«Входит ли в трудовой стаж ИП?» – Яндекс.Кью

Добрый день.

Есть два закона, которые напрямую затрагивают вопрос страховой пенсии. Закон «Об обязательном пенсионном страховании в РФ» описывает условия, при соблюдении которых каждый из нас имеет право получать страховую пенсию. Закон «О страховых пенсиях» содержит правила расчета страхового стажа, влияющего на размер пенсии, и правила подтверждения этого стажа. Если у вас есть трудовая книжка, проблем посчитать ваш страховой стаж не возникает, но у ИП нет трудовой книжки.

Согласно закону в страховой стаж идут периоды деятельности, в течение которых уплачивались страховые взносы в ПФР. ИП обязан платить пенсионные взносы за себя, а раз есть такая обязанность, то он ее и выполняет, иначе попадет на штрафы. Следовательно, ИП имеет страховой стаж и право на страховую пенсию. Подтвердить эти периоды можно выпиской из Пенсионного фонда РФ.

Стоит принимать во внимание, что программы учета в ПФР меняются, и стаж может из программы случайно пропасть. Проверить, включен ли ваш стаж, можно через сайт Госуслуг. Кроме того, лучше хранить все документы, подтверждающие оплату страховых взносов за себя.

Если вы работали индивидуально до 1991 года (как кооператор, например, с 1985 года), то справку о пенсионных взносах получаете в архиве.

Обратите внимание, что в стаж входят лишь периоды времени, в которые вы платили страховые взносы. Вы могли работать иначе и не платить взносы, тогда периоды такой деятельности при расчете пенсии никак не учитываются. Есть исключения в виде так называемых нестраховых периодов, которые засчитываются.

Уплата налогов не является уплатой страховых взносов.

ИП может претендовать на пенсию, если он достиг пенсионного возраста и имеет страховой стаж, причем этот стаж в настоящий момент не должен быть менее 10 лет, и этот показатель будет расти до 2025 года. В 2025 году необходимо будет иметь страховой стаж, равный 15 годам. Если все условия выполнены, то ИП имеет право именно на страховую пенсию, а не социальную.

Как считают стаж?

Есть специально утвержденные в 2007 году Минздравсоцразвитием правила подсчета и подтверждения страхового стажа.

Любой гражданин, работающий по трудовому договору, свой стаж подтверждает трудовой книжкой, так как каждый работодатель обязан делать соответствующие записи в этом документе. ИП, являясь работодателем, также ведет трудовые книжки своих сотрудников, однако, он не имеет права вести свою собственную трудовую. Получается, что у ИП нет трудовой книжки, а свой страховой стаж он подтверждает иными документами.

Так, начало деятельности в качестве ИП подтверждается Свидетельством о государственной регистрации ИП, которое выдается налоговой каждому предпринимателю. С 2017 свидетельства о государственной регистрации перестали выдавать, ИП стали получать выписку из ЕГРИП, которая имеет точно такую же юридическую силу.

Ранее выданные свидетельства своей юридической силы не утратили и являются документом, подтверждающим факт начала вашей деятельности в статусе ИП!

Окончание же предпринимательской деятельности подтверждается также документально. Раньше налоговой выдавалось Свидетельство о прекращении физическим лицом деятельности в качестве ИП. В настоящий момент свидетельство не выдается, а бывший ИП на руки получает соответствующий лист записи ЕГРИП и уведомление о снятии с учета физического лица в налоговом органе.

Итак, если есть документы о начале деятельности в статусе ИП и ее завершении, то посчитать стаж не сложно. Он считается в обычном календарном порядке. В расчет идет полные месяцы (30 дней), за которые взносы были выплачены в полном объеме. Если в расчете встречается неполный месяц, и нет возможности выяснить точную дату, то за дату «икс» (нужную) просто берется середина месяца — 15 число. Аналогично считаются и неполные года: если нет возможности точно установить месяц, то принято брать по умолчанию середину года — 1 июля.

И ИП и наемный работник

Если ИП был не только ИП, но и имел официальное место работы, то есть еще и работал по трудовому договору с соответствующей записью в трудовой книжке, то ему придется выбирать самому, по какой деятельности рассчитывать пенсию. То есть страховая пенсия может рассчитываться на основании предпринимательской деятельности, а может и на основании работы по найму. В страховом стаже учитывается лишь один вид деятельности, и выбирает это сам ИП.

Но при расчете размера будущей пенсии у таких ИП учитываются все выплаченные страховые взносы. Безусловно, у этих граждан сумма выплаченных взносов больше, так как страховые взносы за них платил в полном объеме работодатель и они сами. Ни у того, ни у другого по закону нет возможности эти взносы не платить или как-то уменьшить.

Понятие «страховой стаж» пришел на замену трудовому. По сути, это одно и то же, но с 2007 года понятие «трудовой стаж» принято считать устаревшим.

Еще больше полезных материалов для предпринимателей читайте на канале школы бизнеса “Я – предприниматель” в ЯндексДзен https://zen.yandex.ru/sovcom_pro

и на сайте школы “Я – предприниматель” www.sovcom.pro

Трудовой стаж индивидуального предпринимателя. | портал предпринимателей

Индивидуальные предприниматели вносят достаточно весомый вклад в развитие экономики нашей страны. Не смотря на все трудности ведения своего дела, в том числе административного плана, они организуют и развивают малый бизнес, принимая при этом к себе на работу необходимых помощников. И наемные работники ИП, и сами индивидуальные предприниматели обладают правом зачислить время работы в малом бизнесе в свой общий трудовой стаж. Следовательно, при условии перечисления полноценных взносов в ПФР и ФСС, они имеют право и на выплату пенсий при достижении определенного возраста.

 

Пенсия для индивидуального предпринимателя.

Особенности определения стажа у ИП.

Индивидуальные предприниматели не являются юридическими лицами. Это, говоря юридическим языком, физические лица, относящиеся к категории предпринимателей, занимающиеся малым и средним бизнесом. При этом у ИП может быть штат официально оформленных наемных работников, за которых предприниматель обязан производить все необходимые отчисления в ФНС (Федеральную налоговую службу), ПФР (Пенсионный Фонд России) и ФСС (Фонд Социального Страхования).

Не зависимо от того, какую они предпочли систему налогообложения – общую или упрощенную. Фактически ИП, также как и юридические лица, соблюдает и обеспечивает все права своих наемных работников на их будущую пенсию. Сам же индивидуальный предприниматель не подходит под категорию «наемный работник». Также он не может принимать сам себя на работу.

Сочетание всех этих факторов и ограничений определяет особый характер накопления трудового стажа у ИП и начисления им, в последующем, пенсии.

Документы, необходимые для утверждения стажа ИП.

У любого физического лица, выходящего на пенсию, главным, подтверждающим его страховой стаж документом, всегда была и есть трудовая книжка. Она должна быть соответствующе заполнена. В ней должна быть отражена подробная информация о принятии человека на работу, о его увольнении, должны быть перечислены все поощрения и должности. Индивидуальный предприниматель может иметь трудовую книжку, но только в случае если в прошлом он сам являлся наемным работником, оформленным на общих основаниях.

Период деятельности в качестве ИП в трудовую книжку не вносится.

С 2007 года понятие «Трудовой стаж», заменено в нашей стране на понятие «Страховой стаж». Это связанно с изменением порядка уплаты взносов в ФСС. Будущая пенсия стала рассчитываться исходя из суммы уплаченных добровольных страховых взносов. Сам предприниматель обязан делать эти отчисления и за наемных работников, и за себя. Основными документами, подтверждающими страховой стаж физического лица в период деятельности как индивидуальный предприниматель, являются:

 

• «Свидетельство о государственной регистрации прекращения физическим лицом деятельности в качестве индивидуального предпринимателя» Выдается также в ФНС после окончания предпринимательской деятельности, в случае если закрыт расчетный счет и нет никаких долгов перед государственными контролирующими органами.

 

Если деятельность в качестве ИП велась до 1991 года, необходимо получить в архиве справку об уплате всех страховых взносов. В случае сели такая деятельность велась после 1991 года, эти сведения получают в отделении ФСС.

 

Общие условия для получения права на пенсию.

В Российской Федерации существуют определенные условия, при соблюдении которых любой гражданин вправе рассчитывать на начисление пенсии в ПФ РФ. Одно из них – общий страховой (трудовой) стаж физического лица должен превышать пять лет. Если период трудовой деятельности гражданина меньше пяти лет, то рассчитывать на начисление пенсии он не может. Также существует возрастной порог, после которого человек вправе обратиться в ПФР за начислением пенсии. У мужчин это 60 лет, у женщин – 55 лет. Эти условия касаются в той же мере и индивидуальных предпринимателей. Перечислим три условия, при выполнении которых индивидуальный предприниматель получает право на начисление пенсии в ПФР:

 

• Срок общего стажа деятельности должен превышать пять лет.
• Достижение индивидуальным предпринимателем определенного возраста (55 лет – женщины, 60 лет – мужчины).
• Отсутствие задолженности по ежемесячным страховым взносам в ФСС за период деятельности.

 

При этом размер начисленной пенсии зависит именно от суммы уплаченных взносов в ФСС. Уплата взносов в ПФР (пенсионный фонд) не является основным фактором для начисления пенсии в полном объеме. Многие предприниматели не видят большой разницы между уплатой взносов в ПФ и уплатой взносов в ФСС. Укажем основные различия между этими платежами:

 

• Ежемесячные отчисления индивидуального предпринимателя в ПФ являются обязательными. Их сумма и начисления являются величиной постоянной и не зависят от прибыльности или убыточности бизнеса, которым занимается ИП. Это обязательный платеж, контролируемый соответствующими государственными органами.
• Страховые взносы в ФСС начисляются в соответствии с договором о добровольном социальном страховании, заключаемым между ИП и Фондом социального страхования. Эти взносы являются добровольными и позволяют рассчитывать на начисление полноценной пенсии, в зависимости от накопленной за время страхового стажа суммы.

 

Возможности для увеличения будущей пенсии.

Индивидуальные предприниматели, которые заранее обеспокоились своим будущим, рассчитывая на повышенную пенсию, должны правильно планировать свои действия для ее обеспечения. Не последнюю роль здесь играет временной фактор. Чем раньше предприниматель начнет делать повышенные социальные взносы, тем большая сумма накопится к периоду начисления пенсионного содержания.

