Ст 12 тк рф: ТК РФ Статья 12. Действие трудового законодательства и иных актов, содержащих нормы трудового права, во времени
ТК РФ Статья 12. Действие трудового законодательства и иных актов, содержащих нормы трудового права, во времени
(в ред. Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)(см. текст в предыдущей редакции)
Путеводитель по кадровым вопросам. Вопросы применения ст. 12 ТК РФ |
– Принятие локальных нормативных актов
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, вступает в силу со дня, указанного в этом законе или ином нормативном правовом акте либо в законе или ином нормативном правовом акте, определяющем порядок введения в действие акта данного вида.
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, либо отдельные их положения прекращают свое действие в связи с:
(в ред. Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)(см. текст в предыдущей редакции)
истечением срока действия;
(в ред.
Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)редакции)
вступлением в силу другого акта равной или высшей юридической силы;
отменой (признанием утратившими силу) данного акта либо отдельных его положений актом равной или высшей юридической силы.
(в ред. Федерального закона от 30.06.2006 N 90-ФЗ)(см. текст в предыдущей редакции)
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, не имеет обратной силы и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие.
Действие закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, распространяется на отношения, возникшие до введения его в действие, лишь в случаях, прямо предусмотренных этим актом.
В отношениях, возникших до введения в действие закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, указанный закон или акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие.
Действие коллективного договора, соглашения во времени определяется их сторонами в соответствии с настоящим Кодексом.
(часть шестая введена Федеральным законом от 30.06.2006 N 90-ФЗ)Локальный нормативный акт вступает в силу со дня его принятия работодателем либо со дня, указанного в этом локальном нормативном акте, и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие. В отношениях, возникших до введения в действие локального нормативного акта, указанный акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие.
(часть седьмая введена Федеральным законом от 30.06.2006 N 90-ФЗ)Локальный нормативный акт либо отдельные его положения прекращают свое действие в связи с:
истечением срока действия;
отменой (признанием утратившими силу) данного локального нормативного акта либо отдельных его положений другим локальным нормативным актом;
вступлением в силу закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, коллективного договора, соглашения (в случае, когда указанные акты устанавливают более высокий уровень гарантий работникам по сравнению с установленным локальным нормативным актом).
Открыть полный текст документа
последние изменения и поправки, судебная практика
СТ 12 ТК РФ.
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, вступает в силу со дня, указанного в этом законе или ином нормативном правовом акте либо в законе или ином нормативном правовом акте, определяющем порядок введения в действие акта данного вида.
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, либо отдельные их положения прекращают свое действие в связи с:
истечением срока действия;
вступлением в силу другого акта равной или высшей юридической силы;
отменой (признанием утратившими силу) данного акта либо отдельных его положений актом равной или высшей юридической силы.
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, не имеет обратной силы и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие.
Действие закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, распространяется на отношения, возникшие до введения его в действие, лишь в случаях, прямо предусмотренных этим актом.
В отношениях, возникших до введения в действие закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, указанный закон или акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие.
Бесплатная юридическая консультация по телефонам:
Действие коллективного договора, соглашения во времени определяется их сторонами в соответствии с настоящим Кодексом.
Локальный нормативный акт вступает в силу со дня его принятия работодателем либо со дня, указанного в этом локальном нормативном акте, и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие. В отношениях, возникших до введения в действие локального нормативного акта, указанный акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие.
Локальный нормативный акт либо отдельные его положения прекращают свое действие в связи с:
истечением срока действия;
отменой (признанием утратившими силу) данного локального нормативного акта либо отдельных его положений другим локальным нормативным актом;
вступлением в силу закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, коллективного договора, соглашения (в случае, когда указанные акты устанавливают более высокий уровень гарантий работникам по сравнению с установленным локальным нормативным актом).
Комментарий к Ст. 12 Трудового кодекса РФ
1. В комментируемой статье законодатель определил особенности действия законов и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права, во времени. Положения данной статьи основаны на Федеральном законе от 14 июня 1994 г. N 5-ФЗ “О порядке опубликования и вступления в силу федеральных конституционных законов, федеральных законов, актов палат Федерального Собрания” и Указе Президента РФ от 23 мая 1996 г.
N 763 “О порядке опубликования и вступления в силу актов Президента Российской Федерации, Правительства Российской Федерации и нормативных правовых актов федеральных органов исполнительной власти”.
Федеральные конституционные законы и федеральные законы вступают в силу по истечении 10 дней после их официального опубликования, если ими самими не определен иной порядок вступления законов в силу. Иной порядок характерен для кодификационных актов, на изучение которых правоприменительной практике требуется определенное время. Например, ТК РФ был принят Государственной Думой 21 декабря 2001 г., а вступил в силу согласно ст. 420 ТК РФ с 1 февраля 2002 г. Акты Президента РФ, имеющие нормативный характер, вступают в силу по истечении семи дней, прошедших со дня их официального опубликования. Аналогичные правила действуют в отношении актов Правительства РФ, которыми затрагиваются права, свободы и обязанности человека и гражданина. Нормативные правовые акты федеральных органов исполнительной власти вступают в силу по истечении 10 дней после дня их официального опубликования, если самими актами не установлен иной порядок их вступления в силу.
Официальным опубликованием федерального конституционного закона и федерального закона считается первая публикация его полного текста в “Парламентской газете”, “Российской газете”, Собрании законодательства Российской Федерации или первое размещение (опубликование) на официальном интернет-портале правовой информации (pravo.gov.ru). Официальными источниками опубликования актов Президента РФ и актов Правительства РФ считаются “Российская газета”, Собрание законодательства Российской Федерации и официальный интернет-портал правовой информации (pravo.gov.ru), а нормативные правовые акты федеральных органов исполнительной власти подлежат официальному опубликованию в “Российской газете” и “Бюллетене нормативных актов федеральных органов исполнительной власти”.
2. Часть 2 комментируемой статьи определяет условия, при которых закон или иной нормативный правовой акт прекращает свое действие. Наиболее очевидным способом прекращения действия закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, является его прямая отмена актом равной или высшей юридической силы.
Наименее очевидные результаты дает такой способ прекращения действия закона или иного нормативного правового акта, как вступление в силу другого акта равной или высшей юридической силы, весьма часто порождающее неопределенность в ответе на вопрос, какие нормы сохранили, а какие утратили действие. Кроме того, наличие фактически утративших силу, но формально не отмененных актов загромождает нормативный массив отрасли трудового права и затрудняет его использование и правильный выбор нормы, необходимой для эффективного правоприменения. Эта ситуация наблюдается и поныне с некоторыми нормативными правовыми актами бывшего Союза ССР, многие положения которых следует признать юридически ничтожными в силу их противоречия законодательству РФ.
3. Часть 3 комментируемой статьи воспроизводит общеправовое правило об отсутствии обратной силы у закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права. Исключение возможно лишь в случаях, прямо предусмотренных законом или иным нормативным правовым актом.
4. Части 4 и 5 комментируемой статьи развивают идею ч. 3 ст. 12 ТК РФ, говоря о том, что нормы трудового права распространяются на отношения, возникшие после их введения в действие. Однако применительно к действующему законодательству эту фразу не следует трактовать так, будто все трудовые отношения, возникшие до 1 февраля 2001 г., ТК РФ не регулируются и их следует регулировать с помощью Кодекса законов о труде (далее – КЗоТ) 1971 г. Последний прекратил свое действие и утратил юридическую силу с 1 февраля 2002 г. по прямому указанию закона (ст.
5. Дата вступления в силу коллективного договора или соглашения определяется сторонами и фиксируется в тексте договора или соглашения.
Датой вступления в силу локального нормативного акта признается день его принятия либо иной день, указанный в тексте локального нормативного акта. Вступление в силу трудового договора определяется положениями ст. 61 ТК РФ (см. комментарий к этой статье).
ст. 12 Трудового Кодекса РФ в текущей редакции и комментарии к ней
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, вступает в силу со дня, указанного в этом законе или ином нормативном правовом акте либо в законе или ином нормативном правовом акте, определяющем порядок введения в действие акта данного вида.
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, либо отдельные их положения прекращают свое действие в связи с :
истечением срока действия ;
вступлением в силу другого акта равной или высшей юридической силы;
отменой (признанием утратившими силу) данного акта либо отдельных его положений актом равной или высшей юридической силы .
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, не имеет обратной силы и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие.
Действие закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, распространяется на отношения, возникшие до введения его в действие, лишь в случаях, прямо предусмотренных этим актом.
В отношениях, возникших до введения в действие закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, указанный закон или акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие.
Действие коллективного договора, соглашения во времени определяется их сторонами в соответствии с настоящим Кодексом .
Локальный нормативный акт вступает в силу со дня его принятия работодателем либо со дня, указанного в этом локальном нормативном акте, и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие. В отношениях, возникших до введения в действие локального нормативного акта, указанный акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие .
Локальный нормативный акт либо отдельные его положения прекращают свое действие в связи с:
истечением срока действия;
отменой (признанием утратившими силу) данного локального нормативного акта либо отдельных его положений другим локальным нормативным актом;
вступлением в силу закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, коллективного договора, соглашения (в случае, когда указанные акты устанавливают более высокий уровень гарантий работникам по сравнению с установленным локальным нормативным актом).
Комментарий к статье 12 ТК РФ
1. Комментируемая статья устанавливает пределы действия трудового законодательства и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права. В ней содержится ответ на вопрос, с какого времени начинает действовать закон или иной нормативный правовой акт и когда кончается его действие.
Статья базируется на Федеральном законе от 14.06.1994 N 5-ФЗ “О порядке опубликования и вступления в силу федеральных конституционных законов, федеральных законов, актов палат Федерального Собрания” и Указе Президента РФ от 23.05.1996 N 763 “О порядке опубликования и вступления в силу актов Президента Российской Федерации, Правительства Российской Федерации и нормативных правовых актов федеральных органов исполнительной власти”, определяющих порядок вступления в силу федеральных конституционных законов, федеральных законов, актов палат Федерального Собрания, актов Президента РФ, Правительства РФ и нормативных правовых актов федеральных органов исполнительной власти независимо от их отраслевой принадлежности.
Федеральные законы вступают в силу по истечении 10 дней после дня их официального опубликования, если указано, что закон вступает в силу со дня его официального опубликования или отсутствует какая-либо дата.
Официальным опубликованием федерального закона считается первая публикация его полного текста в “Российской газете” или “Собрании законодательства Российской Федерации”.
Вступление в силу закона со дня официального опубликования – наиболее распространенная дата его введения в действие. Обычно дата введения закона в действие содержится в его заключительных положениях (Закон о персональных данных). Во многих случаях дата вступления закона в силу определяется отдельным законом, устанавливающим порядок его введения в действие.
Кроме формулировки “вступление в силу со дня официального опубликования”, закон может предусматривать иной порядок введения его в действие. Этот порядок может касаться как всего закона, так и его отдельных статей. Так, дата вступления в силу Федерального закона от 30.
06.2006 N 90-ФЗ – по истечении 90 дней после дня его официального опубликования. В Законе о защите инвалидов указано, что Закон вступает в силу со дня его официального опубликования, за исключением статей, для которых установлены иные сроки вступления в силу. Далее приводится перечень этих статей.
2. Акты Президента РФ, имеющие нормативный характер, вступают в силу по истечении семи дней после дня их первого официального опубликования (п. 5 Указа Президента РФ от 23.05.1996 N 763). Акты Правительства РФ, затрагивающие права, свободы и обязанности человека и гражданина, устанавливающие правовой статус федеральных органов исполнительной власти, а также организаций, вступают в силу по истечении семи дней после дня их первого официального опубликования; иные акты Правительства РФ – со дня их подписания (п. 6 Указа Президента РФ от 23.05.1996 N 763). В актах Президента РФ и актах Правительства РФ может быть установлен другой порядок вступления в силу.
3. Нормативные правовые акты федеральных органов исполнительной власти, затрагивающие права, свободы и обязанности человека и гражданина, устанавливающие правовой статус организаций или имеющие межведомственный характер, подлежат государственной регистрации в Минюсте России и обязательному официальному опубликованию в газете “Российские вести” в течение 10 дней после дня их регистрации, а также в “Бюллетене нормативных актов федеральных органов исполнительной власти”.
Не прошедшие государственную регистрацию нормативные правовые акты федеральных органов исполнительной власти (кроме актов и отдельных их положений, содержащих сведения, составляющие государственную тайну, или сведения конфиденциального характера), а также зарегистрированные, но не опубликованные в установленном порядке, не влекут правовых последствий как не вступившие в силу. На указанные акты нельзя ссылаться при разрешении споров.
4. В комментируемой статье содержатся также условия, при которых прекращает свое действие закон или иной нормативный правовой акт.
Наиболее распространенное из них: закон или иной нормативный правовой акт отменяется актом того же или более высокого уровня. Закон может быть отменен только законом; указ Президента РФ – законом или указом Президента РФ; постановление Правительства РФ – законом, указом Президента РФ, постановлением Правительства РФ; нормативный правовой акт федерального органа исполнительной власти – законом, указом Президента РФ, постановлением Правительства РФ, нормативным правовым актом федерального органа исполнительной власти.
В качестве примера отмены закона можно привести Закон об охране труда, который признан утратившим силу Федеральным законом от 30.06.2006 N 90-ФЗ.
Трудовой кодекс называет в качестве условия прекращения действия закона или иного нормативного правового акта вступление в силу другого акта равной или высшей юридической силы по тому же вопросу. Это объясняется тем, что не всегда при принятии того или иного акта одновременно признаются утратившими силу соответствующие нормативные правовые акты. Поэтому в нормативном массиве всегда имеются акты, фактически утратившие силу, но формально не отмененные. При решении вопроса о том, действует ли тот или иной акт, следует исходить из общего положения: имеется ли более поздний акт равной или высшей юридической силы, регулирующий тот же предмет отношений, что и ранее изданный акт.
Статья 12 предусматривает также в качестве условия прекращения действия закона или иного нормативного правового акта истечение срока, на который был рассчитан данный акт.
5. Часть 3 комментируемой статьи формулирует общее положение о том, что закон или иной нормативный правовой акт о труде применяется только к отношениям, возникшим после введения его в действие. На отношения, существующие до введения его в действие, соответствующий закон или иной нормативный правовой акт не распространяется.
Изъятие из этого правила возможно только в том случае, если оно предусмотрено законом или иным нормативным правовым актом. Как правило, положение о том, что действие закона (иного нормативного правового акта) распространяется на отношения, возникшие до введения его в действие, содержится во Вводном законе.
Трудовой кодекс допускает возможность применения закона или иного нормативного правового акта к правам и обязанностям ранее существовавшего отношения, если такие права и обязанности возникли после введения его в действие. Например, с работником, вступившим в трудовое отношение с работодателем в период действия КЗоТ, трудовой договор расторгается после вступления в силу ТК; основание – несоответствие занимаемой должности вследствие недостаточной квалификации.
В данном случае на этого работника будет распространен п. 3 ч. 1 ст. 81 ТК, предусматривающий, что увольнение по такому основанию должно быть подтверждено результатами аттестации. КЗоТ не требовал подтверждения результатами аттестации несоответствия работника занимаемой должности вследствие его недостаточной квалификации.
В ст. 12 предусмотрены также положения, относящиеся к локальному нормативному акту, коллективному договору, соглашениям. Эти положения отсутствовали в прежней редакции комментируемой статьи.
Локальный нормативный акт вступает в силу со дня его принятия работодателем либо со дня, указанного в этом акте, а прекращает свое действие по тем же основаниям, которые применяются к закону или иному нормативному правовому акту. Отличие заключается лишь в том, что локальный нормативный акт либо отдельные его положения прекращают свое действие в связи со вступлением в силу закона (иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права), коллективного договора, соглашения только в том случае, когда указанные акты устанавливают более высокий уровень гарантий работникам по сравнению с установленным локальным нормативным актом.
Есть локальные нормативные акты, которые действуют до тех пор, пока это представляется целесообразным. Среди локальных нормативных актов имеются и акты с годичным сроком действия, например графики отпусков.
В комментируемой статье указано, что действие во времени коллективного договора, соглашений определяется их сторонами в соответствии с ТК. Статья 43 ТК предусматривает, что коллективный договор заключается на срок не более трех лет и вступает в силу со дня подписания его сторонами либо со дня, установленного коллективным договором. Такой же порядок установлен для соглашений (ст. 48 ТК).
Стороны коллективного договора могут продлевать его действие неоднократно на срок не более трех лет, а продление соглашения допускается только один раз на три года.
Другой комментарий к статье 12 ТК РФ
§ 1. Впервые в кодифицированном акте, каким является Трудовой кодекс РФ, указаны особенности действия законов и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права, во времени.
В п. 3 ст. 15 Конституции Российской Федерации сказано, что законы подлежат официальному опубликованию. Неопубликованные законы не применяются. Любые нормативные правовые акты, затрагивающие права, свободы и обязанности человека и гражданина, не могут применяться, если они не опубликованы официально для всеобщего сведения.
§ 2. Комментируемая статья основывается на Федеральном законе от 14 июня 1994 г. “О порядке опубликования и вступления в силу федеральных конституционных законов, федеральных законов, актов палат Федерального Собрания”, с изменениями и дополнениями от 22 октября 1999 г. (СЗ РФ. 1994. N 8. Ст. 801; 1999. N 43. Ст. 5124). Кроме того, надо знать Указ Президента Российской Федерации от 23 мая 1996 г. “О порядке опубликования и вступления в силу актов Президента Российской Федерации, Правительства Российской Федерации и нормативных правовых актов федеральных органов исполнительной власти” (СЗ РФ. 1996. N 22. Ст. 2663). Они определяют порядок вступления в силу перечисленных нормативных правовых актов.
Датой принятия федерального конституционного закона считается день, когда он одобрен палатами Федерального Собрания в порядке, установленном Конституцией РФ. Датой принятия федерального закона считается день принятия его Государственной Думой в окончательной редакции.
Все федеральные конституционные законы, а также федеральные законы подлежат официальному опубликованию в течение семи дней после дня их подписания Президентом РФ.
Акты палат Федерального Собрания подлежат опубликованию не позднее десяти дней после дня их принятия.
Ратифицированные Федеральным Собранием международные договоры публикуются в печати одновременно с соответствующими федеральными законами об их ратификации.
В настоящее время Собрание законодательства РФ и “Российская газета” являются официальными изданиями, которые публикуют полные тексты федеральных конституционных законов, федеральных законов, актов палат Федерального Собрания.
Однако следует иметь в виду, что законы, акты палат Федерального Собрания и иные документы могут быть опубликованы и в виде отдельного издания.
Перечисленные выше нормативные акты Федерального Собрания вступают в силу одновременно на всей территории РФ по истечении десяти дней после дня их официального опубликования, но могут вступать в силу и со дня их официального опубликования.
Акты Президента Российской Федерации, имеющие нормативный характер, вступают в силу одновременно на всей территории РФ по истечении семи дней после дня их первого официального опубликования. Что касается актов Правительства РФ, которые затрагивают права, свободы и обязанности человека и гражданина, то они вступают в силу по аналогии с актами Президента РФ.
Несколько иной порядок вступления в силу нормативных правовых актов федеральных органов исполнительной власти. Они вступают в силу одновременно на всей территории России по истечении десяти дней после дня их официального опубликования при условии, что в самих актах не установлен другой порядок вступления их в силу.
Нормативные правовые акты в сфере трудового права применяются только к тем отношениям, которые возникли после введения в действие соответствующих актов. Например, в силу ст. 85 ТК обработка нормативных данных работника может иметь место с 1 февраля 2002 г., т.е. со дня вступления в силу Трудового кодекса РФ, либо заключение единого трудового договора в соответствии со ст. 59 Кодекса возможно только с теми гражданами, которые поступают на работу после 1 февраля 2002 г.
§ 3. Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, прекращает свое действие в связи с: истечением срока его действия, вступлением в силу другого акта равной или высшей юридической силы, отменой (признанием утратившим силу) данного акта либо отдельных его положений актом равной или высшей юридической силы.
§ 4. В соответствии с ч. 6 ст. 12 ТК действие коллективного договора, соглашения во времени определяется их сторонами в соответствии с Трудовым кодексом.
Локальный нормативный акт вступает в силу со дня его принятия работодателем либо со дня, указанного в самом локальном нормативном акте, и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие. А в отношениях, возникающих до введения в действие локального нормативного акта, указанный акт применяется к правам и обязательствам, возникшим после его введения в действие.
§ 5. Часть 8 ст. 12 ТК предусматривает, что локальный нормативный акт либо отдельные его положения прекращают свое действие в связи:
1) с истечением срока действия;
2) отменой (признанием утратившим силу) данного локального нормативного акта либо его отдельных положений другими локальными нормативными актами;
3) вступлением в силу закона или иного нормативного акта, содержащего нормы трудового права, коллективного договора, соглашения, в случае если указанные акты устанавливают более высокий уровень гарантий работникам по сравнению с установленным локальным нормативным актом.
Статья 12 ТК РФ с комментариями
Полный текст ст. 12 ТК РФ с комментариями. Новая действующая редакция с дополнениями на 2021 год. Консультации юристов по статье 12 ТК РФ.
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, вступает в силу со дня, указанного в этом законе или ином нормативном правовом акте либо в законе или ином нормативном правовом акте, определяющем порядок введения в действие акта данного вида.
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, либо отдельные их положения прекращают свое действие в связи с :
истечением срока действия ;
вступлением в силу другого акта равной или высшей юридической силы;
отменой (признанием утратившими силу) данного акта либо отдельных его положений актом равной или высшей юридической силы .
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, не имеет обратной силы и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие.
Действие закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, распространяется на отношения, возникшие до введения его в действие, лишь в случаях, прямо предусмотренных этим актом.
В отношениях, возникших до введения в действие закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, указанный закон или акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие.
Действие коллективного договора, соглашения во времени определяется их сторонами в соответствии с настоящим Кодексом .
Локальный нормативный акт вступает в силу со дня его принятия работодателем либо со дня, указанного в этом локальном нормативном акте, и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие. В отношениях, возникших до введения в действие локального нормативного акта, указанный акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие .
Локальный нормативный акт либо отдельные его положения прекращают свое действие в связи с:
истечением срока действия;
отменой (признанием утратившими силу) данного локального нормативного акта либо отдельных его положений другим локальным нормативным актом;
вступлением в силу закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, коллективного договора, соглашения (в случае, когда указанные акты устанавливают более высокий уровень гарантий работникам по сравнению с установленным локальным нормативным актом).
Комментарий к статье 12 ТК РФ
1. Комментируемая статья устанавливает правила действия трудового законодательства и иных актов, содержащих нормы трудового права, во времени, а именно определяет момент вступления нормативного акта в силу и прекращения его действия, а также распространение вновь принятого нормативного акта на отношения, возникшие до введения его в действие.
В соответствии с ч.1 ст. 12 ТК РФ предусматривается два варианта вступления в силу закона или иного нормативного акта.
Во-первых, закон или иной акт, содержащий нормы трудового права вступает в силу со дня, указанного в самом акте. Сегодня это самый распространенный способ определения для вступления в силу нормативного акта. Примером может служить сам ТК РФ, в ст. 420 которого определена дата вступления его в силу – 1 февраля 2002 года.
Достаточно часто закон или иной акт устанавливает разные даты вступления в силу отдельных положений (статей, глав, разделов) документа.
День вступления акта в силу может определяться конкретной датой или окончанием определенного самим актом периода после официального опубликования документа. Так, например, Федеральный закон от 30 июня 2006 года N 90-ФЗ, которым были внесены самые существенные изменения и дополнения в ТК РФ, вступил в силу по истечении 90 дней после его официального опубликования.
Во-вторых, если во вновь принятом законе или ином акте, содержащем нормы трудового права, отсутствует прямое указание на день вступления его в силу, то применяются общие правила вступления в силу законов и иных нормативных правовых актов. Эти правила, в свою очередь, установлены специальными законами или иными нормативными правовыми актами.
