Фз 69 статья 34: Статья 34. Права и обязанности граждан в области пожарной безопасности

Содержание

Статья 34. Права и обязанности граждан в области пожарной безопасности

Граждане имеют право на:

защиту их жизни, здоровья и имущества в случае пожара;

возмещение ущерба, причиненного пожаром, в порядке, установленном действующим законодательством;

участие в установлении причин пожара, нанесшего ущерб их здоровью и имуществу;

получение информации по вопросам пожарной безопасности, в том числе в установленном порядке от органов управления и подразделений пожарной охраны;

участие в обеспечении пожарной безопасности, в том числе в установленном порядке в деятельности добровольной пожарной охраны.

Граждане обязаны:

соблюдать требования пожарной безопасности;

иметь в помещениях и строениях, находящихся в их собственности (пользовании), первичные средства тушения пожаров и противопожарный инвентарь в соответствии с правилами противопожарного режима и перечнями, утвержденными соответствующими органами местного самоуправления;(в ред. Федерального закона от 28.

05.2017 N 100-ФЗ)

(см. текст в предыдущей редакции)

при обнаружении пожаров немедленно уведомлять о них пожарную охрану;

до прибытия пожарной охраны принимать посильные меры по спасению людей, имущества и тушению пожаров;

оказывать содействие пожарной охране при тушении пожаров;

выполнять предписания, постановления и иные законные требования должностных лиц государственного пожарного надзора;

(в ред. Федерального закона от 22.08.2004 N 122-ФЗ)

(см. текст в предыдущей редакции)

предоставлять в порядке, установленном законодательством Российской Федерации, возможность должностным лицам государственного пожарного надзора проводить обследования и проверки принадлежащих им производственных, хозяйственных и иных помещений и строений (за исключением жилых помещений), территорий, земельных участков в целях контроля за соблюдением требований пожарной безопасности и пресечения их нарушений.

(в ред. Федеральных законов от 22.08.2004 N 122-ФЗ, от 28.05.2017 N 100-ФЗ)

(см. текст в предыдущей редакции)

Открыть полный текст документа

Глава 5. Права, обязанности и ответственность в области пожарной безопасности

Файлы для скачивания:

27.12.2019 249 KB 4 359

ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ЗАКОН О ПОЖАРНОЙ БЕЗОПАСНОСТИ

Глава V. Права, обязанности и ответственность в области пожарной безопасности

Статья 34. Права и обязанности граждан в области пожарной безопасности

Граждане имеют право на:

защиту их жизни, здоровья и имущества в случае пожара;

возмещение ущерба, причиненного пожаром, в порядке, установленном действующим законодательством;

участие в установлении причин пожара, нанесшего ущерб их здоровью и имуществу;

Граждане обязаны:

соблюдать требования пожарной безопасности;

иметь в помещениях и строениях, находящихся в их собственности (пользовании), первичные средства тушения пожаров и противопожарный инвентарь в соответствии с правилами противопожарного режима и перечнями, утвержденными соответствующими органами местного самоуправления;
(в ред. Федерального закона от 28.05.2017 № 100-ФЗ)

при обнаружении пожаров немедленно уведомлять о них пожарную охрану;

до прибытия пожарной охраны принимать посильные меры по спасению людей, имущества и тушению пожаров;

оказывать содействие пожарной охране при тушении пожаров;

выполнять предписания, постановления и иные законные требования должностных лиц государственного пожарного надзора;
(в ред. Федерального закона от 22.08.2004 № 122-ФЗ)

Статьи 35 – 36. Утратили силу. – Федеральный закон от 22.08.2004 № 122-ФЗ.

Статья 37. Права и обязанности организаций в области пожарной безопасности

(в ред. Федерального закона от 22.08.2004 № 122-ФЗ)

Руководители организации имеют право:

(в ред. Федерального закона от 22.08.2004 № 122-ФЗ)

создавать, реорганизовывать и ликвидировать в установленном порядке подразделения пожарной охраны, которые они содержат за счет собственных средств;
(в ред. Федерального закона от 22.08.2004 № 122-ФЗ)

вносить в органы государственной власти и органы местного самоуправления предложения по обеспечению пожарной безопасности;

проводить работы по установлению причин и обстоятельств пожаров, происшедших на предприятиях;

устанавливать меры социального и экономического стимулирования обеспечения пожарной безопасности;

получать информацию по вопросам пожарной безопасности, в том числе в установленном порядке от органов управления и подразделений пожарной охраны.

Руководители организации обязаны:
(в ред. Федерального закона от 22.08.2004 № 122-ФЗ)

соблюдать требования пожарной безопасности, а также выполнять предписания, постановления и иные законные требования должностных лиц пожарной охраны;

разрабатывать и осуществлять меры пожарной безопасности;
(в ред. Федерального закона от 30.12.2015 № 448-ФЗ)

проводить противопожарную пропаганду, а также обучать своих работников мерам пожарной безопасности;

включать в коллективный договор (соглашение) вопросы пожарной безопасности;

содержать в исправном состоянии системы и средства противопожарной защиты, включая первичные средства тушения пожаров, не допускать их использования не по назначению;

абзац утратил силу. – Федеральный закон от 22.08.2004 № 122-ФЗ;

оказывать содействие пожарной охране при тушении пожаров, установлении причин и условий их возникновения и развития, а также при выявлении лиц, виновных в нарушении требований пожарной безопасности и возникновении пожаров;

предоставлять в установленном порядке при тушении пожаров на территориях предприятий необходимые силы и средства;

(в ред. Федерального закона от 22.08.2004 № 122-ФЗ)

обеспечивать доступ должностным лицам пожарной охраны при осуществлении ими служебных обязанностей на территории, в здания, сооружения и на иные объекты предприятий;

предоставлять по требованию должностных лиц государственного пожарного надзора сведения и документы о состоянии пожарной безопасности на предприятиях, в том числе о пожарной опасности производимой ими продукции, а также о происшедших на их территориях пожарах и их последствиях;
(в ред. Федерального закона от 22.08.2004 № 122-ФЗ)

незамедлительно сообщать в пожарную охрану о возникших пожарах, неисправностях имеющихся систем и средств противопожарной защиты, об изменении состояния дорог и проездов;

содействовать деятельности добровольных пожарных;

обеспечивать создание и содержание подразделений пожарной охраны на объектах исходя из требований, установленных статьей 97 Федерального закона от 22 июля 2008 года № 123-ФЗ “Технический регламент о требованиях пожарной безопасности”.
(в ред. Федерального закона от 30.12.2015 № 448-ФЗ)

Руководители организаций осуществляют непосредственное руководство системой пожарной безопасности в пределах своей компетенции на подведомственных объектах и несут персональную ответственность за соблюдение требований пожарной безопасности.
(часть третья введена Федеральным законом от 22.08.2004 № 122-ФЗ)

Статья 38. Ответственность за нарушение требований пожарной безопасности

Ответственность за нарушение требований пожарной безопасности в соответствии с действующим законодательством несут:

собственники имущества;

руководители федеральных органов исполнительной власти;

руководители органов местного самоуправления;

лица, уполномоченные владеть, пользоваться или распоряжаться имуществом, в том числе руководители организаций;

лица, в установленном порядке назначенные ответственными за обеспечение пожарной безопасности;

должностные лица в пределах их компетенции.
(часть первая в ред. Федерального закона от 22.08.2004 № 122-ФЗ)

Ответственность за нарушение требований пожарной безопасности для квартир (комнат) в домах государственного, муниципального и ведомственного жилищного фонда возлагается на ответственных квартиросъемщиков или арендаторов, если иное не предусмотрено соответствующим договором.

Лица, указанные в части первой настоящей статьи, иные граждане за нарушение требований пожарной безопасности, а также за иные правонарушения в области пожарной безопасности могут быть привлечены к дисциплинарной, административной или уголовной ответственности в соответствии с действующим законодательством.

Часть четвертая утратила силу с 1 января 2008 года. – Федеральный закон от 26.04.2007 № 63-ФЗ.

Статья 39. Административная ответственность руководителей организаций

(в ред. Федерального закона от 22.08.2004 № 122-ФЗ)

Часть первая утратила силу. – Федеральный закон от 30.12.2001 № 196-ФЗ.

Основания и порядок привлечения руководителей организаций к административной ответственности за правонарушения в области пожарной безопасности устанавливаются законодательством Российской Федерации.
(в ред. Федерального закона от 22.08.2004 № 122-ФЗ)

Изготовители (исполнители, продавцы) за уклонения от исполнения или несвоевременное исполнение предписаний должностных лиц государственного пожарного надзора по обеспечению пожарной безопасности товаров (работ, услуг) несут административную ответственность в соответствии с законодательством Российской Федерации о защите прав потребителей.

(в ред. Федерального закона от 22.08.2004 № 122-ФЗ)

Статья 34. права и обязанности граждан в области пожарной безопасности федеральный закон от 21-12-94 69-ФЗ (ред- от 29-06-2004) о пожарной безопасности (2021). Актуально в 2019 году

размер шрифта

ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ЗАКОН от 21-12-94 69-ФЗ (ред- от 29-06-2004) О ПОЖАРНОЙ БЕЗОПАСНОСТИ (2021) Актуально в 2018 году

Статья 34.

Права и обязанности граждан в области пожарной безопасности

Граждане имеют право на:

защиту их жизни, здоровья и имущества в случае пожара;

возмещение ущерба, причиненного пожаром, в порядке, установленном действующим законодательством;

участие в установлении причин пожара, нанесшего ущерб их здоровью и имуществу;

Граждане обязаны:

соблюдать требования пожарной безопасности;

иметь в помещениях и строениях, находящихся в их собственности (пользовании), первичные средства тушения пожаров и противопожарный инвентарь в соответствии с правилами пожарной безопасности и перечнями, утвержденными соответствующими органами местного самоуправления;

при обнаружении пожаров немедленно уведомлять о них пожарную охрану;

до прибытия пожарной охраны принимать посильные меры по спасению людей, имущества и тушению пожаров;

оказывать содействие пожарной охране при тушении пожаров;

выполнять предписания, постановления и иные законные требования должностных лиц пожарной охраны;

предоставлять в порядке, установленном законодательством Российской Федерации, возможность должностным лицам пожарной охраны проводить обследования и проверки принадлежащих им производственных, хозяйственных, жилых и иных помещений и строений в целях контроля за соблюдением требований пожарной безопасности и пресечения их нарушений.

—

Федеральный закон “О пожарной безопасности” от 21.12.1994 N 69-ФЗ (последняя редакция от 22.12.2020) — ПОЖАРНЫЕ РЕБЯТА

Федеральный закон от 21.12.1994

№ 69-ФЗ

«О пожарной безопасности»

(редакция от 22.12.2020)

21 декабря 1994 года № 69-ФЗ

РОССИЙСКАЯ ФЕДЕРАЦИЯ

ФЕДЕРАЛЬНЫЙ ЗАКОН

О ПОЖАРНОЙ БЕЗОПАСНОСТИ

Принят

Государственной Думой

18 ноября 1994 года

Список изменяющих документов:
(в ред. Федеральных законов от 22.08.1995 № 151-ФЗ,
от 18.04.1996 № 32-ФЗ, от 24.01.1998 № 13-ФЗ, от 07.

11.2000 № 135-ФЗ,
от 06.08.2001 № 110-ФЗ, от 30.12.2001 № 196-ФЗ, от 25.07.2002 № 116-ФЗ,
от 10.01.2003 № 15-ФЗ, от 10.05.2004 № 38-ФЗ, от 29.06.2004 № 58-ФЗ,
от 22.08.2004 № 122-ФЗ (ред. 29.12.2004), от 01.04.2005 № 27-ФЗ,
от 09.05.2005 № 45-ФЗ, от 02.02.2006 № 19-ФЗ, от 25.10.2006 № 172-ФЗ,
от 04.12.2006 № 201-ФЗ, от 18.12.2006 № 232-ФЗ, от 26.04.2007 № 63-ФЗ,
от 18.10.2007 № 230-ФЗ, от 22.07.2008 № 137-ФЗ, от 14.03.2009 № 32-ФЗ,
от 19.07.2009 № 198-ФЗ, от 09.11.2009 № 247-ФЗ, от 25.11.2009 № 267-ФЗ,
от 23.07.2010 № 173-ФЗ, от 28.09.2010 № 243-ФЗ, от 29.12.2010 № 442-ФЗ,
от 18.07.2011 № 242-ФЗ, от 18.07.2011 № 243-ФЗ, от 19.07.2011 № 248-ФЗ,
от 08.11.2011 № 309-ФЗ, от 30.11.2011 № 345-ФЗ, от 30.12.2012 № 283-ФЗ,
от 11.02.2013 № 9-ФЗ, от 02.07.2013 № 185-ФЗ, от 12.03.2014 № 27-ФЗ,
от 31.12.2014 № 535-ФЗ, от 08.03.2015 № 37-ФЗ, от 02.05.2015 № 118-ФЗ,
от 29.06.2015 № 160-ФЗ, от 13.07.2015 № 233-ФЗ, от 13.07.2015 № 234-ФЗ,
от 28.11.

2015 № 357-ФЗ, от 30.12.2015 № 448-ФЗ, от 05.04.2016 № 104-ФЗ,
от 23.05.2016 № 141-ФЗ, от 23.06.2016 № 218-ФЗ, от 28.05.2017 № 100-ФЗ,
от 01.07.2017 № 141-ФЗ, от 29.07.2017 № 216-ФЗ, от 29.07.2018 № 272-ФЗ,
от 30.10.2018 № 369-ФЗ, от 26.07.2019 № 232-ФЗ, от 27.12.2019 № 487-ФЗ,
от 22.12.2020 N 454-ФЗ,
с изм., внесенными Федеральным законом от 27.12.2000 № 150-ФЗ,
определением Конституционного Суда РФ от 09.04.2002 № 82-О)

Настоящий Федеральный закон определяет общие правовые, экономические и социальные основы обеспечения пожарной безопасности в Российской Федерации, регулирует в этой области отношения между органами государственной власти, органами местного самоуправления, общественными объединениями, юридическими лицами (далее – организации), должностными лицами, гражданами (физическими лицами), в том числе индивидуальными предпринимателями (далее – граждане).

(в ред. Федерального закона от 28.05.2017 N 100-ФЗ)

Обеспечение пожарной безопасности является одной из важнейших функций государства.

Глава I. Общие положения

Статья 1. Основные понятия

Статья 2. Законодательство Российской Федерации о пожарной безопасности

Статья 3. Система обеспечения пожарной безопасности

Глава II. Пожарная охрана

Статья 4. Виды и основные задачи пожарной охраны

Статья 5. Государственная противопожарная служба

Статья 6. Федеральный государственный пожарный надзор

Статья 6.1. Особенности организации и осуществления федерального государственного пожарного надзора

Статья 7. Личный состав Государственной противопожарной службы

Статья 8. Гарантии правовой и социальной защиты личного состава Государственной противопожарной службы

Статья 9. Страховые гарантии сотрудникам и работникам Государственной противопожарной службы

Статья 10. Финансовое и материально-техническое обеспечение служб пожарной безопасности

Статья 11. Имущество Государственной противопожарной службы и муниципальной пожарной охраны

Статья 11.1. Муниципальная пожарная охрана

Статья 12. Ведомственная пожарная охрана

Статья 12.1. Частная пожарная охрана

Статья 13. Добровольная пожарная охрана

Статья 14, статья 15. Утратили силу

Глава III. Полномочия органов государственной власти и органов местного самоуправления в области пожарной безопасности

Статья 16. Полномочия федеральных органов государственной власти в области пожарной безопасности

Статья 16.1. Передача осуществления полномочий федеральных органов исполнительной власти в области пожарной безопасности органам исполнительной власти субъектов Российской Федерации

Статья 17. Утратила силу

Статья 18. Полномочия органов государственной власти субъектов Российской Федерации в области пожарной безопасности

Статья 19. Полномочия органов местного самоуправления в области пожарной безопасности

Глава IV. Обеспечение пожарной безопасности

Статья 20. Нормативное правовое регулирование в области пожарной безопасности

Статья 21. Разработка и реализация мер пожарной безопасности

Статья 22. Тушение пожаров и проведение аварийно-спасательных работ

Статья 22.1. Реализация мер пожарной безопасности в лесах и тушение лесных пожаров

Статья 22.2. Пожарно-спасательные гарнизоны

Статья 23. Утратила силу

Статья 24. Выполнение работ и оказание услуг в области пожарной безопасности

Статья 25. Противопожарная пропаганда и обучение мерам пожарной безопасности

Статья 26. Информационное обеспечение в области пожарной безопасности

Статья 27. Учет пожаров и их последствий

Статья 28. Утратила силу

Статья 29. Утратила силу

Статья 30. Особый противопожарный режим

Статья 31. Научно-техническое обеспечение пожарной безопасности

Статья 32. Исключена

Статья 33. Подтверждение соответствия в области пожарной безопасности

Глава V. Права, обязанности и ответственность в области пожарной безопасности

Статья 34. Права и обязанности граждан в области пожарной безопасности

Статья 35, статья 36. Утратили силу

Статья 37. Права и обязанности организаций в области пожарной безопасности

Статья 38. Ответственность за нарушение требований пожарной безопасности

Статья 39. Административная ответственность руководителей организаций

Глава VI. Заключительные положения

Статья 40. Вступление в силу настоящего Федерального закона

Статья 41. Приведение нормативных правовых актов в соответствие с настоящим Федеральным законом

Статья 42. Утратила силу

RU_ФЗ 123 “Техрегламент о пожарной безопасности”

Страница 1 из 3

В анкете к Заявке на классификацию запрашивается обязательное наличие декларации ПБ (да-нет).
Декларация ПБ может быть обязательном или добровольном порядке для юр.лиц и в добровольном для жилых ГД на ИЖС.

