температуре или -80 ° C, сильно сгруппирован в зависимости от хозяина, от которого был получен каждый образец. Наши данные демонстрируют, что образцы фекалий, подвергнутые воздействию комнатной температуры или температуры глубокого замораживания в течение 24 часов и 6 месяцев соответственно, демонстрируют микробный состав и разнообразие, которые больше идентичны образцу хозяина, чем любой другой образец.
Образец цитирования: Carroll IM, Ringel-Kulka T., Siddle JP, Klaenhammer TR, Ringel Y (2012) Характеристика фекальной микробиоты с помощью высокопроизводительного секвенирования выявляет стабильное микробное сообщество во время хранения. PLoS ONE 7 (10): e46953. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046953
Редактор: Джош Нойфельд, Университет Ватерлоо, Канада
Поступила: 09.07.2012; Дата принятия: 10 сентября 2012 г .; Опубликовано: 5 октября 2012 г.
Авторские права: © Carroll et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.
Финансирование: Это исследование было поддержано грантом номер UL1RR025747 Национального центра исследовательских ресурсов, присужденным IC. Авторы несут полную ответственность за содержание, которое не обязательно отражает официальную точку зрения Национального центра исследовательских ресурсов или Национальных институтов здравоохранения.Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.
Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что никаких конкурирующих интересов не существует.
Введение
Микробиота кишечника представляет собой сложное сообщество бактерий, архей и эукариев. Считается, что бактериальная фракция содержит более 500 различных видов и может достигать количества 10 12 –10 14 клеток / мл содержимого просвета [1], [2], причем наибольшая плотность приходится на толстую кишку.Учитывая связь этого сложного микробного сообщества с заболеванием [3], [4], точная характеристика состава и разнообразия кишечной микробиоты в биологических образцах имеет первостепенное значение.
Сообщается, что от 40 до 60% бактерий, обитающих в кишечнике, не культивируются [5]. Таким образом, текущие исследования опираются на независимые от культуры ДНК методы для характеристики кишечной микробиоты [6], [7]. Обработка и обработка биологических образцов, используемых для характеристики кишечной микробиоты, имеет решающее значение при сравнении состава этого сложного микробного сообщества между различными экологическими нишами или заболеваниями.Это особенно важно в исследованиях, изучающих связь кишечной микробиоты с синдромом раздраженного кишечника (СРК), когда образцы фекалий оставлялись при комнатной температуре на срок до шести часов перед выделением ДНК фекалий [8]. В недавнем отчете подчеркивается значительное влияние «продолжительности времени» при «комнатной температуре» (примерно 25 ° C) на состав микробиоты в образце мокроты с кистозным фиброзом, в то время как температура замерзания (-20 и -80 ° C) оказывает существенно не меняют состав микробиоты [9].Кроме того, было оценено влияние диапазона температур (20, 4, -20 и -80 ° C) в двух временных точках (3 и 14 дней) на фекальную микробиоту [10]. В этом исследовании сообщается об отсутствии влияния времени и температуры на состав микробиоты в образцах фекалий. Тем не менее, это исследование сравнивало фекальную микробиоту через три и четырнадцать дней, но не включало исходный образец, отражающий фекальную микробиоту во время дефекации. Таким образом, цель нашего исследования состояла в том, чтобы охарактеризовать состав микробиоты в образцах фекалий, оставленных при комнатной температуре на исходном уровне (через 30 минут после дефекации), и контролировать стабильность микробиоты в шести временных точках в течение двадцати четырех часов.Кроме того, мы стремились исследовать стабильность микробиоты в образцах фекалий в семи временных точках в течение шестимесячного периода хранения при -80 ° C. Поскольку на фекальную микробиоту здоровых людей и пациентов с кишечным заболеванием может по-разному влиять продолжительность пребывания при данной температуре, мы включили в наше исследование пациентов с СРК и здоровых людей из контрольной группы.
Материалы и методы
Заявление об этике
Исследование было одобрено Советом по внутреннему анализу UNC (IRB), и все субъекты предоставили письменное согласие до участия в исследовании.
Исследуемая популяция
Мы изучили 2 пациентов, которые соответствовали Римским критериям III для IBS, и 2 здоровых пациентов из контрольной группы. Испытуемые были набраны из общей популяции Чапел-Хилл и из поликлиник здравоохранения Университета Северной Каролины (UNC) с помощью рекламы.
Критерии включения для всех субъектов были такими, как описано ранее [11]. Вкратце, для этого исследования были набраны субъекты 18 лет и старше, любого пола, расы или этнической принадлежности. У здоровых людей не было повторяющихся симптомов со стороны желудочно-кишечного тракта.Пациенты с СРК с историей хирургии желудочно-кишечного тракта (кроме аппендэктомии или холецистэктомии), воспалительными заболеваниями кишечника (ВЗК), целиакией, мальабсорбцией лактозы или любым другим диагнозом, который мог бы объяснить хронические или повторяющиеся симптомы кишечника, были исключены из исследования. . Кроме того, участники были исключены, если они в анамнезе лечились антибиотиками, противовоспалительными средствами, включая аспирин, нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП или стероиды), или если они преднамеренно употребляли пробиотики за два месяца до исследования.Для субъектов, которые сообщили о намеренном потреблении пробиотиков до включения в исследование, требовался восьминедельный период вымывания. Все пациенты были обследованы врачом, чтобы исключить диагноз, альтернативный СРК.