В соответствии со ст. 6 Федерального закона от 14 июня 1994 года N 5-ФЗ “О порядке опубликования и вступления в силу федеральных конституционных законов, федеральных законов, актов палат Федерального Собрания” федеральные конституционные законы, федеральные законы вступают в силу одновременно на всей территории Российской Федерации по истечении десяти дней после дня их официального опубликования.
Общий порядок вступления в силу подзаконных нормативных правовых актов схож с аналогичным порядком применительно к федеральным законам. Так, в соответствии с Указом Президента РФ от 23 мая 1996 года N 763 “О порядке опубликования и вступления в силу актов Президента Российской Федерации, Правительства Российской Федерации и нормативных правовых актов федеральных органов исполнительной власти” нормативные правовые акты федеральных органов исполнительной власти вступают в силу одновременно на всей территории Российской Федерации по истечении десяти дней после дня их официального опубликования.
Важным условием вступления в силу нормативных правовых актов является их официальное опубликование. Официальным опубликованием федерального конституционного закона, федерального закона считается первая публикация его полного текста в “Парламентской газете”, “Российской газете”, “Собрании законодательства Российской Федерации” или первое размещение (опубликование) на “Официальном интернет-портале правовой информации” (www.pravo.gov.ru).
Нормативные акты органов государственной власти субъектов РФ также подлежат официальному опубликованию. Например, официальным опубликованием закона Санкт-Петербурга является первое размещение его полного текста на официальном сайте Администрации Санкт-Петербурга (www.gov.spb.ru) либо первая публикация его полного текста в печатном средстве массовой информации: в журналах “Вестник Администрации Санкт-Петербурга”, “Информационный бюллетень Администрации Санкт-Петербурга”, “Вестник Законодательного Собрания Санкт-Петербурга”, в газетах “Санкт-Петербургские ведомости”, “Петербургский дневник”, “Санкт-Петербургский курьер” (Закон Санкт-Петербурга от 16 июля 2010 года N 445-112 “Об обеспечении доступа к информации о деятельности государственных органов Санкт-Петербурга”).
2. Часть 2 комментируемой статьи фиксирует основания прекращения действия законов и иных актов, содержащих нормы трудового права:
– закон или иной нормативный правовой акт прекращают свое действие в связи с истечением срока. Данное основание встречается крайне редко, поскольку подавляющее большинство нормативных актов принимается без указания срока его действия;
– закон или иной нормативный правовой акт прекращает действие вступлением в силу другого акта равной или высшей юридической силы. “Это объясняется тем, что не всегда при принятии того или иного акта одновременно признаются утратившими силу соответствующие нормативные правовые акты. Поэтому в нормативном массиве всегда имеются акты, фактически утратившие силу, но формально не отмененные”;
________________
Комментарий к Трудовому кодексу Российской Федерации (постатейный). 5-е издание / Под ред. Ю.П.Орловского. М.: Контракт; Инфра-М, 2009.
– чаще всего нормативные правовые акты прекращают действие в связи с отменой (признанием утратившим силу) данного акта либо отдельных его положений актом равной или высшей юридической силы.
Данный способ является более предпочтительным, чем предыдущий, поскольку не создает неопределенности с действием отмененного акта и исключает коллизии норм старого и нового нормативного акта.
При этом должно соблюдаться условие, что нормативный акт может отменяться актом такой же или большей юридической силы. Так, федеральный закон может быть отменен только федеральным и федеральным конституционным законом; Указ Президента РФ – другим Указом или федеральным законом и т.д.
3. В следующих трех частях (3-5) комментируемой статьи определены особенности действия законов и иных нормативных правовых актов в зависимости от момента возникновения правоотношения, регулируемого трудовым законодательством.
Общее правило таково, что закон или иной нормативный правовой акт не имеют обратной силы и применяются для регулирования отношений, возникших после вступления их в силу.
Однако ТК РФ все же позволяет распространять нормативные акты на отношения, возникшие до введения их в действие, что может быть установлено, в частности, самим этим актом.
Иллюстрацией к этому может служить определение ВС РФ от 15 августа 2007 года N 7-Г07-10, которым указ Губернатора Ивановской области признан законным, несмотря на то, что он императивно определил дату выплаты установленной заработной платы с 1 октября 2006 года, то есть до введения этого акта в действие.
Следует отметить, что многие специалисты ставят под сомнение правомерность установления обратной силы закона, особенно если новый закон затрагивает права работника, тем более снижает уровень гарантий.
________________
См., например, Ершова Е.А. Конституция Российской Федерации как основополагающий источник трудового права // Трудовое право. 2006. N 11.
Важное правило закреплено в ч.5 комментируемой статьи. Вновь принятый нормативный правовой акт распространяется на права и обязанности, возникшие после введения его в действие.
Трудовые отношения очень часто носят длительный характер. За это время принимается множество нормативных правовых актов, затрагивающих права и обязанности работников. Это не означает, что эти акты не будут распространяться на данного работника. Например, отдельные работники, заключившие трудовой договор достаточно давно, могут быть уволены в соответствии с новым основанием п.7.1. ч.1 ст. 81 ТК РФ, если не выполнят обязанность, например, по представлению сведений о своих доходах, расходах, об имуществе и обязательствах имущественного характера.
4. Части 6-8 отсутствовали в первоначальной редакции статьи и были введены в 2006 году Федеральным законом от 30 июня 2006 года N 90-ФЗ.
В данных нормах установлены правила действия во времени коллективных договоров, соглашений и ЛНА. Дополнение объясняется тем, что ст. 5 ТК РФ включает эти акты в число источников трудового права, поэтому логично предусмотреть условия и их действия во времени тоже.
В отличие от нормативных правовых актов для коллективных договоров и соглашений предусмотрены общие правила вступления их в силу. В связи с этим день вступления в силу указанных документов должен быть предусмотрен самими этими документами. По сути, стороны коллективных договоров и соглашений должны договориться о дате начала действия документов. При этом стороны самостоятельно решают вопрос об обратной силе коллективных договоров и соглашений.
Правила действия ЛНА во времени во многом аналогичны таковым по отношению к законам и иным нормативным правовым актам.
Отличием является то, что при отсутствии специального указания в самом акте день вступления его в силу является следующим после дня принятия.
Также обращает на себя внимание то, что ЛНА прекращает свое действие вступлением в силу закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, коллективного договора, соглашения только в случае, если указанные акты устанавливают более высокий уровень гарантий работникам по сравнению с установленным ЛНА.
Другой комментарий к ст. 12 ТК РФ
1. В комментируемой статье законодатель определил особенности действия законов и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права, во времени. Положения данной статьи основаны на Федеральном законе от 14 июня 1994 г. N 5-ФЗ “О порядке опубликования и вступления в силу федеральных конституционных законов, федеральных законов, актов палат Федерального Собрания” и Указе Президента РФ от 23 мая 1996 г. N 763 “О порядке опубликования и вступления в силу актов Президента Российской Федерации, Правительства Российской Федерации и нормативных правовых актов федеральных органов исполнительной власти”.
Федеральные конституционные законы и федеральные законы вступают в силу по истечении 10 дней после их официального опубликования, если ими самими не определен иной порядок вступления законов в силу. Иной порядок характерен для кодификационных актов, на изучение которых правоприменительной практике требуется определенное время. Например, ТК был принят Государственной Думой 21 декабря 2001 г., а вступил в силу согласно ст. 420 ТК с 1 февраля 2002 г. Акты Президента РФ, имеющие нормативный характер, вступают в силу по истечении семи дней, прошедших со дня их официального опубликования. Аналогичные правила действуют в отношении актов Правительства РФ, которыми затрагиваются права, свободы и обязанности человека и гражданина. Нормативные правовые акты федеральных органов исполнительной власти вступают в силу по истечении 10 дней после дня их официального опубликования, если самими актами не установлен иной порядок их вступления в силу.
Официальным опубликованием федерального конституционного закона и федерального закона считается первая публикация его полного текста в “Парламентской газете”, “Российской газете”, Собрании законодательства Российской Федерации или первое размещение (опубликование) на официальном интернет-портале правовой информации (http://www.pravo.gov.ru). Официальными источниками опубликования актов Президента РФ и актов Правительства РФ считаются “Российская газета”, Собрание законодательства Российской Федерации и официальный интернет-портал правовой информации (http://www.pravo.gov.ru), а нормативные правовые акты федеральных органов исполнительной власти подлежат официальному опубликованию в “Российской газете” и “Бюллетене нормативных актов федеральных органов исполнительной власти”.
2. Часть 2 комментируемой статьи определяет условия, при которых закон или иной нормативный правовой акт прекращает свое действие. Наиболее очевидным способом прекращения действия закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, является его прямая отмена актом равной или высшей юридической силы. К таким же результатам приводит применение другого способа прекращения действия закона или иного нормативного правового акта – истечение срока его действия. Однако этот способ практически не применяется в отношении законов и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права.
Наименее очевидные результаты дает такой способ прекращения действия закона или иного нормативного правового акта, как вступление в силу другого акта равной или высшей юридической силы, весьма часто порождающее неопределенность в ответе на вопрос, какие нормы сохранили, а какие утратили действие. Кроме того, наличие фактически утративших силу, но формально не отмененных актов загромождает нормативный массив отрасли трудового права и затрудняет его использование и правильный выбор нормы, необходимой для эффективного правоприменения. Эта ситуация наблюдается и поныне с некоторыми нормативными правовыми актами бывшего Союза ССР, многие положения которых следует признать юридически ничтожными в силу их противоречия законодательству РФ. Однако формально они сохраняют действие, поскольку не отменены законами или иными нормативными правовыми актами РФ (подробнее см. ст. 423 ТК и комментарий к ней).
3. Часть 3 комментируемой статьи воспроизводит общеправовое правило об отсутствии обратной силы у закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права. Исключение возможно лишь в случаях, прямо предусмотренных законом или иным нормативным правовым актом.
4. Части 4 и 5 комментируемой статьи развивают идею ч. 3 ст. 12 ТК, говоря о том, что нормы трудового права распространяются на отношения, возникшие после их введения в действие. Однако применительно к действующему законодательству эту фразу не следует трактовать так, будто все трудовые отношения, возникшие до 1 февраля 2001 г., ТК не регулируются и их следует регулировать с помощью Кодекса законов о труде (далее – КЗоТ) 1971 г. Последний прекратил свое действие и утратил юридическую силу с 1 февраля 2002 г. по прямому указанию закона (ст. 422 ТК), поэтому действие ТК сейчас распространяется на всех работников и всех работодателей независимо от времени возникновения между ними трудовых отношений (ст. 11). Соответственно, применение старого закона (или иного нормативного правового акта) к отношениям, возникшим до введения в действие ТК (или иного правового акта), возможно практически лишь в ситуации, связанной с разрешением трудового спора, возникшего в период времени, предшествовавший принятию и введению в действие ТК или иного нормативного акта, содержащего нормы трудового права, которые, в свою очередь, не имеют обратной силы.
5. Дата вступления в силу коллективного договора или соглашения определяется сторонами и фиксируется в тексте договора или соглашения.
Датой вступления в силу локального нормативного акта признается день его принятия либо иной день, указанный в тексте локального нормативного акта. Вступление в силу трудового договора определяется положениями ст. 61 ТК (см. комментарий к этой статье).
Консультации и комментарии юристов по ст 12 ТК РФ
Если у вас остались вопросы по статье 12 ТК РФ и вы хотите быть уверены в актуальности представленной информации, вы можете проконсультироваться у юристов нашего сайта.
Задать вопрос можно по телефону или на сайте. Первичные консультации проводятся бесплатно с 9:00 до 21:00 ежедневно по Московскому времени. Вопросы, полученные с 21:00 до 9:00, будут обработаны на следующий день.
Статья 12 ТК РФ и комментарии к ней
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, вступает в силу со дня, указанного в этом законе или ином нормативном правовом акте либо в законе или ином нормативном правовом акте, определяющем порядок введения в действие акта данного вида.
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, либо отдельные их положения прекращают свое действие в связи с :
истечением срока действия ;
вступлением в силу другого акта равной или высшей юридической силы;
отменой (признанием утратившими силу) данного акта либо отдельных его положений актом равной или высшей юридической силы .
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, не имеет обратной силы и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие.
Действие закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, распространяется на отношения, возникшие до введения его в действие, лишь в случаях, прямо предусмотренных этим актом.
В отношениях, возникших до введения в действие закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, указанный закон или акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие.
Действие коллективного договора, соглашения во времени определяется их сторонами в соответствии с настоящим Кодексом .
Локальный нормативный акт вступает в силу со дня его принятия работодателем либо со дня, указанного в этом локальном нормативном акте, и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие. В отношениях, возникших до введения в действие локального нормативного акта, указанный акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие .
Локальный нормативный акт либо отдельные его положения прекращают свое действие в связи с:
истечением срока действия;
отменой (признанием утратившими силу) данного локального нормативного акта либо отдельных его положений другим локальным нормативным актом;
вступлением в силу закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, коллективного договора, соглашения (в случае, когда указанные акты устанавливают более высокий уровень гарантий работникам по сравнению с установленным локальным нормативным актом).
Комментарий к статье 12 ТК РФ
1. В комментируемой статье законодатель определил особенности действия законов и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права, во времени. Положения данной статьи основаны на Федеральном законе от 14 июня 1994 г. N 5-ФЗ “О порядке опубликования и вступления в силу федеральных конституционных законов, федеральных законов, актов палат Федерального Собрания” и Указе Президента РФ от 23 мая 1996 г. N 763 “О порядке опубликования и вступления в силу актов Президента Российской Федерации, Правительства Российской Федерации и нормативных правовых актов федеральных органов исполнительной власти”.
Федеральные конституционные законы и федеральные законы вступают в силу по истечении 10 дней после их официального опубликования, если ими самими не определен иной порядок вступления законов в силу. Иной порядок характерен для кодификационных актов, на изучение которых правоприменительной практике требуется определенное время. Например, ТК был принят Государственной Думой 21 декабря 2001 г., а вступил в силу согласно ст. 420 ТК с 1 февраля 2002 г. Акты Президента РФ, имеющие нормативный характер, вступают в силу по истечении семи дней, прошедших со дня их официального опубликования. Аналогичные правила действуют в отношении актов Правительства РФ, которыми затрагиваются права, свободы и обязанности человека и гражданина. Нормативные правовые акты федеральных органов исполнительной власти вступают в силу по истечении 10 дней после дня их официального опубликования, если самими актами не установлен иной порядок их вступления в силу.
Официальным опубликованием федерального конституционного закона и федерального закона считается первая публикация его полного текста в “Парламентской газете”, “Российской газете”, Собрании законодательства Российской Федерации или первое размещение (опубликование) на официальном интернет-портале правовой информации (//www.pravo.gov.ru). Официальными источниками опубликования актов Президента РФ и актов Правительства РФ считаются “Российская газета”, Собрание законодательства Российской Федерации и официальный интернет-портал правовой информации (//www.pravo.gov.ru), а нормативные правовые акты федеральных органов исполнительной власти подлежат официальному опубликованию в “Российской газете” и “Бюллетене нормативных актов федеральных органов исполнительной власти”.
2. Часть 2 комментируемой статьи определяет условия, при которых закон или иной нормативный правовой акт прекращает свое действие. Наиболее очевидным способом прекращения действия закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, является его прямая отмена актом равной или высшей юридической силы. К таким же результатам приводит применение другого способа прекращения действия закона или иного нормативного правового акта – истечение срока его действия. Однако этот способ практически не применяется в отношении законов и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права.
Наименее очевидные результаты дает такой способ прекращения действия закона или иного нормативного правового акта, как вступление в силу другого акта равной или высшей юридической силы, весьма часто порождающее неопределенность в ответе на вопрос, какие нормы сохранили, а какие утратили действие. Кроме того, наличие фактически утративших силу, но формально не отмененных актов загромождает нормативный массив отрасли трудового права и затрудняет его использование и правильный выбор нормы, необходимой для эффективного правоприменения. Эта ситуация наблюдается и поныне с некоторыми нормативными правовыми актами бывшего Союза ССР, многие положения которых следует признать юридически ничтожными в силу их противоречия законодательству РФ. Однако формально они сохраняют действие, поскольку не отменены законами или иными нормативными правовыми актами РФ (подробнее см. ст. 423 ТК и комментарий к ней).
3. Часть 3 комментируемой статьи воспроизводит общеправовое правило об отсутствии обратной силы у закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права. Исключение возможно лишь в случаях, прямо предусмотренных законом или иным нормативным правовым актом.
4. Части 4 и 5 комментируемой статьи развивают идею ч. 3 ст. 12 ТК, говоря о том, что нормы трудового права распространяются на отношения, возникшие после их введения в действие. Однако применительно к действующему законодательству эту фразу не следует трактовать так, будто все трудовые отношения, возникшие до 1 февраля 2001 г., ТК не регулируются и их следует регулировать с помощью Кодекса законов о труде (далее – КЗоТ) 1971 г. Последний прекратил свое действие и утратил юридическую силу с 1 февраля 2002 г. по прямому указанию закона (ст. 422 ТК), поэтому действие ТК сейчас распространяется на всех работников и всех работодателей независимо от времени возникновения между ними трудовых отношений (ст. 11). Соответственно, применение старого закона (или иного нормативного правового акта) к отношениям, возникшим до введения в действие ТК (или иного правового акта), возможно практически лишь в ситуации, связанной с разрешением трудового спора, возникшего в период времени, предшествовавший принятию и введению в действие ТК или иного нормативного акта, содержащего нормы трудового права, которые, в свою очередь, не имеют обратной силы.
5. Дата вступления в силу коллективного договора или соглашения определяется сторонами и фиксируется в тексте договора или соглашения.
Датой вступления в силу локального нормативного акта признается день его принятия либо иной день, указанный в тексте локального нормативного акта. Вступление в силу трудового договора определяется положениями ст. 61 ТК (см. комментарий к этой статье).
Другой комментарий к статье 12 Трудового Кодекса РФ
Комментируемая статья устанавливает пределы действия трудового законодательства и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права, что связано с их вступлением в силу и моментом утраты юридической силы.
В самом законе или ином нормативном правовом акте, содержащем нормы трудового права, может быть указан день, когда он вступает в силу. При отсутствии такого указания дата принятия законов, порядок их официального опубликования и вступления в силу определены Федеральным законом от 14.06.1994 N 5-ФЗ “О порядке опубликования и вступления в силу федеральных конституционных законов, федеральных законов, актов палат Федерального Собрания” (в ред. от 21.10.2011) <1>. Согласно данному Закону все указанные законы и акты вступают в силу одновременно на всей территории РФ по истечении 10 дней после их официального опубликования, если самими актами не установлен другой порядок вступления их в силу. В других случаях дата введения закона в действие и нередко порядок такого введения устанавливаются отдельным законом. Так, ТК был подписан Президентом РФ 30 декабря 2001 г. и введен в действие с 1 февраля 2002 г. (ст. 420 ТК).
——————————–
<1> СЗ РФ. 1994. N 8. Ст. 801; 1999. N 43. Ст. 5124; 2011. N 43. Ст. 5977.
Официальным опубликованием считается первая публикация полного текста акта в “Парламентской газете”, “Российской газете” или Собрании законодательства Российской Федерации, а с 10 ноября 2011 г. также первое размещение (опубликование) на официальном интернет-портале правовой информации (www.pravo.gov.ru).
Порядок вступления в силу нормативных правовых актов Президента РФ, Правительства РФ, а также федеральных органов исполнительной власти установлен Указом Президента РФ “О порядке опубликования и вступления в силу актов Президента Российской Федерации, Правительства Российской Федерации и нормативных правовых актов федеральных органов исполнительной власти”. Указы и распоряжения нормативного характера вступают в силу одновременно на всей территории РФ по истечении семи дней после дня их первого официального опубликования. Акты Правительства РФ (постановления, распоряжения), затрагивающие права, свободы и обязанности человека и гражданина, устанавливающие правовой статус федеральных органов исполнительной власти, а также организаций, вступают в силу одновременно на всей территории РФ по истечении семи дней после дня их первого официального опубликования. Официальным опубликованием всех указанных актов является публикация их текстов в “Российской газете” или Собрании законодательства Российской Федерации. С 10 ноября 2011 г. официальным опубликованием акта Президента РФ считается первое размещение (опубликование) его полного текста на официальном интернет-портале правовой информации (www.pravo.gov.ru). Официальными являются также тексты актов Правительства РФ, распространяемые в электронном виде федеральным государственным унитарным предприятием “Научно-технический центр правовой информации “Система” Федеральной службы охраны РФ, а также федеральными органами государственной охраны.
Акты федеральных органов исполнительной власти, затрагивающие права, свободы и обязанности человека и гражданина, устанавливающие правовой статус организаций или имеющие межведомственный характер, подлежат обязательной государственной регистрации в Минюсте России и должны быть официально опубликованы в газете “Российские вести”, а также в Бюллетене нормативных актов федеральных органов исполнительной власти. Официальным также является указанный Бюллетень, распространяемый в электронном виде федеральным государственным унитарным предприятием “Научно-технический центр правовой информации “Система” Федеральной службы охраны РФ, а также федеральными органами государственной охраны.
Нормативные правовые акты федеральных органов исполнительной власти вступают в силу одновременно на всей территории РФ по истечении 10 дней после дня их официального опубликования, если самими актами не установлен другой порядок вступления их в силу. Указанные акты федеральных органов, не прошедшие государственную регистрацию, а также зарегистрированные, но не опубликованные в установленном порядке, не влекут правовых последствий как не вступившие в силу. На такие акты нельзя ссылаться и при разрешении трудовых споров.
В ч. 2 комментируемой статьи установлены случаи, при которых закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права либо отдельные их положения, прекращают свое действие, а именно:
– истечение срока, что влечет за собой прекращение действия тех законов и иных нормативных правовых актов, в которых точно определен срок их действия во времени. При этом уточняется, что прекращается действие также отдельных положений, а не только указанных законов и нормативных правовых актов;
– вступление в силу другого акта равной или высшей юридической силы, когда прекращается применение (полностью либо частично) формально не отмененного нормативного правового акта. Поэтому приоритет отдается более позднему закону или иному нормативному правовому акту, но обязательно акту того же уровня либо имеющему большую юридическую силу, например постановление Правительства РФ – постановлением Правительства РФ или указом Президента РФ, федеральным законом;
– отмена (признание утратившим силу) данного акта либо отдельных его положений актом равной или высшей юридической силы. При этом необходимо иметь в виду, что закон или иной нормативный правовой акт подлежит отмене (признается утратившим силу) только законом или иным актом того же уровня либо более высокого уровня. В более позднем по сроку законе или акте указываются законы или акты, которые считаются утратившими силу (см., например, ст. 422 ТК).
Закон или иной нормативный правовой акт, вступивший в действие, как правило, не имеет обратной силы и применяется к отношениям, возникшим после его введения в действие. Исключение составляют те редкие случаи, когда в принятом акте прямо предусматривается его распространение на отношения, возникшие до введения этого акта в действие.
В ст. 12 ТК уточняется, что в отношениях, возникших до введения в действие закона или иного акта, указанный закон или акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие. Соответственно, в ст. 424 ТК установлено, что ТК применяется к правоотношениям, возникшим после введения его в действие. Если правоотношения возникли до введения в действие ТК, то ТК применяется к тем правам и обязанностям, которые возникнут после введения его в действие. Например, если работник расторгает срочный трудовой договор после вступления в силу ТК, на него в полной мере распространяется ст. 80 ТК, согласно которой он вправе расторгнуть срочный трудовой договор по собственному желанию и должен предупредить работодателя за две недели об этом.
В ч. 6 комментируемой статьи уточняется, что действие коллективного договора, соглашения во времени определяется их сторонами в том порядке, как это установлено ТК (см. ст. ст. 43, 44, 47, 48 и коммент. к ним).
Согласно ч. 7 комментируемой статьи локальный нормативный акт вступает в силу с того дня, когда он принят работодателем, либо со дня, указанного в самом локальном нормативном акте. Порядок принятия локальных нормативных актов установлен ТК (см. ст. 8 и коммент. к ней). Локальный нормативный акт применяется к правоотношениям, возникшим после введения его в действие. Если правоотношения возникли до введения локального нормативного акта, то данный акт применяется к правам и обязанностям, которые возникают после введения его в действие.