Также, следует учитывать, что базовая часть пенсии в соответствии с законодательством РФ, может быть увеличена, в случае если у предпринимателя в семье есть нетрудоспособные иждивенцы. Для подтверждения этого, в ФСС необходимо представить определенные документы.

 

P.S. Эта довольно животрепещущая тема, потому что много предпринимателей как предпенсионного, так и пенсионного возраста.Многие вопросы, связанные с пенсией ИП обсуждаются на официальном форуме нашего портала. Предлагаем присоединиться к обсуждениям.

Включается ли в общий трудовой стаж период осуществления физическим лицом деятельности, предусмотренной Указом № 337, если да, то на основании каких документов? | Вопросы-ответы

б) доходы по трудовым договорам (контрактам) от резидентов Парка высоких технологий, Китайско-Белорусского индустриального парка «Индустриальный парк «Великий камень», а также иные доходы, облагаемые по ставке в размере 9 процентов

б) доходы по трудовым договорам (контрактам) от резидентов Парка высоких технологий, Китайско-Белорусского индустриального парка «Великий камень», а также иные доходы, облагаемые по ставке в размере 9 процентов

б) доходы, полученные по трудовым договорам (контрактам) от резидентов ПВТ, Китайско-Белорусского индустриального парка «Великий камень», иные доходы, облагаемые по ставке 9%

б) доходы, полученные по трудовым договорам (контрактам) от резидентов ПВТ, Китайско-Белорусского индустриального парка «Великий камень»

Подтверждение трудового стажа для назначения пенсии

Трудовой (пенсионный, страховой) стаж является важнейшим фактором при назначении пенсии. От его размера зависит право человека на тот или иной вид пенсии, а также сумма пенсионных выплат. Основным документом, подтверждающим стаж работы до 1 января 2004 года, т.е. до вступления в силу Закона Украины «Об общеобязательном государственном пенсионном страховании», является трудовая книжка. С 01.01.2004 стаж для выхода на пенсию называется страховым и его подтверждение осуществляется по данным персонифицированного учета – данным, хранящимся в Пенсионном фонде.

Как доказать наличие стажа без трудовой книжки?

При отсутствии у человека трудовой книжки, а также в тех случаях, когда в ней отсутствуют необходимые записи или содержатся неправильные (неточные) данные о периодах работы, стаж устанавливается на основании других документов, выданных по месту работы, службы, учебы, а также архивными учреждениями. Если письменные доказательства трудовой деятельности не сохранились, подтверждение стажа производится органами Пенсионного фонда на основании свидетельских показаний (Постановление КМУ «Об утверждении Порядка подтверждения имеющегося трудового стажа для назначения пенсий при отсутствии трудовой книжки или соответствующих записей в ней»).

Какие документы могут служить доказательством трудового стажа?

Документальными подтверждениями наличия у лица необходимого пенсионного стажа являются:

• справки предприятия
• выписки из приказов
• лицевые счета и ведомости на выдачу зарплаты
• удостоверения и характеристики с места работы
• трудовые договоры и соглашения с отметками об их выполнении
• другие документы, содержащие сведения о периодах работы

При отсутствии вышеуказанных документов в качестве доказательства рабочего стажа принимаются членские билеты профсоюзов. При этом подтверждаются только те периоды работы, за которые есть отметки про уплату членских взносов.

Особенности подтверждение стажа показаниями свидетелей

При отсутствии документов стаж работы, дающий право на пенсию, устанавливается на основании показаний двух и более свидетелей, которые бы знали заявителя по совместной с ним работе на одном предприятии, учреждении, организации.

Свидетельские показания применяются при невозможности получения документального подтверждения пенсионного стажа в связи с:

• военными действиями, авариями, катастрофами
• стихийными бедствиями и другим чрезвычайными ситуациями
• ликвидацией предприятия, учреждения, организации
• отсутствием архивных данных по другим причинам

Как частному предпринимателю подтвердить стаж?

Основным местом работы физического лица-предпринимателя является осуществляемая им предпринимательская деятельность. Однако, из-за отсутствия нормативного акта, регулирующего порядок осуществления записей в трудовой книжке предпринимателя, она не сможет использоваться в качестве подтверждения стажа.

Документом, подтверждающим ведение бизнеса, основанного на частной собственности (за период до 1 мая 1993 года) является справка из Пенсионного фонда Украины об уплате страховых взносов. Период осуществления физлицом предпринимательской деятельности (кроме предпринимателей на упрощенной системе налогообложения), с 1 июля 2000 года подтверждается справкой из базы данных реестра застрахованных лиц по информации отдела персонифицированного учета. Трудовой стаж предпринимателей на упрощенной системе налогообложения до 1 января 2004 подтверждается:

• специальным торговым патентом
• справкой об уплате страховых взносов
• свидетельством об уплате единого налога (ЕН)
• патентом об уплате фиксированного размера подоходного налога

С 01.01.2004 предпринимательская деятельность зачисляется в трудовой стаж на основании справки из базы данных реестра застрахованных лиц по информации отдела персонифицированного учета.

Как зачислить воинскую службу в пенсионный стаж?

В соответствии со статьей 8 Закона Украины «О социальной и правовой защите военнослужащих и членов их семей» время пребывания граждан Украины на военной службе засчитывается в их страховой стаж, стаж работы, стаж работы по специальности, а также в стаж государственной службы. Для подтверждения воинской службы, а также службы в гражданской обороне, Госспецсвязи, органах госбезопасности, разведывательных органах принимаются:

• военные билеты
• справки архивных и военно-лечебных учреждений
• справки военных комиссариатов, воинских частей и учреждений системы Минобороны, МВД, МЧС, Мининфраструктуры, СБУ, Службы внешней разведки, ДПС, Управления государственной охраны, Госспецсвязи, Госпогранслужбы, ГПтС, ДСНС

Военная служба в составе действующей армии в период боевых действий, в том числе при выполнении интернационального долга, засчитывается в трудовой стаж на основании справок военных комиссариатов, выдаваемых в порядке, определяемом Минобороны. Для подтверждения службы в органах внутренних дел, Нацполиции принимаются справки, выдаваемые согласно порядку МВД.

Подтверждение периода временной нетрудоспособности

Согласно пункта 9 Постановления Кабинета Министров Украины № 637 от 12.08.1993 года «Об утверждении Порядка подтверждения имеющегося трудового стажа для назначения пенсий при отсутствии трудовой книжки или соответствующих записей в ней» продолжительность периода временной нетрудоспособности, начавшейся во время работы, устанавливается на основании справок, выданных по месту службы.

Чем подтверждается период учебы при расчёте пенсионного стажа?

Период получения образования также может быть учтен при подсчете страхового стажа при назначении пенсии. В качестве подтверждения срока обучения в ВУЗах, профтехучилищах, заведениях повышения квалификации и переподготовки, в аспирантуре, докторантуре и клинической ординатуре принимаются:

• дипломы, свидетельства
• справки и удостоверения
• сохранившиеся архивные данные

Как подтвердить и включить в стаж период творческой деятельности?

Документальным подтверждением времени творческой деятельности членов творческих союзов и других творческих работников, не являющихся членами творческих союзов, являются справки об уплате страховых взносов в ПФ. Стаж творческой деятельности, полученный до 1 апреля 1992 года членами Союза писателей, Союза художников, Союза композиторов, Союза кинематографистов, Союза театральных деятелей, а также других творческих работников, не являющихся членами творческих союзов Украины, но объединенных профкомитетами, подтверждается справками или выписками из постановлений секретариатов правлений творческих союзов об установлении творческого стажа.

Уход за инвалидом или престарелым пенсионером

Продолжительность ухода за инвалидом 1-ой группы, ребенком-инвалидом (до 16 лет), а также больным или престарелым пенсионером, который по заключению врачей требует постоянного ухода, устанавливается на основании:

• акта обследования фактических условий ухода, который составляется органами Пенсионного фонда на основании сведений жилищно-эксплуатационных организаций по месту жительства, опроса лиц, за которыми осуществляется уход, и их соседей
• документов, которые подтверждают инвалидность (выписка из акта осмотра медико-социальной экспертной комиссии, медицинские заключения, пенсионное удостоверение, удостоверение получателя помощи или справка органов соцзащиты, ПФ и т. д.)
• документов, удостоверяющих возраст (свидетельство о рождении, паспорт, справка жилищно-эксплуатационных или других организаций по месту прописки)

Документальное подтверждение периода ухода за детьми для увеличения пенсионного стажа

Процедура увеличения пенсионного стажа за счет включения в него периода по уходу за малолетним ребенком основана на наличии у неработающей матери подтверждающих документов:

• свидетельство о рождении ребенка или паспорт
• свидетельство о смерти (если ребенок умер)
• документ о том, что до достижения ребенком 3 лет мать не работала (выписка из трудовой книжки, сведения об отсутствии предпринимательской деятельности, справка из ПФ)

Страховой стаж при расчете пенсии может быть увеличен за счет добавления срока по уходу за ребенком, пострадавшим в следствии Чернобыльской катастрофы до достижения им 12-летнего возраста.

Основанием для добавления этого промежутка времени в трудовой стаж является:

• свидетельство о рождении ребенка или его паспорт (св-во о смерти)
• удостоверение ребенка, пострадавшего вследствие аварии на ЧАЭС
• документ о том, что до достижения ребенком 12 лет один из родителей не работал
• заявление о том, что никто из родителей не воспользовался «чернобыльской» льготой по пункту 13 статьи 30 ЗУ «О статусе и социальной защите граждан, пострадавших вследствие Чернобыльской катастрофы»

Трудовой стаж осужденных за время отбывания наказания

Срок содержания под стражей, период отбывания наказания в местах лишения свободы и время пребывания на принудительном лечении подтверждается справками МВД и засчитывается в пенсионный (страховой) стаж при наличии:

• документов о реабилитации
• справки суда о принятии оправдательного приговора
• справки суда, прокуратуры, досудебного следствия о закрытии уголовного производства

Работа заключенных подтверждается справкой МВД и справкой об уплате страховых взносов в ПФ.