Сбор и подготовка проб
Стратегия нашего исследования представлена на рисунке 1. Свежий образец стула был взят у всех субъектов ( n = 4) на месте и немедленно доставлен в лабораторию, где он был механически гомогенизирован с помощью стерильного шпателя.Каждый образец был разделен на тринадцать аликвот. Каждая аликвота содержала 200 мг стула в стерильной криопробирке на 2 мл. Затем аликвоты фекалий хранили либо при (I) комнатной температуре (приблизительно 25 ° C), либо (II) -80 ° C в течение разного времени. Комнатная температура : через тридцать минут после дефекации аликвоту исходного образца переносили до -80 ° C. Затем пять аликвот образцов последовательно переносили до -80 ° C после выдержки при комнатной температуре в течение 1, 4, 6, 8 и 24 часов.Затем общую бактериальную ДНК выделяли из всех семи аликвот образцов при комнатной температуре для каждого субъекта. -80 ° C: на исходном уровне семь аликвот образцов для каждого субъекта переводили на -80 ° C. Через 1 неделю при -80 ° C по одной аликвоте образца для каждого субъекта удаляли из хранилища и выделяли общую бактериальную ДНК. Через 1, 2, 3, 4, 5 и 6 месяцев при -80 ° C аликвоту образца для каждого субъекта удаляли из хранилища и выделяли общую бактериальную ДНК. Суммарную бактериальную ДНК из каждой аликвоты образца для каждого субъекта использовали для характеристики кишечной микробиоты.
Выделение ДНК
Бактериальная ДНК была выделена из 52 аликвот пробы фекалий (4 субъекта × 13 временных точек) с использованием метода экстракции фенолом / хлороформом в сочетании с физическим разрушением бактериальных клеток и набором для очистки ДНК (экстракция крови и тканей Qiagen DNeasy®. kit [Qiagen, Valencia, CA]), как описано ранее [11] – [13]. Вкратце, 100 мг замороженных фекалий суспендировали в 750 мкл стерильного бактериального буфера для лизиса (200 мМ NaCl, 100 мМ Трис [pH 8,0], 20 мМ ЭДТА, 20 мг / мл лизоцима -1 ) и инкубировали при 37 ° C в течение 30 минут.Затем к смеси добавляли 40 мкл протеиназы K (20 мг, мл -1 ) и 85 мкл 10% SDS и инкубировали при 65 ° C в течение 30 минут. Затем добавляли 300 мг циркониевых шариков 0,1 мм (BioSpec Products, Bartlesville, OK) и смесь гомогенизировали в миксере для шариков (TeSeE process 48®, Bertin Technologies, Le Bretonneux, Франция) в течение 90 секунд при 5300 об / мин. Гомогенизированную смесь охлаждали на льду, а затем центрифугировали при 14000 об / мин в течение 5 минут (центрифуга Eppendorf 5417R, ротор F45-30-11). Супернатант переносили в новую 1.Микроцентрифужная пробирка объемом 5 мл и фекальную ДНК дополнительно экстрагировали фенолом / хлороформом / изоамиловым спиртом (25∶24: 1), а затем хлороформом / изоамиловым спиртом (24∶1). После экстракции супернатант осаждали абсолютным этанолом при -20 ° C в течение 1 часа. Осажденную ДНК суспендировали в не содержащей ДНКазу H 2 O, а затем очищали с использованием набора для экстракции крови и тканей DNeasy® (Qiagen, Валенсия, Калифорния) со стадии 3 в соответствии с инструкциями производителя. Перед микробной характеристикой выделенную фекальную ДНК хранили при -80 ° C до тех пор, пока ДНК не была получена из всех образцов.
454 Пиросеквенирование генов 16S рРНК
Состав бактериального сообщества в изолированных образцах ДНК был охарактеризован, как описано ранее [14]. Вкратце, вариабельная область V1-3 (прямой, 8f: 5′-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3 ‘; обратный 518r: 5′-ATTACCGCGGCTGCTGG-3′) гена 16S рРНК была амплифицирована с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Прямые праймеры были помечены уникальными штрих-кодовыми метками размером 10 п.н. на 5′-конце вместе с последовательностью адаптера (5’-CCATCTCATCCCTGCGTGTCTCCGACTCAG-3 ‘), что позволило включить несколько образцов в одну пластину для секвенирования 454 GS FLX Titanium, как описано ранее [15 ].Продукты ПЦР 16S рРНК были количественно определены, объединены и очищены для реакции секвенирования. Секвенирование 454 GS FLX Titanium выполняли на аппарате 454 Life Sciences Genome Sequencer FLX (Roche, Florence, SC) в ядре микробиома в UNC-Chapel Hill (http://www.med.unc.edu/microbiome).
Анализ последовательностей 16S рРНК с использованием конвейера QIIME
Данные последовательности 16S рРНК, полученные с помощью секвенатора 454 GS FLX Titanium, были обработаны с помощью конвейера количественного анализа микробной экологии (QIIME) [16].Вкратце, последовательности, длина которых составляла менее 200 п.н. или больше 1000 п.н., содержали неправильные последовательности праймеров или содержали более 1 неоднозначного основания, отбрасывались. Остальным последовательностям были назначены аликвоты образцов на основе их уникальных нуклеотидных штрих-кодов, включая исправление ошибок [17]. Химерные последовательности удаляли с помощью ChimeraSlayer [18]. Последовательности были сгруппированы в операционные таксономические единицы (OTU) на основе сходства их последовательностей при 97% сходстве последовательностей (аналогично уровню видов) с использованием UCLUST [19].Репрезентативная последовательность для каждой OTU была выбрана для последующего анализа на основе наиболее распространенной последовательности из каждой OTU. PyNAST использовали для выравнивания последовательностей с минимальной длиной 150 п.н. и минимальным процентом идентичности 75,0 [20]. OTU были отнесены к таксономии с использованием наивного байесовского классификатора проекта Ribosomal Database Project (RDP) v 2.2 с уровнем достоверности 0,8 [21]. β-разнообразие (разнообразие между группами образцов) использовалось для создания графиков главных координат для каждой выборки с использованием невзвешенных и взвешенных расстояний UniFrac [22] – [24].Графики PCoA использовались для визуализации сходства или различия переменных, которые лучше всего представляют попарные расстояния между группами выборок.