ФЗ 123 Технический регламент о требованиях пожарной безопасности

http://docs.cntd.ru/document/902111644

Статья 64.
2. Для оценки соответствия требованиям пожарной безопасности объекта защиты
– с количеством этажей не более чем два,
– общая площадь которого составляет не более чем 1500 м2
(за исключением зданий классов функциональной пожарной опасности Ф1. 1, Ф1.3, Ф1.4, Ф4.1, Ф4.2),
собственник или иной законный владелец объекта защиты может добровольно составить декларацию пожарной безопасности

Статья 32.
Классификация зданий, сооружений и пожарных отсеков по функциональной пожарной опасности
1) Ф1 – здания, предназначенные для постоянного проживания и временного пребывания людей, в том числе:
а) Ф1.1 – здания дошкольных образовательных организаций, специализированных домов престарелых и инвалидов (не квартирные), больницы, спальные корпуса образовательных организаций с наличием интерната и детских организаций;
б) Ф1.2 – гостиницы, общежития, спальные корпуса санаториев и домов отдыха общего типа, кемпингов, мотелей и пансионатов;
в) Ф1.3 – многоквартирные жилые дома;
г) Ф1.4 – одноквартирные жилые дома, в том числе блокированные;

а) Ф4.1 – здания общеобразовательных организаций, организаций дополнительного образования детей, профессиональных образовательных организаций;
б) Ф4. 2 – здания образовательных организаций высшего образования, организаций дополнительного профессионального образования;

69-ФЗ · О пожарной безопасности

К … относятся:
разработка и осуществление государственной политики, в том числе принятие федеральных законов и иных нормативных правовых актов по пожарной безопасности и контроль за их исполнением;
разработка, организация выполнения и финансирование федеральных целевых программ;
участие в разработке технических регламентов, национальных стандартов Российской Федерации, сводов правил, содержащих требования пожарной безопасности (норм и правил), правил пожарной безопасности, в том числе регламентирующих порядок и организацию тушения пожаров и проведения аварийно-спасательных работ;
формирование предложений по проекту федерального бюджета на соответствующий год в части расходов на проведение мероприятий по обеспечению пожарной безопасности, проводимых федеральными органами исполнительной власти, обеспечение целевого использования средств, выделяемых на эти цели из федерального бюджета;
создание, реорганизация и ликвидация органов управления, подразделений пожарной охраны, пожарно-технических, научных и образовательных организаций, содержащихся за счет средств федерального бюджета;
организация и проведение федерального государственного пожарного надзора;
абзацы восьмой – десятый утратили силу.

– Федеральный закон от 22.08.2004 N 122-ФЗ;
организация развития науки и техники, координация основных научных исследований и разработок;
утверждение номенклатуры, объемов поставок для государственных нужд пожарно-технической продукции, в том числе по оборонному заказу;
установление общих принципов подтверждения соответствия;
создание государственных систем информационного обеспечения, а также систем статистического учета пожаров и их последствий;
абзацы пятнадцатый – семнадцатый утратили силу. – Федеральный закон от 22.08.2004 N 122-ФЗ;
осуществление тушения пожаров в населенных пунктах, в том числе в городских лесах, организация и осуществление тушения пожаров в закрытых административно-территориальных образованиях, особо важных и режимных организациях, в которых создаются специальные и воинские подразделения, в организациях, в которых создаются объектовые подразделения федеральной противопожарной службы, а также при проведении мероприятий федерального уровня с массовым сосредоточением людей;
организация ведомственного пожарного контроля на объектах, находящихся в ведении федеральных органов исполнительной власти;
абзац утратил силу.

– Федеральный закон от 30.12.2015 N 448-ФЗ;
подготовка утверждаемого Правительством Российской Федерации перечня объектов, критически важных для национальной безопасности страны, других особо важных пожароопасных объектов, особо ценных объектов культурного наследия народов Российской Федерации, на которых создаются объектовые, специальные и воинские подразделения федеральной противопожарной службы;
разработка утверждаемых Правительством Российской Федерации нормативных правовых актов, устанавливающих противопожарный режим и определяющих требования к оснащению объектов защиты, которые введены в эксплуатацию либо проектная документация на которые направлена на экспертизу до дня вступления в силу Федерального закона от 22 июля 2008 года N 123-ФЗ “Технический регламент о требованиях пожарной безопасности”, автоматическими установками пожаротушения, системой пожарной сигнализации, системой оповещения и управления эвакуацией людей при пожаре;
проведение аттестации, переаттестации, досрочное прекращение действия квалификационного аттестата и ведение реестра лиц, аттестованных в порядке, установленном Правительством Российской Федерации, на право проектирования средств обеспечения пожарной безопасности зданий и сооружений, которые введены в эксплуатацию.

см. страницу термина

69-ФЗ · О пожарной безопасности

см. страницу термина

Электрохимический синтез мочевины на MBenes

Электрокаталитическая селективность восстановления CO

₂ на MBenes

Вышеупомянутые результаты показали, что электрохимическое производство мочевины может быть осуществимо на поверхности 2D Mo ₂ B ₂, Ti ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂. Однако в настоящее время мы все еще не можем утверждать, что эти три 2D-МБена являются подходящими катализаторами для производства мочевины, поскольку некоторые важные вопросы, касающиеся селективности, все еще не решены.Во-первых, как мы обсуждали выше, частицы * CO являются ключевым промежуточным продуктом для всей реакции. Хотя мы продемонстрировали, что образование * CO на поверхности трех изученных МБенов возможно через промежуточное соединение * COOH, перенос первой пары протон / электрон на CO ₂ может также привести к образованию * OCHO, который является ключевым промежуточным звеном формиата. Следовательно, очень важно знать, можно ли избирательно уменьшить CO ₂ до * CO. Чтобы решить эту проблему, мы сначала вычислили энергию связи частиц * OCHO на трех MBenes и обнаружили, что энергия связи * OCHO обычно выше, чем энергия связи * COOH.Однако это не означает, что образование * OCHO является предпочтительным. Как показали предыдущие исследования ^41,42, многие катализаторы на основе переходных металлов связывают частицы * OCHO сильнее, чем частицы * COOH, но все они имеют CO, а не формиат, в качестве основного продукта. Следовательно, прогнозирование селективности образования * CO исключительно на основе термодинамических расчетов на самом деле ненадежно.

Как показали Cheng et al. ⁴³, селективность восстановления CO ₂, по существу, контролируется кинетически, и образование * COOH и * OCHO может быть достигнуто либо по механизму Эли-Райдила (ER), принимая атом H из воды, либо через механизм Ленгмюра. -Механизм Хиншелвуда (LH) за счет принятия поверхностно-связанного атома H (рис. 4а). Чтобы получить более глубокое представление о селективности, мы также построили явные границы раздела жидкость / твердое тело для всех трех MBenes, добавив слой воды на их поверхности (дополнительный рис.7), и оба механизма ER и LH были рассмотрены для образования * COOH и * OCHO. Как показано на рис. 4b – d, для образования частиц * COOH предпочтительным является механизм ER с кинетическими барьерами 0,38, 0,31 и 0,32 эВ для 2D Mo ₂ B ₂, Ti ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂ соответственно.Напротив, образование разновидностей * OCHO влечет за собой очень большой кинетический барьер через механизм ER или механизм LH. Следовательно, на поверхности трех выбранных нами 2D-МБенов CO ₂ будет преимущественно восстановлен до * CO, а не до формиата.

Рис. 4: Селективность электровосстановления CO ₂.

a Принципиальная схема механизмов ER и LH электровосстановления CO ₂ до * COOH или * OCHO. {\ text {urea}} \).Следовательно, образование * CHO или * COH будет значительно подавлено под рабочим потенциалом производства мочевины.

Кроме того, мы также знаем, что будет существовать конкуренция между адсорбцией * CO и адсорбцией / диссоциацией молекулы H ₂ O в реалистичной водной среде. Согласно нашим результатам, кинетический барьер для прямой диссоциации одной молекулы H ₂ O на 2D Mo ₂ B ₂, Ti ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂ составляет 0.63, 0,53 и 0,72 эВ соответственно (дополнительный рис. 8), указывая на то, что образование поверхностно ограниченных * H и * OH также возможно для трех МБенов. Хотя частицы * H могут служить источником протонов для реакции с промежуточными продуктами реакции по механизму LH, может существовать адсорбционная конкуренция между частицами * CO и * OH на трех MBenes. Поэтому мы затем построили кривые равновесного покрытия поверхности этих двух видов в зависимости от потенциала электрода, выполнив микрокинетическое моделирование. {{\ rm {urea}}} \), он может быть Ожидается, что поверхностные активные центры 2D МБенов, особенно Mo ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂, будут в основном покрыты * CO, а не * OH при рабочих потенциалах.

Электрокаталитическая селективность восстановления N

₂ на MBenes

Как сообщалось в предыдущих исследованиях ^37,38, многие 2D MBenes обладают активностью в базовой плоскости для электровосстановления N ₂ до NH ₃. Будет ли адсорбированная молекула N ₂ также восстановлена до NH ₃ на трех выбранных нами МБенах типа M ₂ B ₂? Чтобы ответить на этот вопрос, мы исследовали термодинамику электрохимического NRR на 2D Mo ₂ B ₂, Ti ₂ B ₂, Cr ₂ B ₂, чтобы получить более глубокое понимание.{\ text {urea}} \), предполагая, что образование NH ₃ может быть значительно подавлено на этих трех MBenes.

Поскольку кинетические факторы играют важную роль в определении селективности, мы далее вычислили кинетические барьеры элементарных стадий восстановления N ₂ до мочевины для трех 2D-МБенов и сравнили с таковыми для восстановления N ₂ NH ₃. В частности, для электрохимических стадий учитывались механизмы как ER, так и LH. Как показано на дополнительных фиг.11–13, для всех трех 2D-МБенов неэлектрохимическая стадия образования * NCON имеет самый большой кинетический барьер, который составляет 0,53, 0,77 и 0,70 эВ для Mo ₂ B ₂, Ti ₂ B ₂, Cr ₂ B ₂ соответственно. Обратите внимание, что кинетические барьеры образования * NCON, предсказанные с помощью явной модели растворителя, довольно близки к тем, которые предсказываются с помощью неявной модели растворителя. Для сравнения, первая электрохимическая стадия восстановления N ₂ до NH ₃, а именно восстановление N ₂ до NNH, уже имеет относительно большой кинетический барьер, равный 0. 78, 0,80 и 0,76 для 2D Mo ₂ B ₂, Ti ₂ B ₂, Cr ₂ B ₂ соответственно (дополнительный рисунок 14). Следовательно, синтез мочевины также кинетически благоприятен для этих трех 2D-МБенов.

Диаграммы Пурбе для MBenes

Наконец, еще одна проблема, которую также необходимо решить, – это электрохимическая стабильность трех MBenes. Хотя пока нет доказательств, подтверждающих существование функциональных групп на экспериментально полученных МБенах, мы задались вопросом, могут ли голые поверхности МБенов быть покрыты частицами * O / * OH в водном растворе в рабочих условиях.Чтобы ответить на этот вопрос, мы построили поверхностные диаграммы Пурбе трех МБенов, чтобы выявить наиболее стабильные конфигурации поверхности при различных равновесных потенциалах и значениях pH (детали расчета приведены в дополнительных методах) ^44,45. Как показано на рис.5, когда электродный потенциал равен 0 В относительно SHE, базальная плоскость 2D Mo ₂ B ₂ полностью покрыта частицами * O независимо от значения pH, тогда как базальные плоскости 2D Ti ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂ покрываются группами * O и * OH в сильнокислой среде. {\ text {urea}} \), что указывает на то, что эти два МБена могут обладать превосходной электрохимической стабильностью против поверхностного окисления в рабочих условиях.{{\ text {NH}} _ {3}} \, \), чтобы гарантировать высокую селективность, поверхность 2D Ti ₂ B ₂ неизбежно будет занята частицами * OH / * O в рабочих условиях. , что приводит к уменьшению количества реактивных сайтов в базисной плоскости.

Рис. 5: Поверхностные состояния МБенов в электрохимических условиях.

Поверхностные диаграммы Пурбэ 2D ( a ) Mo ₂ B ₂, ( b ) Ti ₂ B ₂ и ( c ) Cr ₂ B ₂.Термодинамически стабильные состояния поверхности при значениях SHE и pH выделены оранжевым (для * O), зеленым (для * O + * OH) и фиолетовым (для * OH). Красная пунктирная линия представляет ограничивающий потенциал образования мочевины.

Помимо стабильности активных поверхностей, необходимо также решить вопрос о том, будет ли сам катализатор корродировать в электрохимических условиях. ^46,47. Воспользовавшись тем фактом, что энергии пласта могут передаваться между системами отсчета энергии, мы дополнительно построили полную диаграмму Пурбе трех 2D-МБенов как функцию pH и потенциала при стандартных условиях, чтобы определить окно их стабильности в водных растворах путем прямого объединения Гиббса. свободные энергии из вычислений DFT с экспериментальными произвольными водными состояниями.Как показано на рис.6, широкая область пассивации может быть идентифицирована для Mo ₂ B ₂ (pH <7,08) и Cr ₂ B ₂ (pH <7,22) при потенциале -0,49 В и −0,52 В соответственно. Используя электролит катализатора Pd – Cu (pH = 6,8) ²³ в качестве эталона, как 2D Mo ₂ B ₂, так и Cr ₂ B ₂ могут сохранять целостность структуры в рабочих условиях из-за высоких барьеров. для фазовых превращений твердое тело – жидкость.В отличие от 2D Mo ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂, 2D Ti ₂ B ₂ имеет узкую область пассивации (pH <2,26) при воздействии внешнего потенциала - 0,65 В. В области высоких значений pH Ti ₂ B ₂ будет преобразован в Ti (OH) ₃, что указывает на то, что Ti ₂ B ₂ будет легко корродировать в рабочих условиях синтеза мочевины, поэтому , 2D Ti ₂ B ₂ не является подходящим электрокатализатором для образования мочевины из-за его низкой электрохимической стабильности.

Рис. 6: Коррозионная стойкость МБенов в электрохимических условиях.

Расчетно спрогнозированные диаграммы Пурбе ( a ) Mo ₂ B ₂, ( b ) Ti ₂ B ₂ и ( c ) Cr ₂ B ₂ с использованием 10 ⁻⁶ M для водных частиц при 25 ° C.

Происхождение активности MBenes по отношению к производству мочевины

Благодаря хорошей реакционной способности, селективности и стабильности 2D Mo ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂ были определены как перспективные электрокатализаторы для синтеза мочевины. Однако в настоящее время происхождение активности этих двух МБенов неясно. Известно, что активность электрокатализатора в основном определяется его электронной структурой. Поэтому, чтобы получить более глубокое представление о специализации МБенов для синтеза мочевины, мы дополнительно вычислили их плотность электронных состояний (DOS) на уровне Ферми и сравнили с плотностями некоторых других экспериментально реализованных 2D металлических материалов, включая четыре голых MXenes (Ti ₂ C, Mo ₂ C, Ti ₃ C ₂, Mo ₃ C ₂) и два халькогенида переходных металлов (1T-MoS ₂, VS ₂).Как показано на дополнительном рисунке 15, DOS на атом MXenes, как правило, намного выше, чем у 2D Mo ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂, что подразумевает более сильную металличность и более активные поверхности MXenes. Однако это не означает, что MXenes обладают лучшей электрохимической активностью, чем MBenes, потому что активные поверхности MXenes, как известно, легко пассивируются в растворителях ^27,28,29. Интересно, что DOS Ti ₂ B ₂ довольно близки к DOS Mo ₂ C и Mo ₃ C ₂, что может объяснить нестабильность Ti ₂ B ₂ в водной среде. решение.Примечательно, что DOS Mo ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂ значительно выше, чем у 1T-MoS ₂ и VS ₂, которые фактически инертны по отношению к производству мочевины согласно нашему тесту. вычисления. Поэтому хорошую активность и стабильность 2D Mo ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂ следует отнести к их умеренной металличности.

Подводя итог, на основе всесторонних вычислений DFT мы систематически исследовали потенциал использования трех экспериментально реализованных MBenes, Mo ₂ B ₂, Ti ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂, в качестве электрокатализаторов для синтеза мочевины.Активность, селективность и стабильность трех МБенов в водных условиях были тщательно изучены. Наши расчеты показали, что все три МБена могут адсорбировать N ₂ и CO ₂ на своих базальных плоскостях, а адсорбированный CO ₂ может быть легко восстановлен до * CO. Впоследствии ключевой промежуточный продукт * NCON может быть сформирован посредством соединения * N ₂ и * CO, который может быть далее преобразован в мочевину с помощью четырех этапов PCET. Предельные потенциалы образования мочевины для трех исследованных нами МБенов находятся в диапазоне -0.От 49 до -0,65 эВ, что сопоставимо с таковой для катализатора из сплава Pd-Cu. В частности, обнаружено, что 2D Mo ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂ могут предотвратить проблемы блокировки активных центров и самокоррозии, в то время как 2D Ti ₂ B ₂ не только имеет поверхностно-активные центры, занятые группами * OH и * O, но также может легко корродировать в условиях реакции. Таким образом, 2D Mo ₂ B ₂ и Cr ₂ B ₂ могут служить перспективными катализаторами для получения карбамида, что можно объяснить их умеренной металличностью. Наша работа обеспечивает четкую дорожную карту для разработки электрокатализаторов для одновременной фиксации N ₂ и CO ₂ для производства мочевины, что может способствовать дальнейшим экспериментальным и теоретическим усилиям по разработке 2D электрокатализаторов для этой сложной реакции.

