Статья 193 ТК РФ 2016-2019. Порядок применения дисциплинарных взысканий. ЮрИнспекция

В соответствии со статьей 193 Трудового кодекса РФ, дисциплинарное взыскание может быть обжаловано работником в государственную инспекцию труда и (или) органы по рассмотрению индивидуальных трудовых споров. Органами по рассмотрению трудовых споров, в соответствии со статьей 382 Трудового кодекса РФ, являются комиссии по трудовым спорам и суды. При принятии работником решения об обжаловании дисциплинарного взыскания в суде, ему следует общаться с исковым заявлением в районный суд по месту нахождения работодателя: к индивидуальному предпринимателю – по месту его жительства; к юридическому лицу – по месту его нахождения (юридическому адресу) . В соответствии со статьей 29 Гражданского процессуального кодекса РФ, иск к организации, вытекающий из деятельности ее филиала или представительства, может быть предъявлен также в суд по месту нахождения ее филиала или представительства. Следует иметь в виду, что в соответствии со статьей 333. 36 Налогового кодекса РФ, истцы, при обращении в суды общей юрисдикции по искам о взыскании заработной платы (денежного содержания) и иным требованиям, вытекающим из трудовых правоотношений, освобождаются от уплаты государственной пошлины. Если дисциплинарное взыскание признают незаконным В случае, если дисциплинарное взыскание будет признано незаконным, работодатель обязан соответствующим приказом отменить приказ (распоряжение) о наложении на работника дисциплинарного взыскания. Отказ работодателя от исполнения законных требований государственной инспекции труда или органа по разрешению трудового спора может повлечь привлечение работодателя к административной ответственности. Работник имеет право обратиться в суд за разрешением индивидуального трудового спора в течение 3 месяцев со дня, когда он узнал или должен был узнать о нарушении своего права, а по спорам об увольнении – в течение одного месяца со дня вручения ему копии приказа об увольнении либо со дня выдачи трудовой книжки (ч. 1 ст. 392 ТК РФ) . Органы, уполномоченные рассматривать трудовые споры о нарушениях трудовой дисциплины, вправе отменить наложенное дисциплинарное взыскание, если найдут, что оно, в частности, не соответствует тяжести совершенного правонарушения. Однако они не могут заменить меру взыскания, поскольку наложение дисциплинарного взыскания – прерогатива работодателя, с которым работник состоит в трудовых отношениях. Администрация же в этом случае может применить иное взыскание, но только с соблюдением сроков, указанных в ч. 3 и 4 ст. 193 ТК РФ.

Порядок применения дисциплинарного взыскания – Компания «АПИ»

До применения дисциплинарного взыскания работодатель должен затребовать от работника письменное объяснение (объяснение в форме электронного документа или в иной форме — у дистанционного работника). Если по истечении двух рабочих дней работник не предоставил указанное объяснение, работодатель составляет соответствующий акт. При этом непредоставление работником объяснения не является препятствием для применения дисциплинарного взыскания (ч. 1 ст. 193, ст. 312.3 ТК РФ).

На основании представленного объяснения работника или акта о непредоставлении объяснений работодатель издает приказ о применении дисциплинарного взыскания и объявляет его работнику под подпись в течение трех рабочих дней со дня его издания не считая времени отсутствия работника на работе. Если работник отказывается ознакомиться с указанным приказом (распоряжением) под подпись, работодатель составляет соответствующий акт. Ознакомление с приказом дистанционного работника осуществляется либо в письменной форме, в том числе под роспись, либо путем обмена электронными документами между работодателем и дистанционным работником, либо в иной форме (ч. 6 ст. 193, ч. 5 ст. 312.3 ТК РФ).

При наложении дисциплинарного взыскания работодатель должен учитывать тяжесть совершенного проступка и обстоятельства, при которых он был совершен, а также предшествующее поведение работника, его отношение к труду (ч. 5 ст. 192 ТК РФ; Определение Конституционного Суда РФ от 20. 02.2014 N 252-О; п. 53 Постановления Пленума Верховного Суда РФ от 17.03.2004 N 2).

Кроме того, в отдельных организациях может быть установлен перечень лиц, имеющих право налагать дисциплинарные взыскания на работников (п. 21 Положения N 621).

Работодатель может применить дисциплинарное взыскание в течение месяца со дня обнаружения проступка, не считая времени болезни работника, пребывания его в отпуске, а также времени, необходимого на учет мнения представительного органа работников (ч. 3 ст. 193 ТК РФ).

Дисциплинарное взыскание не может быть применено позднее шести месяцев со дня совершения проступка, а по результатам ревизии, проверки финансово-хозяйственной деятельности или аудиторской проверки — позднее двух лет со дня его совершения. За нарушение законодательства РФ о противодействии коррупции взыскание не может быть применено позднее трех лет со дня совершения проступка. В указанные сроки не включается время производства по уголовному делу (ч. 4 ст. 193 ТК РФ).

Если в течение года со дня применения дисциплинарного взыскания работник не будет подвергнут новому взысканию, то он считается не имеющим взыскания. До истечения года со дня применения взыскания работодатель имеет право снять его с работника (ст. 194 ТК РФ).

 

 

 Более подробно с данным материалом Вы можете ознакомиться в СПС КонсультантПлюс
Ситуация: В каких случаях работодатель вправе применить дисциплинарное взыскание? («Электронный журнал «Азбука права», 2021) {КонсультантПлюс}

Статья 193. Порядок применения дисциплинарных взысканий

Комментарий к статье 193

1. Для выяснения всех обстоятельств совершения дисциплинарного проступка, а также степени вины работника, совершившего проступок, руководитель организации обязан затребовать от него письменное объяснение. Такое объяснение должно быть затребовано до применения к работнику той или иной меры взыскания.

Федеральный закон от 30 июня 2006 г. N 90-ФЗ установил 2-дневный срок для предоставления работником письменного объяснения. Если по истечении 2 рабочих дней указанное объяснение не будет представлено, то составляется соответствующий акт с указанием присутствующих при этом свидетелей. Непредставление работником объяснения не препятствует наложению взыскания.

2. Дисциплинарное взыскание должно быть применено к работнику непосредственно за обнаружением проступка, но не позднее одного месяца со дня его обнаружения. Днем обнаружения проступка, с которого исчисляется срок применения дисциплинарного взыскания, считается день, когда непосредственному руководителю работника стало известно о совершенном проступке. При этом не имеет значения, наделен ли он правом налагать дисциплинарные взыскания.

Данное правило носит общий характер и распространяется на все случаи применения дисциплинарных взысканий, включая увольнение в случаях, когда виновные действия, дающие основания для утраты доверия, либо соответственно аморальный проступок совершены работником по месту работы и в связи с исполнением им трудовых обязанностей.

Следует обратить внимание на то, что Федеральный закон от 30 июня 2006 г. N 90-ФЗ установил иной срок увольнения работника за утрату доверия либо аморальный проступок, если указанные виновные действия совершены вне места работы или по месту работы, но не в связи с исполнением трудовых обязанностей, и, следовательно, не являются дисциплинарными взысканиями. В этих случаях увольнение не допускается позднее одного года со дня обнаружения проступка работодателем (ч. 5 ст. 81 ТК).

Разъясняя указанное положение Федерального закона, Пленум Верховного Суда РФ в п. 47 Постановления Пленума ВС РФ от 17 марта 2004 г. N 2 отметил, что если виновные действия, дающие основание для утраты доверия, либо аморальный поступок совершены работником по месту работы и в связи с исполнением им трудовых обязанностей, то такой работник может быть уволен с работы (соответственно по п. 7 или п. 8 ч. 1 ст. 81 ТК) при условии соблюдения порядка применения дисциплинарных взысканий, установленного ст. 193.

Если же виновные действия, дающие основания для утраты доверия, либо соответственно аморальный проступок совершены работником вне места работы или по месту работы, но не в связи с исполнением им трудовых обязанностей, то трудовой договор также может быть расторгнут с ним по п. 7 или п. 8 ч. 1 ст. 81 ТК, но не позднее одного года со дня обнаружения проступка работодателем.

3. В срок, в течение которого может быть применено дисциплинарное взыскание, не включается период, когда работник отсутствовал на работе в связи с болезнью или находился в отпуске. В этот же срок не засчитывается время, предоставляемое для учета мотивированного мнения выборного профсоюзного органа при расторжении трудового договора в случае неоднократного неисполнения работником без уважительных причин трудовых обязанностей, если он имеет дисциплинарное взыскание (см. коммент. к ст. 373). Отсутствие на работе по иным основаниям, в т. ч. и в связи с использованием дней отдыха (отгулов) независимо от их продолжительности (например, при вахтовом методе организации работ), не прерывает течение указанного срока (подп.

“в” п. 34 Постановления Пленума ВС РФ от 17 марта 2004 г. N 2).

К отпуску, прерывающему течение месячного срока, следует относить все отпуска, предоставляемые работодателем в соответствии с законодательством, в т. ч. ежегодные (основные и дополнительные) отпуска, отпуска в связи с обучением в учебных заведениях, отпуска без сохранения заработной платы (подп. “г” п. 34 Постановления Пленума ВС РФ от 17 марта 2004 г. N 2).

Если в качестве дисциплинарного взыскания к работнику применяют увольнение по подп. “г” п. 6 ч. 1 ст. 81 ТК, месячный срок исчисляется со дня вступления в законную силу приговора, которым установлена вина работника в хищении (в т. ч. мелкого) чужого имущества, растрате, умышленном его уничтожении или повреждении, либо постановления компетентного органа о наложении за это правонарушение административного взыскания.

При длительном прогуле месячный срок со дня обнаружения проступка исчисляется не с первого дня прогула, а с последнего, т. к. только после появления на работе лица, совершившего прогул, станет известно, какова его причина и может ли быть применено дисциплинарное взыскание.

4. Не допускается применение дисциплинарного взыскания по истечении 6 месяцев со дня совершения проступка, а по результатам ревизии, проверки финансово-хозяйственной деятельности или аудиторской проверки – 2 лет со дня его совершения, не считая времени производства по уголовному делу.

5. За каждый дисциплинарный проступок может быть применено только одно дисциплинарное взыскание. Однако если неисполнение или ненадлежащее исполнение по вине работника возложенных на него трудовых обязанностей продолжалось, несмотря на наложение дисциплинарного взыскания, допустимо применить к нему новое дисциплинарное взыскание, в т. ч. увольнение (п. 33 Постановления Пленума ВС РФ от 17 марта 2004 г. N 2).

6. Дисциплинарные взыскания налагаются руководителем организации. Другие должностные лица могут применять их только в случае, если такие полномочия им предоставлены соответствующими документами (уставом организации, приказом руководителя и др.).

О применении дисциплинарного взыскания издается приказ (распоряжение). В приказе (распоряжении) должны быть указаны мотивы его применения, т. е. конкретный дисциплинарный проступок, за совершение которого работник подвергается взысканию.

Работник, подвергшийся взысканию, должен быть ознакомлен с этим приказом (распоряжением) под роспись в течение 3 рабочих дней, не считая времени его отсутствия на работе. Отказ от подписи удостоверяется соответствующим актом.

Приказ (распоряжение) о применении взыскания доводится до сведения всех работников данной организации.

7. Если работник считает, что дисциплинарное взыскание применено неправомерно или мера взыскания является слишком суровой, он имеет право обратиться с жалобой в государственную инспекцию труда и (или) в органы по рассмотрению индивидуальных трудовых споров в установленном законом порядке (см. гл. 60 и коммент. к ее статьям).

Комментарии к Трудовому кодексу Российской Федерации

Под редакцией Орловского Ю. П. 2007 г. Источник: СПС Консультант

Были бы прогнозы, а погода будет.

Представляем прогноз на 1 января в Брянске Любимый читатель! Начни свое утро с нами – рассказываем о самом важном на сегодня.
Сегодня 1 января, погода 0°C. Облачно, ветер легкий, северо-западный 2.0 м/с. Атмосферное давление 737 мм рт. ст. Относительная влажность воздуха 97%.
Завтра ночью температура воздуха понизится до -4°C, ветер изменится на северный 5.1 м/с. Давление повысится и составит 743 мм рт. ст. Температура днем не опустится ниже -8°C, a ночью 03 января не поднимется выше отметки -6°C. Ветер будет южный в пределах 3.6 м/с.
Восход: 08:57 Заход: 16:34 Долгота дня: 7 ч. 37 мин.
Самый теплый декабрь 1.1 (2006). Самый холодный декабрь -12.5 (1933).

Сегодня именины отмечают

Мужчины

Григорий от древнегреческого григорео – «бодрствовать», «быть бдительным», «не спящий»
Илья от древнееврейского имени Элияху – «мой Бог – Яхве»
Тимофей от греческого имени Тимотеос – «почитающий Бога»

Женщины

Аглая от древнегреческого имени Аглаиа – «красота», «блеск», «радость»

Праздники сегодня
Новый Год
Всемирный день мира
Новогодние каникулы
День общественного достояния
День заплыва «полярных медведей» – Канада.

События и памятные даты:
154 год до н. э. — В Древнем Риме день начала годового консульства был перенесён на 1 января,
104 год до н. э. — Римский консул Гай Марий провёл по Риму пленённого царя Нумидии Югурту,
49 — Агриппина Младшая вышла замуж за Клавдия,
1501 — Конец инкунабул (от лат. incunabula — колыбель), печатных изданий в Европе, вышедших с момента изобретения книгопечатания. С этого дня европейские печатные книги условно называются палеотипами,
1515 — Франциск I становится королём после смерти Людовика XII, своего тестя, не оставившего иных наследников,
1622 — Папской канцелярией было принято решение считать началом года 1 января (ранее год начинался 25 марта),
1751 — Напечатан первый том «Энциклопедии, или Толкового словаря наук, искусств и ремесел», изданный Дени Дидро и Жаном Лероном Д’аламбером,
1785 — Выходит первый номер старейшей лондонской ежедневной газеты The Daily Universal Register (в 1788 году переименована в The Times),
1788 — Начинается выход английской газеты «Таймс».

Чиновники «УЗ» незаконно разбогатели на ремонте «Бориспольского экспресса»

Пятерых чиновников подозревают в завладении 12 миллионов гривен средств АО «Укрзализныця» на ремонте «Бориспольского экспресса».

Как сообщает Офис генпрокурора, по данным следствия, должностные лица АО «Укрзализныця» и Регионального филиала «Юго-Западная железная дорога» на протяжении 2019-2020 годов организовали схему завладения средствами «Укрзализныци».

«Находясь в сговоре с должностными лицами коммерческих структур, они пролоббировали их победу в процедурах открытых торгов по закупке услуг по капитальному ремонту оборудования «Бориспольского экспресса». При этом капитальный ремонт оборудования рельсовых автобусов PESA был осуществлен с использованием б/у запчастей ненадлежащего качества и по ценам, превышающим рыночные»

Офис генпрокурора

В результате махинаций, фигуранты завладели средствами АО «Укрзализныця» на сумму 12 миллионов гривен, выделенными на ремонт оборудования рельсовых автобусов. В дальнейшем эти средства члены организованной группы легализовали путем приобретения недвижимости, транспортных средств и обналичивания.

Правоохранители провели 29 обысков. При процессуальном руководстве ОГП разоблачено и уведомлено о подозрении пяти должностным лицам в завладении чужим имуществом в особо крупных размерах, подлоге официальных документов и легализации имущества, полученного преступным путем (ч. 5 ст. 191, ч. 2 ст. 366, ч. 193) 1 ст. 209 УК Украины).

В настоящее время, решается вопрос об избрании подозреваемым мер пресечения и аресте их имущества.

Напомним, 29 марта 2018 года Кабинет министров одобрил проект скоростного железнодорожного экспресса сообщением Центральный железнодорожный вокзал Киева — Международный аэропорт «Борисполь», а 5 июля того же года, окончательно утвердил проект магистрали.

Регулярное курсирование поездов стартовало с 30 ноября 2018 года.

За первый год работы, Kyiv Boryspil Express воспользовались около миллиона пассажиров.  Рекордное количество маршрут перевез в августе и сентябре 2019 года – 98,2 тысячи и 107,6 тысяч соответственно.

В декабре 2020 года на станции «Дарница» экспресс частично сошел с рельсов.

Также «Укрзализныця» планирует электрифицировать железнодорожный путь в аэропорт «Борисполь», что позволит запустить электрички из нескольких вагонов и увеличить провозные емкости на линии.

В декабре этого года, стоимость проезда в Kyiv Boryspil Express выросла на 20 гривен.