Подтверждение стажа работы для жен офицеров

В соответствии с законодательством Украины период проживания жен офицеров, прапорщиков, мичманов и военнослужащих-сверхсрочников с мужьями в местностях, где отсутствовала возможность их трудоустройства по специальности, может быть включен в страховой стаж при оформлении пенсии. Основанием для этого служат справки, выданные командирами воинских частей, военно-учебных заведений, предприятий, учреждений и организаций в порядке, определяемом Минобороны.

Как подтвердить стаж лицам, работающим за границей?

Стаж работы граждан Украины за рубежом подтверждается документами, легализованными в соответствии с законодательством. Исключение составляет работа на территории бывшего СССР и государств, с которыми у Советского Союза были заключены соглашения о социальном обеспечении, до заключения соответствующих двусторонних соглашений с Украиной.

Идет ли трудовой стаж у ИП и как он влияет на будущую пенсию

Не все люди, занимающиеся предпринимательской деятельностью, задумываются о будущей пенсии. Пенсионное обеспечение в компетенции государственных органов. Чтобы назначить гражданину компенсацию утраченного заработка (пенсию), учитывается продолжительность стажа и количество выплат, совершённых в Пенсионный Фонд РФ. Наличие трудового стажа у ИП влияет на пенсию.

Содержимое страницы

Законодательные основы

Согласно положениям Трудового кодекса РФ, каждый российский гражданин вправе рассчитывать на пенсионное обеспечение по достижению установленного возраста. Индивидуальные предприниматели не являются исключением.

Правомерное ведение предпринимательской деятельности с уплатой страховых взносов в Фонд социального страхования позволяет учитывать этот период  для расчёта трудового стажа. Когда гражданин собирается заниматься предпринимательством, он проходит регистрацию в Федеральной налоговой службе. В ходе ведения бизнеса человек обязан платить взносы в ФСС и ПФ РФ согласно требованиям Налогового кодекса РФ.

Важно! Производимые отчисления становятся основаниями для учёта предпринимательской деятельности при формировании стажа.

Правила определения выслуги предпринимателя для начисления пенсии регламентируют следующие нормативные акты:

1. Федеральный закон № 129 «О госрегистрации юридических лиц и индивидуальных предпринимателей». В нём описан перечень документов и порядок регистрации в фондах социального страхования.
2. Федеральный закон «О трудовых пенсиях» с изменениями от 2017 года, где определены правила расчёта и условия для включения стажа предпринимателя в трудовую деятельность.
3. Федеральный закон № 212 (статья 16). Изложены условия для формирования суммы обязательного страхового взноса.

Размер взноса, вносимого в ФСС, оказывает влияние на величину пенсионных выплат для граждан.

Условия получения стажа ИП

С 2007 года трудовой стаж именуют страховым. Период деятельности в качестве ИП будет входить в стаж для пенсии при соблюдении ряда условий:

1. Физическое лицо официально зарегистрировано в ФНС как индивидуальный предприниматель.
2. Гражданин регулярно уплачивал вносы в Фонд социального страхования.
3. Человек вёл деятельность в качестве ИП не меньше 5 лет.
4. Достижение пенсионного возраста.

Важно! Если период коммерческой деятельности у предпринимателя менее установленного порога, гражданин сможет рассчитывать лишь на социальную пенсию.

Когда ИП не осуществляется и не уплачиваются взносы, этот период не засчитывают в страховой. Чтобы избежать такой ситуации, необходимо платить взносы в сумме, не ниже установленной законом даже при отсутствии доходов. В выслугу включают время трудовой деятельности как наёмного работника, если работодатель делал отчисления в ФСС.

Лицо, занимающееся предпринимательством, не вправе заводить трудовую книжку и производить в ней отметки. Пакет документов, свидетельствующий о страховом стаже, определяется системой налогообложения, применяемой к предпринимателю.

Подтверждение стажа

Граждане, трудящиеся в качестве наёмных работников, с помощью трудовой книжки подтверждают этот факт. Когда лицо, ведущее бизнес, нанимает служащих, он становится работодателем и заводит на работников книжки.

Так как ИП не имеет права вносить записи в собственную трудовую книжку, выслугу предпринимателя подтверждают иным образом. При занятии предпринимательством начинается период работы. При заключении договора с Фондом социального страхования и выплате взносов начинается страховой стаж.

Для подтверждения отработанных лет ИП используется свидетельство о государственной регистрации в качестве индивидуального предпринимателя и свидетельство о прекращении данной деятельности. Иногда случается, что человек прерывает работу ввиду различных жизненных обстоятельств. Некоторые из них засчитываются в трудовую деятельность и дают право на получение повышенных пенсионных выплат.

К таким ситуациям законодательство относит:

1. Прерывание работы ввиду рождения ребёнка.
2. Временное прекращение трудовой деятельности из-за болезни ребёнка.
3. Призыв на военную службу.
4. Служба в системе исполнения наказаний, МЧС.
5. Лишение свободы.

Последний пункт имеет значение, когда осуждённый трудился в местах лишения свободы и получал заработную плату.

Предпринимателю засчитают трудовую деятельность, если он представит следующие бумаги:

1. Военный билет.
2. Свидетельство о рождении ребёнка.
3. Справку из архива.
4. Трудовую книжку.
5. Справку из мест лишения свободы.

Для лиц, занимающихся предпринимательством, право на получение пенсионного пособия возникает на тех же началах, что и для граждан, трудящихся на предприятиях. Возраст выхода на пенсию в Российской Федерации составляет 60 лет для мужчин и 55 лет для женщин.

Мнение эксперта

Юрист Консультант

Бесплатно помогу и отвечу на ваши вопросы

Задать вопрос

Данная статья рассказывает о типовых способах решения юридических вопросов, но каждый случай индивидуален. Если вы хотите узнать, как решить именно Вашу проблему – обращайтесь к нашему консультанту совершенно БЕСПЛАТНО!

Для подтверждения стажа индивидуального предпринимателя гражданин должен совершить следующие действия:

1. Обратиться в Пенсионный Фонд РФ по месту прописки. Заявление на оформление и расчёт пенсионных выплат подают не раньше, чем за месяц до наступления возраста выхода на пенсию.
2. Передать в ПФ РФ документацию, удостоверяющую личность и все данные относительно работы по найму и предпринимательству за весь период жизни.

В Пенсионный Фонд необходимо предъявить и ряд других документов:

1. Индивидуальный номер налогоплательщика.
2. Свидетельство о госрегистрации в качестве предпринимателя.
3. Свидетельство о завершении ИП, если деятельность официально не ведётся.
4. Свидетельство о применении ЕНВД или справку об уплате УСН в случае работы предпринимателя по упрощённой схеме налогообложения.
5. Справку из Фонда социального страхования, подтверждающую оплату обязательных взносов во время ведения предпринимательства.

Если лицо занималось ИП до 1 января 1991 года, потребуются бумаги из государственного архива или финансовых органов для удостоверения факта уплаты взносов, положенных в тот период.

Точный перечень документов лучше узнать в местном Пенсионном Фонде, так как он может отличаться.

Важно! Предпринимательство не нужно подтверждать специальными отметками в трудовой книжке. Её предъявляют при расчёте пенсии в случае внесения сведений о коммерческой деятельности, входящей в общий период.

Порядок расчёта стажа и пенсии для ИП

Стаж по предпринимательству считается без учёта дополнительных коэффициентов. Обязательное условие – регулярные отчисления в ФСС. Промежутки, в которые не было взносов, не засчитываются.

Размер пособия от государства будет несколько увеличен при следующих обстоятельствах:

1. Отпуск по уходу за ребёнком при условии отчисления взносов в ФСС.
2. Служба в государственных или муниципальных органах. В качестве подтверждения получают справку о выплатах в этот период.
3. Работа в Государственной Думе РФ или в Совете Федерации.
4. Прохождение военной службы.

Размер будущей пенсии рассчитывают поэтапно. Сначала определяют индивидуальный коэффициент. Его можно посчитать по формуле: ИПК = (Свз : Соб) x 10.

Пояснения:

1. Свз – сделанные предпринимателем отчисления на формирование страховой части пенсии. Их размер (10% или 16%) зависит от того, производились ли вносы на формирование накопительной части.
2. Соб – страховая часть, образованная за счёт страховых взносов. При её расчёте берут максимальную величину, которая ежегодно меняется. Её значение выясняют в Пенсионном Фонде.

Пенсионное пособие гражданина, занимающегося предпринимательством, рассчитывают по формуле: Сп = Ипк x Сб x Пк + Фв x Пк.

Расшифровка:

1. Ипк – индивидуальный пенсионный коэффициент.
2. Сб – стоимость единицы балла, которая ежегодно меняется.
3. Пк – премиальный коэффициент. Его применяют, когда ИП обратился за начислением пенсионного пособия позднее достижения положенного возраста.
4. Фв – фиксированный платёж, установленный государством. Выплата рассматривается как переменная величина.

Когда речь идёт о северных регионах, трудовой стаж рассчитывается по особым правилам. Возраст выхода на пенсию для мужчин составляет 55 лет, для женщин – 50 лет. Они должны отработать на севере не меньше 15 – 20 лет. Чтобы предпринимателю, работавшему в северном регионе Российской Федерации, зачислили его коммерческую деятельность в «северный» стаж, нужно кроме взносов в ФСС представить другие доказательства:

1. Договор об аренде помещения.
2. Выписки из налогового органа о доходах и расходах в северных регионах РФ.
3. Договоры с подрядными организациями и т. п.

Подтверждающие документы зависят от характера осуществляемой коммерческой деятельности.

При расчёте страхового стажа для ИП во внимание принимают период трудовой деятельности в качестве индивидуального предпринимателя. Главным документом, служащим основанием для учёта данного периода, является справка, подтверждающая отчисления в фонды Пенсионного и Социального страхования. Срок работы по ИП должен быть не менее 5 лет. По достижению установленного законодательством возраста гражданин, занимающийся коммерцией, имеет право на получение выплат из Пенсионного фонда.

вакансий | Бакстер

Карьера, которая имеет значение.

Мы стремимся обеспечить увлекательный и полезный опыт работы, который отражает страсть, которую наши сотрудники привносят в нашу миссию по спасению и поддержанию жизней.