В ч. 8 предусмотрены случаи прекращения действия локальных нормативных актов. Эти случаи охватывают: а) истечение срока действия, когда локальный нормативный акт был принят на определенный срок, т.е. точно определен срок его действия во времени; б) в связи с отменой (признанием утратившим силу) данного локального нормативного акта либо отдельных его положений другим локальным нормативным актом, например, принятие новых правил внутреннего трудового распорядка отменяет действовавшие у данного работодателя правила, либо отдельный раздел этих правил, принятый работодателем, ведет к отмене действовавшего раздела; в) вступление в силу закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, а также коллективного договора, соглашения ведет к прекращению действия локального нормативного акта, если законом или указанным актом, а также коллективным договором, соглашением установлен более высокий уровень гарантий работникам по сравнению с установленным локальным нормативным актом.
Статья 12 Трудового Кодекса РФ с комментариями
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, вступает в силу со дня, указанного в этом законе или ином нормативном правовом акте либо в законе или ином нормативном правовом акте, определяющем порядок введения в действие акта данного вида.
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, либо отдельные их положения прекращают свое действие в связи с :
истечением срока действия ;
вступлением в силу другого акта равной или высшей юридической силы;
отменой (признанием утратившими силу) данного акта либо отдельных его положений актом равной или высшей юридической силы .
Закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права, не имеет обратной силы и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие.
Действие закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, распространяется на отношения, возникшие до введения его в действие, лишь в случаях, прямо предусмотренных этим актом.
В отношениях, возникших до введения в действие закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, указанный закон или акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие.
Действие коллективного договора, соглашения во времени определяется их сторонами в соответствии с настоящим Кодексом .
Локальный нормативный акт вступает в силу со дня его принятия работодателем либо со дня, указанного в этом локальном нормативном акте, и применяется к отношениям, возникшим после введения его в действие. В отношениях, возникших до введения в действие локального нормативного акта, указанный акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие .
Локальный нормативный акт либо отдельные его положения прекращают свое действие в связи с:
истечением срока действия;
отменой (признанием утратившими силу) данного локального нормативного акта либо отдельных его положений другим локальным нормативным актом;
вступлением в силу закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, коллективного договора, соглашения (в случае, когда указанные акты устанавливают более высокий уровень гарантий работникам по сравнению с установленным локальным нормативным актом).
Комментарий к статье 12 ТК РФ
Комментируемая статья устанавливает пределы действия трудового законодательства и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права, что связано с их вступлением в силу и моментом утраты юридической силы.
В самом законе или ином нормативном правовом акте, содержащем нормы трудового права, может быть указан день, когда он вступает в силу. При отсутствии такого указания дата принятия законов, порядок их официального опубликования и вступления в силу определены Федеральным законом от 14.06.1994 N 5-ФЗ “О порядке опубликования и вступления в силу федеральных конституционных законов, федеральных законов, актов палат Федерального Собрания” (в ред. от 21.10.2011) <1>. Согласно данному Закону все указанные законы и акты вступают в силу одновременно на всей территории РФ по истечении 10 дней после их официального опубликования, если самими актами не установлен другой порядок вступления их в силу. В других случаях дата введения закона в действие и нередко порядок такого введения устанавливаются отдельным законом. Так, ТК был подписан Президентом РФ 30 декабря 2001 г. и введен в действие с 1 февраля 2002 г. (ст. 420 ТК).
——————————–
<1> СЗ РФ. 1994. N 8. Ст. 801; 1999. N 43. Ст. 5124; 2011. N 43. Ст. 5977.
Официальным опубликованием считается первая публикация полного текста акта в “Парламентской газете”, “Российской газете” или Собрании законодательства Российской Федерации, а с 10 ноября 2011 г. также первое размещение (опубликование) на официальном интернет-портале правовой информации (www.pravo.gov.ru).
Порядок вступления в силу нормативных правовых актов Президента РФ, Правительства РФ, а также федеральных органов исполнительной власти установлен Указом Президента РФ “О порядке опубликования и вступления в силу актов Президента Российской Федерации, Правительства Российской Федерации и нормативных правовых актов федеральных органов исполнительной власти”. Указы и распоряжения нормативного характера вступают в силу одновременно на всей территории РФ по истечении семи дней после дня их первого официального опубликования. Акты Правительства РФ (постановления, распоряжения), затрагивающие права, свободы и обязанности человека и гражданина, устанавливающие правовой статус федеральных органов исполнительной власти, а также организаций, вступают в силу одновременно на всей территории РФ по истечении семи дней после дня их первого официального опубликования. Официальным опубликованием всех указанных актов является публикация их текстов в “Российской газете” или Собрании законодательства Российской Федерации. С 10 ноября 2011 г. официальным опубликованием акта Президента РФ считается первое размещение (опубликование) его полного текста на официальном интернет-портале правовой информации (www.pravo.gov.ru). Официальными являются также тексты актов Правительства РФ, распространяемые в электронном виде федеральным государственным унитарным предприятием “Научно-технический центр правовой информации “Система” Федеральной службы охраны РФ, а также федеральными органами государственной охраны.
Акты федеральных органов исполнительной власти, затрагивающие права, свободы и обязанности человека и гражданина, устанавливающие правовой статус организаций или имеющие межведомственный характер, подлежат обязательной государственной регистрации в Минюсте России и должны быть официально опубликованы в газете “Российские вести”, а также в Бюллетене нормативных актов федеральных органов исполнительной власти. Официальным также является указанный Бюллетень, распространяемый в электронном виде федеральным государственным унитарным предприятием “Научно-технический центр правовой информации “Система” Федеральной службы охраны РФ, а также федеральными органами государственной охраны.
Нормативные правовые акты федеральных органов исполнительной власти вступают в силу одновременно на всей территории РФ по истечении 10 дней после дня их официального опубликования, если самими актами не установлен другой порядок вступления их в силу. Указанные акты федеральных органов, не прошедшие государственную регистрацию, а также зарегистрированные, но не опубликованные в установленном порядке, не влекут правовых последствий как не вступившие в силу. На такие акты нельзя ссылаться и при разрешении трудовых споров.
В ч. 2 комментируемой статьи установлены случаи, при которых закон или иной нормативный правовой акт, содержащий нормы трудового права либо отдельные их положения, прекращают свое действие, а именно:
– истечение срока, что влечет за собой прекращение действия тех законов и иных нормативных правовых актов, в которых точно определен срок их действия во времени. При этом уточняется, что прекращается действие также отдельных положений, а не только указанных законов и нормативных правовых актов;
– вступление в силу другого акта равной или высшей юридической силы, когда прекращается применение (полностью либо частично) формально не отмененного нормативного правового акта. Поэтому приоритет отдается более позднему закону или иному нормативному правовому акту, но обязательно акту того же уровня либо имеющему большую юридическую силу, например постановление Правительства РФ – постановлением Правительства РФ или указом Президента РФ, федеральным законом;
– отмена (признание утратившим силу) данного акта либо отдельных его положений актом равной или высшей юридической силы. При этом необходимо иметь в виду, что закон или иной нормативный правовой акт подлежит отмене (признается утратившим силу) только законом или иным актом того же уровня либо более высокого уровня. В более позднем по сроку законе или акте указываются законы или акты, которые считаются утратившими силу (см., например, ст. 422 ТК).
Закон или иной нормативный правовой акт, вступивший в действие, как правило, не имеет обратной силы и применяется к отношениям, возникшим после его введения в действие. Исключение составляют те редкие случаи, когда в принятом акте прямо предусматривается его распространение на отношения, возникшие до введения этого акта в действие.
В ст. 12 ТК уточняется, что в отношениях, возникших до введения в действие закона или иного акта, указанный закон или акт применяется к правам и обязанностям, возникшим после введения его в действие. Соответственно, в ст. 424 ТК установлено, что ТК применяется к правоотношениям, возникшим после введения его в действие. Если правоотношения возникли до введения в действие ТК, то ТК применяется к тем правам и обязанностям, которые возникнут после введения его в действие. Например, если работник расторгает срочный трудовой договор после вступления в силу ТК, на него в полной мере распространяется ст. 80 ТК, согласно которой он вправе расторгнуть срочный трудовой договор по собственному желанию и должен предупредить работодателя за две недели об этом.
В ч. 6 комментируемой статьи уточняется, что действие коллективного договора, соглашения во времени определяется их сторонами в том порядке, как это установлено ТК (см. ст. ст. 43, 44, 47, 48 и коммент. к ним).
Согласно ч. 7 комментируемой статьи локальный нормативный акт вступает в силу с того дня, когда он принят работодателем, либо со дня, указанного в самом локальном нормативном акте. Порядок принятия локальных нормативных актов установлен ТК (см. ст. 8 и коммент. к ней). Локальный нормативный акт применяется к правоотношениям, возникшим после введения его в действие. Если правоотношения возникли до введения локального нормативного акта, то данный акт применяется к правам и обязанностям, которые возникают после введения его в действие.
В ч. 8 предусмотрены случаи прекращения действия локальных нормативных актов. Эти случаи охватывают: а) истечение срока действия, когда локальный нормативный акт был принят на определенный срок, т.е. точно определен срок его действия во времени; б) в связи с отменой (признанием утратившим силу) данного локального нормативного акта либо отдельных его положений другим локальным нормативным актом, например, принятие новых правил внутреннего трудового распорядка отменяет действовавшие у данного работодателя правила, либо отдельный раздел этих правил, принятый работодателем, ведет к отмене действовавшего раздела; в) вступление в силу закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, а также коллективного договора, соглашения ведет к прекращению действия локального нормативного акта, если законом или указанным актом, а также коллективным договором, соглашением установлен более высокий уровень гарантий работникам по сравнению с установленным локальным нормативным актом.
Другой комментарий к статье 12 ТК РФ
1. Комментируемая статья устанавливает правила действия трудового законодательства и иных актов, содержащих нормы трудового права, во времени, а именно определяет момент вступления нормативного акта в силу и прекращения его действия, а также распространение вновь принятого нормативного акта на отношения, возникшие до введения его в действие.
В соответствии с ч.1 ст.12 ТК РФ предусматривается два варианта вступления в силу закона или иного нормативного акта.
Во-первых, закон или иной акт, содержащий нормы трудового права вступает в силу со дня, указанного в самом акте. Сегодня это самый распространенный способ определения для вступления в силу нормативного акта. Примером может служить сам ТК РФ, в ст.420 которого определена дата вступления его в силу – 1 февраля 2002 года.
Достаточно часто закон или иной акт устанавливает разные даты вступления в силу отдельных положений (статей, глав, разделов) документа.
День вступления акта в силу может определяться конкретной датой или окончанием определенного самим актом периода после официального опубликования документа. Так, например, Федеральный закон от 30 июня 2006 года N 90-ФЗ, которым были внесены самые существенные изменения и дополнения в ТК РФ, вступил в силу по истечении 90 дней после его официального опубликования.
Во-вторых, если во вновь принятом законе или ином акте, содержащем нормы трудового права, отсутствует прямое указание на день вступления его в силу, то применяются общие правила вступления в силу законов и иных нормативных правовых актов. Эти правила, в свою очередь, установлены специальными законами или иными нормативными правовыми актами.
В соответствии со ст.6 Федерального закона от 14 июня 1994 года N 5-ФЗ “О порядке опубликования и вступления в силу федеральных конституционных законов, федеральных законов, актов палат Федерального Собрания” федеральные конституционные законы, федеральные законы вступают в силу одновременно на всей территории Российской Федерации по истечении десяти дней после дня их официального опубликования.
Общий порядок вступления в силу подзаконных нормативных правовых актов схож с аналогичным порядком применительно к федеральным законам. Так, в соответствии с Указом Президента РФ от 23 мая 1996 года N 763 “О порядке опубликования и вступления в силу актов Президента Российской Федерации, Правительства Российской Федерации и нормативных правовых актов федеральных органов исполнительной власти” нормативные правовые акты федеральных органов исполнительной власти вступают в силу одновременно на всей территории Российской Федерации по истечении десяти дней после дня их официального опубликования.
Важным условием вступления в силу нормативных правовых актов является их официальное опубликование. Официальным опубликованием федерального конституционного закона, федерального закона считается первая публикация его полного текста в “Парламентской газете”, “Российской газете”, “Собрании законодательства Российской Федерации” или первое размещение (опубликование) на “Официальном интернет-портале правовой информации” (www.pravo.gov.ru).
Нормативные акты органов государственной власти субъектов РФ также подлежат официальному опубликованию. Например, официальным опубликованием закона Санкт-Петербурга является первое размещение его полного текста на официальном сайте Администрации Санкт-Петербурга (www.gov.spb.ru) либо первая публикация его полного текста в печатном средстве массовой информации: в журналах “Вестник Администрации Санкт-Петербурга”, “Информационный бюллетень Администрации Санкт-Петербурга”, “Вестник Законодательного Собрания Санкт-Петербурга”, в газетах “Санкт-Петербургские ведомости”, “Петербургский дневник”, “Санкт-Петербургский курьер” (Закон Санкт-Петербурга от 16 июля 2010 года N 445-112 “Об обеспечении доступа к информации о деятельности государственных органов Санкт-Петербурга”).
2. Часть 2 комментируемой статьи фиксирует основания прекращения действия законов и иных актов, содержащих нормы трудового права:
– закон или иной нормативный правовой акт прекращают свое действие в связи с истечением срока. Данное основание встречается крайне редко, поскольку подавляющее большинство нормативных актов принимается без указания срока его действия;
– закон или иной нормативный правовой акт прекращает действие вступлением в силу другого акта равной или высшей юридической силы. “Это объясняется тем, что не всегда при принятии того или иного акта одновременно признаются утратившими силу соответствующие нормативные правовые акты. Поэтому в нормативном массиве всегда имеются акты, фактически утратившие силу, но формально не отмененные”;
________________
Комментарий к Трудовому кодексу Российской Федерации (постатейный). 5-е издание / Под ред. Ю.П.Орловского. М.: Контракт; Инфра-М, 2009.
– чаще всего нормативные правовые акты прекращают действие в связи с отменой (признанием утратившим силу) данного акта либо отдельных его положений актом равной или высшей юридической силы.
Данный способ является более предпочтительным, чем предыдущий, поскольку не создает неопределенности с действием отмененного акта и исключает коллизии норм старого и нового нормативного акта.
При этом должно соблюдаться условие, что нормативный акт может отменяться актом такой же или большей юридической силы. Так, федеральный закон может быть отменен только федеральным и федеральным конституционным законом; Указ Президента РФ – другим Указом или федеральным законом и т.д.
3. В следующих трех частях (3-5) комментируемой статьи определены особенности действия законов и иных нормативных правовых актов в зависимости от момента возникновения правоотношения, регулируемого трудовым законодательством.
Общее правило таково, что закон или иной нормативный правовой акт не имеют обратной силы и применяются для регулирования отношений, возникших после вступления их в силу.
Однако ТК РФ все же позволяет распространять нормативные акты на отношения, возникшие до введения их в действие, что может быть установлено, в частности, самим этим актом.
Иллюстрацией к этому может служить определение ВС РФ от 15 августа 2007 года N 7-Г07-10, которым указ Губернатора Ивановской области признан законным, несмотря на то, что он императивно определил дату выплаты установленной заработной платы с 1 октября 2006 года, то есть до введения этого акта в действие.
Следует отметить, что многие специалисты ставят под сомнение правомерность установления обратной силы закона, особенно если новый закон затрагивает права работника, тем более снижает уровень гарантий.
________________
См., например, Ершова Е.А. Конституция Российской Федерации как основополагающий источник трудового права // Трудовое право. 2006. N 11.
Важное правило закреплено в ч.5 комментируемой статьи. Вновь принятый нормативный правовой акт распространяется на права и обязанности, возникшие после введения его в действие.
Трудовые отношения очень часто носят длительный характер. За это время принимается множество нормативных правовых актов, затрагивающих права и обязанности работников. Это не означает, что эти акты не будут распространяться на данного работника. Например, отдельные работники, заключившие трудовой договор достаточно давно, могут быть уволены в соответствии с новым основанием п.7.1. ч.1 ст.81 ТК РФ, если не выполнят обязанность, например, по представлению сведений о своих доходах, расходах, об имуществе и обязательствах имущественного характера.
4. Части 6-8 отсутствовали в первоначальной редакции статьи и были введены в 2006 году Федеральным законом от 30 июня 2006 года N 90-ФЗ.
В данных нормах установлены правила действия во времени коллективных договоров, соглашений и ЛНА. Дополнение объясняется тем, что ст.5 ТК РФ включает эти акты в число источников трудового права, поэтому логично предусмотреть условия и их действия во времени тоже.
В отличие от нормативных правовых актов для коллективных договоров и соглашений предусмотрены общие правила вступления их в силу. В связи с этим день вступления в силу указанных документов должен быть предусмотрен самими этими документами. По сути, стороны коллективных договоров и соглашений должны договориться о дате начала действия документов. При этом стороны самостоятельно решают вопрос об обратной силе коллективных договоров и соглашений.
Правила действия ЛНА во времени во многом аналогичны таковым по отношению к законам и иным нормативным правовым актам.
Отличием является то, что при отсутствии специального указания в самом акте день вступления его в силу является следующим после дня принятия.
Также обращает на себя внимание то, что ЛНА прекращает свое действие вступлением в силу закона или иного нормативного правового акта, содержащего нормы трудового права, коллективного договора, соглашения только в случае, если указанные акты устанавливают более высокий уровень гарантий работникам по сравнению с установленным ЛНА.
Статья 12 ТК РФ. Действие трудового законодательства и иных актов, содержащих нормы трудового права, во времени
Статья 12 ТК отведена под объяснение того, как законодательство по трудовым вопросам действует в определённом временном промежутке. В целом она документирует актуальность актов, регулирующих трудовые взаимодействия, с позиций времени их действия и вступления в силу.
Трудовой кодекс Российской Федерации от 30.12.2001 N 197-ФЗ
Ключевые нюансы ст. 12 ТК
Начальная часть ст. 12 ТК указывает, что нормативный акт в области трудового права приобретает силу с момента, прописанного в самом акте или в том ФЗ, который посвящён описанию его действия.
Далее документируется окончание действия актов по трудовому праву. Они прекращают быть актуальными в следующих случаях:
- окончание срока их действия;
- принятие новых актов с равным или превосходящим статусом;
- отмена их действия актом с равным или превосходящим статусом.
В следующем абзаце законодатели сочли необходимым специально упомянуть, что акты по трудовому праву не обладают обратной силой, т.е. применяются лишь к отношениям, которые образовались после их введения в действие. Далее подчёркнуто, что исключения из данного правила возможны, но лишь если об этом особо упомянуто в самом акте.
В следующем абзаце говорится, что действие коллективного договора или соглашения во времени согласовывается сторонами на базе ТК.
Заключительная часть посвящена описанию временных параметров локального акта по трудовым взаимодействиям. Указано, что этот акт используется для регулирования отношений, возникших после его утверждения. Также его можно применять для регулирования прав и обязанностей, которые возникли после его ввода в действие, но принадлежат к отношениям, возникшим до этого момента. В конце по отношению к локальному акту перечислены случаи, когда он заканчивает свою актуальность – они практически совпадают с перечнем по прекращению действия правовых актов.
Вопросы действия ст. 12 ТК
На каком материале базируется определение сроков актуальности правовых актов по трудовой деятельности?
В основе ст. 12 ТК лежат принятый в 1994 году № 5-ФЗ, регулирующий порядок публикации и действия новых правовых актов, и выпущенный в 1996 году президентский указ № 763, также посвящённый этому вопросу. В этих документах указаны разнообразные, но типовые сроки начала действия новых актов. Так, новые ФЗ, если в них самих не упомянут конкретный срок, становятся актуальными после 10 дней со дня их опубликования в официальных источниках. Также срок начала их действия может определяться новыми актами, посвящёнными именно этому вопросу. Президентские указы обретают силу после того, как прошло семь дней с момента их официальной публикации – если в них не упомянут другой срок вступления в действие.
Как на практике определяется порядок прекращения действия нормативных актов, если об этом не упомянуто специально в новых ФЗ и других источниках права?
Не всегда специально оговаривается, что новый закон отменяет старый, посвящённый этому же вопросу, что иногда приводит к неопределённости в судебных и правовых спорах. В такой ситуации, если это специально не оговорено, действует определённое правило: новый или с более высоким статусом акт более актуален, чем старый, при возникновении противоречий между ними. Также в ст. 12 ТК указано и ещё одно основание для прекращения правовых актов: срок их действия, прописанный в самих актах.
Каково отношение новых актов по трудовому праву к обстоятельствам, возникшим до их принятия?
По общему правилу, которое также подтверждено в данной статье, новые законы не применяются к юридическим отношениям, возникшим до их ввода в действие. Единственное исключение – если иной порядок особо указывается в самом новом акте.
Каковы особенности отмены локальных правовых актов?
Имеются три способа окончания их действия:
- истечение определённого срока;
- отмена (замена) этого акта положениями нового;
- ввод в действие новых ФЗ, а также тех актов, которые содержат более высокий уровень гарантий сотрудникам.
Этот перечень практически совпадает с тем, который прописывает окончание действия нормативных актов по трудовым взаимоотношениям. Заметным исключением является упоминание об отмене локального акта по причине ввода в действие тех актов, которые содержат более качественные нормы гарантий персоналу.
Ручная установка Canon R5 / RF 2X TC / RF 100-500 дает потрясающие результаты! Секвенирование линьки взрослой смеющейся чайки «Arthur Morris / BIRDS AS ART
Эти два изображения были созданы 28 февраля 2021 года в парке Форт-ДеСото, Тьерра-Верде, Флорида, с помощью ручного объектива Canon RF 100-500mm f / 4.5-7.1L IS USM с удлинителем Canon Extender RF 2x (на 1000 мм) и рекламировал корпус 45-мегапиксельной беззеркальной цифровой камеры Canon EOS R5. Face Detection plus Tracking захватил и птичьи глаза и отлично отследил их. Однако оба изображения неправильно кадрированы из-за ошибки оператора. Щелкните изображение, чтобы увидеть его в увеличенном виде. Но не слишком волнуйтесь!Ваш браузер не поддерживает iFrame. |
Но не слишком волнуйтесь!
В сегодняшнем посте вы увидите несколько потрясающих изображений, сделанных на расстоянии 1000 мм с помощью портативной камеры Canon RF 100-500mm f / 4.Объектив 5-7.1L IS USM с удлинителем Canon RF 2x и широко разрекламированный корпус беззеркальной цифровой камеры Canon EOS R5 с разрешением 45 МП.
Но не слишком волнуйтесь:
1- Вам, вероятно, потребуется довольно короткая выдержка для создания резких изображений.
2 – Вы будете работать с очень маленькой диафрагмой – широко открытая диафрагма на 1000 мм составляет f / 14 – что потребует относительно высоких настроек ISO в любых условиях освещения, кроме яркого солнца.
3- Как видно из двух снимков экрана выше, правильно кадрировать изображение, когда его рука держит на расстоянии 1000 мм (20-кратное увеличение), чрезвычайно сложно.Это верно даже тогда, когда птица полностью неподвижна, как Смеющаяся Чайка, когда было создано изображение слева (вверху). Если птица каким-либо образом движется, кадрирование становится практически невозможным; Уимбрел (вверху справа) шел прямо передо мной. Я был немного жадным и в результате не сделал ни одного изображения, не обрезав кончик банкноты. (У меня есть план по восстановлению изображения Whimbrel; если мне это удастся, вы когда-нибудь увидите результат здесь, в блоге.
Что случилось?
Во вторник утром я заметил последнего выжившего детеныша журавля (из четырех вылупившихся в этом сезоне) в Южном болоте вместе с двумя взрослыми особями.Судя по всему, дела идут очень хорошо. Я сделал несколько красивых снимков взрослого журавля, взъерошивающегося при мягком свете, а затем рано отправился домой.