Congress.gov | Библиотека Конгресса

Секция записи Конгресса Ежедневный дайджест Сенат дом Расширения замечаний

Замечания участников Автор: Any House Member Адамс, Альма С. [D-NC] Адерхольт, Роберт Б. [R-AL] Агилар, Пит [D-CA] Аллен, Рик В. [R-GA] Оллред, Колин З. [D-TX] Амодеи, Марк Э. [R -NV] Армстронг, Келли [R-ND] Аррингтон, Джоди К. [R-TX] Auchincloss, Jake [D-MA] Axne, Cynthia [D-IA] Бабин, Брайан [R-TX] Бэкон, Дон [R -NE] Бэрд, Джеймс Р. [R-IN] Балдерсон, Трой [R-OH] Бэнкс, Джим [R-IN] Барр, Энди [R-KY] Барраган, Нанетт Диаз [D-CA] Басс, Карен [ D-CA] Битти, Джойс [D-OH] Бенц, Клифф [R-OR] Бера, Ами [D-CA] Бергман, Джек [R-MI] Бейер, Дональд С., младший [D-VA] Байс , Стефани И. [R-OK] Биггс, Энди [R-AZ] Билиракис, Гас М.[R-FL] Бишоп, Дэн [R-NC] Бишоп, Сэнфорд Д., младший [D-GA] Блуменауэр, Эрл [D-OR] Блант Рочестер, Лиза [D-DE] Боберт, Лорен [R-CO ] Бонамичи, Сюзанна [D-OR] Бост, Майк [R-IL] Bourdeaux, Carolyn [D-GA] Bowman, Jamaal [D-NY] Бойл, Брендан Ф. [D-PA] Брэди, Кевин [R-TX ] Брукс, Мо [R-AL] Браун, Энтони Г. [D-MD] Браун, Шонтел М. [D-OH] Браунли, Джулия [D-CA] Бьюкенен, Верн [R-FL] Бак, Кен [R -CO] Бакшон, Ларри [R-IN] Бадд, Тед [R-NC] Берчетт, Тим [R-TN] Берджесс, Майкл К. [R-TX] Буш, Кори [D-MO] Бустос, Чери [D -IL] Баттерфилд, Г.К. [D-NC] Калверт, Кен [R-CA] Каммак, Кэт [R-FL] Карбахал, Салуд О. [D-CA] Карденас, Тони [D-CA] Кэри, Майк [R-OH] Карл , Джерри Л. [R-AL] Карсон, Андре [D-IN] Картер, Эрл Л. «Бадди» [R-GA] Картер, Джон Р. [R-TX] Картер, Трой [D-LA] Картрайт, Мэтт [D-PA] Кейс, Эд [D-HI] Кастен, Шон [D-IL] Кастор, Кэти [D-FL] Кастро, Хоакин [D-TX] Cawthorn, Madison [R-NC] Chabot, Steve [ R-OH] Чейни, Лиз [R-WY] Чу, Джуди [D-CA] Cicilline, Дэвид Н. [D-RI] Кларк, Кэтрин М. [D-MA] Кларк, Иветт Д. [D-NY] Кливер, Эмануэль [D-MO] Клайн, Бен [R-VA] Клауд, Майкл [R-TX] Клайберн, Джеймс Э.[D-SC] Клайд, Эндрю С. [R-GA] Коэн, Стив [D-TN] Коул, Том [R-OK] Комер, Джеймс [R-KY] Коннолли, Джеральд Э. [D-VA] Купер , Джим [D-TN] Корреа, Дж. Луис [D-CA] Коста, Джим [D-CA] Кортни, Джо [D-CT] Крейг, Энджи [D-MN] Кроуфорд, Эрик А. «Рик» [ R-AR] Креншоу, Дэн [R-TX] Крист, Чарли [D-FL] Кроу, Джейсон [D-CO] Куэльяр, Генри [D-TX] Кертис, Джон Р. [R-UT] Дэвидс, Шарис [ D-KS] Дэвидсон, Уоррен [R-OH] Дэвис, Дэнни К. [D-IL] Дэвис, Родни [R-IL] Дин, Мадлен [D-PA] ДеФацио, Питер А. [D-OR] DeGette, Диана [D-CO] ДеЛауро, Роза Л.[D-CT] ДельБене, Сьюзан К. [D-WA] Дельгадо, Антонио [D-NY] Демингс, Вал Батлер [D-FL] ДеСолнье, Марк [D-CA] ДеДжарле, Скотт [R-TN] Дойч, Теодор Э. [D-FL] Диас-Баларт, Марио [R-FL] Дингелл, Дебби [D-MI] Доггетт, Ллойд [D-TX] Дональдс, Байрон [R-FL] Дойл, Майкл Ф. [D- PA] Дункан, Джефф [R-SC] Данн, Нил П. [R-FL] Эллзи, Джейк [R-TX] Эммер, Том [R-MN] Эскобар, Вероника [D-TX] Эшу, Анна Г. [ D-CA] Эспайлат, Адриано [D-NY] Эстес, Рон [R-KS] Эванс, Дуайт [D-PA] Фэллон, Пэт [R-TX] Feenstra, Рэнди [R-IA] Фергюсон, А. Дрю, IV [R-GA] Фишбах, Мишель [R-MN] Фицджеральд, Скотт [R-WI] Фитцпатрик, Брайан К.[R-PA] Флейшманн, Чарльз Дж. «Чак» [R-TN] Флетчер, Лиззи [D-TX] Фортенберри, Джефф [R-NE] Фостер, Билл [D-IL] Фокс, Вирджиния [R-NC] Франкель, Лоис [D-FL] Франклин, К. Скотт [R-FL] Фадж, Марсия Л. [D-OH] Фулчер, Расс [R-ID] Гаец, Мэтт [R-FL] Галлахер, Майк [R- WI] Гальего, Рубен [D-AZ] Гараменди, Джон [D-CA] Гарбарино, Эндрю Р. [R-NY] Гарсия, Хесус Дж. «Чуй» [D-IL] Гарсия, Майк [R-CA] Гарсия , Сильвия Р. [D-TX] Гиббс, Боб [R-OH] Гименес, Карлос А. [R-FL] Гомерт, Луи [R-TX] Голден, Джаред Ф. [D-ME] Гомес, Джимми [D -CA] Гонсалес, Тони [R-TX] Гонсалес, Энтони [R-OH] Гонсалес, Висенте [D-TX] Гонсалес-Колон, Дженниффер [R-PR] Гуд, Боб [R-VA] Гуден, Лэнс [R -TX] Госар, Пол А.[R-AZ] Gottheimer, Джош [D-NJ] Granger, Kay [R-TX] Graves, Garret [R-LA] Graves, Sam [R-MO] Green, Al [D-TX] Green, Mark E. [R-TN] Грин, Марджори Тейлор [R-GA] Гриффит, Х. Морган [R-VA] Гриджалва, Рауль М. [D-AZ] Гротман, Гленн [R-WI] Гость, Майкл [R-MS] Гатри, Бретт [R-KY] Хааланд, Дебра А. [D-NM] Хагедорн, Джим [R-MN] Хардер, Джош [D-CA] Харрис, Энди [R-MD] Харшбаргер, Диана [R-TN] Хартцлер, Вики [R-MO] Гастингс, Элси Л. [D-FL] Хейс, Джахана [D-CT] Херн, Кевин [R-OK] Херрелл, Иветт [R-NM] Эррера Бейтлер, Хайме [R-WA ] Хайс, Джоди Б.[R-GA] Хиггинс, Брайан [D-NY] Хиггинс, Клэй [R-LA] Хилл, Дж. Френч [R-AR] Хаймс, Джеймс А. [D-CT] Хинсон, Эшли [R-IA] Холлингсворт , Трей [R-IN] Хорсфорд, Стивен [D-NV] Houlahan, Крисси [D-PA] Хойер, Стени Х. [D-MD] Хадсон, Ричард [R-NC] Хаффман, Джаред [D-CA] Huizenga , Билл [R-MI] Исса, Даррелл Э. [R-CA] Джексон Ли, Шейла [D-TX] Джексон, Ронни [R-TX] Джейкобс, Крис [R-NY] Джейкобс, Сара [D-CA] Джаяпал, Прамила [D-WA] Джеффрис, Хаким С. [D-NY] Джонсон, Билл [R-OH] Джонсон, Дасти [R-SD] Джонсон, Эдди Бернис [D-TX] Джонсон, Генри К.«Хэнк» младший [D-GA] Джонсон, Майк [R-LA] Джонс, Mondaire [D-NY] Джордан, Джим [R-OH] Джойс, Дэвид П. [R-OH] Джойс, Джон [R -PA] Кахеле, Кайали [D-HI] Каптур, Марси [D-OH] Катко, Джон [R-NY] Китинг, Уильям Р. [D-MA] Келлер, Фред [R-PA] Келли, Майк [R-PA] Келли, Робин Л. [D-IL] Келли, Трент [R-MS] Ханна, Ро [D-CA] Килди, Дэниел Т. [D-MI] Килмер, Дерек [D-WA] Ким , Энди [D-NJ] Ким, Янг [R-CA] Kind, Рон [D-WI] Кинзингер, Адам [R-IL] Киркпатрик, Энн [D-AZ] Кришнамурти, Раджа [D-IL] Кустер, Энн М. [D-NH] Кустофф, Дэвид [R-TN] Лахуд, Дарин [R-IL] Ламальфа, Дуг [R-CA] Лэмб, Конор [D-PA] Ламборн, Дуг [R-CO] Ланжевен, Джеймс Р.[D-RI] Ларсен, Рик [D-WA] Ларсон, Джон Б. [D-CT] Латта, Роберт Э. [R-OH] Латернер, Джейк [R-KS] Лоуренс, Бренда Л. [D-MI ] Лоусон, Эл, младший [D-FL] Ли, Барбара [D-CA] Ли, Сьюзи [D-NV] Леже Фернандес, Тереза ​​[D-NM] Леско, Дебби [R-AZ] Летлоу, Джулия [R -LA] Левин, Энди [D-MI] Левин, Майк [D-CA] Лиу, Тед [D-CA] Лофгрен, Зои [D-CA] Лонг, Билли [R-MO] Лудермилк, Барри [R-GA ] Ловенталь, Алан С. [D-CA] Лукас, Фрэнк Д. [R-OK] Люткемейер, Блейн [R-MO] Лурия, Элейн Г. [D-VA] Линч, Стивен Ф. [D-MA] Мейс , Нэнси [R-SC] Малиновски, Том [D-NJ] Маллиотакис, Николь [R-NY] Мэлони, Кэролайн Б.[D-NY] Мэлони, Шон Патрик [D-NY] Манн, Трейси [R-KS] Мэннинг, Кэти Э. [D-NC] Мэсси, Томас [R-KY] Маст, Брайан Дж. [R-FL] Мацуи, Дорис О. [D-CA] МакБэт, Люси [D-GA] Маккарти, Кевин [R-CA] МакКол, Майкл Т. [R-TX] Макклейн, Лиза К. [R-MI] МакКлинток, Том [ R-CA] МакКоллум, Бетти [D-MN] Макичин, А. Дональд [D-VA] Макговерн, Джеймс П. [D-MA] МакГенри, Патрик Т. [R-NC] МакКинли, Дэвид Б. [R- WV] МакМоррис Роджерс, Кэти [R-WA] Макнерни, Джерри [D-CA] Микс, Грегори W. [D-NY] Meijer, Питер [R-MI] Менг, Грейс [D-NY] Meuser, Daniel [R -PA] Mfume, Kweisi [D-MD] Миллер, Кэрол Д. [R-WV] Миллер, Мэри Э. [R-IL] Миллер-Микс, Марианнетт [R-IA] Мооленаар, Джон Р. [R-MI] Муни, Александр X. [R-WV] Мур, Барри [R -AL] Мур, Блейк Д. [R-UT] Мур, Гвен [D-WI] Морелл, Джозеф Д. [D-NY] Моултон, Сет [D-MA] Мрван, Фрэнк Дж. [D-IN] Маллин , Маркуэйн [R-OK] Мерфи, Грегори [R-NC] Мерфи, Стефани Н. [D-FL] Надлер, Джерролд [D-NY] Наполитано, Грейс Ф. [D-CA] Нил, Ричард Э. [D -MA] Негусе, Джо [D-CO] Нелс, Трой Э. [R-TX] Ньюхаус, Дэн [R-WA] Ньюман, Мари [D-IL] Норкросс, Дональд [D-NJ] Норман, Ральф [R -SC] Нортон, Элеонора Холмс [D-DC] Нуньес, Девин [R-CA] О’Халлеран, Том [D-AZ] Обернолти, Джей [R-CA] Окасио-Кортес, Александрия [D-NY] Омар, Ильхан [D-MN] Оуэнс, Берджесс [R-UT] Палаццо, Стивен М.[R-MS] Паллоне, Фрэнк, младший [D-NJ] Палмер, Гэри Дж. [R-AL] Панетта, Джимми [D-CA] Паппас, Крис [D-NH] Паскрелл, Билл, мл. [D -NJ] Пейн, Дональд М., младший [D-NJ] Пелоси, Нэнси [D-CA] Пенс, Грег [R-IN] Перлмуттер, Эд [D-CO] Перри, Скотт [R-PA] Питерс, Скотт Х. [D-CA] Пфлюгер, Август [R-TX] Филлипс, Дин [D-MN] Пингри, Челли [D-ME] Пласкетт, Стейси Э. [D-VI] Покан, Марк [D-WI] Портер, Кэти [D-CA] Поузи, Билл [R-FL] Прессли, Аянна [D-MA] Прайс, Дэвид Э. [D-NC] Куигли, Майк [D-IL] Радваген, Аумуа Амата Коулман [R- AS] Раскин, Джейми [D-MD] Рид, Том [R-NY] Решенталер, Гай [R-PA] Райс, Кэтлин М.[D-NY] Райс, Том [R-SC] Ричмонд, Седрик Л. [D-LA] Роджерс, Гарольд [R-KY] Роджерс, Майк Д. [R-AL] Роуз, Джон В. [R-TN ] Розендейл старший, Мэтью М. [R-MT] Росс, Дебора К. [D-NC] Роузер, Дэвид [R-NC] Рой, Чип [R-TX] Ройбал-Аллард, Люсиль [D-CA] Руис , Рауль [D-CA] Рупперсбергер, Калифорния Датч [D-MD] Раш, Бобби Л. [D-IL] Резерфорд, Джон Х. [R-FL] Райан, Тим [D-OH] Саблан, Грегорио Килили Камачо [ D-MP] Салазар, Мария Эльвира [R-FL] Сан-Николас, Майкл FQ [D-GU] Санчес, Линда Т. [D-CA] Сарбейнс, Джон П. [D-MD] Скализ, Стив [R-LA ] Скэнлон, Мэри Гей [D-PA] Шаковски, Дженис Д.[D-IL] Шифф, Адам Б. [D-CA] Шнайдер, Брэдли Скотт [D-IL] Шрейдер, Курт [D-OR] Шрайер, Ким [D-WA] Швейкерт, Дэвид [R-AZ] Скотт, Остин [R-GA] Скотт, Дэвид [D-GA] Скотт, Роберт С. «Бобби» [D-VA] Сешнс, Пит [R-TX] Сьюэлл, Терри А. [D-AL] Шерман, Брэд [D -CA] Шерилл, Мики [D-NJ] Симпсон, Майкл К. [R-ID] Sires, Альбио [D-NJ] Slotkin, Элисса [D-MI] Смит, Адам [D-WA] Смит, Адриан [R -NE] Смит, Кристофер Х. [R-NJ] Смит, Джейсон [R-MO] Смакер, Ллойд [R-PA] Сото, Даррен [D-FL] Спанбергер, Эбигейл Дэвис [D-VA] Спарц, Виктория [ R-IN] Спейер, Джеки [D-CA] Стэнсбери, Мелани Энн [D-NM] Стэнтон, Грег [D-AZ] Stauber, Пит [R-MN] Стил, Мишель [R-CA] Стефаник, Элиза М.[R-NY] Стейл, Брайан [R-WI] Steube, В. Грегори [R-FL] Стивенс, Хейли М. [D-MI] Стюарт, Крис [R-UT] Стиверс, Стив [R-OH] Стрикленд , Мэрилин [D-WA] Суоззи, Томас Р. [D-NY] Swalwell, Эрик [D-CA] Такано, Марк [D-CA] Тейлор, Ван [R-TX] Тенни, Клаудия [R-NY] Томпсон , Бенни Г. [D-MS] Томпсон, Гленн [R-PA] Томпсон, Майк [D-CA] Тиффани, Томас П. [R-WI] Тиммонс, Уильям Р. IV [R-SC] Титус, Дина [ D-NV] Тлайб, Рашида [D-MI] Тонко, Пол [D-NY] Торрес, Норма Дж. [D-CA] Торрес, Ричи [D-NY] Трахан, Лори [D-MA] Трон, Дэвид Дж. .[D-MD] Тернер, Майкл Р. [R-OH] Андервуд, Лорен [D-IL] Аптон, Фред [R-MI] Валадао, Дэвид Г. [R-CA] Ван Дрю, Джефферсон [R-NJ] Ван Дайн, Бет [R-Техас] Варгас, Хуан [D-CA] Визи, Марк А. [D-TX] Вела, Филемон [D-TX] Веласкес, Нидия М. [D-Нью-Йорк] Вагнер, Энн [R -MO] Уолберг, Тим [R-MI] Валорски, Джеки [R-IN] Вальс, Майкл [R-FL] Вассерман Шульц, Дебби [D-FL] Уотерс, Максин [D-CA] Уотсон Коулман, Бонни [D -NJ] Вебер, Рэнди К., старший [R-TX] Вебстер, Дэниел [R-FL] Велч, Питер [D-VT] Венструп, Брэд Р. [R-OH] Вестерман, Брюс [R-AR] Векстон, Дженнифер [D-VA] Уайлд, Сьюзан [D-PA] Уильямс, Nikema [D-GA] Уильямс, Роджер [R-TX] Уилсон, Фредерика С.[D-FL] Уилсон, Джо [R-SC] Виттман, Роберт Дж. [R-VA] Womack, Стив [R-AR] Райт, Рон [R-TX] Ярмут, Джон А. [D-KY] Янг , Дон [R-AK] Зельдин, Ли М. [R-NY] Любой член Сената Болдуин, Тэмми [D-WI] Баррассо, Джон [R-WY] Беннет, Майкл Ф. [D-CO] Блэкберн, Марша [ R-TN] Блюменталь, Ричард [D-CT] Блант, Рой [R-MO] Букер, Кори А. [D-NJ] Бузман, Джон [R-AR] Браун, Майк [R-IN] Браун, Шеррод [ D-OH] Берр, Ричард [R-NC] Кантуэлл, Мария [D-WA] Капито, Шелли Мур [R-WV] Кардин, Бенджамин Л. [D-MD] Карпер, Томас Р. [D-DE] Кейси , Роберт П., Младший [D-PA] Кэссиди, Билл [R-LA] Коллинз, Сьюзан М. [R-ME] Кунс, Кристофер А. [D-DE] Корнин, Джон [R-TX] Кортез Масто, Кэтрин [D -NV] Коттон, Том [R-AR] Крамер, Кевин [R-ND] Крапо, Майк [R-ID] Круз, Тед [R-TX] Дейнс, Стив [R-MT] Дакворт, Тэмми [D-IL ] Дурбин, Ричард Дж. [D-IL] Эрнст, Джони [R-IA] Файнштейн, Dianne [D-CA] Фишер, Деб [R-NE] Гиллибранд, Кирстен Э. [D-NY] Грэм, Линдси [R -SC] Грассли, Чак [R-IA] Хагерти, Билл [R-TN] Харрис, Камала Д. [D-CA] Хассан, Маргарет Вуд [D-NH] Хоули, Джош [R-MO] Генрих, Мартин [ D-NM] Гикенлупер, Джон В.[D-CO] Хироно, Мази К. [D-HI] Хувен, Джон [R-ND] Хайд-Смит, Синди [R-MS] Инхоф, Джеймс М. [R-OK] Джонсон, Рон [R-WI ] Кейн, Тим [D-VA] Келли, Марк [D-AZ] Кеннеди, Джон [R-LA] Кинг, Ангус С., младший [I-ME] Klobuchar, Amy [D-MN] Ланкфорд, Джеймс [ R-OK] Лихи, Патрик Дж. [D-VT] Ли, Майк [R-UT] Леффлер, Келли [R-GA] Лухан, Бен Рэй [D-NM] Ламмис, Синтия М. [R-WY] Манчин , Джо, III [D-WV] Марки, Эдвард Дж. [D-MA] Маршалл, Роджер [R-KS] МакКоннелл, Митч [R-KY] Менендес, Роберт [D-NJ] Меркли, Джефф [D-OR ] Моран, Джерри [R-KS] Мурковски, Лиза [R-AK] Мерфи, Кристофер [D-CT] Мюррей, Пэтти [D-WA] Оссофф, Джон [D-GA] Падилла, Алекс [D-CA] Пол , Рэнд [R-KY] Питерс, Гэри К.[D-MI] Портман, Роб [R-OH] Рид, Джек [D-RI] Риш, Джеймс Э. [R-ID] Ромни, Митт [R-UT] Розен, Джеки [D-NV] Раундс, Майк [R-SD] Рубио, Марко [R-FL] Сандерс, Бернард [I-VT] Sasse, Бен [R-NE] Schatz, Брайан [D-HI] Шумер, Чарльз Э. [D-NY] Скотт, Рик [R-FL] Скотт, Тим [R-SC] Шахин, Джин [D-NH] Шелби, Ричард К. [R-AL] Синема, Кирстен [D-AZ] Смит, Тина [D-MN] Стабеноу, Дебби [D-MI] Салливан, Дэн [R-AK] Тестер, Джон [D-MT] Тьюн, Джон [R-SD] Тиллис, Томас [R-NC] Туми, Патрик [R-PA] Тубервиль, Томми [R -AL] Ван Холлен, Крис [D-MD] Уорнер, Марк Р.[D-VA] Варнок, Рафаэль Г. [D-GA] Уоррен, Элизабет [D-MA] Уайтхаус, Шелдон [D-RI] Уикер, Роджер Ф. [R-MS] Уайден, Рон [D-OR] Янг , Тодд [R-IN]