Музыка, язык и N400: паттерны взаимодействия ERP в когнитивных областях

Окончательная приемлемость предложения и знакомство с мелодией

Ответы на вынесение приговора в конце предложения (рис. 1A) дали основные эффекты правильности [F (1,35) = 369 .45, p <0,0001] и ключ [F (1,35) = 14,05, p = 0,0006], но без эффектов знакомства и взаимодействия. Таким образом, музыкальные нарушения снижали процент принятия как правильных предложений (вмешательство), так и неправильных предложений (фасилитация). Name That Tune Ответы на задания указали, что знакомые мелодии, как правило, были известны нашим участникам (рис. 1B), что дает очень значимые различия между типами мелодий [F (1,35) = 741,91, p <0,0001].

Рис. 1

Поведенческие ответы для оценки в конце предложения (слева) и задачи «Назови ту настройку» (справа). Планки погрешностей представляют 95% доверительных интервалов.

Потенциалы мозга, связанные с событием

Общие средние ERP на рис. 2 показывают все сравнения с соответствующими контрольными элементами, отделяя нарушения только музыки (верхние панели) от нарушений только языка и двойных нарушений (нижние панели).

Рис. 2

Общие средние ERP (все условия) и карты различий скальпа (нарушение минус контроль).Музыкальные нарушения показаны на верхней панели; Язык и двойные нарушения в нижней панели. Привычная (слева) и незнакомая (правая) мелодии отображаются отдельно. Обратите внимание, что независимых ответов на музыку и язык N400, как ожидается, дадут больший такой эффект для знакомого условия двойного нарушения мелодии (сплошной зеленый, внизу слева) из-за аддитивной комбинации с музыкой N400. Вместо этого получается субаддитивный шаблон, обозначенный очень похожими N400 для языковых нарушений, независимо от того, получены ли одновременные музыкальные нарушения (зеленый) или нет (синий).

Визуальный осмотр ERP на рис. 2 демонстрирует ожидаемые ранние вызванные ответы (наложенные слуховые и зрительные N1 / P2), за которыми следуют передние негативности, выраженные ответы N400 и эффекты P600 для нарушений по сравнению с контрольными условиями. Что особенно важно, нам удалось выявить эффекты N400 для языковых нарушений (нижние панели рис. 2), а также ожидаемую негативность, подобную N400, для знакомых нарушений тональности мелодии (рис. 2 вверху слева). Кроме того, нарушения как музыки, так и языка вызвали более поздние передние негативности и P600.

Обратите внимание на то, что ответы N400 на нижних панелях на рис. 2 очень похожи для знакомых и незнакомых условий мелодии: оба показывают кажущиеся эквивалентные ответы N400 только для языка и условий двойного нарушения. Однако, если очевидный музыкальный эффект N400 для нарушений только знакомой мелодии (верхняя левая панель) соответствует независимым базовым нейронным генераторам, наблюдаемый образец будет , а не , как мы ожидали. Вместо этого в этом случае должен быть виден аддитивный шаблон, дающий больший N400 для знакомого случая двойного нарушения по сравнению с языком только N400 (т.е., только музыка и только язык N400 должны суммировать – , а не ). То есть однородность ответов N400 на нижних панелях фиг. 2 ясно показывает субаддитивный ответ N400 для знакомых двойных нарушений. Это должно (и дает) значительное взаимодействие Корректность x Ключ в нашем статистическом анализе (см. Ниже).

Вышеупомянутые закономерности были подтверждены нисходящим анализом дисперсии эффектов средней амплитуды для последовательных временных окон (согласно M&U ²⁴), исследованием эффектов и взаимодействий ключа и правильности, а также взаимодействием этих факторов состояния с кожей головы. местоположение (см. Методы).Мы представляем эти анализы знакомых и незнакомых мелодий в четырех частях, показывая ранние эффекты RAN (150–350 мс), лингвистические N400 (350–450 мс), нашу репликацию музыкального ответа N400 и демонстрацию важнейших взаимодействий Correctness x Key. (450–550 мс), а также поздние задние положительные и передние отрицательные стороны (550–900 мс). Наконец, был проведен дополнительный анализ для проверки латентности начала языка N400 (см. Методы), которые, как оказалось, варьировались в зависимости от мелодии (не) знакомства (см. Ниже).Дополнительные анализы, включая фактор «Знакомство», включены там, где это уместно, в частности, для демонстрации наличия музыкального отклика N400 для знакомых мелодий и его отсутствия для незнакомых.

150–250 и 250–350 мс

Знакомые мелодии не показали значительных эффектов или взаимодействий, включающих тональность или правильность в этих первых двух временных окнах. На временном окне 250–350 мс было указание на начало переднего негатива для знакомых нарушений мелодии, что можно увидеть на картах различий скальпа (рис. 2, вверху слева), но эффект Key не был значительным, даже когда анализ был ограничен передними интересующими областями (ROI, , методы ) [F (1,35) = 2,85, p = 0,1004].

В отличие от знакомых мелодий, в обоих этих двух начальных временных окнах незнакомые мелодии продемонстрировали взаимодействия Key x Laterality (Lat) [ 150–250 мс , F (2,70) = 5,03, p = 0,0200; 250–350 мс , F (2,70) = 3,78, p = 0,0432] и взаимодействия, включающие ключ, правильность (Cor) и как переднюю / заднюю (AP), так и латеральную [ 150–250 мс , ключ x Кор x AP x Широта: F (2,70) = 3.31, p = 0,0451; 250–350 мс , Key x Cor x AP: F (1,35) = 5,70, p = 0,0225].

Разложение этих взаимодействий по областям интереса показало, что, когда предложения были правильными, незнакомые мелодии вызывали широко распространенную переднюю негативность от 150 до 250 мс, давая основной эффект ключа по всем передним областям интереса [F (1,35) = 5,29, p = 0,0275]. Однако, в то время как значительный эффект Key, полученный для левой передней области ROI [F (1,35) = 9,63, p = 0.0038], эффект Key был пограничным для средне-передних [F (1,35) = 4,07, p = 0,0514] и правых передних областей интереса [F (1,35) = 2,89, p = 0,0978] . Апостериорные ROI не показали никаких эффектов или взаимодействий с участием Key, когда предложения были правильными [F’s <1]. Кроме того, соответствующий анализ, ограниченный предложениями с языковыми нарушениями, не выявил никаких эффектов ключа [F’s <1].

На интервале 250–350 мс анализ передних и задних областей интереса по отдельности показал одну и ту же общую картину.Когда предложения были правильными, наблюдался значительный эффект Key по сравнению с предшествующими областями интереса [F (1,35) = 4,88, p = 0,0337], который отсутствовал, когда предложения содержали нарушения [F <1]. Не было никаких эффектов Key для задних ROI [F <1] независимо от наличия / отсутствия языковых нарушений.

Кроме того, в том же временном окне 250–350 мс языковые нарушения в паре с незнакомыми мелодиями привели к основному эффекту правильности [F (1,35) = 13,07, p = 0.0009], что связано с возникновением эффекта N400 (рис. 2, справа внизу).

Таким образом, в этих первых двух временных окнах незнакомые условия мелодии выявили эффекты нарушения языка и музыки, а также непредвиденное взаимодействие языка и музыки в форме очевидного подавления эффекта RAN в случае двойного нарушения. В этот же период нарушения привычной мелодии не проявляли эффектов нарушения языка или музыки.

350–450 мс

Здесь устойчивые эффекты Key и Correctness были очевидны для обоих типов мелодий.Эффект языка N400, который начался в предыдущем временном окне для условий незнакомой мелодии, достиг своего пика, дав главный эффект правильности [F (1,35) = 35,27, p <0,0001]. Точно так же передняя негативность, которая уже присутствовала для незнакомых мелодий между 150–350 мс, стала больше, создавая взаимодействие Key x AP [F (1,35) = 6,44, p = 0,0158]. Последующий анализ подтвердил продолжающееся переднее распределение этого негатива в отношении нарушений незнакомой музыки, поскольку эффект Ки был очевиден по передним областям интереса [F (1,35) = 12.15, p = 0,0013], но лишь слабо по сравнению с задними областями интереса [F (1,35) = 3,46, p = 0,0712].

Подобно условиям незнакомой мелодии, знакомые мелодии также дали основной эффект Правильности [F (1,35) = 22,49, p <0,0001] в результате появления эффекта языка N400. Учитывая разницу в начальной задержке языковых эффектов N400 в зависимости от знакомства мелодии (присутствующей уже в предыдущем окне 250–350 мс для незнакомых, но не знакомых мелодий), мы исследовали (50%) дробную пиковую задержку, пиковую задержку, и измерение пиковой амплитуды с использованием процедуры складного ножа (см. Методы ), сравнение разностных волн N400 (Нарушение – Правильно) для знакомых и незнакомых мелодий, как с одновременными нарушениями музыки, так и без них. Эти анализы не выявили существенных различий в пиковой задержке или амплитуде для языковых эффектов N400, но измерения дробной пиковой задержки выявили значительный главный эффект от фамильярности [скорректированный F (1,35) = 5,68, p = 0,0227], с незнакомыми мелодиями, показывающими начало заболевания в среднем на ~ 50 мс раньше (сравните карты различий скальпа на рис. 2, нижние панели и правый график разностных волн эффекта нарушения языка на рис. 3). На задержку срабатывания N400 не повлияло наличие / отсутствие музыкальных нарушений.

Рис. 3

Волны разности для всех нарушений для условий знакомой (слева) и незнакомой (в центре) мелодии, построенные против предсказанного аддитивного профиля отклика для условий двойного нарушения; Ответы N400 на нарушения языка и двойные нарушения, наложенные на знакомые и незнакомые условия мелодии (справа). Обратите внимание, что двойное нарушение (зеленая кривая) является субаддитивным – соответствует взаимодействию Correctness x Key (см. Также Рис. 2 и основной текстовый отчет о результатах временного окна 450–550 мс).

Эффект нарушения знакомой мелодии музыки в этом временном окне по-разному распределялся на коже головы – в то время как взаимодействие Key x AP, очевидное для незнакомых мелодий, не было значимым для знакомых [F <1], было взаимодействие Key x Laterality [F (1,35) = 3,45, p = 0,0374]. Последующие наблюдения на уровнях латеральности соответствовали некоторому правостороннему латерализованному эффекту Key, который слабо проявлялся по левосторонним областям интереса [F (1,35) = 3,92, p = 0.0558], но значимы как по средней линии [F (1,35) = 4,71, p = 0,0369], так и справа латеральной области интереса [F (1,35) = 9,42, p = 0,0041].

450–550 мс

До этого момента условия мелодии были различимы только на основании времени начала эффектов нарушения музыки и языка (ранее для незнакомых условий мелодии). В окне 450–550 мс условия незнакомой мелодии показали только языковые эффекты [Правильность: F (1,35) = 31,13, p <0. 0001; Cor x AP: F (1,35) = 5,99, p = 0,0196; Cor x AP x Lat: F (2,70) = 3,31, p = 0,0453], и никаких ключевых эффектов или взаимодействий.

Напротив, знакомые условия мелодии продемонстрировали как эффекты правильности [F (1,35) = 16,40, p = 0,0003], так и взаимодействие правильности и тональности [F (1,350 = 6,09, p = 0,0186] и Корректность x ключ x AP [F (2,70) = 4,17, p = 0,0486]. Последующий анализ по передним и задним областям интереса по отдельности показал только основной эффект правильности по сравнению с передними областями интереса [F (1,35) = 22.04, p <0,0001], в то время как задние области интереса дали как эффект правильности [F (1,35) = 6,04, p = 0,0191], так и значимое взаимодействие правильности x ключа [F (1,35) = 11,67, p = 0,0016]. Как видно на рис. 2 (верхняя левая панель), это взаимодействие было вызвано апостериорной негативностью для нарушений знакомой мелодии, когда предложения были правильными, и тем фактом, что этот эффект не сочетался аддитивно с лингвистическим N400 – обратите внимание на аналогичный профили ответов N400 для языковых и двойных нарушений на рис. 2, нижняя правая панель). Изучение этого паттерна в пределах уровней правильности показало, что эта отрицательность значима по сравнению с задними областями интереса, когда предложения были правильными [F (1,35) = 6,45, p = 0,0157]; но когда возникали языковые нарушения, реакция на нарушение музыки имела противоположную тенденцию, при этом нарушение было немного более позитивным, но не достигало значимости [F (1,35) = 2,78, p = 0,1046]. Дальнейшее сравнение условий незнакомой / знакомой мелодии, когда предложения были правильными, показало взаимодействие «Знакомство х ключ» [F (1,35) = 4.82, p = 0,0348], подтверждая, что наличие этой задней негативности было уникальным для знакомых музыкальных нарушений мелодии.

Это может означать , либо , что ответ музыкального N400 мог быть полностью ослаблен в случаях двойного нарушения, либо, в качестве альтернативы, конкуренция между потоками обработки уменьшила оба ответа N400. Однако мы полагаем, что статистический анализ разрешает первую интерпретацию (полное затухание музыки N400 в двойных нарушениях), основываясь на следующих соображениях. Первый , музыка N400 демонстрирует более ограниченное апостериорное распределение, чем эффект языка N400 в случаях единичного нарушения, как можно увидеть на картах напряжения на рис. 2, который повторяет распределение, описанное в исследовании Miranda & Ullman. Второй , учитывая этот факт, если бы было так, что двойные нарушения одновременно снижали амплитуду и ответов на музыку и языка N400, чтобы получить наблюдаемый субаддитивный профиль, это должно было бы быть более очевидным в более широком смысле. скальп на сокращенном языке, ответы N400 и на передние области интереса (учитывая его в целом более широкое распространение).

Однако это не та закономерность, которую мы видим в данных, как обсуждалось выше: здесь мы находим трехстороннее взаимодействие Корректность x Ключ x A / P, которое соответствовало взаимодействию Корректность x Ключ только по задним областям интереса – передним областям интереса напротив, показал только главный эффект Правильности. Это убедительно свидетельствует о том, что субаддитивный эффект был вызван не модуляцией вниз вкладов от , языка и обработки музыки в наблюдаемое двойное нарушение амплитуды N400, а скорее то, что одновременное нарушение языка полностью ослабило музыкальный ответ N400.Это также согласуется с наблюдаемым сходством языковых ответов N400 в условиях одиночного и двойного нарушения.

Подводя итог важным выводам в этом диапазоне задержки 450–550 мс: взаимодействие Correctness x Key в этом временном окне выявляет субаддитивный ответ N400 для знакомых двойных нарушений, тогда как для незнакомых мелодий такое взаимодействие не проявляется. На рис. 3 (левый и средний графики) показаны разностные волны эффекта N400 для музыки, языка и двойных нарушений как для знакомых, так и для незнакомых мелодий, построенные против прогнозируемого аддитивного профиля отклика.Опять же, если бы ответы N400 на языке и музыке были независимыми, мы ожидали бы аддитивного профиля: не было бы взаимодействия Корректность x Ключ для знакомых мелодий, и сумма волн разницы между языком и музыкой (обозначена пунктирной черной кривой на рис. 3) не будет отличаться от реального дела о двойном нарушении, что противоречит действительности. Как утверждалось выше, общие закономерности согласуются с интерпретацией, согласно которой такое положение дел соответствует полному ослаблению музыки N400 в случаях двойного нарушения.

550–900 мс

Наконец, в этом диапазоне латентности как языковые, так и музыкальные нарушения привели к передним отрицательным и задним положительным сторонам, как видно из надежного ключа x AP [F (1,35) = 26,67, p <0,0001] и правильность x AP взаимодействий [F (1,35) = 37,82, p <0,0001] между 550–900 мс. Между Ключом и Правильностью не было взаимодействий, связанных с этими более поздними эффектами. Тем не менее, знакомство мелодии действительно модулировало топографию ключевых эффектов [Знакомство x Ключ x AP: F (1,35) = 4.13, p = 0,0497; Знакомство x ключ x латеральность: F (2,70) = 4,07, p = 0,0243]. В частности, как и более ранние негативы типа RAN, поздние передние негативы незнакомой мелодии (N500) не показывали признаков латерализации, в то время как знакомые мелодии были справа латерализованы. Эти различия в латерализации могут быть наиболее четко видны в ответах ERP с двойным нарушением на рис. 2, где эти эффекты были особенно значительными (из-за аддитивности, по-видимому, независимых языковых и музыкальных поздних передних негативностей).

Общее резюме

Результаты нашего эксперимента можно резюмировать следующим образом. Первый , нарушения как только музыки, так и языка повторяли ранее описанные закономерности. Нарушения тональности для обоих типов мелодий вызывали RAN, за которыми следовали более поздние эффекты N500 и P600, в то время как только знакомые мелодии приводили к дополнительной задней негативности (N400), которая возникала после (и немного перекрывалась) RAN, как сообщается в M&U ²⁴ ( хотя и отличается от M&U ²⁴ по времени начала, см. ниже).Концептуальные семантические нарушения в визуально представленных языковых стимулах также воспроизводили ранее описанные паттерны, включая устойчивые эффекты N400, за которыми следуют P600 и передние негативности (см. Steinhauer et al. . ⁵¹). Два вывода из исследования только оригинальной музыки здесь не воспроизводились, а именно: передний P3a и более крупный P600 для нарушений знакомой мелодии. Отсутствие этих ранее описанных эффектов, как мы обсудим ниже, имеет отношение к нашей предварительной интерпретации настоящих данных.