Наша компания поддерживает разнообразную и инклюзивную культуру, в которой наших сотрудников поощряют учиться, расти и внедрять инновации, принося при этом значительный вклад миллионам людей во всем мире.Вдохновленные нашей миссией, мы продолжаем формировать медицину, совершенствуя продукты первой необходимости, которые расширяют доступ к медицинской помощи, улучшают качество медицинской помощи и повышают удовлетворенность пациентов и поставщиков медицинских услуг.

Мы нанимаем ряд талантливых и целеустремленных людей с различными навыками и опытом, от ученых и исследователей до профессионалов в области производства, инженерии и технологий, права, маркетинга и продаж, среди прочего.

Шанс повлиять на жизни

Наша культура способствует личному и профессиональному росту.Сотрудников поощряют учиться и вводить новшества, принося при этом пользу миллионам людей. Узнайте больше о многих карьерных возможностях в Baxter; исследуйте области карьеры, которые лучше всего соответствуют вашим целям и опыту.

Люди Бакстера

Мы считаем, что Baxter – это больше, чем компания, мы – сообщество преданных своему делу профессионалов, работающих вместе, чтобы решать, внедрять инновации, производить и предлагать лучшие варианты медицинского обслуживания для пациентов по всему миру.Мы представляем разнообразное население более чем в 100 странах, объединенное общей страстью к спасению и поддержанию жизней. Мы приглашаем вас узнать больше о нас через наших сотрудников, которые находятся в авангарде, чтобы изменить ситуацию к лучшему для пациентов во всем мире.

Мы люди Бакстера

Талант и вовлеченность

Привлечение наших сотрудников и вдохновение в наше будущее

Культура инноваций

Наша культура инноваций способствует личному и профессиональному росту.Нашим сотрудникам предлагается расти, находя пути для значимых инноваций, которые имеют значение для миллионов пациентов во всем мире.

Разнообразная рабочая сила

Бакстер считает, что разнообразное и инклюзивное рабочее место может стимулировать инновации, создавать надежные партнерские отношения и способствовать успеху и устойчивости бизнеса. Это мышление формирует основу глобальной стратегии интеграции Baxter, стремления нанимать и удерживать разнообразную рабочую силу, а также быть инклюзивным в нашем взаимодействии со всеми заинтересованными сторонами.

Развитие карьеры

В Baxter мы инвестируем в рост и развитие наших сотрудников и предлагаем комплексные программы, которые развивают лидеров, способствующих инновациям, ориентированным на пациента. Наш подход к карьерному росту основан на философии развития компании, которая подчеркивает, что профессиональная эволюция происходит за счет сочетания опыта работы, взаимоотношений и обучения и является совместной ответственностью сотрудников и их руководителей.

Преимущества

Важнейший компонент видения компании Baxter – быть лучшим местом для работы. В рамках этого обязательства компания Baxter предоставляет своим сотрудникам всестороннюю компенсацию и льготы. Наша глобальная философия тотального вознаграждения заключается в обеспечении конкурентоспособной на рынке оплаты труда при поощрении сотрудников за индивидуальные и деловые успехи.

Защитите себя от кражи личных данных

Имейте в виду, что мы обнаружили случаи мошенничества, когда лица, выдававшие себя за сотрудников компании Baxter, рекрутеров или других агентов, пытались взаимодействовать с соискателями для кражи личной информации.Эти неавторизованные стороны могут использовать имя и логотип Baxter для публикации вакансий, общения с соискателями через мгновенные сообщения или чаты или даже для распространения предложений с помощью текстовых сообщений.

В Baxter мы не запрашиваем личную финансовую информацию во время телефонных, личных или видео-собеседований, а также не делаем предложения о работе без прохождения тщательного процесса приема на работу. Мы также не запрашиваем плату за рассмотрение вакансии. Федеральная торговая комиссия, агентство США по защите прав потребителей, опубликовала ресурсы для выявления мошенничества с вакансиями.Если у вас есть опасения, связанные с этим, рассмотрите следующие действия: 1) подайте заявление в местное отделение полиции; 2) подать жалобу в Центр рассмотрения жалоб на Интернет-преступления; и / или 3) подать жалобу в Федеральную торговую комиссию США.

Равные возможности трудоустройства

Насколько важен опыт работы при поступлении на степень MBA? (2019)

Поделитесь этим сообщением

При составлении заявки на получение степени MBA часть, посвященная вашему опыту работы, может сбивать с толку.С расплывчатыми инструкциями и объяснениями того, что важно, вы чувствуете, что вам достаточно? Это «правильный» вид? Не знаете, что нужно включить? Это похоже на испытание, к которому тебя никто не подготовил?

Эта статья призвана ответить на как можно больше вопросов о процессе.

Какой опыт работы требуется для получения степени MBA?

Сдавали ли вы раньше GMAT?

Обязателен ли опыт работы для получения степени MBA?

Вопрос, который задают чаще других, похоже, заключается в том, является ли опыт работы обязательным.

Короткий простой ответ – нет. Отсутствие опыта работы не повлияет на вашу способность получить степень MBA. В свое время отсутствие опыта работы означало бы, что вас отвергнут, однако изменения и реформация предоставили варианты и программы для студентов, которые хотят сразу перейти от получения степени бакалавра к поступлению на MBA.

Существует широкий спектр программ с требованиями от без опыта работы до трех с лишним лет. Вам нужно найти то, что работает для вас и ваших целей.В конце концов, вы будете получать только одну степень MBA в своей жизни. Поэтому вам следует не спешить с получением степени MBA, а лучше подготовиться к этому увлекательному путешествию.

Не торопитесь, изучите все варианты, доступные вам, и даже подумайте о возможностях, не связанных с MBA.

Смогу ли я заработать больше денег, если у меня будет опыт работы?

Перспективные студенты часто спрашивают, могут ли они заработать столько же с MS, MEM или MSc, сколько с MBA. Ответ на это – да, но условное «да».«Потенциал заработка сопоставим, если школа, которую вы посещаете, является« лучшим университетом ».

Возможности для рассмотрения без MBA, такие как программа в MEM, MS Finance или бухгалтерский учет, могут быть неоценимы для будущих руководящих должностей. Таким образом, варианты без MBA могут быть использованы как ступеньки для получения опыта до получения MBA. Такие программы, как MSc in Management, приобретаемые в лучших школах, таких как HEC Paris, Manchester Business School, Oxford, LBS, ESADE и LSE, являются надежными предшественниками MBA.

Для тех, кто уверен, что они готовы получить степень MBA, вы можете выбрать несколько школ в Индии и за ее пределами.

Индийская бизнес-школа, которая позволяет подавать документы с приемлемым уровнем GMAT 690 и без опыта работы, – это SP Jain – Mumbai. Школа предлагает 2-летнюю программу, разработанную, чтобы дать вам необходимый опыт. Еще одна двухлетняя программа, которая дает вам инструменты, необходимые для получения степени MBA, проходит через лучшую итальянскую бизнес-школу MISB от SDA Bocconi, которая предлагает «курс Мумбаи». Во время программы студенты проводят первый год в Мумбаи, а на втором году студенты учатся в кампусе в Италии.

Программы, предлагаемые исключительно за пределами Индии, также многочисленны и инновационны. Мы рассмотрим три такие уникальные возможности для студентов, которые могут подать заявку и быть принятыми на программу 2 + 2 . Чтобы получить квалификацию, вы должны быть на третьем курсе бакалавриата. После зачисления вы будете получать наставничество на протяжении оставшейся части вашего курса и работать в течение двух лет, приобретая опыт под руководством профессора колледжа, который вас наставляет. По истечении этих двух лет вы присоединяетесь к классу MBA по месту жительства.Университеты, предлагающие программу 2 + 2, – это Гарвард, SUNY Buffalo и Стэнфорд.

В дополнение к этим программам в Йельском университете существует программа «Серебряный ученый» , которая предлагает комплексный путь к получению степени MBA. Оксфорд предлагает программу 1 плюс 1, которая включает в себя использование первого года в качестве строительного блока для изучения основ, что позволяет получить ценную информацию до фактической программы MBA. Другие колледжи, предлагающие программу ускоренного или раннего карьерного роста, включают Rutgers, ISB, YLP, Chicago Booth, Carnegie Mellon, Tepper и UIC.

Открытие двери открывает еще больше возможностей – вы можете просто подать заявку на хорошее сочетание программ без MBA и MBA, предназначенных для студентов с опытом работы от 0 до 2 лет.

MBA или MS, Решения – Решения!

Возникает вопрос – какой путь лучше; раннее зачисление, MSc Management, MS, должен ли я оставаться стойким при посещении моей MBA или, возможно, выбрать комбинацию?

Для тех потенциальных соискателей, которые имеют опыт работы, если у вас есть опыт работы 3 года или более, в идеале вам следует напрямую рассмотреть возможность получения степени MBA.

Что составляет опыт работы

Что составляет «опыт работы»? Что включено, а что снижено? Должен ли он быть связан с вашей степенью бакалавра или конкретно с менеджментом?

Эти вопросы заставят человека спать по ночам, волноваться и гадать. Однако ответ так же прост: засчитывается любая должность, на которой вы работаете со степенью бакалавра на полную ставку, независимо от области или должности .Хотя лидерские роли – это плюс, если у вас их нет – это не отрицательно.

Что не считается, так это опыт работы, полученный во время учебы в бакалавриате , стажировки, которые вы прошли в качестве студента бакалавриата, и стажировки. Подчеркнем, что любая работа, волонтерская работа, а также обучение и стажировки не считаются опытом работы, если они были выполнены, когда вы завершали учебу в бакалавриате или работали волонтером. Волонтерская работа также не применяется во время или после бакалавриата.

Если вы выполнили трехлетнюю стажировку частично или полностью после получения степени бакалавра, то часть, которая поступает «после» окончания учебы, учитывается.

Пробелы в вашем опыте приемлемы, однако вам нужно будет указать веские причины того, почему вы не работали или почему вы сменили компанию. Заявление «Я ушел из компании, потому что мне предложили больше в другом месте» не является уважительной причиной. Примером достаточной причины может быть отпуск по беременности и родам или событие, изменившее жизнь, например, переезд в другую страну.При подсчете месяцев или лет опыта с пробелами в истории занятости, общее практическое правило состоит в том, что считается непрерывным «ЕСЛИ» разрыв составляет менее 3 месяцев – что-либо больше, и вам нужно будет дисконтировать эти месяцы.