Текст

– H.Res.193 – 117-й Конгресс (2021-2022): Признание вклада членов и выпускников AmeriCorps и добровольцев AmeriCorps Seniors в жизнь людей Соединенных Штатов.

| Congress.gov

Секция записи Конгресса Ежедневный дайджест Сенат дом Расширения замечаний

Замечания участников Автор: Any House Member Адамс, Альма С.[D-NC] Адерхольт, Роберт Б. [R-AL] Агилар, Пит [D-CA] Аллен, Рик В. [R-GA] Оллред, Колин З. [D-TX] Амодеи, Марк Э. [R -NV] Армстронг, Келли [R-ND] Аррингтон, Джоди К. [R-TX] Auchincloss, Jake [D-MA] Axne, Cynthia [D-IA] Бабин, Брайан [R-TX] Бэкон, Дон [R -NE] Бэрд, Джеймс Р. [R-IN] Балдерсон, Трой [R-OH] Бэнкс, Джим [R-IN] Барр, Энди [R-KY] Барраган, Нанетт Диаз [D-CA] Басс, Карен [ D-CA] Битти, Джойс [D-OH] Бенц, Клифф [R-OR] Бера, Ами [D-CA] Бергман, Джек [R-MI] Бейер, Дональд С. , младший [D-VA] Байс , Стефани И. [R-OK] Биггс, Энди [R-AZ] Билиракис, Гас М.[R-FL] Бишоп, Дэн [R-NC] Бишоп, Сэнфорд Д., младший [D-GA] Блуменауэр, Эрл [D-OR] Блант Рочестер, Лиза [D-DE] Боберт, Лорен [R-CO ] Бонамичи, Сюзанна [D-OR] Бост, Майк [R-IL] Bourdeaux, Carolyn [D-GA] Bowman, Jamaal [D-NY] Бойл, Брендан Ф. [D-PA] Брэди, Кевин [R-TX ] Брукс, Мо [R-AL] Браун, Энтони Г. [D-MD] Браун, Шонтел М. [D-OH] Браунли, Джулия [D-CA] Бьюкенен, Верн [R-FL] Бак, Кен [R -CO] Бакшон, Ларри [R-IN] Бадд, Тед [R-NC] Берчетт, Тим [R-TN] Берджесс, Майкл К. [R-TX] Буш, Кори [D-MO] Бустос, Чери [D -IL] Баттерфилд, Г.К. [D-NC] Калверт, Кен [R-CA] Каммак, Кэт [R-FL] Карбахал, Салуд О. [D-CA] Карденас, Тони [D-CA] Кэри, Майк [R-OH] Карл , Джерри Л. [R-AL] Карсон, Андре [D-IN] Картер, Эрл Л. «Бадди» [R-GA] Картер, Джон Р. [R-TX] Картер, Трой [D-LA] Картрайт, Мэтт [D-PA] Кейс, Эд [D-HI] Кастен, Шон [D-IL] Кастор, Кэти [D-FL] Кастро, Хоакин [D-TX] Cawthorn, Madison [R-NC] Chabot, Steve [ R-OH] Чейни, Лиз [R-WY] Чу, Джуди [D-CA] Cicilline, Дэвид Н. [D-RI] Кларк, Кэтрин М. [D-MA] Кларк, Иветт Д. [D-NY] Кливер, Эмануэль [D-MO] Клайн, Бен [R-VA] Клауд, Майкл [R-TX] Клайберн, Джеймс Э.[D-SC] Клайд, Эндрю С. [R-GA] Коэн, Стив [D-TN] Коул, Том [R-OK] Комер, Джеймс [R-KY] Коннолли, Джеральд Э. [D-VA] Купер , Джим [D-TN] Корреа, Дж. Луис [D-CA] Коста, Джим [D-CA] Кортни, Джо [D-CT] Крейг, Энджи [D-MN] Кроуфорд, Эрик А. «Рик» [ R-AR] Креншоу, Дэн [R-TX] Крист, Чарли [D-FL] Кроу, Джейсон [D-CO] Куэльяр, Генри [D-TX] Кертис, Джон Р. [R-UT] Дэвидс, Шарис [ D-KS] Дэвидсон, Уоррен [R-OH] Дэвис, Дэнни К. [D-IL] Дэвис, Родни [R-IL] Дин, Мадлен [D-PA] ДеФацио, Питер А. [D-OR] DeGette, Диана [D-CO] ДеЛауро, Роза Л.[D-CT] ДельБене, Сьюзан К. [D-WA] Дельгадо, Антонио [D-NY] Демингс, Вал Батлер [D-FL] ДеСолнье, Марк [D-CA] ДеДжарле, Скотт [R-TN] Дойч, Теодор Э. [D-FL] Диас-Баларт, Марио [R-FL] Дингелл, Дебби [D-MI] Доггетт, Ллойд [D-TX] Дональдс, Байрон [R-FL] Дойл, Майкл Ф. [D- PA] Дункан, Джефф [R-SC] Данн, Нил П. [R-FL] Эллзи, Джейк [R-TX] Эммер, Том [R-MN] Эскобар, Вероника [D-TX] Эшу, Анна Г. [ D-CA] Эспайлат, Адриано [D-NY] Эстес, Рон [R-KS] Эванс, Дуайт [D-PA] Фэллон, Пэт [R-TX] Feenstra, Рэнди [R-IA] Фергюсон, А. Дрю, IV [R-GA] Фишбах, Мишель [R-MN] Фицджеральд, Скотт [R-WI] Фитцпатрик, Брайан К.[R-PA] Флейшманн, Чарльз Дж. «Чак» [R-TN] Флетчер, Лиззи [D-TX] Фортенберри, Джефф [R-NE] Фостер, Билл [D-IL] Фокс, Вирджиния [R-NC] Франкель, Лоис [D-FL] Франклин, К. Скотт [R-FL] Фадж, Марсия Л. [D-OH] Фулчер, Расс [R-ID] Гаец, Мэтт [R-FL] Галлахер, Майк [R- WI] Гальего, Рубен [D-AZ] Гараменди, Джон [D-CA] Гарбарино, Эндрю Р. [R-NY] Гарсия, Хесус Дж. «Чуй» [D-IL] Гарсия, Майк [R-CA] Гарсия , Сильвия Р. [D-TX] Гиббс, Боб [R-OH] Гименес, Карлос А. [R-FL] Гомерт, Луи [R-TX] Голден, Джаред Ф. [D-ME] Гомес, Джимми [D -CA] Гонсалес, Тони [R-TX] Гонсалес, Энтони [R-OH] Гонсалес, Висенте [D-TX] Гонсалес-Колон, Дженниффер [R-PR] Гуд, Боб [R-VA] Гуден, Лэнс [R -TX] Госар, Пол А.[R-AZ] Gottheimer, Джош [D-NJ] Granger, Kay [R-TX] Graves, Garret [R-LA] Graves, Sam [R-MO] Green, Al [D-TX] Green, Mark E. [R-TN] Грин, Марджори Тейлор [R-GA] Гриффит, Х. Морган [R-VA] Гриджалва, Рауль М. [D-AZ] Гротман, Гленн [R-WI] Гость, Майкл [R-MS] Гатри, Бретт [R-KY] Хааланд, Дебра А. [D-NM] Хагедорн, Джим [R-MN] Хардер, Джош [D-CA] Харрис, Энди [R-MD] Харшбаргер, Диана [R-TN] Хартцлер, Вики [R-MO] Гастингс, Элси Л. [D-FL] Хейс, Джахана [D-CT] Херн, Кевин [R-OK] Херрелл, Иветт [R-NM] Эррера Бейтлер, Хайме [R-WA ] Хайс, Джоди Б.[R-GA] Хиггинс, Брайан [D-NY] Хиггинс, Клэй [R-LA] Хилл, Дж. Френч [R-AR] Хаймс, Джеймс А. [D-CT] Хинсон, Эшли [R-IA] Холлингсворт , Трей [R-IN] Хорсфорд, Стивен [D-NV] Houlahan, Крисси [D-PA] Хойер, Стени Х. [D-MD] Хадсон, Ричард [R-NC] Хаффман, Джаред [D-CA] Huizenga , Билл [R-MI] Исса, Даррелл Э. [R-CA] Джексон Ли, Шейла [D-TX] Джексон, Ронни [R-TX] Джейкобс, Крис [R-NY] Джейкобс, Сара [D-CA] Джаяпал, Прамила [D-WA] Джеффрис, Хаким С. [D-NY] Джонсон, Билл [R-OH] Джонсон, Дасти [R-SD] Джонсон, Эдди Бернис [D-TX] Джонсон, Генри К.«Хэнк» младший [D-GA] Джонсон, Майк [R-LA] Джонс, Mondaire [D-NY] Джордан, Джим [R-OH] Джойс, Дэвид П. [R-OH] Джойс, Джон [R -PA] Кахеле, Кайали [D-HI] Каптур, Марси [D-OH] Катко, Джон [R-NY] Китинг, Уильям Р. [D-MA] Келлер, Фред [R-PA] Келли, Майк [R-PA] Келли, Робин Л. [D-IL] Келли, Трент [R-MS] Ханна, Ро [D-CA] Килди, Дэниел Т. [D-MI] Килмер, Дерек [D-WA] Ким , Энди [D-NJ] Ким, Янг [R-CA] Kind, Рон [D-WI] Кинзингер, Адам [R-IL] Киркпатрик, Энн [D-AZ] Кришнамурти, Раджа [D-IL] Кустер, Энн М. [D-NH] Кустофф, Дэвид [R-TN] Лахуд, Дарин [R-IL] Ламальфа, Дуг [R-CA] Лэмб, Конор [D-PA] Ламборн, Дуг [R-CO] Ланжевен, Джеймс Р.[D-RI] Ларсен, Рик [D-WA] Ларсон, Джон Б. [D-CT] Латта, Роберт Э. [R-OH] Латернер, Джейк [R-KS] Лоуренс, Бренда Л. [D-MI ] Лоусон, Эл, младший [D-FL] Ли, Барбара [D-CA] Ли, Сьюзи [D-NV] Леже Фернандес, Тереза ​​[D-NM] Леско, Дебби [R-AZ] Летлоу, Джулия [R -LA] Левин, Энди [D-MI] Левин, Майк [D-CA] Лиу, Тед [D-CA] Лофгрен, Зои [D-CA] Лонг, Билли [R-MO] Лудермилк, Барри [R-GA ] Ловенталь, Алан С. [D-CA] Лукас, Фрэнк Д. [R-OK] Люткемейер, Блейн [R-MO] Лурия, Элейн Г. [D-VA] Линч, Стивен Ф. [D-MA] Мейс , Нэнси [R-SC] Малиновски, Том [D-NJ] Маллиотакис, Николь [R-NY] Мэлони, Кэролайн Б.[D-NY] Мэлони, Шон Патрик [D-NY] Манн, Трейси [R-KS] Мэннинг, Кэти Э. [D-NC] Мэсси, Томас [R-KY] Маст, Брайан Дж. [R-FL] Мацуи, Дорис О. [D-CA] МакБэт, Люси [D-GA] Маккарти, Кевин [R-CA] МакКол, Майкл Т. [R-TX] Макклейн, Лиза К. [R-MI] МакКлинток, Том [ R-CA] МакКоллум, Бетти [D-MN] Макичин, А. Дональд [D-VA] Макговерн, Джеймс П. [D-MA] МакГенри, Патрик Т. [R-NC] МакКинли, Дэвид Б. [R- WV] МакМоррис Роджерс, Кэти [R-WA] Макнерни, Джерри [D-CA] Микс, Грегори W. [D-NY] Meijer, Питер [R-MI] Менг, Грейс [D-NY] Meuser, Daniel [R -PA] Mfume, Kweisi [D-MD] Миллер, Кэрол Д.[R-WV] Миллер, Мэри Э. [R-IL] Миллер-Микс, Марианнетт [R-IA] Мооленаар, Джон Р. [R-MI] Муни, Александр X. [R-WV] Мур, Барри [R -AL] Мур, Блейк Д. [R-UT] Мур, Гвен [D-WI] Морелл, Джозеф Д. [D-NY] Моултон, Сет [D-MA] Мрван, Фрэнк Дж. [D-IN] Маллин , Маркуэйн [R-OK] Мерфи, Грегори [R-NC] Мерфи, Стефани Н. [D-FL] Надлер, Джерролд [D-NY] Наполитано, Грейс Ф. [D-CA] Нил, Ричард Э. [D -MA] Негусе, Джо [D-CO] Нелс, Трой Э. [R-TX] Ньюхаус, Дэн [R-WA] Ньюман, Мари [D-IL] Норкросс, Дональд [D-NJ] Норман, Ральф [R -SC] Нортон, Элеонора Холмс [D-DC] Нуньес, Девин [R-CA] О’Халлеран, Том [D-AZ] Обернолти, Джей [R-CA] Окасио-Кортес, Александрия [D-NY] Омар, Ильхан [D-MN] Оуэнс, Берджесс [R-UT] Палаццо, Стивен М.[R-MS] Паллоне, Фрэнк, младший [D-NJ] Палмер, Гэри Дж. [R-AL] Панетта, Джимми [D-CA] Паппас, Крис [D-NH] Паскрелл, Билл, мл. [D -NJ] Пейн, Дональд М., младший [D-NJ] Пелоси, Нэнси [D-CA] Пенс, Грег [R-IN] Перлмуттер, Эд [D-CO] Перри, Скотт [R-PA] Питерс, Скотт Х. [D-CA] Пфлюгер, Август [R-TX] Филлипс, Дин [D-MN] Пингри, Челли [D-ME] Пласкетт, Стейси Э. [D-VI] Покан, Марк [D-WI] Портер, Кэти [D-CA] Поузи, Билл [R-FL] Прессли, Аянна [D-MA] Прайс, Дэвид Э. [D-NC] Куигли, Майк [D-IL] Радваген, Аумуа Амата Коулман [R- AS] Раскин, Джейми [D-MD] Рид, Том [R-NY] Решенталер, Гай [R-PA] Райс, Кэтлин М.[D-NY] Райс, Том [R-SC] Ричмонд, Седрик Л. [D-LA] Роджерс, Гарольд [R-KY] Роджерс, Майк Д. [R-AL] Роуз, Джон В. [R-TN ] Розендейл старший, Мэтью М. [R-MT] Росс, Дебора К. [D-NC] Роузер, Дэвид [R-NC] Рой, Чип [R-TX] Ройбал-Аллард, Люсиль [D-CA] Руис , Рауль [D-CA] Рупперсбергер, Калифорния Датч [D-MD] Раш, Бобби Л. [D-IL] Резерфорд, Джон Х. [R-FL] Райан, Тим [D-OH] Саблан, Грегорио Килили Камачо [ D-MP] Салазар, Мария Эльвира [R-FL] Сан-Николас, Майкл FQ [D-GU] Санчес, Линда Т. [D-CA] Сарбейнс, Джон П. [D-MD] Скализ, Стив [R-LA ] Скэнлон, Мэри Гей [D-PA] Шаковски, Дженис Д.[D-IL] Шифф, Адам Б. [D-CA] Шнайдер, Брэдли Скотт [D-IL] Шрейдер, Курт [D-OR] Шрайер, Ким [D-WA] Швейкерт, Дэвид [R-AZ] Скотт, Остин [R-GA] Скотт, Дэвид [D-GA] Скотт, Роберт С. «Бобби» [D-VA] Сешнс, Пит [R-TX] Сьюэлл, Терри А. [D-AL] Шерман, Брэд [D -CA] Шерилл, Мики [D-NJ] Симпсон, Майкл К. [R-ID] Sires, Альбио [D-NJ] Slotkin, Элисса [D-MI] Смит, Адам [D-WA] Смит, Адриан [R -NE] Смит, Кристофер Х. [R-NJ] Смит, Джейсон [R-MO] Смакер, Ллойд [R-PA] Сото, Даррен [D-FL] Спанбергер, Эбигейл Дэвис [D-VA] Спарц, Виктория [ R-IN] Спейер, Джеки [D-CA] Стэнсбери, Мелани Энн [D-NM] Стэнтон, Грег [D-AZ] Stauber, Пит [R-MN] Стил, Мишель [R-CA] Стефаник, Элиза М. [R-NY] Стейл, Брайан [R-WI] Steube, В. Грегори [R-FL] Стивенс, Хейли М. [D-MI] Стюарт, Крис [R-UT] Стиверс, Стив [R-OH] Стрикленд , Мэрилин [D-WA] Суоззи, Томас Р. [D-NY] Swalwell, Эрик [D-CA] Такано, Марк [D-CA] Тейлор, Ван [R-TX] Тенни, Клаудия [R-NY] Томпсон , Бенни Г. [D-MS] Томпсон, Гленн [R-PA] Томпсон, Майк [D-CA] Тиффани, Томас П. [R-WI] Тиммонс, Уильям Р. IV [R-SC] Титус, Дина [ D-NV] Тлайб, Рашида [D-MI] Тонко, Пол [D-NY] Торрес, Норма Дж. [D-CA] Торрес, Ричи [D-NY] Трахан, Лори [D-MA] Трон, Дэвид Дж. .[D-MD] Тернер, Майкл Р. [R-OH] Андервуд, Лорен [D-IL] Аптон, Фред [R-MI] Валадао, Дэвид Г. [R-CA] Ван Дрю, Джефферсон [R-NJ] Ван Дайн, Бет [R-Техас] Варгас, Хуан [D-CA] Визи, Марк А. [D-TX] Вела, Филемон [D-TX] Веласкес, Нидия М. [D-Нью-Йорк] Вагнер, Энн [R -MO] Уолберг, Тим [R-MI] Валорски, Джеки [R-IN] Вальс, Майкл [R-FL] Вассерман Шульц, Дебби [D-FL] Уотерс, Максин [D-CA] Уотсон Коулман, Бонни [D -NJ] Вебер, Рэнди К., старший [R-TX] Вебстер, Дэниел [R-FL] Велч, Питер [D-VT] Венструп, Брэд Р. [R-OH] Вестерман, Брюс [R-AR] Векстон, Дженнифер [D-VA] Уайлд, Сьюзан [D-PA] Уильямс, Nikema [D-GA] Уильямс, Роджер [R-TX] Уилсон, Фредерика С.[D-FL] Уилсон, Джо [R-SC] Виттман, Роберт Дж. [R-VA] Womack, Стив [R-AR] Райт, Рон [R-TX] Ярмут, Джон А. [D-KY] Янг , Дон [R-AK] Зельдин, Ли М. [R-NY] Любой член Сената Болдуин, Тэмми [D-WI] Баррассо, Джон [R-WY] Беннет, Майкл Ф. [D-CO] Блэкберн, Марша [ R-TN] Блюменталь, Ричард [D-CT] Блант, Рой [R-MO] Букер, Кори А. [D-NJ] Бузман, Джон [R-AR] Браун, Майк [R-IN] Браун, Шеррод [ D-OH] Берр, Ричард [R-NC] Кантуэлл, Мария [D-WA] Капито, Шелли Мур [R-WV] Кардин, Бенджамин Л. [D-MD] Карпер, Томас Р. [D-DE] Кейси , Роберт П., Младший [D-PA] Кэссиди, Билл [R-LA] Коллинз, Сьюзан М. [R-ME] Кунс, Кристофер А. [D-DE] Корнин, Джон [R-TX] Кортез Масто, Кэтрин [D -NV] Коттон, Том [R-AR] Крамер, Кевин [R-ND] Крапо, Майк [R-ID] Круз, Тед [R-TX] Дейнс, Стив [R-MT] Дакворт, Тэмми [D-IL ] Дурбин, Ричард Дж. [D-IL] Эрнст, Джони [R-IA] Файнштейн, Dianne [D-CA] Фишер, Деб [R-NE] Гиллибранд, Кирстен Э. [D-NY] Грэм, Линдси [R -SC] Грассли, Чак [R-IA] Хагерти, Билл [R-TN] Харрис, Камала Д. [D-CA] Хассан, Маргарет Вуд [D-NH] Хоули, Джош [R-MO] Генрих, Мартин [ D-NM] Гикенлупер, Джон В.[D-CO] Хироно, Мази К. [D-HI] Хувен, Джон [R-ND] Хайд-Смит, Синди [R-MS] Инхоф, Джеймс М. [R-OK] Джонсон, Рон [R-WI ] Кейн, Тим [D-VA] Келли, Марк [D-AZ] Кеннеди, Джон [R-LA] Кинг, Ангус С., младший [I-ME] Klobuchar, Amy [D-MN] Ланкфорд, Джеймс [ R-OK] Лихи, Патрик Дж. [D-VT] Ли, Майк [R-UT] Леффлер, Келли [R-GA] Лухан, Бен Рэй [D-NM] Ламмис, Синтия М. [R-WY] Манчин , Джо, III [D-WV] Марки, Эдвард Дж. [D-MA] Маршалл, Роджер [R-KS] МакКоннелл, Митч [R-KY] Менендес, Роберт [D-NJ] Меркли, Джефф [D-OR ] Моран, Джерри [R-KS] Мурковски, Лиза [R-AK] Мерфи, Кристофер [D-CT] Мюррей, Пэтти [D-WA] Оссофф, Джон [D-GA] Падилла, Алекс [D-CA] Пол , Рэнд [R-KY] Питерс, Гэри К.[D-MI] Портман, Роб [R-OH] Рид, Джек [D-RI] Риш, Джеймс Э. [R-ID] Ромни, Митт [R-UT] Розен, Джеки [D-NV] Раундс, Майк [R-SD] Рубио, Марко [R-FL] Сандерс, Бернард [I-VT] Sasse, Бен [R-NE] Schatz, Брайан [D-HI] Шумер, Чарльз Э. [D-NY] Скотт, Рик [R-FL] Скотт, Тим [R-SC] Шахин, Джин [D-NH] Шелби, Ричард К. [R-AL] Синема, Кирстен [D-AZ] Смит, Тина [D-MN] Стабеноу, Дебби [D-MI] Салливан, Дэн [R-AK] Тестер, Джон [D-MT] Тьюн, Джон [R-SD] Тиллис, Томас [R-NC] Туми, Патрик [R-PA] Тубервиль, Томми [R -AL] Ван Холлен, Крис [D-MD] Уорнер, Марк Р.[D-VA] Варнок, Рафаэль Г. [D-GA] Уоррен, Элизабет [D-MA] Уайтхаус, Шелдон [D-RI] Уикер, Роджер Ф. [R-MS] Уайден, Рон [D-OR] Янг , Тодд [R-IN]