Статистический анализ
Перед проведением статистических сравнений процентные доли бактериальных таксонов и наборы данных среднего значения UniFrac были оценены на предмет нормальности с использованием комплексного теста Д’Агостино и Пирсона. Когда набор данных был идентифицирован как не имеющий нормального распределения, он был преобразован логарифмом 10 [25] и повторно проверен на нормальность.Нормально распределенные наборы данных сравнивали с использованием t-критерия Стьюдента. Все статистические сравнения проводились с использованием программного обеспечения GraphPad (v4.0a; Prism, San Diego, CA). Мы использовали анализы на основе таксонов и филогенетики для сравнения последовательностей гена 16S рРНК у пациентов с СРК и здоровых людей в контрольной группе с течением времени при комнатной температуре или -80 ° C. На основе таксонов: средние значения и стандартные отклонения численности бактериальных групп (тип, класс, отряд, семейство и род) и OTU были рассчитаны и сравнены между всеми образцами, хранящимися при комнатной температуре и -80 ° C, и между образцами, хранящимися при комнатная температура и −80 ° C для каждого человека.Значение p менее 0,05 считалось значимым после тестирования множественных сравнений с использованием поправки Бонферрони. Нулевые значения для таксонов и OTU считались отсутствием и не учитывались при расчете средних значений. На основе филогенетики: филогенетические деревья для пациентов с СРК и здоровых людей были созданы с использованием конвейера QIIME [16]. Каждое дерево подвергалось взвешенному и невзвешенному анализу UniFrac [22] – [24] через конвейер QIIME. Расстояния UniFrac представляют собой долю длины ветви, которая является общей для любых двух сообществ образцов в филогенетическом дереве, построенном на основе данных последовательности 16S рРНК из всех образцов.Статистические различия между группами образцов (то есть образцы при комнатной температуре по сравнению с образцами -80 ° C и образцами при комнатной температуре и -80 ° C от каждого индивидуума) были протестированы с использованием анализа сходства (ANOSIM – доступен через QIIME) путем перестановки членства в группах с 999 реплицирует. Статистика теста R, которая измеряет силу результатов, находится в диапазоне от -1 до 1: R = 1 означает различия между группами, а R = 0 означает, что группы идентичны.
Результаты
И.Характеристика микробных сообществ в образцах фекалий IBS и HC
Всего 201 101 последовательность 16S рРНК приемлемого качества была получена из 52 образцов фекалий (4 субъекта × 13 аликвот) в среднем 3867 считываний (диапазон: 1552–6 531) на образец (HC: 4 309 считываний на образец, в среднем, с диапазоном 1 936–6 531; IBS: в среднем 3 426 считываний на образец с диапазоном 1552–5797). Было обнаружено, что 18,14% от общего числа последовательностей являются химерными и исключены из дальнейших анализов.Чтобы определить количество и численность различных бактериальных групп в каждом образце, мы использовали 3% -ное несходство между последовательностями гена 16S рРНК в качестве индикатора OTU «видового уровня». Используя эту процедуру, мы обнаружили в общей сложности 8 334 OTU во всех выборках, полученных от 4 субъектов. Данные последовательности 16S рРНК для этого исследования публично доступны на веб-сайте QIIME (www.microbio.me/qiime) под заголовком «исследование хранения».
II. Стабильность фекальных микробных сообществ при хранении
Для сравнения глобального состава микробиоты в образцах фекалий HC и IBS, хранящихся при комнатной температуре и –80 ° C в течение разного времени, были рассчитаны расстояния UniFrac [22] – [24], которые сравнивались между аликвотами образцов.Анализ главных координат (PCoA) взвешенных и невзвешенных расстояний UniFrac для всех аликвот образцов, хранящихся при комнатной температуре или -80 ° C ( n = 52), выявил четыре отдельных кластера (рис. 2 A&E). Каждый кластер содержал образцы, полученные от одного субъекта для всех временных точек как при комнатной температуре, так и при -80 ° C. Кроме того, каждый кластер содержал образцы, полученные от одного испытуемого для всех временных точек. Графики PCoA невзвешенных расстояний UniFrac не выявили значительной кластеризации образцов в зависимости от температуры хранения.Графики PCoA взвешенных расстояний UniFrac не выявили значительной кластеризации образцов в зависимости от температуры хранения как для образцов HC, так и для одного образца IBS, однако образцы от одного человека IBS (IBS1) продемонстрировали кластеризацию в зависимости от температуры хранения (рис. 2 B&F). ANOSIM подтвердил, что образцы от двух HC и одного индивидуума IBS не сгруппировались в зависимости от температуры хранения (HC1: невзвешенный Unifrac – R = 0,16 p = 0,07, взвешенный UniFrac – R = 0,01 p = 0,39; HC2: невзвешенный Unifrac – R = 0.07 p = 0,72, взвешенный UniFrac – R = 0,07 p = 0,22; IBS2: невзвешенный Unifrac – R = -0,05 p = 0,70, взвешенный UniFrac – R = 0,14 p = 0,08), и что образцы от одного индивидуального IBS кластеризовались в зависимости от температуры хранения (IBS1: невзвешенный Unifrac – R = – 0,01 p = 0,48, взвешенный UniFrac – R = 0,21 p = 0,04). Средневзвешенные и невзвешенные расстояния UniFrac, рассчитанные на основе «хоста происхождения», оказались значительно ниже ( p <0.05) по сравнению с расстояниями UniFrac, рассчитанными на основе продолжительности хранения образца при комнатной температуре или -80 ° C (рис. 2 C, D, G и H), что указывает на то, что микробиота в образцах фекалий более схожа в пределах индивидуального происхождение по сравнению с продолжительностью времени при температуре хранения. Интересно, что комбинированные средневзвешенные расстояния UniFrac для HC были значительно ниже ( p <0,05), чем комбинированные средневзвешенные расстояния UniFrac для пациентов с СРК.Это значительное снижение не наблюдалось при невзвешенном анализе, что указывает на то, что образцы HC могут быть более стабильными, чем образцы IBS во время хранения, на основании относительного содержания конкретных OTU.
Рис. 2. Анализ β-разнообразия образцов.