Если вы в настоящее время безработный, эксперты рекомендуют потенциальным студентам попытаться подать заявление и, надеюсь, получить работу до подачи заявления на программы MBA. Причина этой рекомендации заключается в том, что комитет учитывает ваш «текущий опыт работы» при определении того, какие потенциальные студенты будут приняты, а какие будут отклонены.

Сколько опыта работы – требуется и рекомендуется

После вопроса нужен ли опыт , какие муки студенты, сколько стаж работы ?

Для этого вам нужно будет проверить отдельные школы MBA, которые предлагают интересующие вас программы. Одно из требований, которое вам нужно будет выполнить, – это указать количество историй, которые они укажут.

В некоторых университетах есть годичные программы, в которых строго указывается, сколько опыта работы требуется или количество сокращений.Это направление лучше подходит для студентов с опытом работы более 5 лет, поскольку они ориентированы на более быстрый темп обучения студентов со знаниями, которые приходят с опытом.

В Индии – все университеты IIM (по всем направлениям) имеют обязательные ограничения на обучение, которые варьируются от 5 до 6 лет. Находясь в Великобритании, школы указывают как минимум трехлетний стаж работы. Отрезки строго соблюдаются. Поэтому, если школа говорит, что у вас должен быть 60-месячный стаж работы, а у вас есть 59 месяцев, 3 недели и 2 дня, вы не будете приняты в их программу – они не делают исключений из этого правила.

Есть и хорошие новости – есть школы, которые отказались от «ограничений» и «обязательного» воздействия и теперь «рекомендуют» определенный объем опыта работы. Выбор обучения в Европе, Азии или Австралии позволит вам поступить на программу MBA, даже если у вас не хватит опыта. Эти лучшие школы стараются смотреть на качество наряду с количеством, чтобы решить, должны ли они принять вас или отвергнуть.

Самый каверзный вопрос – Качество

Мы все слышали эту фразу; Качество больше количества

Но что именно составляет качественный опыт работы для кандидатов на получение степени MBA?

Дело не столько в том, где вы работали или в какой области, сколько в том, насколько у вас разносторонний опыт и чем вы выделяетесь по сравнению со своими сверстниками.

Цель комитета – наполнить класс как можно большим количеством точек зрения и разнообразием. Первый взгляд, который они бросают, – это поле соискателя, они не хотят заполнять комнату только инженерами-программистами, поскольку это предлагает только одну точку зрения и никакого разнообразия. Следующий взгляд будет более подробным: график карьеры каждого кандидата сравнивается с его сверстниками. Это означает – придерживаясь стандарта Software Engineers – что ваш опыт работы будет рассмотрен и сравнен с другими кандидатами на соискание Software Engineer.Комитет изучит представленные эссе и LOR, чтобы выбрать лучшего кандидата для каждого места в программе.

Хорошо написанный LOR или эссе становятся активом, в то время как один простой набросок или перечисление может оказаться гибелью и оставить вас в стороне. Качественное эссе покажет, чего вы достигли, и насколько ваш подвиг выделяется по сравнению с другими соискателями.

Если вы печатаете, например; «Я сделал сольный проект за два миллиона долларов».

• С этим предложением наши читатели не узнают, происходит ли это ежедневно или редко.Отсутствие деталей также заставляет читателя задуматься, было ли ваше достижение чем-то особенным?

Если бы вместо этого вы должны были написать; «В компании, в которой я работаю, менее 5% сотрудников работают независимо над проектами, однако мне доверили проект на два миллиона долларов в одиночку из-за моей трудовой этики»

– Это предложение включает в себя читателя и рассказывает о том, что вы сделали, какие достижения заслуживают внимания, и рассказывает о том, как вы выделяетесь из толпы.

Заключение

Суть в том, что комитет, рассматривающий и отбирающий кандидатов, должен ответить на один вопрос: будет ли этот кандидат успешным выпускником?

Итак, независимо от того, есть ли у вас опыт – мало ли он или много – рассматривается, но это не так важно, как то, что ваш опыт сделал для вас и как вы передали значение этого опыта комитету.Кандидат, который потратил время на включение подробностей, показывающих, где и как они преуспели, будет иметь больше шансов получить это конкурирующее место в программе по сравнению с тем, кто имеет большой опыт работы, но не диапазон воздействия.

Вебинар по опыту работы в программе MBA

Дополнительные ресурсы –

Поделиться этим постом

Безопасность | Стеклянная дверь

Мы получаем подозрительную активность от вас или кого-то, кто пользуется вашей интернет-сетью.Подождите, пока мы подтвердим, что вы настоящий человек. Ваш контент появится в ближайшее время. Если вы продолжаете видеть это сообщение, напишите нам чтобы сообщить нам, что у вас возникли проблемы.

Nous aider à garder Glassdoor sécurisée

Nous avons reçu des activités suspectes venant de quelqu’un utilisant votre réseau internet. Подвеска Veuillez Patient que nous vérifions que vous êtes une vraie personne. Вотре содержание apparaîtra bientôt. Si vous continuez à voir ce message, veuillez envoyer un электронная почта à pour nous informer du désagrément.

Unterstützen Sie uns beim Schutz von Glassdoor

Wir haben einige verdächtige Aktivitäten von Ihnen oder von jemandem, der in ihrem Интернет-Netzwerk angemeldet ist, festgestellt. Bitte warten Sie, während wir überprüfen, ob Sie ein Mensch und kein Bot sind. Ihr Inhalt wird в Kürze angezeigt. Wenn Sie weiterhin diese Meldung erhalten, informieren Sie uns darüber bitte по электронной почте: .

We hebben verdachte activiteiten waargenomen op Glassdoor van iemand of iemand die uw internet netwerk deelt.Een momentje geduld totdat, мы выяснили, что u daadwerkelijk een persoon bent. Uw bijdrage zal spoedig te zien zijn. Als u deze melding blijft zien, электронная почта: om ons te laten weten dat uw проблема zich nog steeds voordoet.

Hemos estado detectando actividad sospechosa tuya o de alguien con quien compare tu red de Internet. Эспера mientras verificamos que eres una persona real. Tu contenido se mostrará en breve. Si Continúas recibiendo este mensaje, envía un correo electrónico a para informarnos de que tienes problemas.

Hemos estado percibiendo actividad sospechosa de ti o de alguien con quien compare tu red de Internet. Эспера mientras verificamos que eres una persona real. Tu contenido se mostrará en breve. Si Continúas recibiendo este mensaje, envía un correo electrónico a para hacernos saber que estás teniendo problemas.

Temos Recebido algumas atividades suspeitas de voiceê ou de alguém que esteja usando a mesma rede. Aguarde enquanto confirmamos que Você é Uma Pessoa de Verdade.Сеу контексто апаресера эм бреве. Caso продолжить Recebendo esta mensagem, envie um email para пункт нет informar sobre o проблема.

Abbiamo notato alcune attività sospette da parte tua o di una persona che condivide la tua rete Internet. Attendi mentre verifichiamo Che sei una persona reale. Il tuo contenuto verrà visualizzato a breve. Secontini visualizzare questo messaggio, invia un’e-mail all’indirizzo per informarci del проблема.

Пожалуйста, включите куки и перезагрузите страницу.

Это автоматический процесс. Ваш браузер в ближайшее время перенаправит вас на запрошенный контент.

Подождите до 5 секунд…

Перенаправление…

Заводское обозначение: CF-102 / 6aa81ff3bbb27593.

Уолл-стрит продлевает рекордное ралли благодаря отчету о сильных рабочих местах, Pfizer COVID-19 pill cheer

Трейдеры работают в зале Нью-Йоркской фондовой биржи (NYSE) в Нью-Йорке, США, 20 октября 2021 года. REUTERS / Brendan McDermid

• Pfizer растет после положительных данных о противовирусных препаратах COVID-19
• Количество рабочих мест в октябре снова растет, поскольку воздействие вируса прекращается
• Акции туристических компаний лидируют в более широком росте рынка
• Pinterest растет, поскольку праздничный сезон выглядит ярко
• Индексы выросли: Dow 0.63%, S&P 0,57%, Nasdaq 0,58%

5 ноября (Рейтер) – основные индексы Уолл-стрит достигли рекордных максимумов на широкомасштабном ралли в пятницу, поскольку данные показывают сильный рост рабочих мест в октябре в сочетании с таблеткой Pfizer от COVID-19. обновление, укрепившее мнение об экономическом росте.

Десять из 11 основных секторов S&P выросли, причем три из них прибавили более 1% каждый. Индекс малой капитализации Russell 2000 (.RUT) прибавил 1,6%, также достигнув рекордного пика.

В отчете Министерства труда указано, что У.В прошлом месяце занятость в С. увеличилась больше, чем ожидалось, поскольку за лето число случаев заражения COVID-19 снизилось, хотя нехватка рабочих продолжала стимулировать рост заработной платы, при этом годовая почасовая оплата увеличилась до 4,9% в октябре. подробнее

«Хотя (данные) служат хорошим предзнаменованием для восстановления экономики США, рост прибыли на 4,9% в годовом исчислении действительно подчеркивает опасения по поводу инфляции заработной платы», – сказала Сюзанна Стритер, старший аналитик по инвестициям и рынкам Hargreaves Lansdown.

«Но цифры вряд ли будут достаточно горячими, чтобы сбить Федеральный резерв с курса на постепенное сужение своей программы стимулирования.”

Pfizer Inc (PFE.N) вырос на 7,9% после того, как экспериментальные противовирусные таблетки от COVID-19, разработанные производителем лекарств, снизили на 89% риск развития тяжелого заболевания. [NL1N2RW0N5]

Акции Merck (MRK.N) упали на 9,6%

Акции туристических компаний выросли после заявления Pfizer, индекс S&P 1500 Airlines (.SPCOMAIR) поднялся на 6,5%, а круизные операторы Carnival Corp (CCL.N), Royal Caribbean Cruises (RCL) .N) и Норвежский круиз (NCLH.N) с повышением примерно на 9% каждый.