Женщины в парламентах: мировая классификация

>>> VERSION FRANÇAISE
	Женщины в национальных парламентах
Ситуация на 1 февраля 2019 г.
	Данные в таблице ниже были составлены Межпарламентским союзом на основе информации, предоставленной национальными парламентами к 1 февраля 2019 года. 193 страны классифицируются в порядке убывания процента женщин в нижней или единственной палате . Сравнительные данные о среднемировом и региональном среднем уровне, а также данные о двух региональных парламентских ассамблеях, избранных прямым голосованием, можно найти на отдельных страницах. Вы можете использовать базу данных PARLINE для просмотра подробных результатов парламентских выборов по странам.
С марта 2019 года ежемесячные рейтинги процентной доли женщин в парламенте публикуются на New Parline, платформе открытых данных МПС: https: // data.ipu.org/women-ranking Обратитесь к архиву статистических данных о процентном соотношении женщин в национальных парламентах.
МИРОВАЯ КЛАССИФИКАЦИЯ Рейтинг Страна Нижняя или единственная палата Верхняя палата или Сенат Выборы мест * Женщины % Вт Выборы Места * Женщины % Вт 1 Руанда 03. 09.2018 80 49 61,3% 26.09.2011 26 10 38,5% 2 Куба 11.03.2018 605 322 53,2% — — — — 3 Боливия 12.10.2014 130 69 53,1% 12.10.2014 36 17 47.2% 4 Мексика 01.07.2018 500 241 48,2% 01.07.2018 128 63 49,2% 5 Швеция 09.09.2018 349 165 47,3% — — — — 6 Гренада 13.03.2018 15 7 46. 7% 27.04.2018 13 4 30,8% 7 Намибия 29.11.2014 104 48 46,2% 08.12.2015 42 10 23,8% 8 Коста-Рика 04.02.2018 57 26 45,6% — — — — 9 Никарагуа 06.11.2016 92 41 44,6% — — — — 10 ЮАР 1 07.05.2014 393 168 42,7% 21.05.2014 54 19 35,2% 11 Сенегал 30.07.2017 165 69 41. 8% — — — — 12 Финляндия 19.04.2015 200 83 41,5% — — — — 13 Испания 26.06.2016 350 144 41,1% 26.06.2016 266 98 36,8% 14 Норвегия 11.09.2017 169 69 40,8% — — — — 15 Новая Зеландия 23.09.2017 120 48 40,0% — — — — “ Тимор-Лешти 12.05.2018 65 26 40,0% — — — — 17 Франция 11. 06.2017 577 229 39,7% 24.09.2017 348 112 32,2% 18 Мозамбик 15.10.2014 250 99 39,6% — — — — 19 Аргентина 22.10.2017 255 99 38,8% 22.10.2017 72 30 41.7% “ Эфиопия 24.05.2015 547 212 38,8% 05.10.2015 153 49 32,0% 21 Северная Македония 11.12.2016 120 46 38,3% — — — — 22 Исландия 28.10. 2017 63 24 38.1% — — — — 23 Бельгия 25.05.2014 150 57 38,0% 03.07.2014 60 26 43,3% “ Эквадор 19.02.2017 137 52 38,0% — — — — 25 Сербия 24.04.2016 247 93 37,7% — — — — 26 Дания 18.06.2015 179 67 37,4% — — — — 27 Австрия 15.10.2017 183 68 37,2% Нет данных 61 22 36. 1% 28 Объединенная Республика Танзания 25.10.2015 393 145 36,9% — — — — 29 Бурунди 29.06.2015 121 44 36,4% 24.07.2015 39 18 46,2% 30 Тунис 26.10.2014 217 78 35,9% — — — — 31 Италия 04.03.2018 630 225 35,7% 04.03.2018 320 110 34,4% “ Португалия 04.10.2015 230 82 35,7% — — — — 33 Уганда 18. 02.2016 459 160 34,9% — — — — 34 Беларусь 11.09.2016 110 38 34,5% 30.08.2012 56 17 30,4% 35 Монако 14.02.2018 24 8 33,3% — — — — 36 Непал 26.11.2017 275 90 32,7% 07.02.2018 59 22 37,3% 37 Швейцария 18.10.2015 200 65 32,5% 23.10.2011 46 7 15,2% 38 Андорра 01.03.2015 28 9 32,1% — — — — 39 Соединенное Королевство 08. 06.2017 650 208 32,0% Нет данных 789 208 26,4% 40 Гайана 11.05.2015 69 22 31,9% — — — — “ Зимбабве 30.07.2018 270 86 31,9% 30.07.2018 80 35 43.8% 42 Нидерланды 15.03.2017 150 47 31,3% 26.05.2015 75 27 36,0% 43 Камерун 30.09.2013 180 56 31,1% 25.03.2018 100 26 26,0% 44 Сальвадор 04.03.2018 84 26 31,0% — — — — “ Латвия 06. 10.2018 100 31 31,0% — — — — “ Тринидад и Тобаго 07.09.2015 42 13 31,0% 23.09.2015 31 11 35.5% 47 Германия 24.09.2017 709 219 30,9% Нет данных 69 27 39,1% 48 Ангола 23.08.2017 220 66 30,0% — — — — “ Австралия 02.07.2016 150 45 30.0% 02.07.2016 76 30 39,5% “ Перу 10.04.2016 130 39 30,0% — — — — 51 Филиппины 09. 05.2016 292 86 29,5% 09.05.2016 24 6 25,0% 52 Суринам 24.05.2015 51 15 29,4% — — — — 53 Албания 25.06.2017 140 41 29,3% — — — — 54 Израиль 17.03.2015 120 35 29,2% — — — — 55 Польша 25.10.2015 460 134 29,1% 25.10.2015 100 14 14,0% 56 Эстония 01.03.2015 101 29 28,7% — — — — 57 Южный Судан 04. 08.2016 383 109 28,5% 05.08.2011 50 6 12.0% 58 Судан 13.04.2015 481 133 27,7% 01.06.2015 71 19 26,8% 59 Лаосская Народно-Демократическая Республика 20.03.2016 149 41 27,5% — — — — 60 Казахстан 20.03.2016 107 29 27,1% 28.06.2017 47 5 10,6% 61 Канада 19.10.2015 334 90 26,9% Нет данных 105 49 46,7% 62 Доминиканская Республика 15. 05.2016 190 51 26,8% 15.05.2016 32 3 9.4% 63 Вьетнам 22.05.2016 494 132 26,7% — — — — 64 Джибути 23.02.2018 65 17 26,2% — — — — 65 Алжир 04.05.2017 462 119 25.8% 29.12.2018 132 9 6,8% “ Болгария 26.03.2017 240 62 25,8% — — — — 67 Ирак 12.05.2018 329 83 25,2% — — — — 68 Доминика 08. 12.2014 32 8 25,0% — — — — “ Люксембург 14.10.2018 60 15 25,0% — — — — “ Сан-Марино 20.11.2016 60 15 25,0% — — — — “ Туркменистан 25.03.2018 124 31 25,0% — — — — 72 Китай 05.03.2018 2975 742 24,9% — — — — 73 Словения 03.06.2018 90 22 24,4% 22. 11.2017 40 4 10.0% “ Сомали 23.10.2016 275 67 24,4% 23.10.2016 54 13 24,1% 75 Армения 02.04.2017 132 32 24,2% — — — — 76 Афганистан 20.10.2018 250 59 23.6% 10.01.2015 68 16 23,5% “ Cabo Verde 20.03.2016 72 17 23,6% — — — — “ Соединенные Штаты Америки 06.11.2018 433 102 23,6% 06. 11.2018 100 25 25.0% 78 Черногория 16.10.2016 81 19 23,5% — — — — 79 Лесото 03.06.2017 120 28 23,3% 11.07.2017 32 7 21,9% 80 Сингапур 11.09.2015 100 23 23.0% — — — — 81 Гвинея 28.09.2013 114 26 22,8% — — — — “ Республика Молдова 30.11.2014 101 23 22,8% — — — — 83 Чили 19. 11.2017 155 35 22,6% 19.11.2017 43 10 23,3% 84 Чешская Республика 20.10.2017 200 45 22,5% 05.10.2018 81 13 16,0% “ Объединенные Арабские Эмираты 03.10.2015 40 9 22,5% — — — — 86 Ирландия 26.02.2016 158 35 22,2% 25.04.2016 60 18 30,0% “ Уругвай 26.10.2014 99 22 22,2% 26.10.2014 31 8 25,8% “ Венесуэла (Боливарианская Республика) 06. 12.2015 167 37 22,2% — — — — 89 Эритрея 01.02.1994 150 33 22,0% — — — — 90 Кения 08.07.2017 349 76 21,8% 08.07.2017 68 21 30,9% 91 Босния и Герцеговина 07.10.2018 42 9 21,4% 29.01.2015 15 2 13.3% 92 Литва 09.10.2016 141 30 21,3% — — — — 93 Сейшельские острова 08.09.2016 33 7 21,2% — — — — 94 Гондурас 26. 11.2017 128 27 21.1% — — — — 95 Бангладеш 30.12.2018 348 72 20,7% — — — — “ Румыния 11.12.2016 329 68 20,7% 11.12.2016 136 19 14,0% 97 Хорватия 11.09.2016 151 31 20,5% — — — — “ Марокко 07.10.2016 395 81 20,5% 02.10.2015 120 14 11,7% 99 Мавритания 01.09.2018 153 31 20,3% — — — — 100 Пакистан 25. 08.2018 341 69 20,2% 03.03.2018 104 20 19,2% 101 Барбадос 24.05.2018 30 6 20,0% 05.06.2018 21 8 38,1% “ Камбоджа 29.07.2018 125 25 20,0% 25.02.2018 62 11 17.7% “ Экваториальная Гвинея 12.11.2017 100 20 20,0% 12.11.2017 72 11 15,3% “ Словакия 05.03.2016 150 30 20,0% — — — — 105 Саудовская Аравия 02. 12.2016 151 30 19,9% — — — — 106 Фиджи 14.11.2018 51 10 19,6% — — — — 107 Кыргызстан 04.10.2015 120 23 19,2% — — — — “ Мадагаскар 20.12.2013 151 29 19,2% 29.12.2015 63 13 20,6% 109 Гватемала 06.09.2015 158 30 19,0% — — — — “ Таджикистан 01.03.2015 63 12 19,0% 27. 03.2015 32 7 21.9% 111 Колумбия 11.03.2018 171 32 18,7% 11.03.2018 105 22 21,0% “ Греция 20.09.2015 300 56 18,7% — — — — 113 Панама 04.05.2014 71 13 18.3% — — — — 114 Индонезия 09.04.2014 560 102 18,2% — — — — 115 Замбия 11.08.2016 167 30 18,0% — — — — 116 Кипр 22. 05.2016 56 10 17,9% — — — — “ Габон 06.10.2018 134 24 17,9% 13.12.2014 102 18 17,6% 118 Ямайка 22.02.2016 63 11 17,5% 10.03.2016 21 5 23.8% 119 Турция 24.06.2018 596 104 17,4% — — — — 120 Монголия 29.06.2016 76 13 17,1% — — — — “ Республика Корея 13.04.2016 298 51 17. 1% — — — — 122 Нигер 21.02.2016 171 29 17,0% — — — — 123 Азербайджан 01.11.2015 119 20 16,8% — — — — 124 Малави 20.05.2014 192 32 16,7% — — — — “ Сент-Люсия 06.06.2016 18 3 16,7% 05.01.2012 11 3 27,3% 126 Того 20.12.2018 91 15 16,5% — — — — 127 Корейская Народно-Демократическая Республика 09. 03.2014 687 112 16,3% — — — — 128 Ливия 25.06.2014 188 30 16,0% — — — — “ Узбекистан 21.12.2014 150 24 16,0% 13.01.2015 100 17 17.0% 130 Российская Федерация 18.09.2016 450 71 15,8% Нет данных 170 31 18,2% 131 Иордания 20.09.2016 130 20 15,4% 27.09.2016 65 10 15,4% 132 Бахрейн 01. 12.2018 40 6 15,0% 09.12.2018 40 9 22,5% “ Бразилия 07.10.2018 513 77 15,0% 07.10.2018 81 12 14,8% “ Парагвай 22.04.2018 80 12 15,0% 22.04.2018 45 9 20.0% 135 Бутан 18.10.2018 47 7 14,9% 20.04.2018 25 4 16,0% “ Чад 13.02.2011 168 25 14,9% — — — — “ Египет 17.10.2015 596 89 14. 9% — — — — 138 Грузия 08.10.2016 149 22 14,8% — — — — 139 Сан-Томе и Принсипи 07.10.2018 55 8 14,5% — — — — 140 Малайзия 09.05.2018 222 32 14,4% Нет данных 67 13 19,4% 141 Гвинея-Бисау 13.04.2014 102 14 13,7% — — — — 142 Буркина-Фасо 29.11.2015 127 17 13,4% — — — — 143 Сент-Китс и Невис 16. 02.2015 15 2 13,3% — — — — 144 Сирийская Арабская Республика 13.04.2016 250 33 13,2% — — — — 145 Гана 07.12.2016 275 36 13,1% — — — — 146 Сент-Винсент и Гренадины 09.12.2015 23 3 13,0% — — — — 147 Багамы 24.05.2017 39 5 12,8% 24.05.2017 16 7 43,8% 148 Венгрия 08.04. 