Второй , с точки зрения эффектов междоменной интерференции, четыре результата (I-IV) релевантны:

(I) Задержка начала языка N400. Хотя в языковых эффектах N400 не наблюдались амплитудные модуляции, связанные с одновременной обработкой музыки, на время начала влияла (не) семейность, независимо от наличия / отсутствия музыкальных нарушений. Язык N400 демонстрировал задержку начала, когда соответствующая мелодия была знакома (рис. 3, правая панель).

(II) Задержка начала действия комплекса RAN / N400 для знакомых мелодий. Знакомые нарушения только музыки также демонстрировали задержку начала. В предыдущем исследовании, тестировавшем эти мелодии изолированно ²⁴, знакомые и незнакомые условия вызывали RAN с неразличимым временем начала, с эффектом знакомой мелодии N400, следующим (и слегка перекрывающимся) RAN. Здесь, хотя эффекты RAN и N400 для знакомых мелодий происходили вместе последовательно, как и в предыдущем отчете, этот комплекс ответов не возникал до 350–550 мс, тогда как RAN для незнакомой мелодии уже обнаруживался в 150–550 мс. Диапазон задержки 250 мс.

(III) Субаддитивный отклик N400 в условиях двойного нарушения знакомой мелодии. Если бы музыка и язык ответов N400 были независимыми, мы бы ожидали увидеть аддитивный профиль ответа. Для знакомых мелодий аддитивность будет присутствовать с двойными нарушениями N400, которые, как ожидается, будут больше, чем ответ N400 только на языке, без статистического взаимодействия (то есть только основные эффекты Key и Correctness). Однако, поскольку незнакомые мелодии не должны вызывать музыкальный отклик N400, в незнакомом случае мы ожидаем увидеть похожие, если не идентичные отклики N400, независимо от того, было ли одновременное нарушение музыки или нет.Хотя это именно то, что мы видим для незнакомых мелодий, музыкальный эффект N400 для знакомых мелодий, по-видимому, подавляется при двойных нарушениях, что приводит к неразличимым амплитудам N400 для знакомых и незнакомых условий мелодии только для языка и случаев двойного нарушения. В случае знакомой мелодии это соответствует ключевому взаимодействию Key x Correctness, которое было одним из наших ожидаемых возможных открытий.

(IV) Эффект RAN незнакомой мелодии задерживался при двойных нарушениях.Наличие языковых семантических нарушений подавляло / задерживало RAN для незнакомых мелодий. Это не было ожидаемым результатом настоящего исследования, хотя, как мы обсудим ниже, он также не может быть беспрецедентным (например, см. Луи и др. . ⁴⁸).

Правило 69. Исполнение | Федеральные правила гражданского судопроизводства | Закон США

(а) Общие положения.

(1) Денежное решение; Применимая процедура. Денежное решение приводится в исполнение исполнительным листом, если суд не постановит иное.Процедура исполнения – а также в процедурах, дополняющих судебное решение или исполнение судебного решения, – должна соответствовать процедуре штата, в котором находится суд, но в той мере, в которой он применяется, регулируется федеральный закон.

(2) Получение открытия. В целях содействия судебному решению или исполнению кредитор по судебному решению или правопреемник, чьи интересы являются зарегистрированными, могут получить раскрытие информации от любого лица, включая должника по судебному решению, в соответствии с настоящими правилами или в соответствии с процедурой государства, в котором находится суд. расположена.

(b) Против некоторых государственных служащих. Когда судебное решение было вынесено против налогового инспектора при обстоятельствах, указанных в 28 U.S.C. §2006, или против должностного лица Конгресса при обстоятельствах, указанных в 2 U.S.C. §118, решение должно быть выполнено в соответствии с положениями этого закона.

Банкноты

(с изменениями, внесенными 29 декабря 1948 г., сроком действия 20 октября 1949 г .; 30 марта 1970 г., сроком действия 1 июля 1970 г.; 2 марта 1987 г., действующим 1 августа 1987 г.; 30 апреля 2007 г.) , эфф. 1 декабря 2007 г.)

Записки Консультативного комитета по правилам – 1937

Примечание к Подразделу (а) . Это следует по существу USC, раздел 28, [бывший] §§727 (казни в соответствии с законами штата) и 729 [теперь раздел 42, §1988] (производство по защите гражданских прав), за исключением того, что, как в аналогичном случае приложений (см. примечание к Правилу 64), правило определяет применимое право штата как закон времени, когда испрашивается средство правовой защиты, и, таким образом, делает ненужными, а также заменяет собой правила местного окружного суда.

Статуты Соединенных Штатов об исполнении, если применимо, регулируются этим правилом.Среди них:

U.S.C., титул 12:

§91 (Банковские переводы и другие действия при рассмотрении неплатежеспособности)

§632 (Юрисдикция окружных судов Соединенных Штатов по делам, возникающим за пределами юрисдикции иностранных банков, стороной которых является Федеральный резервный банк)

U.S.C., титул 19:

§199 (Порядок уплаты таможенных пошлин)

U.S.C., титул 26:

§1610 (a) [бывший] (Передача имущества, подлежащего аресту)

U. S.C., титул 28:

§122 [ныне 1656] (Создание нового округа или передача территории; залог)

§350 [теперь 2101] (время для подачи заявления на апелляцию или certiorari; приостановить рассмотрение заявления на certiorari)

§489 [теперь 547] (Окружные прокуроры; подчиняются Министерству юстиции)

§574 [теперь 1921] (Маршалы, сборы перечислены)

§786 [бывший] (Судебные решения; собираются монетами)

§811 [теперь 1961] (Проценты на судебные решения)

§838 [бывший] (Казни; проводится во всех округах штата)

§839 [теперь 2413] (Казни; действуют в каждом штате и территории)

§840 [прежний] (Казни; оставление на условиях), с изменениями, внесенными Правилом 62 (b).

§841 [бывший] (Казни; приостановление одного срока), с изменениями, внесенными Правилом 62 (f)

§842 [теперь 2006] (Казни; против налоговых инспекторов в случаях вероятной причины), как указано в подразделе (b ) этого правила

§843 [теперь 2007] (тюремное заключение за долги)

§844 [теперь 2007] (тюремное заключение за долги; освобождение в соответствии с законами штата)

§845 [теперь 2007] (тюремное заключение за долги; ограничения тюремного заключения)

§846 [теперь 2005] (Fieri Facias; оценка товаров; оценщики)

§847 [теперь 2001] (Продажа; недвижимость по приказу или постановлению)

§848 [теперь 2004] (Продажа; движимое имущество по приказу или постановлению)

§849 [теперь 2002] (Продажа; необходимость уведомления)

§850 [теперь 2003] (Продажа; смерть маршала после сбора или после продажи)

§869 [бывший] (Облигация по предыдущей ошибке и по апелляции), как указано в Правиле 73 (c)

§874 [бывший] (Заменяет), с изменениями, внесенными Правилами 62 (d) и 73 (d)

U. S.C., титул 31:

§195 [теперь 3715] (Покупка при исполнении)

U.S.C., титул 33:

§918 (Сбор невыполненных платежей)

U.S.C., титул 49:

§74 (g) [бывший] (Причины действий, вытекающих из федерального контроля над железными дорогами; исполнение и другие процессы)

Особые законы США об освобождении от казни также продолжаются. Среди них:

U.S.C., титул 2:

§118 (Действия против должностных лиц Конгресса за официальные действия)

U.S.C., Титул 5:

§729 [см. 8346, 8470] (пенсионные выплаты федеральным служащим, не подлежащие назначению, исполнению, взиманию или иному процессуальному закону)

U.S.C., титул 10:

§610 [ныне 3690, 8690] (Освобождение рядовых от ареста в рамках гражданского процесса)

U.S.C., титул 22:

§21 (h) [см. 4060] (Система выхода на пенсию и инвалидности за рубежом; учреждение; правила и положения; аннуитеты; без права уступки; освобождение от судебного процесса)

U. S.C., титул 33:

§916 (Уступка и освобождение от требований кредиторов) Закон о компенсации портовых и портовых рабочих)

U.S.C., титул 38:

§54 [см. 5301] (Вложение, взимание или конфискация денежных средств, причитающихся пенсионерам, запрещены)

§393 [ранее] (Почетная медаль армии и флота; дополнительные пенсии к другим пенсиям; ответственность за привязанность и т. Д.) Сравните Раздел 34, §365 (c) (Почетная медаль; специальная пенсия для зачисленных лиц)

§618 [см. 5301] (Льготы, освобожденные от ареста в рамках процесса и налогообложения; никаких вычетов по задолженности перед Соединенными Штатами)

U.S.C., титул 43:

§175 (Освобождение приусадебного участка от исполнения)

U.S.C., титул 48:

§1371 o (Пенсионные аннуитеты по Панамскому каналу и железной дороге, освобождение от исполнения и т. Д.)

Примечания Консультативного комитета по правилам – дополнительное примечание 1946 года

В отношении положений Закона 1940 года о гражданской помощи солдатам и морякам (50 U. S.C. [App.] §501 et seq .) См. Примечания к Правилам 62 и 64 в данном документе.

Записки Консультативного комитета по правилам – поправка 1948 года

Поправка заменяет настоящую нормативную ссылку.

Примечания Консультативного комитета по правилам – поправка 1970 г.

Поправка гарантирует, что для исполнения судебного решения доступны все процедуры обнаружения, предусмотренные правилами, а не только обнаружение посредством снятия показаний. Согласно существующей формулировке, один суд постановил, что кредитор судебного решения не может раскрыть информацию по Правилу 34. M. Lowenstein & Sons, Inc. против American Underwear Mfg. Co ., 11 F.R.D. 172 (E.D.Pa.1951). Несмотря на формулировку и в значительной степени опираясь на историю законодательства со ссылкой на Правило 33, Пятый округ постановил, что кредитор судебного решения может использовать допросы согласно Правилу 33. United States v. McWhirter , 376 F.2d 102 (5-й округ 1967 г. ). Но аргументация суда не распространяется на открытие, за исключением случаев, предусмотренных Правилами 26–33. Один комментатор предполагает, что существующий язык может быть правильно распространен на все открытия, 7 Федеральная практика Мура 69.05 [1] (2-е изд. 1966 г.), но другой считает, что необходима поправка к правилам. 3 Barron & Holtzoff, Федеральная практика и процедура 1484 (изд. Райта, 1958). Как комментаторы, так и суд в деле McWhirter ясно заявляют, что в соответствии с политикой Правило 69 должно разрешать использование всех устройств обнаружения, предусмотренных правилами.

Примечания Консультативного комитета по правилам – поправка 1987 г.

Изменения технические. Никаких существенных изменений не предполагается.

Комментарии Комитета к Правилам – Поправка 2007 г.

Формулировка Правила 69 была изменена в рамках общего рестайлинга Гражданских правил, чтобы сделать их более понятными и сделать стиль и терминологию единообразными во всех правилах. Эти изменения носят чисто стилистический характер.

Правило 69 (b) с поправками напрямую включает положения 2 U.S.C. §118 и 28 U.S.C. §2006, исключающий неполное изложение в бывшем Правиле 69 (b) обстоятельств, при которых казнь не применяется против офицера.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу.Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

От скамейки к постели: иммунное микроокружение опухоли и современные стратегии иммунотерапии при гепатоцеллюлярной карциноме | Журнал экспериментальных и клинических исследований рака

Гепатоцеллюлярная карцинома (ГЦК) представляет собой наиболее распространенный тип первичного рака печени, с глобальной частотой 500 000 новых случаев в год [1]. ГЦК тесно связан с хроническим воспалением печени и некоторыми хорошо известными факторами риска, включая хронические инфекции HBV и HCV, потребление алкоголя, сахарный диабет и несколько метаболических заболеваний [2]. Текущие терапевтические варианты, доступные для HCC, такие как трансартериальная химиоэмболизация (TACE), радиочастотная абляция, хирургическая резекция и трансплантация, являются излечивающими только для некоторых пациентов на ранних стадиях. В последние несколько лет появились и другие более эффективные подходы, такие как ингибиторы тирозинкиназы (TKI), направленные на ангиогенез (например,грамм. Сорафениб, ленватиниб, регорафениб) [3], клинически протестированные селективные ингибиторы циклинзависимой киназы 5 и 4/6 (Cdk5, Cdk4 / 6) (Dinaciclib и Palbociclib) [4,5,6] и высокоселективный рецептор фактора роста фибробластов 4 (FGFR4) ингибитор h4B-6527 [7, 8], который доклинически и клинически демонстрирует обнадеживающую эффективность и активно используется для лечения прогрессирующего ГЦК.

Печень является «толерогенным» органом, который может вызывать ее иммунные ответы для предотвращения нежелательной атаки патогенов и возникновения опухоли.Однако, как типичный связанный с воспалением туморогенез, уклонение от иммунитета является одной из особенностей, возникающих во время инициации и развития ГЦК [9]. Ряд механизмов иммуносупрессоров, включая внутриопухолевое накопление популяций иммуносупрессивных клеток, дефектную презентацию антигена и активацию множественных ингибирующих путей рецептор-лиганд, благоприятствуют толерантности над иммунитетом и способствуют прогрессированию ГЦК [10, 11]. Величина подавления иммунитета в микроокружении опухоли (TME) тесно коррелирует с плохим прогнозом у пациентов с ГЦК.Следовательно, для лучшего повышения противоопухолевого иммунитета необходимо срочно выяснить более подробную информацию о подавленном иммунном ландшафте ГЦК.

Сложная иммунная сеть в TME HCC

Микроокружение опухоли HCC (TME) представляет собой динамическую систему, которая включает раковые клетки, сложную цитокиновую среду, внеклеточный матрикс, субпопуляции иммунных клеток и другие компоненты [12]. Хорошо известно, что иммунный ландшафт ГЦК обладает сильным подавляющим действием. В этой сложной сети про-туморогенный иммунный ответ, опосредованный различными субпопуляциями иммуносупрессивных клеток, секрециями и передачей сигналов, играет ключевую роль в управлении уклонением от иммунитета [13] (рис.1 . ). Более того, «утомление» противоопухолевого иммунитета также способствует толерантности и прогрессированию опухоли. Здесь мы обсуждаем новые достижения в иммуносупрессивной картине ГЦК.

Рис. 1

Пейзаж иммуносупрессивного опухолевого микроокружения ГЦК. Инфильтрация разнообразных супрессивных подмножеств иммунных клеток, регуляторные секреции и некоторые подавляющие сигналы опосредуют уклонение от иммунитета при ГЦК. (Примечания: Treg: регуляторные Т-клетки; TAM: опухолевые макрофаги; TAN: опухолевые нейтрофилы; CTL: цитотоксические Т-лимфоциты; CAF: фибробласты, связанные с раком; MDSC: миелоидные супрессорные клетки; HSC: звездчатые клетки печени; NK: естественная клетка-киллер; KC: клетка Купфера)

Репрезентативные иммуносупрессивные компоненты в TME HCC

Миелоидные супрессорные клетки (MDSC)

MDSC представляют собой гетерогенную популяцию незрелых миелоидных клеток (IMC), которые размножаются в патологических условиях и повышают экспрессию иммуносупрессивных факторов, таких как аргиназа и индуцибельная синтаза оксида азота (iNOS или NOS2) [14]. Было продемонстрировано, что различные цитокины опухолевого происхождения, такие как G-CSF, GM-CSF, VEGF, MCP-1 и IL-1β, вызывают инфильтрацию MDSC [15]. Киназа, связанная с клеточным циклом (CCRK), представляет собой новую сигнальную мишень для иммунотерапии рака [16]. Новые данные также указывают на то, что CCRK, присущий гепатоме, активирует продукцию interlukin-6 (IL-6) посредством передачи сигналов EZh3 / NF-κB, что, следовательно, индуцирует накопление MDSCs в TME [17]. Связанные с опухолью фибробласты (TAF), связанные с карциномой печени, являющиеся частью стромы в HCC, могут индуцировать миграцию и дифференцировку моноцитов периферической крови в CD14 ⁺ HLA-DR ^{– / low} MDSC с помощью SDF-1α.TAF опосредуют генерацию MDSC посредством передачи сигналов IL-6 / STAT3 [18]. Кроме того, локальная гипоксия была идентифицирована как ключевой регулятор, который может способствовать накоплению MDSCs посредством хемокинового мотива C-C лиганда 26 (CCL26) / CX ₃ пути CR1 [19]. Было доказано, что гипоксия-индуцибельный фактор 1α (HIF-1α), опосредованный сверхэкспрессией ENTPD2 в клетках HCC, увеличивает внеклеточный уровень 5′-AMP, который впоследствии рекрутирует MDSCs в TME [20].

