Содержание

Журнал трехступенчатого контроля по охране труда, образец

В ст. 212 ТК РФ и Положении о системе управления охраной труда на рабочих местах (утв. приказом Минтруда от 19.08.2016 г. № 438н) сказано, что работодатель должен осуществлять контроль за условиями труда. Наиболее эффективный способ реализации этой обязанности – это установление на предприятии трехступенчатого контроля по охране труда. Результаты проведения данного контроля отражают в специальном журнале.

Положение о трехступенчатом контроле по охране труда

Трехступенчатый контроль осуществляется следующим образом:

  • Первая ступень – это контроль условий труда непосредственно на рабочем месте (до начала или во время смены), который осуществляется мастерами, бригадирами и начальниками участков. На этой ступени контроль осуществляется наиболее часто (каждый день).

  • Вторая ступень – контроль, который осуществляется с привлечением специалиста по охране труда (ОТ) и начальников структурных подразделений. Он проводится согласно принятому графику, как правило, еженедельно. На данном уровне проверяется соблюдение правил техники безопасности (ТБ) работниками, соблюдение принятых локальных норм по ТБ и ОТ, проверяется состояние и исправность оборудования, средств защиты, соблюдение правил работы с опасными веществами, а также рассматривается качество контроля, проводимого на первой ступени.

  • Третья ступень – это проверка условий на рабочих местах в целом по предприятию. Она проводится комиссией во главе с руководителем компании. Комиссией проверяется организация контроля на предыдущих ступенях, проводятся расследования несчастных производственных случаев и т.п. По итогам проверки составляется акт, с внесением в журнал трехступенчатого контроля всех выявленных нарушений.

Для того, чтобы установить четкий порядок организации проверки на всех трех ступенях, утверждается Положение о трехступенчатом контроле по охране труда. Данный документ разрабатывается работодателем самостоятельно. В нем учитываются все нюансы работы предприятия. Можно не издавать отдельный локально-нормативный акт, а включить соответствующий раздел в Положение по охране труда, действующее в организации.

Журнал трехступенчатого контроля по охране труда

Форма контрольного журнала законом не утверждена, но рекомендованный бланк отражает все необходимые сведения о проверке. Предприятие может самостоятельно разработать форму данного журнала.

В журнале отражаются следующие сведения:

  • Дата проведения проверки.

  • Номер ступени, которая проводила проверку.

  • Выявленные недочеты или их отсутствие.

  • Мероприятия, которые необходимо провести, и ответственное за их проведение лицо.

  • Лицо, которое проводило проверку.

  • Отметки о выполнении указанного мероприятия.

На обложке журнала указывают полное наименование организации, структурное подразделение, даты начала и окончания ведения журнала.

Страницы журнала нумеруют и прошивают. Запись о количестве страниц заверяется подписью ответственного за ведение журнала лица и печатью.

Заполнение журнала трехступенчатого контроля по охране труда

Заполнение журнала можно производить несколькими способами:

  • отмечая только выявленные недостатки;

  • отражая все проверки, включая те, при которых не было выявлено никаких недочетов.

Можно вести единый журнал для всех ступеней проверки либо завести несколько – отдельные для каждой ступени или цеха (участка).

Также возможен вариант, когда мероприятия третьей ступени не отражают в журнале, а составляют акт проверки и приказ по ее результатам.

Журнал должен заполняться только ручкой, в записях не должно быть исправлений и помарок.

Обратите внимание! При расследовании несчастного случая на производстве данные, указанные в журнале, должны совпадать с данными в акте расследования. Например, если утром при проверке отмечено, что у работников отсутствует что-либо из средств индивидуальной защиты, то это должно быть указано и в акте (при условии, что к моменту несчастного случая, это не было исправлено, о чем должна стоять отметка). В случае, когда проверку проводит сторонняя комиссия, журнал проверяется в первую очередь.

Журнал трехступенчатого контроля по охране труда отражает проведение проверки условий труда на рабочих местах. Для упорядочения ведения журнала издается соответствующее положение, в котором прописывается порядок проведения проверок на всех ступенях. Форма журнала не утверждена законодательно, поэтому работодатель может дополнить ее необходимыми ячейками или разработать свою.

Журнал трехступенчатого контроля по охране труда

Работодатель самостоятельно разрабатывает документ, регулирующий осуществление трехступенчатого контроля охраны труда в организации. Порядок проверки состояния охраны труда на всех трех ступенях фиксируется в Журнале трехступенчатого контроля по охране труда. Несмотря на то, что ведение Журнала трехступенчатого контроля обязательно в школе, ДОУ и любом ином учреждении, его форма не утверждена и разрабатывается организациями самостоятельно. В бланке журнала рекомендуется заполнять необходимые для контроля соблюдения требований охраны труда сведения о трехступенчатой проверке.

В Журнал трехступенчатого контроля за состоянием охраны труда как в школе, ДОУ или в иной организации и учреждении должны быть внесены дата проведения проверки и номер ступени, которая проводила проверку. Все недочеты, выявленные в ходе проверки, как и их отсутствие, вносятся в журнал 3-х ступенчатого контроля. В документе ведется запись мероприятий, которые необходимо провести, и назначается ответственное за их проведение лицо. Лицо, проводившее проверку, ставит подпись к соответствующей записи в журнале трехступенчатой проверки и делает отметки о выполнении.

Журнал


трехступенчатого контроля за состоянием охраны труда

 


На лицевой стороне представленного образца журнала трехступенчатого контроля за состоянием охраны труда указывается уставное наименование организации и дата начала ведения журнала. Количество прошитых и пронумерованных страниц Журнала заверяется печатью организации и подписью ответственного лица на последней странице журнала. Все ступени проверки можно фиксировать в один журнал или же завести отдельную книгу для каждой ступени. В отдельных случаях контроль третьей ступени не отражается в журнале. По данному мероприятию составляют акт проверки и приказ по ее результатам.



Предложенная выше форма Журнала трехступенчатого контроля является образцом составления журнала по контролю охраны труда на трех уровнях, а также подходит для применения в разных организациях, учреждениях, школах и детских садах, офисах и на предприятиях. В журнале не должно быть помарок и исправлений, запись ведется только ручкой. Данные, внесенные в Журнал трехступенчатого контроля, должны совпадать с данными в акте расследования несчастного случая на производстве. Порядок ведения Журнала трехступенчатого контроля регламентируется специальным положением, изданным в организации и уточняющим порядок проведения проверок условий труда на рабочих местах.

Литература

Предлагаем Вашему вниманию учебные пособия и справочную литературу

Пожалуйста, стоимость и наличие уточняйте по нашим контактным данным

Аптечка первой помощи

Вахтенный журнал крановщика

Гигиенич.требов.к персон.ЭВМ и орг-ии работ

Гигиенические требования к условию труда женщин

Гигиенические требования к естественному искуственному освещению

Гигиенические требования к микроклимату производственных помещений

Гигиенические требования к организации раб.на копир.множит.технике

Журнал контроля за состоянием охраны труда и противопожарной безопасности

Журнал осмотра грузозахватных приспособлений

Журнал по электробезопасности

Журнал предписаний работников службы охраны труда

Журнал проверки противопожарного состояния помещения перед закрытием

Журнал профилактического ремонта электрооборудования

Журнал регистрации вводного инструктажа

Журнал регистрации инструктажа на рабочем месте

Журнал регистрации противопож. инструктажа на рабочем месте

Журнал технического обслуживания огнетушителей

Журнал трехступенчатого контроля знаний (1 ступень)

Журнал трехступенчатого контроля знаний (2 ступень)

Журнал трехступенчатого контроля знаний (3 ступень)

Журнал учета выдачи инструкций ОТ

Журнал учета занятий по гражданской обороне

Журнал учета занятий по ОТ

Журнал учета и осмотра съемных грузозахватных приспособлений и тары

Журнал учета и осмотра съемных грузозахватных приспособлений и тары

Журнал учета и содержания средств защиты

Журнал учета инструкций по ОТ

Журнал учета огнетушителей

Журнал учета присвоения группы 1 по электробезопасности неэлектротехнического персонала

Журнал учета проверки знаний лиц обслуживающих грузоподъемные машины

Журнал учета работ по нарядам и распоряжениям

Инструкция по организации и проведение работ повышенной опасности

Инструкция по применению и испытанию средств защиты

Как планировать мероприятия по ГО и ЧС на объекте

Книга приема и сдачи дежурств

Личная карточка учета выдачи средств индивидуально защиты

Межотраслевая инструкция по оказанию 1 помощи

Межотраслевая инструкция по оказанию 1 помощи

Межотраслевые правила по ОТ (ПБ) при экспл.электроуст.

Межотраслевые правила по ОТ при работе на высоте

Межотраслевые правила по охране труда при погрузо-разгурочных работ и размещении грузов

Методические рекомендации по разработке государственных нормативных требований охраны труда

Методические рекомендации по разработке инструкций по ОТ для работников

Методическое пособие лифтера, оператора

О мерах по улучшению условий и ОТ от 26.08.1995 №843

Об отходах производства и потребления

Об утверждении перечней вред. и опасн. произв.ф

Об утверждении рекомендаций по планированию мероприятий по охране труда от 27.02.95 №11

Оборудование грузоподъемное.Общие технические требования

Общероссийский класификатор профессий рабочих, должностей служащих и тарифных разрядов

Оказание экстренной помощи до прибытия врача

Органинизация обучения безопасности труда.Общие положения ГОСТ 12.0.004-90 ССБТ

ПБ систем газораспределения и газопотребления

Первая медецинская помощь в чрезвычайных ситуациях

Питьевая вода гигиенические требования к качеству воды СанП 2.1.4.1034.01

Пособие к изучению ПУ и БЭ паровых и водогрейных котлов

Правила охраны труда на торговых складах,базах и холодильниках

Правила технической эксплуатации тепловых энергоустановок

Правила технической эксплуатации электроустановок потребителей

Правила устройства и безопасная эксплуатация сосудов, работающих под давлением

Правила устройства и безопасная эксплуатация трубопроводов пара и горячей воды

Правила устройства и безопасной эксплуатации грузоподъемных кранов-манипуляторов

Правила учета тепловой энергии и теплоносителя

Предельно допустимые концентрации вред.вещ. в воздухе раб.зоны

Протокол заседания комиссии поп роверке знаний

ПУ и БЭ грузоподъемных кранов

ПУ и БЭ котлов

ПУ и БЭ лифтов

ПУ и БЭ строительных подъемников

ПУ и БЭ технолог.трубопроводов

ПУЭ (7 редакция-утв.главы)

Списки №1 и 2 производств,работ,профессий,должностей,дающих право на льготное пенсионное обеспечение

Справочник по ОТ в РФ

Типовая инстр. по ОТ для раб.выполн.погруз.-разгр. и склад.работы

Типовая инстр.по ОТ для зав.складом

Типовая инструкция по ОТ для электромонтеров

Типовая инструкция по охране труда для водиделей автопогрузчиков

Типовая инструкция по охране труда для водителей электропогрузчика

Типовая инструкция по охране труда для комплектовщика автоматизированного склада ТИ РМ 003-2000

Требования к регистраторам параметров грузоподъемных кранов РД 10-399-01

Трудовой кодекс РФ

Чрезвычайные ситуации.Краткая характеристика и классификация

Экзаменационные билеты для самоходных машин кат. С

Библиотека журналов по охране труда

ЖУРНАЛЫ БАЗОВЫЕ

 

Ж 1 Журнал регистрации инструктажа на рабочем месте (ГОСТ 12.0.004-90)

Ж 1/1 Журнал регистрации инструктажа на рабочем месте (с графой “№ инструкции”)

Ж 2 Журнал учета присвоения группы I по электробезопасности неэлектрическому персоналу.

Ж 3 Журнал учета проверки знаний, норм и правил работы в электроустановках.

Ж 4 Журнал трёхступенчатого контроля (1 ступень).

Ж 5 Журнал трёхступенчатого контроля (2 ступень).

Ж 6 Журнал трёхступенчатого контроля (3 ступень).

Ж 7 Журнал трехступенчатого контроля (1 и 2 ступень).

Ж 8 Журнал трёхступенчатого контроля (объединённый).

Ж 9 Журнал вводного инструктажа.

Ж 10 Журнал учёта и содержания средств защиты и приспособлений.

Ж 11 Журнал учёта, проверки и испытания электроинструмента и вспомогательного оборудования к нему.

Ж 12 Журнал записи результатов проверки инструментов и предохранительных приспособлений.

Ж 13 Журнал регистрации несчастных случаев на производстве.

Ж 14 Журнал учёта контрольных листов.

Ж 15 Оперативный журнал.

Ж 16 Журнал учёта выдачи инструкций по охране труда.

Ж 17 Журнал учета инструкций по охране труда.

Ж 18 Журнал учёта занятий по охране труда.

Ж 19 Журнал контроля за состоянием охраны труда и противопожарной безопасности.

Ж 20 Журнал авторского надзора за строительством

Ж 21 Журнал инструктажа по охране труда для лиц сторонних организаций.

Ж 22 Журнал по технике безопасности (повторный).

Ж 23 Журнал проверки знаний Правил технической эксплуатации тепловых энергоустановок.

Ж 24 Журнал для оперативно-ремонтного персонала.

Ж 25 Журнал по учету противоаварийных, противопожарных тренировок.

Ж 26 Журнал регистрации инструктажа по пожарной безопасности.

Ж 27 Журнал аварийных тренировок.

Ж 28 Журнал строительной машины.

Ж 29 Журнал грузоподъемной машины.

Ж 30 Журнал крановщика самоходного автомобильного крана.

Ж 31 Журнал учета, проверки и содержания электрозащитных средств, приспособлений, ручного электроинструмента и сварочных аппаратов.

Ж 32 Журнал регистрации технического состояния аккумуляторных батарей.

Ж 35 Вахтенный журнал крановщика.

Ж 36 Журнал профилактического ремонта электрооборудования.

Ж 40 Журнал учета проверки знаний норм и правил.

Ж 41 Журнал учета и осмотра такелажных средств, механизмов и приспособлений.

Ж 42 Журнал контрольных проверок манометров.

Ж 43 Книга учета и освидетельствования сосуда.

Ж 44 Журнал приемки и осмотра лесов и подмостей.

Ж 45 Журнал технического освидетельствования тары.

Ж 46 Журнал приема-выдачи электропогрузчиков.

Ж 47 Книга приема и сдачи дежурства.(Утв. Приказом МВД РФ № 288-99)

Ж 48 Сменный журнал операторов котельной.

Ж 49 Паспорт газорегуляторной установки.

Ж 50 Журнал учета работ по нарядам и распоряжениям.

Ж 51 Журнал учета газоанализаторов.

Ж 52 Журнал регистрации работ по техническому обслуживанию и ремонту автоматических установок пожаротушения, дымоудаления и пожарно-охранной сигнализации.

Ж 53 Паспорт автоматических установок пожаротушения, дымоудаления, охранной, пожарной и пожарно-охранной сигнализации.

Ж 57 Журнал учета дефектов и неполадок электрооборудования.

Ж 60 Журнал учета и периодического осмотра съемных грузозахватных приспособлений и тары.

Ж 63 Журнал по проведению инструктажей с водительским составом по безопасности движения.

Ж 64 Журнал учета выхода автомобиля на линию и возврата с линии.

Ж 65 Журнал предрейсового осмотра водителей.

Ж 66 Журнал учета движения путевых листов.

Ж 67 Журнал учета ДТП (сведения подлежащие сверке с ОВД).

Ж 68 Журнал учета ДТП (сведения внутреннего характера).

Ж 69 Журнал учета занятий по гражданской обороне.

Ж 70 Журнал ежесменного осмотра лифтов.

Ж 71 Журнал учета и выдачи ключей от машинных и блочных помещений лифтов.

Ж 72 Журнал записи нарядов и выполнения работ.

Ж 74 Аккумуляторный журнал.

Ж 75 Журнал бетонных работ.

Ж 76 Журнал сварочных работ и антикоррозийной защиты.

Ж 77 Журнал выдачи защитных средств.

Ж 78 Общий журнал работ.

Ж 79 Журнал производства работ по строительству инженерных сооружений.

Ж 80 Журнал осмотра помещений перед их закрытием.

Ж 81 Журнал учета огнетушителей.

Ж 82 Журнал технического обслуживания огнетушителей.