2018 199 25 12,6% — — — — “ Индия 07.04.2014 524 66 12,6% 16.01.2018 244 28 11,5% 150 Палау 01.11.2016 16 2 12,5% 01.11.2016 13 2 15,4% 151 Либерия 10.10.2017 73 9 12,3% 20.12.2014 30 3 10.0% “ Сьерра-Леоне 07.03.2018 146 18 12,3% — — — — 153 Лихтенштейн 05.02.2017 25 3 12,0% — — — — 154 Мальта 03. 06.2017 67 8 11.9% — — — — 155 Маврикий 10.12.2014 69 8 11,6% — — — — “ Украина 26.10.2014 423 49 11,6% — — — — 157 Конго 16.07.2017 151 17 11,3% 31.08.2017 69 13 18,8% “ Мьянма 08.11.2015 433 49 11,3% 08.11.2015 224 27 12,1% 159 Антигуа и Барбуда 21.03.2018 18 2 11,1% 26. 03.2018 17 9 52,9% 160 Кот-д’Ивуар 18.12.2016 255 28 11,0% 25.03.2018 66 8 12,1% 161 Науру 09.07.2016 19 2 10,5% — — — — 162 Демократическая Республика Конго 30.12.2018 485 50 10,3% 19.01.2007 108 5 4,6% “ Гамбия 06.04.2017 58 6 10,3% — — — — 164 Япония 22.10.2017 463 47 10,2% 10. 07.2016 241 50 20.7% 165 Самоа 04.03.2016 50 5 10,0% — — — — 166 Катар 01.07.2013 41 4 9,8% — — — — 167 Ботсвана 24.10.2014 63 6 9.5% — — — — 168 Белиз 04.11.2015 32 3 9,4% 13.11.2015 13 2 15,4% 169 Бруней-Даруссалам 13.01.2017 33 3 9,1% — — — — “ Маршалловы Острова 16. 11.2015 33 3 9,1% — — — — 171 Мали 24.11.2013 147 13 8,8% — — — — 172 Центральноафриканская Республика 14.02.2016 140 12 8,6% — — — — 173 Тонга 16.11.2017 27 2 7,4% — — — — 174 Бенин 26.04.2015 83 6 7,2% — — — — “ Эсватини 21.09.2018 69 5 7,2% 23. 10.2018 30 7 23.3% 176 Тувалу 31.03.2015 15 1 6,7% — — — — 177 Кирибати 30.12.2015 46 3 6,5% — — — — 178 Коморские острова 25.01.2015 33 2 6.1% — — — — 179 Иран (Исламская Республика) 26.02.2016 289 17 5,9% — — — — 180 Нигерия 28.03.2015 359 20 5,6% 28.03.2015 109 7 6,4% 181 Таиланд 07. 08.2014 240 13 5,4% — — — — 182 Шри-Ланка 17.08.2015 225 12 5,3% — — — — 183 Ливан 06.05.2018 128 6 4,7% — — — — “ Мальдивы 22.03.2014 85 4 4,7% — — — — 185 Кувейт 26.11.2016 65 3 4,6% — — — — 186 Гаити 09.08.2015 118 3 2,5% 20. 11.2016 28 1 3.6% 187 Соломоновы Острова 19.11.2014 49 1 2,0% — — — — 188 Оман 25.10.2015 85 1 1,2% 07.11.2015 85 14 16,5% 189 Йемен 27.04.2003 301 1 0.3% 28.04.2001 111 3 2,7% 190 Микронезия (Федеративные Штаты) 07.03.2017 14 0 0,0% — — — — “ Папуа-Новая Гвинея 24.06.2017 106 0 0,0% — — — — “ Вануату 22. 01.2016 52 0 0,0% — — — — Обновлено 29 мая и включает данные по нижней палате Афганистана после подтверждения результатов выборов в октябре 2018 г.

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Произошла ошибка при настройке вашего пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере уже в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файле cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

193 Andover H # 193, Уэст-Палм-Бич, Флорида 33417 | В среднем

🧡

1. Дома
2. Флорида
3. Округ Палм-Бич

• 1 кровать
• 2 ванны
• 738 кв. фут
• $ 108 за квадратный фут
• 1971 г. строить
• – на месте

Century Village – это закрытое сообщество для 55+, которое может так много предложить активному взрослому образу жизни, декоративно-прикладному искусству, социальным мероприятиям в фитнес-центре, список можно продолжать.Приходите и посмотрите этот красивый блок на первом этаже, вам не нужно беспокоиться о лифте с приборами из нержавеющей стали, столешницами Calacatta, виниловыми полами, свежеокрашенными, центральным кондиционированием воздуха и многим другим. НЕОБХОДИМО УВИДЕТЬ не продлится долго. Есть 2 ТСЖ по 137 долларов. и $ 235,00

Объявление любезно предоставлено MLSM / La Rosa Realty Grt. Ft. Lauderdale

Последний раз проверено: Проверка… • Последнее обновление: 18 декабря 2021 г. • Источник: MLSM

Как лицензированный брокер по недвижимости, Estately имеет доступ к той же базе данных, которую используют профессиональные риэлторы: Служба множественного листинга (или MLS). Это означает, что мы можем отображать все объекты недвижимости, перечисленные другими брокерскими компаниями-членами местной Ассоциации риэлторов, за исключением случаев, когда продавец потребовал, чтобы объявление не публиковалось или не продавалось в Интернете.

MLS считается наиболее авторитетным, актуальным, точным и полным источником информации о недвижимости для продажи в США.

Estately обновляет эти данные как можно быстрее и передает нашим пользователям столько информации, сколько разрешено местными правилами. Estately также может отправлять вам обновления по электронной почте, когда на рынке появляются новые дома, соответствующие вашему запросу, изменяются цены или подписываются контракты.

MLS № A11026242 – Сообщить о проблеме

Удобства и налоги

Здание

Год постройки:

1971

Год постройки Подробности:

Вторичка

Строительные материалы:

Блок

Архитектурный стиль:

GardenApartment

историй Всего:

2

Номер единицы:

193

Расположение входа:

1

Начальный уровень:

1

Внешний вид:

Двор, Фруктовые Деревья

Функции безопасности:

Детекторы дыма

Общая площадь застройки:

738. 0

Интерьер

Элементы интерьера:

СпальняОсновной уровень, Первый этаж, вход для инвалидов

Жилая площадь:

738,0

Этаж:

Плитка, Винил

Специальные возможности:

Специальные возможности, Другое

Финансы и условия

Финансирование покупателя:

Наличные

Место расположения

Проезд

ИСПОЛЬЗУЙТЕ GPS

Недвижимость

Просмотр:

ложный

Просмотр:

Нет

Номер посылки:

00424323210081930

Тип недвижимости:

Жилой

Подтип недвижимости:

Кондоминиум

Дополнительный подтип недвижимости:

Кондоминиум

Состояние объекта:

ОбновленСамодельный

Размер лота Единиц:

SquareFeet

Набережная:

ложный

Листинговый агент

Контактная информация:

Зарегистрируйтесь, чтобы увидеть информацию

Телефон агента:

(954) 789-7558

Рабочий телефон:

(954) 526-7318

Налоги

Налоговый год:

2020

Годовая сумма налога:

$ 893

Налоговое правовое описание:

ANDOVER H COND PAR 193

Ванны

Всего ванных:

2

Ванные комнаты Полная:

1

Половина ванных комнат:

1

Отопление охлаждение

Обогрев:

Центральный

Отопление:

правда

Охлаждение:

CentralAir

Охлаждение:

правда

Утилиты

Коммунальные услуги:

CableAvailable

Техника

Приборов:

ElectricRange, Электрический водонагреватель, Утилизация, Ледогенератор, Микроволновая печь, Холодильник

Характеристики прачечной:

Общая площадь

Общество

Название подразделения:

Andover Condos

Сообщество пожилых людей:

правда

Удобства ассоциации:

Клуб, Фитнес-центр, Прачечная, Бассейн, Тропы, Транспортные услуги

Характеристики бассейна:

с подогревом

Сбор ассоциации:

235. 0

Сбор ассоциации:

$ 137

Частота сбора ассоциации:

Ежемесячно

Частота сбора ассоциации:

Ежемесячно

Регистрационный взнос

включает:

Все объекты, зоны общего пользования, кабельное телевидение, площадки для обслуживания, парковка, бассейны, места отдыха, охрана, мусор

Стоянка

Функции парковки:

OneSpace

Гараж:

ложный

Навес для машины:

ложный

Школы

Рейтинг	Детали
	Начальная школа Грасси Уотерс
	Средняя школа Беар Лейкс
	Средняя школа Палм-Бич Лейкс

Показать больше

Баллы в GreatSchools выставляются по шкале от 1 до 10, где 10 выше среднего.

Сферы школьных услуг не являются окончательными и должны использоваться только в качестве руководства. Рейтинги GreatSchools предоставлены www.greatschools.org

Фактор наводнения

Flood Factor® предоставляет исчерпывающую информацию о рисках наводнений, связанных с дождем, реками, приливами и штормовыми нагонами, и учитывает, как будущий риск наводнений меняется с течением времени из-за изменения окружающей среды.

Фактор наводнения – это оценка от 1 до 10, от минимального до крайнего , который говорит вам о потенциальном риске затопления собственности хотя бы один раз в течение срока 30-летней ипотеки.

Данные о рисках наводнений предоставлены Flood Factor®, продуктом First Street Foundation®. Модель фактора наводнения предназначена для приблизительного определения риска наводнения и не предназначена для включения всех возможных рисков наводнения.

Посмотреть полный отчет на FloodFactor. com

Это свойство имеет минимальный риск наводнения

Это свойство имеет Минимальный Фактор наводнения® . Несмотря на то, что риски наводнений по всей стране меняются из-за состояния окружающей среды, это свойство вряд ли будет затоплено в течение следующих 30 лет.

Предоставлено Flood Factor®

Страхование от наводнения

Рекомендовано: По оценке MassiveCert, эта собственность находится в зоне X FEMA, что означает, что страхование от наводнения рекомендуется, но не требуется.

Получите мгновенную расценку на страхование

Климатическая проверка

Информация о климате отсутствует

Нам не удалось найти информацию о климатических рисках для этой собственности.
Когда появится новая информация, мы поделимся ею здесь.

Исследуйте окрестности

Моя поездка

WalkScore®

14 – Автомобиль-зависимый

Предоставлено WalkScore® Inc.