Являясь мощным ингибирующим иммуномодулятором, проникающие в MDSCs в HCC, повреждают эффекторные Т-клетки, расширяют передачу сигналов иммунной контрольной точки, снижают цитотоксичность NK-клеток и продукцию цитокинов с помощью различных механизмов [21, 22].MDSC в фиброзной ткани HCC заметно коррелируют с уменьшением инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL) и повышенной онкогенностью, агрессивным фенотипом, более того, активация и инфильтрация которых значительно снижает выживаемость как у мышей, так и у пациентов с HCC [23]. CD14 ⁺ HLA-DR ^{– / low} MDSC могут притуплять иммунитет к ГЦК, индуцируя активацию CD4 ⁺ CD25 ⁺ Foxp3 ⁺ регуляторных Т-клеток, ингибируя пролиферацию и секрецию IFN-γ стимулированными CD3 / CD28 аутологичные мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) [24]. Функция Т-клеток нарушается из-за конкуренции за энергетические ресурсы (например, аргинин и цистеин) с MDSC [25], а также из-за участия нескольких путей ингибирования рецептор-лиганд в опосредованном MDSCs иммунном уклонении. TGF-β, полученный из опухоли, запускает рекрутирование MDSC CXCL1 / 2 / 5- и CXCR2-зависимым образом. Инфильтрованные MDSC избирательно подавляют продукцию IFN-γ, происходящую из NKT-клеток [26]. MDSC также могут экспрессировать галектин-9, который связывается с TIM-3 на Т-клетках, вызывая апоптоз Т-клеток [27]. Кроме того, предполагается, что MDSC у пациентов с прогрессирующим ГЦК могут взаимодействовать с клетками Куппфера, чтобы индуцировать экспрессию PD-L1 и опосредовать ингибированную цитотоксичность и высвобождение цитокинов NK-клетками через рецептор NKp30 [28].Взятые вместе, MDSC оказывают разностороннее иммуносупрессивное действие при ГЦК. Комбинированное лечение анти-PD-1 / PD-L1 и сопутствующее нацеливание на MDSC (например, ингибирование CCRK или ингибитор p38 MAPK) может синергетически повышать эффективность ликвидации HCC [17, 23]. Кроме того, недавние данные свидетельствуют о том, что лучевая терапия и комбинированная терапия IL-12 (RT / IL-12) могут повышать противоопухолевый иммунитет при HCC за счет снижения накопления MDSC и продукции активных форм кислорода (ROS) [29]. Следовательно, MDSC могут служить потенциальной мишенью для восстановления иммунологического состояния в опухолях HCC.

Макрофаги, ассоциированные с опухолью (ТАМ)

Макрофаги возникают из циркулирующих моноцитов костного мозга, а затем находятся в нормальных тканях. Два поляризующих фенотипа M1 и M2 очень пластичны в ответ на сложные стимулы. Обширные клинические данные и экспериментальные исследования подтвердили, что альтернативно активированные статусные макрофаги, фенотип M2, стимулируют инициирование, прогрессирование и злокачественные метастазы опухоли с помощью различных механизмов [30, 31]. При ГЦК в последнее время в центре внимания исследований стали некоторые специфические популяции иммуносупрессивных опухолево-ассоциированных макрофагов (ТАМ).Хорошо идентифицированные цитокины, производные от HCC, такие как IL-4, IL-13, CSF-1, CCL2, CXCL12, фактор роста соединительной ткани (CTGF) [32,33,34], индуцируют дифференцировку TAMs от CCR2 ⁺ воспалительные моноциты, альтернативно инфильтрация активированных макрофагов (AAM), затем снижают врожденный или адаптивный иммунитет [34, 35]. Остеопонтин (OPN), экспрессируемый клетками HCC, не только имеет положительную ассоциацию с экспрессией PD-L1 при HCC, более того, он способствует альтернативной активации и хемотаксической миграции ТАМ через путь CSF1-CSF1R в ТАМ [36].Произошедшие из клеток HCC. HIF-1α, как недавно было предложено, усиливает высвобождение IL-1β с помощью ТАМ через сигнальный путь TLR4 / TRIF / NF-κB, который способствует EMT и иммунному уклонению от HCC [37]. Перекрестное взаимодействие между MDSC и ТАМ приводит к снижению продукции IL-6, IL-12, снижению экспрессии MHCII и повышению продукции IL-10, сильного ингибитора, который снижает цитотоксичность CD8 + T-клеток и NK-клеток [38]. IL-10, производный от ТАМ, также увеличивает внутриопухолевую частоту Tregs Foxp3 ⁺, что затем подавляет активацию CD4 ⁺ CD25 ^– Т-клеток [38, 39].Было показано, что ТАМ в перитуморальной строме ГЦК секретируют несколько ключевых провоспалительных цитокинов (например, IL-1β, IL-6, IL-23 и TNF-α) и способствуют увеличению количества CD4, продуцирующего интерлейкин-17 ⁺ Клетки T-хелперы 17 (Th27), которые подавляют противоопухолевый иммунитет за счет сверхэкспрессии нескольких маркеров активации, таких как PD-1, CTLA-4 и GITR [40]. Кроме того, ТАМ активно участвуют в других регуляторах иммунного подавления [41, 42]. TGF-β в TME HCC способствует экспрессии Tim-3 на TAM, впоследствии позволяя активированным TAM способствовать росту опухоли и иммунной толерантности посредством передачи сигналов NF-κB и продукции IL-6 ниже по ходу процесса [43].Передача сигналов IL-6 / STAT3, происходящая от ТАМ, также была подтверждена для поддержания канцерогенеза ГЦК за счет стимулирования характеристик, подобных его стволовым клеткам карциномы (ОСК) [44].

Примечательно, что недавние данные показывают, что ТАМ PD-1 ^– могут захватывать моноклональные антитела против PD-1 (aPD-1 mAb) через рецепторы Fcγ (FcγR), экспрессируемые на поверхности связывания с гликаном Fc-домена лекарственного средства [45]. Это новое исследование показывает, что блокада FcγR перед введением mAb aPD-1 может существенно улучшить терапию блокадой контрольных точек.

Нейтрофилы, ассоциированные с опухолью (TAN)

Гетерогенность TAN является фундаментальным свойством, которое позволяет TAN выполнять соответствующие функции для адаптации к изменяющейся микросреде. Подобно макрофагам, нейтрофилы по-разному влияют на биологическое поведение опухоли в зависимости от их поляризации, как противоопухолевого (N1), так и проопухолевого (N2) фенотипа [46]. В некоторых моделях солидных опухолей, таких как рак легких, метастатический почечно-клеточный рак (mRCC) и меланома, ранее сообщалось, что инфильтрация TAN или соотношение нейтрофилов и лимфоцитов (NLR) тесно коррелируют с прогрессированием опухоли, что может служить важным предиктором для наблюдение за пациентами с прогрессирующей опухолью, получающих иммунотерапию анти-PD-1 / PD-L1 [47, 48].Активация TAN модулируется цитокинами, такими как интерфероны I типа (IFN) и TGF-β [49]. TAN в основном подавляют противоопухолевый иммунитет посредством взаимодействия с Т-клетками CD8 ⁺, индуцируя апоптоз Т-клеток CD8 ⁺ за счет продукции оксида азота (NO), опосредованной фактором некроза опухоли-α (TNF-α) [50].

Фасилитаторская роль TAN в патологическом прогрессировании HCC стала темой растущего интереса в последние годы. Клинически TAN играют ключевую роль в развитии и плохом прогнозе HCC, а NLR является независимым предиктором выживаемости после гепатэктомии у пациентов с HCC [51, 52].Новейшее открытие показывает, что потеря связанного с гипоксией фактора HAF (кодируемого SART1 ) приводит к несоответствующей активации HIF-1 и избыточной продукции нижестоящего HIF-1-зависимого хемокина, RANTES. При активации HIF-1 / RANTES происходит накопление инфильтрации TAN, что связано с инициированием и прогрессированием HCC, вызванным неалкогольным стеатогепатитом (НАСГ) [53]. Более того, недавние исследования показали, что TAN опосредуют внутриопухолевую инфильтрацию ТАМ и регуляторных Т-клеток за счет избыточной продукции некоторых хемокинов, таких как CCL2 и CCL17, что затем способствует прогрессированию ГЦК, метастазированию и устойчивости к лечению сорафенибом [54].Недавно идентифицированная петля положительной обратной связи подразумевает, что TAN индуцируют характеристики, подобные стволовым клеткам HCC, за счет повышения экспрессии miR-301b-3p в раковых клетках и поддерживают гипер-действие в передаче сигналов NF-kB, что приводит к более высокому уровню секреции хемокина 5 мотива CXC (CXCL5 ) и, в свою очередь, привлекает больше проникновения TANs [55]. В целом, TAN тесно связаны с иммуносупрессией при HCC, но прямые взаимодействия между TAN и другими компонентами в HCC ткани и точные механизмы, лежащие в основе этой регуляции при HCC, еще не ясны.

Лимфоциты, инфильтрирующие опухоль (TIL)

Когда-то считалось, что высокая плотность лимфоцитов, инфильтрирующих опухоль (TIL), является иммунной реакцией хозяина против рака. Некоторые ранние клинические данные свидетельствуют о том, что у послеоперационных пациентов с ГЦК с высоким уровнем инфильтрации лимфоцитами, особенно Т-лимфоцитами, рецидивы уменьшались, а выживаемость улучшалась [56]. Однако накопленные данные свидетельствуют о том, что общая степень TIL при ГЦК не способна создавать эффективный противоопухолевый иммунитет для контроля прогрессирования опухоли [57].Внутрипеченочный иммунный ответ включает различные популяции лимфоцитов, которые по-разному способствуют иммунному надзору за ГЦК. Внутриопухолевый баланс регуляторных и цитотоксических Т-клеток играет ключевую роль в оценке иммунного статуса и прогрессирования ГЦК [57, 58].

Регуляторные Т-клетки (Treg)

Регуляторные Т-клетки (Treg) могут быть получены из Т-лимфоцитов периферической крови, резидентных Т-клеток и других клеточных источников. Его рекрутирование, как было обнаружено, индуцируется осью CCR6 (CC Chemokine рецептор типа 6) –CCL20 (CC motif Chemokine 20).Активация Tregs индуцируется вовлечением Т-клеточного рецептора (TCR) одновременно с передачей сигналов IL-10 и TGF-β [59]. Помимо активации посредством провоспалительных сигналов, недавние исследования выяснили, что длинные некодирующие РНК (LncRNAs) могут играть ключевую роль в управлении дифференцировкой Treg и их последствиях во время прогрессирования HCC [60]. Сверхэкспрессируемый рецептор Lnc-эпидермального фактора роста (Lnc-EGFR) в Tregs связывается с EGFR и предотвращает его убиквитинирование c-CBL, усиливая активацию его нижележащей оси AP-1 / NF-AT1 в Treg, таким образом, способствуя иммуносупрессии при HCC [60] .Более того, амфирегулин (AREG), многофункциональный игрок, также может усиливать супрессивную функцию Treg через мотивацию EGFR [61].

Частоты Treg связаны с инвазивностью HCC и играют решающую роль в препятствовании развитию эффективных противоопухолевых ответов при HCC [57, 62]. Недавние данные показывают, что CD4 ⁺ CD25 ⁺ Treg у пациентов с ГЦК могут запускать ослабленный иммунный ответ посредством различных механизмов [63]. Типичная подгруппа, CD4 ⁺ CD25 ⁺ Foxp3 ⁺ Tregs, может снижать способность убивать CD8 ⁺ Т-лимфоцитов посредством ингибирования высвобождения и продукции гранзима A, B (GrA, B) и перфорина [64] , одновременно они также избирательно подавляют определенные молекулы (такие как TNF-α, IFN-γ), участвующие в активации CD8 ⁺ Т-клеток [64, 65].Кроме того, высокая экспрессия IL-35 в ткани HCC была положительно связана с другим недавно идентифицированным подтипом, CD39 ⁺ Foxp3 ⁺ Tregs инфильтрацией [66], что служит лучшим независимым прогностическим индикатором рецидива у пациентов с HCC. после лечебной резекции.

CD8

⁺ цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL)

Присутствие CD8 ⁺ цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL) в ткани HCC связано с улучшением выживаемости.Однако эффективность опосредованного CTL противоопухолевого иммунного ответа функционально ограничена различными механизмами. Физические условия (например, перегрузка молочной кислоты, низкий pH, гипоксия) [67], серьезная «метаболическая конкуренция» с опухолевыми клетками, отсутствие CD4 ⁺ Т-клеток помогают (более того, взаимодействуют с Treg и другими супрессорными клетками) [64 , 68], а также высокая экспрессия большого количества иммунорегуляторных молекул в Т-клетках или клетках ГЦК (например, IL-10, Fas / FasL, CXCL17, VEGF, индоламин-2,3-диоксигеназа и т. Д.) [67, 69, 70,71], может быть ответственным за ограниченные опухолево-ассоциированные антигены (TAA) -специфические CD8 ⁺ Т-клеточные ответы и низкую продукцию ЦТЛ IFN-γ [72, 73].Помимо классических иммуносупрессивных клеток в TME, другие компоненты также критически влияют на функции CTL. Фиброз печени, характерная характеристика ГЦК, нарушает распознавание тромбоцитов CD44 Т-клетками CD8 ⁺, снижает инфильтрацию эффекторных Т-лимфоцитов CD8 ⁺ и прилипает к синусоидам печени для осуществления иммунного надзора [74]. Экспрессия Fas / FasL в Т-клетках CD8 ⁺ положительно коррелирует с противоопухолевым иммунитетом против ГЦК [69]. Недавние данные показывают, что производный от опухоли фактор роста эндотелия сосудов A (VEGF-A) и простагландин E2 (PGE2) совместно индуцируют экспрессию FasL в эндотелиальных клетках, что приводит к избыточному обмену CD8 + Т-клеток и снижению противоопухолевых иммунных ответов [71 ].Было высказано предположение, что дендритные клетки CD14 ⁺ (CD14 ⁺ DC), недавно открытый иммунный регулятор ГЦК, подавляют CTL посредством выработки IL-10 и индоламин-2,3-диоксигеназы (IDO), и оба цитокина играют центральные роли в различных физиологических и патологических иммунных реакциях и воспалительных процессах [75].

В частности, было продемонстрировано, что передача сигналов иммунных контрольных точек, которая включает усиление множества ингибирующих костимулирующих молекул (например, PD-1, LAG-3, CTLA-4, Tim-3, 2B4), резко вызывает истощение CTL [58, 76, 77].Более подробная информация будет рассмотрена в разделе «Пути иммунных контрольных точек и родственная терапия».

Врожденные иммунные игроки и стромальные компоненты

Естественные клетки-киллеры (NK)

Естественные киллерные клетки (NK) составляют значительную часть врожденной иммунной системы в печени. Будучи первой линией защиты хозяина от вирусных инфекций (например, HBV, HCV) и канцерогенеза, NK-клетки играют ключевую роль в поддержании баланса между иммунной защитой и толерантностью. Все больше данных свидетельствует о том, что гипоксический стресс в ткани ГЦК, переключение активирующих / ингибирующих NK-рецепторов (NKR) и влияние иммунных регуляторных компонентов в TME в значительной степени способствуют дисфункции NK-клеток, что в значительной степени коррелирует с утомляемым противоопухолевым иммунитетом и плохим прогнозом [78 , 79].

Было показано, что сверхэкспрессия α-фетопротеина (AFP) клетками HCC косвенно нарушает продукцию интерлюкина-12 (IL-12) дендритными клетками (DC), что приводит к ослаблению высвобождения цитотоксических эффекторных молекул, снижению экспрессии естественных киллеров группы 2, член D (NKG2D), активирующий рецептор на NK-клетках, и впоследствии ингибирующий активацию и способность NK-клеток [80, 81]. Недавнее исследование также указывает на то, что AFP может оказывать прямое двойное влияние на функции NK-клеток. Кратковременное воздействие AFP индуцирует NK-клетки гиперчувствительного фенотипа к IL-2, что сопровождается повышенной секрецией IL-1β, IL-6 и TNF-α [82].Эти провоспалительные цитокины были связаны с низкой частотой рецидивов и увеличенной общей выживаемостью (ОВ) пациентов с ГЦК, связанным с ВГВ [83]. Напротив, расширенный эффект AFP отрицательно влияет на долгосрочную жизнеспособность NK-клеток [82].

Другие модуляторы TME HCC также оказывают множественное влияние на активность NK (Fig. 2 . ). Как упоминалось выше, инфильтрация MDSC и ТАМ ингибирует цитотоксичность аутологичных NK-клеток и продукцию цитокинов, и подавление в основном зависит от NKp30 на NK-клетках [28].Tregs конкурируют с NK-клетками за доступность IL-2 и нарушают NK-ответы посредством высвобождения цитокинов, таких как IL-8, TGF-ß1 и IL-10, которые затем подавляют экспрессию лигандов NKR на звездчатых клетках печени (HSC) и подавляют их признание NKG2D [84]. Было показано, что фибробласты, ассоциированные с гепатоцеллюлярной карциномой (CAF или TAF), индуцируют образование MDSC через ось IL-6 / STAT3 и секрецию фактора стромальных клеток (SDF) -1α [18]. В дополнение к прямому влиянию на иммуносупрессивный TME, происходящие из CAFs IDO и PGE2 ослабляют опосредованную NK-клетками продукцию TNF-α и IFN-γ, что может быть связано со стойким фиброзом при HCC и иммунным уклонением опухолевых клеток [85, 86].