Ж 83 Журнал входного учета контроля качества получаемых деталей, материалов и оборудования

Ж 84 Журнал учета выдачи нарядов- допусков на выполнение работ повышенной опасности

Ж 85 Журнал ухода за бетоном

Ж 86/1 Журнал технического обслуживания и ремонта арматуры

Ж 87 Журнал по Вашему макету

Ж 87/1 Журнал учета проверок заземления электрооборудования

Ж 89 Журнал монтажных работ

Ж 90 Журнал производства работ

Ж 91 Журнал регистрации противопожарного инструктажа на рабочем месте

Ж 93 Журнал регистрации вводного противопожарного инструктажа

Ж 94 Журнал инспекционных проверок

Ж 95 Журнал учета проведения слесарных работ

Ж 96 Журнал учета и выдачи инструмента

Ж 97 Журнал учета показателей температуры и влажности

Ж 98 Журнал учета потребления электроэнергии

Ж 99 Журнал учета нарушения трудовой дисциплины

Ж 100 Санитарный журнал

Ж 101 Книга приема и выдачи ключей

Ж 102 Журнал регистрации проверки знаний работников по охране труда

Ж 103 Журнал учета первичных средств пожаротушения

Ж 104 Журнал регистрации нарядов-допусков на проведение газоопасных работ

Ж 105 Журнал учета и осмотра стропов

 

СТРОИТЕЛЬСТВО

110. Буровой журнал

111. Вахтенный журнал машиниста подъёмника

112. Вахтенный журнал для рабочих люльки, работающих на подъемнике

113. Вахтенный журнал крановщика (машиниста) крана-трубоукладчика

114. Вахтенный журнал крановщика кранов мостового типа

115. Вахтенный журнал оператора (машиниста) грузоподъемного крана-манипулятора

116. Журнал бетонирования стыков Ф-52

117. Журнал испытаний (контроля прочности бетона)

118. Журнал осмотра грузовых канатов

119. Журнал производства бетонных и железобетонных работ

120. Журнал производства земляных работ

121. Журнал регистрации поступления цемента

122. Журнал учета и периодических осмотров механизмов и агрегатов

123. Журнал выдачи предохранительных поясов

124. Журнал вызова технических специалистов и регистрации выполненных работ

125. Журнал регистрации паспортов качества (бетоны)

126. Журнал бурения скважин, разбуривания уширений в основании скважин или оболочек

127. Журнал вибропогружения свай-оболочек (свай)

128. Журнал выполнения монтажных соединений на болтах с контролируемым натяжением

129. Журнал забивки свай

130. Журнал замечаний по качеству выполненных работ

131. Журнал замечаний по качеству проектно-сметной документации

132. Журнал замоноличивания монтажных стыков и узлов

133. Журнал изготовления и освидетельствования арматурных каркасов для бетонирования монолитных и сборных железобетонных конструкций на строительстве (реконструкции)

134. Журнал инженерного сопровождения объекта строительства

135. Журнал инъецирования каналов арматурных пучков

136. Журнал испытания абразивного и эльборового инструмента

137. Журнал испытания битумного сырья

138. Журнал испытания вязких нефтяных битумов и полимерно-битумных вяжущих (ПБВ)

139. Журнал испытания жидких нефтяных битумов

140. Журнал испытания контрольных образцов бетона

141. Журнал испытания минерального порошка

142. Журнал испытания образцов асфальтобетонной смеси, взятых из смесителя

143. Журнал испытания образцов, взятых из асфальтобетонного покрытия

144. Журнал испытания песка (отсевов дробления)

145. Журнал испытания цемента

146. Журнал испытания щебня, гравия, песчано-гравийной смеси

147. Журнал контрольной тарировки ключей для натяжения высокопрочных болтов

148. Журнал контроля качества бетона в зимних условиях

149. Журнал контроля качества производства работ по заделке и герметизации стыков полносборных зданий

150. Журнал контроля плотности земляного полотна

151. Журнал мостового крана

152. Журнал натяжения арматурных пучков

153. Журнал определения зернового состава и содержания битума в асфальтобетонной смеси

154. Журнал осмотра резервуаров

155. Журнал по водоподготовке в котельной

156. Журнал по сварке трубопроводов

157. Журнал погружения столбов в скважины

158. Журнал погружения шпунта

159. Журнал подводного бетонирования

160. Журнал постановки высокопрочных болтов

161. Журнал приготовления органических вяжущих в окислительных установках СИ-204, Т-309, Т-310

162. Журнал проверки загазованности помещений и колодцев

163. Журнал производства работ по втрамбовыванию щебня в дно котлована

164. Журнал производства работ по вытрамбовыванию котлованов

165. Журнал производства работ при выполнении торкрет-бетонных покрытий

166. Журнал производственного операционного контроля качества строительно-монтажных работ

167. Журнал работ по гидроизоляции, антикоррозийной защите, окраске стальных конструкций

168. Журнал работ по монтажу строительных конструкций

169. Журнал ревизии змеевиков

170. Журнал ревизии и ремонта гарнитуры , металлоконструкций и строительной части печи

171. Журнал регистрации заключений экспертизы промышленной безопасности

172. Журнал регистрации нарядов-допусков в сталеплавильном производстве

173. Журнал регистрации отбора проб строительных материалов

174. Журнал регистрации отказов при взрывных работах

175. Журнал регистрации поступления арматурной стали

176. Журнал регистрации результатов контроля за добавками для бетона

177. Журнал регистрации температуры в пропарочных камерах

178. Журнал регистрации технического состояния и выпуска на линию транспортных средств

179. Журнал суточных приказов на доставку нефтепродуктов

180. Журнал сушки футеровки

181. Журнал тахеометрической съемки

182. Журнал термической обработки сварных соединений трубопровода

183. Журнал технического нивелирования

184. Журнал учета движения средств измерений

185. Журнал учета испытаний взрывчатых материалов

186. Журнал учета обследования тупиковых упоров

187. Журнал учета поступивших нефтепродуктов

188. Журнал учета ремонта тупиковых упоров

189. Журнал учета средств подмащивания

190. Журнал учета тепловой энергии и теплоносителя у потребителя в водяных системах теплопотребления

191. Журнал учета тепловой энергии и теплоносителя у потребителя в паровых системах теплопотребления

192. Журнал физико-механических свойств грунтов

193. Журнал эксплуатации и ремонта предохранительных устройств

194. Оперативный журнал геодезических работ

195. Производства геодезических работ

196. Ремонтный журнал (котельные)

197. Сменный журнал работы установок и аппаратов

 

ДОКУМЕНТАЦИЯ И БУХУЧЕТ

198. Журнал входящей информации

199. Журнал кассира-операциониста КМ-4

200. Журнал комплектования счетов

201. Журнал пустографок

202. Журнал регистрации внутренних документов

203. Журнал регистрации входящих документов

204. Журнал регистрации авансовых отчётов

205. Журнал регистрации документов

206. Журнал регистрации исходящих документов

207. Журнал регистрации накладных

208. Журнал регистрации отправляемых документов

209. Журнал регистрации платёжных ведомостей ф. Т-53А

210. Журнал регистрации показаний суммирующих денежных и контрольных сётчиков ККМ, работающих без кассира-операциониста КМ-5

211. Журнал регистрации приёма на работу

212. Журнал регистрации приказов

213. Журнал регистрации приказов по кадрам

214. Журнал регистрации приказов по основной деятельности

215. Журнал регистрации приходных и расходных кассовых документов (КО-3)

216. Журнал регистрации товарно-транспортных накладных

217. Журнал регистрации хозяйственных договоров

218. Журнал учёта взысканий и поощрений

219. Журнал учёта выданных доверенностей

220. Журнал учёта командировочных удостоверений

221. Журнал учёта личных карточек Т-2

222. Журнал учёта оргтехники

223. Журнал учёта принятых факсограмм

224. Журнал учёта рабочего времени

225. Журнал учёта сведений составляющих коммерческую тайну

226. Журнал учёта сверхурочных работ

227. Журнал учёта производственного обучения

 

ТРАНСПОРТ

228. Журнал осмотра (проверки) транспортных средств автоколонны

229. Журнал учета выезда-заеда автомашин

230. Журнал учета выполнения технического обслуживания автомобилей

231. Журнал учета использования транспортных средств

232. Журнал учета неисправностей автомобилей

233. Журнал учета пломбирования спидометров и их приводов

 

ПОЖАРНАЯ БЕЗОПАСНОСТЬ

234. Регистрации вторичного противопожарного инструктажа (ф. то же что и вводного)

235. Журнал регистрации повторного и внепланового инструктажей по технике безопасности и пожарной безопасности

236. Проверки знаний в объеме пожарно-технического минимума

237. Осмотра противопожарного состояния помещений перед их закрытием

238. Распределения огнетушителей

239. Журнал электромонтера охранно-пожарной сигнализации

240. Журнал проведения испытаний и перезарядки огнетушителя

 

РАЗНЫЕ

241. Журнал доставок

242. Журнал ознакомления с ППР, приказами, распоряжениями

243. Журнал передачи смен

244. Журнал регистрации заявок

245. Журнал технического обслуживания и ремонта оборудования

246. Журнал учета вывоза отходов

247. Журнал учета выдачи наряд-заданий на смену

248. Журнал учета выдачи удостоверений о проверке знаний требований охраны труда

249. Журнал учета дефектов

250. Журнал учета мероприятий по контролю

251. Журнал учета контроля производимой продукции

252. Журнал учета оборудования

253. Журнал учета отходов

254. Журнал учета разборов

255. Журнал учета результатов входного контроля

3 шага к созданию эффективной политики управления журналами

Вы на дежурстве. Вы просыпаетесь посреди ночи у мобильного телефона в безумной тиске SMS. Вы получаете сотни сообщений от службы ведения журнала вашей компании: запись записывается в базу данных, код выполняется, запускается новый контейнер и так далее. Ни одно из этих сообщений не имеет для вас значения. Вы просто выключаете телефон и снова засыпаете.

На следующий день вы приходите в офис и обнаруживаете, что половина стоек в вашем центре обработки данных отключилась ночью.Тысячи клиентов остались без обслуживания. Вы так и не получили ФАТАЛЬНОЕ сообщение. Как ты мог? Ваш телефон был выключен. Тем не менее, ты виноват. Вам повезет, если вы сохраните свою работу. Вы немного подглядываете, только чтобы узнать, что какой-то младший системный администратор сделал так, что служба регистрации пересылала ВСЕ сообщения журнала на ваш телефон независимо от степени серьезности.

В тот же день вас вызовут в отдел кадров. Персонал отдела кадров присутствует; и твой босс тоже. Ваш начальник спрашивает вас, о чем вы думали, когда выключили телефон во время звонка.Ваша единственная защита – это то, что телефон сводил вас с ума.

В комнате тишина. Наконец, сотрудник отдела кадров спрашивает вашего начальника: «Почему его завалили звонками? Какова ваша политика ведения журналов? »
Ваш начальник смиренно отвечает: «У нас его нет».


Если вы думаете, что этот сценарий уникален, подумайте еще раз. Многие компании не применяют политику ведения журналов, пока не станет слишком поздно.

Политика ведения журналов в масштабе предприятия дает компании согласованность и надежность, необходимые для предоставления важной информации для правильной работы.Кроме того, это хорошая окупаемость инвестиций.

Реализация политики ведения журнала в масштабе предприятия – это трехэтапный процесс: установка политики; сообщить об этом всей компании; затем, как только политика вступит в силу, приведите ее в исполнение.

Позвольте мне уточнить.

Установление политики ведения журнала

Когда дело доходит до создания политики ведения журнала, есть два хороших практических правила:

  • Чем меньше, тем лучше
  • Будьте проще

Эффективная политика краткая, прямая и понятная.Когда политика становится слишком сложной, люди либо забывают тонкости, либо просто решают полностью игнорировать правила.

Определение уровней журнала

Ведение журнала состоит из двух частей: отправка и получение записей. Что касается отправки записей журнала, хорошей политикой является определение каждого уровня ведения журнала и того, когда следует использовать тот или иной уровень.

Уровень Описание Пример Заинтересованные стороны
ОТЛАДКА Информация для программистов и разработчиков систем журнал.отладка ("ввод функции foo ()") Лица, обслуживающие приложение или систему, которым необходимо детальное понимание работы кода, обычно разработчики
ИНФОРМАЦИЯ Информация, описывающая рабочие события log.info (JSON.stringify (eventData)) Лица, контролирующие работу приложения или системы: разработчики, Q / A персонал, системные администраторы
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ Информация, указывающая на опасное состояние журнал.warn («Недостаточно памяти, текущее использование: 15,9 ГБ, максимальная емкость: 16 ГБ») Лица, контролирующие работу приложения или системы: разработчики, Q / A персонал, системные администраторы
ОШИБКА Информация, описывающая ошибку приложения или системы log.error (JSON.stringify (исключение)) Лица, контролирующие работу приложения или системы: разработчики, Q / A персонал, системные администраторы
FATAL Информация о существовании катастрофического состояния журнал.фатальный ("Регион US-WEST-1 недоступен))" Лица, ответственные за текущее состояние и правильную работу приложения или системы: разработчики, персонал службы контроля и проверки, системные администраторы, управление операциями

Таблица 1: Уровни журнала с описанием, примером и соответствующими сторонами

После определения использования уровня журнала необходимо определить политику для хранения данных журнала.

Определение ограничений хранения

Типичный образец для компаний, использующих ведение журнала, состоит в том, что они хотят регистрировать все.Однако постоянное хранение всего без ограничений сопряжено с риском. Файлы журнала могут разрастаться настолько, что занимают все доступное дисковое пространство. Тем не менее, может быть веская причина для хранения информации об ошибках на хост-машине – например, чтобы сделать информацию легко доступной в источнике при проверке неисправной машины. Таким образом, разумная политика хранения состоит в том, чтобы собирать информацию об ошибках непосредственно на машине, генерирующей ошибку, в дополнение к регистрации всех уровней журнала с помощью масштабируемой службы ведения журнала.Кроме того, другая часть политики – хранить данные в соответствии с уровнем журнала. Например, отправка данных WARNING и ERROR в репозиторий, где может быть выполнен прогнозный анализ.

Определение политики доступа и уведомлений

Получение данных журнала зависит от операционных потребностей и политики безопасности рассматриваемой компании. Что касается уведомлений, мы не хотим иметь сценарий, подобный описанному в начале этой статьи. Слишком много информации превратится в шум.Таким образом, политика уведомлений должна отвечать на простые вопросы: кто получает уведомления о чем и как происходит уведомление?

Те же вопросы можно задать для доступа к информации журнала. В журналах хранится много конфиденциальной информации, полезной для тех, кто имеет злые намерения. Тем не менее, многие компании рассматривают данные журналов как информацию, которая является «всего лишь некоторой информацией о наших системах». Знающие понимают иначе. Таким образом, наличие политики, регулирующей доступ к журналам, имеет решающее значение.Просто спросите тех, кто занимается ИТ-управлением, кто изо всех сил пытается обеспечить соответствие PCI-DSS на постоянной основе.

Сообщение о политике ведения журнала

Заставить сотрудников обратить внимание на любую политику, не говоря уже о такой неоднозначной, как ведение журнала, – непростая задача. Тем не менее, чтобы политика регистрации была эффективной, ее необходимо знать.

Лучший способ сообщить о политике ведения журнала – создать сообщение, которое побудит сотрудников узнать о политике. После определения сообщение необходимо многократно публиковать.Такое общение требует большого творчества. Сообщение может иметь форму списка, опубликованного во внутренней сети ИТ-отдела, под названием «7 фактов в политике ведения журнала, которые поразят ваших друзей и впечатлят ваших родственников». Или это может быть объявление начальника отдела в начале еженедельного совещания по ИТ-операциям.

Применение политики ведения журнала

После того, как политика была определена и передана, ее необходимо применить. Самый простой способ обеспечить соблюдение политики ведения журнала – максимально ее автоматизировать.На уровне кода это означает, что ведение журнала встроено в базу кода и инструменты программирования, которые используют разработчики в компании. Например, с помощью таких приемов, как декораторы Python, аннотации Java или атрибуты NET для автоматической генерации событий журнала – например, BeforeSave и AfterSave . Кроме того, вы можете создать набор подключаемых модулей ведения журнала, которые можно добавить в интегрированную среду разработки (IDE) разработчика.

Другой способ – заставить кого-нибудь из ИТ-отдела добровольно стать специалистом по политике.На уровне команды Policy Wonk берет на себя ведущую роль, обеспечивая поддержку политики ведения журнала в процессе проверки кода и как часть вскрытия DevOps. На уровне отделов Policy Wonk может предоставить экспертизу при предварительном обзоре.

Еще один удивительно эффективный способ обеспечения соблюдения политики – использование знаков признания. Да, техника немного иронична, но те из нас, кто нарушил ночную сборку, могут засвидетельствовать, что Build Breaker Trophy работает. Людям нравится признание.Присуждение награды за поддержку политики лесозаготовок может показаться немного маловажным. Но это работает.

Человек в роли Политического Вонка должен быть сторонником авторитарности. Человек должен побуждать других следовать данной политике, а не становиться грубой силой. Цель состоит в том, чтобы заставить людей подчиняться, а не соглашаться. Без желания подчиняться люди просто вернутся к старому поведению.

Собираем все вместе

Внедрение простой и понятной политики ведения журналов – важный и рентабельный шаг к улучшению управления журналами на предприятии.Однако ключом к поддержанию долгосрочной политики ведения журнала является желание предприятия изменить курс, чтобы соответствовать имеющимся условиям. Изменится технология ведения журнала, как и объем ведения журнала. Самое важное – это взять на себя обязательство на протяжении всей ИТ-операции иметь культуру, поддерживающую политику ведения журналов, и иметь гибкость для изменения политики в соответствии с новыми требованиями, которые появятся на горизонте.

Узнайте, как Rapid7 может помочь вам в ведении журнала. Ознакомьтесь с нашим решением для ИТ-операций InsightOps.

Используйте потоки бизнес-процессов в Dynamics 365 Customer Engagement (on-premises)

  • 11 минут на чтение

В этой статье

Этот раздел относится к Dynamics 365 Customer Engagement (on-premises). Если вы онлайн-пользователь, см. Обзор потоков бизнес-процессов в документации Power Automate.

Вы можете помочь обеспечить единообразный ввод данных и выполнение одних и тех же действий при каждой работе с клиентом, создав последовательность бизнес-процессов. Например, вы можете захотеть создать поток бизнес-процессов, чтобы все обрабатывали запросы на обслуживание клиентов одинаково, или потребовать от людей утверждения счета перед отправкой заказа. В потоках бизнес-процессов используется та же базовая технология, что и в других процессах, но предоставляемые ими возможности сильно отличаются от других функций, использующих процессы.Чтобы узнать, как создать или изменить последовательность бизнес-процессов, см. Создание последовательности бизнес-процессов.

Посмотрите короткий видеоролик (4:49) о потоках бизнес-процессов.

Зачем нужны потоки бизнес-процессов?

Потоки бизнес-процессов служат руководством для людей при выполнении работы. Они обеспечивают оптимизированный пользовательский интерфейс, который ведет людей через процессы, определенные их организацией для взаимодействий, которые необходимо довести до какого-либо заключения. Этот пользовательский интерфейс можно настроить так, чтобы люди с разными ролями безопасности могли иметь опыт, который лучше всего подходит для выполняемой ими работы.

Используйте потоки бизнес-процессов, чтобы определить набор шагов, которым должны следовать люди, чтобы привести их к желаемому результату. Эти шаги представляют собой визуальный индикатор, который сообщает людям, в каком месте бизнес-процесса они находятся. Потоки бизнес-процессов сокращают потребность в обучении, поскольку новым пользователям не нужно сосредотачиваться на том, какой объект им следует использовать. Они могут позволить процессу направлять их. Вы можете настроить потоки бизнес-процессов для поддержки общих методологий продаж, которые могут помочь вашим группам продаж достичь лучших результатов.Для сервисных групп потоки бизнес-процессов могут помочь новым сотрудникам быстрее освоиться и избежать ошибок, которые могут привести к неудовлетворенности клиентов.

Что могут делать потоки бизнес-процессов?

Определение потока бизнес-процесса представлено как настраиваемая сущность, а экземпляр процесса сохраняется как запись в этой сущности. Каждая запись связана с записью данных (например, с учетной записью, контактом, интересом или возможностью), а в случае процессов, охватывающих несколько сущностей, с записью данных для каждой участвующей организации.

С помощью потоков бизнес-процессов вы определяете набор из этапов и этапов , которые затем отображаются в элементе управления вверху формы.

Каждый этап содержит группу шагов. Каждый шаг представляет собой поле, в которое можно вводить данные. Люди переходят к следующему этапу с помощью кнопки Next Stage . Вы можете сделать шаг обязательным, чтобы люди должны были ввести данные для соответствующего поля, прежде чем они смогут перейти к следующему этапу.Это обычно называется «выходом на сцену».

Потоки бизнес-процессов кажутся относительно простыми по сравнению с другими типами процессов, потому что они не обеспечивают никакой условной бизнес-логики или автоматизации, кроме упрощения ввода данных и контроля перехода на этапы. Однако, когда вы объединяете их с другими процессами и настройками, они могут сыграть важную роль в экономии времени людей, снижении затрат на обучение и повышении уровня восприятия пользователями.