«Еще рано делать окончательные выводы, но эта (таблетка) выглядит как настоящий поворотный момент для многих отраслей, таких как отдых и транспорт, вы видите, что это отражается на ценах», – сказал Андре Бахос, управляющий директор New Vines Capital LLC. Бернардсвилль, Нью-Джерси.

«Заработок по большей части довольно высокий, многообещающий. Мир не идеален, но в целом цифры хорошие».

Среди движений, ориентированных на прибыль, Expedia (EXPE.O) подскочили на 14,5% после того, как онлайн-туристическое агентство сообщило об оптимистичной выручке в третьем квартале, а Pinterest Inc (PINS.N) выросла на 7,1% на фоне сильного прогноза выручки на четвертый квартал. подробнее

Звездный сезон отчетности за третий квартал в сочетании с радужными прогнозами роста доходов, а также нежеланием центрального банка повышать процентные ставки в последнее время повысили аппетит инвесторов к акциям.

Тем временем президент Джо Байден в пятницу призвал законодателей США, обеспокоенных ростом инфляции, принять законопроекты об инфраструктуре и внутренних расходах, которые в настоящее время находятся на рассмотрении Палаты представителей.подробнее

В 12:03 ET, промышленный индекс Dow Jones (.DJI) вырос на 226,01 пункта, или на 0,63%, до 36350,24, S&P 500 (.SPX) поднялся на 26,88 пункта, или на 0,57%, до 4706,94, а индекс Nasdaq Composite (.IXIC) выросла на 92,12 пункта, или 0,58%, до 16 032,43, впервые поднявшись до отметки 16 000.

Доли так называемых домоседов, таких как Zoom Video Communications (ZM.O) и Netflix Inc (NFLX.O), упали на 6,6% и 1,9% соответственно.

Peloton Interactive Inc (PTON.O) упал на 34,0% после того, как он сократил годовой прогноз продаж до 1 миллиарда долларов. подробнее

Количество проданных выпусков превысило количество подешевевших в соотношении 2,48: 1 на NYSE и 1,44: 1 на Nasdaq.

Индекс S&P зафиксировал 82 новых 52-недельных максимума и два новых минимума, в то время как Nasdaq зафиксировал 282 новых максимума и 58 новых минимумов.

Репортаж Девика Джайна и Бансари Маюра Камдара в Бангалоре; Под редакцией Маджу Самуэль

Наши стандарты: принципы доверия Thomson Reuters.

Золотые наночастицы усиливают действие антител за счет прямой цитотоксичности раковых клеток за счет дифференциальной регуляции фагоцитоза

Дизайн конъюгата золотые частицы-ПЭГ для Cy5-мечения Рамуцирумаба

Рамуцирумаб (Cyramza, Lilly), HS-PEG3500-COOH (Nanosoft), Доксорубицин (Zhejiang Hisun Pharmaceutical Co) закупали у производителей. Гетерофункциональный ПЭГ (раствор α-Меркапто-ω-карбокси ПЭГ, HS-C ₂ H ₄ -CONH-PEG-O-C ₃ H ₆ -COOH, MW.3,5 кДа) связывают с золотыми наностержнями диаметром 9-15 нм и длиной 46-56 нм (Alfa Aesar 46819, AuNR) в 18 MEG DI воде, смешанной с SDS в течение 12 часов в RT. Избыток ПЭГ удаляли центрифугированием, когда ПЭГ определяли количественно с помощью анализа Эллмана, чтобы рассчитать концентрацию, был ли ПЭГ полностью / наполовину связан с наночастицами золота. 200 мкл раствора ПЭГ в 100 мкл фосфатного буфера (0,5 M, pH 7) с 7 мкл 5,5′-дитио-бис (2-нитробензойной) кислоты (DTNB, 5 мг / мл) в фосфатном буфере (0,5 M, pH 7) и измерение оптической плотности при 412 нм через 10 минут реакции.Диализ 10 кДа для удаления ПЭГ по отношению к полученному количеству Au-PEG. Оптимизированное соотношение золотых наностержней к PEG составляет 1 мл: 0,14 мг, так как весь PEG связан с золотыми наностержнями. Более низкое отношение Рамуцирумаба к Alexa Fluor® 647 (Ex: 650 нм, Em: 670 нм), чтобы гарантировать наличие в антителе первичных аминов, свободных от Cy5 (R-NH ₂ ). Рамуцирумаб функционализирован Au-PEG стандартной реакцией сочетания EDC / NHS ⁴⁸ . Золотые наносферы (STREM 95-1547, AuSP) заменили наностержни, чтобы выяснить, влияет ли форма материала на характеристики цитотоксина.Вкратце, 300 мкл Au-PEG активировали 2 мг / мл N-гидроксисульфосукцинимида (сульфо-NHS, Sigma) и 0,5 мг / мл EDC (1-этил-3- (3-диметиламинопропил) карбодиимид, Sigma) с 400 мкл 10 мМ MES (2- (N-морфолино) этансульфоновая кислота, Sigma) в течение 1 ч и очищают диализом. Затем 100 мкл активированного Au-PEG, инкубированного в 30 мкл Ab-Cy5 (1 мг / мл, всего 0,2 нмоль) или 10 мкл DOX (0,1 мг / мл, всего 2 нмоль), и 100 мкл Au-PEG, активированного с 15 мкл Ab -Cy5 (1 мг / мл, всего 0,1 нмоль) и смешанные 5 мкл DOX (0,1 мг / мл, всего 1 нмоль) для синтеза Au-PEG-Ab-DOX, и DOX смешивали непосредственно в системе.Спектр 220–850 нм и ПЭМ подтверждают правильность синтеза Au-PEG, Au-PEG-Ab, Au-PEG-DOX, Au-PEG-Ab-DOX. Золотые наносферы 20 нм (STREM 95–1547) заменили наностержни, чтобы выяснить, влияет ли острый материал на характеристики цитотоксина. Все группы количественно оценивались по одинаковой концентрации Ab (1 мкг / мл в Ab).

Анализ Эллмана

Избыток тиолатных цепей в супернатанте определяли количественно путем интерполяции калибровочной кривой, полученной при взаимодействии 200 мкл раствора ПЭГ в 100 мкл фосфатного буфера (0.5 M, pH 7) с 7 мкл 5,5′-дитио-бис (2-нитробензойной) кислоты (DTNB, 5 мг / мл) в фосфатном буфере (0,5 M, pH 7) и измерение оптической плотности при 412 нм через 10 минут реакции.

Характеристики материалов

УФ-видимый спектр 220–850 нм, ПЭМ, динамическое рассеяние света (DLS) и инфракрасные спектры (ИК) подтверждают, что Au-PEG, Au-PEG-Ab были синтезированы правильно. ТЕМ (Tecnai G-20 spirit BioTwin, FEI, США) использовали для характеристики размера, формы и морфологии наноносителей. После функционализации образцы собирали и трижды промывали PBS.В дальнейшем их фиксировали 2% глутаровым альдегидом при 4 ° C в течение ночи с последующей фиксацией в течение 2 часов 1% тетроксидом осмия. Образцы были обезвожены этанолом, а затем пропитаны и залиты смолой Спурра. Тонкие срезы закрепляли на медных сетках и затем наблюдали на просвечивающем электронном микроскопе. Измерения DLS были выполнены с помощью Malvern Zetasizer. Измерения DLS проводились для воды и гидродинамических диаметров, представленных как средние значения из числового распределения. Поверхностные заряды измерялись при диспергировании наночастиц в деионизированной воде.Ошибки являются стандартными (n = 3). FTIR-анализы проводились с использованием системы NICOLET iN 10 MX. Инфракрасные спектры отражения в микрофурье-пропускании собирали в диапазоне волновых чисел ^-1 от 4000 до 1500 см при разрешении 4 см ^-1 .

Клеточная культура и анализ жизнеспособности клеток

Клетки HUVEC (среда для эндотелиальных клеток, с добавлением 5% фетальной бычьей сыворотки), GES-1 (среда для клеток 1640, Gibco, с добавлением 10% FBS), SNU5 (среда 1640 с 10% FBS) и клетки MKN-45 (среда 1640 с 20% FBS) были приобретены в ATCC.Во-первых, мы создали VEGF-надежную модель клеточного роста в клетке HUEVC, превратив белок VEGF в фактор, стимулирующий активность клеток HUVEC. 9000 клеток засевают во все лунки 96-луночного планшета со средой для эндотелиальных клеток. VEGF добавляли в среду до конечной концентрации 20 нг / мл на следующий день. После 96 часов инкубации клетки голодали с помощью базальной среды для эндотелиальных клеток в течение ночи, рамуцирумаба, разбавленного средой для эндотелиальных клеток с добавлением 5% фетальной бычьей сыворотки до конечной концентрации в диапазоне 10 ^-2 -10 ⁴ мкг / мл и перемешать в лунке в течение 24 часов.Параллельный метод был применен в SNU5. При обработке доксорубицином для SNU5 опухолевые клетки высевали в 96-луночный планшет по 5000 на лунку, базальное изменение сыворотки 1640 предшествовало 10% сыворотке FBS-1640 через 24 часа, Рамуцирумаб разбавляли 5% сывороткой FBS-1640 до конечной концентрации 10 ^-3 -10 ³ мкг / мл и изменение сыворотки предыдущей культуры. Определение МТТ после обработки в течение 24 часов. Клетка MKN45 – еще одна низкодифференцированная клетка карциномы желудка. Анализы 3- (4,5-диметил-2-тиазолил) -2,5-дифенил-2-H-тетразолийбромида (МТТ) оценивают степень ингибирования каждого лекарственного средства.Данные были собраны PerkinElmer Enspire Multiscan Spectrum. Статистика и анализ значимости программ OriginPro 2018 и SPSS 19. Затем мы сравнили токсичность каждого компонента в течение 24 часов, таких как PBS (NC), PEG (1 мкг / мл), Ab (8 мкг / мл), PEG-Ab (8 мкг / мл в Ab), AuSP-PEG. -Ab (8 мкг / мл в Ab), AuSP-DOX (0,3 мкг / мл в DOX), AuSP-Ab-DOX (8 мкг / мл в Ab), AuNR-PEG-Ab (8 мкг / мл в Ab и 0,3 мкг / мл в DOX), AuNR-DOX (0,3 мкг / мл в DOX), AuNR-Ab-DOX (8 мкг / мл в Ab и 0,3 мкг / мл в DOX).