Я решил сделать презентацию видеогалереи Camtasia для электронного руководства пользователя камеры BAA Canon R5. У меня ушло меньше часа на его запись, больше двух часов на редактирование и рендеринг для публикации и более трех часов на загрузку. Хотя закат выглядел несколько обнадеживающим, я решил остаться дома и продолжить работу. Происходит много всего.
Ветеран множественной IPT и дорогая подруга Донна Бурдон сегодня летит из Мемфиса в Орландо для трехдневного инструктажа в полевых условиях и помогает с ее новым R5 (который сейчас стоит на моем обеденном столе).Джим заберет Донну после обеда. Надеемся на достойную съемку заката.
Когда фотография маленького журавля провалилась из-за потери двух жеребят и одного птенца, друг BAA Клеменс Ван дер Верф подъезжает из Вест-Палм со своей лодкой на буксире. Мы планируем встретиться с ним и Lake Blue Cypress в четверг утром. Партнер Донны Бев Стилл встретит нас у меня дома в субботу, и все трое пользователей отправятся в Титусвилл на IPT на острове Мерритт.
В дополнение к видеогалерее я проделал дополнительную работу над руководством по R5.Брюс Дудек продолжает быть отличным помощником и ресурсом, несмотря на то, что он продолжает задавать острые вопросы и вносить предложения, требующие полного переписывания основных частей руководства. За это я его благодарю.
Сейчас аккумулятор для моей новой беззеркальной камеры SONY Alpha a-1 стоит на зарядном устройстве. Хорошая новость заключается в том, что он требует такой же аккумулятор, что и корпуса серии a9 / a7r. Я набираю 6:29 утра. Если я смогу закончить и опубликовать этот блог, я надеюсь, что у меня будет несколько минут для беглой настройки a1 и немного спуститься к озеру, прежде чем вернуться домой, чтобы работать над руководством R5.
Пожалуйста, не спрашивайте мое мнение о людях, которые постоянно ноют, Мне нечего делать!
Сегодня среда, 10 марта 2021 года. Прогноз на это утро – переменная облачность с легкими ветрами с востока / северо-востока. Где бы вы ни были и чем бы вы ни занимались, я надеюсь, что у вас будет отличный день.
На подготовку этого сообщения в блоге ушло чуть больше двух часов, и семьдесят девять дней подряд выходит новый. Не забудьте использовать мои партнерские ссылки B&H или сэкономить деньги в Bedfords, используя код скидки BIRDSASART при оформлении заказа.
Б / у шестерня BAAСтраница подержанного снаряжения продолжает оставаться очень активной. Страница BAA Used Gear Page – это место, где можно продать ваше бывшее в употреблении фотооборудование. Мы поможем вам продать ваше снаряжение быстро на 30–70% или больше, чем то, что предлагают большие парни… Сомневаетесь? Ознакомьтесь со списком последних продаж внизу страницы.
Объектив Canon EF 500 f4 / L IS II USMКирк Ститт предлагает объектив Canon EF 500 f4 / L IS II USM в отличном плюсовом состоянии по очень низкой цене в 5349 долларов.00. Распродажа включает в себя покрытие LensCoat, заднюю крышку объектива, корпус объектива, переднюю крышку объектива, ремешок объектива и застрахованную наземную доставку через крупного курьера только по нижним 48 адресам в США. Ваш товар не будет отправлен до тех пор, пока ваш чек не будет подтвержден, если не будут приняты другие меры.
Пожалуйста, свяжитесь с Кирком Ститтом по электронной почте или по телефону 1-900-800-9898 (горный часовой пояс).
Благодаря успеху беззеркальных корпусов Canon EOS R5 и R6, супертележки серии II стали пользоваться большим спросом.Супертелеобъективы 500 f / 4 уже много десятилетий являются самыми популярными в мире объективами для съемки птиц, природы, дикой природы и спорта. Версия Canon Series II – легкая, быстрая, сверхчеткая и дает потрясающие изображения как с 1.4X, так и с 2X III TC. 500 II относительно невелик, некоторым людям его легко держать в руке, с ним намного легче путешествовать, он фокусируется ближе, чем 600 II или 600 III !. Наконец, и вы можете найти это удивительным, увеличение у 500 II такое же, как у 600 II:.15X. Как такое возможно? Увеличение рассчитано при минимальном расстоянии фокусировки объектива – 12,14 футов (3,7 метра) для 500 II и 14,77 футов (4,5 метра) для 600 II. Проще говоря, 500 II фокусируется более чем на два фута ближе, чем 600 II. Пожалуйста, не откладывайте, если вы серьезно интересуетесь объективом Кирка, так как он должен быстро распродаться. artie
Электронное руководство пользователя камеры Canon EOS R5
Одиннадцать дней назад я разослал около дюжины копий почти готового электронного руководства пользователя камеры Canon EOS R5 для ознакомления с людьми, которые ранее получали бесплатные копии электронного руководства по автофокусировке R5 / R6, используя мои партнерские ссылки для покупки их беззеркалки Canon.В том же духе я связывался со всеми, кто на прошлой неделе купил R5 / R6 AF e-Guide. Совсем недавно людям, купившим R5 / R6 AF Guide, была предложена возможность приобрести копию руководства перед публикацией для просмотра. Многие люди ответили содержательными отзывами, в том числе ветеран IPT Уоррен Хоу.
Поскольку камера и меню настолько сложны, это руководство потребовало большого количества исследований, много времени и много усилий (и будет продолжаться до тех пор, пока оно не будет завершено).Его нужно закончить к первой неделе марта. 2021. Последнее обновление электронного руководства R5 / R6 AF стало частью полного электронного руководства пользователя камеры; он уже был переработан и расширен.
Полное руководство пользователя камеры будет продаваться по цене 75 долларов США. Люди, купившие свое оборудование Canon по моим ссылкам, получат скидку в размере 65 долларов США; Путеводитель будет стоить им номинальные 10 долларов. Люди, которые потратили более 7500 долларов на беззеркальное оборудование Canon, используя одну из моих партнерских ссылок (B&H или Bedfords), получат электронное руководство пользователя камеры бесплатно.Люди, которые приобрели электронное руководство R5 / R6 AF, получат скидку в размере 10 долларов США на электронное руководство пользователя. Лучшая новость в том, что конец близок.
Политика скидок на новые и лучшие Bedfords!
Теперь вы можете сэкономить 3% на всех покупках фотооборудования Bedfords, введя код купона BIRDSASART при оформлении заказа. Ваша скидка будет применена к вашей сумме до налогообложения. Кроме того, используя код, вы получите 2-дневную доставку авиапочтой через Fed Ex.
Купите телеконвертер Nikon AF-S TC-14E III и сэкономьте 14 долларов.99. Купите Canon EOS R5, и ваша скидка составит 116,97 долларов. Купите объектив Sony FE 600mm f / 4 GM OSS и сэкономьте 389,94 доллара! Ваша покупка Bedford не должна превышать 1000 долларов США, чтобы вы могли получить скидку. Чем больше вы тратите, тем больше экономите.
Напоминание об экономии денег
Многие знают, что если вам нужна горячая фотография, которой нет в наличии в B&H, и вам будет предложена бесплатная доставка по воздуху на второй день, лучше всего щелкнуть здесь, разместить заказ в Bedfords и ввести код купона BIRDSASART на странице проверить.Если товара нет в наличии, свяжитесь со Стивом Элкинсом по электронной почте или по его мобильному телефону по телефону (479) 381-2592 (центральное время). Обязательно укажите код купона BIRDSASART и используйте его для своего онлайн-заказа, чтобы сэкономить 3% и получить бесплатную 2-дневную авиаперевозку. Стив великолепно доставлял людям горячие товары, которых нет в наличии в B&H и повсюду. Листы ожидания в крупных магазинах могут составлять год или больше для товаров, которые трудно достать. Стив наверняка достанет тебе снаряжение задолго до этого. В течение прошлого года он помогал людям из BAA Blog заполучить такие вещи, как SONY a9 ii, объектив SONY 200-600 G OSS, Canon EOS R5, объектив Canon RF 100-500 мм и Nikon 500 мм PF. .Стив представительный, услужливый и всегда готов доставить удовольствие.
Вопросы и советы по передаче
Слишком много людей, посещающих IPT BAA (помните их?), И десятки фотографов, которых я вижу в полевых условиях и на BPN, по незнанию используют неправильное оборудование, особенно когда дело касается штативов и особенно штативных головок … Пожалуйста знайте, что я всегда рад ответить на ваши вопросы об оборудовании по электронной почте. Эти вопросы могут касаться систем, корпусов камер, аксессуаров и / или выбора и решений объектива.
Это изображение было создано 28 февраля 2021 года в парке Форт ДеСото, Тьерра-Верде, Флорида. Используя технику коленной подушки, сидя на мокром песке, я работал с портативным объективом Canon RF 100-500mm f / 4.5-7.1L IS USM с удлинителем Canon Extender RF 2x (на 1000 мм) и широко разрекламированным 45MP Canon EOS. R5 Корпус беззеркальной цифровой камеры. ISO 800. Экспозиция определяется тестовой экспозицией, гистограммой и оценкой миганий: 1/800 секунды при f / 18 (остановлено на 2/3 ступени) в ручном режиме.RawDigger показал, что этот недоэкспонирован менее чем на 1/3 ступени. AWB в 8:35 солнечным утром. УстройствоFace Detection plus Tracking отлично захватило и отследило глаз чайки. Щелкните изображение, чтобы увидеть его в увеличенном виде. Изображение №1: Веселая чайка только начинает линять, превращаясь в оперение для размножения / портрет головыВаш браузер не поддерживает iFrame. |
Спасибо, Стив Кинг!
В последний день моего недавнего отпуска машиниста в Форт-Де-Сото Стив Кинг присоединился ко мне на утреннем полевом инструктаже.У нас был отличный день. Когда он упомянул, что берет с собой свой Canon Extender RF 2x, я подумал: Теперь это кажется совершенно непрактичным. Тем не менее, когда солнце выглянуло примерно в 8:15, я попросил одолжить его RF 2X, и Стив любезно подошел к своему рюкзаку и передал его. Короче говоря: я заказал один у Стива Элкинса на следующий день. Как и все, что связано с R5, удвоитель ВЧ достать сложно. Моя должна быть здесь в пятницу, как раз перед отъездом на IPT на острове Мерритт.
| Устройство Face Detection plus Tracking отлично захватило и отследило глаз чайки. Щелкните изображение, чтобы увидеть его в увеличенном виде. Изображение №1A: снимок экрана DPP 4 для «Веселой чайки» , которая только начинает линять и превращается в оперение / портрет головы изображениеВаш браузер не поддерживает iFrame. |
Довольно удивительно
Как ни странно, функция распознавания лиц и следящий автофокус отлично справились с f / 14 даже на 1000 мм.Когда камера была настроена, как описано в почти готовом электронном руководстве пользователя камеры Canon EOS R5 BAA, производительность системы автофокусировки заставила меня расслабиться. Как отмечалось выше, огромная проблема заключалась в правильном кадрировании изображений. Я работал с 2X около 30 минут и создал около 700 изображений. Более 400 из них были мгновенно удалены, потому что они были ужасно подставлены.
Обратите внимание на красную рамку автофокусировки прямо на глазу чайки. Даже на неправильно оформленных изображениях, которые открывали этот пост в блоге, система автофокусировки поразила глаз.
| Изображение # 1B: Topaz DeNoise на Смеющаяся чайка только начинает линять, превращаясь в оперение / портрет головы изображение Ваш браузер не поддерживает iFrame. |
Topaz DeNoise AI on DeNoise на Auto
Не забудьте нажать на изображение, чтобы увидеть феноменальную работу, которую DeNoise AI проделал с фоновым шумом, а также с шумом в тенях.При использовании DeNoise или Low Light гладкая, как у ребенка, кушетка является нормальным явлением. Будет интересно посмотреть, что произойдет, когда я опробую установку Canon на расстоянии 1000 мм в условиях низкой освещенности…
Отличные новости о топазе!
Люди, которые используют ссылку BAA Topaz для покупки Sharpen AI, DeNoise AI или Utility Bundle (или любых других плагинов Topaz), получат 15% скидку, введя код ARTHUR15 при оформлении заказа. Если товар продается (как обычно), вы экономите 15% от продажной цены! Чтобы получить скидку, вы должны использовать мою ссылку и ввести код скидки.Обязательно начните с этой ссылки.
Те, кто приобретает Sharpen AI, DeNoise AI или любые другие плагины Topaz, используя мою ссылку и затем вводя код ARTHUR15 при оформлении заказа, могут отправить электронное письмо с запросом на короткое электронное руководство Приступая к работе с Topaz . Пожалуйста, приложите копию квитанции Topaz, в которой указана скидка. Помимо основ, в руководстве объясняется, как установить подключаемые модули, чтобы они отображались в меню фильтров Photoshop.
Это изображение также было создано 28 февраля 2021 года в парке Форт ДеСото, Тьерра-Верде, Флорида.Опять же, используя технику коленной подушки, сидя на мокром песке, я работал с портативным объективом Canon RF 100-500mm f / 4.5-7.1L IS USM с Canon Extender RF 2x (на 1000 мм) и широко разрекламированным 45MP. Корпус беззеркальной цифровой камеры Canon EOS R5. ISO 800. Экспозиция определяется тестовой экспозицией, гистограммой и оценкой миганий: 1/640 секунды при f / 20 (остановка на одну ступень) в ручном режиме. RawDigger показал, что этот недоэкспонирован менее чем на 1/3 ступени. AWB в 8:28 солнечным утром. УстройствоFace Detection plus Tracking отлично захватило и отследило глаз чайки. Щелкните изображение, чтобы увидеть его в увеличенном виде. Изображение № 2: Веселая чайка, линяющая в брачное оперение / портрет головыВаш браузер не поддерживает iFrame. |
Далее
Птица на этом изображении немного дальше от линьки до оперения размножения. Даже когда птица начала кричать, у системы автофокусировки не было проблем с отслеживанием глаза.Возможно, что еще более поразительно, изображения на 1000 мм были невероятно резкими и показывали хрустящую кожу глаз, которую я люблю. А точная детализация (FFD) была нереальной.
Остановка?
Кто-то может спросить, Зачем останавливаться на f / 18 и f20, когда широко открытая диафрагма на 1000 мм составляет f / 14? . Люди должны помнить, что потребность в дополнительной глубине резкости больше всего, когда вы работаете с большим фокусным расстоянием в упор. На расстоянии шести футов при ширине 1000 мм общая глубина резкости равна 0.0 футов. При диафрагме f / 20 он увеличивается до 0,01 фута. Не намного, но лучше, чем ничего.
Это изображение также было создано 28 февраля 2021 года в парке Форт ДеСото, Тьерра-Верде, Флорида. Опять же, используя технику коленной подушки, сидя на мокром песке, я работал с портативным объективом Canon RF 100-500mm f / 4.5-7.1L IS USM с Canon Extender RF 2x (на 902 мм) и широко разрекламированным 45MP. Корпус беззеркальной цифровой камеры Canon EOS R5.ISO 800. Экспозиция определяется тестовой экспозицией, гистограммой и оценкой миганий: 1/640 секунды при f / 20 (остановка на одну ступень) в ручном режиме. RawDigger показал, что этот недоэкспонирован менее чем на 1/3 ступени. AWB в 8:24 солнечным утром. УстройствоFace Detection plus Tracking отлично захватило и отследило глаз чайки. Щелкните изображение, чтобы увидеть его в увеличенном виде. Изображение № 3: Веселая чайка, линяющая в брачное оперение / портрет головыВаш браузер не поддерживает iFrame. |
Девять ярдов
Эта птица почти полностью в брачном оперении с полностью угольно-черной шапкой, винно-красным клювом и белыми полумесяцами. На фоне голубой воды они – зрелище. Большинство смеющихся чаек будут в полном оперении в апреле. Они, а также королевские крачки и сэндвич-крачки будут демонстрировать различное племенное поведение на обоих IPT. К ним относятся демонстрации ухаживания и кормление, копулятивные стойки и совокупления.
Подведение итогов
Добавление телеконвертера RF 2X к телеконвертеру R5 / RF 100-500 / RF 1.4X значительно расширяет универсальность и без того великолепной беззеркальной установки Canon. Как и в случае с RF 1.4X TC, масштабирование шире отметки 300 мм невозможно. Это дает вам сверхчеткий объектив 600-1000 мм, который можно держать в руке, который предлагает невероятную автофокусировку (хотя и с небольшой диафрагмой с соответственно высокими значениями ISO.
Обратите внимание, что вы устанавливаете TC, вы должны иметь настройку 300 мм (или больше).
Все изображения были созданы в Форте ДеСото в апреле или начале мая. Щелкните карточку, чтобы просмотреть ее в увеличенном виде. Карта IPT Fort DeSoto A |
Источник Форт ДеСото IPT № 1
Форт ДеСото Спринг ИПТ №1. 3 1/2 ДНЯ. СБ 10 апреля до утренней сессии TEUS 13 апреля 2021 года. 1499 долларов США включают три обеда.Лимит: 6. Открытий 5.Хотя ДеСото – одно из немногих мест для фото, которое может быть отличным в любой день года, весной оно просто сияет. Многие болотные птицы и кулики находятся в полном оперении. Крачки и чайки ухаживают и совокупляются. У нас будет много возможностей для фотографирования в полете. Я упоминал, что многие птицы глупо приручены?
Для удержания вашего места на IPT требуется депозит в размере 499 долларов США. Вы можете отправить нам чек (выписанный на «BIRDS AS ART») здесь: BIRDS AS ART, PO Box 7245, Indian Lake Estates, FL, 33855, или позвонить Джиму или Дженнифер в офис с кредитной картой по телефону 863-692. -0906.Ваш баланс, оплачиваемый только чеком, подлежит оплате сразу после регистрации. Если у вас есть какие-либо вопросы, свяжитесь со мной по электронной почте. Если вы отмените подписку из-за проблем с COVID 19, все ваши платежи будут возвращены.
Все изображения были созданы в Форте ДеСото в апреле или начале мая. Щелкните карточку, чтобы просмотреть ее в увеличенном виде. Карта IPT Fort DeSoto B |
Источник Форт ДеСото IPT № 2
Источник Форт ДеСото ИПТ №2.3 1/2 ДНЯ. С понедельника, 26 апреля, до утренней сессии 29 апреля 2021 года. 1499 долларов США включают три обеда. Лимит: 6 / Открытий: 5.Я не только знаком со всеми тремя основными системами камер, используемыми в США – Nikon, Canon и SONY (извините, Энди Роуз…), я использовал все три в течение последних четырех лет. К ним относятся как SONY, так и Canon беззеркальные. На обоих этих IPT вы узнаете, как получить наилучшую экспозицию, как получить максимальную отдачу от вашей системы автофокусировки и как приблизиться к свободным и диким птицам.И многое другое.
Для удержания вашего места на IPT требуется депозит в размере 499 долларов США. Вы можете отправить нам чек (выписанный на «BIRDS AS ART») здесь: BIRDS AS ART, PO Box 7245, Indian Lake Estates, FL, 33855, или позвонить Джиму или Дженнифер в офис с кредитной картой по телефону 863-692. -0906. Ваш баланс, оплачиваемый только чеком, подлежит оплате сразу после регистрации. Если у вас есть какие-либо вопросы, свяжитесь со мной по электронной почте. Если вы отмените подписку из-за проблем с COVID 19, все ваши платежи будут возвращены.
Все изображения были созданы в Форте ДеСото в апреле или начале мая. Щелкните карточку, чтобы просмотреть ее в увеличенном виде. Карта IPT Fort DeSoto C |
Ожидаемые виды весенних ИПЦ Fort DeSoto
Если повезет, нам удастся сфотографировать следующие виды: Смеющаяся, Колклювая, Сельдь и Малая Черноспинная чайка; Королевская, сэндвич-крачка и крачка Форстера: большая, снежная, а также бело-темная морфа, красноватая цапля и большая синяя цапля, маленькая синяя и трехцветная цапля; Желто-коронованная ночная цапля, лесной аист, розовая колпица и коричневый пеликан.Мы увидим и сфотографируем множество куликов, в том числе американского кулика-сорока, чернобрюхого, вильсоновского, полуалматого, снежного и трубчатого зуек, мраморного Годвита, Виллета, чернозобика, красного узла, песочного песочника, а также западного кулика и, возможно, белоснежного кулика.
Подпишитесь на оба IPT и получите скидку в 200 долларов. Большинство из нас будет жить в соседнем Галфпорте.
Опечатки
Со всеми сообщениями в блоге, не стесняйтесь писать по электронной почте или оставлять комментарии относительно любых опечаток или ошибок.
Нагрев электронов в высокочастотных емкостных разрядах при атмосферном и субатмосферном давлениях
Среднеквадратичный ток в зависимости от действующего напряжения ( I среднеквадратичное значение – В среднеквадратичное значение ) и среднеквадратичное значение тока в зависимости от мощности в плазме ( I rms – P dis ) кривые показаны на рис.1 (а, б) соответственно. Поскольку все разряды работали в аномальном α-режиме, V rms и P dis почти линейно пропорциональны I rms . Как показано на рисунке, доступные диапазоны V rms и P dis уменьшаются с уменьшением давления. Наклон кривых I rms – V rms кривых немного увеличивается с уменьшением давления.Согласно одномерной (1-D) простой модели последовательной цепи резистор-конденсатор, которая является приемлемой моделью для емкостных разрядов атмосферного давления 6 , наклон I среднеквадратичного значения – В Кривая среднеквадратичного значения составляет примерно \ (1/2 {\ rm {\ pi}} (13,56 [{\ rm {MHz}}]) / (1,52 {\ varepsilon} _ {0} S / d) \), где ε 0 – диэлектрическая проницаемость в вакууме, S – площадь поперечного сечения плазмы, а d – толщина оболочки.Следовательно, увеличение наклона при уменьшении давления указывает на увеличение толщины оболочки. Следовательно, поскольку падение напряжения на оболочке увеличивается с увеличением толщины оболочки при том же токе разряда, ВЧ-мощность, которая рассеивается в плазме, уменьшается с уменьшением давления газа, как показано на рис. 1 (b). Аналитическое решение для ударной оболочки 17 представляет соотношение между давлением газа, p , толщиной оболочки, s m .{-1} \) – длина свободного пробега ионов для разряда в аргоне, δ D – длина Дебая электрона, Дж, – плотность высокочастотного тока, проходящего через оболочку, e – элементарный заряд, f – частота возбуждения, n 0 – плотность электронов на краю оболочки. Это решение показывает, что толщина оболочки пропорциональна p -1/2 . Общая толщина оболочки, которая была оценена с помощью модели схемы с использованием разности фаз между напряжением и током и других электрических факторов, представлена как функция I среднеквадратичного значения на рис.1 (в). Максимальная толщина оболочки 564 мкм при 200 Торр примерно в два раза больше, чем минимальная толщина оболочки 290 мкм при 760 Торр. Как интуитивно и аналитически ожидалось, толщина оболочки емкостного разряда в аргоне увеличивается с уменьшением давления при постоянном токе разряда.
Рисунок 1Электрические характеристики ВЧ разряда в аргоне при 200–760 Торр. ( a ) I rms – V rms and ( b ) I rms – P dis характеристики; ( c ) толщина оболочки емкостных разрядов аргона при различных давлениях.Крайняя левая и крайняя правая точки данных для разряда 200, 300, 400 Торр указывают минимальные и максимальные достижимые условия, соответственно, в аномальном α-режиме, тогда как максимальное рабочее состояние α-режима для разряда 760 Торр не представлено. из-за ограниченной мощности источника питания.