Доступен ряд готовых к использованию потоков бизнес-процессов.Подробнее: Добавьте готовые бизнес-процессы.

Потоки бизнес-процессов, интегрированные с другими настройками

Когда вы или ваш пользователь вводите данные, используя потоки бизнес-процессов, изменения данных также применяются к полям формы, так что любая автоматизация, обеспечиваемая бизнес-правилами или скриптами форм, может быть применена немедленно. Можно добавить шаги, которые устанавливают значения для полей, которых нет в форме, и эти поля будут добавлены в объектную модель Client API, используемую для скриптов формы.Любые рабочие процессы, инициированные изменениями полей, включенных в поток бизнес-процессов, будут применяться при сохранении данных в форме. Если автоматизация применяется в рабочем процессе в реальном времени, изменения будут немедленно видны пользователю, когда данные в форме будут обновлены после сохранения записи.

Хотя управление потоком бизнес-процессов в форме не обеспечивает прямого программирования на стороне клиента, изменения, применяемые бизнес-правилами или сценариями форм, автоматически применяются к элементам управления потоком бизнес-процессов.Если вы скрываете поле в форме, это поле также будет скрыто в элементе управления потоком бизнес-процессов. Если вы устанавливаете значение с помощью бизнес-правил или сценариев форм, это значение будет установлено в потоке бизнес-процесса.

Параллельные потоки процессов

Параллельные потоки бизнес-процессов позволяют настройщикам настраивать несколько бизнес-процессов и связывать их с одной и той же начальной записью. Пользователи могут переключаться между несколькими бизнес-процессами, выполняющимися одновременно, и возобновлять свою работу на той стадии процесса, на котором они находились.

Потоки бизнес-процессов системы

Включены следующие потоки бизнес-процессов. Чтобы понять, как работают потоки бизнес-процессов, просмотрите эти системные потоки бизнес-процессов:

Несколько сущностей в потоках бизнес-процессов

Вы можете использовать последовательность бизнес-процессов для одной сущности или охватывать несколько сущностей. Например, у вас может быть процесс, который начинается с возможности, затем продолжается с расценки, заказа, а затем счета-фактуры, прежде чем, наконец, вернуться, чтобы закрыть возможность.

Вы можете спроектировать потоки бизнес-процессов, которые объединяют записи для пяти различных сущностей в единый процесс, чтобы люди, использующие приложение, могли сосредоточиться на потоке своего процесса, а не на том, с какой сущностью они работают. Им будет проще перемещаться между записями связанных сущностей.

Для одного объекта доступно несколько потоков бизнес-процессов

Не каждый пользователь в организации может следовать одному и тому же процессу, и разные условия могут потребовать применения другого процесса.У вас может быть до 10 активных потоков бизнес-процессов на одну сущность, чтобы обеспечить соответствующие процессы для различных ситуаций.

Управлять тем, какой поток бизнес-процессов будет применяться

Вы можете связать потоки бизнес-процессов с ролями безопасности, чтобы только люди с этими ролями безопасности могли их видеть или использовать. Вы также можете установить порядок потоков бизнес-процессов, чтобы вы могли контролировать, какой поток бизнес-процессов будет установлен по умолчанию. Чтобы установить порядок выполнения бизнес-процессов, откройте поток бизнес-процессов в конструкторе, а затем выберите Порядок выполнения заказа на панели команд.Нажимайте стрелки вверх и вниз, чтобы переместить потоки бизнес-процессов в нужном вам порядке.

Когда кто-то создает новую запись объекта, список доступных активных определений бизнес-процессов фильтруется по роли безопасности пользователя. Первое активированное определение бизнес-процесса, доступное для роли безопасности пользователя в соответствии со списком порядка процессов, применяется по умолчанию. Если доступно более одного активного определения бизнес-процесса, пользователи могут загрузить другое из диалогового окна «Переключить процесс».Всякий раз, когда процессы переключаются, тот, который в настоящее время отображается, уходит в фоновый режим и заменяется выбранным, но он сохраняет свое состояние и может быть переключен обратно. С каждой записью может быть связано несколько экземпляров процесса (каждый для отдельного определения потока бизнес-процесса, всего до 10). При загрузке формы отображается только одна последовательность бизнес-процессов. Когда какой-либо пользователь применяет другой процесс, этот процесс может загружаться по умолчанию только для этого конкретного пользователя.

Чтобы бизнес-процесс загружался по умолчанию для всех пользователей (поведение, эквивалентное «закреплению» процесса), при загрузке формы можно добавить настраиваемый сценарий API клиента (веб-ресурс), который специально загружает существующий экземпляр бизнес-процесса на основе идентификатор определения бизнес-процесса.

Привилегии потока бизнес-процессов

Каждое определение потока бизнес-процесса, представленное как настраиваемая сущность, имеет собственный набор привилегий, которые можно редактировать в рамках роли безопасности, как и в любой другой системе или настраиваемой сущности. Вы можете указать привилегии на вкладке Business Process Flows для роли безопасности.

Вы можете назначить следующие привилегии для потока бизнес-процессов:

  • Создать : Позволяет создать экземпляр потока бизнес-процесса, который выполняется одновременно с созданием новой записи.
  • Чтение : позволяет просматривать поток бизнес-процессов в созданной записи.
  • Запись : позволяет обновлять поток бизнес-процессов. Например, изменение состояния и навигации.
  • Удалить : Позволяет удалить экземпляр, например, при удалении записи.
  • Приложение : разрешает навигацию между объектами из объекта. Например, объект Lead в потоке бизнес-процесса Lead to Opportunity Sales Process .
  • Дополнение к : разрешает навигацию между объектами к объекту. Например, сущность «Возможность» в потоке бизнес-процесса «Ведите к возможной продаже».

Примечание

Роли безопасности System Administrator и System Customizer по умолчанию имеют доступ ко всем потокам бизнес-процессов.

Анализ потока бизнес-процессов

Вы можете определять потоки бизнес-процессов только для тех сущностей, которые их поддерживают.Вам также необходимо знать ограничения на количество процессов, этапов и шагов, которые можно добавить.

Потоки бизнес-процессов, которые вызывают рабочий процесс

Теперь вы можете вызывать рабочие процессы по запросу из потока бизнес-процессов. Вы можете настроить это из нового конструктора потока бизнес-процессов, перетащив компонент рабочего процесса на стадию процесса или в раздел Глобальные рабочие процессы. Дополнительные сведения об использовании рабочих процессов в потоках бизнес-процессов см. В разделе Блог: автоматизация потока бизнес-процессов в Dynamics 365 for Customer Engagement.

Когда вы включаете рабочий процесс, который вы хотите запустить при выходе из этапа в поток бизнес-процесса, и этот этап является последним этапом в потоке, разработчик создает впечатление, что рабочий процесс будет запущен, когда этот этап будет завершен. . Однако рабочий процесс не будет запущен, поскольку переход между этапами не происходит. Вы не получите предупреждения или ошибки, препятствующие включению рабочего процесса в сцену. Когда пользователь взаимодействует с потоком бизнес-процесса, завершение или выход из процесса не приводит к переходу между этапами, и поэтому рабочий процесс не запускается.Рассмотрим следующие примеры:

  • Вы создаете поток бизнес-процесса с двумя этапами, S1 подключается к S2, с рабочим процессом на этапе S2 и устанавливаете триггер на Stage Exit .

  • Вы создаете последовательность бизнес-процессов из трех этапов: S1 подключается к S2, затем S2 разветвляется на S3. Вы включаете рабочий процесс в S2 и устанавливаете триггер на . Выход из этапа .

    В любом случае рабочий процесс не запустится. Чтобы обойти эту проблему, вы можете добавить глобальный рабочий процесс и добавить к нему рабочий процесс, который вы хотите запустить, чтобы рабочий процесс запускался для бизнес-процесса, а не для его стадии.Вы можете установить триггер для глобального рабочего процесса на «Процесс отменен» или «Процесс завершен», чтобы рабочий процесс запускался, когда пользователь прекращает или завершает бизнес-процесс.

Объекты, которые могут использовать потоки бизнес-процессов

Только те сущности, которые используют обновленные формы, могут использовать потоки бизнес-процессов. Сюда входят настраиваемые сущности и следующие системные сущности:

Примечание

Если вы перейдете на этап последовательности операций бизнес-процесса, который содержит сущность Social Activity , и нажмете кнопку Next Stage , вы увидите параметр Create .Когда вы выбираете Create , загружается форма Social Activity . Однако, поскольку Social Activity недействителен для Создайте из пользовательского интерфейса приложения, вы не сможете сохранить форму, и вы увидите сообщение об ошибке: «Неожиданная ошибка».

Максимальное количество процессов, этапов и шагов

Чтобы обеспечить приемлемую производительность и удобство использования пользовательского интерфейса, необходимо учитывать некоторые ограничения, о которых следует помнить, когда вы планируете использовать потоки бизнес-процессов:

  • В одной сущности может быть не более 10 активированных процессов потока бизнес-процессов.

  • Каждый процесс может содержать не более 30 этапов.

  • Процессы с несколькими объектами могут содержать не более пяти объектов.

Поддержка настройки сущности потока бизнес-процессов

Сущности потока бизнес-процессов могут появиться в системе, так что данные записей сущностей могут быть доступны в сетках, представлениях, диаграммах и информационных панелях.

Использование записей сущностей потока бизнес-процессов с сетками, представлениями, диаграммами и панелями мониторинга

Теперь, когда потоки бизнес-процессов доступны как сущность, вы можете использовать расширенные функции поиска, представления, диаграммы и панели мониторинга, полученные из данных потока бизнес-процессов для данной сущности, например интереса или возможности.Системные администраторы и специалисты по настройке могут создавать настраиваемые сетки потоков бизнес-процессов, представления, диаграммы и панели мониторинга, аналогичные тем, которые создаются с помощью любого другого объекта.

Потоки бизнес-процессов, такие как Lead To Opportunity Sales Process , отображаются как настраиваемая сущность в обозревателе решений.

Чтобы получить доступ к представлению потока бизнес-процессов по умолчанию, откройте обозреватель решений, разверните Сущности > разверните нужный процесс, например Lead To Opportunity Sales Process , выберите Views , а затем выберите нужное представление.

Доступно несколько представлений по умолчанию, которые можно просматривать в виде диаграммы, например представление Процесс продаж активной возможности .

Ограничения использования сущностей потока бизнес-процессов

В настоящее время вы не можете создавать собственные формы для сущностей на основе последовательности бизнес-процессов.

См. Также

Посмотрите короткий видеоролик (4:49) о потоках бизнес-процессов
Добавьте готовые к использованию бизнес-процессы
Создайте поток бизнес-процессов
Расширьте потоки бизнес-процессов с помощью ветвления
Технический документ: Включение процессов с помощью Dynamics 365 for Customer Engagement Создавайте индивидуальную бизнес-логику с помощью процессов Рабочие процессы
Действия – Обзор

границ | Оценка аналитических подходов для анализа скрытых классов с помощью вспомогательной модели линейного роста

Введение

Моделирование смеси стало широко используемым статистическим методом в поведенческих науках, поскольку оно позволяет исследовать идентификацию и понимание скрытых субпопуляций в данной популяции.Среди них метод, в котором конструкты категориальных латентных признаков идентифицируются на основе множества наблюдаемых категориальных переменных, конкретно называется анализом латентных классов (LCA) (Lazarsfeld and Henry, 1968; Dayton and Macready, 1998). Хотя идентификация и интерпретация латентных классов может представлять основной интерес для LCA, исследователей также может интересовать, как идентифицированные латентные классы связаны со вспомогательными переменными, такими как ковариаты и отдаленные исходы. Другими словами, исследователей интересуют не только латентные классы индивидов, но и потенциальные причины и / или последствия принадлежности к классу (Bakk et al., 2013, 2014). Этот тип анализа предоставит дополнительную информацию о неоднородности отношений, поскольку нереалистично предположить, что все люди в популяции имеют одинаковые отношения к вспомогательным переменным (Nylund-Gibson et al., 2014). Более того, исследователи могут быть заинтересованы в рассмотрении вспомогательной модели в сочетании с LCA, так что отдельные параметры вспомогательной модели оцениваются для каждого из скрытых классов. Например, простая модель линейной регрессии в качестве вспомогательной модели к LCA была представлена ​​и исследована в Asparouhov and Muthén (2014).При таком моделировании переменную скрытого класса можно рассматривать как модератора для вспомогательной модели (то есть вторичной модели). В этой статье этот тип модели называется моделью двухфазной смеси, поскольку модель состоит из двух фаз: фазы модели LCA и фазы вспомогательной модели.

Кто-то может возразить, что одной модели смеси без модели измерения скрытого класса может быть достаточно для описания неоднородности на вспомогательной модели, такой как регрессия смеси и модель смеси роста.Однако есть контексты, в которых скрытые классы должны определяться моделью измерения скрытых классов, а не единственной моделью смеси. Например, Asparouhov, Muthén (2014) и Vermunt (2010) указали, что подход модели единственной смеси не будет соответствовать логике исследователя, если модель измерения скрытых классов теоретически определяет латентные классы, а не распределение смеси вспомогательная переменная или модель. В таком случае результаты модели двухфазной смеси не обязательно совпадают с результатами модели одной смеси.Следовательно, первостепенное значение имеет идентификация скрытых классов с помощью индикаторов измерения в модели измерения скрытых классов, а не непосредственная попытка идентифицировать скрытые классы на основе неоднородности их вспомогательной переменной или модели. Таким образом, становится важной реализация модели двухфазной смеси.

Способы получения моделей двухфазной смеси

Существует несколько различных подходов, которые можно использовать для оценки модели двухфазной смеси. В этом разделе описаны четыре выбранных подхода, хотя первый подход не рассматривается в данном исследовании.

Подход классификации и анализа

Подход «классифицируй и анализируй» – это двухэтапный процесс, также называемый жестким разделением (Vermunt, 2010). На первом этапе проводится LCA, и каждому человеку присваивается определенный латентный класс по наивысшей апостериорной вероятности принадлежности к классу, которая получается из LCA. Затем на втором этапе присвоения классов используются в качестве наблюдаемой группирующей переменной для сравнения групп по вспомогательным переменным, если модель содержит вспомогательные переменные.Если модель содержит вспомогательную модель, вспомогательная модель будет подобрана для каждого из идентифицированных классов. В любом случае членство в идентифицированных классах является взаимоисключающим, так что каждое наблюдение классифицируется только в один из идентифицированных классов. Хотя ее легко реализовать (Hibbard et al., 2007; Reinke et al., 2008; Archambault et al., 2009; Hardigan, 2009), эта стратегия имеет ряд серьезных недостатков. Во-первых, могут быть неправильно классифицированные люди, потому что детерминированные классификации основаны на вероятностной информации о вероятностях принадлежности к классу.Известно, что неправильная классификация людей в подходе «классифицируй и анализируй» может привести к смещенным оценкам отношений между скрытыми классами и вспомогательными переменными и вспомогательными параметрами модели (Hagenaars, 1993; Clogg, 1995). Во-вторых, что отчасти связано с первым недостатком, неопределенности классификации (а именно, ошибки измерения в классификациях из ОЖЦ) будут игнорироваться. Поскольку классификации рассматриваются как истинные состояния, стандартные ошибки для оценок параметров с помощью подхода классификации и анализа, вероятно, недооценены (Roeder et al., 1999; Локен, 2004; Кларк и Мутен, 2009). В целом, имеющаяся на сегодняшний день литература согласна с тем, что подход «классифицируй и анализируй» больше не рекомендуется для оценки модели ОЖЦ с вспомогательными переменными и / или вспомогательными моделями. Поэтому в данном исследовании подход «классифицируй и анализируй» не рассматривался.

Одноэтапный подход

Одноэтапный подход включает одновременную оценку модели LCA и вспомогательных переменных и / или вспомогательных моделей (Formann, 1992; Heijden et al., 1996; Bandeen-Roche et al., 1997; Дейтон и Макреди, 1998 г .; Muthén and Muthén, 2000; Кларк и Мутен, 2009 г .; Ким и др., 2016). Одноэтапный подход рекомендуется, в частности, в более ранней литературе (Heijden et al., 1996; Muthén, 2001), потому что оценка LCA и вспомогательных моделей в одноэтапном режиме имеет преимущества по сравнению с подходом, основанным на классификации и анализе. Во-первых, появление классификации людей в неправильные классы не имеет значения, потому что одноэтапный подход не включает классификации людей в определенные классы на основе оцененных вероятностей классов.Другими словами, оценка скрытых классов выполняется совместно путем включения вспомогательных переменных и / или моделей (Kim et al., 2016). Как подчеркнули Кларк и Мутен (2009), при одношаговом подходе люди могут быть дробными членами всех идентифицированных скрытых классов. Таким образом, это уменьшает проблемы, которые возникают из-за обработки скрытых классов как истинного состояния, процедуры, которой следует подход классификации и анализа. Во-вторых, ошибки измерения принадлежности к классу будут включены в анализ, потому что они встроены в модель с помощью одношагового подхода.Еще одним преимуществом одношагового подхода является вклад включенной вспомогательной переменной (ов) / модели в оценку скрытых классов. Кларк и Мутен (2009) утверждают, что это включение улучшает разделение классов и уменьшает стандартные ошибки.

Однако, хотя он все еще известен как эффективный подход, недавние исследования осторожно относятся к использованию одношагового подхода (Vermunt, 2010; Nylund-Gibson et al., 2014). Важная причина заключается в том, что на параметры модели первой фазы LCA могут влиять вспомогательные переменные и / или модели, если сила ассоциаций между индикаторами латентных классов и латентными классами недостаточно сильна (Vermunt, 2010; Asparouhov and Muthén , 2014).Если это станет проблемой, это может привести к другому количеству и / или интерпретации скрытых классов за счет включения вспомогательных переменных и / или моделей. Такое изменение параметров может сбить с толку и привести к проблемам с построением модели. Хотя включение вспомогательных переменных и / или моделей важно, измерение скрытых классов не должно зависеть от влияния вспомогательных переменных и моделей (Nylund-Gibson et al., 2014).