Анализ основных координат (PCoA) взвешенных и невзвешенных расстояний UniFrac пациента с СРК (зеленые и оранжевые треугольники) и здорового контроля (синие квадраты и красные кружки) аликвот образцов фекалий, подвергшихся воздействию комнатной температуры и −80 ° C в течение разного времени (комнатная температура – 1, 4, 6, 8 и 24 часа; −80 ° C – 1 неделя и 1, 2, 3, 4, 5 и 6 месяцев).Графики PCoA иллюстрируют субъект, от которого была получена аликвота каждой пробы ( A&E ), и температуру, при которой они хранились ( B&F ). Средневзвешенные расстояния UniFrac для всех аликвот образцов, основанные на хранении при комнатной температуре ( C&G ) или -80 ° C ( D&H ), показывают, что микробиоты аликвот образцов демонстрируют значительное сходство (* p <0,05).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046953.g002
III.Стабильность бактериальных групп при хранении
Процент бактериальных таксонов показал ненормальное распределение, что, вероятно, было связано с наличием нулевых значений в наборе данных. Все наборы данных показали нормальное распределение после преобразования log 10 . Хотя мы наблюдали значительное разделение состава микробиоты между образцами, хранящимися при комнатной температуре и -80 ° C у одного человека с IBS (IBS1), мы не смогли идентифицировать какие-либо конкретные OTU, которые значительно различались по концентрации между температурами хранения в любой из четырех исследованных лиц (Таблица 1).Кроме того, не было обнаружено, что количество различных бактериальных таксонов, идентифицированных выравниванием последовательностей OTU, значительно колеблется у пациентов с СРК и HC во времени во время хранения при комнатной температуре или -80 ° C. На рис. 3 показано изменение доминирующих типов в образцах фекалий во время хранения. Типы Bacteroidetes и Proteobacteria показали более высокие концентрации у пациентов с СРК (рис. 3). Ранее нашей исследовательской группой сообщалось, что уровень Proteobacteria phylum и класс Gammaproteobacteria значительно выше у пациентов с СРК [14]; однако не было обнаружено, что тип Bacteroidetes связан с СРК.
Рис. 3. Численность доминирующих типов в выборках.
Обилие (% от общего числа последовательностей 16S рРНК) преобладающих бактериальных типов в аликвотах образцов фекалий здоровых людей и пациентов с СРК, подвергнутых воздействию комнатной температуры и −80 ° C в течение разного времени.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046953.g003
Обсуждение
До появления основанных на ДНК методов для характеристики сложных бактериальных сообществ в биологических образцах было широко распространено мнение, что образцы фекалий человека должны быть немедленно заморожены после сбора, чтобы сохранить состав микробиоты [26].Это предположение оказалось практически трудным в клинических испытаниях на людях, где собранные образцы фекалий могли подвергаться воздействию комнатной температуры в течение нескольких часов, прежде чем попасть в лабораторию. Кроме того, в зависимости от скорости набора субъектов, образцы фекалий, возможно, придется хранить в условиях глубокого замораживания в течение длительных периодов времени перед выделением ДНК.
Недавнее исследование с использованием высокопроизводительного пиросеквенирования гена 16S рРНК показало, что филогенетическая структура микробиоты существенно не различалась между образцами фекалий трех- и четырнадцатидневного возраста, хранящимися при различных температурах (20, 4, -20 и – 80 ° С) [10].Однако в исследовании Lauber et al [10] отсутствовал исходный образец, представляющий структуру фекальной микробиоты сразу после дефекации. Таким образом, возможно, что микробиота в образцах фекалий быстро деградировала и сохранила этот состав с течением времени. Чтобы решить эти вопросы, мы разработали исследование, в котором собирали базовую аликвоту (через 30 минут после дефекации) и сравнивали с аликвотами того же образца, хранившимися при комнатной температуре в течение двадцати четырех часов. Мы также исследовали стабильность фекальной микробиоты из аликвот тех же образцов, которые хранились при -80 ° C в течение шести месяцев.Кроме того, поскольку образцы фекалий пациентов с язвенным колитом и СРК имеют значительно более высокую протеазную активность [27], возможно, что на микробиоту фекалий людей с кишечным заболеванием может по-разному влиять продолжительность воздействия комнатной или отрицательной температуры. Таким образом, в это исследование были включены здоровые люди и пациенты с СРК.
При прямом сравнении состава кишечной микробиоты от всех субъектов и образцов, хранящихся при комнатной температуре, с использованием расстояний UniFrac [22] – [24], мы обнаружили, что образцы были разделены на основе субъекта, из которого они были получены, а не продолжительности времени, в течение которого они были подвергается воздействию комнатной температуры.Это открытие предполагает, что образцы фекалий, хранящиеся при комнатной температуре до двадцати четырех часов, сохраняют микробиоту, аналогичную по составу свежей пробе от этого человека. Аналогичным образом, во время длительного хранения при температуре -80 ° C мы обнаружили, что состав микробиоты всех субъектов и образцов был разделен на основе субъекта, из которого они произошли, а не продолжительности времени, в течение которого они находились в условиях глубокого замораживания. Это открытие предполагает, что образцы фекалий, хранящиеся при -80 ° C в течение шести месяцев, также сохраняют микробиоту, аналогичную по составу свежей пробе от этого человека.Однако мы обнаружили, что состав микробиоты из образцов, хранящихся при комнатной температуре, значительно отличался от микробиоты образцов, хранящихся при -80 ° C, для одного человека с СРК. Образцы от второго индивидуума IBS не показали такого же значительного разделения между температурами хранения; однако кластеризация образцов на взвешенном PCoA показала большую вариабельность по сравнению с HC, подразумевая, что микробиота этого пациента с СРК также может быть менее стабильной при комнатной температуре по сравнению со здоровым контролем.Действительно, микробиота из обоих образцов HC показала более низкие средневзвешенные значения UniFrac, чем микробиота из обоих образцов IBS. В подтверждение этого наблюдения наш взвешенный анализ PCoA показывает, что образцы HC кластеризуются более плотно, чем образцы IBS. Это наблюдение предполагает, что многочисленные таксоны в образцах УВ в нашем исследовании менее подвержены влиянию температуры, чем IBS, проанализированные в нашем исследовании. Хотя образцы IBS, которые мы проанализировали, больше зависели от температуры хранения, чем от HC, микробиота в этих образцах имела больше сходства с их индивидуальным происхождением, чем с температурой хранения, и мы не выявили какой-либо конкретной OTU или более высокой таксономической группы, которая значительно отличалась между температуры хранения у лиц с СРК.Это указывает на то, что, хотя образцы СРК, хранящиеся при комнатной температуре до 24 часов, могут изменять микробный состав, эти образцы по-прежнему точно отражают кишечную микробиоту этого человека. Неясно, почему микробиота образцов фекалий СРК менее стабильна при хранении при комнатной температуре, однако, поскольку метаболиты кишечника изменяются у пациентов с СРК [27], [28], есть соблазн предположить, что повышенные уровни протеаз и кислот могут привести к более быстрое расщепление фекальной ДНК.