Далее обсуждается взаимосвязь между давлением газа и электронными свойствами при давлении от атмосферного до субатмосферного. Во-первых, на рис.2 (a, b) соответственно (двумерное распределение нейтрального тормозного излучения и T e можно найти как дополнительный рис. S1). Измеренные профили T e возле каждого электрода частично не согласуются с результатами численного моделирования 18,19 . Профили, представленные на рис. 2 (а), показывают, что максимум T e существует немного в стороне от электродов, а T e уменьшается как по направлению к электродам, так и по объему.Для сравнения, результаты моделирования показывают, что T e в плазменной оболочке (от поверхности электрода до границы плазменной оболочки; местоположение самого высокого T e считается плазменной оболочкой. граница в этой статье) является самым высоким и обычно превышает 4 эВ. Это несоответствие в области оболочки может быть связано с немаксвелловским характером распределения электронов по энергиям, особенно вблизи электродов. Неопределенность в электронной диагностике, используемой в этой работе, увеличивается, когда функция распределения электронов по энергиям искажается от максвелловского распределения, поскольку коэффициент излучения нейтрального тормозного излучения был рассчитан на основе максвелловского распределения электронов по энергиям.В плазменном слое немаксвелловское распределение может быть вызвано холодными электронами; они образуются в области оболочки в результате процессов ионизации, инициируемых вторичными электронами, испускаемыми металлическим электродом или диэлектрическими поверхностями. Таким образом, оценочные значения n e и T e в непосредственной близости от электродов [см. Рис. 2 (a, b)] могут отклоняться от реальных значений.
Рисунок 2Зависимость электронных характеристик от давления газа.Профили усредненные по времени ( a ) T e и ( b ) n e по оси, перпендикулярной электродам; электронная концентрация ( c ) и температура в центре газового зазора на профилях как функция давления газа. Все случаи при каждом давлении соответствуют крайним правым данным характеристических кривых на рис. 1. Цветные стрелки в ( a , b ) указывают толщину оболочки, приведенную на рис.1 (в).
При атмосферном давлении n e и T e более или менее постоянны во всей объемной плазме, и значения составляют приблизительно 10 12 см −3 и 2,5 эВ, соответственно, кроме электродов. Быстрое изменение n e и T e возле электрода происходит из-за частых столкновений между электронами и нейтралами, которые мешают энергичным электронам перемещать расстояние между электродами.По мере уменьшения давления длина свободного пробега электрона увеличивается, что приводит к плавному профилю во всем газовом зазоре. Как обсуждалось в предыдущем абзаце, расстояние от самого высокого T e от электрода, которое соответствует ширине оболочки, увеличивается с уменьшением давления [см. Фиг. 1 (c)]. Заметная разница между профилями n e и T e наблюдается на рис.2 (а, б) при изменении давления газа, а разница представлена на рис.2 (в). Графики n e и T e , представленные на рисунке, представляют значения в центре газового зазора для каждого давления. Как показано на рисунке, T e уменьшается (с 2,5 до 1,1 эВ), а n e увеличивается (с 1,3 × 10 12 до 1,3 × 10 13 см −3 ) с снижение давления. Эту связь n e и T e с давлением можно интуитивно интерпретировать следующим образом.По мере снижения давления газа электроны и метастабильные атомы Ar, которые образуются на границе плазмы и оболочки, могут достаточно быстро диффундировать, чтобы преодолеть радиочастотное осциллирующее поле из-за увеличенной длины свободного пробега, тем самым они перемещаются дальше в направлении электрода и основной области плазмы. . Кроме того, вблизи атмосферного давления преобладающим механизмом нагрева электронов является омический (столкновительный) нагрев из-за частых столкновений частиц. Таким образом, нагрев электронов в значительной степени определяется электрическим полем; я.е., распределения n e и T e зависят от распределения электрического поля и наоборот. Другими словами, образование электронов в области усиленного поля, которая создается объемными зарядами на границе плазма-оболочка, ослабевает с уменьшением давления во время схлопывания оболочки. В результате профиль n e становится выпуклым профилем с максимумом в объеме плазмы при уменьшении давления вместо слабо вогнутого профиля с двумя максимумами около электродов.Учитывая баланс мощности, профили T e могут быть оценены из профилей n e . Концентрация электронов увеличивается с уменьшением давления в объеме плазмы, и, следовательно, мощность, поглощаемая одним электроном, уменьшается в объеме плазмы.
Для дальнейшего понимания кинетики электронов и структур нагрева в радиочастотном осциллирующем поле можно использовать профили с пространственным и фазовым разрешением атомной линии T e и Ar I (2p → 1s, 696.5 нм и 706,7 нм) излучение получали с помощью камеры с усиленным устройством с зарядовой связью (iCCD) со сверхбыстрым стробированием (см. Раздел «Материалы и методы» и «Дополнительные материалы» для получения подробной информации о методике визуализации структуры электронного нагрева). Пространственно-временная эволюция непрерывного излучения T e , излучение линии Ar I в емкостных разрядах аргона, работающих при 200, 300, 400, 760 Торр, показаны в каждом столбце рис. 3.
Рис. 3Визуализация структуры электронного нагрева с наносекундным разрешением.Пространственно-временная эволюция непрерывного излучения 514,5 нм (1-я колонка), T e (2-я колонка), эмиссия Ar I (3-я колонка) при ( a ) 760 Торр, ( b ) 400 Торр, () c ) 300 торр, ( d ) 200 торр. Интенсивности непрерывного излучения и излучения Ar I нормированы на максимальную интенсивность, а единицей измерения T e является эВ. Цветные полосы расположены с правой стороны каждого изображения.
Изображения нейтрального тормозного излучения демонстрируют периодическое поведение границы плазменного слоя и структуры нагрева электронов для всех давлений газа, а профили излучения T e и Ar I явно показывают зависимость пространственно-временного поведения от давления электроны.Как показано на рис. 3 (а), континуальная эмиссия на длине волны 514,5 нм и T e увеличиваются во время фаз расширения и отступления оболочки при 760 Торр, и их профили имеют симметричную и нелокальную структуру по отношению к центру. газового промежутка, что свидетельствует об одновременном нагреве электронов вблизи обоих электродов. Аналогичное распределение обнаружено в пространственно-временной эволюции излучения Ar I, которое показано на правом правом изображении на рис. 3 (а). В условиях высокого давления нагрев электронов происходит из-за образования области с усиленным полем, вызванной космическими электронами и ионами на отступающей кромке слоя.Из-за высокой частоты столкновений движение электронов ограничено, и в результате локализованное электрическое поле, индуцированное космическими электронами, ускоряет электроны по направлению к электроду во время схлопывания оболочки. Хотя нагревание края отступающей оболочки незначительно в разрядах низкого давления 20 , аналогичный механизм нагрева наблюдался, когда электроны подвергались повышенным столкновениям в присутствии молекулярных газов 21 . Однако нагрев электронов сопровождается инверсией поля во время отходящей оболочки в разрядах низкого давления 21 , тогда как инверсия поля в отходящей оболочке емкостного высокочастотного разряда при атмосферном давлении 22 отсутствует.Как показано на рис. 3 и подробно показано на дополнительном рис. S2, интенсивность излучения и T e во время схлопывания оболочки становятся ниже, чем во время расширения оболочки, поскольку давление уменьшается, поскольку заряженные частицы, включая электроны, могут достаточно диффундировать. быстро в течение половины периода радиочастоты. Численное моделирование, решающее одномерные уравнения жидкости 22 , показало, что нагрев в окрестности отступающей оболочки быстро уменьшается с уменьшением давления, что вполне согласуется с нашими наблюдениями.
Заметной особенностью является зависимость профиля нагрева электронов от давления в направлении, перпендикулярном электродам. Как видно из усредненного по времени распределения T e [см. Дополнительный рис. S1 (e – h) и рис. 2 (a)], температура электронов в основной области плазмы уменьшается с понижением давления, что приводит к кратерообразная форма профиля. Как обсуждалось выше, омический нагрев, вызванный областью с усиленным полем, созданной объемным зарядом, уменьшается с уменьшением давления, что приводит к уменьшению T e .
Как показано в крайнем левом столбце на рис. 3, ширина области слабой интенсивности, соответствующей обедненным электронами областям около электродов (краям оболочки), увеличивается с уменьшением давления. Этот результат согласуется с соотношением между толщиной оболочки и давлением, полученным из усредненных по времени профилей T e и характеристик I rms – V rms , как показано на дополнительном рис. S1 и рис. . 1 (в).
Ответ клеток нейробластомы на радиочастотные токи в зависимости от частоты сигнала | BMC Cancer
Клеточная культура
Клеточная линия нейробластомы NB69 (лот № 03I019 / 2008, товар № 902) была приобретена из Европейской коллекции аутентифицированных клеточных культур (ECACC, Солсбери, Великобритания). Клетки периодически тестировались на загрязнение микоплазмой (ПЦР) и реакцию на химическое и физическое лечение, включая цитостатические агенты или гипертермию.
Клетки высевали в 75 см. 2 культуральных колб, содержащих среду D-MEM (Biowhittaker, Lonza, Verviers, Бельгия) с добавлением 10% (об. / Об.) Фетальной бычьей сыворотки, 1% L-глутамина и 1% пенициллина. фунгизон (Гибко, Инвитроген, Камарилло, Калифорния, США).Клетки выращивали в инкубаторе (Forma Scientific, Thermo Fisher, Waltham, MA, USA) при 37 ° C, 5% CO 2 , влажной атмосфере. Каждый седьмой день после слияния культуру пропускали путем отделения клеток 0,05% трипсина + 0,02% ЭДТА (Sigma, Сент-Луис, Миссури, США) в HBSS и посева их в новую колбу. Остальные клетки помещали в чашки Петри диаметром 60 мм (Nunc, Роскилле, Дания) при плотности 8160 клеток / см 2 . Для иммунофлуоресцентного анализа клетки высевали на покровные стекла, помещенные внутрь чашек Петри.
Электрообработка
Электрообработка применялась на 4-й день после посева. Система экспонирования подробно описана в предыдущих статьях [13, 18, 19]. Вкратце, электрический ток подавали с помощью пар стерильных электродов из нержавеющей стали, специально разработанных для стимуляции in vitro, которые помещали внутри чашек Петри. Для воздействия CRET пары электродов, вставленные в экспериментальные чашки, были последовательно подключены к многочастотному генератору сигналов (INDIBA®, Барселона, Испания), специально спроектированному для подачи высокочастотных электрических токов в диапазоне 350–650 кГц.Для фиктивного воздействия пары электродов, помещенные во все контрольные чашки, также были подключены к генератору, хотя они оставались обесточенными. Схема стимуляции состояла из 5-минутных импульсов 350 кГц, 448 кГц, 570 кГц или 650 кГц, синусоидального тока, подаваемого с субтепловой плотностью 50 мкА / мм 2 . За каждым импульсом следовала пауза без стимуляции либо 0 минут, либо 25 минут (краткосрочные сеансы лечения), либо 3 часа и 55 минут (другие виды лечения). За исключением кратковременного лечения, описанный цикл между импульсами повторялся с суммарными интервалами 4, 12 или 24 часа.Культуры выращивали в двух отдельных идентичных инкубаторах CO 2 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Параметры стимуляции и атмосфера внутри инкубаторов (температура: 37 ° C, относительная влажность: 90% и CO 2 : 5%) постоянно контролировались. Электромагнитная среда внутри инкубаторов также контролировалась [18].
Анализ трипанового синего
Влияние на жизнеспособность клеток 24-часовой обработки каждой из выбранных частот оценивали с помощью анализа исключения трипанового синего.Клетки отделяли от планшетов, используя 0,05% трипсин + 0,02% EDTA, окрашивали 0,4% трипановым синим (Sigma, Steinheim, Германия), разведенным в PBS 1: 4, и подсчитывали в камере Нойбауэра. Было проведено не менее трех экспериментальных повторов на частоту.
Проточная цитометрия
Применяемая стандартная процедура гейтирования подробно описана в других источниках [16, 17, 19]. Вкратце, в конце 24-часовой обработки сигналом 448 кГц клетки трипсинизировали, собирали и окрашивали йодидом пропидия в течение 1 часа при комнатной температуре.В каждом повторении эксперимента обрабатывали три клеточных суспензии для каждого условия эксперимента. Относительные доли субпопуляций subG0 / G1 (показывающие гибель клеток) G1, S и G2 / M определяли посредством количественной оценки содержания ДНК (FACScalibur, Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ, USA). Программное обеспечение CellQuest 3.2 использовалось для сбора данных (20 000 событий на образец) и анализа. Были применены подходящие стратегии стробирования, чтобы исключить обломки и агрегаты.
Иммунофлуоресценция
Протокол подробно описан в ранее опубликованных статьях [17,18,19].Вкратце, иммунофлуоресценцию определяли экспрессию p-ERK1 / 2, p-p38, p53, Bax и каспазы-3 в образцах, экспонированных на покровных стеклах током 448 кГц в течение 30 минут, 12 и / или 24 часов. Клетки фиксировали 4% параформальдегидом и инкубировали в течение ночи при 4 ° C с кроличьими поликлональными анти-p-ERK1 / 2 (1: 500; каталожный номер: 44-680G, Thermo Fisher, Бангалор, Индия), мышиным моноклональным анти-p -p38 (1: 500; каталожный номер: # 9216), мышиный моноклональный анти-p53 (1: 200; каталожный номер: # 2524), кроличий поликлональный анти-каспаза-3 (1: 400; кат.n: # 9664), трое из них от Cell Signaling (Данверс, Массачусетс, США) и кроличий поликлональный анти-Bax (1: 100; каталожный n: sc-6236) от Santa Cruz Technologies (Техас, США). После этого образцы окрашивали флуоресценцией в течение 1 ч при комнатной температуре с помощью козьих антител к кроличьему IgG Alexa Fluor® 488 (1: 500; каталожный номер: A-11034) или козьих антимышиных антител Alexa Fluor® 568 (1: 500; каталожный n: A-11031), как от Molecular Probes (Орегон, США), так и ядра клеток контрастировали с бис-бензимидом h43258 (Sigma). В каждом повторении эксперимента были сделаны микрофотографии и проанализированы 3 покровных стекла на экспериментальную группу.Двадцать полей под микроскопом (800 клеток на поле) были случайным образом выбраны для каждого покровного стекла, и процент иммунореактивных клеток был рассчитан по общему количеству клеток, выявленному контрастным окрашиванием ядер Hoechst с использованием флуоресцентной микроскопии (Nikon Eclipse TE300; Мелвилл, США) и компьютерной микроскопии. Вспомогательный анализ изображений (Analy-SIS, GMBH, Мюнхен, Германия). Все анализы проводились в двух экземплярах и повторялись не менее 3 раз для каждого из проанализированных белков.
Вестерн-блоттинг
Протоколы электрофореза и вестерн-блоттинга подробно описаны в другом месте [16].Вкратце, p-ERK1 / 2 анализировали в конце начальной 5-минутной стимуляции сигналом 448 кГц и через 30 минут, 4 часа, 12 часов или 24 часа от начала первого воздействия. ERK1 / 2 и p-EGFR анализировали в конце начальной 5-минутной стимуляции и через 30 минут после нее. Экспрессию p-JNK и p-p38 анализировали через 30 минут после начальной 5-минутной стимуляции, а циклин D1, p53, p27 и Bax анализировали через 12 и 24 часа. После CRET- или фиктивной стимуляции клетки собирали в буфере для гипотонического лизиса (10 мМ трис-HCl, 10 мМ KCl, 1 мМ дитиотреитол, 1 мМ EDTA, 1 мМ PMFS, 10 мкг / мл лейпептина, 5 мкг / мл пепстатина, 100 мМ NaF, 20 мМ β-глицерофосфат, 20 мМ молибдат натрия, 0.5% Triton X-100 и 0,1% SDS). После этого белки разделяли, переносили на нитроцеллюлозные мембраны и иммуноокрашивали в течение ночи при 4 ° C для кроличьих поликлональных анти-p-EGFR (1: 1000; каталожный n: # 3777), мышиных моноклональных анти-p-p38 (1: 1000). ), анти-ERK1 / 2 (1: 1000; кат. n: # 9102), анти-p-JNK (1: 1000; кат. n: # 4668) и анти-p53 (1: 1000), все из Cell Signaling (Danvers, MA, США), а также для мышиных моноклональных анти-p27 (1: 300; каталожный номер: AHZ0452; Invitrogen, Carlsbad, CA, USA), мышиных моноклональных антициклинов D1 (1: 500; Кот.n: NCL-CYCLIN D1-GM; Novocastra, Ньюкасл, Великобритания), кроличьи поликлональные анти-Bax (1: 500; Santa Cruz Technologies) и кроличьи поликлональные анти-p-ERK1 / 2 (1: 1000; Thermo Fisher). Мышиный моноклональный анти-β-актин (1: 5000; каталожный номер: A5441; Sigma, Реховот, Израиль) использовали в качестве контроля загрузки. Мембраны инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре с антителами против кроличьего IgG, конъюгированными с IRdye 800 CW (1: 10000; каталожный номер: 926–32 211; LI-COR Biosciences, Небраска, США), и с антителами против мышиного IgG, конъюгированными с IRdye 680 LT (1: 15000; кат.n: 926–68 020; LI-COR Biosciences). Затем мембраны сканировали с помощью сканера LI-COR Odyssey (LI-COR Biosciences). Когда требовалась ECL-хемилюминесценция, мембраны инкубировали с ECL-антимышиным IgG-антителом, связанным с пероксидазой хрена (1: 3000; каталожный номер: NA931; GE Healthcare, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK) или с ECL-анти- кроличьи IgG-антитела, связанные с пероксидазой хрена (1: 3000; каталожный номер: NA934; GE Healthcare). Полученные полосы были проанализированы денситометрией (PDI Quantity One 4.5.2 программное обеспечение, BioRad, Мюнхен, Германия). Было проведено не менее трех экспериментальных повторов для каждого временного интервала и белка. Данные были нормализованы по контрольным образцам нагрузки и имитационным контрольным образцам.
Ингибирование p-ERK1 / 2
Три чашки с культурами NB69 использовали для каждой из 3 экспериментальных групп: необработанные контроли (C), образцы, обработанные ингибитором p-ERK1 / 2: 20 мкМ PD98059 (PD), и образцы подвергается воздействию CRET в присутствии ингибитора (PD + CRET). Культуры засевали с плотностью 8160 клеток / см 2 и инкубировали в течение 4 дней.Затем образцы PD и PD + CRET получали ингибитор, а образцы PD + CRET подвергали электрической обработке в течение 12 или 24 часов. После электрической стимуляции экспрессию Bax (иммуноблот через 12 часов), а также клеточный цикл и скорость апоптоза (проточная цитометрия через 24 часа) анализировали в соответствии с протоколами, описанными выше.
Статистический анализ
Все экспериментальные процедуры и анализы проводились вслепую для лечения. Двусторонний непарный t-критерий Стьюдента или ANOVA и тест множественного сравнения Бонферрони применяли для анализа данных с использованием GraphPad Prism 6.01 Software (Сан-Диего, Калифорния, США). Различия между образцами считались статистически значимыми при p <0,05.
Как иммунологическая память и клональное расширение способствуют сохранению ВИЧ-1
J Immunol. Авторская рукопись; доступно в PMC, 15 июля 2017 г. , New York NY
Kyungyoon J.Квон
1 Школа медицины Университета Джона Хопкинса, Медицинский центр Колумбийского университета, Нью-Йорк, Нью-Йорк
Донна Л. Фарбер
2 Колумбийский центр трансляционной иммунологии, Департамент микробиологии и иммунологии и Департамент хирургии Колумбийского университета Медицинский центр, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк
Роберт Ф. Силичиано
1 Школа медицины Университета Джона Хопкинса, Медицинский центр Колумбийского университета, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк,
3 Медицинский институт Говарда Хьюза, Балтимор, Мэриленд
1 Johns Медицинский факультет Университета Хопкинса, Медицинский центр Колумбийского университета, Нью-Йорк, штат Нью-Йорк,
2 , Колумбийский центр трансляционной иммунологии, отделение микробиологии и иммунологии, и отделение хирургии, Медицинский центр Колумбийского университета, Нью-Йорк, Нью-Йорк,
3 Говард Хьюз Медицинский институт, Балтимор, MD
Последняя отредактированная версия издателя Одна часть этой статьи доступна бесплатно на сайте J Immunol. См. другие статьи в PMC, в которых цитируется опубликованная статья.Abstract
Комбинированная антиретровирусная терапия (АРТ) при ВИЧ-1-инфекции снижает уровень вируса в плазме до уровня ниже предела обнаружения клиническими анализами. Однако даже при длительном подавлении репликации вируса с помощью АРТ виремия быстро восстанавливается после прекращения лечения. Таким образом, АРТ не лечит. Основным препятствием на пути излечения является чрезвычайно стабильный резервуар латентного ВИЧ-1 в Т-клетках памяти CD4 + в состоянии покоя. Здесь мы рассматриваем объяснения замечательной стабильности скрытого резервуара.Стабильность, по-видимому, отражает не восполнение в результате новых инфекционных событий, а скорее нормальные физиологические процессы, обеспечивающие иммунологическую память. Особое значение имеют пролиферативные процессы, которые стимулируют клональную экспансию инфицированных клеток. Недавние данные свидетельствуют о том, что в некоторых инфицированных клетках пролиферация является следствием интеграции провирусов в гены хозяина, связанные с ростом клеток. При попытках вылечить ВИЧ-1 инфекцию путем воздействия на латентный резервуар может потребоваться учитывать возможность пролиферации латентно инфицированных клеток.
Введение
В 2014 г. около 37 миллионов человек были инфицированы ВИЧ-1 (www.unaids.org). Оптимальные исходы для пациентов достигаются при начале комбинированной антиретровирусной терапии (АРТ) сразу после диагностики инфекции, независимо от количества Т-лимфоцитов CD4 + (1–3). АРТ снижает уровень вируса в плазме до уровня ниже клинического предела обнаружения (20–50 копий РНК ВИЧ-1 / мл) и останавливает прогрессирование заболевания (4–6). Рекомендуемые начальные схемы состоят из двух ингибиторов обратной транскриптазы нуклеозидных аналогов и третьего препарата, либо ингибитора интегразы, либо ингибитора протеазы дарунавир (3).Хотя АРТ эффективно подавляет виремию, она не излечивает, и виремия восстанавливается после прекращения АРТ (7, 8). Следовательно, требуется пожизненное лечение. Обеспечение пожизненного лечения для всех инфицированных людей представляет собой серьезную экономическую и логистическую проблему. В настоящее время АРТ получают только 15 миллионов человек. Переносимость схем АРТ резко улучшилась, но долгосрочная токсичность лекарств также вызывает беспокойство. Другие проблемы включают возникновение устойчивости к неоптимальному лечению и стигматизацию, связанную с инфекцией.По этим причинам в настоящее время существует большой интерес к лекарствам (9, 10).
Основным препятствием для лечения является стабильный резервуар латентного ВИЧ-1 в покоящихся CD4 + Т-клетках (11, 12). Резервуар сохраняется даже у пациентов, длительно получающих АРТ, у которых нет обнаруживаемой виремии (13–18). Клетки, составляющие этот резервуар, обладают фенотипом памяти (12, 19–23). Прямые измерения латентного резервуара у пациентов, получающих АРТ, показывают очень низкую скорость распада (t 1/2 = 3,7 года) (16, 17).При таких темпах для ликвидации резервуара из 10 6 клеток потребуется 73 года, что делает излечение маловероятным даже при пожизненной АРТ. Таким образом, поиск лекарства направлен на устранение этого резервуара. В недавних обзорах обсуждались молекулярные механизмы латентного периода ВИЧ-1 (24–27) и подходы к устранению резервуара (10, 28–30). Здесь мы рассмотрим объяснения его замечательной стабильности.
Почему ВИЧ-1 вызывает скрытую инфекцию?