Трехэтапный подход

Другим подходом к модели двухфазной смеси является трехступенчатый подход (Bolck et al., 2004; Вермант, 2010). Ключевым преимуществом трехэтапного подхода является отдельная обработка модели LCA и вспомогательных переменных или моделей, как и в подходе «классифицируй и анализируй», при этом ошибки измерения классификации по-прежнему принимаются во внимание. В результате разделение классов осуществляется без влияния вспомогательных переменных и моделей (Vermunt, 2010; Kim et al., 2016). В качестве первого шага трехэтапного подхода модель LCA оценивается как модель измерения с использованием только переменных-индикаторов скрытого класса.На втором этапе переменная для наиболее вероятных классов () создается модальным назначением с использованием наибольших апостериорных вероятностей, полученных на первом этапе. Как и в случае с подходом «классифицируй и анализируй», он рассматривается как явная номинальная переменная, которая представляет присвоения классов. Однако трехэтапный подход сохраняет информацию о неопределенностях классификации и использует ее в качестве ошибок измерения классификаций следующим образом. Используя оцененные вероятности апостериорного класса и количество людей, отнесенных к каждому из скрытых классов, вычисляются коэффициенты неопределенности классификации.Эти скорости представляют собой средние апостериорные вероятности в виде матрицы k × k , где k – количество скрытых классов. На третьем этапе вспомогательная модель настраивается отдельно для каждого из идентифицированных классов на первом этапе путем включения ошибок измерения, полученных на втором этапе. Bolck et al. (2004) продемонстрировали, что их трехэтапный подход недооценивает связи между принадлежностью к классу и вспомогательными переменными. Vermunt (2010) предложил метод коррекции путем максимизации взвешенной функции логарифмического правдоподобия для кластеризованных данных.С помощью серии имитационных исследований Вермунт продемонстрировал, что поправка существенно улучшила метод. В настоящее время трехэтапный подход с поправкой Вермунта включен в программное обеспечение Mplus (Asparouhov and Muthén, 2014).

Asparouhov and Muthén (2014) продемонстрировали, что трехэтапный подход с поправкой Вермунта очень хорошо восстанавливает параметры, когда переменная скрытого класса хорошо измеряется моделью LCA (т. Е. Высокая энтропия). Также было продемонстрировано, что потеря эффективности для трехэтапного подхода была минимальной по сравнению с одноэтапным подходом.С другой стороны, Bakk et al. (2014) сообщили, что трехэтапный подход с поправкой на смещение, используемый в программном обеспечении Mplus, имеет тенденцию недооценивать стандартные ошибки эффектов вспомогательных переменных. Nylund-Gibson et al. (2014) расширили применение этого трехэтапного подхода до анализа латентных переходов (LTA). В целом трехэтапный подход с поправкой Вермунта стал многообещающим методом для оценки модели смеси с вспомогательными переменными и / или вспомогательными моделями. Тем не менее, Asparouhov and Muthén (2014) утверждали, что любой метод может не обеспечить удовлетворительной точности и эффективности, если переменная скрытого класса плохо измеряется моделью измерения (т.е., низкая энтропия), в том числе трехступенчатый подход.

Весовой подход

Метод веса ящика для смешанных моделей также представляет собой трехэтапную процедуру. На первом этапе модель измерения (то есть LCA) оценивается с использованием только переменных-индикаторов скрытого класса. Фактически, этот первый шаг LCA в точности совпадает с первым шагом вышеупомянутого трехэтапного подхода. Однако способ получения информации о неопределенностях классификации на втором этапе отличается от трехэтапного подхода.На втором этапе подхода с использованием весовых коэффициентов оценочные вероятности апостериорных классов из первого шага напрямую сохраняются как весовые переменные (по одной весовой переменной для каждого идентифицированного класса). На третьем этапе вспомогательная модель настраивается отдельно для каждого из скрытых классов с использованием соответствующей весовой переменной из второго шага в качестве весов наблюдений.

Таким образом, каждое наблюдение рассматривается как дробный член всех идентифицированных скрытых классов, что позволяет учесть неопределенности классификации.В результате вклад каждого наблюдения в данный класс представлен оцененной вероятностью класса для наблюдения. Например, если наблюдение имеет очень маленькую вероятность класса для данного скрытого класса, наблюдение будет иметь очень небольшое влияние на оценку параметров вспомогательной модели, но не нулевое. Кроме того, эффективный размер выборки для каждого класса представляет собой сумму оцененных вероятностей класса, что является разумной реализацией оцененного размера класса. Эта процедура аналогична вычислению итогового количества взвешенных данных, такого как средневзвешенное значение, которое также аналогично процедуре взвешивания оценки склонности (Робинс и Ротницкий, 1995; Хирано и Имбенс, 2001).

В качестве одного из примеров, связанных с этим подходом, Кларк и Мутен (2009) продемонстрировали подход, в котором переменная скрытого класса регрессировала по переменной-предиктору с использованием вероятностей классификации из LCA начального шага в качестве весов регрессии. Cheng (2012) также использовал тот же подход для модели LCA с дистальным исходом. Кларк и Мутен, а также Ченг подтвердили, что подход взвешенной регрессии работает хорошо, в то время как одноэтапный подход по-прежнему лучше всего объясняет неопределенность латентной принадлежности к классу.

Подход с использованием веса случая, обсуждаемый в этой статье, предполагает любой вид модели измерения латентного класса и любой вспомогательный тип модели. Например, Nese et al. (2017) использовали этот подход для изучения неоднородности роста новых знаний о грамотности путем объединения модели регрессии Пуассона с нулевым раздутием (т. Е. Фазы модели измерения латентных классов) и модели смеси трех классов (т. Е. Вспомогательной модели). фаза). Однако эффективность этого подхода неизвестна.Таким образом, текущее исследование направлено на изучение эффективности подхода веса случая в различных условиях для модели двухфазной смеси посредством моделирования. Эффективность подхода с учетом веса случая также сравнивалась с двумя другими подходами; а именно одноэтапный и трехэтапный подходы.

Методы

Модель

Первым этапом модели исследуемой двухфазной смеси была двухклассная модель LCA с четырьмя дихотомическими индикаторами измерения. Модель обозначается как

. P (Up = 1 | c) = [1 + exp (τcp)] – 1,

, где U p – ответ на дихотомическом индикаторе измерения p ( p = 1,…, 4) и c – переменная скрытого класса ( c = 1 или 2 ).Кроме того, τ cp является пороговым параметром для p -го индикатора измерения для скрытого класса c . Соответственно, τ cp является логитом для U p = 1, данного в классе c th.

Вторая фаза модели двухфазной смеси была вспомогательной моделью, которая представляла собой модель линейного роста (LGM) с четырьмя временными точками. LGM был создан как частный случай модели двухфакторного подтверждающего факторного анализа, где два латентных фактора представляли точку пересечения роста и наклон роста, который варьировался между людьми.Модель обозначается как

.

, где y – вектор 4 × 1 показателей результатов, Λ – матрица факторных нагрузок 4 × 2, η – вектор 2 × 1 двух скрытых факторов, а ϵ – матрица 4 × 1. вектор остатков. Факторные нагрузки для четырех показателей результатов были ограничены фиксированными значениями: [1, 1, 1, 1] для фактора пересечения (первый столбец Λ ) и [0, 1, 2, 3] для наклона фактор (второй столбец Λ ).В результате остановка роста была реализацией исходного статуса. Кроме того, предполагалось, что ϵ нормально распределены с 0 средними и ковариационной матрицей с равными диагоналями и 0 недиагоналями, что указывает на то, что дисперсии ошибок для четырех показателей результатов были ограничены равными и нулевыми ковариациями между ошибками. Кроме того, предполагалось, что η нормально распределены с неизвестными средними (среднее пересечение и средняя траектория роста) и ковариационной матрицей (дисперсии пересечения и траектории роста, а также ковариация между пересечением и траекторией роста).Предполагалось, что все параметры во вспомогательной модели (т.е. среднее значение точки пересечения, средний наклон, дисперсия точки пересечения, дисперсия наклона, ковариация между точкой пересечения и наклона и дисперсия ошибок) различны между двумя скрытыми классами. Графическое представление этой модели двухфазной смеси также представлено на рисунке 1. Как упоминалось выше, все параметры во вспомогательной модели предполагались разными для латентных классов. Эти параметры графически обозначены точками на прямых и изогнутых стрелках на рисунке 1.

Рисунок 1 . Графическое представление модели исследуемой двухфазной смеси. В модели измерения U 1 , U 2 , U 3 и U 4 представляют четыре дихотомических переменных результата, связанных с переменной скрытого класса c . На вспомогательной модели y 1 , y 2 , y 3 и y 4 представляют переменную результата, многократно измеряемую в четырех точках времени.Кроме того, I представляет точку пересечения роста, S представляет наклон роста, а ϵ представляет остатки. Черные точки указывают на то, что параметры, представленные этими стрелками, различаются между латентными классами.

Истинные значения параметров для модели LCA варьировались, включая соотношение классов для меньшего класса. В дальнейшем меньший класс будет называться «класс 2». Пороговые параметры должны были быть одинаковыми для четырех индикаторов измерения, но значение варьировалось в зависимости от условий моделирования (см. Ниже).Эти различия в значениях пороговых параметров косвенно повлияли на различия в разделении классов (т. Е. На энтропию), где более низкий порог приводил к более низкому разделению классов. Предполагалось, что параметры вспомогательного LGM для двух классов различаются, но фиксированы для всех условий моделирования. Значения параметров для вспомогательной модели представлены в таблице 1. Обратите внимание, что мы не предполагали каких-либо прямых отношений между переменными вспомогательной модели и индикаторами скрытого класса, как в случае с Бакком и др.(2013).

Таблица 1 . Истинные значения параметров для вспомогательной модели.

Simulation Study

Данные были сгенерированы для двух фаз модели одновременно, точно так же, как Аспарухов и Мутен (2014) сгенерировали данные. По словам Аспарухова и Мутена, эта стратегия генерации данных генерирует данные, которые будут согласованы с моделью двухфазной смеси, потому что скрытая переменная класса не является эндогенной переменной в модели генерации данных. Наборы данных были сгенерированы для 27 условий моделирования внутри метода с минимум 1000 повторений для каждого условия.Мы генерировали дополнительные репликации, если было менее 1000 успешно конвергентных репликаций, которые правильно определили 2-классную модель как лучшую модель BIC для любого из методов анализа. Мы следовали этой стратегии только для подгонки модели с двумя классами, потому что оценки восстановления параметров были предприняты только тогда, когда была подобрана модель с двумя классами. Кроме того, если какие-либо методы, у которых было более 1000 успешных конвергентных репликаций с 2-классной моделью в качестве лучшей модели от BIC для определенного условия, только первые 1000 репликаций были оценены для оценки восстановления параметров.

27 условий моделирования внутри метода были представлены тремя факторами моделирования; а именно, размеры выборки, пропорция классов для меньшего класса (класс 2) и разделение классов (т. е. пороговый параметр на этапе LCA модели). Эти три фактора моделирования были выбраны, поскольку известно, что они влияют на производительность оценки модели смеси. Были выбраны три размера выборки: малая (500 испытуемых), средняя (1000 испытуемых) и большая (2000 испытуемых). Три пропорции класса 2 были: малая (0.05), средний (0,15) и большой (0,30). Обратите внимание, что это исследование генерировало латентные классы только с помощью двухклассовой модели LCA. Наконец, тремя уровнями разделения классов (пороговым параметром фазы LCA модели) были: низкий (0,754), средний (1,254) и высокий (1,750). Эти значения пороговых параметров были вычислены путем определения сначала логарифмической разности шансов между классами для фазы LCA модели; низкий = 1,50, средний = 2,50 и высокий = 3,50. В результате средняя энтропия составила 0,66, 0,77 и 0,90 для трех уровней разделения классов в моделировании.Данные, полученные для каждого из 27 условий моделирования в рамках метода, были подогнаны с помощью трех методов, а именно, одноэтапного подхода (OS), подхода с учетом веса случая (CW) и трехэтапного подхода (TS).

Для каждого условия моделирования соответствие модели для модели 2-го класса оценивалось относительно моделей 1-го и 3-го класса. Для этого доля повторений, в которых байесовский информационный критерий (BIC) для модели с 2 классами был меньше, чем для моделей с 1 и 3 классами, была вычислена для каждого из трех методов для каждого из 27 в условиях моделирования внутри метода.Для подходов, основанных на весе случаев и трехэтапных подходов, эта оценка обычно выполнялась для модели LCA первого шага, потому что это был бы шаг, на котором можно было бы принять решение о выборе модели относительно количества скрытых классов для этих двух подходов. Кроме того, скорость сходимости была оценена для моделей 1-го, 2-го и 3-го класса для каждого условия моделирования. Обратите внимание, что вычисление скорости сходимости для подходов CW и TS включало умножение скорости сходимости модели LCA первого шага и скорости сходимости вспомогательной модели LGM третьего шага.

Наконец, эффективность восстановления параметров была оценена для модели с двумя классами отдельно для трех подходов для каждого параметра вспомогательной модели для двух скрытых классов для каждого из 27 условий моделирования внутри метода путем вычислений; (a) абсолютная относительная систематическая ошибка, (b) стандартная эмпирическая ошибка (SE), (c) средняя оцененная SE относительно эмпирической SE, и (d) среднеквадратичная ошибка (RMSE). Затем каждый из четырех индексов был усреднен по всем параметрам модели для двух скрытых классов отдельно для каждого из 27 условий моделирования внутри метода.Как упоминалось ранее, только первые 1000 успешно конвергентных репликаций были включены в оценки восстановления параметров, включая только те репликации, которые пришли к выводу, что модель с двумя классами была правильно выбрана BIC. i – оценка параметра для i -й репликации, θ – истинное значение параметра, а r – количество повторений.ir)) 2r,

, где все символы определены выше. Кроме того, каждая репликация моделирования производила оценочную SE, и в данном исследовании она явно упоминается как «оценочная SE», чтобы отличить ее от эмпирической SE. Эмпирическая SE представляет собой численно реализованную теоретическую SE, основанную на повторно выбранных данных, в то время как оцененная SE является аналитически (или численно, в некоторых других случаях, таких как метод начальной загрузки) оцененной SE на основе одной данной выборки данных. На практике аналитикам данных будет доступна только оценочная SE, и она будет рассматриваться как наилучшая оценка теоретической SE.i-θ) 2r,

, где все символы определены выше.

Программное обеспечение

Mplus (Muthén and Muthén, 1998–2012) использовалось для генерации данных, а также для соответствия модели. Генерация данных и анализ с помощью Mplus контролировались программным обеспечением R (R Core Team, 2016). Примеры синтаксиса Mplus представлены в качестве дополнительных материалов.

Результаты

Скорость сходимости

Скорости сходимости приведены в таблице 2. Хотя они не показаны в таблице, все репликации сошлись без каких-либо предупреждений или ошибок для одношагового подхода 1-го класса и модели LCA 1-го класса для первого шага.Кроме того, почти все повторения модели первого шага 2-х классной LCA конвергенции, которая разделялась подходом веса случая и трехэтапным подходом, с самой низкой скоростью сходимости 97,1%.

Таблица 2 . Процент сходимости и правильный выбор модели.

Для модели с двумя классами подход веса случая имел самую высокую скорость сходимости среди трех методов. Например, они сошлись почти на 100% для всех условий, когда n = 2000, в то время как его скорость сходимости несколько снизилась, когда доля класса 2 была небольшой с n = 500.Тем не менее, коэффициент сходимости всегда был выше 96%. Скорость сходимости для трехэтапного подхода была аналогична подходу с учетом веса случая, а именно, когда доля класса 2 была мала, скорость сходимости была ниже. Тем не менее, скорость сходимости была постоянно ниже, чем для подхода с учетом веса случая в тех же условиях. В некоторых условиях они были существенно ниже, особенно когда n = 500, и / или когда доля класса 2 была небольшой. Даже при n = 2000, когда доля классов 2 была мала, а разделение классов было низким, скорость сходимости упала до 56.9%, в то время как степень сходимости оставалась почти 100% для подхода веса случая. С другой стороны, скорость сходимости для одношагового подхода упала до еще более низких процентов при меньшем размере выборки, меньшей доле класса 2 и / или более низком разделении классов. Например, степень сходимости составляла 79,6%, когда доля класса 2 была небольшой, а разделение классов было низким даже при n = 2000. Он упал до 29,4% в тех же условиях с n = 500.

Для модели с 3 классами скорость сходимости для одношагового подхода резко упала.Наивысшая скорость сходимости составила всего 15,3% для условий с n = 2000 и разделением высокого класса. С другой стороны, скорость сходимости оставалась высокой для подхода с учетом веса случая, хотя в сопоставимых условиях они были равномерно ниже, чем у модели с двумя классами. Для трехэтапного подхода скорость сходимости для трехклассовой модели упала намного больше, чем для подхода с учетом веса случая. Тем не менее, скорость сходимости была значительно выше, чем при одноэтапном подходе.

Выбор модели

Процент правильного выбора модели сведен в последних двух столбцах таблицы 2.Во-первых, процент правильного выбора модели был довольно низким как при одноэтапном подходе, так и при использовании первого шага ОЖЦ, когда разделение классов было низким, а доля класса 2 была небольшой. Для этого сочетания условий частота выбора правильных моделей всегда была низкой, независимо от размера выборки.

С другой стороны, правильные коэффициенты выбора модели составляли 100% или почти 100% с высоким разделением классов и большой или средней долей класса 2, независимо от метода анализа и размера выборки. Кроме того, условия со средним разделением классов и большой долей класса 2 продемонстрировали довольно высокие показатели правильного выбора модели.При высоком разделении классов и небольшой доле класса 2 правильный выбор модели составлял почти 100% с n = 2000 (98,6% для ОС и 100% для LCA на первом этапе). Однако ставки снизились по мере того, как размер выборки для ОС стал меньше; 93,7% с n = 1000 и 79,7% с n = 500, в то время как ставки оставались около 100% для первого шага LCA. Аналогичные закономерности наблюдались для условий с разделением среднего класса и средней долей класса 2.

В целом, ОЖЦ первого этапа (т.е., метод взвешивания случаев и трехэтапный подход) был лучше при выборе правильной модели, чем одноэтапный подход. Исключение составляли случаи, когда разделение классов было низким, а доля класса 2 была небольшой. Другое исключение было, когда разделение классов было низким, а доля класса 2 была средней: n = 500.

Восстановление параметров

Как упоминалось ранее, результаты восстановления параметров были суммированы путем усреднения всех параметров во вспомогательном LGM для каждого скрытого класса. Сводные результаты представлены на Рисунке 2 (среднее абсолютное относительное смещение), Рисунке 3 (среднее эмпирическое SE), Рисунке 4 (среднее оцененное SE относительно эмпирического SE) и Рисунке 5 (среднее RMSE).Для каждого рисунка результаты сведены в три столбца графиков для трех размеров выборки ( n = 500; n = 1000; n = 2000) для каждого латентного класса. Первые три столбца графиков предназначены для большего класса (класс 1), а последние три столбца графиков – для класса 2 (меньшего класса). Три ряда графиков соответствуют трем уровням доли класса 2 (малый; средний; большой). Три метки на горизонтальной оси каждого графика обозначают три уровня разделения классов (низкий; средний; высокий).