Рис. 2

Роль модулятора NK-клеток в регуляции иммунных ответов на ГЦК. NK-клетки выполняют множество функций регуляции иммунитета при ГЦК. Помимо прямого влияния на опухолевые клетки, взаимодействия между NK-клетками и другими иммунными клетками или компонентами стромы опухоли, как было продемонстрировано, опосредуют иммунное уклонение от HCC. иммунный гомеостаз печени. В некоторых исследованиях сообщалось, что опосредованное ИЛ-10 подавление продукции KC воспалительного TNF-α и NO способствует ослаблению гепатита [87].Хотя когда-то KC считались мощной линией защиты от опухолей в печени, в последнее время KC обычно исследуются как проканцерогенные субъекты в контексте HCC, более глубоких механизмов их роли иммунного регулятора и врожденных или связанных с KCs механизмов. адаптивный иммунный ответ постепенно раскрывается. Текущие исследования показывают, что на измененные функции KC в основном влияют провоспалительные сигналы и другие супрессивные клетки (например, MDSC) [88]. Запускающие рецепторы, экспрессируемые миелоидными клетками-1 (TREM-1), экспрессируемыми KC, являются решающим фактором в инициации HCC.Новые исследования показывают, что потенциальный лиганд для TREM-1, группа Box 1 с высокой подвижностью (HMGB1), высвобождаемая некротическими гепатоцитами, вероятно, участвует в активации провоспалительной передачи сигналов KCs и способствует прогрессированию HCC [89]. KCs, дефектные по аутофагии, новый непаренхиматозный дефицит клеточной деградации печени, как было показано, способствуют фиброзу, воспалению и гепатоканцерогенезу на пре-неопластической стадии за счет усиления митохондриального пути ROS / NF-κB / IL-1 [90]. Кроме того, галектин-9, производный от KCs, естественный лиганд Т-клеточного иммуноглобулинового домена и белка 3 муцинового домена (Tim-3), приводит к экспансии CD4 ⁺ CD25 ⁺ FoxP3 ⁺ Treg, сокращению CD4 ⁺ эффекторных Т-клеток и апоптоз ЦТЛ при ГЦК [91].Галектин-9 не только опосредует старение Т-клеток при HBV-ассоциированном ГЦК, вносит значительный вклад в воспалительные реакции и ускользает от иммунного ответа на ГЦК [92], но, в частности, также представляет собой потенциальный биомаркер фиброза печени и может выступать в качестве новой иммунотерапевтической мишени для лечения ГЦК и вирусные инфекции печени [92, 93].

Дендритные клетки (ДК) и вакцины на основе ДК

Подобно NK-клеткам, являясь еще одним важным фактором врожденного иммунитета, ДК служат в качестве профессиональных антигенпрезентирующих клеток, которые способны примировать Т-клетки к антигенам, ассоциированным с опухолью (ТАА) участвует в прогрессировании ГЦК.В последнее время DC вызвали большой интерес, поскольку были разработаны новые вакцины на основе DC, которые широко используются для лечения солидных опухолей, включая рак простаты, меланому, рак почек и HCC [94]. ДК, сконструированные с опухоль-ассоциированными антигенами (ТАА), которые были выяснены в ходе многочисленных исследований in vitro и in vivo, рассматриваются как многообещающие вакцины в иммунотерапии ГЦК. Кроме того, аутологичные ДК, пульсирующие ex vivo с лизатом аутологичных опухолевых клеток, клетками HepG2 и теломеразными пептидами, были оценены в клинических испытаниях на людях.

Недавно экзосомы, полученные из дендритных клеток (DC), и экзосомы, полученные из опухолевых клеток (TEX), которые вызывают регрессию опухоли в моделях автохтонных мышей с ГЦК, сформировали новый класс бесклеточных вакцин и расширили возможности для лечения ГЦК. иммунотерапевтические вакцины [95, 96] ( Таблица 1 .) .

Таблица 1 Биологические эффекты вакцин на основе ДК при ГЦК: репрезентативные исследования in vitro и in vivo

Репрезентативные факторы и модуляторы иммунного ингибирования

Обилие провоспалительных хемокинов, цитокинов и иммунодепрессивных молекул, которые организуют сильно иммунодепрессивную опухоль среды, играют критическую роль в изменении формы TME, опосредуют межклеточные перекрестные помехи и оказывают стимулирующее иммунное уклонение эффекты HCC.Некоторые из их специфических функций были упомянуты при обсуждении иммунных клеток ГЦК, здесь мы суммируем репрезентативных игроков, которые в основном выделяются в текущих исследованиях (Таблица 2 , ).

Таблица 2 Репрезентативные молекулы и пути передачи сигналов, опосредованные про- / противоопухолевым иммунитетом HCC

Современные иммунотерапевтические стратегии для HCC

Как связанный с воспалением рак, HCC представляет собой многообещающую мишень для иммунной терапии. Клинически успех иммунной онкологии при многих типах рака стимулировал внедрение иммунотерапевтических средств при ГЦК.Недавние исследования показали, что антиген-специфическая иммунотерапия опухоли и другие подходы, регулирующие иммуногенность, стали привлекательными стратегиями лечения ГЦК. Как правило, эти иммунотерапевтические подходы для лечения ГЦК можно в основном разделить на блокаду иммунных контрольных точек (ICB), клеточные (в основном относятся к DC) / неклеточные вакцины, адоптивный перенос клеток (ACT), иммунные схемы на основе цитокинов / антител, и сочетание иммунотерапевтических средств с другими лекарственными средствами (рис. 3 .). Здесь мы собираем некоторые репрезентативные данные о доклинических и клинических испытаниях иммунных стратегий ГЦК и обсуждаем наши текущие знания об их механизмах действия, обосновании и перспективах применения для лечения ГЦК в обозримом будущем.

Рис. 3

Современные иммунотерапевтические варианты лечения ГЦК. Иммунотерапевтические подходы при ГЦК в основном включают блокаду контрольных точек иммунитета (ICB), клеточные (в основном относятся к DC) / неклеточные вакцины, адаптивный перенос клеток (ACT), иммунные схемы на основе цитокинов / антител и онколитический вирус

Иммунная контрольная точка ингибиторы

Иммунные контрольные точки – это особый подтип мембраносвязанных молекул, которые действуют как основные регуляторы иммунного ускользания при раке.Наиболее изученные иммунные контрольные точки при ГЦК включают цитотоксический белок Т-лимфоцитов 4 (CTLA-4), белок-1 запрограммированной гибели клеток и его лиганд (PD-1, PD-L1), белок гена 3 активации лимфоцитов (LAG-3) и муцин. молекула, содержащая домен-3 (Tim-3).

Белок-1 запрограммированной гибели клеток и его лиганд (PD-1, PD-L1)

PD-1, регуляторный иммуноглобулин, экспрессируемый на активированных CD4 ⁺, CD8 ⁺ Т-клеток, В-клеток и NK-клеток, играет важную роль в поддержании иммунной толерантности и подавлении цитотоксичности Т-лимфоцитов [123].Коингибиторные сигналы в лимфоцитах опосредуются связыванием PD-1 с его лигандами PD-L1 (B7-h2) и PD-L2 (B7-DC) [124]. При ГЦК очевидно, что увеличение количества как циркулирующих, так и внутриопухолевых Т-клеток PD-1 ⁺ CD8 ⁺ предсказывает высокие послеоперационные рецидивы и худший прогноз. Также известно, что повышающая регуляция PD-L1 на клетках HCC, которая индуцируется различными цитокинами, особенно IFN-γ, в свою очередь, способствует снижению противоопухолевого иммунитета и способствует апоптозу Т-клеток CD8 ⁺ [110].Новые открытия in vitro и in vivo показывают, что сверхэкспрессируемые PD-1 миелоидные клетки, такие как DC, подавляют ответы Т-клеток при HCC. CD8 ⁺ Т-клетки могут быть более активно активированы для секреции IL-2 и IFN-γ посредством адоптивного переноса PD-1-дефицитных DCs [111].

Клинически репрезентативное испытание фазы увеличения и увеличения дозы на 1/2 дозы ингибиторов иммунных контрольных точек PD-1, ниволумаба (исследование CheckMate 040), показало многообещающую роль иммунотерапии в лечении запущенного ГЦК, и соответствующие результаты были представлены на ASCO 2017 годовое собрание [125].В фазе увеличения дозы (зарегистрированное число = 48) частота объективного ответа (ЧОО) составляла 15%, степень контроля заболевания (DCR) составляла 58%, а среднее время до прогрессирования составляло 3,4 месяца. В фазе увеличения дозы (общее количество = 214; в 4 когортах), как правило, ORR составлял 20%, DCR составлял 64%, среднее время до прогрессирования составляло 4,1 месяца, а 6 месяцев и 9 месяцев. Выживаемость без прогрессирования составила 83 и 74% соответственно. Последующий анализ, основанный на CheckMate-040, сравнивал ЧОО и выживаемость между общей популяцией, получившей намерение лечиться (ITT), и азиатской когортой.Было высказано предположение, что ниволумаб показал сходный mOS и управляемый профиль безопасности как в популяции ITT, так и у азиатских пациентов [126].

Эффективность другого моноклонального антитела против PD-1, пембролизумаба, оценивали в фазе II открытого исследования (KEYNOTE-224). В этом исследовании было доказано, что пембролизумаб эффективен и хорошо переносится пациентами, принимавшими сорафениб и имеющими запущенную стадию ГЦК, а уровень экспрессии PD-L1 может выступать в качестве полезного прогностического биомаркера при выборе заинтересованных пациентов с ГЦК.В общей сложности 104 пациента, включенных в это исследование, имели 8-месячную медианную продолжительность ответа (mDOR), а среднее время до ответа составляло 2 месяца [127].

Кроме того, продолжается еще одно рандомизированное клиническое испытание фазы 3 монотерапии ниволумабом по сравнению с сорафенибом в условиях первой линии (NCT02576509). Кроме того, также изучаются комбинированные методы лечения неоперабельного ГЦК антителом против PD-L1 (Дювалумаб) с антителом против CTL4-4 (Тремелимумаб) (NCT02519348).

Другие опубликованные исследования комбинированной иммунотерапии обнадеживают и действительно открывают новые возможности для лечения ГЦК [128,129,130], однако необходимы дополнительные стратегии для выявления более чувствительных прогностических биомаркеров помимо оси PD-1 / PD-L1, оптимизации выбора лечения и улучшения ГЦК. иммунный ответ пациентов.(Дополнительные данные о прекращенных или продолжающихся клинических исследованиях доступны в Таблице 3 . ).

Таблица 3 Типичные клинические исследования иммунотерапии на основе блокады иммунных контрольных точек (ICB) при ГЦК

Цитотоксический Т-лимфоцитарный белок 4 (CTLA-4)

Цитотоксический Т-лимфоцитарный белок 4 (CTLA-4), ингибирующий корецептор, который является экспрессируется активированными Т-клетками и постоянно присутствует на Treg, обладает большим сродством к конкуренции с CD28 за счет связывания с его лигандами, CD80 и CD86, на антигенпрезентирующих клетках (APC).CTLA-4 играет важную роль в контроле функции Т-клеток CD4 ⁺. При HCC и многих других типах рака CTLA-4 подавляет пролиферацию Т-клеток, которые подверглись распознаванию и дифференцировке TAA [131]. Кроме того, внутри тканей HCC CTLA-4 дополнительно опосредует иммуносупрессию, индуцируя активность Treg и продукцию IDO и IL-10 в DC [75].

Многие клинические испытания антител против CTLA-4 продолжаются. Пилотное клиническое исследование, посвященное противоопухолевым и противовирусным эффектам Тремелимумаба у пациентов с ГЦК и инфекцией ВГС, показало явные признаки противоопухолевой эффективности (NCT01008358).Лечение представляет собой надежный профиль безопасности, так как не возникало связанных с иммунитетом нежелательных явлений. Среднее время до прогрессирования (ВДП) составило 6,48 месяца, а медиана общей выживаемости (ОС) – 8,2 месяца. Частичный ответ составил 17,6%, а уровень контроля над заболеванием – 76,4%. Более того, 36% пациентов с уровнем АФП> 100 нг / мл показали снижение более чем на 50% после терапии тремелимумабом [132]. В другом клиническом исследовании фазы 1, в котором проверяется безопасность и эффективность тремелимумаба с использованием радиочастоты (РЧА) (NCT01853618), медиана ВДП и медиана ОС были соответственно 7.4 месяца (95% ДИ от 4,7 до 19,4 месяцев) и 12,3 месяца (95% ДИ от 9,3 до 15,4 месяцев). 6-недельная биопсия ГЦК показала явное увеличение инфильтрации Т-лимфоцитов CD8 ⁺, демонстрируя, что комбинация Тремелимумаба с РЧА при запущенной ГЦК возможна и приводит к более сильному противоопухолевому иммунитету [133].

Молекула-3, содержащая муциновый домен (Tim-3) и белок гена активации лимфоцитов 3 (LAG-3)

Молекула-3, содержащая муциновый домен (Tim-3), представляет собой трансмембранный белок, который экспрессируется на IFN-γ -секретирующие клетки Th2, NK-клетки и CTL [113].Tim-3 взаимодействует со своим растворимым лигандом галектином-9, а затем негативно регулирует ответы Т-клеток [91]. Экспрессия Tim-3 повышена в Т-клетках, инфильтрирующих хроническую инфекцию HBV [134], а путь Tim-3 / галектин-9 последовательно предсказывает плохой прогноз у пациентов с HBV-ассоциированным HCC [76].

Белок гена активации лимфоцитов 3 (LAG-3), член суперсемейства иммуноглобулинов, который часто связывает молекулы MHC класса II с высоким сродством, подавляет костимуляторные функции Т-клеток [135].Клинически двойная блокада LAG-3 с терапией анти-PD-1 тестируется в испытании фазы I (NCT01968109) (таблица 3 , ).

Иммуносупрессивная роль как Tim-3, так и LAG-3 при хроническом вирусном гепатите и ГЦК была недавно обнаружена. Однако их клиническая ценность требует дальнейшего изучения.

Терапия на основе адоптивного переноса клеток (ACT) при ГЦК

Помимо блокады иммунных контрольных точек (ICB), срочно необходимы другие эффективные иммунотерапевтические варианты лечения ГЦК.В последние годы большое внимание уделяется исследованиям и разработке клеточной иммунотерапии для лечения солидных опухолей. Принятие клеточного переноса (ACT) обеспечивает надежный и более устойчивый противоопухолевый иммунитет при лечении рака. Недавние трансляционные исследования и клинические случаи сообщили об успехе разработанных аутологичных терапевтических средств, перенаправляющих Т-клеточные рецепторы (TCR), в лечении HBV-ассоциированного ГЦК [136, 137], что расширяет иммунотерапевтические подходы и может быть использовано для лечения более широкой популяции пациенты [138].Основываясь на типах клеток, АКТ, используемые в доклинических / клинических исследованиях ГЦК, можно в основном классифицировать как: (1) лечение цитокин-индуцированными клетками-киллерами (CIK) и (2) генетически модифицированные NK-клетки или Т-клетки (CAR-T). ).

CIK-клетки представляют собой смесь Т-лимфоцитов, которые ex vivo размножаются в присутствии цитокинов (таких как IL-1, IL-2, IFN-γ), включая активированные NKT-клетки, CD3 ^– / CD56 ^{+ NK-клетки} и цитотоксические Т-клетки CD3 ⁺ / CD56 ^– [139].Клетки CIK можно получить в большом количестве из мононуклеарных клеток периферической крови (PBMC), и их очень легко культивировать. Что еще более важно, было выяснено, что отсутствие ограничений MHC способствует более сильной противоопухолевой эффективности CIK-клеток по сравнению с традиционными CTL [58, 139]. Предыдущие исследования показали, что клетки CIK предотвращают прогрессирование HCC и эффективно убивают раковые стволовые клетки (CSC) в основном за счет распознавания NKG2d-лигандов [140]. Ретроспективное исследование продемонстрировало значительную корреляцию между большим количеством TIL PD-1 ⁺ и благоприятным исходом в группе HCC, обработанной клетками CIK, что позволило предположить, что TIL PD-1 ⁺ можно использовать для прогнозирования эффективности лечения CIK в послеоперационном периоде. -операционные пациенты с ГЦК [141].Рандомизированное клиническое испытание фазы 3 эффективности и безопасности лечения клетками CIK у 230 пациентов с HCC (NCT00699816) показывает, что для пост-лечебного лечения пациентов с HCC адъювантная иммунотерапия клетками CIK может продлить безрецидивную выживаемость и общую выживаемость (медиана RFS: 44,0 месяца в группе лечения, 30,0 месяцев в контрольной группе). Кроме того, доля пациентов с серьезными нежелательными явлениями существенно не различалась между группами лечения и контрольной группой [142]. Сообщалось о нескольких испытаниях лечения клетками CIK в сочетании с другими методами лечения, такими как РЧА, артериальная химиоэмболизация и эпитопно-импульсные ДК [143,144,145].Доказательства, полученные из растущего объема литературы, подтверждают, что клетки CIK являются очень многообещающей адоптивной иммунотерапией, которую можно использовать для лечения и предотвращения рецидивов ГЦК. Однако небольшая часть пациентов, проходящих стандартную терапию, страдает статусом «иммунной усталости» и не имеет адекватных лейкоцитов [139], что является основным препятствием для лечения клетками CIK, которое необходимо срочно преодолеть. (Текущие клинические испытания на основе CIK доступны в Таблице 4 .)