Вирусная латентность – это обратимое непродуктивное состояние инфицирования отдельных клеток (31).Латентно инфицированные клетки содержат стабильную форму вирусного генома либо в виде кольцевой плазмиды в случае герпесвирусов, либо в виде линейного провируса, стабильно интегрированного в ДНК клетки-хозяина в случае ВИЧ-1. В латентный период экспрессия вирусных генов сильно ограничена (31). Для некоторых герпесвирусов латентный период стал важным механизмом уклонения от иммунитета и устойчивости вируса (31, 32). Для ВИЧ-1 латентный период не является необходимым для персистенции, поскольку активная репликация вируса происходит на протяжении всего периода инфекции у нелеченных пациентов (33).Избегание иммунных ответов происходит за счет быстрой эволюции вариантов, не распознаваемых цитолитическими Т-лимфоцитами (CTL) или нейтрализующими антителами (34–41). Тем не менее, латентный резервуар быстро устанавливается у всех ВИЧ-1-инфицированных людей (42). Латентно инфицированные клетки могут быть обнаружены у тех редких людей, которые спонтанно контролируют инфекцию ВИЧ-1 без АРТ (43). Раннее ВРТ ограничивает размер резервуара (22, 44), но не блокирует его создание (42). У макак-резусов, инфицированных вирусом обезьяньего иммунодефицита (ВИО), который также создает латентный резервуар в покоящихся CD4 + Т-клетках (45, 46), начало АРТ на 3-й день после инфицирования предотвращает обнаруживаемую вирусемию, но не создает скрытый резервуар. резервуар (47).Таким образом, трудно предотвратить создание скрытого резервуара.
Недавняя теория предполагает, что ВИЧ-1 развил механизм для быстрого установления латентной инфекции, чтобы облегчить передачу через слизистые барьеры (48, 49). Предполагается, что латентность служит «стратегией хеджирования ставок», которая позволяет некоторым инфицированным клеткам выживать достаточно долго, чтобы пройти через слизистую оболочку. Однако, как обсуждается ниже, инфицированные клетки могут оставаться в латентном состоянии в течение многих лет, и длительный временной интервал между воздействием на слизистые оболочки и виремией никогда не был задокументирован.
Задержка наиболее просто объясняется как следствие вирусного тропизма к активированным CD4 + Т-клеткам, которые могут переходить в состояние памяти покоя, которое не разрешает репликацию (). ВИЧ-1 имеет сильную склонность инфицировать активированные CD4 + Т-клетки (50, 51). CCR5, критический корецептор для проникновения обычно передаваемых форм ВИЧ-1 (52–57), активируется при активации CD4 + Т-клеток (58). После проникновения в ДНК происходит обратная транскрипция генома вирусной РНК и интеграция образовавшегося провируса в ДНК клетки-хозяина в течение нескольких часов (59).Затем начинается транскрипция интегрированного провируса, потому что в активированных клетках присутствуют активные ядерные формы ключевых факторов хозяина, необходимые для инициации и удлинения вирусной транскрипции, включая NFκB, NFAT и pTEFb (60–67). Напротив, покоящиеся CD4 + Т-клетки в основном лишены экспрессии CCR5 (58), а другие факторы мешают репликации ВИЧ-1, даже если вирус успешно проник. Клеточный белок SAMHD1, дезоксинуклеозидтрифосфаттрифосфогидролаза, истощает уровни dNTP, тем самым препятствуя обратной транскрипции (68–70).Он экспрессируется на высоком уровне в миелоидных клетках и покоящихся CD4 + Т-клеток (52–55). Интересно, что SIV и ВИЧ-2 кодируют белок Vpx, который способствует деградации SAMHD1 (68, 71). Однако у ВИЧ-1 отсутствует Vpx, и, таким образом, обратная транскрипция в покоящихся CD4 + Т-лимфоцитов неэффективна, занимая до 3 дней (72–74). Статический характер актинового цитоскелета в покоящихся клетках препятствует доставке обратно транскрибируемого вирусного генома в ядро (75). Эти задержки облегчают распознавание промежуточных продуктов ДНК, генерируемых во время обратной транскрипции сенсором врожденной ДНК хозяина, IFI16, что приводит к активации каспазы-1 и провоспалительной форме гибели клеток, известной как пироптоз (76–78).Дополнительные барьеры для репликации в покоящихся CD4 + Т-клетках включают отсутствие активных форм NFκB, NFAT и pTEFb, необходимых для транскрипции провируса (60–63, 65, 66).
Модель для установления латентной инфекции ВИЧ-1 в CD4 памяти в состоянии покоя + Т-клеток. Нормальный процесс генерации клеток памяти (в рамке) включает воздействие антигена на покоящиеся CD4 + Т-клеток, что приводит к бластной трансформации, пролиферации и дифференцировке в эффекторные клетки.Многие эффекторные клетки умирают во время фазы сокращения иммунного ответа, но часть выживает и постепенно возвращается в состояние покоя в виде долгоживущих клеток памяти в состоянии покоя. Большинство покоящихся CD4 + Т-клеток лишены экспрессии CCR5, критического корецептора для проникновения ВИЧ-1. Активация покоящихся клеток антигеном (Ag) усиливает экспрессию CCR5 и отменяет другие блоки репликации ВИЧ-1 в покоящихся CD4 + Т-клетках, обеспечивая продуктивную инфекцию этих клеток. Наиболее продуктивно инфицированные CD4 + Т-лимфобласты быстро умирают от вызванной активацией гибели клеток (AICD), вирусных цитопатических эффектов (CPE) или лизиса CTL.Когда активированные клетки переходят обратно в состояние покоя, активные формы ключевых факторов транскрипции хозяина, необходимых для экспрессии гена ВИЧ-1, секвестрируются. Инфекция на этой стадии может привести к скрытой инфекции, а не к гибели клеток. Другие модели предполагают прямое инфицирование покоящихся клеток. См. Ссылки в тексте.
Хотя активированные CD4 + Т-клетки являются основной мишенью для ВИЧ-1, они быстро умирают после заражения. Классические исследования вирусной динамики выявили быстрое ослабление виремии, когда новые события инфекции блокируются с помощью АРТ (6, 79–81).Этот распад отражает короткий период полураспада вирионов плазмы (t 1/2 ~ минут) и инфицированных клеток, которые продуцируют большую часть вируса плазмы (t 1/2 ~ 1 день). Активированные Т-клетки склонны умирать в фазе сокращения иммунных ответов из-за гибели клеток, вызванной активацией (82). Кроме того, продуктивно инфицированные клетки могут погибнуть в результате других путей гибели клеток, вызванных вирусными белками или интеграцией провируса в геном клетки-хозяина (83, 84). Инфицированные CD4 + Т-лимфобласты также могут лизироваться CD8 + CTL (34, 85–87).Неожиданно оказалось, что CTL не укорачивают t 1/2 продуктивно инфицированных клеток (88, 89). Тем не менее, оказывается, что наиболее продуктивно инфицированные CD4 + Т-лимфобласты недолговечны.
Учитывая, что покоящиеся CD4 + Т-клетки устойчивы к инфекции и что активированные CD4 + Т-клетки быстро умирают после заражения, как создается скрытый резервуар? Некоторые инфицированные CD4 + Т-лимфобласты могут выжить достаточно долго, чтобы вернуться в состояние покоя, которое не разрешает экспрессию вирусных генов (11), особенно если они инфицированы в течение узкого временного окна, когда они все еще разрешены для шагов в жизни. цикл через интеграцию, но не для экспрессии генов высокого уровня ().Таким образом, установление латентной инфекции является редким событием, что согласуется с низкой частотой латентно инфицированных клеток in vivo (1/10 6 ) (13, 16–18). Задержка может быть дополнительно усилена за счет подавления эпигенетических модификаций интегрированного провируса (90–92). В этом скрытом состоянии вирус сохраняется, по сути, как генетическая информация. Когда антиген или цитокины впоследствии активируют клетку, провирус транскрибируется, производятся вирусные белки и высвобождаются вирусные частицы.Учитывая длительный t 1/2 ответов Т-клеток памяти и тот факт, что латентные провирусы в этих клетках не обнаруживаются иммунной системой и не нацелены на АРТ, стабильная персистенция ВИЧ-1 не вызывает удивления. Эта простая модель рассматривает латентность в контексте нормальной физиологии иммунологической памяти, тем самым объясняя все клинические наблюдения относительно персистенции ВИЧ-1, не требуя эволюции специальных вирусных механизмов для латентности.
Остаточная виремия, латентный резервуар и отскок вируса
Следы свободного вируса (~ 1 копия / мл) присутствуют в плазме большинства пациентов, получающих АРТ (93–95).Анализ последовательности остаточной виремии (RV) показывает, что эти вирусы напоминают виремию, имевшую место ранее при инфицировании, чувствительны к текущему режиму АРТ пациента и, как правило, не демонстрируют доказательств продолжающейся эволюции (96–100). Все эти особенности предполагают, что RV происходит из стабильного резервуара (101). В ситуациях, когда была обнаружена эволюция, причиной может быть неоптимальная АРТ (102). Важно отметить, что усиление стандартной АРТ из трех препаратов дополнительными антиретровирусными препаратами из другого класса не снижает РВ (103–105), что указывает на то, что он происходит из долгоживущих клеток, инфицированных до АРТ.Латентно инфицированные покоящиеся CD4 + Т-клетки являются по крайней мере одним источником RV. Присутствие RV предполагает, что несколько латентно инфицированных клеток активируются каждый день. Пока пациенты продолжают получать АРТ, выпущенные вирусы не заражают дополнительные клетки. Однако, если АРТ прерывается, происходит отскок вируса. Восстановление обычно наблюдается в течение 2 недель (7, 8), времени, необходимого для вымывания антиретровирусных препаратов и роста недавно выпущенных вирусов до обнаруживаемых уровней. Вирус рикошета носит архивный характер, что согласуется с выводом о том, что он происходит из стабильного латентного резервуара (106).Ограниченное изменение времени до отскока, несмотря на двухлогарифмическое изменение размера резервуара, также предполагает, что в день активируется несколько клеток (107). Этот вывод согласуется с недавним анализом вирусного рикошета, который выявил множественные вирусные клоны, появляющиеся во многих местах (лимфатический узел, подвздошная и прямая кишка) (8).
Доказательства латентной инфекции покоящейся памяти CD4
+ Т-клетокЭта модель латентной инфекции ВИЧ-1 как барьера для лечения подтверждается несколькими линиями доказательств:
Репликационно-компетентный ВИЧ-1 может быть легко восстанавливается из высокоочищенных покоящихся CD4 + Т-клеток практически у всех инфицированных людей, независимо от продолжительности АРТ (12, 13, 15, 16, 18, 108).Восстановление требует активации ячеек, чтобы уменьшить задержку, как предсказано моделью. Как обсуждается ниже, восстановление не удается только тогда, когда размер скрытого коллектора существенно уменьшается (44, 109–111). Остается спорным вопрос о том, служат ли другие типы клеток, включая макрофаги, стабильными резервуарами ВИЧ-1 (112–123). На сегодняшний день долгосрочное сохранение репликационно-компетентного ВИЧ-1 в условиях оптимальной АРТ было продемонстрировано только для покоящихся CD4 + Т-клеток (124).Это может частично отражать сложность взятия проб тканевых макрофагов, особенно в таких местах, как центральная нервная система. Персистентность тканевых макрофагов в принципе может быть изучена на новых гуманизированных моделях мышей (123) и на модели SIV, но только при использовании животных на полностью супрессивной долгосрочной АРТ и с оговоркой, что ограничению SAMHD1 противодействует SIV Vpx. (68, 69).
Латентный ВИЧ-1 обнаружен в покоящихся CD4 + Т-клетках памяти, но лишь в ограниченной степени в наивных CD4 + Т-клетках (12, 19–23).
Генерация латентно инфицированных клеток может быть воспроизведена in vitro в первичных CD4 + Т-клетках, которые были каким-либо образом активированы, инфицированы, а затем культивированы для возврата в состояние покоя (125–129) . Рестимуляция этих клеток через рецептор Т-клеток (TCR) приводит к экспрессии гена ВИЧ-1. Вместе эти результаты подтверждают сохранение латентного ВИЧ-1 в покоящихся CD4 + Т-клетках, которые были ранее инфицированы в активированном состоянии.
Общая концепция латентного периода ВИЧ-1 также решительно подтверждается случаями излечения и «почти полного излечения» «берлинского пациента» (109), двух «бостонских пациентов» (110, 111) и « Миссисипский ребенок »(44). Пациенты из Бостона и Берлина были ВИЧ-1-инфицированными людьми, у которых развились злокачественные новообразования, требующие трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (HSCT), что привело к восстановлению иммунитета с помощью донорских клеток. Пациент из Берлина получил ТГСК от донора, чьи клетки были гомозиготными по делеции в CCR5, и был вылечен, поскольку воссоздающие Т-клетки не допускали проникновение R5-тропного ВИЧ-1 (109).Попытки воспроизвести это лекарство до сих пор не увенчались успехом, в основном из-за прогрессирования злокачественного новообразования. В одном случае было отмечено появление вирусных вариантов, использующих альтернативный корецептор ВИЧ-1, CXCR4 (130). Бостонские пациенты получали ТГСК от доноров с CCR5 дикого типа, и АРТ продолжалась в течение всего периода трансплантации для защиты донорских клеток от инфекции. Когда произошло очевидное полное восстановление донорскими Т-клетками и ВИЧ-1 больше не обнаруживался стандартными анализами, АРТ было прервано.Пациенты сохраняли подавление виремии в течение 3 и 8 месяцев до внезапных и драматических восстановлений.
Ребенок из штата Миссисипи, рожденный от инфицированной матери, которая не получала дородового ухода, вскоре после рождения имел уровень РНК ВИЧ-1 в плазме ~ 20 000 копий / мл, и ему сразу же начали АРТ. РНК ВИЧ-1 в плазме снизилась до уровня ниже предела обнаружения и оставалась там даже после того, как лечение было прервано вопреки врачебной рекомендации в возрасте от 15 до 18 месяцев. Лечение не было возобновлено, и виремия оставалась невыявленной более 2 лет, прежде чем внезапно возобновилась.Важно отметить, что ВИЧ-1-специфические Т-клеточные ответы отсутствовали у всех трех субъектов из-за процесса трансплантации или раннего лечения. Антитела к ВИЧ-1 не были обнаружены у младенцев из Миссисипи, и их количество заметно снизилось у пациентов из Бостона. Поскольку репликация ВИЧ-1 является экспоненциальной в отсутствие иммунных ответов и АРТ, сохранение ВИЧ-1 в течение месяцев или лет у этих пациентов лучше всего можно объяснить нереплицирующейся или латентной формой вируса. В этих случаях ТГСК или раннее АРТ задерживали отскок за счет снижения количества латентно инфицированных клеток до точки, при которой стохастическая реактивация была редким событием (107).
Объяснение длинного t
1/2 латентного резервуараСкорость распада латентного резервуара была первоначально измерена с помощью анализа вирусного роста (VOA), который количественно определяет вирусный рост из-за предельных разведений стимулированного митогеном покоящегося CD4 + Т-клеток от пациентов, получающих АРТ (13, 131–133). Первоначальные измерения разрушения коллектора на основе VOA, опубликованные в 1999 и 2003 годах, показали, что t 1/2 составляет 3,7 года (16, 17). Это значение было подтверждено в более позднем исследовании (t 1/2 = 3.6 лет), указывая на то, что, несмотря на разработку новых, менее токсичных и более удобных схем АРТ, фундаментальная проблема резервуара как препятствия на пути излечения не решена (18). Важный вопрос заключается в том, является ли замечательная стабильность резервуара результатом нормальных гомеостатических механизмов, поддерживающих иммунологическую память, или других факторов.
Одно спорное объяснение стабильности состоит в том, что резервуар постоянно пополняется из-за низкого уровня инфекции de novo , которая продолжается, несмотря на АРТ (134).Эта репликация может отражать неадекватные уровни лекарства в определенных анатомических участках, включая лимфатические узлы (135, 136) или распространение от клетки к клетке, которое труднее блокировать с помощью АРТ (137). Однако многочисленные доказательства указывают на то, что АРТ эффективно сдерживает новую инфекцию восприимчивых клеток. Поскольку репликация ВИЧ-1 неизменно сопровождается прогрессирующим накоплением мутаций (138), что отражает склонность к ошибкам обратной транскриптазы (139) и, возможно, гипермутации фактора рестрикции хозяина APOBEC3G (40, 140–143), отсутствие эволюции последовательности в вирусном резервуаре (22, 97, 100, 144, 145) указывает на то, что АРТ блокирует текущие циклы репликации вируса.Недавний отчет, в котором утверждается, что вирусная эволюция осложняется взятием образцов только в первые 6 месяцев АРТ, в течение периода, в течение которого преобладают короткоживущие популяции инфицированных клеток, не являющиеся репрезентативными для стабильного резервуара (146). До разработки эффективной АРТ доминирующей клинической проблемой была эволюция лекарственной устойчивости (147–151), но сейчас частота резистентности снижается (152–154). Действительно, есть неопровержимые клинические данные о том, что АРТ эффективна, и пациенты, получающие лечение, могут рассчитывать на почти нормальную продолжительность жизни (3, 155–158).Как упоминалось выше, неспособность интенсификации АРТ снизить уровень правого желудочка указывает на то, что нынешние схемы АРТ предотвращают новые случаи инфекции (103–105). Наконец, в упомянутых выше случаях отсроченного рецидива стойкость ВИЧ-1 во время АРТ не может быть объяснена продолжающейся репликацией, поскольку это привело бы к немедленному восстановлению. Следовательно, стабильность латентного резервуара, скорее всего, связана с длительным t 1/2 Т-клеток памяти и их обновлением посредством пролиферации.
Функциональные исследования показали, что CD4 + Т-клеточные ответы памяти у людей могут обеспечивать пожизненный иммунитет.У людей, которые получили вакцину против оспы или вылечили инфекцию гепатита С, вирус-специфические Т-клеточные ответы CD4 + сохраняются в течение десятилетий, несмотря на отсутствие дальнейшего воздействия антигена (159, 160). Ранние исследования продолжительности жизни клеток памяти у людей изучали индуцированные радиацией хромосомные аномалии, которые препятствуют пролиферации клеток. Это позволило оценить интермитотический t 1/2 лимфоцитов (161, 162). Измеренное t 1/2 22 недель для Т-клеток памяти примерно согласуется с последующими измерениями in vivo с использованием мечения глюкозы или дейтерия, которые указывают на 1/2 порядка месяцев для CD4 человеческой памяти + Т-клетки (163, 164; также обзор в 165).Это существенно меньше, чем t 1/2 индивидуальных наивных Т-клеток (1–8 лет). Важно отметить, что он короче, чем t 1/2 резервуара ВИЧ-1 (3,7 года) и ответов Т-клеток функциональной памяти (8–12 лет). Несоответствие между периодом полужизни отдельных Т-клеток памяти и общим иммунным ответом памяти предполагает, что пролиферация клеток памяти должна вносить вклад в стабильность латентного резервуара. Однако, как обсуждалось выше, продуктивно инфицированные клетки имеют очень короткий t 1/2 , и поэтому концепция о том, что инфицированные клетки могут пролиферировать, не получила должного признания.Белок Vpr ВИЧ-1 индуцирует остановку клеточного цикла на G 2 , взаимодействуя с убиквитинлигазой Е3 хозяина (166, 167) и стимулируя деградацию белков хозяина, включая фактор репликации ДНК MCM10 (168). Для клеток в латентном состоянии инфекции этот блок пролиферации не действует, и латентно инфицированные клетки могут, в принципе, пролиферировать, если движущий стимул не сильно увеличивает экспрессию гена ВИЧ-1 (169–172).
Память CD4 + Пролиферация Т-клеток может быть вызвана антигеном, перекрестным распознаванием других собственных или чужеродных пептидов, представленных MHC класса II, или цитокинами.В мышиной системе ни антиген, ни MHC класса II не требуются для персистенции Т-клеток памяти (173), хотя CD4 + Т-клетки памяти, которые сохраняются в отсутствие MHC класса II, функционально нарушены (174). Требования к поддержанию Т-клеточных ответов CD4 + памяти человека менее ясны и могут включать взаимодействия с родственными сигналами или цитокинами. В настоящее время мало что известно об антигенной специфичности клеток, несущих латентный ВИЧ-1, хотя небольшая их часть может быть ВИЧ-1-специфичной (175).Однако Т-клетки памяти CD4 + проявляют перекрестную реактивность, и специфичность к антигенам, никогда не встречавшимся, может быть обнаружена среди Т-клеток памяти CD4 + в периферической крови (176). Как обсуждалось выше, ожидается, что стимулы, действующие через TCR, будут повышать экспрессию латентного ВИЧ-1, но это может не относиться к пролиферации, управляемой цитокинами. Цитокинами, участвующими в гомеостазе и выживании Т-клеток памяти, являются ИЛ-7 и ИЛ-15 (обзор в 177). IL-7 необходим для стимуляции гомеостатической пролиферации + Т-клеток памяти CD4.У мышей, дефицитных по IL-7 (или IL-7R), резко снизился общий уровень Т-лимфоцитов, уменьшился размер и клеточность селезенки (178). IL-15 также играет роль в гомеостатической пролиферации Т-клеток памяти CD4 + (179). Ранние исследования in vitro и показали, что IL-7 действительно может индуцировать экспрессию латентного ВИЧ-1 (180, 181). Однако у пациентов, получающих АРТ, инфузия ИЛ-7 приводит к пролиферации Т-клеток памяти CD4 + , включая латентно инфицированные клетки, с небольшой индукцией экспрессии гена ВИЧ-1 или без нее (182, 183). Исследования in vitro на первичной клеточной модели латентного периода ВИЧ-1 подтверждают, что латентно инфицированные клетки могут пролиферировать в ответ на ИЛ-7 (плюс ИЛ-2) без усиления экспрессии гена ВИЧ-1 (169). Эти исследования предполагают, что латентный резервуар может поддерживаться в Т-клетках памяти, претерпевая гомеостатический оборот. Анализ подмножеств Т-клеток памяти предоставил дополнительное понимание этой проблемы.
Память CD4
+ Подмножества Т-клетокТ-клетки памяти можно разделить на два основных подмножества, центральную память (T CM ) и эффекторные клетки памяти (T EM ), на основе экспрессии хоминг-рецепторов и хемокиновых рецепторов. участвуют в преимущественном перемещении во вторичные лимфоидные органы или периферические участки, соответственно (184).ДНК ВИЧ-1 предпочтительно содержится в T CM и другом подмножестве T-клеток памяти, переходных T-клетках памяти (T TM ) (21). T TM имеют фенотип (CD45RA – , CD27 + , CCR7 – ), промежуточный между T CM и T EM . Два основных подмножества CD4 + Т-клеток памяти, которые содержат латентный ВИЧ-1, T CM и T TM , могут обеспечить более стабильный резервуар для ВИЧ-1, чем клетки T EM , которые имеют более высокий индекс пролиферации и более подвержены запрограммированной гибели клеток (21, 185).Недавнее исследование с использованием анализа вирусного роста, а не ПЦР, продемонстрировало репликационно-компетентный ВИЧ-1, персистирующий в T CM , но в гораздо меньшей степени в T TM , что указывает на то, что T CM может представлять собой основной источник стойкого ВИЧ. -1 у большинства пациентов (186).
Другим недавно определенным подмножеством Т-клеток памяти CD4 + , которые могут способствовать сохранению ВИЧ-1, является подмножество Т-клеток памяти, подобных стволовым клеткам (T SCM ) (187). T SCM фенотипически сходны с наивными Т-клетками (T N ) в том, что они CD45RO –, CD45RA + и CCR7 + .Однако они также экспрессируют поверхностные маркеры, характерные для клеток памяти, такие как CD95 и IL-2Rβ (187). T SCM быстро реагирует на антиген и секретирует IFN-γ, IL-2 и TNF. Их также стимулирует пролиферация IL-7. Было предложено пошаговое продвижение от T N к T SCM к T CM к T EM , при этом T SCM потенциально способен давать начало другим типам Т-клеток памяти и самообновляться при стимуляции. . T SCM может быть инфицирован ВИЧ-1 in vitro , а у пациентов, получающих АРТ, ДНК ВИЧ-1 присутствует в T SCM на более высоком уровне, чем в других подмножествах памяти (188).Хотя латентно инфицированный T SCM составляет лишь небольшую часть от общего резервуара, они могут иметь особое значение из-за их стабильности и способности к самообновлению (23, 188).