Рисунок 2 . Усредненное абсолютное относительное смещение вспомогательных параметров модели. ОС, одноэтапный подход; CW, метод взвешивания случая, и TS, трехэтапный подход.

Рисунок 3 . Усредненная эмпирическая SE для вспомогательных параметров модели. ОС, одноэтапный подход; CW, метод взвешивания случая, и TS, трехэтапный подход.

Рисунок 4 . Усредненная средняя расчетная SE относительно средней эмпирической SE для вспомогательных параметров модели.ОС, одноэтапный подход; CW, метод взвешивания случая, и TS, трехэтапный подход.

Рисунок 5 . Усредненное RMSE для дополнительных параметров модели. ОС, одноэтапный подход; CW, метод взвешивания случая, и TS, трехэтапный подход.

Для более крупного класса (класс 1) все абсолютные относительные смещения, эмпирические SE и RMSE были существенно меньше. В частности, различия между тремя подходами были почти неразличимы для класса 1 в условиях высокого разделения классов, независимо от размера выборки и доли класса 2.Единственным исключением была относительная оценочная SE, где недооценка оценочной SE была выявлена ​​для подходов с учетом веса случая и трехэтапного подхода, особенно когда разделение классов было низким. Недооценка расчетной SE была почти нулевой для условий со средним или высоким разделением классов для всех трех подходов. Интересно, что недооценка была намного больше при одноэтапном подходе, чем при двух других подходах, когда разделение классов было низким, доля класса 2 была небольшой и n = 500.

Было сделано несколько важных наблюдений за результатами для меньшего класса (класс 2). В дальнейшем обсуждение результатов сосредоточено на классе 2. Во-первых, было выявлено, что среднее значение абсолютной относительной систематической ошибки (рис. 2) было больше для подхода, основанного на весе случая, чем для двух других подходов во всех условиях. Относительное смещение для одноэтапного подхода и трехэтапного подхода резко уменьшалось по мере увеличения размера выборки, по мере увеличения разделения классов и увеличения доли класса 2.Однако на относительную погрешность подхода, основанного на весе случаев, гораздо меньше повлияли доля класса 2 и размер выборки, в то время как разделение на классы по-прежнему влияло на него. Другими словами, больший размер выборки и большая пропорция класса 2 не уменьшили относительную систематическую ошибку при использовании подхода с учетом веса случая. С другой стороны, относительная систематическая ошибка для всех трех подходов резко снизилась по мере того, как разделение классов стало выше, а расхождение между подходом на основе веса случая и двумя другими подходами стало меньше, когда разделение классов было высоким.В целом, одноэтапный и трехэтапный подходы продемонстрировали силу в отношении относительной систематической ошибки, в то время как метод взвешивания случаев – нет.

Хотя подробности не представлены в этой статье, результаты для каждого параметра были исследованы при n = 500 условиях. Параметры среднего и дисперсионного уклона для класса 2 были особенно высокими по относительной систематической погрешности во всех трех подходах, когда доля класса 2 была небольшой, а разделение классов было низким. Однако для всех трех подходов наблюдалось резкое снижение по мере увеличения разделения классов.Также резкое снижение наблюдалось для одноэтапного и трехэтапного подходов по мере увеличения доли класса 2. В целом было подтверждено, что относительная систематическая ошибка для подхода с учетом веса случая была постоянно выше, чем для двух других подходов по всем параметрам для меньшего класса. Также было подтверждено, что расхождение между тремя подходами стало меньше по мере того, как разделение на классы стало выше.

Что касается эмпирической SE (рис. 3), эффективность подхода с учетом веса случая была лучше, чем у двух других подходов, особенно когда доля класса 2 и размер выборки были небольшими.Однако расхождения между тремя подходами стали меньше по мере увеличения разделения классов и увеличения доли класса 2. Эффективность одноэтапного и трехэтапного подходов была одинаковой; когда классовое разделение было средним или высоким, их эмпирические SE были почти идентичны, особенно в условиях среднего и большого соотношения классов 2. В целом подход на основе веса случая показал сильные стороны по сравнению с эмпирической SE. Чтобы оценить потенциальную недооценку или переоценку оценочной SE, была оценена относительная величина средней оцененной SE к эмпирической SE (рис. 4).В результате подходы с учетом веса случая и трехэтапный подход показали существенную недооценку SE для обоих классов, особенно когда разделение классов было низким. Для параметров класса 1 недооценка для двух подходов стала небольшой, когда разделение классов было средним или высоким. Однако для параметров класса 2 недооценка подхода с учетом веса случая не уменьшилась в условиях малых пропорций класса 2. Другим примечательным результатом недооценки расчетного SE было то, что одноэтапный подход показал существенное недооценку параметров классов 1 и 2 в наиболее сложных условиях ( n = 500, небольшая доля класса 2 и низкое разделение ) по сравнению с подходом с взвешиванием случая и трехэтапным подходом.

Поскольку эмпирические SE были оценены для каждого параметра для n = 500 условий (опять же, подробности здесь не представлены), они были особенно высокими для среднего значения и дисперсии пересечения для класса 2 при одношаговом и трехэтапном подходы, когда разделение классов было небольшим, а доля класса 2 была небольшой. По мере того, как доля класса 2 увеличивалась, эмпирические значения SE улучшились для одношагового и трехэтапного подходов, однако эмпирические значения SE по-прежнему были постоянно ниже при подходе с учетом веса случая.

Что касается RMSE (рис. 5), эффективность одноэтапного и трехэтапного подходов была почти идентична и немного лучше, чем метод взвешивания ящиков при разделении среднего / высокого класса и условиях соотношения среднего / большого класса 2. Когда доля класса 2 была небольшой, одноэтапный подход работал немного лучше, чем трехэтапный подход для более крупных размеров выборки ( n = 1000 и 2000). Подход с использованием веса корпуса работал лучше, чем два других подхода в ограниченных условиях.Во-первых, в условиях малых пропорций класса 2 с n = 500, метод взвешивания ящиков всегда работал лучше, чем два других подхода. Кроме того, метод взвешивания случая показал лучшие результаты, чем два других подхода, при небольшой доле класса 2 и условии разделения на низкий класс с n = 1000.

Когда RMSE оценивались для каждого параметра для n = 500 условий (опять же, не представлены здесь), они были постоянно низкими для параметров класса 1 для всех трех подходов.Для параметров класса 2 метод взвешивания наблюдений всегда работал лучше, чем два других подхода для трех параметров; ковариация скрытого фактора (т. е. ковариация между точкой пересечения и наклоном), среднее значение и дисперсия точки пересечения. Тем не менее, метод взвешивания наблюдений постоянно работает хуже, чем два других подхода для среднего значения наклона.

Выводы

В этом исследовании изучалась эффективность трех выбранных подходов для оценки модели двухфазной смеси, где первая фаза представляла собой двухклассную модель LCA, а вторая фаза – LGM с четырьмя временными точками.Были сделаны некоторые важные наблюдения в отношении литературы. Во-первых, согласно Аспарухову и Мутену (2014), потеря эффективности трехэтапного подхода будет минимальной по сравнению с одноэтапным подходом. Наши результаты подтвердили, что это так. С другой стороны, согласно Asparouhov, Muthén (2014) и Vermunt (2010), на параметры модели LCA могут влиять вспомогательные модели, если сила связи между индикаторами скрытого класса и скрытыми классами недостаточно сильна.Это заставило нас ожидать, что восстановление параметров для одноэтапного подхода может пострадать в условиях с низким классом разделения. Кроме того, мы надеялись, что метод взвешивания случаев и / или трехэтапный подход покажут лучшие результаты, чем одноэтапный подход. Однако в отношении предвзятости дело обстояло иначе. Одноэтапный подход в меньшей степени пострадал от разделения на низшие классы. Кроме того, наши результаты продемонстрировали существенную заниженную оценку SE для подходов с учетом веса случая и трехэтапного подхода в определенных условиях, что согласуется с Clark and Muthén (2009), Vermunt (2010) и Bakk et al.(2014).

Практическое применение

В этом исследовании были продемонстрированы некоторые практически важные результаты. Во-первых, было выявлено, что подход с взвешиванием случая показывает постоянно большую систематическую ошибку, чем два других подхода. Следует отметить, что это критическое ограничение подхода, основанного на весе ящиков. С другой стороны, одноэтапный и трехэтапный подходы показали гораздо меньшую предвзятость. Их значения смещения были почти идентичны, особенно когда разделение классов было средним или высоким. Однако их предвзятость была высокой, когда доля класса 2 была небольшой, разделение классов было низким, а размер выборки был небольшим.Во-вторых, было обнаружено, что метод взвешивания случаев имеет сильные стороны по сравнению с эмпирической SE. Однако следует предупредить, что оценочные SE были сильно недооценены методом взвешивания случаев. Кроме того, в таких сложных условиях частота выбора правильных моделей была чрезвычайно низкой для всех подходов, включая метод взвешивания по случаям. Следовательно, на практике может оказаться невозможным воспользоваться преимуществом подхода с учетом веса случая в отношении SE, потому что будет много неопределенности при правильном выборе модели в таких сложных условиях.

Что касается успешной конвергенции, было обнаружено, что одноэтапный подход очень чувствителен к жестким условиям. На практике это затруднит использование одноэтапного подхода, если данные не взяты из идеальных условий, таких как большой размер выборки, разделение классов от среднего до высокого и отсутствие доли малых классов. С другой стороны, скорость сходимости была сильной стороной подхода с учетом веса корпуса в сложных условиях. Это преимущество позволяет исследовать и тестировать больше вариантов модели даже в менее идеальных условиях.Однако на практике метод взвешивания случаев следует использовать с осторожностью, поскольку он имеет значительно большую систематическую ошибку, чем два других подхода.

Основываясь на результатах этого исследования, наша рекомендация по применению модели двухфазной смеси заключается в следующем. Во-первых, убедитесь, что размер выборки достаточно велик, минимум 500, как уже предлагали Аспарухов и Мутен (2014) и Вермунт (2010). Во-вторых, подгоните часть модели измерения скрытых классов отдельно, чтобы исследовать количество скрытых классов.Это имеет смысл, потому что это исследование продемонстрировало, что ОЖЦ первого шага определит правильную модель лучше, чем одноэтапный подход. Также на этом этапе рекомендуется убедиться, что (а) разделение классов достаточно высокое, например энтропия> 0,80, (б) нет малого класса с <15%, чтобы использовать трехэтапный подход. Если эти два условия не выполняются или размер выборки не достигает 2000, рекомендуется применять одноэтапный подход. Однако, если эти условия станут более сложными (разделение более низкого класса и наличие более мелкого класса), одноэтапный подход и трехэтапный подход могут не совпадать.Если это так, то рекомендуется использовать подход, основанный на весе ящика. Однако, даже если подход, основанный на весе случаев, сходится, результаты следует использовать с осторожностью.

Ограничения

Модель, исследуемая в этом исследовании, была ограничена очень конкретной моделью. Как упоминалось ранее в этой статье, подход веса случая и трехэтапный подход могут быть применены к любому типу модели измерения латентного класса и к любому типу вспомогательной модели. Например, Nese et al. (2017) использовали этот подход для изучения неоднородности роста новых знаний о грамотности, объединив двухклассную модель регрессии Пуассона с нулевым раздутием в качестве фазы модели измерения скрытых классов и трехклассовую модель смеси роста в качестве фазы вспомогательной модели. .Требуется дальнейшее исследование эффективности одношагового, взвешенного и трехэтапного подходов в такой сложной модели.

Авторские взносы

Все перечисленные авторы внесли существенный, прямой и интеллектуальный вклад в работу и одобрили ее к публикации.

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Дополнительные материалы

Дополнительные материалы к этой статье можно найти в Интернете по адресу: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fpsyg.2018.00130/full#supplementary-material

Список литературы

Аршамбо, И., Янош, М., Моризо, Дж., И Пагани, Л. (2009). Поведенческое, эмоциональное и когнитивное участие подростков в школе: отношение к отсеву. J. Школьное здравоохранение 79, 408–415. DOI: 10.1111 / j.1746-1561.2009.00428.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Аспарухов, Т., и Muthén, B. (2014). Вспомогательные переменные в моделировании смеси: трехэтапные подходы с использованием Mplus. Struct. Equ. Модель. Многопрофильный. J. 21, 329–341. DOI: 10.1080 / 10705511.2014.1

CrossRef Полный текст

Бакк З., Оберски Д. и Вермунт Дж. (2014). Связь скрытых присвоений классов с внешними переменными: стандартные ошибки для правильного вывода. Pol. Анальный. 22, 520–540 DOI: 10.1093 / pan / mpu003

CrossRef Полный текст

Бакк, З., Текле, Ф. Т., и Вермант, Дж. К. (2013). Оценка связи между латентной принадлежностью к классу и внешними переменными с использованием трехэтапных подходов с поправкой на смещение. Sociol. Методол. 43, 272–311. DOI: 10.1177 / 0081175012470644

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бандин-Рош, К., Мильоретти, Д. Л., Зегер, С. Л., и Ратуз, П. Дж. (1997). Скрытая переменная регрессии для множественных дискретных исходов. J. Am. Стат. Доц. 92, 1375–1386. DOI: 10.1080 / 01621459.1997.10473658

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Болк А., Кроон М. и Хагенаарс Дж. (2004). Оценка моделей скрытой структуры с категориальными переменными: одношаговые или трехшаговые оценки. Pol. Анальный. 12, 3–27. DOI: 10,1093 / пан / миль / ч001

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Cheng, Z. (2012). Связь между неопределенностью в членстве в скрытом классе и результатами в модели обнаружения сигналов скрытого класса , докторская диссертация, Колумбийский университет, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк.DOI: 10.7916 / D8ZP4D6S

CrossRef Полный текст

Клогг, К. С. (1995). «Модели латентного класса: последние события и перспективы на будущее», в Справочнике по статистическому моделированию для социальных и поведенческих наук , , ред. Г. Армингер, К.С. Клогг и М.Э. Собел (Нью-Йорк, Нью-Йорк: Пленум), 311– 352.

Дейтон, К. М., и Макреди, Г. Б. (1998). Сопутствующий анализ латентных классов переменных. J. Am. Стат. Доц. 83, 173–178.

Google Scholar

Форман, А.К. (1992). Линейный логистический анализ латентных классов для политомических данных. J. Am. Стат. Доц. 87, 476–486. DOI: 10.1080 / 01621459.1992.10475229

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хагенаарс, Дж. А. (1993). Логлинейные модели со скрытыми переменными . Лондон: Мудрец.

Google Scholar

Хардиган, П. С. (2009). Применение анализа скрытых классов в измерении падения среди пожилого населения сообщества. Открыть Гериатр.Med. J. 2, 12–17. DOI: 10.2174 / 18748272010012

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Heijden, P., Dessens, J., and Bockenholt, U. (1996). Оценка модели латентного класса сопутствующих переменных с помощью алгоритма EM. J. Educ. Behav. Стат. 31, 215–229. DOI: 10.3102 / 10769986021003215

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хиббард, Дж. Х., Махони, Э. Р., Сток, Р. и Туслер, М. (2007). Приводит ли увеличение активности пациента к улучшению самоконтроля? Health Serv.Res. 42, 1443–1463. DOI: 10.1111 / j.1475-6773.2006.00669.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хирано К. и Имбенс Г. В. (2001). Оценка причинных эффектов с использованием взвешивания по шкале предрасположенности: приложение к данным о катетеризации правых отделов сердца. Health Serv. Результаты Рез. Методол. 2, 259–278. DOI: 10.1023 / A: 1020371312283

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ким, М., Вермунт, Дж., Бакк, З., Джаки, Т., и Ван Хорн, М. Л. (2016). Моделирование предикторов латентных классов в моделях регрессионной смеси. Struct. Equ. Модель. Многопрофильный. J. 23, 601–614. DOI: 10.1080 / 10705511.2016.1158655

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лазарсфельд, П. Ф., и Генри, Н. У. (1968). Анализ скрытой структуры . Бостон, Массачусетс: Хоутон Миффлин.

Google Scholar

Muthén, B. (2001). «Моделирование смеси со скрытыми переменными», в Новые разработки и методы моделирования структурными уравнениями , ред.А. Маркулидес и Р. Э. Шумакер (Хиллсдейл, Нью-Джерси: Эрлбаум), 1–33.

Muthén, B., and Muthén, L. (2000). Интеграция личностно-ориентированного анализа и анализа, ориентированного на переменные: моделирование смеси роста с классами скрытых траекторий. Алкоголь. Clin. Exp. Res. 24, 882–891. DOI: 10.1111 / j.1530-0277.2000.tb02070.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Muthén, L., and Muthén, B. (1998–2012). Руководство пользователя Mplus. 7-е изд. Лос-Анджелес, Калифорния: Muthén & Muthén.

Несе, Дж. Ф., Камата, А., и Тиндал, Дж. (2017). Двухэтапный весовой подход к моделированию ростовой смеси для возникающих и развивающихся навыков с изменениями распределения с течением времени. J. School Psychol. 61, 55–74 DOI: 10.1016 / j.jsp.2016.12.001

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Найлунд-Гибсон, К., Гримм, Р., Куирк, М., и Ферлонг, М. (2014). Модель смеси скрытых переходов, использующая трехступенчатую спецификацию. Struct.Equ. Модель. Многопрофильный. J. 21, 439–454. DOI: 10.1080 / 10705511.2014.5

CrossRef Полный текст | Google Scholar

R Core Team, S. (2016). R: Язык и среда для статистических вычислений . Вена: Фонд R для статистических вычислений. Доступно в Интернете по адресу: https://www.R-project.org/

Рейнке В. М., Герман К. К., Петрас Х. и Ялонго Н. С. (2008). Подтипы академических и поведенческих проблем ребенка, полученные эмпирическим путем: совпадение и отдаленные исходы. J. Abnorm. Child Psychol. 36, 759–770. DOI: 10.1007 / s10802-007-9208-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Робинс Дж. И Ротницки А. (1995). Полупараметрическая эффективность в многомерных регрессионных моделях с отсутствующими данными. J. Am. Стат. Доц. 90, 122–129. DOI: 10.1080 / 01621459.1995.10476494

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Родер К., Линч К. Г. и Нагин Д. С. (1999). Моделирование неопределенности в латентной классовой принадлежности: тематическое исследование в криминологии. J. Am. Стат. Доц. 94, 766–776. DOI: 10.1080 / 01621459.1999.10474179

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вермунт, Дж. К. (2010). Моделирование скрытых классов с ковариатами: два улучшенных трехэтапных подхода. Pol. Анальный. 18, 450–469. DOI: 10.1093 / pan / mpq025

CrossRef Полный текст

HCCI – Печатная продукция

Программа Healthy Child Care Iowa (HCCI) предлагает перечисленные ниже продукты, чтобы помочь вам в предоставлении качественных услуг по уходу за детьми штата Айова.Загрузите эти раздаточные материалы, чтобы распечатать их сами, или обратитесь за копиями к местному консультанту по уходу за детьми.