Оценка ходьбы – это самый известный показатель проходимости по любому адресу. Это зависит от удаленности от множества близлежащих услуг и удобства для пешеходов. Оценки за ходьбу варьируются от 0 (зависимость от машины) до 100 (рай ходока).

Soundscore ™

70 – Умеренный

Предоставлено HowLoud

ГромкоУмеренно Тихо

Soundscore – это общая оценка, учитывающая трафик, активность в аэропорту и местные источники.Оценка Soundscore – это число от 50 (очень громко) до 100 (очень тихо).

Индекс загрязнения воздуха

43 – Умеренный

Предоставлено ClearlyEnergy

ХудшееСреднее Лучшее

Индекс загрязнения воздуха рассчитывается по округам или городам с использованием данных за последние три года. Индекс оценивает округ или город по шкале от 0 (лучший) до 100 (худший) в Соединенных Штатах.

Максимальная скорость интернета

Атлантический широкополосный доступ

Предоставлено BroadbandNow®

Посмотреть полный отчет

Это максимальная заявленная скорость интернета, доступная для этого дома. Менее 10 Мбит / с относится к более медленному диапазону, а все, что выше 30 Мбит / с, считается быстрым. Для более активных пользователей Интернета некоторые планы позволяют использовать скорость более 100 Мбит / с.

История продаж

Дата	Событие	Источник	Цена	% Изменение
30.06.21 30 июня 2021 г.	Продал	MLSM	$ 80 000
03.06.21 3 июня 2021 г.	Продано с учетом непредвиденных обстоятельств	MLSM	$ 80 000
14.05.21 14 мая 2021 г.	Цена изменена	MLSM	80 000 долл. США	-6.4%

Подробнее

Сожалеем, но нам не удалось получить дополнительные данные для этого ресурса. Пожалуйста, повторите попытку позже!

Дополнительная история недоступна

Если для этого свойства будут добавлены новые записи, мы расскажем о них здесь.

Хотите увидеть этот дом?

Запланировать бесплатный тур

---

Присылать мне обновления свойств по электронной почте

Спасибо!

Мы создали вашу учетную запись – проверьте свою электронную почту, чтобы установить пароль.

Мы сохранили это свойство для вас и сообщим вам по электронной почте, когда что-нибудь изменится.

Закрывать

Введите свой адрес электронной почты, чтобы создать учетную запись и получать новости о собственности.

Идентификация фактора H-подобного белка 1 в качестве преобладающего регулятора комплемента в мембране Бруха: последствия для возрастной дегенерации желтого пятна

Abstract

Жесткая регуляция врожденного иммунитета на внеклеточном матриксе (ЕСМ) является жизненно важной частью иммунного гомеостаза на всем протяжении человеческое тело, и считается, что нарушение этой регуляции в глазу непосредственно способствует прогрессированию возрастной дегенерации желтого пятна (AMD). Фактор регулятора комплемента плазмы H (FH) считается основным регулятором, который защищает ECM от повреждающей активации комплемента. Однако в настоящем исследовании мы демонстрируем, что усеченная форма FH, называемая FH-подобным белком 1 (FHL-1), является основным регуляторным белком в слое ECM под сетчаткой человека, называемом мембраной Бруха. Мембрана Бруха является основным участком патогенеза ВМД, где образуются друзы, характерные для ВМД поражения. Мы показываем, что FHL-1 может пассивно диффундировать через мембрану Бруха, тогда как полноразмерный гликозилированный FH не может.FHL-1 в значительной степени связан с мембраной Бруха посредством взаимодействия с гепарансульфатом, и мы показали, что общий полиморфизм Y402H в гене CFH , связанный с повышенным риском AMD, снижает связывание FHL-1 с этим гепарансульфатом. Мы также показываем, что FHL-1 сохраняется в друзах, тогда как FH покрывает периферию поражений, возможно, ингибируя их выведение. Наши результаты идентифицируют новый механизм регуляции комплемента в человеческом глазу, который подчеркивает потенциальные новые возможности терапевтических стратегий.

Введение

Возрастная дегенерация желтого пятна (AMD) – основная причина слепоты в развитых странах, от которой страдают около 50 миллионов человек во всем мире. Прогнозируется, что распространенность этого состояния будет расти по мере увеличения численности пожилого населения: в Соединенных Штатах было подсчитано, что в период с 2004 по 2020 год число заболевших вырастет на 50% (1). Это изнурительное заболевание можно разделить на неоваскулярную («влажную») и атрофическую («сухую») AMD (2), которым обычно предшествует образование друзов.Эти агрегаты липидов, белков и клеточного мусора накапливаются внутри мембраны Бруха, слоя внеклеточного матрикса (ECM), который отделяет пигментный эпителий сетчатки (RPE) от кровеносных сосудов сосудистой оболочки. Присутствие белков комплемента и нижестоящих воспалительных маркеров в друзах привело к гипотезе о том, что хроническое локальное воспаление в мембране Бруха и окружающих структурах, возникающее в результате несоответствующей активации комплемента, имеет большое влияние на патогенез ВМД (3-5).

Генетические изменения являются основным фактором риска AMD. Были идентифицированы два основных локуса: один находится на хромосоме 10 рядом с генами ARMS2 / HTRA1 , а другой – на хромосоме 1, включая фактор комплемента H (FH) и белки, связанные с FH (FHR) (6). Кроме того, были задействованы гены, кодирующие члены альтернативного пути комплемента, включая C3, фактор комплемента I (FI) и фактор комплемента B (FB), тем самым обеспечивая убедительные доказательства того, что этот путь участвует в патогенезе AMD (6-8).Локус на хромосоме 1 сложен с множеством идентифицированных гаплотипов, которые изменяют риск AMD (9).

В локусе хромосомы 1 полиморфизм Y402H при СГ представляет собой главный фактор риска ВМД (10–14). Частота этого аллеля риска составляет ~ 35% у лиц европейского происхождения и приводит к замене тирозина остатком гистидина в положении 402 (с использованием нумерации последовательностей препротеина) (15). Эффекты полиморфизма Y402H, по-видимому, опосредуются локально, поскольку полиморфизм не способствует активации комплемента в крови (14), в отличие от некоторых мутаций, обнаруженных в доменах C-концевого контрольного белка комплемента (CCP) FH.

Центральным механизмом активации альтернативного пути является ковалентное отложение белка C3b (опсонина) на всех локальных поверхностях. Связанный с поверхностью C3b может реагировать с другими белками комплемента с образованием активного фермента, конвертазы C3, которая способна производить дополнительные (прикрепляемые к поверхности) молекулы C3b. Это достигается за счет того, что C3-конвертаза протеолитически перерабатывает C3 в крови в свежие молекулы C3b, одновременно производя анафилатоксин C3a. Недостаточный контроль конвертазы C3 приводит к массовому производству молекул C3b и C3a и смещению каскада комплемента на его терминальный литический путь.Это производит самый мощный анафилатоксин, C5a, и комплекс клеточного литического белка, названный комплексом атаки на мембрану; как C5a, так и комплекс мембранной атаки обеспечивают сильные воспалительные сигналы.

Однако присутствие FH в тканях хозяина и его кофакторная активность в отношении FI приводит к разрушению C3b (что приводит к образованию неактивного iC3b), тем самым предотвращая несоответствующую активацию комплемента и воспаление (16). FH также проявляет активность, ускоряющую распад, которая может способствовать деконструкции уже сформированных C3-конвертаз.В то время как регуляторы комплемента, экспрессируемые на клеточной поверхности, также предотвращают активацию комплемента на клетках, передаваемый через кровь FH в настоящее время является единственным известным регулятором комплемента, который связывается и обеспечивает защиту ECM, например мембрану Бруха (17). Защитный FH рекрутируется на собственные поверхности, по крайней мере частично, путем связывания определенных полианионов, таких как цепи гликозаминогликана (GAG) или группы сиаловой кислоты, которые обычно не присутствуют на потенциальных патогенах. ГАГ – это длинные неразветвленные полисахариды, состоящие из повторяющихся дисахаридных единиц, которые могут подвергаться различным сульфатированиям: характер сульфатирования может управлять привлечением специфического белка (18).Одним из повсеместно экспрессируемых ГАГ и основным лигандом для FH является гепарансульфат (HS), который включает как низко-, так и высокосульфатированные области (18). Эти сульфатированные лиганды являются важными компонентами ВКМ, ответственными за ряд биологических процессов, включая иммунный гомеостаз (19, 20).

FH включает 20 доменов CCP и два основных участка связывания GAG, в CCP7 (с некоторым участием CCPs 6 и 8) и CCP20 (21) (см. Рис. 1A): полиморфизм Y402H находится в CCP7 и изменяет связывание FH. к сульфатированным ГАГ (22).Связанный с заболеванием вариант 402H значительно хуже связывается с мембраной Бруха человека (важный сайт в патогенезе AMD), чем форма 402Y при экзогенном применении на срезы тканей (23). Мы продемонстрировали, что область связывания GAG в CCP6-8 отвечает за поверхностное закрепление и, следовательно, распознавание хозяина в структурах глаза, включая мембрану Бруха, тогда как область CCP19-20 прикрепляет FH к ECM в почках (24).

В этом исследовании мы исследовали распределение встречающейся в природе усеченной формы FH, называемой FH-подобным белком 1 (FHL-1), которая возникает в результате альтернативного сплайсинга гена CFH (25). FHL-1 идентичен FH для первых семи доменов CCP перед тем, как оканчивается уникальным 4-aa C концом (см. Фиг. 1A). Важно отметить, что FHL-1 сохраняет все необходимые домены для функционирования, а также подвержен полиморфизму Y402H. Предыдущие исследования продемонстрировали экспрессию FHL-1 клетками RPE (13, 26), и она была идентифицирована в стекловидном теле глаза, где, как сообщалось, FH и FHL-1 находились в эквимолярных концентрациях (27). В крови человека концентрация FH составляет ∼300 мкг / мл (28), а FHL-1 ∼50 мкг / мл (29), что дает молярное соотношение ∼2: 1.

Материалы и методы

Первичные антитела и белковые реагенты

Рекомбинантные 402H и 402Y формы FHL-1 были получены в соответствии с методологией, описанной ранее (30). Полноразмерный белок FH очищали из плазмы человека, как описано Hakobyan et al. (31). В этом исследовании использовались коммерческие АБС OX23 (AbD Serotec, Кидлингтон, Великобритания) (32) и L20 / 3 (Hycult Biotech, Уден, Нидерланды), которые ранее были опубликованы под названием клона C02 (33).Оба эти Abs распознают разные эпитопы на FH (см. Фиг. 1A). Анти-FHL-1 генерировали против пептидной последовательности CIRVSFTL (Mimotopes, Клейтон, Австралия). IgG против FHL-1 очищали с использованием аффинной колонки: рекомбинантный FHL-1 связывали с сефарозой, активированной цианогенбромидом, в соответствии с инструкциями производителя (GE Healthcare, Бакингемшир, Великобритания). Вкратце, кроличью антисыворотку центрифугировали при 12000 × g в течение 5 минут при комнатной температуре для удаления твердых частиц.Затем антисыворотку пропускали через аффинную колонку FHL-1 в PBS, 1 мМ EDTA. Колонку тщательно промывали 5 объемами колонки 0,4 М NaCl для удаления слабосвязанного материала. Два объема колонки 3 M MgCl ₂ использовали для элюирования связанного белка. Затем колонку регенерировали промыванием 5 объемами колонки 0,4 М NaCl и повторным уравновешиванием 5 объемами колонки PBS, 1 мМ EDTA. Элюированный белок диализовали в 2 л Milli-Q H ₂ O в течение 16 часов при 4 ° C с использованием трубки для диализа с отсечкой 10 кДа перед дальнейшим диализом в 20 мМ NaH ₂ PO ₄ , 150 мМ NaCl (pH 8.0) в течение следующих 16 часов при 4 ° C. Кроличий IgG очищали из диализата с использованием протеина A-сефарозы, следуя инструкциям производителя (Sigma-Aldrich, Poole, UK). Изолированный IgG запускали на 4–12% восстанавливающих гелях NuPAGE для проверки чистоты и тестировали на специфичность к FHL-1 в твердофазных анализах (см. Дополнительный рис. 1).

Препарат ткани глаза

Детали донорской ткани глаза, использованной в этом исследовании, перечислены в таблице I. Человеческие глаза были получены из глазного банка Королевской глазной больницы Манчестера после удаления роговиц для трансплантации.Наше исследование соответствовало принципам Хельсинкской декларации. Во всех случаях было предварительное согласие на использование ткани глаза для исследований, и соблюдались руководящие принципы, установленные в Законе о тканях человека от 2004 года (Великобритания). За исключением донорской ткани, используемой для окрашивания друзов, ни один из других доноров не имел в анамнезе нарушений зрения или заболеваний глаз.

Для пар донорских глаз, используемых для иммуногистохимии, анализа ПЦР и вестерн-блоттинга, один глобус был предназначен для выделения клеток РПЭ и обогащения мембраны Бруха.Эти глаза были открыты, сделав три надреза в наглазнике и расплющив ткань. Стекловидное тело и нейросенсорную сетчатку удаляли, клетки RPE собирали осторожным соскобом и выделяли РНК (см. Ниже). Мембрана Бруха была обогащена за счет удаления склеры и сосудистой оболочки. Мембрану Бруха несколько раз промывали PBS и либо замораживали для анализа методом вестерн-блоттинга, либо использовали в экспериментах по диффузии в камере Уссинга (обе методологии описаны ниже).

Второй глобус от каждого донора использовали для приготовления замороженных срезов ткани и фиксировали в 4% (об. / Об.) Формальдегиде в течение 2 часов.Затем глаза обрабатывали и готовили серийные срезы 5 мкм с использованием криостата, как описано ранее (23, 34).

Флуоресцентная иммуногистохимия

Срезы тканей окрашивали на наличие эндогенного FH или FHL-1 с использованием методов, описанных ранее (23). Вкратце, срезы тканей инкубировали с охлажденным (-20 ° C) ацетоном гистологической чистоты (Sigma-Aldrich) в течение 20 с перед тщательной промывкой PBS. Срезы тканей блокировали 0,1% (мас. / Об.) БСА, 1% (об. / Об.) Козьей сывороткой и 0.1% (об. / Об.) Triton X-100 в PBS в течение 1 ч при комнатной температуре. После промывания PBS срезы тканей инкубировали с комбинациями антител либо 10 мкг / мл смеси L20 / 3 и анти-FHL-1, либо OX23 и анти-FHL-1 в течение 16 часов при 4 ° C. Срезы промывали и связывание антител определяли с использованием флуоресцентно меченных вторичных антител (Life Technologies, Пейсли, Великобритания). Равная смесь разведения 1: 5000 конъюгированных с Alexa Fluor 488 козьих антител к кролику (для обнаружения анти-FHL-1) и козьих антимышиных антител, конъюгированных с Alexa Fluor 594 (против OX23 или L20 / 3), была добавлена ​​в секции для 2 человек. ч при комнатной температуре.Наконец, DAPI применяли в качестве ядерного контрастного красителя (0,3 мкМ в течение 5 мин) перед нанесением среды (Vectashield; Vector Laboratories, Питерборо, Великобритания) и нанесением покровного стекла.

В некоторых экспериментах предварительная ферментативная обработка ткани выполнялась, как описано ранее (23). Вкратце, 20 ед / мл каждой из гепариназы I, II и III (все из Flavobacterium heparinum , Sigma-Aldrich) в PBS наносили на срезы тканей на 1,5 ч при 37 ° C; это выполняли после фиксации в ацетоне с последующей промывкой PBS перед этапом блокирования.

Изображения были получены на широкоугольном микроскопе для моментальных снимков (Olympus BX51) с использованием объектива × 40 / 0,30 Plan Fln. Микроскопические изображения получали с помощью камеры CoolSNAP ES (Photometrics) через программное обеспечение MetaVue (Molecular Devices). Чтобы предотвратить просачивание цвета из одного канала в другой, для DAPI, FITC и Texas Red использовались специальные наборы полосовых фильтров. Все изображения обрабатывались с помощью ImageJ64 (версия 1.40g; http://rsb.info.nih.gov/ij).

Вестерн-блоттинг

Образцы обрабатывали на 4–12% гелях NuPAGE Bis-Tris (Life Technologies) при 200 В в течение 60 мин и переносили на нитроцеллюлозные мембраны при 80 мА в течение 2.5 ч с использованием полусухого устройства для переноса в буфере для переноса (25 мМ Трис, 192 мМ глицин, 10% [об / об] метанол). Мембраны блокировали в PBS, 10% (мас. / Об.) Молоке и 0,02% (мас. / Об.) BSA в течение 16 часов при 4 ° C перед добавлением смеси OX23 и анти-FHL-1 Ab, каждая по 0,5 мкг / мл в PBS с 0,2% (об. / об.) Tween 20 (PBST) в течение 2 ч при комнатной температуре. Мембраны дважды промывали в течение 30 мин в PBST перед добавлением в разведении 1: 2000 козьих антител, конъюгированных с IRDye 680RD, и козьих антител к кроликам, конъюгированных с IRDye 800CW (LI-COR Biosciences U.K., Кембридж, Великобритания) в течение 2 ч при комнатной температуре в защищенном от света месте. Мембраны промывали и полосы белков визуализировали с использованием системы инфракрасной визуализации LI-COR Odyssey и программного обеспечения Image Studio.