Таким образом, анализ подмножеств памяти показывает, что геномы ВИЧ-1 распределены по множеству подмножеств клеток памяти, с более высокими частотами в подмножествах с большим потенциалом выживания. Остается несколько вопросов. Одна из проблем заключается в том, что многие исследования распределения геномов ВИЧ-1 в субпопуляциях Т-клеток основаны в первую очередь на измерениях провирусной ДНК на основе ПЦР.Это проблематично, поскольку подавляющее большинство провирусов в покоящихся CD4 + Т-лимфоцитов от пролеченных пациентов сильно дефектны (189). Также существует значительная вариабельность от пациента к пациенту в распределении вирусных геномов внутри этих подмножеств. Наконец, эти подмножества не статичны и могут взаимно преобразовываться способами, которые еще не полностью поняты, и поэтому неясно, сохраняется ли латентный ВИЧ-1 стабильно в данном подмножестве.
Анатомическое распределение латентного резервуара
Большинство исследований образца латентного резервуара CD4 + Т-клеток периферической крови.Учитывая непрерывную рециркуляцию и широкое распространение Т-клеток памяти в тканях, обычно предполагается, что латентно инфицированные покоящиеся CD4 + Т-клетки будут присутствовать в большинстве вторичных лимфоидных органов и в нелимфоидных тканях (190–192). Ранние исследования продемонстрировали примерно равную частоту латентно инфицированных клеток в крови и лимфатических узлах (12). В модели SIV латентно инфицированные покоящиеся CD4 + Т-клетки были продемонстрированы в крови, лимфатических узлах и селезенке (45, 46). Интересно, что, как обсуждается ниже, некоторые недавно описанные популяции клеток памяти, отсутствующие в крови, также могут способствовать сохранению ВИЧ-1.
ВИЧ-1 может инфицировать фолликулярные хелперные Т-клетки (T FH ) (193–196), и эта популяция привлекла значительное внимание, потому что у CD8 + CTL отсутствуют хемокиновые рецепторы, необходимые для миграции в В-клеточные фолликулы (196), таким образом, фолликулы становятся местом «иммунной привилегии». В подгруппе макак-резус, которые спонтанно контролируют SIV, репликация вируса ограничена T FH , предположительно потому, что CD8 + CTL лизируют инфицированные клетки в другом месте узла (196).Степень, в которой T FH служит долгосрочным резервуаром для ВИЧ-1 в условиях оптимальной АРТ, еще предстоит определить. Если латентно инфицированный T FH сохраняется, стратегии эрадикации ВИЧ-1 могут потребовать включения не только агентов, обращающих латентный период, и стимулов для усиления ответа ЦТЛ CD8 + (197), но и вмешательств, направленных на разрушение фолликулов В-клеток для обеспечения доступа CTL (196).
Другая популяция Т-клеток памяти, которая потенциально может содержать латентный ВИЧ-1, – это популяции резидентных Т-клеток памяти (T RM ) (198, 199).Новаторские исследования мышиной системы продемонстрировали широкое распространение Т-клеток памяти CD4 + , в том числе в нелимфоидных тканях, таких как печень и легкие (190). Субпопуляции клеток памяти могут генерироваться или рекрутироваться в определенные нелимфоидные ткани, где они находятся в течение длительных периодов времени (192, 199). Эти T RM лишены экспрессии CCR7 и имеют общие фенотипические и функциональные свойства с T EM . Однако, в отличие от других подмножеств памяти, они экспрессируют CD69, лектин клеточной поверхности, регуляция которого повышается в ранние сроки после активации Т-клеток.У людей большинство клеток T EM в лимфоидной и слизистой тканях, включая легкие и кишечник, экспрессируют CD69 и, следовательно, могут удерживаться в этих сайтах как T RM (191, 200). Кожа человека также содержит значительные популяции T RM (198). До сих пор T RM не исследовался напрямую на наличие латентного ВИЧ-1. Однако стойкий ВИЧ-1 был обнаружен в лимфоидной ткани кишечника у лиц, получающих АРТ (201, 202). T RM выделяются в собственной пластинке слизистой оболочки и среди интраэпителиальных лимфоцитов, и возможно, что T RM содержит ВИЧ-1.Многие CD4 + T RM проявляют активированные фенотипы со сниженной поверхностной экспрессией CD28 (191), и поэтому неясно, может ли латентная инфекция развиваться в этих клетках. Дальнейшая характеристика тканеспецифических резервуаров ВИЧ-1 является важным приоритетом исследований.
Доказательства клональной экспансии инфицированных клеток
Рассмотрение механизма гомеостаза клеток памяти предполагает, что стабильность латентного резервуара, по крайней мере, частично зависит от способности инфицированных клеток к пролиферации.Несколько исследований предоставили прямые доказательства клональной экспансии инфицированных клеток, начиная с исследований RV (100, 102). Хотя пациенты, начинающие АРТ во время хронической инфекции, являются носителями различных квазивидов вируса (138), в ПЖ часто преобладают идентичные последовательности, обнаруживаемые при независимой выборке в течение нескольких месяцев или лет. Происхождение этих последовательностей неизвестно, но может отражать инфицирование клеток, которые затем пролиферируют, давая начало множеству клеток-потомков, несущих идентичные провирусы (100, 102, 203).Доля идентичных последовательностей ВИЧ-1 в образцах от пациентов, получающих АРТ, увеличивается со временем, что соответствует пролиферации инфицированных клеток (145). В более поздних исследованиях использовался анализ сайтов интеграции для получения окончательных доказательств пролиферации инфицированных клеток. Сайты интеграции в разных клетках, как правило, различны и широко распределены по геному человека. Ранние исследования клеточных линий, инфицированных in vitro, ВИЧ-1 (204) и покоящихся CD4 + Т-клеток от пациентов, получающих АРТ (205), выявили сильное предпочтение интеграции внутри активных транскрипционных единиц.Однако интеграция происходит в любой ориентации по отношению к гену-хозяину, и консенсусная последовательность в сайте интеграции отсутствует. Следовательно, точная человеческая последовательность на стыке ДНК хозяина и ВИЧ-1 однозначно идентифицирует отдельные события инфекции и, таким образом, все клональное потомство одной инфицированной клетки. Кроме того, новый анализ глубокого секвенирования позволяет подсчитывать клональное потомство одной инфицированной клетки в образце путем обнаружения различий в точках случайного разрыва во фрагментах разрезанной ДНК, содержащих один и тот же сайт интеграции (170, 206).Применение этого и родственных подходов к CD4 + Т-клеткам пациентов, получающих АРТ, предоставило убедительные доказательства клональной экспансии (170, 171, 207). Maldarelli et al. показали, что 43% из 2410 сайтов интеграции в CD4 + Т-клеток от 5 пациентов находились в клонально размноженных клетках (170). Обнаружение того, что несколько клеток с одним и тем же сайтом интеграции могут быть захвачены в одном образце крови, отражает резкое клональное расширение in vivo .
Интересно, что некоторые увеличенные клоны имели провирусы, интегрированные в человеческие гены, связанные с ростом клеток, и в нескольких независимых исследованиях было обнаружено, что некоторые из этих генов содержат интегрированные провирусы (170, 171, 205, 207, 208).К ним относятся миокардиноподобный белок 2 ( MKL2) , фактор транскрипции и основной фактор транскрипции лейциновой молнии 2 ( BACh3 ), регулятор транскрипции, влияющий на рост, активацию, старение и цитокиновый гомеостаз лимфоцитов. Для этих генов события интеграции были обнаружены в определенных областях гена и в той же транскрипционной ориентации, что и ген хозяина. Этот искаженный паттерн отражает процесс постинтеграционного отбора, который способствует росту in vivo и клеток с этими событиями интеграции, поскольку эти паттерны не наблюдались при инфекциях in vitro и (170, 171, 204).Эти результаты открывают интересную возможность того, что интеграция в определенные гены хозяина способствует персистенции ВИЧ-1, стимулируя пролиферацию инфицированных клеток способом, отличным от гомеостатической пролиферации. Молекулярные механизмы в настоящее время неясны.
Предостережение к этим исследованиям заключается в том, что используемые методы не захватывают полную последовательность интегрированного провируса. Некоторые методы фиксируют только соединение между ДНК хозяина и ВИЧ-1. Учитывая, что подавляющее большинство провирусов являются дефектными в результате больших внутренних делеций или гипермутации, опосредованной APOBEC3G (189, 207), следует предположить, что большинство размноженных клонов несут дефектные провирусы.Нет никакого избирательного давления на клетки, несущие дефектные провирусы, которые не продуцируют вирусные белки. Предыдущие исследования описали увеличенные клоны, несущие дефектные провирусы, некоторые из которых сохраняются в течение многих лет (22, 209). Однако в недавнем отчете описывается резкое увеличение in vivo и инфицированного клона Т-лимфоцитов CD4 + у пролеченного пациента, у которого также была плоскоклеточная карцинома (210). Важно отметить, что этот клон был способен продуцировать компетентный к репликации вирус.Сайт интеграции не может быть точно локализован, потому что он находится в области повторяющейся последовательности. Было обнаружено, что клон широко распространен в местах метастатической опухоли по всему телу, что повышает вероятность того, что клональная экспансия произошла в ответ на опухолевый антиген. Актуальный вопрос, имеющий большое значение, заключается в том, в какой степени увеличенные клеточные клоны несут репликационно-компетентный ВИЧ-1.
Значение
Стабильность латентного резервуара – основная причина того, что инфекция ВИЧ-1 не может быть излечена.Нормальные механизмы, поддерживающие иммунологическую память, дают простое объяснение этой стабильности. Однако пул латентно инфицированных клеток не статичен. В то время как общий размер пула уменьшается очень медленно, клетки в резервуаре постоянно активируются для производства вируса, что проявляется в виде остаточной виремии. Эти клетки могут погибнуть, но гомеостатическая пролиферация клеток памяти помогает уравновесить потерю. Кроме того, более клеточно-автономный процесс пролиферации, управляемый зависимыми от сайтов интеграции изменениями в экспрессии генов-хозяев, может позволить некоторым инфицированным клеткам претерпеть резкую клональную экспансию.Попытки воздействовать на латентный резервуар обычно предполагали, что зависящее от вмешательства снижение частоты латентно инфицированных клеток будет стабильным, так что повторные вмешательства в конечном итоге позволят вылечить. Возможность того, что субпопуляции инфицированных клеток могут продолжать размножаться, может еще больше осложнить усилия по искоренению.
Динамика скрытого резервуара. АРТ в значительной степени блокирует новое инфицирование восприимчивых клеток. У пациентов, получающих длительную АРТ, пул латентно инфицированных клеток чрезвычайно стабилен (t½ = 3.7 лет), так что оборот клеток памяти должен в значительной степени уравновешиваться пролиферацией ранее инфицированных клеток. Латентно инфицированные CD4 + Т-клетки памяти в состоянии покоя иногда сталкиваются с соответствующим родственным антигеном (или перекрестно реагирующим антигеном) и активируются. Активация обращает латентность, обеспечивая экспрессию вирусных генов и производство вирусов. У пациентов, получающих АРТ, высвободившиеся вирусы не могут успешно инфицировать новые клетки, но могут быть обнаружены на очень низких уровнях в плазме, где они составляют остаточную виремию (RV).Наиболее продуктивно инфицированные клетки быстро погибают от AICD, CPE или лизиса CTL. Возможно, что некоторая степень управляемой антигеном пролиферации может происходить без активации экспрессии вирусного гена. Гомеостатическая пролиферация клеток памяти также может происходить без реактивации экспрессии вирусных генов. Для некоторых инфицированных клеток интеграция провируса в гены, связанные с ростом клеток, также может стимулировать пролиферацию. См. Ссылки в тексте.
Благодарности
Мы благодарим Dr.Джанет Силичиано за критическое прочтение рукописи.
Грантовая поддержка
Эта работа была поддержана коллабораториями Martin Delaney CARE и DARE (гранты NIH AI096113 и 1U19AI096109), грантом ARCHE для совместных исследований Фонда исследований СПИДа (amFAR 108165-50-RGRL), Центр исследований СПИДа Джонса Хопкинса (P30AI094189), грант NIH 43222, а также Медицинский институт Говарда Хьюза и Фонд Билла и Мелинды Гейтс. D.L.F.поддерживается грантами NIH AI100119, {“type”: “entrez-nucleotide”, “attrs”: {“text”: “AI106697”, “term_id”: “3476992”, “term_text”: “AI106697”}} AI106697, и {“type”: “entrez-нуклеотид”, “attrs”: {“text”: “HL116136”, “term_id”: “1051693630”, “term_text”: “HL116136”}} HL116136.
Список литературы
1. Исследовательская группа INSIGHT START. Lundgren JD, Babiker AG, Gordin F, Emery S, Grund B, Sharma S, Avihingsanon A, Cooper DA, Fatkenheuer G, Llibre JM, Molina JM, Munderi P, Schechter M, Wood R, Klingman KL, Collins S, Lane HC , Филипс А.Н., Нитон Дж. Д..Начало антиретровирусной терапии при ранней бессимптомной ВИЧ-инфекции. N Engl J Med. 2015; 373: 795–807. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 2. Данел С., Мо Р., Габиллард Д., Бадже А., Ле Карру Дж., Уасса Т., Уаттара Е., Анциан А., Нтакпе Дж. Б., Минга А., Куаме Г. М., Бухусу Ф., Эмием А., Куаме А., Инвули А., Тони Т. Д., Ахибо. H, Кабран М., Рабе С., Сидибе Б., Нзунету Дж., Конан Р., Нокоро Дж., Гуэсс П., Мессоу Э, Дохун Л., Камагате С., Яо А., Амон С., Куаме А. Б., Куа А., Куаме Е., Ндри Й, Ба-Гомис О, Далигоу М., Акундзе С., Гаверлендер Д., Ани А., Дембеле Ф., Коне Ф., Гехи С., Канга С., Коуле С., Сери Дж., Ойеби М., Мбакоп Н., Макайла О, Бабатунде С., Бабатунде Н., Bleoue G, Tchoutedjem M, Kouadio AC, Sena G, Yededji SY, Assi R, Bakayoko A, Mahassadi A, Attia A, Oussou A, Mobio M, Bamba D, Koman M, Horo A, Deschamps N, Chenal H, Sassan- Morokro M, Konate S, Aka K, Aoussi E, Journot V, Nchot C, Karcher S, Chaix ML, Rouzioux C, Sow PS, Perronne C, Girard PM, Menan H, Bissagnene E, Kadio A, Ettiegne-Traore V, Moh-Semde C, Kouame A, Massumbuko JM, Chene G, Dosso M, Domoua SK, N’Dri-Yoman T., Salamon R, Eholie SP, Anglaret X TEMPRANO ANRS 12136 Study Group.Испытание ранних антиретровирусных препаратов и превентивной терапии изониазидом в Африке. N Engl J Med. 2015; 373: 808–822. [PubMed] [Google Scholar] 3. Gunthard HF, Aberg JA, Eron JJ, Hoy JF, Telenti A, Benson CA, Burger DM, Cahn P, Gallant JE, Glesby MJ, Reiss P, Saag MS, Thomas DL, Jacobsen DM, Volberding PA International Antivirus Society – Группа США . Антиретровирусное лечение ВИЧ-инфекции у взрослых: рекомендации 2014 г. группы Международного антивирусного общества – США. ДЖАМА. 2014; 312: 410–425. [PubMed] [Google Scholar] 4.Гулик Р.М., Меллорс Дж. У., Хавлир Д., Эрон Дж. Дж., Гонсалес С., МакМахон Д., Ричман Д. Д., Валентайн Ф. Т., Йонас Л., Мейбом А., Эмини Е. А., Ходакевиц Дж. А. Лечение индинавиром, зидовудином и ламивудином у взрослых с инфекцией вируса иммунодефицита человека и предшествующей антиретровирусной терапией. N Engl J Med. 1997; 337: 734–739. [PubMed] [Google Scholar] 5. Хаммер С.М., Сквайрс К.Э., Хьюз М.Д., Граймс Дж. М., Деметер Л. М., Карриер Дж. С., Эрон Дж. Дж., Младший, Фейнберг Дж. Контролируемое испытание двух аналогов нуклеозидов плюс индинавир на людях с инфекцией вируса иммунодефицита человека и количеством клеток CD4 200 на кубический миллиметр или меньше.Группа клинических исследований СПИДа 320. Исследовательская группа. N Engl J Med. 1997; 337: 725–733. [PubMed] [Google Scholar] 6. Перельсон А.С., Эссунгер П., Цао И., Весанен М., Херли А., Саксела К., Марковиц М., Хо Д.Д. Характеристики распада ВИЧ-1-инфицированных компартментов во время комбинированной терапии. Природа. 1997; 387: 188–191. [PubMed] [Google Scholar] 7. Дэйви Р. Т., младший, Бхат Н., Йодер К., Чун Т. В., Меткалф Дж. А., Дьюар Р., Натараджан В., Лемпицки Р. А., Адельсбергер Дж. В., Миллер К. Д., Ковач Дж. А., Полис М. А., Уокер Р. Е., Фаллон Дж., Мазур Н., Джи Д., Базелер М, Димитров Д.С., Фаучи А.С., Переулок HC.Динамика ВИЧ-1 и Т-клеток после прекращения высокоактивной антиретровирусной терапии (ВААРТ) у пациентов с устойчивой вирусной супрессией в анамнезе. Proc Natl Acad Sci U S. A. 1999; 96: 15109–15114. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 8. Rothenberger MK, Keele BF, Wietgrefe SW, Fletcher CV, Beilman GJ, Chipman JG, Khoruts A, Estes JD, Anderson J, Callisto SP, Schmidt TE, Thorkelson A, Reilly C, Perkey K, Reimann T.G., Utay NS, Nganou Makamdop К., Стивенсон М., Дук Д.К., Хаазе А.Т., Шакер Т.В.После прерывания лечения в результате мультифокальной инфекции в лимфатических тканях возникает большое количество вариантов ВИЧ-отскока / основателя. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2015; 112: E1126–34. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 9. Ричман Д.Д., Марголис Д.М., Делани М., Грин В.С., Хазуда Д., Померанц Р.Дж. Проблема поиска лекарства от ВИЧ-инфекции. Наука. 2009; 323: 1304–1307. [PubMed] [Google Scholar] 10. Дикс С.Г., Отран Б., Беркхаут Б., Бенкиран М., Кэрнс С., Чомонт Н., Чун Т.В., Черчилль М., Мацио М.Д., Катлама С., Лафейлад А., Ландей А., Ледерман М., Левин С.Р., Мальдарелли Ф., Марголис Д., Марковиц М. , Мартинес-Пикадо Дж., Маллинс Дж. И., Меллорс Дж., Морено С., О’Догерти Ю., Палмер С., Пенико М. С., Петерлин М., Поли Дж., Роути Дж. П., Рузиу К., Сильвестри Дж., Стивенсон М., Теленти А., Линт CV, Вердин Э., Вулфри А., Зайя Дж., Барре-Синусси Ф. Научная рабочая группа Международного общества борьбы со СПИДом по лечению ВИЧ.На пути к излечению от ВИЧ: глобальная научная стратегия. Nat Rev Immunol. 2012; 12: 607–614. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 11. Чун Т.В., Финци Д., Марголик Дж., Чедвик К., Шварц Д., Силичиано Р.Ф. Судьба ВИЧ-1-инфицированных Т-клеток in vivo: количественный анализ перехода к стабильной латентности. Nat Med. 1995; 1: 1284–1290. [PubMed] [Google Scholar] 12. Чун Т.В., Каррут Л., Финци Д., Шен Х, ДиДжузеппе Дж. А., Тейлор Х., Херманкова М., Чедвик К., Марголик Дж., Куинн Т.С., Куо Ю.Х., Брукмейер Р., Зейгер М.А., Бардич-Крово П., Силичиано Р.Ф.Количественная оценка латентных тканевых резервуаров и общей вирусной нагрузки организма при ВИЧ-1-инфекции. Природа. 1997. 387: 183–188. [PubMed] [Google Scholar] 13. Финци Д., Германкова М., Пирсон Т., Каррут Л. М., Бак С., Чейссон Р. Э., Куинн Т. К., Чедвик К., Марголик Дж., Брукмейер Р., Галлант Дж., Марковиц М., Хо Д. Д., Ричман Д. Д., Силичиано Р.Ф. Выявление резервуара ВИЧ-1 у пациентов, получающих высокоактивную антиретровирусную терапию. Наука. 1997; 278: 1295–1300. [PubMed] [Google Scholar] 14. Вонг Дж. К., Хезаре М., Гунтхард Х. Ф., Хавлир Д. В., Игнасио С. К., Спина Калифорния, Ричман Д. Д..Восстановление репликационно-компетентного ВИЧ, несмотря на длительное подавление плазменной виремии. Наука. 1997; 278: 1291–1295. [PubMed] [Google Scholar] 15. Чун Т.В., Стуйвер Л., Мизелл С.Б., Элер Л.А., Мичан Дж.А., Баселер М., Ллойд А.Л., Новак М.А., Фаучи А.С. Наличие индуцибельного латентного резервуара ВИЧ-1 во время высокоактивной антиретровирусной терапии. Proc Natl Acad Sci U S. A. 1997; 94: 13193–13197. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 16. Finzi D, Blankson J, Siliciano JD, Margolick JB, Chadwick K, Pierson T., Smith K, Lisziewicz J, Lori F, Flexner C, Quinn TC, Chaisson RE, Rosenberg E, Walker B, Gange S, Gallant J, Siliciano RF .Скрытая инфекция CD4 + Т-клеток обеспечивает механизм сохранения ВИЧ-1 на протяжении всей жизни даже у пациентов, получающих эффективную комбинированную терапию. Nat Med. 1999; 5: 512–517. [PubMed] [Google Scholar] 17. Силичиано Дж. Д., Кайдас Дж., Финци Д., Куинн Т. К., Чедвик К., Марголик Дж. Б., Ковач С., Ганге С. Дж., Силичиано Р.Ф. Долгосрочные последующие исследования подтверждают стабильность латентного резервуара ВИЧ-1 в покоящихся CD4 + Т-клетках. Nat Med. 2003; 9: 727–728. [PubMed] [Google Scholar] 18. Крукс А.М., Бейтсон Р., Коуп А.Б., Даль Н.П., Григгс М.К., Курук Д.Д., Гей К.Л., Эрон Дж.Дж., Марголис Д.М., Бош Р.Дж., Арчин Н.М.Точная количественная оценка латентного резервуара ВИЧ-1: последствия для стратегий искоренения. J Infect Dis 2015 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 19. Пирсон Т., Хоффман Т.Л., Бланксон Дж., Финци Д., Чедвик К., Марголик Дж. Б., Бак С., Силичиано Дж. Д., Домс Р. У., Силичиано Р.Ф. Характеристика использования хемокиновых рецепторов вирусов в латентном резервуаре вируса иммунодефицита человека типа 1. J. Virol. 