План действий при анафилаксии

План действий по анафилаксии – это 2-страничная (8 1/2 x 11) форма, которую предприятия по уходу за детьми могут использовать при планировании ухода за ребенком с аллергией, нуждающимся в инъекции адреналина (Epi pen).

План действий по борьбе с астмой

План действий по борьбе с астмой – это многоцветная 1 страница (8 1/2 x 11), которую предприятия по уходу за детьми могут использовать при планировании ухода за ребенком, страдающим астмой.

Брошюра по лечению астмы

Брошюра

Asthma Care – это многоцветный 2-страничный (8 1/2 x 11) документ, призванный помочь предприятиям, занимающимся уходом за детьми, выполнить План действий по борьбе с астмой.

Постельные клопы в присмотре за детьми

«Постельные клопы в уходе за детьми» – это 3-страничный (8 1/2 x 11) информационный бюллетень по предотвращению заражения постельными клопами в вашем бизнесе по уходу за детьми. В информационный бюллетень включены цветные фотографии клопов и других ресурсов.

Поддержка грудного вскармливания

Поддержка грудного вскармливания – это 2-страничный (8 1/2 x 11) информационный бюллетень о том, как поставщики услуг по уходу за детьми могут поддержать грудных младенцев и их родителей.В информационный бюллетень включены инструкции по хранению и обращению.

Форма отчета о травмах / происшествиях по уходу за детьми

Отчет о травмах / происшествиях, связанных с уходом за детьми – это 2-страничная (8 1/2 x 11) форма, которую необходимо заполнять каждый раз, когда травма, требующая оказания первой помощи или медицинской помощи, произошла в доме по уходу за ребенком, в доме развития ребенка или у ребенка, имеющего лицензию. учреждение по уходу.

Плакат с погодными часами для ухода за детьми

Этот двухстраничный плакат содержит информацию о погоде и безопасности детей. Плакат печатается в полноцветном формате (8 1/2 x 11).Спереди есть карта погоды, сзади – информация о состоянии здоровья, связанная с погодой.

Бланки обследования здоровья ребенка

Форма для младенцев, детей дошкольного возраста

Эта 2-страничная форма (8 1/2 x 11) соответствует правилам по уходу за детьми штата Айова, которые требуют ежегодного медицинского осмотра детей младшего, младшего и дошкольного возраста (включая поступление в детский сад).

Медицинская форма для детей школьного возраста – Заявление родителей

Эта 2-страничная (8 ½ x 11) форма соответствует правилам штата Айова по уходу за детьми, которые требуют ежегодного заявления родителей о состоянии здоровья ребенка школьного возраста.

Издевательства в детстве

Детское издевательство – это 2-страничный (8 ½ x 11) информационный бюллетень о издевательствах, предотвращении и ресурсах.

Профилактика удушья и еда

Профилактика удушья и питание: Руководство для детей младше 4 лет – это 3-страничный (8 1/2 x 11) информационный бюллетень о стратегиях предотвращения удушья, пищевых продуктах, которых следует избегать, и обслуживании детей грудного и раннего возраста.

Распространенные болезни и критерии исключения

Общие заболевания и критерии исключения – это 3-страничное (8 1/2 x 11) руководство по уходу за детьми и обучению по исключению детей с признаками и симптомами болезни или заболевания, включая COVID-19.

Ресурсы по COVID-19 (новый коронавирус)

Направляющая

Центры по контролю за заболеваниями (CDC) Школы и уход за детьми https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/community/schools-childcare/index.html

Руководство CDC по осуществлению программ ухода за детьми во время COVID-19 https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/community/schools-childcare/guidance-for-childcare.html

Обеспокоенность по поводу здоровья и безопасности COVID-19

Предупреждение: предупреждение Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов (FDA) о дезинфицирующих средствах для рук, которые потребители не должны использовать

FDA предупреждает потребителей и поставщиков медицинских услуг о том, что агентство отметило резкое увеличение количества дезинфицирующих средств для рук, которые не следует использовать из соображений безопасности.Информация доступна по адресу https://www.fda.gov/drugs/drug-safety-and-availability/fda-updates-hand-sanitizers-methanol

.

Руководство по уходу за детьми (14 мая 2021 г.) – этот 2-страничный (8 1/2 x 11) документ Министерства социальных служб (DHS) и Министерства здравоохранения штата Айова содержит руководство по COVID-19 для лицензированного ухода за детьми. центры, регулируемые дома развития ребенка, дошкольный и послешкольный уход, а также временные учреждения по уходу за детьми, обеспечивающие поддержку основной рабочей силы.

Центры по контролю за заболеваниями (CDC) COVID-19 Веб-сайт по адресу https: // www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/index.html

CDC Очистка и дезинфекция вашего помещения, когда кто-то болен https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/community/disinfecting-building-facility.html

CDC Что делать, если вы заболели (для передачи семьям и персоналу) https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-ncov/downloads/sick-with-2019-nCoV-fact-sheet.pdf

IDPH Epi Manual COVID-19 отчетная информация о болезни / борьба с распространением, включая руководство по уходу за детьми https: // wiki.idph.iowa.gov/epimanual/Home/CategoryID/522

Тест Айова https://www.testiowa.com/

Информация о вакцине включает информацию о вакцине COVID-19, преимуществах и часто задаваемые вопросы https://idph.iowa.gov/Emerging-Health-Issues/Novel-Coronavirus/Vaccine/Information-for-the-Public

IDPH Новый коронавирус COVID-19 Веб-сайт по адресу https://idph.iowa.gov/Emerging-Health-Issues/Novel-Coronavirus
Iowa DHS COVID-19 Ресурсы по уходу за детьми Веб-сайт по адресу https: // dhs.iowa.gov/childcare-covid-19
Ресурс и направление по уходу за детьми Айовы (CCR & R) Ресурсы COVID-19 Веб-сайт по адресу https://iowaccrr.org/

Информационный бюллетень по неотложной стоматологической помощи

Этот информационный бюллетень на одной странице (8 1/2 x 11) содержит руководство по шести неотложным стоматологическим ситуациям. Информация предоставлена ​​Бюро гигиены полости рта Департамента общественного здравоохранения штата Айова.

Форма медицинского осмотра поставщика услуг по уходу за детьми DHS

Эта 2-страничная форма (8 1/2 x 11) соответствует требованиям к медицинскому освидетельствованию DHS штата Айова для персонала Центра по уходу за детьми и поставщиков детских домов.

План лечения диабета

Этот 8-страничный (8 1/2 x 11) бланк можно использовать для планирования ухода за детьми с диабетом.

Плакат о подгузниках

Этот полноцветный плакат размером 8 1/2 x 11 содержит процедуру надевания подгузников при уходе за детьми. Соответствует Национальным стандартам охраны здоровья и безопасности «Забота о наших детях» (4-е издание).

Форма запроса на изменение диеты

Эта двухстраничная форма (8 1/2 x 11) предназначена для программ по уходу за детьми, которые участвуют в Программе питания для детей и взрослых (CACFP).CACFP – это программа, финансируемая из федерального бюджета, которая обеспечивает возмещение расходов на питание центрам по уходу за детьми, дневным центрам по уходу за взрослыми, приютам для оказания экстренной помощи, программам до и после школы, а также домам развития детей. Форма запроса на изменение диеты заполняется для детей с особыми диетическими потребностями. Форма была разработана Департаментом образования штата Айова, Бюро питания и здравоохранения (11/2017).

Ссылка на веб-сайт готовности к чрезвычайным ситуациям

Документ по планированию готовности к чрезвычайным ситуациям для центров по уходу за детьми

Этот документ может использоваться детскими садами и дошкольными учреждениями для планирования готовности к чрезвычайным ситуациям.Этот документ также может быть использован для документации Системы оценки качества (QRS) штата Айова, касающейся здоровья и безопасности.

Документ по планированию готовности к чрезвычайным ситуациям для поставщиков услуг по развитию детей в домашних условиях

Этот документ может быть использован поставщиками детских домов для планирования готовности к чрезвычайным ситуациям. Этот документ также может быть использован для документации Системы оценки качества (QRS) штата Айова, касающейся здоровья и безопасности.

План контроля за опасным воздействием и образец протокола травм, связанных с острыми предметами

План контроля воздействия предназначен для использования в качестве руководства работодателя по стандарту OSHA по патогенам, передающимся с кровью.Этот 10-страничный документ (8 1/2 x 11) имеет простой в использовании формат для написания плана контроля экспозиции. Образец журнала травм от острых предметов предназначен для документирования уколов иглой или других острых травм в соответствии со стандартами OSHA.

Контрольный список для оказания первой помощи

Этот 1-страничный (8 1/2 x 11) контрольный список для оказания первой помощи может использоваться поставщиками услуг по уходу за детьми для оценки и контроля аптечек первой помощи.

План действий в отношении пищевой аллергии

Эта 2-страничная форма (8 1/2 x 11) может использоваться для планирования ухода за ребенком, страдающим пищевой аллергией.

Плакат о перчатках

Этот цветной плакат на одной странице (8 1/2 x 11) содержит информацию о перчатках.

Гуд Сосед Айова

Good Neighbor Iowa – это общественная образовательная кампания штата, направленная на снижение воздействия на детей широко используемых пестицидов для газонов. В нем участвуют школьные округа, менеджеры парков, предприятия по уходу за детьми и другие лидеры сообществ, которые демонстрируют, что можно и практично управлять большими площадями газона без использования пестицидов (средств уничтожения сорняков, инсектицидов или фунгицидов).В Good Neighbor Iowa действует Политика по уходу за газонами и борьбе с вредителями , доступная для предприятий по уходу за детьми.

Информационный бюллетень о поддержке в случае скорби и утраты

Этот информационный бюллетень предоставляет информацию о поддержке детей, переживающих горе и утрату. Информационный бюллетень «Поддержка скорби и утраты» представлен в двух форматах: цветной раздаточный материал размером 8 1/2 x 11 для печати на трех страницах и цветная закладка размером 4 1/2 x 11 (лицевая и оборотная стороны).

Плакат о мытье рук

Этот 2-страничный плакат содержит информацию о мытье рук.Плакат напечатан в полноцветном формате на бумаге 8 1/2 x 11. Первая страница на английском языке, вторая страница на испанском.

План снижения рисков

Этот документ может использоваться центрами, дошкольными учреждениями и поставщиками детских домов для оценки потенциальных опасностей в их среде ухода за детьми и разработки плана смягчения последствий для устранения потенциальной опасности. Этот документ также может быть использован для документации Системы оценки качества (QRS) штата Айова, касающейся здоровья и безопасности.

Брошюра о головных вшах

В этой брошюре представлены советы и информация о лечении головных вшей в соответствии с рекомендациями Министерства здравоохранения штата Айова.Это двусторонняя цветная брошюра (8 1/2 x 11).

Ежедневный отчет о младенцах

Этот двусторонний раздаточный материал (8 1/2 x 11) предоставляет поставщикам услуг по уходу за детьми метод общения с семьями по вопросам ухода за их младенцем. В документе есть раздел, в котором родители могут сообщить о состоянии своего ребенка по прибытии в учреждение присмотра за детьми. В документе есть место, где поставщик услуг по уходу за ребенком может сообщить о состоянии ребенка и оказанном уходе.

Информационный бюллетень по репелленту от насекомых

Этот 2-страничный (8 1/2 x / 11) раздаточный материал содержит факты и советы по профилактике укусов и укусов насекомых.

Плакат с обязательным докладчиком

Этот цветной плакат размером 8 1/2 x 11 дюймов под названием «Ваш партнер в защите детей» был разработан для того, чтобы поставщики услуг по уходу за детьми размещали его для уведомления родителей о том, что у них есть сайт обязательного сообщения о жестоком обращении с детьми.

Информация о ручном мытье посуды

Этот 2-страничный информационный бюллетень размером 8 1/2 x 11 содержит информацию о трехэтапном процессе мытья посуды вручную и о том, как контролировать выполнение дезинфекции.

Плакат для мытья посуды вручную

Этот цветной плакат на одной странице (8 1/2 X 11) содержит инструкции по трехэтапному процессу мытья посуды вручную.

Компетенция по применению лекарственных препаратов

В этом раздаточном материале на 1 странице (8 1/2 x 11) объясняются требования к прохождению оценки компетентности в отношении навыков приема лекарств для поставщиков медицинских услуг, которые прошли 2-часовой курс повышения квалификации в отношении навыков приема лекарств.

Лист компетенций по применению лекарственных препаратов

Этот 16-страничный (8 1/2 x 11) набор тестовых листов для проверки навыков приема лекарственных препаратов включает шаги для 8 форм лекарств, которые часто используются в учреждении по уходу за детьми.Эти листы могут быть полезны поставщикам медицинских услуг для безопасного приема лекарств.

Навыки приема лекарств: Кому следует пройти этот курс?

Компетенция по навыкам приема лекарств : Кому следует пройти этот курс? Раздаточный материал на 1 странице (8 1/2 x 11) объясняет, кто должен пройти этот курс, а также требования к участникам.

Безопасность лекарств: безопасное и правильное хранение лекарств

Этот 2-страничный (8 1/2 x 11) информационный бюллетень содержит информацию о безопасности лекарств, включая их хранение, лекарства неотложной помощи, лекарства с истекшим сроком годности и их правильную утилизацию.

План действий по борьбе с мигренью

План действий по детской мигрени – это 3-страничная (8 1/2 x 11) форма, которую предприятия по уходу за детьми могут использовать при планировании ухода за ребенком с мигренью.

Ежемесячный отчет о приеме лекарств

Эта 2-страничная (8 1/2 x 11) цветная форма может использоваться поставщиками услуг по уходу за детьми для документирования лекарств, принимаемых детьми во время ухода.

Уход за детьми на открытом воздухе

Этот 2-страничный (8 1/2 x 11) раздаточный материал содержит информацию и ресурсы о важности условий для ухода за детьми на открытом воздухе и поддержания здоровья и безопасности на открытом воздухе.

Покрытие игровой площадки

Этот 2-страничный (8 1/2 x 11) информационный бюллетень предоставляет информацию о национальных стандартах покрытия игровых площадок и предотвращения травм.

Safe Sleep Часто задаваемые вопросы

Этот 3-страничный (8 1/2 x 11) раздаточный материал включает часто задаваемые вопросы о безопасном сне младенцев и может использоваться поставщиками услуг с Политикой безопасного сна младенцев. Часто задаваемые вопросы о безопасном сне соответствуют стандартам безопасного сна для младенцев Американской академии педиатрии для предотвращения синдрома внезапной детской смерти (СВДС) и смертей, связанных со сном.

Политика безопасного сна

Эта 2-страничная форма (8 1/2 x 11) может использоваться поставщиками для Политики безопасного сна для младенцев. Политика безопасного сна для младенцев соответствует стандартам безопасного сна для младенцев Американской академии педиатрии для предотвращения синдрома внезапной детской смерти (СВДС) и смертей, связанных со сном. Обратите внимание, что Политика безопасного сна на испанском языке в настоящее время недоступна.

План действий по изъятию

Эта 2-страничная форма (8 1/2 x 11) может использоваться для планирования ухода за детьми с судорогами.

Руководящие принципы политики в отношении отказа от табака и никотина

Эта 2-страничная форма (8 1/2 x 11) помогает поставщикам услуг по уходу за детьми разработать Политику отказа от табака и никотина для использования в их бизнесе по уходу за детьми.

Направляющая для чистки зубов

Этот 3-страничный (8 1/2 x 11) информационный бюллетень из программы I-Smile Департамента общественного здравоохранения штата Айова содержит информацию для поставщиков услуг по чистке зубов и уходу за полостью рта.

Время живота

Этот 1-страничный (8 1/2 x 11) информационный бюллетень содержит информацию о том, что такое «время на живот», о способах поощрения ребенка во время «живота», необходимом наблюдении взрослых и безопасности.

Разумное использование химикатов

Разумное использование химикатов – это многоцветный 3-страничный (8 1/2 x 11) документ, который предприятия по уходу за детьми могут использовать при принятии решений о покупке чистящих, дезинфицирующих и дезинфицирующих средств.

Детский скрининг Well

Этот 1-страничный (8 1/2 x 11) информационный бюллетень предоставляет информацию для родителей и поставщиков услуг по уходу за детьми о правилах проверки благополучия детей.

Организационные элементы управления: прямая связь, одновременная работа и обратная связь – видео и стенограмма урока

Объяснение элементов управления с прогнозированием

Элементы управления с прогнозированием включает выявление и предотвращение проблем в организации до того, как они возникнут.Контроль с прогнозированием носит упреждающий и профилактический характер. Элементы управления с прогнозированием полезны для менеджеров, потому что они позволяют руководителю эффективно планировать работу; они могут заранее регулировать такие ресурсы, как сотрудники, сырье и капитал. Это означает, что можно избежать проблем в будущем. Хотя упреждающие меры могут быть дорогостоящими и могут замедлить процесс планирования, они помогают избежать проблем в дальнейшем.

Представим себе отделение неотложной помощи городской больницы. В отделении неотложной помощи требуется много разных сотрудников для правильного лечения пациентов.От высококвалифицированных сотрудников до сотрудников с минимальной квалификацией – каждая функция отделения неотложной помощи должна быть полностью функциональной и бесперебойной.

Во избежание проблем, которые могут возникнуть в отделении неотложной помощи, важно, чтобы руководство городской больницы нанимало нужных людей, регулярно осматривало и тестировало оборудование и имело достаточно капитальных ресурсов для управления любой неотложной медицинской помощью, которая может возникнуть. Это акцент на входных данных, или на вещах, которые организация может включить в планирование, чтобы убедиться, что цели могут быть достигнуты.

Более пристальный взгляд на членов управленческой команды отделения неотложной помощи покажет, что средства контроля с прогнозированием действуют всегда. Когда мы рассмотрим примеры упреждающего контроля, мы обнаружим, что есть очень подробный план управления персоналом, план обслуживания оборудования и хорошо финансируемый бюджетный план.

Упреждающее планирование можно использовать при планировании отдела кадров. План человеческих ресурсов гарантирует, что менеджеры по найму нанимают нужных людей на каждую должность.Однако есть и обратная сторона. Наем нужных людей может быть дорогостоящим и трудоемким. Время и деньги тратятся на размещение объявлений «Требуется помощь» в нужных газетах и ​​на правильных интернет-сайтах вакансий, собеседование с кандидатами, проверка биографических данных и тестирование на наркотики, обучение и льготы по здоровью.