Экспрессия гена комплемента клетки RPE

Общую РНК выделяли из клеток RPE человека, выделенных от доноров, перечисленных в таблице I, с использованием стандартных методов экстракции и очистки. Вкратце, клетки RPE гомогенизировали в 1 мл холодного реагента TRI (Life Technologies) на 30 мг ткани с использованием бисерной мельницы TissueLyser II (Qiagen).После гомогенизации РНК выделяли после разрушения реагента TRI / BCP и разделения фаз. РНК дополнительно очищали путем абсорбции на спин-колонке RNeasy mini (Qiagen) с обработкой на колонке ДНКазой I. Чистоту и концентрацию РНК, измеренные спектрофотометром NanoDrop, определяли по оптической плотности при 230, 260 и 280 нм. кДНК синтезировали с использованием набора для синтеза кДНК Transcriptor High Fidelity (Roche Diagnostics, Burgess Hill, UK) с 1 мкг РНК и праймером олиго (dT) ₁₈ в соответствии с инструкциями производителя.

Последовательности

гена-мишени были получены из GenBank, а праймеры для ПЦР для конкретных мишеней были разработаны с помощью программного обеспечения Primer3 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/primer-blast/) и показаны в дополнительной таблице I. Праймеры для генов, специфичных для клеток RPE (Bestrophin-1 и RPE65), также были включены, чтобы гарантировать, что очищенная кДНК действительно была получена из клеток RPE. кДНК амплифицировали с использованием следующего протокола ПЦР: 95 ° C в течение 5 минут с последующими 40 циклами 95 ° C в течение 10 секунд, 60 ° C в течение 15 секунд и 72 ° C в течение 20 секунд с последующей программой плавления.Целостность реакций ПЦР проверяли путем обнаружения единственной полосы правильного размера с помощью электрофореза в агарозном геле. Такие же эксперименты были выполнены на объединенной кДНК печени (Sigma-Aldrich).

Эксперименты по диффузии в камере Уссинга

Макулярную область обогащенной мембраны Бруха, изолированную от донорских глаз (описано выше), помещали в камеру Уссинга (Harvard Apparatus, Hamden, CT). После установки макулярная область диаметром 5 мм была единственным барьером между двумя идентичными отделами (см.рис.3А). Обе стороны мембраны Бруха промывали 2 мл PBS в течение 5 минут при комнатной температуре. Сыворотку человека (Sigma-Aldrich) разбавляли 1: 1 PBS и добавляли 2 мл в отсек Уссинга, представляющий хориоидальную сторону мембраны Бруха. Через 1 мин, когда во втором отсеке не было обнаружено утечек (что указывало бы на нарушение целостности мембраны), только 2 мл PBS были добавлены во второе отделение и камеру Уссинга оставили при комнатной температуре на 24 часа при осторожном перемешивании в каждом отсеке. отсек, чтобы избежать образования градиентов диффундирующих белков.Образцы из каждой камеры анализировали гель-электрофорезом. Гели окрашивали окрашиванием Instant Blue (Expedeon, Harston, UK) в течение 60 мин при комнатной температуре или подвергали Вестерн-блоттингу (см. Выше).

В некоторых экспериментах описанный выше протокол повторяли с использованием 100 мкг / мл FH, очищенного из плазмы человека (31), на трех донорских мембранах Бруха (см. Таблицу I). Через 24 часа собирали весь отсек PBS, в который диффундирует ФГ, и собирали гранулы StrataClean (Agilent Technologies, Cheadle, U.К.) используется для извлечения всех белков из раствора. Все содержимое отделения PBS анализировали гель-электрофорезом, как описано выше. Аналогичным образом, чтобы установить, изменил ли связанный с AMD полиморфизм диффузионные свойства FHL-1, 100 мкг / мл рекомбинантных форм FHL-1 402H или 402Y были отдельно протестированы на трех донорных мембранах Бруха (см. Таблицу I). Содержание белка в каждом отделении камеры Юссинга анализировали с помощью гель-электрофореза, и плотности полос нормализовали и сравнивали с образцом FHL-1, полученным через 0 ч, 100 мкг / мл.

Активность жидкофазного кофактора FHL-1

Активность жидкофазного кофактора вариантов FHL-1 402H и 402Y измеряли путем инкубации FHL-1 (в любой форме), C3b и FI вместе в общем объеме 20 мкл PBS в течение 15 мин при 37 ° C. Для каждой реакции использовали 2 мкг C3b и 0,04 мкг FI с различными концентрациями FHL-1 в диапазоне от 0,0125 до 0,8 мкг на реакцию. Анализ был остановлен добавлением 5 мкл 5 × SDS восстанавливающего буфера для образца и кипячением в течение 10 мин при 100 ° C.Образцы обрабатывали на геле 4–12% NuPAGE Bis-Tris при 200 В в течение 60 минут для максимального разделения полос продукта разложения C3b. Плотность полосы продукта iC3b массой 68 кДа измеряли с помощью ImageJ64 (версия 1.40g; http://rsb.info.nih.gov/ij) и использовали для отслеживания эффективности разрушения C3b белков FHL-1. Для обеих форм FHL-1 использовались усредненные данные трех отдельных экспериментов.

Анализы на твердофазных планшетах

Характеристики связывания с гепарином белков FHL-1 (варианты 402H и 402Y) были проанализированы с использованием анализов на микротитровальных планшетах, где либо гепарин, либо одно из его селективно десульфатированных производных (все из Iduron) был иммобилизован нековалентно на покрытых аллиламином гепарин-связывающих пластинах (BD Biosciences, Oxford, U.К.), как описано ранее (22, 35). В этом исследовании использовались образцы селективно десульфатированного гепарина: 2- O –десульфатированный, 6– O –десульфатированный и N –десульфатированный гепарин. HS из слизистой оболочки свиньи (Iduron) или из почек крупного рогатого скота (Sigma-Aldrich) также тестировался в тех же условиях.

Все ГАГ разводили в PBS и иммобилизовали при концентрации 1 мкг / лунку в объеме 100 мкл / лунку в течение ночи при комнатной температуре. Планшеты блокировали в течение 90 мин при 37 ° C 300 мкл / лунку 1% (мас. / Об.) BSA в буфере для анализа (20 мМ HEPES, 130 мМ NaCl, 0.05% [об. / Об.] Твин 20 [pH 7,3]). Этот стандартный буфер для анализа использовали для всех последующих инкубаций, разведений и промывок, и все этапы выполнялись при комнатной температуре. Белок FHL-1 инкубировали с иммобилизованными ГАГ в течение 4 ч. После отмывки связанный белок определяли добавлением 100 мкл / лунку 0,5 мкг / мл антител OX23 и инкубировали в течение 30 минут с последующей промывкой и 30-минутной инкубацией в 100 мкл конъюгированного с щелочной фосфатазой антибиотика в разведении 1: 1000. -мышь IgG (Sigma-Aldrich). Планшеты проявляли, используя 100 мкл / лунку 1 мг / мл раствора динатрия p -нитрофенилфосфата (Sigma-Aldrich) в 0.05 М трис-HCl, 0,1 М NaCl (pH 9,3). Значения оптической плотности при 405 нм определяли через 10 мин проявления при комнатной температуре и корректировали по холостым лункам (то есть лункам без иммобилизованных ГАГ).

Гепарин-аффинная хроматография

Гепарин-связывающие свойства вариантов 402H и 402Y FHL-1 сравнивали с помощью аффинной хроматографии на гепариновой аффинной колонке, в которой 30 мг гепарина (идурон) были соединены с 1,5 мл цианогенбромид-активированной сефарозы ( GE Healthcare) в 0.1 M NaHCO ₃ , 0,5 M NaCl (pH 8,3) с использованием протокола производителя. Перед загрузкой образца колонку уравновешивали 5 мл PBS (Sigma-Aldrich). Очищенный рекомбинантный белок (100 мкг) загружали на колонку в общем объеме 5 мл PBS. Колонку промывали 4 объемами колонки PBS перед тем, как связанный белок элюировали линейным солевым градиентом 130 мМ – 1 M NaCl на 20 мл путем смешивания буфера для элюции (PBS, 1 M NaCl) с буфером для уравновешивания при скорости потока 1 мл. / мин; фракции (1 мл) были собраны на протяжении всего протокола.

Результаты

FHL-1 присутствует в мембране Бруха человека

Чтобы определить, присутствует ли FHL-1 в мембране Бруха человека, мы использовали Abs OX23 (который распознает как FH, так и FHL-1) (32), L20 / 3 (ранее опубликованный как клон C02 и распознающий только FH) (33), и созданное нами специфическое антитело против FHL-1 (рис. 1A). Было показано, что антитела против FHL-1 и L20 / 3 являются специфичными для их предполагаемых мишеней и не проявляют перекрестной реактивности при тестировании против рекомбинантного FHL-1 или FH, очищенного из сыворотки крови человека (дополнительный рис.1A – C). Флуоресцентное окрашивание шести отдельных пятен человека (таблица I) идентифицировало FHL-1 по всей мембране Бруха (рис. 1B). Напротив, полноразмерный белок FH был идентифицирован на хориоидальной стороне мембраны Бруха (с особым накоплением в хориокапиллярах), и небольшие количества присутствовали в пятнах на стороне, обращенной к RPE, но окрашивание не было замечено внутри мембраны Бруха (рис. . 1С, 1Д). Строма хориоидеи окрашивалась на (полноразмерный) FH, и было слабое окрашивание на FHL-1, особенно возле мембраны Бруха.Окрашивание FHL-1 может быть устранено путем предварительной абсорбции Ab рекомбинантным белком (дополнительный рис. 1D, 1E), тем самым обеспечивая дополнительные доказательства того, что окрашивание идентифицировало эндогенный белок. Кроме того, как и ожидалось, мы продемонстрировали совместную локализацию антител против FHL-1 и OX23 по всей мембране Бруха (дополнительный рис. 1F). Анализы друзы от четырех доноров (таблица I) демонстрируют окрашивание на эндогенный FH на периферии поражений, тогда как окрашивание FHL-1 проявляется во всех поражениях (рис.1E).

РИСУНОК 1.

FHL-1, а не FH, является преобладающим регулятором комплемента в мембране Бруха человека. ( A ) Схема, показывающая области CCP FH и FHL-1, распознаваемые OX23, анти-FHL-1 и L20 / 3 Abs. Ассоциированный с AMD полиморфизм Y402H локализован в CCP7 как FH, так и FHL-1. ( B ) Серое флуоресцентное окрашивание макулы человека анти-FHL-1. ( C ) Окрашивание того же донора по шкале серого, как показано на (B), но с Ab L20 / 3. ( D ) Флуоресцентное окрашивание желтого пятна человека с равной смесью анти-FHL-1 (зеленый) и L20 / 3 (красный).( E ) Маркировка друзы FHL-1 (зеленый) и FH (красный) Abs. ( F ) Вестерн-блоттинг солюбилизированной мембраны Бруха от четырех доноров, окрашенных анти-FHL-1 (зеленый) и OX23 (красный): окрашивание желтым цветом указывает на совместную локализацию обоих Abs. Синий цвет представляет собой окрашивание ядер клеток DAPI. Изображения в (B) – (D) представляют шесть индивидуальных доноров. Масштабные линейки 10 мкм. Изображение в (E) представляет четырех доноров. Масштабная линейка 5 мкм.

Таблица I. Детали донорских глаз, использованных в этом исследовании

Мы провели Вестерн-блоттинг экстрактов из изолированной мембраны Бруха человека и зондировали их с помощью анти-FHL-1 и OX23 Abs.Мы идентифицировали полосу ~ 49 кДа, которая мигрировала в то же положение, что и контрольный рекомбинантный белок FHL-1 (рис. 1F). Это было идентифицировано как OX23, так и анти-FHL-1, тем самым подтверждая, что эта полоса была FHL-1, а не одним из ряда известных триптических фрагментов FH (25, 36). Однако OX23 Ab не смог обнаружить в экстрактах виды 155 кДа, соответствующие FH.

Человеческий RPE транскрипция FHL-1, FH и генов, связанных с альтернативным путем комплемента

Мы исследовали экспрессию мРНК ряда генов комплемента клетками RPE, выделенными из донорской ткани (список см. В дополнительной таблице I).Мы обнаружили, что большинство генов, участвующих в альтернативном пути ответа комплемента, были транскрибированы, включая C3, FB, FI, FHL-1 и FH (рис. 2A).

РИСУНОК 2.

Обнаружение транскрипции гена комплемента клетками РПЭ человека. Объединенную РНК из пяти донорских клеток RPE использовали для обнаружения транскрипции гена комплемента. ( A ) РНК для ряда генов, центральных по отношению к альтернативному пути комплемента, была обнаружена как в клетках печени, так и в клетках RPE, включая FHL-1, FH, C3, FB и FI. ( B ) Два RPE-специфических гена, Best-1 и RPE65, использовали в качестве положительных контролей для РНК клеток RPE, а β-актин и ТАТА-связывающий белок (TBP) были выбраны в качестве контролей генов домашнего хозяйства.

FHL-1 может диффундировать через мембрану Бруха

Затем мы исследовали, могут ли FH и FHL-1 способствовать защите границы раздела мембрана Бруха / RPE путем диффузии через мембрану Бруха из кровотока. Изолированную мембрану Бруха помещали между двумя отсеками камеры Уссинга (см. Фиг. 3A), как описано ранее (37), и исследовали диффузию FH и FHL-1 из сыворотки крови человека через мембрану. Через 24 часа с помощью вестерн-блоттинга с использованием OX23 была идентифицирована только полоса ∼49 кДа в диффузате (рис.3Б). Двойное окрашивание этой полосы OX23 и анти-FHL-1 подтвердило, что это действительно был FHL-1, пересекающий мембрану Бруха (рис. 3B). Напротив, FH (155 кДа) не был обнаружен. Эксперименты были повторены с использованием очищенной FH, и через 24 часа все белковое содержимое диффузионной камеры было сконцентрировано и проанализировано, и мы не смогли обнаружить какой-либо белок FH, пересекший мембрану Бруха (рис. 3C). Чтобы выяснить, влияет ли Y402H AMD-ассоциированный полиморфизм на диффузию FHL-1, мы повторили эксперименты с очищенными формами 402H и 402Y FHL-1 (рис.3D, 3E). В случае обоих вариантов равновесие было достигнуто, хотя наблюдалось снижение рассчитанного извлечения белка для формы 402Y (в среднем 73% по трем отдельным экспериментам по сравнению с 92% для формы 402H).

РИСУНОК 3.

FHL-1 способен диффундировать через мембрану Бруха из сыворотки крови человека. Камеру Уссинга использовали для сравнения диффузии FH и FHL-1 из человеческой сыворотки через обогащенную мембрану Бруха из глаз доноров человека. ( A ) Схема расположения камеры Уссинга, где показаны ( a ) мембрана Бруха, ( b ) точки доступа для отбора проб и ( c ) стержни магнитной мешалки.( B ) Флуоресцентный вестерн-блоттинг одного репрезентативного эксперимента из трех, показывающий образцы 0 и 24 часа из отделения PBS: левая полоса показывает образец положительного контроля, содержащий по 1 мкг каждого из FH и FHL-1 . Красные полосы распознаются только OX23, зеленые – только анти-FHL-1, а желтые – обоими Abs. Используемые белковые маркеры Odyssey визуализируются в красном канале. Показанный вестерн-блот представляет три отдельных эксперимента. ( C ) Очищенный FH помещали в одно отделение, и через 24 ч весь белок, содержащийся в другом отделении «PBS», концентрировали, подвергали SDS-PAGE, и полученный гель окрашивали кумасси синим.( D и E ) В экспериментах по диффузии с очищенными рекомбинантными белками FHL-1 изучали потенциальные различия в способности вариантов 402H и 402Y проходить через мембрану Бруха. Обе формы 402H и 402Y были протестированы отдельно с использованием трех донорских мембран Бруха, и данные показаны в виде процентного содержания белка, обнаруженного в каждой камере через 24 часа при комнатной температуре: отметка 50% показана пунктирной линией. Донорские ткани, использованные в (C) – (E), перечислены в таблице I.

AMD-ассоциированный полиморфизм 402H не влияет на активность кофактора C3b FHL-1

Мы оценили, изменит ли AMD-ассоциированный полиморфизм Y402H способность FHL-1 регулировать активацию комплемента на поверхности хозяина, катализируя FI-опосредованный распад C3b до iC3b.При работе с восстанавливающими градиентными гелями α- и β-цепи C3b могут быть четко разделены (дополнительный рис. 3A). Когда C3b инкубируется с FI и либо с формой FHL-1 402Y, либо с 402H, протеолитическое расщепление α-цепи C3b с помощью FI дает полосы при 68 и 43 кДа (38), появление которых можно использовать в качестве меры. активности кофактора FHL-1. В настоящем исследовании мы не отметили различий в способности двух форм FHL-1 расщеплять C3b (см. Дополнительный рис. 3B). Этот результат был предсказуем, поскольку участки связывания C3b / FI и сайт полиморфизма Y402H находятся на противоположных концах белка FHL-1 (рис.1А) (39, 40).