Таблица 4 Клинические испытания, основанные на CIK и генетически модифицированных Т-клетках, изучаемых для лечения ГЦК

Другая адоптивная клеточная иммунотерапия, в которой используются модифицированные химерными антигенными рецепторами Т-клетки (CAR-T) или генетически модифицированные NK-клетки, была проведена. Показано, что это многообещающая стратегия лечения ГЦК.CAR-T может специфически распознавать ассоциированные с опухолью антигены и эффективно устранять опухолевые клетки без ограничения MHC. Кроме того, можно использовать дополнительные гены для обеспечения устойчивости к подавлению иммунитета [146]. Успешное использование CAR-T-клеток при лечении гематологических злокачественных новообразований включает ACT с использованием CD19-специфических CAR-T-клеток и третьего поколения CD20-специфических CAR с костимулирующими доменами CD28 и 4-1BB. Лечение CAR-T-клетками хорошо переносится и может вызвать большую ремиссию при B-клеточной лимфоме [147, 148] (NCT00
6, NCT00621452), однако, несмотря на это, достижения в терапии CAR-T-клетками против солидных опухолей все еще скромны.При ГЦК недавние исследования показали, что глипикан-3 (GPC-3), онкофетальный протеогликан, закрепленный на клеточной мембране ГЦК, который способствует прогрессированию ГЦК и связан с плохим прогнозом, представляет собой новую прогностическую молекулу терапевтическую мишень в иммунотерапии ГЦК [149] . Предыдущие in vitro и ортотопические модели ксенотрансплантатов экспериментов с ГЦК человека показали, что цитотоксическая активность Т-клеток, перенаправленных на GPC-3, по-видимому, положительно коррелировала с уровнями экспрессии GPC-3 в целевой клетке.Это предполагает, что клетки CAR-T, нацеленные на GPC-3, могут предложить многообещающее иммунотерапевтическое вмешательство в отношении GPC-3 ⁺ HCC [150, 151]. Более того, в настоящее время проводится серия клинических исследований, проведенных для проверки безопасности и эффективности CAR-T-клеток, перенаправленных на GPC-3 при лечении ГЦК (Таблица 4 , ). Аналогичным образом, CAR-модифицированные NK представляют собой недавно появившийся иммунотерапевтический метод лечения ГЦК. Сильные противоопухолевые ответы терапевтических средств на основе GPC-3-специфических NK наблюдались в ксенотрансплантатах HCC как с высокой, так и с низкой экспрессией GPC-3, что расширяет возможности лечения пациентов с GPC-3 ⁺ HCC [152].Другой ген-модифицированный NK-кандидат, NKL-клетки, модифицированные геном интерлейкина-15 (hIL-15) человека (NKL-IL15), как было продемонстрировано, экспрессируют высокие уровни молекул, связанных с цитолизом (TNF-α, IFN-γ, NKp80 и и т.д.), что индуцирует более высокую экспрессию лиганда NKG2D на клетках-мишенях и приводит к повышенной чувствительности HCC к NKs-опосредованному цитолизу [153].

В совокупности генетически модифицированные NK-клетки и лечение на основе CAR-T-клеток открывают новые возможности для иммунотерапии против ГЦК. Тем не менее, до того, как они стали широко использоваться в качестве терапевтических средств в клинике, их клиническая эффективность и токсичность для опухолей, поражающая мишень, по-прежнему требуют дальнейшей оценки в более рандомизированных исследованиях.

Вакцины на неклеточной основе и иммунотерапия на основе онколитических вирусов при ГЦК

С выявлением растущего числа опухолезависимых антигенов (ТАА), и, как следствие, были исследованы и разработаны вакцины, нацеленные на ГЦК ТАА. Ряд опухолевых антигенов, таких как человеческий альфа-фетопротеин (AFP), GPC-3 и теломераза-обратная транскриптаза (hTERT), были идентифицированы как иммунотерапевтические мишени на основе вакцин для HCC [154]. (Таблица 5 . ). Хотя прилагаются все большие усилия для продвижения вакцин на основе TAA, ранние клинические испытания засвидетельствовали смешанную историю успеха и неудачи [155, 156, 157, 160].Первое клиническое испытание вакцины против ГЦК AFP было завершено, и были обнаружены только временные иммунологические ответы, частично из-за ограниченного количества используемых антигенов или недостаточной поддержки CD4 ⁺ хелперных Т-клеток [157, 160, 161]. Вакцина с единственной последовательностью из 16 аминокислот, пептидом, производным от hTERT (GV1001), и связывает несколько молекул HLA класса II, дает небольшую клиническую активность и не обнаруживает абсолютных антиген-специфических CTL-ответов [155]. С другой стороны, частичные клинические данные о вакцинах на основе GPC-3 продемонстрировали, что вакцина может вызывать измеримые противоопухолевые ответы и связана с пролонгированным OS пациентов с HCC [156, 162].

Таблица 5 Несколько репрезентативных клинических испытаний неклеточных вакцин и иммунотерапии на основе онколитического вируса (OV) при ГЦК

Помимо этих классических TAA, другой привлекательной мишенью являются антигены рака яичка (CTA), которые считаются новыми мишени для иммунотерапии ГЦК из-за ограниченных паттернов экспрессии в различных опухолях и нормальных тканях [163]. NY-ESO-1, также известный как CTAG1, является одним из наиболее иммуногенных CTA. В ряде предыдущих исследований сообщалось, что NY-ESO-1 высоко экспрессируется во многих типах солидных опухолей, и в настоящее время разрабатывается ряд стратегий вакцинации, нацеленных на NY-ESO-1 [164, 165, 166].Исследования in vitro показали, что экспрессия NY-ESO-1 связана с плохим исходом опухоли, а ДК, нагруженные пептидом NY-ESO-1, могут стимулировать специфические Т-клеточные ответы против клеток HCC [98, 167]. Это означает, что NY-ESO-1 потенциально может быть ценной молекулой-мишенью для иммунотерапии против HCC. Клинически вакцины против солидных опухолей, экспрессирующих NY-ESO-1 (включая ГЦК), продолжаются (NCT01522820).

Текущие исследования демонстрируют, что ДНК, кодирующая оптимизированный для эпитопов мышиный AFP и опосредованная лентивектором генетическая иммунизация, может индуцировать мощные AFP-специфические ответы CD8 ⁺, вызывая значительный противоопухолевый эффект в модели автохтонной HCC [168].Это может предоставить дополнительные технологии и новые перспективы для дальнейшего максимального использования вакцин, используемых в терапии ГЦК.

Онколитические вирусы (OV) избирательно реплицируются в опухолевых клетках, повреждая их и впоследствии распространяя вирус в опухолевой ткани, не нанося вреда нормальным клеткам. Эта характеристика делает OV эффективной платформой для иммунотерапии рака [169]. Доклинические и клинические исследования подчеркивают естественные и генетически модифицированные вирусы, которые вооружены иммуномодулирующими трансгенами, которые не только вызывают мощный противоопухолевый иммунитет in situ через посредство иммуногенной гибели клеток (ICD) и воспалительного каскада, но также служат векторами, экспрессирующими терапевтические гены для улучшения лечения рака [170, 171].

Что касается OV, используемых в иммунотерапии HCC, предыдущие исследования in vitro и модели ксенотрансплантатов на мышах показали, что широкий спектр терапевтических генов рекомбинантных онколитических аденоассоциированных вирусов (AAV) может оказывать сильное цитопатическое действие на клетки HCC (рис.4 . ). Опухоль-селективный реплицирующийся аденовирус, экспрессирующий IFN-β и ZD55-IFN-β, демонстрирует повышенный уровень экспрессии IFN-β и в 100 раз более высокую противоопухолевую цитотоксичность, чем репликативный аденовирус ONYX-015 [172]. Применение другой модели рекомбинантных AAV, векторов AAV, содержащих обратную транскриптазу теломеразы человека (hTERT) и ген лиганда, индуцирующего апоптоз, связанный с фактором некроза опухоли альфа (TRAIL), а именно AAV-hTERT-TRAIL, нацелены на активность теломеразы в клетках HCC и проявляют специфическую цитотоксичность и апоптоз для подавления роста опухолей ксенотрансплантата HCC [173].Онколитический аденовирус, кодирующий гранулоцитарный макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), Ad5-D24-GMCSF, индуцирует опухолеспецифический и вирусспецифический иммунитет как на модели сингенного хомяка, так и у пациентов. Это говорит о том, что опосредованный онколитическим вирусом противоопухолевый иммунитет может быть многообещающим кандидатом в иммунотерапию для дальнейших клинических испытаний при лечении ГЦК [174].

Рис. 4

Иммунотерапия на основе онколитических вирусов при ГЦК . Онколитические вирусы (OV) избирательно реплицируются в опухолевых клетках и повреждают их, а затем распространяются в опухолевой ткани

В ранних клинических исследованиях онколитический поксвирус JX-594 (также известный как PexaVec) показал устойчивую репликацию вируса, зависимую от онколиза, хорошо переносимый характер , антиваскулярные эффекты и противоопухолевый иммунитет при ГЦК и других солидных опухолях [158, 175, 176].(NCT00629759) (Таблица 5 . ). Другое рандомизированное исследование распространенного ГЦК продемонстрировало онколитические и иммунотерапевтические механизмы действия (МОА), ответы опухоли и дозозависимую выживаемость (высокая доза JX-594 была связана с более длительным ОС) у лиц с ГЦК [159] (NCT00554372).

В целом, OV являются мощным терапевтическим средством для лечения рака, и это многообещающее расширение возможностей иммунотерапии для HCC. Важно отметить, что режимы дозирования OV должны быть лучше определены для его клинического использования, и в этом отношении ожидаются дальнейшие результаты клинических испытаний.

Границы | Генетика тяжелых кожных побочных реакций

Введение

Кожные реакции являются наиболее частыми проявлениями реакций гиперчувствительности к лекарствам, называемыми кожными побочными реакциями на лекарства, и среди тех, которые имеют риск опасной для жизни, классифицируются как тяжелые кожные побочные реакции (SCAR), опосредованные лекарственными Т-лимфоцитами, включая лекарственные сыпь с эозинофилией и системными симптомами (DRESS) / синдромом лекарственной гиперчувствительности (DIHS), синдромом Стивенса – Джонсона (SJS) и токсическим эпидермальным некролизом (TEN).Смертность от SJS / TEN составляет ~ 5–10% при SJS и 30–50% при TEN (1), и наиболее распространенными лекарствами, вызывающими SJS, во всем мире являются антибиотики, противоэпилептические средства, аллопуринол и лекарства от простуды (2–4). . В этой статье мы рассмотрели обновленный молекулярный механизм и чувствительные гены, относящиеся к SCAR.

Иммунные механизмы и клинические проявления тяжелых кожных побочных реакций

SCAR относятся к реакции гиперчувствительности IV типа и представляют собой опосредованные Т-клетками иммунные ответы с различными эффекторными клетками и цитокинами, что приводит к появлению дополнительных подтипов с конкретными клиническими признаками.

SJS / TEN характерен для отслоения кожи и слизистых оболочек, обычно включая слизистые оболочки полости рта, глаз, гениталий или анального канала. Внутренние эпителиальные органы поражаются редко, в основном это касается дыхательных путей и желудочно-кишечного тракта (5). SJS / TEN является одним из репрезентативных SCAR с высокой смертностью и осложнениями, где CD8 + цитотоксические Т-лимфоциты (CTL) играют роль, действуя как эффекторные клетки с естественными клетками-киллерами, вызывая гибель клеток участником перфорина / гранзима B, гранулизина, и / или лиганд Fas-Fas (6).Кроме того, цитокины / хемокины, включая интерлейкин (IL) -6, IL-8, IL-15, CC-хемокиновый рецептор 10, фактор некроза опухоли-α, интерферон-γ и т. Д., Также способствуют этим тяжелым иммунным реакциям (7). . Экспрессия матричной РНК и уровень гранулизина массой 15 кДа были обнаружены намного выше, чем другие, в блистерных клетках SJS / TEN, что позволяет предположить, что он является ключевым медиатором диссеминированного апоптоза кератиноцитов (8).

Другим тяжелым фенотипом SCAR является DRESS, проявляющийся в виде длительной, широко распространенной и инфильтрированной кожной сыпи с поражением внутренних органов и гематологическими аномалиями, чаще всего в виде эозинофилии и атипичных лимфоцитов (9).Иммунный механизм, участвующий в DRESS, – это в основном иммунный ответ Th3. Клетки Th3, участвующие в DRESS, секретируют IL, включая IL-5, IL-4 и IL-13, способствуя выработке иммуноглобулина E и иммуноглобулина G4 и дезактивации макрофагов, что приводит к активации тучных клеток и эозинофилов (6). Также задействованы перфорин / гранзим B, фактор некроза опухоли-α, интерферон-γ, C-C хемокиновый рецептор 4, тимус и регулируемый активацией хемокин (10).

Молекулярный механизм и чувствительные гены, связанные с тяжелыми кожными побочными реакциями

Roujeau et al.впервые сообщили о взаимосвязи между человеческим лейкоцитарным антигеном (HLA) и SJS в 1986 г. (11) и HLA и TEN в 1987 г. (12). Связь HLA и SCAR зависит от лекарственного препарата и этнической принадлежности (13). Специфический HLA является не только генетическим маркером, но также играет важную роль в патогенезе SCAR, представляя лекарственный антиген Т-клеточному рецептору (TCR) и вызывая Т-клеточный иммунный ответ (14).

Недавний прогресс в технологии фармакогеномных исследований показал, что больше генетических факторов риска, связанных со SCAR, не только в генах HLA и других иммунных путях, но также в метаболизме или элиминации лекарств.Генетический подход к исследованиям фармакогеномики для SCAR развился от генотипирования на основе секвенирования с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР), такой как генотипы HLA (15), до более комплексных подходов, включая исследование общегеномных ассоциаций (GWAS) и секвенирование следующего поколения. (NGS), обнаружив взаимосвязь между побочными реакциями на лекарства (ADR) и генотипированием, и обнаружил больше локусов, не относящихся к HLA (15-17).

Генетическая предрасположенность к тяжелым кожным побочным реакциям, вызванным ароматическими противоэпилептическими препаратами

Ароматические противоэпилептические препараты (AED) обычно используются в основном при лечении эпилепсии и невралгии, включая карбамазепин (CBZ), окскарбазепин (OXC), ламотриджин (LTG), фенитоин (PHT) и фенобарбитал (PB).Сильная ассоциация HLA-B ^* 15:02 с CBZ-индуцированным SJS / TEN была впервые обнаружена у китайцев хань (18). Эта связь была также доказана у выходцев из Юго-Восточной Азии, включая тайцев (19), малазийцев (20), индийцев (21).

AED имели одинаковую химическую структуру, ароматическое кольцо и, следовательно, имели один и тот же аллель риска. Восприимчивость HLA-B ^* 15:02 к SJS / TEN, индуцированному AED, также была обнаружена у PHT (22) и OXC (23), вызывая SJS / TEN у ханьцев и жителей Юго-Восточной Азии (24– 26) (таблица 1).

Таблица 1 . Генетические ассоциации со SCAR в разных популяциях.

Используя подход GWAS, наше предыдущее исследование показало, что CYP2C9 ^* 3 был значительно связан с PHT-индуцированными SCAR в ханьском Китае, Японии и Малайзии, и добавление HLA-B * 15: 02 к этому варианту могло повысить чувствительность для превентивного теста (35). В дополнение к HLA-B ^* 15:02, HLA-B ^* 13:01 и HLA-B ^* 51:01 также были обнаружены сильная связь с PHT -индуцированные SCAR у ханьцев, китайцев, тайцев и японцев (37).Другим генетическим вариантом PHT-индуцированных SCAR был HLA-B ^* 15:13, который в основном встречается в Малайзии (24) (таблица 1).

Сообщалось, что аллель HLA-DRB1 ^* 15:01 ассоциирован с AED-индуцированным SJS / TEN у ханьцев (68). Кроме того, HLA-A ^* 33:03, HLA-B ^* 58:01, HLA-B ^* 40:01 и HLA-DRB1 ^* 03:01 Сообщалось также, что аллели связаны с AED-индуцированным SJS / TEN (68, 69).

Между этническими группами имелись различия в генах восприимчивости. Тот же самый чувствительный генотип HLA-B * 15: 02 CBZ-индуцированного SJS / TEN не был обнаружен у жителей Северо-Восточной Азии, таких как японцы и корейцы, но вместо этого был обнаружен HLA-B ^* 15:11 (27, 28, 63). Интересно, что связь между HLA-B * 15: 21 и CBZ-индуцированным SJS была обнаружена у HLA-B ^* 15:02 отрицательного тайского пациента (29). Связь между HLA-B ^* 15:11 и HLA-B ^* 15:21 , членом серотипа HLA-B75, и CBZ-индуцированным SJS / TEN была обнаружена в HLA. -B ^* 15:02 отрицательных пациента с объединенными данными из Юго-Восточной Азии (29) (Таблица 1).

Что касается других AED у жителей Северо-Восточной Азии, было обнаружено, что HLA-B ^* 51:01 связан с PHT- и PB-индуцированным SJS / TEN, а HLA-A ^* 02:07 был обнаружен релевантно для индуцированного PB- и зонисамидом SJS / TEN (36) (таблица 1).

европеоидов также выявили менее актуальные AED и HLA-B ^* 15:02 , вместо этого они обычно обнаруживались с HLA-A ^* 31:01 , и у них развилось платье, вызванное CBZ. (31, 32).Эта взаимосвязь существовала также у китайцев хань и японцев (31, 70), однако у японцев с этим геном были связаны не только DRESS, но и SJS / TEN (70). Другой ген, специфичный для европеоидов, был HLA-B ^* 57:01, и было обнаружено, что он сильно связан с CBZ-индуцированным SJS / TEN у европейцев (30). Ограниченное количество также показало связь с HLA-B ^* 38 и LTG-индуцированным SJS / TEN (34) (Таблица 1).