Флуоресцентная визуализация in vitro

Клетки SNU5 культивировали в среде при плотности 10 ⁵ на конфокальную чашку.Рамуцирумаб был помечен Alexa Fluor® 647 (Ex: 650 нм, Em: 670 нм) с последующим синтезом AuNR-PEG-Ab-Cy5 и AuSP-PEG-Ab-Cy5. Все соединения обрабатывали клетки SNU5 в течение 1, 2, 4 часов при конечной концентрации антител 1 мкг / мл. Hoechst 33342 (2 мкг / мл, 200 мкл, Ex: 405 нм, Em: 488 нм) использовали в качестве индикатора ядер в течение 15 мин инкубации при 37 ° C. Наконец, все изображения клеток были получены с помощью конфокального микроскопа Zeiss LSM 710.

Животные и опухоли ксенотрансплантата

Атимные самки голых мышей BALB / cAnNCrl (в возрасте 6 недель) были приобретены у Charles River (Уилмингтон, Массачусетс, США) и содержались в цикле свет-темнота 16: 8 ч при температуре ~ 18–23 ° C при влажности 40–60%.Все процедуры соответствовали требованиям Комитета по изучению животных Пекинского университета и одобрены институциональным комитетом по изучению животных Национального центра нанонауки и технологий. Для получения ксенотрансплантатов у мышей nude клетки SNU5 подвергали трипсинизации и суспендировали в 1 × PBS и вводили подкожно в правую дорсальную сторону верхней задней конечности мышей (1 × 10 ⁷ клеток на мышь).

Флуоресцентная визуализация in vivo

Когда объем опухоли достигал ~ 100 мм ³ в длинном диаметре, AuNR-PEG-Ab (30 мкг Ab), Ab (30 мкг) и 5 ​​× Ab (150 мкг) были удалены с помощью 0.Фильтрующая мембрана 22 мкм и внутривенно вводили каждой мыши. Визуализацию флуоресценции проводили через 2, 4, 8, 12, 24 ч после инъекции, используя прибор PerkinElmer (Уолтем, Массачусетс, США) IVIS с возбуждением при 650 нм и фильтром 680 нм для сбора флуоресцентного излучения Су5. Мышей умерщвляли, основные органы (печень, легкие, селезенка, почки и сердце) и опухоль вскрывали и получали изображения.

Анализ проточной цитометрии

Поглощение клетками Cy5-меченных Ab и других нанопрепаратов исследовали с помощью анализа проточной цитометрии.Клетки инкубировали с Ab в течение 1 мин при комнатной температуре. Затем эти клетки промывали PBS и повторно суспендировали в PBS для анализа. Интенсивность флуоресценции Cy5 (4 канала) измеряли с помощью проточного цитометра (accuri C6, BD, США). Меченные Cy5 Ab (1 мг / мл) разбавляли PBS (1: 500, 1: 1000, 1: 2000, 1: 3000). Клетки HUVEC и SNU5 инкубировали в Ab в течение 1 ч при комнатной температуре. При этом клетки SNU5 инкубировали в Ab, PEG-Ab, AuSP-PEG-Ab и AuNR-PEG-Ab (1 мкг / мл Ab) в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем эти клетки промывали PBS и повторно суспендировали в PBS для анализа.Интенсивность флуоресценции Cy5 (4 канала) измеряли с помощью проточного цитометра (Accuri C6, BD, США) с использованием программного обеспечения CFlowPlus. Гейтинг клеток с помощью FSC и SSC, а также данные о 10 ^{и 4} клетках были собраны и экспортированы в данные .fcs. Затем программное обеспечение FLowJo V10 было использовано для анализа данных .fcs и повторного гейтирования клеток с помощью FSC и SSC, чтобы отсортировать приблизительно 10 ⁴ клеток, проанализировать интенсивность флуоресценции Cy5 клетки по каналу 4.

Для анализа апоптоза клеток использовали клетки SNU-5. покрыли на ночь. Нанопрепараты (NC относится к PBS) разбавляли культуральной средой при той же концентрации, что и при анализе МТТ, и ими обрабатывали клетки в течение 24 часов.Затем клетки собирали трипсинизацией без EDTA, и 10 ⁶ клеток дважды окрашивали аннексином-V-Alexa Fluor 647 / PI в течение 15 минут и анализировали. После отсортировали приблизительно 10 ⁴ клеток с помощью FSC / SSC. Канал 3 и канал 4 выставлялись на картинке. Квадратное стробирование PI и Alexa Fluor647 в соответствии с результатом группы NC. затем мы использовали то же условие для группы Quad gate all group.

Расщепление белков и анализ ЖХ-МС / МС

Образцы клеток SNU5 были добавлены с буфером для лизиса, содержащим 50 мМ трис-HCl (pH 8), 8 М мочевину и 0.2% SDS. Затем их инкубировали с ультразвуковой обработкой на льду в течение 5 минут, а затем центрифугировали при 13000 g в течение 20 минут при 4 ° C. Супернатант переносили в чистую пробирку и определяли концентрацию белка с помощью анализа BCA. Добавить 2 мМ DTT и инкубировать образец при 56 ° C в течение 1,5 часа, после чего добавить достаточное количество йодуксусной кислоты и инкубировать в течение 1,5 часов в защищенном от света месте при комнатной температуре. Затем добавьте 4 объема холодного ацетона к экстракту образца, тщательно встряхните и поместите образец на ночь при -20 ° C.Центрифугируйте и соберите осадок, чтобы дважды промыть его холодным ацетоном. Наконец, растворяют осадок буфером растворения, содержащим 0,1 М бикарбоната триэтиламмония (pH 8,5) и 8 М мочевину. Затем образцы обрабатывали трипсином Gold (Promega) при 37 ° C в течение 20 часов. После расщепления трипсином пептид обессоливали с помощью картриджа C18, затем сушили центрифугированием в вакууме. Пептиды фракционировали с использованием колонки C18 (Waters BEH C18 4,6 × 250 мм, 5 мкм) на ВЭЖХ Rigol L3000 со скоростью 1 мл / мин. Термостат колонки был установлен на 50 ° C.Подвижные фазы A (2% ацетонитрил, pH доведен до 10,0 с помощью гидроксида аммония) и B (98% ацетонитрил, pH доведен до 10,0, используя гидроксид аммония) использовали для создания градиентного элюирования. Градиент растворителя был установлен следующим образом: 3% B, 5 мин; 3–10% B, 0,1 мин; 10–20% B, 11,9 мин; 20–32% B, 11 мин; 32–45% B, 7 мин; 45–80% B, 3 мин; 80% B, 5 мин; 80–5%, 0,1 мин; 5% B, 6,9 мин. Триптические пептиды контролировали при УФ 214 нм. Элюент собирали каждую минуту и ​​затем объединяли до 15 фракций. Образцы сушили в вакууме и восстанавливали в 0.1% (об. / Об.) Муравьиной кислоты (ЖК) в воде для последующих анализов.

Для протеомики использовали систему EASY-nLCTM 1200 UHPLC (ThermoFisher), соединенную с масс-спектрометром Orbitrap Q Exactive HF-X (ThermoFisher). Пептиды восстанавливали в 0,1% FA и вводили в колонку Acclaim PepMap100 C18 Nano-Trap (2 см × 100 мкм, 5 мкм). Пептиды разделяли на аналитической колонке Reprosil-Pur 120 C18-AQ (15 см × 150 мкм, 1,9 мкм), используя 90-минутный линейный градиент от 5 до 100% элюента B (0,1% FA в 80% ACN) в элюенте A. (0.1% FA в H ₂ O) при расходе 600 нл / мин. Градиент растворителя был установлен следующим образом: 5–8% B, 2 мин; 8–35% B, 80 мин; 35–56% B, 2 мин; 56–89% B, 1 мин; 89–100% B, 5 мин. Масс-спектрометр работал в режиме положительной полярности при напряжении распыления 2,3 кВ и температуре капилляров 320 ° C. Полное сканирование МС от 400 до 1500 m / z было получено с разрешением 60000 (при 200 m / z) с целевым значением AGC 3 × 10 ⁶ и максимальным временем инжекции ионов 20 мс. Из полного сканирования MS было выбрано максимальное количество из 35 наиболее распространенных ионов-предшественников для анализа фрагментов столкновительной диссоциации (HCD) с более высокой энергией с разрешением 15000 (при 200 m / z) с мишенью для автоматической регулировки усиления (AGC). значение 1 × 10 ⁵ , максимальное время инжекции ионов 45 мс, нормализованная энергия столкновения 32%, порог интенсивности 8.3 × 10 ³ , а параметр динамического исключения установлен на 60 с. Полученные в результате спектры от каждого прогона анализировались отдельно по базе данных SwissProt_2016_04 с таксономией базы данных [человека] с помощью пакета программного обеспечения MaxQuant (Computational Systems Biochemistry, Martinsried, Германия) (версия 1.5.1.2). Искомые параметры устанавливаются следующим образом: допуск по массе для иона-предшественника составлял 10 ppm, а допуск по массе для иона-продукта составлял 0,02 Да. Допускалось максимум 2 сайта неправильного расщепления. Идентифицированный белок содержит как минимум 1 уникальный пептид.Карбамидометил был указан как фиксированные модификации. Окисление метионина (М) определяли как динамическую модификацию и ацетилирование. Идентифицированные пептиды и белок были сохранены и выполнены с FDR не более 1,0%.