402H и 402Y формы FHL-1 по-разному связывают сульфатированные маркеры собственной поверхности

Хотя полиморфизм Y402H не влияет на способность FHL-1 инактивировать C3b, он находится в единственном домене узнавания поверхности белка в CCP7 (рис. . 1А). Ранее с использованием FH и рекомбинантных белков, представляющих область CCP6-8 FH, было показано, что полиморфизм Y402H влияет на связывание GAG (22, 23). В этом исследовании мы исследовали связывание белков FHL-1 402H и 402Y с избирательно десульфатированным гепарином.Гепарин десульфатировался в положениях 6- O , 2- O и N (см. Фиг. 4A), и хотя это не влияло на связывание 402Y-формы FHL-1, десульфатация существенно влияют на связывание формы 402H, ассоциированной с AMD (рис. 4B, 4C).

РИСУНОК 4.

Форма 402H FHL-1 показывает большую зависимость связывания от сульфатирования ГАГ. Гепарин – это высокосульфатированная модель HS. ( A ) Схема, показывающая дисахарид основной цепи идуроновая кислота – глюкозаминовая основная цепь гепарина, где все четыре возможных положения сульфатирования перечислены следующим образом: R ₁ , 6- O сульфатирование; R ₂ , N сульфатирование; R ₃ , 2- O сульфатирование; и R ₄ , 3- O сульфатирование.( B и C ) Анализы на планшете, демонстрирующие активность связывания форм FHL-1 402Y и 402H для селективно десульфатированного гепарина. ( D ) Схематическая диаграмма, демонстрирующая различные дисахаридные области цепи HS. GlcNAc, N -ацетилированный глюкозамин; GlcNS, N -сульфатированный глюкозамин; GlcUA, глюкуроновая кислота; IdoUA, идуроновая кислота; 2S, сульфатирование в положении 2- O ; 6S, сульфатирование в положении 6- O . ( E и F ) Анализы на планшетах, демонстрирующие, что форма FHL-1, ассоциированная с AMD, 402H, относительно плохо связывается с двумя формами HS по сравнению с формой 402Y.Данные в (B), (C), (E) и (F): n = 6, усредненные из двух независимых экспериментов ± SEM.

Гепарин, однако, представляет собой удобную высокосульфатированную модель HS, которая обнаруживается в ECM. HS содержит большие области с низким содержанием сульфатированных дисахаридов и в целом имеет гораздо меньше сульфатирования, чем гепарин (рис. 4D) (18). Эксперименты с избирательно десульфатированным гепарином продемонстрировали, что связанный с заболеванием вариант 402H FHL-1 в значительной степени зависит от высокосульфатированных последовательностей GAG и, следовательно, вероятно, будет хуже связываться с HS, чем гепарин.Чтобы подтвердить это, были проведены эксперименты по твердофазному связыванию с двумя источниками HS (слизистая оболочка свиньи и почка крупного рогатого скота), которые подтвердили, что форма 402H FHL-1 связывается с HS значительно хуже, чем форма 402Y (рис. 4E, 4F). И наоборот, форма 402H FHL-1 связывалась лучше, чем форма 402Y, с высокосульфатированным гепарином (дополнительный рисунок 2), что согласуется с влиянием доступности сульфатирования на связывание 402H, но также подчеркивает непригодность гепарина в качестве физиологической модели. для взаимодействий FHL-1 / HS.

Удаление HS из срезов ткани желтого пятна путем предварительной обработки смесью гепариназы I / II / III уменьшило сигнал, наблюдаемый для эндогенного FHL-1 (рис. 5B), указывая на то, что HS действительно является одним из основных лигандов, закрепляющих FHL- 1 к мембране Бруха. Интересно, что ферментативная обработка друз, по-видимому, не изменила определяемых уровней FHL-1 внутри друзы, но действительно удалила характерное окрашивание FH по краям поражений (рис. 5C, 5D).

РИСУНОК 5.

Предварительная обработка гепариназой изменяет картину окрашивания FHL-1 и FH в макуле.Локализация как FHL-1, так и FH визуализировалась в ткани глаза до и после ферментативной предварительной обработки смесью гепариназы I / II / III с использованием шести нормальных донорских глаз и четырех друзов, содержащих AMD (глаза, как указано в Таблице I). В каждом случае окрашивание в зеленый цвет представляет собой FHL-1, а окрашивание в красный цвет – FH. ( A ) Распределение FHL-1 и FH до удаления HS и ( B ) после ферментативной обработки в макулярной ткани без патологии AMD. Мечение FHL-1 и FH друзы без ( C ) и с обработкой гепариназой ( D ).Окрашивание в синий цвет представляет собой окрашивание ядер клеток DAPI. Масштабные линейки 10 мкм.

Обсуждение

С 2005 г. большое количество работ было сосредоточено на изменениях СГ как основных генетических факторах патогенеза ВМД (6, 41–44) и важности альтернативного пути комплемента. Это подтверждено доказательствами присутствия белков комплемента в макулярной ткани AMD, включая маркеры нарушения регуляции (3, 22, 23, 45). Предыдущие исследования пришли к выводу, что FH, как передаваемый с кровью белок, является единственным регулятором комплемента, который обеспечивает защиту ECM, например мембраны Бруха.В генетических исследованиях не проводилось различий между FH и FHL-1 (учитывая, что они имеют один и тот же ген), и, хотя в прошлом были проведены специфические для FHL-1 антитела (46), они не использовались для исследования тканей глаза (27). .

В этом исследовании мы показываем, что FHL-1, вероятно, обеспечивает большую защиту мембраны Бруха, чем FH, тогда как последний является преобладающей формой, защищающей ECM хориоидеи (рис. 1C, 1D). Кроме того, мы подтверждаем, что клетки RPE транскрибируют гены, участвующие в активации и регуляции комплемента на мембране Бруха, и наши данные демонстрируют, что FHL-1 транскрибируется локально (рис.2). Помимо местного вклада в накопление FHL-1 в мембране Бруха, мы продемонстрировали, что белок массой 49 кДа может пассивно диффундировать через мембрану Бруха из сосудистой сети сосудистой оболочки глаза, тогда как гликозилированный белок FH массой 155 кДа не может (рис. 3B, 3С). Это последнее наблюдение подтверждает предыдущий вывод о том, что мембрана Бруха ограничивает размер белков, способных пассивно диффундировать через нее, размер которых уменьшается с возрастом (37). Связанный с AMD полиморфизм Y402H не влияет на диффузию FHL-1 через мембрану Бруха (рис.3D, 3E), но различия в количестве восстановленного белка между формами 402H и 402Y могут указывать на большее связывание 402Y FHL-1 с мембраной Бруха в камере Уссинга при прохождении через него по сравнению с формой 402H.

Небольшие участки FH наблюдались на обращенной к RPE стороне мембраны Бруха (рис. 1D), которые, вероятно, происходят из клеток RPE. Локальный синтез также мог бы объяснить характерную маркировку FH на поверхности друз, которая может быть не в состоянии проникнуть в них, тогда как более мелкий FHL-1 может проникать в друз (рис.1E). Интересно, что окрашивание FH вокруг друз удаляется обработкой гепариназой (рис. 5), что позволяет предположить, что белок удерживается на поверхности друз за счет связывания цепей HS. Отсутствие эффекта гепариназы на окрашивание FHL-1 в друзах предполагает, что белок либо взаимодействует с неидентифицированным в настоящее время лигандом, либо находится в ловушке среди множества компонентов, которые составляют эти характерные поражения AMD. Точно так же возможно, что сама гепариназа не способна проникать через плотный матрикс друзы.Неясно, сохраняет ли FHL-1 активность в этой среде.

Мы показываем, что FHL-1 внутри мембраны Бруха иммобилизован там в основном за счет взаимодействия с HS. В другой недавней работе мы показали, что с возрастом наблюдается заметное снижение уровней HS GAG в мембране Бруха (47). Это снижение уровней HS в мембране Бруха в сочетании с более плохим связыванием 402H формы FHL-1 может объяснить, почему AMD является болезнью старения. Люди с полиморфизмом 402H могут по мере старения быть неспособными локализовать достаточное количество FHL-1 на мембране Бруха, так что его защитные эффекты теряются, а каскад комплемента активируется с разрушительными последствиями, которые в конечном итоге приводят к AMD.Кроме того, доминирующая роль FHL-1 в регуляции комплемента в этом сайте, насколько нам известно, впервые дает объяснение того, почему GAG-связывающая область в CCP7 оказалась жизненно важной для локализации белка в глазу (23). , тогда как CCPs 19-20 FH более важны в почках (24, 33, 48). Отсутствие полноразмерного FH в мембране Бруха (и, таким образом, CCPs 19–20) могло привести к эволюционному давлению с целью экспрессии видов HS, способных рекрутировать FHL-1 через его домен CCP7.

Хотя наша работа предполагает, что FHL-1 является основным регулятором комплемента в мембране Бруха, есть генетические доказательства того, что FH также важен. Высокопенетрантная мутация R1210C на С-конце FH является сильным фактором риска AMD и, как полагают, совпадает с 6-летним началом заболевания (9). Форма FH R1210C обнаруживается исключительно ковалентно связанной с альбумином в плазме (49), что может влиять на подвижность белков, и хотя связывание альбумина не влияет на связывание GAG, оно действительно изменяет связывание FH с C3b (49, 50).Таким образом, вполне вероятно, что эта мутация препятствует проникновению в ткань FH и защите поверхности. Кроме того, большинство пациентов с AMD с гаплотипом R1210C имеют полиморфизм FH / FHL-1 402H на другом аллеле (9). Может случиться так, что любой вклад, вносимый FH в иммунную регуляцию в макуле, нарушается мутацией R1210C и усиливает и без того несбалансированный иммунный гомеостаз (обусловленный связанными генетическими факторами, такими как полиморфизм Y402H).

Наши результаты также имеют значение для понимания того, как пять белков FHR способствуют иммунному гомеостазу в глазу.Вариации генов, кодирующих белки FHR, связаны с изменениями риска AMD (41, 42), а белки FHR могут конкурировать со связыванием FH с C3b и / или GAG и даже образовывать новую конвертазу C3 (51). Таким образом, они быстро рассматриваются как недавно идентифицированные позитивные регуляторы альтернативного пути комплемента (41, 52–54). Однако многие из этих биохимических исследований предполагают, что белки FHR будут конкурировать с FH в качестве основного регулятора, что в контексте мембраны Бруха не так, и поэтому их конкурентные свойства с FHL-1 могут отличаться.

Уникальный C-конец FHL-1 означает, что необходимо исследовать характеристики связывания известных лигандов FH, таких как C-реактивный белок (55, 56) и маркеры окислительного стресса (такие как малоновый диальдегид) (57), в зависимости от полиморфизм Y402H. Более того, результаты, показанные в настоящем исследовании, могут иметь значение для иммунного гомеостаза в других тканях и при других заболеваниях, когда FH пытается получить доступ к структурам ECM или внеклеточным дебрисам, тогда как FHL-1 может. Примером могут служить поражения головного мозга пациентов с болезнью Альцгеймера (58), и следует отметить, что изменения сульфатирования HS также связаны с этим состоянием (59).Идентификация FHL-1 как основного регулятора комплемента на ключевом участке патогенеза AMD формирует наше понимание молекулярной биологии заболевания. Только выяснив точную биохимию, лежащую в основе регуляции комплемента в макуле, наряду с пониманием генетической регуляции задействованных белков, мы можем надеяться разработать успешные терапевтические стратегии для этого изнурительного заболевания.

Раскрытие информации

У авторов нет финансового конфликта интересов.

Благодарности

Мы благодарим проф.Пола Барлоу (Эдинбургский университет, Эдинбург, Великобритания) и профессора Энтони Дэя (Манчестерский университет, Манчестер, Великобритания) за советы, поддержку и руководство на ранних этапах этой работы. Мы также благодарим доктора Исаака Самбрано (Manchester Eye Bank, Манчестерский Королевский глазной госпиталь, Манчестер, Великобритания) за помощь в получении донорской ткани глаза, использованной в этом исследовании.

Сноски

• S.J.C. разработал исследование, провел эксперименты и написал рукопись; C.Q.S. экспрессировал рекомбинантные белки FHL-1; A.M.W. помогал в разработке и проведении экспериментов ПЦР; S.H. и Б.П.М. очищенная СГ от человеческих доноров; и П.Н.Б. консультировал по экспериментальному дизайну и написанию рукописи.

• S.J.C. является получателем стипендии MR / K024418 / 1 Совета медицинских исследований по развитию карьеры и ранее получал стипендию Stepping Stones от факультета медицины и гуманитарных наук Манчестерского университета. Хранение тканей глаза было инициировано и поддержано грантами Совета по медицинским исследованиям G02 и MR / K004441 / 1.Микроскопы Bioimaging Facility, использованные в этом исследовании, были приобретены при поддержке Исследовательского совета биотехнологий и биологических наук, Wellcome Trust и Стратегического фонда Манчестерского университета.

• Онлайн-версия этой статьи содержит дополнительные материалы.

• Сокращения, использованные в этой статье:

  AMD

  возрастная дегенерация желтого пятна

  CCP

  контрольный белок комплемента

  ECM

  внеклеточный матрикс

  H FB

  фактор комплемента фактор H

  FHL-1

  фактор H-подобный белок 1

  FHR

  фактор H-связанный

  FI

  фактор комплемента I

  GAG

  гликозаминогликан

  HS

  гепаран

  гепаран пигментный эпителий сетчатки.

• Получено 26 июня 2014 г.
• Принято 11 сентября 2014 г.

• Авторское право © 2014 Американская ассоциация иммунологов, Inc.

1 сентября 1939 г., WH Auden – Стихи

Я сижу в одном из ныряльщиков.
На Пятьдесят второй улице
Неуверенный и испуганный
Когда истекают умные надежды
Низкого нечестного десятилетия:
Волны гнева и страха
Круговорот ярких
И темных земель земли,
Одержимость личной жизнью;
Неописуемый запах смерти
Оскорбляет сентябрьскую ночь.

Точная стипендия может помочь. ,
Те, кому делается зло.
Делайте зло взамен.

Изгнанный Фукидид знал
Все, что может сказать речь
О демократии,
И что делают диктаторы,
Пожилой чушь, которую они говорят
В безразличную могилу;
Проанализировал все в своей книге,
Просветление отогнано,
Боль, вызывающая привыкание,
Неумелое руководство и горе:
Мы должны снова их всех перенести.

В этот нейтральный воздух
Где слепые небоскребы используют
В полный рост, чтобы провозгласить
Сила коллективного человека,
Каждый язык изливает свое тщеславие
Соревновательное оправдание:
Но кто может жить долго
В эйфорическом сне;
Они смотрят из зеркала,
Лицо империализма
И международное заблуждение.

Лица вдоль бара
Придерживайтесь своего обычного дня:
Свет никогда не должен гаснуть,
Музыка всегда должна играть,
Все условности сговариваются
Чтобы этот форт принимал на себя
Домашняя мебель;
Чтобы мы не увидели, где мы находимся,
Заблудились в лесу с привидениями,
Дети, боящиеся ночи
Которые никогда не были счастливы или добры.

Самый ветреный воинственный мусор
Важные люди кричат ​​
Не так грубо, как наше желание:
То, что безумный Нижинский написал
О Дягилеве
Верно для нормального сердца;
За ошибку, заложенную в кости
Каждую женщину и каждого мужчину
Жаждет того, чего не может иметь,
Не вселенская любовь
Но быть любимой в одиночестве.

Из консервативной тьмы
В этическую жизнь
Прибывают плотные пассажиры,
Повторяя утреннюю клятву;
«Я буду верен жене,
Я больше сконцентрируюсь на своей работе»
И просыпаются беспомощные правители
Чтобы возобновить свою принудительную игру:
Кто может их сейчас освободить,
Кто может дотянуться до глухих,
Кто может говорить за тупого?

Все, что у меня есть, это голос
Чтобы развязать сложенную ложь,
Романтическая ложь в мозгу
Чувственного обывателя
И ложь Власти
Чьи здания ощупывают небо:
Нет такого вещь как государство
И никто не существует в одиночку;
Голод не оставляет выбора
Гражданин или полиция;
Мы должны любить друг друга или умереть.

Беззащитный под ночью
Наш мир в ступоре лежит;
Тем не менее, повсюду разбросаны
Иронических световых точек
Вспыхивают повсюду Просто
Обмениваются сообщениями:
Могу я, составленный, как они,
Эроса и пыли,
Осаждены теми же
Отрицанием и отчаянием,
Показать подтверждение пламя.