Наше исследование сообщает об относительно стабильной микробиоте в образцах фекалий, хранящихся при комнатной температуре или -80 ° C с течением времени, однако мы не видим идентичных бактериальных составов во всех образцах от одного и того же хозяина. Сообщалось, что продолжительность хранения при различных температурах влияет на плотность определенных бактериальных групп [29] в фекалиях свиней. Хотя мы не наблюдали значительного влияния продолжительности времени при температуре хранения на бактериальные таксономические группы или отдельные OTU на уровне вида, наш анализ не обеспечил разрешения для исследования колебаний таксонов на уровне вида или штамма.Кроме того, мы не исследовали стабильность микробиоты в образцах фекалий между 8 и 24 часами при комнатной температуре, где микробиота может быть менее стабильной. Также важно отметить, что, хотя мы сгенерировали относительно большое количество последовательностей на образец, наша глубина охвата не позволит выявить очень мало распространенных таксонов. Следовательно, возможно, что таксоны с низкой численностью могут зависеть от температуры хранения. Кроме того, фекальная ДНК, используемая в нашем исследовании для характеристики микробиоты образцов фекалий, хранилась при -80 ° C в течение разного времени, и мы не исследовали эту стабильность фекальной ДНК с течением времени в условиях замораживания.
В заключение мы сообщаем, что образцы фекалий, подвергшиеся воздействию комнатной температуры или температуры глубокого замораживания в течение 24 часов и 6 месяцев, соответственно, демонстрируют микробный состав и разнообразие, которые больше идентичны образцу хозяина, чем любой другой образец. Это исследование подтверждает подход к хранению образцов при -80 ° C до тех пор, пока не будет собран полный набор образцов фекалий, чтобы исследовать состав фекальной микробиоты у здоровых контролей и пациентов с СРК.
Благодарности
Авторы хотели бы поблагодарить ядро микробиома UNC за их ценную помощь в этом исследовании.
Вклад авторов
Задумал и спроектировал эксперименты: IC TR JPS TRK YR. Проведены эксперименты: IC JPS. Проанализированы данные: IC TR YR. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: IC. Написал статью: IC TR YR.
Ссылки
- 1. Whitman WB, Coleman DC, Wiebe WJ (1998) Прокариоты: невидимое большинство. Proc Natl Acad Sci U S A 95: 6578–6583.
- 2. Ley RE, Peterson DA, Gordon JI (2006) Экологические и эволюционные силы, формирующие микробное разнообразие в кишечнике человека.Ячейка 124: 837–848.
- 3. Ringel Y, Carroll IM (2009) Изменения кишечной микробиоты и функциональные симптомы кишечника. Gastrointest Endosc Clin N Am 19: 141–150, vii.
- 4. Packey CD, Sartor RB (2009) Комменсальные бактерии, традиционные и условно-патогенные микроорганизмы, дисбактериоз и уничтожение бактерий при воспалительных заболеваниях кишечника. Curr Opin Infect Dis 22: 292–301.
- 5. Hayashi H, Sakamoto M, Benno Y (2002) Филогенетический анализ микробиоты кишечника человека с использованием библиотек клонов 16S рДНК и строго анаэробных методов на основе культивирования.Microbiol Immunol 46: 535–548.
- 6. Тернбо П. Дж., Гордон Дж. И. (2009) Микробиом ядра кишечника, энергетический баланс и ожирение. J Physiol 587: 4153–4158.
- 7. Кэрролл И.М., Рингель-Кулька Т., Рингель Ю. (2009) Количественное определение и идентификация организмов. В: Флоч МХКАС, редактор. Пробиотики: клиническое руководство. Торофар, Нью-Джерси: компания SLACK включена. 55–69.
- 8. Малинен Э., Ринттила Т., Каяндер К., Матто Дж., Кассинен А. и др. (2005) Анализ фекальной микробиоты пациентов с синдромом раздраженного кишечника и здоровых людей в контрольной группе с помощью ПЦР в реальном времени.Am J Gastroenterol 100: 373–382.
- 9. Nelson A, De Soyza A, Bourke SJ, Perry JD, Cummings SP (2010) Оценка практики обработки образцов на микробную активность в образцах мокроты от пациентов с муковисцидозом. Lett Appl Microbiol 51: 272–277.
- 10. Лаубер К.Л., Чжоу Н., Гордон Дж. И., Найт Р., Фирер Н. (2010) Влияние условий хранения на оценку структуры бактериального сообщества в почве и образцах, связанных с человеком. FEMS Microbiol Lett 307: 80–86.
- 11. Кэрролл И.М., Рингель-Кулька Т., Кеку Т.О., Чанг Й.Х., Пакки С.Д. и др. (2011) Молекулярный анализ кишечной микробиоты, связанной с просветом и слизистой оболочкой, при синдроме раздраженного кишечника с преобладанием диареи. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 301: G799–807.
- 12. Carroll IM, Chang YH, Park J, Sartor RB, Ringel Y (2010) Микробиота кишечника, связанная с просветом и слизистыми оболочками, у пациентов с синдромом раздраженного кишечника с преобладанием диареи. Gut Pathog 2:19.
- 13. Carroll IM, Keku TO, Ringel-Kulka T, Sartor RB, Ringel Y (2010) Молекулярная характеристика фекальной и связанной со слизистой оболочкой кишечной микробиоты у пациентов с СРК с преобладанием диареи и здоровых субъектов. Гастроэнтерология 138: S – 624.