Без четкого плана управления персоналом отделение неотложной помощи не может быть укомплектовано надлежащим персоналом. Для работы отделения неотложной помощи может не хватить медицинского персонала. В дальнейшем это может вызвать множество проблем.

Вот несколько примеров того, как упреждающий и превентивный подход может помочь избежать проблем в будущем:

  • Тщательное собеседование с кандидатом может многое рассказать менеджеру отдела кадров о том, как этот человек впишется в организацию. Спешное собеседование может привести к найму на работу не того человека.
  • Проведение проверок биографических данных и проверок на наркотики сотрудников очень важно. В отделении неотложной помощи нет места для сотрудников с криминальным прошлым или проблемами с наркотиками.Например, прием на работу потребителя наркотиков может привести к несоответствиям в назначении лекарств пациентам, несчастным случаям и травмам сотрудников, более высоким требованиям ответственности и прогулам.
  • Учебные программы эффективно поддерживают стандарты качества. В отделении неотложной помощи может случиться так много вещей, которые могут пойти не так. Например, поскользнуться и упасть можно, обучив сотрудников устранению разливов.
  • Еще одним средством контроля с прогнозированием может быть предложение сотрудникам хорошего плана медицинского страхования. Когда сотрудники здоровы, они надежно выходят на работу.Это сокращает количество прогулов.

Объяснение параллельных элементов управления

Параллельные элементы управления включает выявление и предотвращение проблем в организации по мере их возникновения. Это означает, что системы контролируются в режиме реального времени. Параллельный контроль начинается со стандартов, и вся деятельность сотрудников измеряется по стандарту. Обычно это стандарты контроля качества. Это означает, что продукты и услуги можно проверять по мере их производства или исполнения, чтобы быть уверенным, что производятся или предоставляются продукт или услуга самого высокого качества.Параллельные элементы управления важны, потому что они происходят в реальном времени.

Это сосредоточено на текущих процессах или на вещах, которые организация может изменить в режиме реального времени, чтобы убедиться, что цели могут быть достигнуты.

Давайте еще раз посетим городскую больницу. В отделении неотложной помощи городской больницы используются параллельные средства контроля, когда решения просто не могут быть приняты на основе превентивного подхода. Некоторые проблемы возникают во время занятия. Таким образом, вместо того, чтобы ждать, пока будет завершена вся рабочая деятельность, параллельные элементы управления позволяют менеджерам отслеживать рабочие действия по мере их возникновения.Некоторые области организации, которые выигрывают от параллельных средств контроля, – это производство и поведение сотрудников.

Вот несколько примеров того, как подход в реальном времени может помочь в обнаружении проблем во время выполнения действий:

В городской больнице

работают тысячи людей, которые выполняют много разных работ. Одно из самых оживленных мест в городской больнице – кафетерий. В любой день и ночь персонал кафетерия обслуживает более 5000 обедов. Блюда готовятся на конвейере на кухне, а затем доставляются в комнаты.Блюда готовятся на сборочной линии, то есть лотки стекают по конвейерной ленте. По мере того, как лотки проходят через различные станции, компоненты блюда помещаются на лоток.

Конвейерная лента оснащена камерами и датчиками, которые обнаруживают проблемы в процессе. Камеры покажут наблюдающему менеджеру по контролю качества, как движется лента в любой момент времени. Датчики подают сигнал тревоги, если лента останавливается или становится слишком загруженной лотками. Когда что-то идет не так на сборочной линии, менеджер по контролю качества немедленно уведомляется.Узнав о проблеме, менеджер может принимать решения немедленно и в режиме реального времени.

Поведение сотрудников

В организации, которая придерживается высоких стандартов качества, обычно есть сотрудники, которые придерживаются таких же стандартов качества. Параллельные средства контроля позволяют сотрудникам оценивать свою работу по мере ее выполнения, чтобы определить, нужно ли вносить изменения.

Если одна или две фрикадельки попадут на сборочную линию, которые не соответствуют стандарту, сотрудник, ответственный за фрикадельки, будет немедленно уведомлен о внесении изменений в процедуру или рецепт, чтобы они соответствовали стандарту.Корректирующие действия, предпринятые на этом этапе, позволят избежать проблем постфактум.

Объяснение механизмов управления с обратной связью

Обратная связь включает выявление и исправление проблем в организации после их возникновения. Обратная связь используется, когда предыдущие элементы управления, прямые и параллельные, стоили бы слишком дорого или занимали бы слишком много времени. Некоторые организационные цели просто не могут иметь превентивных мер и не могут быть измерены в реальном времени.

Целями продаж нельзя управлять прямым способом.Помните, что прогнозирование предполагает использование упреждающего и превентивного подхода к контролю. Цели продаж не могут использовать одновременный подход к контролю, потому что результаты таких целей, как цели продаж, могут быть измерены только после завершения действия. Цели продаж должны основываться на обратной связи.

Городская больница

использует элементы управления обратной связью для таких вещей, как опросы клиентов, цели сбора данных, цели продаж сувенирного магазина и цели продаж продуктов питания. Это фокус на , на выходе или на вещах, которые организация может извлечь из планирования, чтобы убедиться, что цели могут быть достигнуты.

Вот несколько примеров того, как реактивный подход может помочь в анализе проблем после завершения действия. Бухгалтерский отдел городской больницы ставит перед сотрудниками цели по взысканию неоплаченных больничных счетов. Сотрудники отдела взыскания платежей должны ежедневно совершать 150 звонков о взыскании задолженности пациентам, имеющим задолженность перед больницей. Единственный способ измерить эту цель – это количество сделанных звонков.

Менеджер по бухгалтерскому учету будет оценивать отчеты о звонках и отчеты о сборе, чтобы определить, приближается ли каждый сотрудник к целям сбора или выполняет их.Если в отчете указано, что сделано все необходимое количество вызовов, никаких корректирующих действий не требуется. Отзыв будет положительным. Если цели не достигнуты, это может означать, что их нужно будет сформулировать заново, чтобы сделать их более эффективными.

Резюме урока

Таким образом, существует три типа средств контроля, используемых организациями, которые сосредоточены на до, во время и после того, как были установлены цели и внедрены процессы. Самый упреждающий и превентивный контроль – это с прямой связью , и он включает принятие превентивных мер, чтобы быть уверенным, что цели будут достигнуты.Обычно это связано с людьми, капиталом и ресурсами.

Второй элемент управления – это скорее управление в реальном времени. Он называется одновременное управление и включает в себя анализ процессов, пока они активны. Это включает механизмы контроля, которые измеряют качество продукта во время его производства или оценивают производительность, пока сотрудники заняты работой.

Последним элементом управления является обратная связь , и он включает в себя анализ процессов после выполнения действия, чтобы определить, были ли достигнуты цели.Этот метод контроля можно использовать для анализа отчетов о продажах и финансовых отчетов.

Важно помнить, что существуют средства контроля, позволяющие определить, соответствует ли фактическая производительность ожидаемой. Три элемента управления, которые мы изучили в этом уроке, разбивают три разных периода времени, в течение которых используются элементы управления. Нет лучшего контроля. При выборе элемента управления, необходимого для организации, необходимо учитывать множество факторов.

Результат обучения

После того, как вы закончите этот урок, вы должны быть в состоянии описать элементы управления с прямой связью, параллельные и обратные связи, а также обсудить, как организация может использовать их для достижения своих целей в области качества и производительности.

Семь принципов HACCP

Применение принципов HACCP

Принцип 1. Проведение анализа опасностей

Применение этого принципа включает в себя перечисление этапов процесса и определение вероятных опасностей. Команда HACCP сосредоточится на опасностях, которые можно предотвратить, устранить или контролировать с помощью плана HACCP. Сообщается об обосновании включения или исключения опасности и определяются возможные меры контроля.

Принцип 2 – Определение критических контрольных точек

Критическая контрольная точка (ККТ) – это точка, этап или процедура, в которой может применяться контроль, и угроза безопасности пищевых продуктов может быть предотвращена, устранена или снижена до приемлемого уровня. Команда HACCP будет использовать дерево решений CCP, чтобы помочь определить критические контрольные точки в процессе. Критическая контрольная точка может контролировать более одной угрозы безопасности пищевых продуктов, или в некоторых случаях требуется более одной контрольной точки для контроля одной опасности.Количество необходимых ККТ зависит от этапов обработки и контроля, необходимого для обеспечения безопасности пищевых продуктов.

Принцип 3 – Установление критических пределов

Критический предел (CL) – это максимальное и / или минимальное значение, до которого биологический, химический или физический параметр должен контролироваться на ККТ для предотвращения, устранения или снижения до приемлемого уровня возникновения угрозы безопасности пищевых продуктов. Критический предел обычно представляет собой такую ​​меру, как время, температура, активность воды (Aw), pH, вес или какой-либо другой показатель, основанный на научной литературе и / или нормативных стандартах.

Принцип 4 – Монитор CCP

Группа HACCP опишет процедуры мониторинга для измерения критического предела в каждой критической контрольной точке. Процедуры мониторинга должны описывать, как будут проводиться измерения, когда будут проводиться измерения, кто отвечает за измерения и как часто измерения будут проводиться во время производства.

Принцип 5 – Принятие корректирующих мер

Корректирующие действия – это процедуры, которые выполняются при отклонении от критического предела.Команда HACCP определит шаги, которые будут предприняты для предотвращения попадания потенциально опасных пищевых продуктов в пищевую цепочку, и шаги, необходимые для исправления процесса. Обычно это включает в себя выявление проблем и шаги, предпринимаемые для того, чтобы проблема больше не возникла.

Принцип 6 – Проверка

Действия, кроме мониторинга, которые определяют действительность плана HACCP и что система работает в соответствии с планом.Группа HACCP может определять такие действия, как аудит CCP, анализ документации, предварительная проверка отгрузки, калибровка прибора и тестирование продукции как часть деятельности по проверке.

Принцип 7 – Ведение документации

Ключевым компонентом плана HACCP является запись информации, которая может использоваться, чтобы доказать, что продукт был произведен безопасно. Записи также должны включать информацию о плане HACCP. Запись должна включать информацию о группе HACCP, описание продукта, блок-схемы, анализ опасностей, выявленные CCP, критические пределы, систему мониторинга, корректирующие действия, процедуры ведения записей и процедуры проверки.

HACCP не автономный

Применение HACCP применяется не только на предприятии пищевой промышленности. План должен быть основан на других программах безопасности пищевых продуктов. Надлежащая производственная практика (GMP), применяемая на перерабатывающем предприятии, будет поддерживать план HACCP и решать вопросы безопасности и качества пищевых продуктов, которые не являются критическими для снижения опасностей, связанных с безопасностью пищевых продуктов. Стандартные рабочие процедуры санитарии (SSOP) требуются при проведении федеральной инспекции мясных и птицеводческих хозяйств и касаются процедур для чистых помещений, оборудования и персонала, которые необходимы для всей продукции, производимой на предприятии.

Оптимизация наборов праймеров и протоколов обнаружения SARS-CoV-2 коронавирусного заболевания 2019 (COVID-19) с использованием ПЦР и ПЦР в реальном времени

Рекомендации по разработке и оптимизации праймеров

В предыдущем исследовании мы признали важность процесс проверки и оптимизации наборов праймеров, используемых для тестирования на вирусы. Поэтому в этом исследовании мы сначала описываем подробные рекомендации по разработке и оптимизации наборов праймеров в три важных этапа (рис.1а). Первым шагом является выбор генов-мишеней ( RdRP , N , E и S ) для обнаружения в интересующем геноме (SARS-CoV-2) и разработка праймера на основе целевой последовательность каждого гена. Для оптимальной целевой последовательности, когда в транскрипте гена присутствует вариант сплайсинга, предпочтительна целевая область в более распространенном варианте сплайсинга. Для фактического дизайна праймера использовались различные инструменты, доступные на веб-сайте Primer3 (http://primer3.wi.mit.edu).Primer3 позволяет выбрать оптимальный праймер на основе T м , длины праймера и стабильности 3′-конца, которые следует учитывать при разработке каждого набора праймеров. Второй этап – это проверка in silico последовательностей праймеров и ампликонов. Идентификация вторичной структуры ампликона и возможность образования само- или гетеродимера самой последовательностью праймера были предсказаны на другом веб-сайте idtdna.com (https://sg.idtdna.com/pages/tools/oligoanalyzer).На этом сайте тенденцию к само- или гетеродимеризации можно оценить, рассчитав значение ΔG. Наконец, на веб-сайте gemone.ucsc.edu (https://genome.ucsc.edu/cgi-bin/hgPcr) инструмент ПЦР in silico можно использовать для прогнозирования возможности неспецифических реакций в том же геноме, а также геномы разных видов. Третий шаг – экспериментальное подтверждение и оптимизация набора праймеров в биологической лаборатории. Мы оптимизировали условия ПЦР, такие как температура отжига ( T a ), с помощью градиентной ПЦР, установив температуры отжига от 50 до 65 ° C и определив температуру, при которой была достигнута максимальная амплификация.В качестве меры предосторожности важно отметить, что конечная концентрация праймера, установленного в смеси для ПЦР, является критической для целевой ПЦР. При концентрациях, превышающих оптимальную, праймеры могут образовывать димеры и мешать специфичной для мишени ПЦР. Следовательно, для каждого набора праймеров необходимо тестировать концентрации в диапазоне от 100 до 500 нМ на образование димеров. При подтверждении результата ПЦР с помощью электрофореза необходимо проверить эффективность реакции на основании того, являются ли размер полосы ампликона и количество добавленного шаблона подходящим или нет.

Рис. 1. Рекомендации по созданию и оптимизации праймеров для ПЦР, карта генома SARS-CoV-2 и мишени для наборов праймеров.

a Трехэтапное руководство по конструированию и оптимизации праймеров для ПЦР. Шаг 1: гены-мишени были выбраны из геномных баз данных, и были созданы праймеры с использованием Primer3. Шаг 2: наборы праймеров были оптимизированы in silico, чтобы избежать вторичной структуры в праймерах или нецелевой амплификации. Шаг 3: разработанные праймеры были оптимизированы на уровне влажной лаборатории для достижения высокой специфичности и эффективности обнаружения мишеней. b Расположение генов-мишеней и выбранных наборов праймеров в геноме SARS-CoV-2. c Структура SARS-CoV-2 с указанием каждого белка и его названия.

Чтобы продемонстрировать важность процедуры оптимизации праймеров, мы провели ПЦР (35 циклов) с использованием различных наборов неоптимальных праймеров с матричной ДНК или без нее (кДНК SARS-CoV-2) и в различных условиях T a (рис. ). Первый пример продемонстрировал появление ложного образования праймер-димер (рис.2а). Димер праймера – это побочный продукт ПЦР, состоящий из молекул праймера, которые гибридизуются друг с другом из-за цепочек комплементарных оснований в праймерах 22 . В первом примере мы провели ПЦР с ранее описанным набором праймеров SARS-CoV-2_IBS_RdRP1 9 . Полученные данные электрофореза показали появление ложных коротких димерных полос примерно на 30–50 пар оснований (п.н.) вместе с темной полосой с ожидаемым размером ампликона 118 п.н. в условиях шаблона (рис.2а). Фактически, полосы праймер-димер были обнаружены во всех условиях, независимо от присутствия матрицы. Кроме того, интенсивность полос праймер-димер имела тенденцию к снижению с повышением температуры. Появление полос праймер-димер свидетельствует о том, что концентрация праймера и T a не оптимальны и должны быть оптимизированы путем уменьшения концентрации праймера и увеличения T a .

Рис. 2: Примеры результатов теста неоптимального набора праймеров с использованием ПЦР.

Результаты электрофореза после ПЦР (35 циклов) с различными наборами неоптимальных праймеров с ДНК-матрицей или без нее (кДНК SARS-CoV-2) и в различных условиях T a . a Пример появления димеров коротких праймеров во всех условиях, выполненный с набором праймеров SARS-CoV-2_IBS_RdRP1. b Пример появления димеров коротких и длинных праймеров под низким T a , с набором праймеров SARS-CoV-2_IBS_S1. c Пример появления длинных димеров праймеров под низким T a , с набором праймеров SARS-CoV-2_IBS_E1. d Пример низкоэффективных праймеров в ПЦР, проводимой с набором праймеров CDC_RNAse P. e Пример появления неспецифической полосы при низком уровне T a в ПЦР, проведенной с набором праймеров SARS-CoV-2_IBS_N1. Красные звездочки указывают на длинные димеры праймеров.

Второй пример продемонстрировал появление ложного длинного димера вместе с более короткой полосой праймер-димер (рис.2б, в). В этих примерах мы провели ПЦР с ранее опубликованными наборами праймеров SARS-CoV-2_IBS_S1 (рис. 2b) и SARS-CoV-2_IBS_E1 (рис. 2c) 9 . Хотя в условиях, включая матричную ДНК, наблюдались сильные положительные полосы ожидаемого размера, длинные димерные полосы появлялись при низкой температуре T a = 50 ° C и 55 ° C, но не при высокой температуре T a = 60 ° C, в условиях отсутствия шаблона (красные звездочки на рис. 2б, в). Эти результаты предполагают, что, когда набор праймеров показывает возможность образования длинного побочного продукта ПЦР, этого можно избежать, увеличив T a .

Третий пример показал набор малоэффективных праймеров. В этом примере мы провели ПЦР с ранее описанным набором праймеров CDC_RNAse P 9 (фиг. 2d). Полученные данные электрофореза показали, что во всех условиях наблюдались сильные ложные длинные и короткие полосы праймеров и слабые полосы или их отсутствие (рис. 2d). Появление этих сильных полос праймеров указывает на то, что набор праймеров проявляет тенденцию к чрезмерной димеризации, которая сильнее, чем его тенденция к гибридизации с матрицей.Эти результаты предполагают, что этот набор праймеров следует выбросить, а новый набор праймеров должен быть разработан и оптимизирован.

Последний пример продемонстрировал появление очень длинной неспецифической полосы. В этом примере мы провели ПЦР с SARS-CoV-2_IBS_N1. Полученные данные электрофореза показали отсутствие полосы праймер-димер и сильную ожидаемую полосу в условиях, содержащих матричную ДНК (рис. 2e). Однако была ложная очень длинная неспецифическая полоса около 400 п.н. при низком T a = 50 ° C и 55 ° C, но не при высоком T a = 60 ° C в отсутствие матричная ДНК (рис.2д). Отсутствие полосы праймер-димер указывает на то, что сам набор праймеров является оптимальным набором праймеров. Однако наличие неспецифической полосы при низком уровне T a предполагает, что оптимальное значение T a было выше и было близко к T a = 60 ° C.