Генетическая предрасположенность к антибиотикам, вызванная тяжелыми кожными побочными реакциями

Антибиотики являются одними из наиболее широко используемых лекарств, на них приходится от одной пятой до одной трети нежелательных реакций (71, 72).Наиболее частой причиной SCAR, вызванного антибиотиками, являются бета-лактамы; другие включают сульфонамидные антибиотики, фторхинолоны, макролиды, тетрациклины и гликопептиды (71). Прежде всего, ванкомицин вызывает ПЛАТЬЕ. Соответствующий чувствительный ген, обнаруженный у DRESS, вызывающего ванкомицин, был HLA-A ^* 32:01, с сильной ассоциацией у кавказцев (39). Другими возможными генами в качестве фактора риска у европеоидов были HLA-B ^* 38 с индуцированным сульфаметоксазолом SJS / TEN (34) и HLA-B ^* 62 с DRESS, индуцированным пиперациллином / тазобактамом (38), тем не менее, необходимы дальнейшие исследования из-за ограниченного количества (Таблица 1).

Антибиотики, AED и аллопуринол являются наиболее распространенными лекарствами, вызывающими SJS / TEN, в Китае из нашего предыдущего исследования (4). Хотя обнаружение генетической предрасположенности к SCAR, индуцированным антибиотиками, было ограничено, наше недавнее исследование с использованием подхода полногеномного секвенирования (WGS) показало, что HLA-B ^* 13:01 , а не ферменты метаболизма, были сильно связаны с co -тримоксазол-индуцированные SCAR у азиатов, включая китайцев хань, тайцев и малазийцев (17) (таблица 1).

Дапсон в основном используется при лечении проказы, а также может применяться при других дерматологических воспалительных заболеваниях из-за его противоинфекционных и противовоспалительных свойств. Синдром гиперчувствительности к дапсону – это потенциально фатальный побочный эффект дапсона, проявляющийся в виде лихорадки, кожной сыпи, лимфаденопатии и множественных системных поражений. При использовании подхода GWAS чувствительный ген DHS был впервые обнаружен у китайцев хань с HLA-B ^* 13:01 (51), который в основном существует у азиатов.Тот же результат был подтвержден у корейцев (52) и индонезийцев (53). Этот ген также был восприимчивым к ДАПСОН-индуцированным SCAR у тайцев (54), включая DRESS и SJS / TEN (Таблица 1).

Генетическая предрасположенность к реакциям гиперчувствительности, индуцированным антивирусами

Абакавир является нуклеозидным ингибитором обратной транскриптазы и используется в качестве одного из средств комбинированного лечения инфекции вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). Реакции гиперчувствительности, вызванные абакавиром, появляются у ~ 5-8% жителей европеоидной расы (73), которые проявляются в виде лихорадки, сыпи, со стороны желудочно-кишечного тракта и респираторных симптомов в течение первых 6 недель после начала лечения.Эти симптомы неспецифичны; однако, будучи иммунной реакцией замедленного типа, патч-тест может легко помочь выявить реакции гиперчувствительности (73). Соответствующий чувствительный ген HLA-B ^* 57:01 был обнаружен у белого и черного населения (40, 41), особенно у белых (74), а также у испаноязычных (42) и индийских детей (43). Исследование, проведенное в Гонконге, показало 0,5% положительных результатов с HLA-B ^* 57:01 у ВИЧ-инфицированных пациентов ханьских китайцев, что позволяет предположить, что скрининг в этой популяции не нужен (75) (Таблица 1).

Невирапин – это ингибитор нуннуклеозидной обратной транскриптазы (ННИОТ), а также лекарство от ВИЧ-инфекции. Ассоциация чувствительного гена была впервые обнаружена с HLA-DRB1 ^* 01:01 в индуцированном невирапином HSR в Западной Австралии (49). Однако позже было доказано, что этот ген больше связан с гепатотоксичностью, чем cADR у европеоидов (46). Другим чувствительным геном, обнаруженным при гепатотоксичности, вызванной невирапином, были HLA-Cw ^* 08 у японцев (29), HLA-Cw ^* 04 у ханьских китайцев (76) и HLA-DQB1. ^* 05 на Кавказе (46).Оба HLA-Cw ^* 08 и HLA-Cw ^* 04 оказались релевантными для HSR, индуцированного невирапином, и гепатоксичности. Связи между HLA-Cw ^* 08 и HSR были обнаружены на сардинском (47) и японском (29) языках. HLA-Cw ^* 04 обычно обнаруживался в индуцированных невирапином cADR у ханьцев Китая, Таиланда, Испании, Африки и Кавказа, особенно в Африке и Азии (46). CYP2B6 также участвовал из-за влияния на отсроченный плазменный клиренс невирапина (46).Кроме того, HLA-B ^* 35:05 оказался предсказуемым при кожной сыпи, вызванной невирапином, у тайцев (44), тогда как такая же взаимосвязь была обнаружена слабой у ханьцев и кавказцев (46). Помимо HSR, у пациентов, принимавших невирапин, был обнаружен SJS / TEN, связанный с HLA-C ^* 04:01 в Африке (45), а недавно была выявлена связь между генетическими вариациями в CCHCR1 и невирапином. HSR также был обнаружен в тайском языке (77). В обоих исследованиях использовался подход GWAS (таблица 1).

Ралтегравир является ингибитором интегразы, который также используется при лечении ВИЧ-инфекции, и было обнаружено, что HLA-B ^* 53:01 тесно связан с DRESS, вызванным ралтегравиром, у африканцев (50) (таблица 1).

Генетическая предрасположенность к синдрому Стивенса – Джонсона, индуцированному лекарствами от простуды, и токсическому эпидермальному некролизу

Термин «лекарство от простуды» включает нестероидные противовоспалительные препараты и другие многокомпонентные лекарства. Из-за высокой распространенности простуды и использования лекарств от простуды, SJS / TEN развивался после того, как пациенты принимали лекарства от простуды, не является редкостью, и сообщалось, что ряд чувствительных генов связан с SJS / TEN, вызванным лекарствами от простуды, особенно с тяжелые глазные осложнения.Было обнаружено, что ассоциация HLA-A ^* 02:06 и HLA-B ^* 44:03 связана с SJS / TEN, вызванным лекарствами от простуды, у японцев (55), и те же самые чувствительные гены были проверены у пациентов. других популяций, таких как HLA-B ^* 44:03 в Индии и Бразилии и HLA ^* 02:06 в корейском (56). Кроме того, сообщалось, что HLA-C ^* 03:04 также связан с SJS / TEN, вызванным лекарствами от простуды, на корейском языке (57). Кроме того, HLA-A ^* 66:01 и HLA-C ^* 12:03 были обнаружены связанными в бразильском (58) и HLA-B ^* 44:03 и HLA-C ^* 07:01 найдены на тайском (59).Таким образом, HLA-B ^* 44:03 кажется межэтническим восприимчивым геном с сильной ассоциацией у японцев, бразильцев, индийцев и тайцев, тогда как HLA-A ^* 02:06, HLA -B ^* 44:03, толл-подобный рецептор 3 (TLR3), рецептор простагландина-E 3 (PTGER3 ) и IKZF1 с использованием подхода GWAS были идентифицированы как первичная ассоциация с SJS, вызванным лекарствами от простуды / TEN с тяжелым поражением глаз у японцев (55, 60, 61, 78) (таблица 1).

Генетическая предрасположенность к тяжелым кожным побочным реакциям, индуцированным аллопуринолом

Ингибируя ксантиноксидазу, а затем снижая синтез мочевой кислоты, аллопуринол является препаратом первой линии, используемым для лечения гиперурикемии и подагры, а также остается одной из основных причин SCAR.HLA-B ^* 5801 был впервые обнаружен как важный генетический маркер аллопуринол-индуцированных SCAR у китайцев хань (64). Такие же ассоциации были подтверждены у тайцев (62), японцев (63), корейцев (65) и кавказцев (34). Однако фармакогеномные ассоциации варьировались от разных этнических групп: 50–60% у кавказцев и японцев и 80–100% у корейцев, тайцев и ханьцев (79). Другие негенетические факторы также могут вносить вклад в SCAR, вызванные аллопуринолом, особенно нарушение функции почек, сердечно-сосудистые заболевания и более высокие начальные дозы лекарств (80) (таблица 1).

Генетическая предрасположенность к индуцированному метазоламидом синдрому Стивенса – Джонсона и токсическому эпидермальному некролизу

Ингибитор карбоангидразы метазоламид – это лекарство, применяемое для снижения внутриглазного давления, например, у пациентов с глаукомой. Несмотря на низкую частоту, метазоламид потенциально может вызывать SJS / TEN. Сообщалось о сильной ассоциации HLA-B ^* 59:01 и индуцированного метазоламидом SJS / TEN у корейцев и японцев (66), а также у ханьцев (67) (таблица 1).

Теория джекпота и важность специфических Т-клеточных рецепторов для развития тяжелых кожных побочных реакций

Хотя предыдущие исследования доказали связь определенных генотипов HLA с SCAR, положительная прогностическая ценность была в основном низкой (81). Наше предыдущее исследование показало, что CBZ-специфические Т-клетки, экспрессирующие специфический TCR из мононуклеарных клеток периферической крови и вызывающие активацию высвобождения гранулизина в HLA-B ^* 15: 02-позитивные CBZ-индуцированные SJS / TEN, не были обнаружены у CBZ-толерантных людей. или другой связанный с наркотиками SJS / TEN (82).Аналогичным образом, предпочтительное использование вариабельного гена TCRβ и клональная экспансия специфической третьей области, определяющей комплементарность (CDR3), были идентифицированы в блистерных клетках пациентов с индуцированным аллопуринолом SJS / TEN (83). Совсем недавно наше дальнейшее исследование показало, что общедоступный αβTCR был дополнительно идентифицирован из CTL пациентов с CBZ-индуцированным SJS / TEN, с парным клонотипом TCRβ CDR3 «ASSLAGELF» и клонотипом TCRα CDR3 «VFDNTDKLI», которые реагируют на CBZ и его структурные аналоги. своими структурными аналогами и связывают сродство и опосредуют иммунный ответ (84).Важно отметить, что конкретный клонотип CDR3 присутствовал в CTL CBZ-индуцированного SJS / TEN пациентов из разных популяций (китайцев или европейцев) с генотипом HLA-B ^* 1502 или без него. Обнаружение клонотип-специфичных Т-клеток и специфических для лекарств общедоступных TCR у пациентов продемонстрировало важную молекулярную роль общих и ограниченных TCR, которые взаимодействуют со специфическими HLA и лекарствами, для развития SCAR (теория джекпота).

Фармакогеномный тест для предотвращения тяжелых кожных побочных реакций

Бремя развития SCAR было опасным для жизни.Пострадало не только общественное здравоохранение, но и медицинские ресурсы. Команда из Сингапура отметила более высокие лабораторные затраты в резидентуре пациентов с НР (85).

Учитывая уровень смертности и экономическое бремя SCAR, очень потребуется простой и эффективный метод предотвращения SCAR. Поэтому очень полезно разработать сильную корреляцию превентивных генетических тестов для препаратов высокого риска, связанных со SCAR. Путем скрининга соответствующих генов перед использованием чувствительных препаратов-виновников мы должны быть в состоянии предотвратить возникновение SCAR и, как следствие, затраты на их последствия.

Генетическое тестирование HLA-B ^* 15:02 до того, как CBZ был предупрежден Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (FDA) США, Тайваня и аналогичными агентствами других стран (86), а также генетическое тестирование HLA-B ^* 58:01 перед началом приема аллопуринола было предупреждено FDA Тайваня или других азиатских стран (Таблица 1). Рекомендации относительно тестирования генов перед препаратами-виновниками в случае развития SCAR были замечены в различных исследованиях (87). Первый проспективный скрининговый тест был применен к пациентам с ВИЧ-инфекцией, нуждающимся в абакавире, и продемонстрировал значительно меньшую заболеваемость в группе скрининга HLA-B ^* 57:01 (74).Для подтверждения концепции и клинической реализации Тайваньский консорциум SJS провел клиническое испытание по профилактике вызванных CBZ SCAR путем генотипирования ДНК с аллелем HLA-B ^* 15:02 4877 кандидатов до терапии CBZ и не обнаружил SJS / TEN с отрицательные предметы (88). Другим одним из наиболее часто используемых препаратов и причиной SCAR на Тайване был аллопуринол. В проспективный скрининг с HLA-B ^* 58:01 было включено 2926 пациентов до начала приема аллопуринола на Тайване, и результат показал, что ни у одного из отрицательных субъектов не развился SCAR (89).Недавно в проспективном исследовании 1539 пациентов с диагнозом лепра было проведено генотипирование HLA-B ^* 13:01 перед использованием дапсона в Китае, и результат показал, что у не-носителей заболевания SCAR не развились (90) (таблица 1).

Внедрение высокоточного использования противоэпилептической лекарственной терапии путем скрининга аллелей множественного риска, связанных с ароматическими противоэпилептическими препаратами, для предотвращения тяжелых кожных побочных реакций

Обладая аналогичной структурой ароматического кольца, AED первой линии, такие как CBZ, OXC, LTG, PHT и PB, имеют одинаковые аллели риска, предрасполагающие к SCAR.Для рассмотрения эффективности и безопасности клинического выбора ПЭП для принятия решений пациентами с эпилептическими или неврологическими расстройствами важна часть фармакогеномической информации. Следовательно, фармакогеномное панельное тестирование для выявления аллелей множественного риска, связанных со всеми AED, имеет свою клиническую необходимость и потребность; Для клинической реализации и оценки осуществимости и эффективности фармакогеномной панели ПЭП мы разработали панель быстрого тестирования аллелей множественного риска, включая HLA-B ^* 15:02, CYP2C9 ^* 3, HLA-B ^* 13:01, HLA-B ^* 51:01 и HLA-A ^* 31:01, которые сильно связаны с SCAR, вызванными ароматическими AED (таблица 2), для принятия решений перед запуском AED.С 2018 года началось клиническое испытание нескольких медицинских центров на Тайване и в Китае путем набора пациентов, нуждающихся в противоэпилептических препаратах, не принимавших в анамнезе, и проведения панели тестирования с помощью количественной полимеразной цепной реакции (КПЦР). При отказе от соответствующих препаратов с положительными генами восприимчивости, предварительная оценка 231 пациента с отрицательными соответствующими аллелями риска, получавших терапию ароматическими противоэпилептическими препаратами, никаких SCAR не наблюдалось, хотя у пяти пациентов развились более легкие макулопапулезные высыпания или зудящие кожные поражения.

Таблица 2 . Фармакогеномная панель связана с SCAR, связанными с AED, у азиатов.

Выводы

SCAR редки, но опасны для жизни. Обнаружение взаимосвязи с чувствительными генами и лекарствами приводит к клиническому применению профилактики. Проведение скрининга известных релевантных генов перед назначением потенциально виновных лекарств в соответствующих этнических группах было бы эффективным методом предотвращения развития SCAR.

Авторские взносы

S-CY, M-YL, Z-YZ, X-YJ, MH, Y-FZ, C-BC и W-HC написали первоначальный черновик.X-YJ, MH и Y-FZ предоставили ресурсы. S-CY, M-YL, Z-YZ, C-BC и W-HC рассмотрели и отредактировали черновик. C-BC и W-HC разработали концепцию обзора и получили финансирование. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.

Финансирование

Это исследование было поддержано исследовательскими грантами Сямыньского научно-технического бюро, Китай (3502Z20180411), больницы Сямынь Чанг Гунг (3502Z20180411), Министерства науки и технологий, Тайвань (MOST 108-2314-B-182A-006-MY3 согласно C-BC; MOST 103-2321-B-182-001, MOST 104-2314-B-182A-148-MY3, MOST 104-2325-B-182A-006, MOST 105-2325-B-182A-007 , MOST 106-2314-B-182A-037-MY3, MOST 106-2622-B-182A-003-CC2, MOST 107-2622-B-182A-001-CC2, MOST 108-23 14-B-182A- 104-MY3, MOST 108-2320-B-182A-023-MY3, MOST 108-2320-B-182A-024-MY2, MOST 109-2320-B-182A-008 -MY3, MOST-108-2314-B -182A-104 -MY3 и MOST-109-2326-B-182A-001 – W-HC), а также Мемориальный госпиталь Чанг Гунг, Тайвань (CMRPG2H0081, CMRPG2J0221, CMRPG2J0222, NMRPG2J6012, NMRPG2J6013, CIRG13PG2, CIRG1200I, CIRG1200I, CIRG2PG2, CIRG1200I, CIRG1 -BC; CIRPG3I0022, CIRPG3I0023, CIRPG3I0042, CIRPG3I0043, CLRPG3E0036, CLRPG3J0012, CMRPG3I0382, CORPG3J0322, CLRPG2E0053, CMRPG3D0363, CORPG3F0042 ~ 3, NCRPG3G0023, NCRPG3GS023, NMRPG3G6293, NMRPG3J6062, NMRPG3J606 3, NMRPG3K0521 и OMRPG3E0041 по W-HC).

Конфликт интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Список литературы

1. Чунг У.Х., Ван Ч.В., Дао Р.Л. Тяжелые кожные побочные реакции на лекарства. J Dermatol. (2016) 43: 758–66. DOI: 10.1111 / 1346-8138.13430

CrossRef Полный текст | Google Scholar

2. Сунага Й., Куросава М., Очиай Х., Ватанабэ Х., Суэки Х., Азукидзава Х. и др.Общенациональное эпидемиологическое исследование синдрома Стивенса-Джонсона и токсического эпидермального некролиза в Японии, 2016-2018 гг. J Dermatol Sci. (2020) 100: 175–82. DOI: 10.1016 / j.jdermsci.2020.09.009