- 14. Carroll IM, Ringel-Kulka T, Siddle JP, Ringel Y (2012) Изменения в составе и разнообразии кишечной микробиоты у пациентов с синдромом раздраженного кишечника с преобладанием диареи. Нейрогастроэнтерол Мотил.24: 521–530.
- 15. Фирер Н., Хамади М., Лаубер К.Л., Найт Р. (2008) Влияние пола, рукопожатия и мытья рук на разнообразие бактерий на поверхности рук. Proc Natl Acad Sci U S A 105: 17994–17999.
- 16. Caporaso JG, Kuczynski J, Stombaugh J, Bittinger K, Bushman FD, et al. (2010) QIIME позволяет анализировать данные секвенирования сообщества с высокой пропускной способностью. Nat Методы 7: 335–336.
- 17. Hamady M, Walker JJ, Harris JK, Gold NJ, Knight R (2008) Штрих-кодовые праймеры с исправлением ошибок для пиросеквенирования сотен образцов в мультиплексе.Нат методы 5: 235–237.
- 18. Хаас Б.Дж., Геверс Д., Эрл А.М., Фельдгарден М., Уорд Д.В. и др. (2011) Образование и обнаружение последовательности химерной 16S рРНК в ПЦР-ампликонах, секвенированных по Сэнгеру и 454-пиросеквенированию. Genome Res 21: 494–504.
- 19. Edgar RC (2010) Поиск и кластеризация на порядки быстрее, чем BLAST. Биоинформатика 26: 2460–2461.
- 20. Капорасо Дж. Г., Биттингер К., Бушман Ф. Д., ДеСантис Т. З., Андерсен Г. Л. и др. (2010) PyNAST: гибкий инструмент для выравнивания последовательностей по шаблону.Биоинформатика 26: 266–267.
- 21. Ван Кью, Гаррити Дж. М., Тидже Дж. М., Коул Дж. Р. (2007) Наивный байесовский классификатор для быстрого отнесения последовательностей рРНК к новой бактериальной таксономии. Appl Environ Microbiol 73: 5261–5267.
- 22. Lozupone CA, Hamady M, Kelley ST, Knight R (2007) Количественные и качественные меры бета-разнообразия приводят к различным взглядам на факторы, которые структурируют микробные сообщества. Appl Environ Microbiol 73: 1576–1585.
- 23.Lozupone C, Lladser ME, Knights D, Stombaugh J, Knight R (2011) UniFrac: эффективный показатель расстояния для сравнения микробного сообщества. Isme J 5: 169–172.
- 24. Lozupone C, Knight R (2005) UniFrac: новый филогенетический метод сравнения микробных сообществ. Appl Environ Microbiol 71: 8228–8235.
- 25. Раметт А. (2007) Многомерный анализ микробной экологии. FEMS Microbiol Ecol 62: 142–160.
- 26. Rochelle P, Cragg BA, Fry JC, Parkes RJ, Weightman AJ (1994) Влияние обработки образцов на оценку бактериального разнообразия в морских отложениях с помощью анализа последовательности гена 16S рРНК.FEMS Microbiol Ecol 15: 40–46.
- 27. Рока Р., Роштоци А., Левек М., Избеки Ф., Надь Ф. и др. (2007) Пилотное исследование фекальной активности серин-протеазы: патофизиологический фактор при синдроме раздраженного кишечника с преобладанием диареи. Клин Гастроэнтерол Гепатол 5: 550–555.
- 28. Тана С., Умесаки Ю., Имаока А., Ханда Т., Канадзава М. и др. (2009) Измененные профили кишечной микробиоты и органических кислот могут быть причиной симптомов синдрома раздраженного кишечника.Нейрогастроэнтерол Мотил 22: 512–519.
- 29. O’Carroll JM, Davies PR, Correa MT, Slenning BD (1999) Влияние хранения образцов и отложенного вторичного обогащения на обнаружение Salmonella spp в фекалиях свиней. Am J Vet Res 60: 359–362.
Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:
- В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
- Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
- Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
- Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
- Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.
Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:
- В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
- Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
- Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
- Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
- Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.
Характеристика и прогнозирование клинических путей уязвимости к психозам с помощью графической обработки сигналов
Существенные изменения:
• Введение – Недостаточная мотивация для использования и значимости сетевых моделей.Оба рецензента подчеркнули это как главное ограничение рукописи. Сетевое моделирование стало в некоторой степени модным в исследованиях психопатологии из-за его новизны и количественной привлекательности. Авторы, однако, не приводят убедительных аргументов в пользу использования этого метода. Могут ли авторы показать существенную прибавку или особую выгоду, предлагаемую этим методом? Какой теоретический или научный вопрос здесь стоит на кону? Какие преимущества дает этот подход помимо другого способа объяснения эмпирических отношений между анализируемыми переменными?
Мы благодарим рецензентов за этот уместный комментарий.Мы значительно изменили структуру введения, чтобы решить их проблемы.
В частности, перед тем, как представить сетевые подходы к психопатологии, мы представили раздел введения, в котором мы более четко очерчиваем ограничения существующих размерных и категориальных подходов, во-первых, с точки зрения лежащей в их основе концептуализации нарушений психического здоровья, а во-вторых, с точки зрения руководства клиническими исследованиями. упражняться.
«Первый подход, основанный на диагностических категориях, интуитивно понятен и оказался чрезвычайно полезным для повышения коммуникабельности и согласия между клиницистами [1].[…] Действительно, в психиатрии все чаще признается, что симптомы являются не только пассивным выражением общих основных болезненных процессов, но часто могут представлять собой активные агенты, которые способны спровоцировать их взаимное возникновение посредством динамических причинно-следственных взаимодействий [5, 6]. Например….”
Мы добавили раздел, в котором подробно описываем общую цель разработки новых методов анализа данных для психиатрии, а именно охват сложности клинических проявлений и обеспечение индивидуального подхода к клинической помощи.