Таким образом, наборы праймеров, которые показывают образование праймер-димер, можно просто оптимизировать, увеличив T a , тогда как набор праймеров, используемый на рис. 2d, необходимо изменить.Без оптимизации образующиеся ложные димеры праймеров и побочные продукты могут привести к появлению ложноположительной кривой при высоких значениях C t , близких к 35 циклам, и низких температурах плавления, независимо от наличия или отсутствия шаблон в ПЦР в реальном времени 23 . При разработке нового набора праймеров можно следовать трехэтапным рекомендациям, которые мы предложили на рис. 1а.

Дизайн и оптимизация праймера SARS-CoV-2

В этом исследовании мы планировали разработать протокол обнаружения для традиционной ПЦР, а также ПЦР в реальном времени.Кроме того, мы планировали разработать протокол обнаружения для мультиплексной ПЦР, а также мультиплексной ПЦР в реальном времени. Мы разработали и оптимизировали наборы праймеров для каждого протокола в соответствии с рекомендациями, показанными на рис. 1а. Список недавно разработанных наборов праймеров, а также наиболее оптимизированные наборы праймеров из предыдущего исследования 9 показаны в таблице 1. Наши наборы праймеров были разработаны специально для SARS-CoV-2, поэтому они не нацелены на другие коронавирусы человека. , таких как человеческий коронавирус OC43 (HCoV-OC43), человеческий коронавирус NL63 (HCoV-NL63), человеческий коронавирус HKU1 (HCoV-HKU1) и человеческий коронавирус 229E (HCoV-229E).

Среди наборов праймеров, которые были разработаны для обнаружения SARS-CoV-2 в режиме реального времени в предыдущем исследовании 9 , некоторые наборы праймеров были повторно оценены и отобраны на основе рекомендаций по дизайну и оптимизации представлены на рис. 1а (табл. 1). Используя выбранные наборы праймеров, мы провели традиционную ПЦР, как показано на фиг. 3, и ПЦР в реальном времени, как показано на фиг. 4, 5. Кроме того, новые наборы праймеров позволили получить ампликоны размером от 100 до 400 пар оснований.Эти новые наборы праймеров нацелены на гены RdRP , E , N и S SARS-CoV-2 (рис. 1b, c) и были использованы для мультиплексной ПЦР на рис. 6 (таблица 1) . Для обнаружения человеческого IPC мы разработали новые наборы праймеров, нацеленные на гены ACTB (актин бета), TBP (связывающий белок TATA-Box), 18S рРНК и GAPDH гены Homo sapiens ( Таблица 1). Эти наборы праймеров IPC использовали для контроля качества добровольной кДНК образца и проверки ПЦР.Новые наборы праймеров для множественной ПЦР-детекции были оптимизированы, как показано на фиг. 6a, b, в соответствии с рекомендациями, показанными на фиг. 1a.

Рис. 3: Разработка традиционного протокола ПЦР для обнаружения SARS-CoV-2.

Результаты гель-электрофореза в результате ПЦР (35 циклов) с использованием наборов праймеров SARS-CoV-2_IBS_E2, SARS-CoV-2_IBS_RdRP2, SARS-CoV-2_IBS_S2 и SARS-CoV-2_IBS_N1. Праймеры GAPDH использовали в качестве набора праймеров IPC. Прогнозируемый размер ампликонов составлял примерно 100 п.н. Пять нанограммов кДНК SARS-Cov-2 (4.5 × 10 8 копий на реакцию) или кДНК HEK-293T (1,5 × 10 3 копий на реакцию) использовали для каждой реакции. Условие отсутствия матрицы не содержало кДНК.

Рис. 4: Улучшение протокола обнаружения ПЦР в реальном времени для SARS-CoV-2.

ПЦР в реальном времени выполняли с использованием наборов праймеров SARS-CoV-2 SARS-CoV-2_IBS_E2, SARS-CoV-2_IBS_RdRP2, SARS-CoV-2_IBS_S2 и SARS-CoV-2_IBS_N1. Набор праймеров GAPDH использовали в качестве набора праймеров IPC. Каждая строка представляет каждый набор праймеров.Слева каждый график представляет собой график амплификации, который показывает изменение значений log (ΔRn) в зависимости от номера цикла ПЦР. Ось Y представляет нормализованное репортерное значение (Rn), которое было рассчитано как сигнал флуоресценции от SYBR Green, нормализованный к сигналу флуоресценции эталонного красителя. Графики справа представляют графики кривой плавления, которые отображают данные, собранные на этапе кривой плавления. Пики на кривой плавления могут указывать на температуру плавления ( T m ) мишени или идентифицировать неспецифическую ПЦР-амплификацию.На оси Y производное репортера (-Rn ‘) вычисляли как отрицательную первую производную Rn, генерируемую репортером во время ПЦР-амплификации. Зеленая кривая соответствует образцу кДНК U добровольца. Синяя кривая – кДНК SARS-CoV-2. Фиолетовая кривая соответствует условию отсутствия шаблона. Все данные представлены как среднее значение ± S.E.M.

Рис. 5: Разработка протокола обнаружения мультиплексной ПЦР в реальном времени для SARS-CoV-2.

Мультиплексные результаты ПЦР в реальном времени для наборов праймеров SARS-CoV-2 SARS-CoV-2_IBS_E2, SARS-CoV-2_IBS_RdRP2, SARS-CoV-2_IBS_S2 и SARS-CoV-2_IBS_N1.Набор праймеров GAPDH использовали в качестве набора праймеров IPC. Графики слева представляют графики амплификации. Графики справа представляют собой графики кривых плавления. Конечная концентрация смеси праймеров составляла 500 нМ. Зеленая кривая соответствует образцу кДНК U добровольца. Синяя кривая – кДНК SARS-CoV-2. Фиолетовая кривая соответствует условию отсутствия шаблона. Все данные представлены как среднее значение ± S.E.M.

Рис. 6: Оптимизация и разработка протокола мультиплексной ПЦР для обнаружения SARS-CoV-2.+

+, B Гель-электрофорез результаты ПЦР с наборов праймеров SARS_CoV-2_IBS_m_RdRP 1, SARS_CoV-2_IBS_m_RdRP 2, SARS_CoV-2_IBS_m_S 1, SARS_CoV-2_IBS_m_S 2, SARS_CoV-2_IBS_m_N 1, SARS_CoV-2_IBS_m_N 2, 18S рРНК , IBS_m_ACTB 1, IBS_m_ACTB 2, IBS_m_TBP 1 и IBS_m_TBP 2. Ожидаемые размеры продуктов ПЦР указаны в таблице 1. c , d Результаты гель-электрофореза, полученные в результате мультиплексной ПЦР в SARS-CoV-2, HEK-293T, Voulteer U и реакции без шаблона с использованием смеси из четырех наборов праймеров для c SARS-CoV-2 для обнаружения (SARS-CoV-2_IBS_E2, SARS-CoV-2_IBS_m_RdRP 1, SARS-CoV-2_IBS_m_S 1 и SARS- CoV-2_IBS_m_N 1). d Смесь трех наборов праймеров использовали для обнаружения человеческого IPC (IBS_m_TBP 1, IBS_m_ACTB 1 и 18S рРНК). Расположение каждого предсказанного продукта ПЦР в геле указано справа.

Разработка традиционного протокола ПЦР для обнаружения SARS-CoV-2

Для разработки традиционного протокола обнаружения ПЦР для SARS-CoV-2, который может быть легко реализован в любой биологической лаборатории по всему миру, мы разработали протокол на основе ПЦР с использованием лучшие наборы праймеров среди ранее разработанных наборов праймеров 9 после оптимизации каждого набора праймеров в соответствии с рекомендациями, показанными на рис.1а. Мы использовали кДНК SARS-CoV-2 в качестве положительного контроля, кДНК человеческого происхождения HEK-293T в качестве человеческого IPC и CDC_RNAae P (рис. 2d) в качестве праймер-димерного контроля. Мы провели ПЦР (35 циклов) для каждого набора праймеров с использованием полимеразы Taq (рис. 3). Результаты электрофореза показали, что наборы праймеров SARS-CoV-2 SARS-CoV-2_IBS_E2, SARS-CoV-2_IBS_RdRP2, SARS-CoV-2_IBS_S2 и SARS-CoV-2_IBS_N1 давали только темные полосы соответствующего размера (~ 100 п.н.) в присутствии матрицы кДНК SARS-CoV-2, а не в условиях кДНК HEK-293T или без матрицы (рис.3). Наборы праймеров SARS-CoV-2 человека IPC показали несколько признаков образования ложных праймер-димерных полос (рис. 3), что указывает на то, что набор праймеров был высоко оптимизирован по сравнению с неоптимизированными наборами праймеров. Мы использовали праймеры GAPDH в качестве набора праймеров IPC человека и обнаружили, что, хотя наборы праймеров SARS-CoV-2 не давали детектируемой полосы с кДНК HEK-293T, набор праймеров GAPDH давал положительную полосу в присутствии кДНК HEK-293T ( Рис.3). Результаты GAPDH показали, что кДНК HEK-293T была приготовлена ​​должным образом.Поскольку геномная РНК SARS-CoV-2 была первоначально получена из линии клеток Vero, выделенных из эпителиальных клеток почек, выделенных из африканской зеленой обезьяны ( макака-резус ) 19 , положительная полоса GAPDH была получена в присутствии SARS- КДНК CoV-2 указывала на то, что кДНК клетки Vero была случайно включена в кДНК SARS-CoV-2 (рис. 3). Это было подтверждено с помощью инструмента ПЦР in silico, как показано на рис. 1а. Взятые вместе, результаты показали, что мы разработали традиционный протокол обнаружения SARS-CoV-2 на основе ПЦР, который можно будет использовать во всем мире в любой биологической лаборатории, оснащенной обычным ПЦР-аппаратом.

Улучшение протокола обнаружения ПЦР в реальном времени для SARS-CoV-2

В нашем предыдущем отчете мы предоставили 9 уникальных наборов праймеров, нацеленных на SARS-CoV-2 9 . Однако эти наборы праймеров не были оптимизированы в соответствии с рекомендациями, показанными на рис. 1а. Поэтому в этом исследовании мы оптимизировали и выбрали лучшие наборы праймеров в попытке улучшить протокол на основе ПЦР в реальном времени. Используя выбранные наборы праймеров для SARS-CoV-2_IBS_E2, SARS-CoV-2_IBS_RdRP2, SARS-CoV-2_IBS_S2 и SARS-CoV-2_IBS_N1, мы провели ПЦР в реальном времени для каждого набора праймеров и Volunteer U или SARS-CoV- 2 образца кДНК или контроль без матрицы (рис.4). Результаты ПЦР в реальном времени отображаются на двух отдельных графиках для каждого набора праймеров: график амплификации и график кривой плавления (рис. 4). График амплификации показывает изменение значений log (ΔRn) в зависимости от номера цикла ПЦР, тогда как график кривой плавления показывает динамику плавления диссоциации цепей ДНК и последующего высвобождения ДНК, связанной с красителем SYBR® Green I 24 . Форма и положение этой кривой плавления ДНК зависят от соотношения GC / AT, длины и последовательности и могут использоваться для дифференциации ампликонов, разделенных менее чем на 2 ° C по температуре плавления 24 .Результаты амплификации и график кривой плавления для каждого набора праймеров показали отсутствие достоверно положительного сигнала при значениях C t ниже 37 для всех четырех наборов праймеров SARS-CoV-2 (SARS-CoV2_IBS_RdRP2, SARS-CoV2_IBS_S2 , SARS-CoV2_IBS_E2 и SARS-CoV2_IBS_N1), тогда как при использовании кДНК образца U добровольца был положительный сигнал для GAPDH (зеленая кривая, рис. 4; дополнительная таблица 1). Это сильно контрастировало со значительно положительными сигналами, полученными с кДНК SARS-CoV-2 (синяя кривая, рис.4). Положительные сигналы на графике амплификации последовательно представлены острыми пиками на соответствующем графике кривой плавления (рис. 4). Несоответствие между положениями пиков на кривых плавления GAPDH для образцов SARS-CoV-2 и Volunteer U, скорее всего, было связано с 11% разницей в последовательностях ампликонов между двумя видами приматов ( Homo sapiens и макака-резус ), на что указывает ПЦР in silico (дополнительная таблица 1). Для определения наличия SARS-CoV-2 мы использовали те же критерии, которые описаны в предыдущем документе 9 : если был обнаружен какой-либо один из генов SARS-CoC-2, он записывался как «обнаружен SARS-CoV-2. », Или, если обнаружен только ген IPC человека, он был записан как« SARS-CoV-2 НЕ обнаружен ».Основываясь на этих результатах и ​​применяемых критериях, мы пришли к выводу, что доброволец U, скорее всего, был отрицательным по SARS-CoV-2. Взятые вместе, эти результаты показывают, что использование оптимизированных наборов праймеров вместе с анализом кривой плавления может обеспечить улучшенный протокол обнаружения SARS-CoV-2 без ложных срабатываний.

Разработка протокола мультиплексной ПЦР в реальном времени для обнаружения SARS-CoV-2

Используя оптимизированные наборы праймеров для ПЦР в реальном времени, мы попытались разработать альтернативный протокол обнаружения, приняв мультиплексную ПЦР в реальном времени, в которой все наборы праймеров смешивают в одном реакционном буфере.Разработав протокол мультиплексной ПЦР в реальном времени, мы рассчитывали сократить необходимое количество образца и реагентов, время подготовки, стоимость и трудозатраты. Для получения смеси с набором праймеров мы смешали все наборы праймеров, нацеленных на SARS-CoV-2, в реакционном буфере, и набор праймеров IPC растворяли отдельно в реакционном буфере. Таким образом, нам удалось снизить общее количество реакций с 15 до 6, когда мы приняли метод мультиплексирования. Чтобы уменьшить образование праймер-димер, когда все наборы праймеров были смешаны вместе, мы пропорционально уменьшили концентрацию каждого набора праймеров так, чтобы конечная концентрация всех наборов праймеров составляла 500 нМ (по 125 нМ каждый).В остальном процедура была такой же, как и для ПЦР в реальном времени. Мы получили очень похожие результаты на графиках амплификации для мультиплексной ПЦР в реальном времени (рис. 5), что и результаты, полученные с помощью ПЦР в реальном времени (рис. 4). В частности, график амплификации показал одну объединенную кривую реакции для всех четырех наборов праймеров со значительно более низким значением C t (фиг. 5; дополнительная таблица 1) по сравнению с таковой для каждого набора праймеров (фиг. 4). Точность эксперимента была подтверждена графиком кривой плавления, поскольку кривая плавления для положительного сигнала показывала несколько пиков, причем каждый пик представлял каждый ампликон для соответствующего набора праймеров (фиг.4, 5; Дополнительная таблица 1). Основываясь на этих результатах, мы пришли к выводу, что доброволец U, скорее всего, был отрицательным на SARS-CoV-2. Взятые вместе, результаты демонстрируют, что недавно разработанный протокол мультиплексной ПЦР в реальном времени можно использовать для быстрого и точного обнаружения SARS-CoV-2 в качестве экономичной альтернативы протоколу ПЦР в реальном времени.

Разработка протокола мультиплексной ПЦР для обнаружения SARS-CoV-2

В качестве альтернативы традиционному протоколу на основе ПЦР мы дополнительно разработали протокол обнаружения SARS-CoV-2 на основе мультиплексной ПЦР, в котором все наборы праймеров были смешанные вместе в реакционном буфере.Чтобы визуализировать и отделить каждый ампликон каждого набора праймеров, мы разработали новые наборы праймеров, нацеленные на гены RdRP , S и N в геноме SARS-CoV-2, где каждый набор праймеров продуцировал ампликон другого типа. размер (т.е. 200, 300 и 400 п.н. соответственно). Для набора праймеров, нацеленного на ген E , использовали ранее описанный набор праймеров SARS-CoV-2_IBS_E2, продуцирующий ампликон длиной 116 п.н. (Таблица 1). Для наборов праймеров IPC человека мы аналогичным образом разработали новые наборы праймеров, нацеленные на 18 S рРНК , ACTB и TBP с размерами ампликонов 200, 300 и 400 пар оснований соответственно.Все наборы праймеров IPC человека включали последовательности праймеров, общие с африканской зеленой обезьяной ( макака-резус ), за исключением набора праймеров IBS_m_TBP 1. Для оптимизации недавно разработанных наборов праймеров мы провели ПЦР (35 циклов) с кДНК SARS-CoV-2 в качестве положительного контроля и кДНК человеческого происхождения HEK-293T в качестве человеческого IPC (рис. 6a, b). Результаты электрофореза показали положительные темные полосы подходящего размера и отсутствие димеров праймеров в присутствии кДНК SARS-CoV-2 или HEK-293T, хотя некоторые наборы праймеров показали продуцируемые димеры праймеров в условиях отсутствия матрицы (рис.6а, б). Эти результаты показали, что все наборы праймеров были высоко оптимизированы, показывая высокую эффективность амплификации и низкую тенденцию к образованию собственных или гетеропраймер-димеров. Основываясь на низком или полном отсутствии образования праймер-димерной полосы и высокой интенсивности полосы ампликона, мы выбрали следующие лучшие наборы праймеров для протокола обнаружения SARS-CoV-2 на основе мультиплексной ПЦР: SARS_CoV-2_IBS_m_RdRP 1 ( RdRP ), SARS_CoV- 2_IBS_m_S 1 ( S ), SARS_CoV-2_IBS_m_N 1 ( N ), 18S рРНК ( 18S рРНК ), IBS_m_ACTB 1 ( ACTB ) и IBS_m_TBP 1 ().

Используя выбранные наборы праймеров на этапе оптимизации, мы затем провели мультиплексную ПЦР для обнаружения SARS-CoV-2. Для мультиплексной ПЦР мы смешали все наборы праймеров, нацеленных на SARS-CoV-2, вместе в реакционном буфере, и наборы праймеров IPC человека растворяли отдельно в реакционном буфере, чтобы получить конечную общую концентрацию набора праймеров 500 нМ в обоих случаях. Верхние результаты электрофореза показали четыре положительных полосы соответствующего размера для каждого праймера SARS-CoV-2, установленного на одной дорожке в присутствии кДНК SARS-CoV-2 (рис.6в). За исключением положительной полосы, полученной с набором праймеров SARS-CoV-2_IBS_E2, другие три набора праймеров давали высокоинтенсивные положительные полосы (фиг. 6c). Это согласуется с недавним отчетом о том, что экспрессия гена E в SARS-CoV-2 очень низкая 18 . Напротив, не было никаких признаков положительной полосы в кДНК HEK-293T, кДНК U добровольца или в условиях отсутствия матрицы (фиг. 6c). В соответствии с результатами, представленными на рис. 6a, b, не было никаких признаков образования праймер-димер.