Выделение и секвенирование РНК

Во-первых, деградацию и загрязнение РНК контролировали на 1% агарозных гелях, а чистоту РНК проверяли с помощью спектрофотометра NanoPhotometer® (IMPLEN, CA, USA). Затем целостность РНК оценивали с помощью набора RNA Nano 6000 Assay Kit системы Bioanalyzer 2100 (Agilent Technologies, Калифорния, США).Общее количество 1 мкг РНК на образец из клеток SNU5 индивидуально использовали в качестве исходных материалов. Библиотеки секвенирования были созданы с использованием набора NEBNext® UltraTM RNA Library Prep Kit для Illumina® (NEB, США) в соответствии с рекомендациями производителя, и индексные коды были добавлены к последовательностям атрибутов для каждого образца. мРНК очищали от общей РНК с использованием магнитных шариков, прикрепленных к поли-Т олигонуклеотидам. Фрагментацию проводили с использованием двухвалентных катионов при повышенной температуре в буфере для реакции синтеза первой цепи NEBNext (5X).КДНК первой цепи синтезировали с использованием случайного гексамерного праймера и обратной транскриптазы M-MuLV (РНКазы H). Затем проводили синтез кДНК второй цепи с использованием ДНК-полимеразы I и РНКазы H. Остальные выступы были преобразованы в тупые концы с помощью экзонуклеазной / полимеразной активности. После аденилирования 3 ’концов фрагментов ДНК адаптер NEBNext со структурой петли шпильки лигировали для подготовки к гибридизации. Для отбора фрагментов кДНК предпочтительно длиной 250–300 п.н. фрагменты библиотеки очищали с помощью системы AMPure XP (Beckman Coulter, Беверли, США).После этого использовали 3 мкл фермента USER (NEB, США) с кДНК выбранного размера, лигированной адаптером, при 37 ° C в течение 15 минут, а затем в течение 5 минут при 95 ° C перед ПЦР. ПЦР проводили с использованием ДНК-полимеразы высокой точности phusion, универсальных праймеров для ПЦР и праймера Index (X). Наконец, продукты ПЦР были очищены (система AMPure XP) и качество библиотеки оценено на системе Agilent Bioanalyzer 2100. Кластеризацию образцов с индексным кодом выполняли в системе создания кластеров cBot с использованием TruSeq PE Cluster Kit v3-cBot-HS (Illumia) в соответствии с инструкциями производителя.После создания кластера препараты библиотеки секвенировали на платформе Illumina Novaseq и были сгенерированы считывания парных концов 150 п.н.

Необработанные данные (необработанные чтения) обрабатывались с помощью внутренних сценариев Perl. На этом этапе чистые данные (чистые чтения) были получены путем удаления чтения, содержащего адаптер, чтения, содержащего ploy-N, и чтения низкого качества из необработанных данных. В то же время были рассчитаны чистые данные по содержанию Q20, Q30 и GC. Все последующие анализы были основаны на чистых данных высокого качества.Индекс эталонного генома был построен с использованием Hisat2 v2.1.0, а чистые считывания парных концов были сопоставлены с эталонным геномом с использованием Hisat2 v2.1.0. Counts v1.5.0-p3 использовали для подсчета числа считываний, сопоставленных с каждым геном. Анализ дифференциальной экспрессии двух групп проводили с использованием пакета DESeq2 R (1.16.1). Полученные P-значения были скорректированы с использованием подхода Бенджамини и Хохберга для контроля уровня ложных открытий.

Биоинформатический анализ

Тепловые карты были созданы с использованием Perseus (1.6.2.2) ⁴⁹ . Онтология генов и анализ пути KEGG были выполнены с использованием GeneCodis 3.0 ⁵⁰ . FDR (значение q) использовали для выбора интересных наборов белков и генов.

Анализы терапии in vivo группы NR и SP

Четыре группы самок мышей C57BL / 6 ( n = 5, 6-8-недельный возраст) были подкожно имплантированы клетками SNU5 для терапии. Это исследование соответствовало соответствующим этическим нормам для испытаний и исследований на животных, все протоколы на животных были одобрены Комитетом по уходу и использованию животных Национального центра нанонауки и технологий.Мышей случайным образом разделили на четыре группы. Когда опухоли позволили развиться примерно до 100–200 мм ³ , мышам внутривенно вводили AuNR-PEG-Ab (группа NR), AuSP-PEG-Ab (группа SP), Ab и PBS (100 мкл). в дозе, соответствующей 8 мг / кг Рамуцирумаба ( n = 5). PBS служил контролем. Введение проводилось один раз в неделю с учетом того, что препарат лечили пациенту с ГК один раз в две недели. Размер и вес опухоли регистрировали ежедневно в одно и то же время.Размеры опухолей измеряли штангенциркулем. Объем опухоли рассчитывали по формуле (Д × Ш ² ) / 2. L – самый длинный, а W – самый короткий по диаметру опухоли (мм). Экспериментальные данные были оценены как среднее стандартное отклонение с использованием программного обеспечения Origin для четырех независимых экспериментов. После этого были собраны опухоли и другие органы. Токсичность для опухолей и органов каждой группы определялась H&E. Апоптоз опухолевых клеток также выявляли с помощью анализа TUNEL, срезы тканей депарафинизировали и повышали проницаемость, затем TUNEL-FITC инкубировали клетки в течение 1 ч при 37 ° C и DAPI в течение 10 мин.Десять изображений были получены из трех случайно выбранных срезов каждой опухоли и проанализированы для статистического анализа.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени (ОТ-ПЦР) и вестерн-блоттинг для проверки экспрессии FcγR

Клетки культивировали в среде при плотности 10 ⁷ на чашку. Тотальную РНК экстрагировали с использованием реагента TRIzol (Invitrogen) в соответствии с инструкциями производителя. РНК подвергали обратной транскрипции с использованием набора для синтеза первой цепи (Takara), а затем кДНК подвергали ПЦР в реальном времени с использованием смеси SYBR green (Takara).ПЦР проводили на ABI 7500fast (ABI Life Technologies). Значения Ct, полученные из порогового цикла, были нормализованы с помощью GAPDH, амплифицированного в том же цикле. Используемые праймеры перечислены в дополнительной таблице 2.

Для вестерн-блоттинга клетки промывали PBS и лизировали в буфере для лизиса (Sigma, США) на льду в течение 30 мин. Лизаты клеток собирали центрифугированием при 4 ° C в течение 30 мин, и общий белок измеряли с использованием набора для анализа белка BCA (бицинхониновая кислота) (Beyotime Biotechnology, Китай).В соответствии со стандартными процедурами вестерн-блоттинга белки разделяли с помощью SDS-PAGE и переносили на мембраны из PVDF (поливинилиденфторида) (Merck Millipore, DE). Затем мембраны блокировали в течение 1 часа в 5% обезжиренном молоке в PBST и инкубировали с анти-CD64, разведенными 1: 1000 (EPR4623, abcam, UK) и разбавленными 1: 1000 анти-CD16 (EPR22409-124, abcam, UK). ) антитела и антитела к β-актину (mAbcam 8226, abcam, UK), разведенные 1: 2000, соответственно, в течение ночи при 4 ° C. После трехкратной промывки PBST по 5 мин каждая мембрана инкубировали с изотип-специфическими вторичными антителами, связанными с пероксидазой хрена, в течение 1 ч при комнатной температуре.Иммунные комплексы выявляли с помощью системы визуализации ChemiDoc MP (Bio-Rad, США).

Измерение клеточных ROS

Для оценки клеточных уровней ROS клетки SNU5 высевали из расчета 5 × 10 ⁴ клеток на лунку в 96-луночный планшет в течение 24 часов. затем клетки обрабатывали каждым компонентом с одинаковой концентрацией в анализе МТТ для 24. Все обработанные клетки инкубировали с 20 мкМ DCFDA (Abcam) при 37 ° C и 5% CO2 в течение 30 минут. Интенсивность флуоресценции измеряли с помощью Multi-scan Spectrum.

Статистика и воспроизводимость

Количественные данные представлены как среднее ± стандартное отклонение.Различия между группами сравнивали с использованием непарного двустороннего независимого t-критерия Стьюдента или одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с повторными измерениями, за которым для множественного сравнения использовали апостериорный анализ HSD Тьюки. Собранные данные не были исключены из анализа. Значение p указано либо в тексте рукописи, либо на рисунках и в подписях: * P <0,05, ** P <0,01, *** P <0,001.

Краткое изложение отчета

Дополнительная информация о дизайне исследования доступна в Резюме отчета об исследовании природы, связанном с этой статьей.

Дело DVAC против ИП Велумани: В просьбе о размораживании счетов отказано | Chennai News

CHENNAI: Специальный суд отклонил ходатайство родственника главного обвиняемого в деле DVAC против бывшего министра муниципальной администрации С. П. Велумани о размораживании фиксированных вкладов и банковских счетов, принадлежащих ему и его компании. Заявитель, Б. С. Логанатан, является зятем К. Чандрапракаша (из KCP Infra), одного из тех, кто находится в РПИ DVAC.
Логанатан в своей петиции в специальный суд для рассмотрения дел в соответствии с Законом о предотвращении коррупции сказал, что он был партнером M / S Madras Infra, которая заключает договор на оказание услуг и выполнение работ.И что в сентябре он получил сообщение из своего банка в Коимбатуре о том, что его счет и фиксированные депозиты были заморожены по приказу Управления бдительности и противодействия коррупции (DVAC).
3,9 крор рупий на его сберегательном счете и 65 лакхов на фиксированных вкладах были получены из законных источников, и он не участвовал в деле против министра, сказал Логанатан.
В ответ DVAC проинформировал суд о том, что он расследует, действовал ли заявитель при попустительстве обвиняемым по делу.DVAC провел обыски в резиденциях Велумани и его сотрудников 10 и 11 августа. «Мы попросили Департамент подоходного налога предоставить отчеты, поданные 80 компаниями / физическими лицами / фирмами, которые, как предполагается, были вовлечены, а также банковские счета фирм и частных лиц. связанные с основными обвиняемыми, подлежат тщательной проверке “, – заявил адвокат DVAC.
В течение 2018 и 2021 годов на банковском счете жены заявителя – сестры Чандрапракаша была проведена транзакция на сумму 69,67 крор рупий.Как сказано в сообщении DVAC, банковский счет был открыт только в 2017 году.
«Заявитель принимал заказы на работу от корпорации Ченнаи и Коимбатура без какого-либо предыдущего опыта в этой области. Распределение заказов на работу фирме заявителя и другой фирме, владельцем которой является его жена, находится в стадии расследования», – сообщил DVAC. корт.
Специальный судья Дж. Омпракаш временно отклонил ходатайство. Суд отметил, что, поскольку процедура и способ назначения компании заявителя на конкурс находится в стадии расследования, претензии заявителя не могут быть согласованы.