«Клинические данные, представленные выше, указывают на два соображения, которые будут важны для разработки новых подходов к оценке и классификации пациентов. […] Есть надежда, что инструменты науки о данных позволят охватить сложность проблем психического здоровья и, в конечном итоге, помогут в индивидуальном подходе к клинической помощи [10] ».
Мы также предоставили более подробное описание возможностей сетевых подходов к изучению психопатологии с учетом ограничений, которые ранее были выделены для текущих размерных и категориальных подходов.
В частности, мы добавили раздел, чтобы описать основную вычислительную привлекательность подходов к сетевому анализу: а именно способность охарактеризовать широкие элементы общей структуры набора данных при сохранении высокодетализированной информации относительно отдельных переменных.
«Наука о сетях – это быстро развивающийся раздел математики, посвященный изучению графов, которые в широком смысле можно определить как структуры, состоящие из дискретных узлов, соединенных ребрами [12].[…] Например, склонность и индивидуальная переменная сильно опосредуют взаимосвязь между другими сетевыми переменными, может быть определена как центральность сети ».
Кроме того, мы добавили раздел, чтобы описать, как вычислительные преимущества сетевого анализа могут привести к лучшему пониманию нарушений психического здоровья.
«Применение сетевого анализа может оказать глубокое теоретическое и практическое влияние на изучение нарушений психического здоровья.[…] Обычно считается, что высокая центральность отражает важную причинную роль во влиянии на другие симптомы ».
Наконец, мы добавили раздел, чтобы предоставить конкретные примеры идей, которые в настоящее время генерируются путем применения методов сетевого анализа к расширенному фенотипу психоза.
«Сетевые подходы быстро набирают популярность, демонстрируя, что использование многомерной детализации клинических оценок может дать понимание, которое было бы упущено, если бы симптомы были объединены в диагнозы или измерения [17].[…] Наконец, с помощью сетевого анализа исследования показали, что клинические проявления, которые не обязательно специфичны для психоза, включая, в частности, аффективную дисрегуляцию, могут играть заметную роль во влиянии на наличие психотических переживаний (PLE) в подростковом возрасте. [21] ».
• Метод. Как было написано, было сложно понять обоснование конкретных методов и, в конечном итоге, значимость результатов. Оба рецензента подчеркнули это как серьезное ограничение.Сетевой анализ – это относительно новый набор методов, с которым многие читатели могут не быть знакомы. И даже для тех, кто знаком с этими методами, много важной информации упускается и / или описывается только в дополнительных материалах. Кроме того, у многих анализов отсутствует мотивация, а представленные метрики не имеют адекватного описания (например, что представляет собой сила и почему это важно?). Из-за этих проблем в его нынешней форме читателям будет сложно понять, что означают результаты и почему они важны.Также вызывает беспокойство стабильность решения.
Мы благодарим рецензентов за этот уместный комментарий. В самом деле, мы согласны с тем, что обоснование для нескольких процедур, описанных в разделе о методах, не было достаточно проработано, а некоторые методические детали недостаточно детализированы. Мы значительно реструктурировали несколько разделов методов, чтобы решить эти проблемы.
В частности, разделы, подробно описывающие процедуру топологического встраивания сети, были адаптированы для интеграции, а вводный раздел, подробно описывающий рациональные и цели проведения снижения размерности сети.Мы также добавили раздел, чтобы обосновать выбор использования только двух основных сетевых измерений для топологического вложения сетей.
Кроме того, мы добавили раздел, чтобы описать рациональную основу для вычисления корреляций между евклидовым расстоянием и силой корреляции, а также то, что лежит в основе гипотезы.
“Топологическое встраивание сети
Возможно, одна из основных проблем современных сетевых моделей связана с интуитивностью и интерпретируемостью результатов.[…] Кроме того, мы коррелировали топологическое встраивание симптомов в соответствии с двумя основными сетевыми измерениями в выборках, чтобы иметь оценку степени сходства сетевой структуры в выборках ».
Также полностью реструктурирован раздел, посвященный анализу теории графов. Мы добавили вводный раздел, в котором подробно описываются цели выполнения теоретического анализа графов в первую очередь. Более того, мы улучшили описание конкретных использовавшихся теоретических мер графов, как с точки зрения лежащей в основе рациональности, так и с точки зрения интерпретации каждой меры (т.е значение силы связности или центральности промежуточности) и конкретных алгоритмов, которые использовались для получения показателей. Теперь раздел гласит:
«Теория графов анализа продольных клинических путей
Пространственное вложение симптомов дало интуитивное представление об основных закономерностях взаимосвязи между симптомами. […] Такие продольные сетевые центры при последующем наблюдении можно концептуализировать как воронок психопатологии ».
[Примечание редакции: до принятия были предложены дальнейшие исправления, как описано ниже.]
Рукопись была улучшена, но есть одна существенная проблема, которую необходимо решить.
Мы хотели бы, чтобы вы представили трезвое и немного более полное обсуждение ограничений исследования, а также некоторые конкретные предложения для будущих исследований, направленных на устранение этих ограничений. Процитируя рецензента 3: «Я считаю, что было бы полезно расширить раздел об ограничениях исследования, чтобы указать, что исследование отражает первоначальную попытку решить сложные вопросы, рассматриваемые в относительно исследовательской манере.«
Мы благодарим рецензентов за этот уместный комментарий. Действительно, как это было сформулировано ранее, мы согласны с тем, что рукопись недостаточно отражала ни степень ограничений нашей работы, ни ее исследовательский характер. Мы значительно переформулировали и расширили раздел ограничений, чтобы решить эту проблему. В частности, по сравнению с предыдущей версией мы выделили дополнительные ограничения нашего подхода. Более того, мы решили объединить раздел об ограничениях и будущих направлениях, чтобы обеспечить более последовательное обсуждение будущей работы, которая будет необходима для устранения ограничений настоящего исследования.
Во-первых, мы подчеркиваем тот факт, что мы не проводили явного тестирования причинно-следственной связи в клинических путях, определенных нашим анализом как существенное ограничение нашей работы. По сравнению с предыдущей версией мы также добавляем ссылку, описывающую недавние методологические разработки, которые были предложены для реконструкции причинно-следственной связи во взаимодействиях между психиатрическими симптомами. Такие методы в основном применялись к данным, полученным с высоким временным разрешением, с использованием метода выборки опыта (ESM).Мы предполагаем, что в будущей работе можно будет попытаться применить такие методы для оценки причинно-следственной связи в клинических путях, имеющих гораздо более низкую временную динамику, такую как описанные в настоящем исследовании.
«С методологической точки зрения существенным ограничением является то, что мы не тестировали явным образом причинную природу лонгитюдных взаимодействий между симптомами. […] Такие методы потенциально могут быть плодотворно использованы для проверки причинно-следственной связи между продольными клиническими переменными, измеряемыми с гораздо более низким временным разрешением, как, например, анализы в настоящем исследовании.”
По сравнению с предыдущей версией, мы выделяем отсутствие персонализации сети как существенное ограничение работы. В частности, мы прямо заявляем, что реконструкция единой сети для всей выборки подразумевает, что интерпретации, касающиеся существования различных клинических путей, должны относиться ко всей выборке и, следовательно, не являются персонализированными. Мы подчеркиваем тот факт, что бедность предметной информации остается основным ограничением для существующих методов сетевого анализа, который ни в коем случае не рассматривается в настоящем исследовании.
“ Еще одним существенным ограничением является то, что для обеих популяций мы реконструировали единую сеть симптомов во всей выборке. […] Вопрос о том, как позволить методам сетевого анализа собирать достаточно индивидуализированную информацию для фактического информирования клинической практики, остается важной проблемой, которая ни в коем случае не решена в настоящем исследовании ».
По сравнению с предыдущей версией рукописи мы также добавили раздел, детализирующий наши взгляды на два многообещающих направления исследований, которые могут быть предложены для решения проблемы недостаточной персонализации текущих методов сетевого анализа.Мы предлагаем способы, которыми работы, представленные в настоящем исследовании, могут потенциально способствовать таким усилиям.
В частности, мы предлагаем использовать подход многослойной сети симптомов для анализа данных, собранных с помощью метода выборки опыта (ESM), который может позволить отображать персонализированную информацию о путях взаимодействия между различными клиническими переменными, которые происходят в повседневной жизни. . Более того, мы полагаем, что внедрение модерированного сетевого анализа может быть многообещающей перспективой для выявления предикторов специфичности на предметном уровне в структуре лонгитюдных сетей симптомов.
«На наш взгляд, по крайней мере, два текущих направления исследований являются особенно многообещающими с точки зрения увеличения персонализации методов сетевого анализа. […] Проверка таких гипотез в сетевой структуре должна, на наш взгляд, стать целью будущей работы ».
По сравнению с предыдущей версией рукописи, мы далее явно указали два дополнительных ограничения, которые мы выделили в процессе рецензирования. Такие ограничения относятся к наблюдению, что, несмотря на наши усилия, MLSN, представленный в исследовании, может оказаться слишком сложным для клинического перевода.Более того, мы предполагаем, что произвольность в выборе количества узлов и ребер является еще одной нерешенной проблемой в текущем анализе сети, которая тесно связана со сложностью получаемых сетей и является значительным ограничением по сравнению с традиционными диагностическими подходами на основе консенсуса.
“ Дополнительным существенным ограничением является то, что, хотя методы, предложенные в настоящей рукописи, могут способствовать повышению интерпретируемости психиатрических сетевых анализов, результаты, представленные в настоящей рукописи, могут оказаться слишком сложными для клинического перевода.[…] Такой произвол, возможно, представляет собой существенное ограничение текущего сетевого анализа по сравнению с традиционными диагностическими подходами, основанными на консенсусе ».
Наконец, мы подчеркиваем тот факт, что наш анализ ограничивался психопатологическими переменными, что, на наш взгляд, представляет собой существенное ограничение нашей работы. Действительно, мы считаем, что лежащие в основе нейробиологические процессы, которые потенциально могут быть захвачены обширным фенотипированием, проводимым как в когортах 22q11DS, так и в NEURAPRO, могут играть значительную роль во влиянии на клинические пути взаимодействия между симптомами.
С этой точки зрения мы предлагаем некоторые подходы, с помощью которых подход MLSN может быть использован для интеграции различных аспектов, таких как познание, генетика и нейробиология, которые участвуют в клинической эволюции людей на ранних стадиях психопатологии.
“ Наконец, существенным ограничением является то, что, несмотря на то, что обе когорты широко фенотипированы с нейрокогнитивной и нейробиологической точки зрения, анализы, представленные в настоящем исследовании, были ограничены психопатологическими переменными.[…] Прагматический подход мог бы заключаться в том, чтобы исследовать, связаны ли лежащие в основе нейробиологические механизмы с различиями в структуре сети продольных симптомов, и, следовательно, повысить точность прогнозирования на основе графа-диффузии ».
https://doi.org/10.7554/eLife.59811.sa2% PDF-1.6 % 978 0 объект > эндобдж xref 978 67 0000000016 00000 н. 0000002791 00000 н. 0000002975 00000 н. 0000003019 00000 н. 0000003452 00000 н. 0000003605 00000 н. 0000003826 00000 н. 0000004397 00000 н. 0000005342 00000 п. 0000006522 00000 н. 0000006768 00000 н. 0000023109 00000 п. 0000035488 00000 п. 0000211589 00000 н. 0000211853 00000 п. 0000214553 00000 п. 0000220517 00000 н. 00002
00000 н. 0000293901 00000 н. 0000297812 00000 н. 0000301122 00000 н. 0000305580 00000 н. 0000312030 00000 н. 0000315041 00000 н. 0000318100 00000 н. 0000318175 00000 н. 0000318330 00000 н. 0000318418 00000 н. 0000318463 00000 н. 0000318548 00000 н. 0000318592 00000 н. 0000318764 00000 н. 0000318906 00000 н. 0000318950 00000 н. 0000319089 00000 н. 0000319226 00000 н. 0000319339 00000 н. 0000319382 00000 н. 0000319493 00000 п. 0000319595 00000 н. 0000319638 00000 п. 0000319681 00000 п.