2000; 74: 7824–7833. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 20. Бренчли Дж. М., Хилл Б. Дж., Амброзак Д. Р., Прайс Д. А., Гуэнага Ф. Дж., Казазза Дж. П., Куруппу Дж., Яздани Дж., Мигуэлес С. А., Коннорс М., Родерер М., Дуек, округ Колумбия, Куп РА.Подмножества Т-клеток, которые содержат вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) in vivo: значение для патогенеза ВИЧ. J Virol. 2004. 78: 1160–1168. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 21. Chomont N, El-Far M, Ancuta P, Trautmann L, Procopio FA, Yassine-Diab B, Boucher G, Boulassel MR, Ghattas G, Brenchley JM, Schacker TW, Hill BJ, Douek DC, Routy JP, Haddad EK, Sekaly RP. Размер и стойкость резервуара ВИЧ обусловлены выживаемостью Т-клеток и гомеостатической пролиферацией. Nat Med. 2009; 15: 893–900. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 22.Йозефссон Л., фон Стокенстрём С., Фариа Н. Р., Синклер Э, Баккетти П., Киллиан М., Эплинг Л., Тан А., Хо Т., Лемей П., Шао В., Хант П. В., Сомсук М., Уайли В., Доуек, округ Колумбия, Леб Л., Кастер Дж., Хох Р., Пул Л., Дикс С. Г., Хехт Ф., Палмер С. Резервуар ВИЧ-1 у восьми пациентов, получающих длительную супрессивную антиретровирусную терапию, стабилен с небольшими генетическими изменениями с течением времени. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2013; 110: E4987–96. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 23. Jaafoura S, de Goer de Herve MG, Hernandez-Vargas EA, Hendel-Chavez H, Abdoh M, Mateo MC, Krzysiek R, Merad M, Seng R, Tardieu M, Delfraissy JF, Goujard C, Taoufik Y.Прогрессивное сокращение латентного резервуара ВИЧ вокруг ядра менее дифференцированных CD4 (+) Т-клеток памяти. Nat Commun. 2014; 5: 5407. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 24. Карн Дж. Молекулярная биология латентного периода ВИЧ: разрыв и восстановление Tat-зависимой транскрипционной цепи. Curr Opin ВИЧ СПИД. 2011; 6: 4–11. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 29. Арчин Н.М., Сунг Дж.М., Гарридо К., Сориано-Сарабия Н., Марголис Д.М. Искоренение инфекции ВИЧ-1: стремление избавиться от стойкого патогена.Nat Rev Microbiol. 2014; 12: 750–764. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 30. Катлама С., Дикс С.Г., Отран Б., Мартинес-Пикадо Дж., Ван Лунзен Дж., Рузиу К., Миллер М., Велла С., Шмитц Дж. Э., Алерс Дж., Ричман Д. Д., Секали Р.П. Препятствия на пути к излечению от ВИЧ: новые способы нацеливания и искоренения резервуаров ВИЧ-1. Ланцет. 2013; 381: 2109–2117. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 32. Perng GC, Jones C. К пониманию цикла латентной реактивации вируса простого герпеса 1 типа. Междисциплинарная перспектива Infect Dis.2010; 2010: 262415. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 33. Пятак М-младший, Сааг М.С., Ян Л.К., Кларк С.Дж., Каппес Дж.С., Лук К.С., Хан Б.Х., Шоу Г.М., Лифсон Дж.Д. Высокий уровень ВИЧ-1 в плазме на всех стадиях инфицирования определяется с помощью конкурентной ПЦР. Наука. 1993; 259: 1749–1754. [PubMed] [Google Scholar] 34. Заимствовать П., Левицки Х., Вей Х, Хорвиц М.С., Пеффер Н., Мейерс Х., Нельсон Дж. А., Гайрин Дж. Э., Хан Б. Х., Олдстоун М.Б., Шоу Г.М. Противовирусное давление, оказываемое ВИЧ-1-специфическими цитотоксическими Т-лимфоцитами (CTL) во время первичной инфекции, демонстрируется быстрым отбором вируса, ускользающего от CTL.Nat Med. 1997; 3: 205–211. [PubMed] [Google Scholar] 35. Вэй Х, Деккер Дж. М., Ван С., Хуэй Х., Каппес Дж. К., Ву Х, Салазар-Гонсалес Дж. Ф., Салазар М. Г., Килби Дж. М., Сааг М. С., Комарова Н. Л., Новак М. А., Хан Б. Х., Квонг П. Д., Шоу Г. М.. Нейтрализация антител и ускользание от ВИЧ-1. Природа. 2003. 422: 307–312. [PubMed] [Google Scholar] 36. Ричман Д.Д., Рин Т., Литтл С.Дж., Петропулос С.Дж. Быстрая эволюция нейтрализующего ответа антител на ВИЧ-инфекцию 1 типа. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2003; 100: 4144–4149. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 37.Лесли AJ, Pfafferott KJ, Chetty P, Draenert R, Addo MM, Feeney M, Tang Y, Holmes EC, Allen T., Prado JG, Altfeld M, Brander C, Dixon C, Ramduth D, Jeena P, Thomas SA, St John A, Роуч Т.А., Купфер Б., Луцци Дж., Эдвардс А., Тейлор Дж., Лайалл Х., Тюдор-Уильямс Дж., Новелли V, Мартинес-Пикадо Дж., Кипиела П., Уокер Б.Д., Гоулдер П.Дж. Эволюция ВИЧ: CTL ускользают от мутации и реверсии после передачи. Nat Med. 2004. 10: 282–289. [PubMed] [Google Scholar] 38. Jones NA, Wei X, Flower DR, Wong M, Michor F, Saag MS, Hahn BH, Nowak MA, Shaw GM, Borrow P.Детерминанты вируса иммунодефицита человека типа 1 ускользают от первичного ответа цитотоксических Т-лимфоцитов CD8 +. J Exp Med. 2004; 200: 1243–1256. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 39. Фрост С.Д., Рин Т., Смит Д.М., Косаковский пруд С.Л., Лю Й., Паксинос Э., Чаппи С., Галович Дж., Бошейн Дж., Петропулос С.Дж., Литтл С.Дж., Ричман Д.Д. Реакции нейтрализующих антител стимулируют эволюцию оболочки вируса иммунодефицита человека типа 1 во время недавней ВИЧ-инфекции. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2005; 102: 18514–18519.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 40. Wood N, Bhattacharya T., Keele BF, Giorgi E, Liu M, Gaschen B., Daniels M, Ferrari G, Haynes BF, McMichael A, Shaw GM, Hahn BH, Korber B., Seoighe C. Эволюция ВИЧ в ранней инфекции: давление отбора , шаблоны вставки и удаления, а также влияние APOBEC. PLoS Pathog. 2009; 5: e1000414. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 41. Дэн К., Пертя М., Ронгво А., Ван Л., Дюран СМ, Гиаур Дж., Лай Дж., МакХью Х. Л., Хао Х., Чжан Х., Марголик Дж. Б., Гурер С., Мерфи А.Дж., Валенсуэла Д.М., Янкопулос Г.Д., Дикс С.Г., Строиг Т. , Кумар П., Силичиано Дж.Д., Зальцберг С.Л., Флавелл Р.А., Шан Л., Силичиано Р.Ф.Широкий CTL-ответ необходим для устранения латентного ВИЧ-1 из-за преобладания ускользающих мутаций. Природа. 2015; 517: 381–385. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 42. Чун Т.В., Энгель Д., Берри М.М., Ши Т., Кори Л., Фаучи А.С. Раннее создание пула латентно инфицированных покоящихся CD4 (+) Т-клеток во время первичной инфекции ВИЧ-1. Proc Natl Acad Sci U S. A. 1998; 95: 8869–8873. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 43. Бакхейт Р.В., 3-е место, Сальгадо М, Мартинс К.О., Бланксон Дж. Влияние вирусных резервуаров на элитный контроль над инфекцией ВИЧ-1.Cell Mol Life Sci. 2013; 70: 1009–1019. [PubMed] [Google Scholar] 44. Персо Д., Гей Х., Зиемняк С., Чен Ю. Х., Пятак М., младший, Чун Т. В., Штамм М., Ричман Д., Лузуриага К. Отсутствие выявляемой виремии ВИЧ-1 после прекращения лечения у младенца. N Engl J Med. 2013; 369: 1828–1835. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 45. Шен А., Зинк М.С., Манковски Дж. Л., Чедвик К., Марголик Дж. Б., Каррут Л. М., Ли М., Клементс Дж. Э., Силичиано РФ. Покоящиеся CD4 + Т-лимфоциты, но не тимоциты, обеспечивают скрытый вирусный резервуар в модели обезьяньего вируса иммунодефицита – Macaca nemestrina у пациентов, инфицированных вирусом иммунодефицита человека типа 1, получающих высокоактивную антиретровирусную терапию.J Virol. 2003; 77: 4938–4949. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 46. Dinoso JB, Rabi SA, Blankson JN, Gama L, Mankowski JL, Siliciano RF, Zink MC, Clements JE. Модель макаки, инфицированной вирусом иммунодефицита обезьян, для изучения вирусных резервуаров, которые сохраняются во время высокоактивной антиретровирусной терапии. J Virol. 2009; 83: 9247–9257. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 47. Уитни Дж. Б., Хилл А. Л., Санисетти С., Пеналоза-Макмастер П., Лю Дж., Шетти М., Паренто Л., Кабрал С., Шилдс Дж., Блэкмор С., Смит Д. Ю., Бринкман А. Л., Питер Л. Е., Мэтью С. И., Смит К. М., Бордуччи Е. Н., Розенблум Д.И., Льюис М.Г., Хаттерсли Дж., Ли Б., Хессельгессер Дж., Гелезиунас Р., Робб М.Л., Ким Дж. Х., Майкл Н.Л., Баруш Д.Х.Быстрый посев вирусного резервуара перед вирусом SIV у макак-резусов. Природа. 2014; 512: 74–77. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 48. Rouzine IM, Weinberger AD, Weinberger LS. Эволюционная роль латентного периода ВИЧ в усилении передачи вируса. Клетка. 2015; 160: 1002–1012. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 50. Марголик Дж. Б., Фолькман Д. Д., Folks TM, Fauci AS. Амплификация инфекции HTLV-III / LAV за счет антиген-индуцированной активации Т-клеток и прямого подавления вирусом бластогенных ответов лимфоцитов.J Immunol. 1987; 138: 1719–1723. [PubMed] [Google Scholar] 51. Zhang Z, Schuler T, Zupancic M, Wietgrefe S, Staskus KA, Reimann KA, Reinhart TA, Rogan M, Cavert W, Miller CJ, Veazey RS, Notermans D, Little S, Danner SA, Richman DD, Havlir D, Wong J , Jordan HL, Schacker TW, Racz P, Tenner-Racz K, Letvin NL, Wolinsky S, Haase AT. Передача половым путем и распространение ВИО и ВИЧ в покоящихся и активированных CD4 + Т-клетках. Наука. 1999; 286: 1353–1357. [PubMed] [Google Scholar] 52. Денг Х., Лю Р., Эллмайер В., Чхве С., Унутмаз Д., Буркхарт М., Ди Марцио П., Мармон С., Саттон Р. Э., Хилл К. М., Дэвис С. Б., Пайпер С. К., Шалл Т. Дж., Литтман Д. Р., Ландау Н. Р..Идентификация основного корецептора для первичных изолятов ВИЧ-1. Природа. 1996. 381: 661–666. [PubMed] [Google Scholar] 53. Алхатиб Г., Комбадьер С., Бродер С.К., Фенг Ю., Кеннеди П.Е., Мерфи П.М., Бергер Е.А. CC CKR5: рецептор RANTES, MIP-1alpha, MIP-1beta в качестве кофактора слияния для макрофаготропного ВИЧ-1. Наука. 1996; 272: 1955–1958. [PubMed] [Google Scholar] 54. Wu L, Gerard NP, Wyatt R, Choe H, Parolin C, Ruffing N, Borsetti A, Cardoso AA, Desjardin E, Newman W, Gerard C, Sodroski J. CD4-индуцированное взаимодействие первичных гликопротеинов gp120 ВИЧ-1 с хемокином рецептор CCR-5.Природа. 1996; 384: 179–183. [PubMed] [Google Scholar] 55. Тркола А., Драгич Т., Артос Дж., Бинли Дж. М., Олсон В. К., Allaway GP, Ченг-Майер К., Робинсон Дж., Мэддон П. Дж., Мур Дж. П. CD4-зависимые, чувствительные к антителам взаимодействия между ВИЧ-1 и его корецептором CCR-5. Природа. 1996. 384: 184–187. [PubMed] [Google Scholar] 56. Choe H, Farzan M, Sun Y, Sullivan N, Rollins B, Ponath PD, Wu L, Mackay CR, LaRosa G, Newman W., Gerard N, Gerard C, Sodroski J. Бета-хемокиновые рецепторы CCR3 и CCR5 способствуют инфицированию путем первичные изоляты ВИЧ-1.Клетка. 1996; 85: 1135–1148. [PubMed] [Google Scholar] 57. Драджик Т., Литвин В., Allaway GP, Мартин С.Р., Хуанг Й., Нагашима К.А., Каянан К., Мэддон П.Дж., Куп Р.А., Мур Дж. П., Пакстон, Вашингтон. Проникновение ВИЧ-1 в клетки CD4 + опосредуется хемокиновым рецептором CC-CKR-5. Природа. 1996; 381: 667–673. [PubMed] [Google Scholar] 58. Bleul CC, Wu L, Hoxie JA, Springer TA, Mackay CR. Корецепторы ВИЧ CXCR4 и CCR5 по-разному экспрессируются и регулируются на Т-лимфоцитах человека. Proc Natl Acad Sci U S. A. 1997; 94: 1925–1930. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 59.Mohammadi P, Desfarges S, Bartha I, Joos B, Zangger N, Munoz M, Gunthard HF, Beerenwinkel N, Telenti A, Ciuffi A. 24 часа жизни ВИЧ-1 в линии Т-клеток. PLoS Pathog. 2013; 9: e1003161. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 60. Набель Г., Балтимор Д. Индуцибельный фактор транскрипции активирует экспрессию вируса иммунодефицита человека в Т-клетках. Природа. 1987; 326: 711–713. [PubMed] [Google Scholar] 61. Bohnlein E, Lowenthal JW, Siekevitz M, Ballard DW, Franza BR, Greene WC. Одни и те же индуцибельные ядерные белки регулируют активацию митогена как гена рецептора интерлейкина-2-альфа, так и ВИЧ 1-го типа.Клетка. 1988. 53: 827–836. [PubMed] [Google Scholar] 62. Duh EJ, Maury WJ, Folks TM, Fauci AS, Rabson AB. Фактор некроза опухоли альфа активирует вирус иммунодефицита человека типа 1 посредством индукции связывания ядерного фактора с сайтами NF-каппа B в длинном концевом повторе. Proc Natl Acad Sci U S. A. 1989; 86: 5974–5978. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 63. Адамс М., Шармин Л., Кимптон Дж., Ромео Дж. М., Гарсия Дж. В., Петерлин Б.М., Гроудин М., Эмерман М. Клеточная латентность у инфицированных вирусом иммунодефицита человека людей с высокими уровнями CD4 может быть обнаружена по присутствию проксимальных к промотору транскриптов.Proc Natl Acad Sci U S. A. 1994; 91: 3862–3866. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 64. Киношита С., Чен Б.К., Канешима Х., Нолан Г.П. Контроль хозяина паразитизма ВИЧ-1 в Т-клетках ядерным фактором активированных Т-клеток. Клетка. 1998. 95: 595–604. [PubMed] [Google Scholar] 65. Райс AP, Herrmann CH. Регулирование TAK / P-TEFb в CD4 + Т-лимфоцитах и макрофагах. Curr HIV Res. 2003; 1: 395–404. [PubMed] [Google Scholar] 66. Лин Х, Ирвин Д., Канадзава С., Хуанг Л., Ромео Дж., Йен Т.С., Петерлин Б.М. Транскрипционные профили латентного вируса иммунодефицита человека у инфицированных людей: влияние Tat на хозяина и резервуар.J Virol. 2003; 77: 8227–8236. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 67. Песслер F, Cron RQ. Взаимная регуляция ядерного фактора активированных Т-клеток и ВИЧ-1. Genes Immun. 2004. 5: 158–167. [PubMed] [Google Scholar] 68. Laguette N, Sobhian B, Casartelli N, Ringeard M, Chable-Bessia C, Segeral E, Yatim A, Emiliani S, Schwartz O, Benkirane M. SAMHD1 – это специфический для дендритных и миелоидных клеток рестрикционный фактор ВИЧ-1, которому противодействует Vpx. Природа. 2011; 474: 654–657. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 69.Бергер А., Соммер А.Ф., Цварг Дж., Хамдорф М., Вельцель К., Эсли Н., Паниц С., Рейтер А., Рамос И., Джатиани А., Малдер Л.С., Фернандес-Сесма А., Рутч Ф., Саймон В., Кениг Р., Флори Э. SAMHD1-дефицитные CD14 + клетки людей с синдромом Айкарди-Гутьереса очень восприимчивы к инфекции ВИЧ-1. PLoS Pathog. 2011; 7: e1002425. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 70. Baldauf HM, Pan X, Erikson E, Schmidt S, Daddacha W, Burggraf M, Schenkova K, Ambiel I, Wabnitz G, Gramberg T, Panitz S, Flory E, Landau NR, Sertel S, Rutsch F, Lasitschka F, Kim B , Konig R, Fackler OT, Keppler OT.SAMHD1 ограничивает инфекцию ВИЧ-1 в покоящихся CD4 (+) Т-клетках. Nat Med. 2012; 18: 1682–1687. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 71. Романи Б, Коэн Э.А. Вспомогательные белки лентивирусов Vpr и Vpx захватывают убиквитинлигазу cullin4-DDB1 (DCAF1) E3. Curr Opin Virol. 2012; 2: 755–763. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 72. Зак Дж. А., Арриго С. Дж., Вайцман С. Р., Го А. С., Хейслип А., Чен И. С.. Попадание ВИЧ-1 в покоящиеся первичные лимфоциты: молекулярный анализ показывает лабильную латентную вирусную структуру. Клетка.1990; 61: 213–222. [PubMed] [Google Scholar] 73. Пирсон Т.К., Чжоу Ю., Киффер Т.Л., Рафф К.Т., Бак К., Силичиано Р.Ф. Молекулярная характеристика латентного периода до интеграции при инфекции вирусом иммунодефицита человека 1 типа. J Virol. 2002; 76: 8518–8531. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 74. Тейлор Х.Э., Симмонс Г.Э., мл., Мэтьюз Т.П., Хатуа А.К., Попик В., Линдсли К.В., Д’Акуила Р.Т., Браун Х.А. Фосфолипаза D1 связывает активацию CD4 + Т-клеток с c-Myc-зависимым увеличением пула дезоксирибонуклеотидов и репликацией ВИЧ-1.PLoS Pathog. 2015; 11: e1004864. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 75. Yoder A, Yu D, Dong L, Iyer SR, Xu X, Kelly J, Liu J, Wang W, Vorster PJ, Agulto L, Stephany DA, Cooper JN, Marsh JW, Wu Y. преодолеть ограничение кортикального актина в покоящихся CD4 Т-клетках. Клетка. 2008. 134: 782–792. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 76. Дойч Г., Галлоуэй Н.Л., Гэн Х, Ян З., Монро К.М., Зепеда О, Хант П.В., Хатано Х., Совински С., Муньос-Ариас I, Грин В.Гибель клеток в результате пироптоза приводит к истощению Т-лимфоцитов CD4 при ВИЧ-1-инфекции. Природа. 2014; 505: 509–514. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 77. Монро К.М., Ян З., Джонсон-младший, Гэн Х, Дойш Дж., Кроган Нью-Джерси, Грин В. Датчик ДНК IFI16 необходим для гибели лимфоидных CD4 T-клеток, абортивно инфицированных ВИЧ. Наука. 2014; 343: 428–432. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 78. Munoz-Arias I, Doitsh G, Yang Z, Sowinski S, Ruelas D, Greene WC. Полученные из крови CD4 Т-клетки естественным образом сопротивляются пироптозу во время абортивной инфекции ВИЧ-1.Клеточный микроб-хозяин. 2015; 18: 463–470. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 79. Вей X, Гош С.К., Тейлор М.Э., Джонсон В.А., Эмини Е.А., Дойч П., Лифсон Д.Д., Бонхеффер С., Новак М.А., Хан Б.Х. Вирусная динамика при инфекции вирусом иммунодефицита человека 1 типа. Природа. 1995; 373: 117–122. [PubMed] [Google Scholar] 80. Хо Д.Д., Нойман А.Ю., Перельсон А.С., Чен В., Леонард Дж. М., Марковиц М. Быстрый оборот вирионов плазмы и лимфоцитов CD4 при инфекции ВИЧ-1. Природа. 1995; 373: 123–126. [PubMed] [Google Scholar] 81.Перельсон А.С., Нойман А.Ю., Марковиц М., Леонард Дж. М., Хо Д. Д.. Динамика ВИЧ-1 in vivo: скорость клиренса вирионов, продолжительность жизни инфицированных клеток и время генерации вируса. Наука. 1996; 271: 1582–1586. [PubMed] [Google Scholar] 82. Ахмед Р., Грей Д. Иммунологическая память и защитный иммунитет: понимание их связи. Наука. 1996. 272: 54–60. [PubMed] [Google Scholar] 83. Сакаи К., Димас Дж., Ленардо М.Дж. Дополнительные белки Vif и Vpr независимо вызывают ВИЧ-1-индуцированную цитопатичность Т-клеток и остановку клеточного цикла.Proc Natl Acad Sci U S. A. 2006; 103: 3369–3374. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 84. Купер А., Гарсия М., Петровас С., Ямамото Т., Куп Р.А., Набель Г.Дж. ВИЧ-1 вызывает гибель клеток CD4 через ДНК-зависимую протеинкиназу во время интеграции вируса. Природа. 2013; 498: 376–379. [PubMed] [Google Scholar] 85. Уокер Б.Д., Чакрабарти С., Мосс Б., Парадис Т.Дж., Флинн Т., Дурно А.Г., Блумберг Р.С., Каплан Дж.С., Хирш М.С., Скули РТ. ВИЧ-специфические цитотоксические Т-лимфоциты у серопозитивных людей. Природа. 1987. 328: 345–348.[PubMed] [Google Scholar] 86. Куп Р.А., Сафрит Дж. Т., Цао Ю., Эндрюс К. А., Маклеод Дж., Борковски В., Фартинг К., Хо Д. Д.. Временная ассоциация клеточных иммунных ответов с начальным контролем виремии при синдроме первичного вируса иммунодефицита человека 1 типа. J Virol. 1994; 68: 4650–4655. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 87. Schmitz JE, Курода MJ, Santra S, Sasseville VG, Simon MA, Lifton MA, Racz P, Tenner-Racz K, Dalesandro M, Scallon BJ, Ghrayeb J, Forman MA, Montefiori DC, Rieber EP, Letvin NL, Reimann KA.Контроль виремии при инфицировании вирусом иммунодефицита обезьян CD8 + лимфоцитами. Наука. 1999; 283: 857–860. [PubMed] [Google Scholar] 88. Wong JK, Strain MC, Porrata R, Reay E, Sankaran-Walters S, Ignacio CC, Russell T, Pillai SK, Looney DJ, Dandekar S. Подавление CD8 + T-клеток in vivo siv-виремии не опосредуется клиренсом CTL продуктивно инфицированные клетки. PLoS Pathog. 2010; 6: e1000748. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 89. Klatt NR, Shudo E, Ortiz AM, Engram JC, Paiardini M, Lawson B, Miller MD, Else J, Pandrea I, Estes JD, Apetrei C, Schmitz JE, Ribeiro RM, Perelson AS, Silvestri G.CD8 + лимфоциты контролируют репликацию вируса у макак-резусов, инфицированных SIVmac239, без уменьшения продолжительности жизни продуктивно инфицированных клеток. PLoS Pathog. 2010; 6: e1000747. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 90. He G, Ylisastigui L, Margolis DM. Регуляция экспрессии гена ВИЧ-1: новая роль хроматина. ДНК Cell Biol. 2002; 21: 697–705. [PubMed] [Google Scholar] 91. Ylisastigui L, Archin NM, Lehrman G, Bosch RJ, Margolis DM. Усовершенствование ВИЧ-1 из покоящихся CD4 Т-клеток: ингибирование гистондеацетилазы делает возможной скрытую вирусную экспрессию.СПИД. 2004. 18: 1101–1108. [PubMed] [Google Scholar] 92. West MJ, Lowe AD, Karn J. Повторная активация транскрипции вируса иммунодефицита человека в Т-клетках: NF-kappaB p65 стимулирует удлинение транскрипции. J Virol. 2001; 75: 8524–8537. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 93. Дорнадула Г., Чжан Х., ВанУитерт Б., Стерн Дж., Ливорнезе Л., младший, Ингерман М.Дж., Витек Дж., Кеданис Р.Дж., Наткин Дж., Десимоун Дж., Померанц Р.Дж. Остаточная РНК ВИЧ-1 в плазме крови пациентов, принимающих супрессивную высокоактивную антиретровирусную терапию.ДЖАМА. 1999; 282: 1627–1632. [PubMed] [Google Scholar] 94. Палмер С., Виганд А. П., Мальдарелли Ф., Базми Х., Микан Дж. М., Полис М., Дьюар Р. Л., Планта А., Лю С., Меткалф Дж. А., Меллорс Дж. В., Гроб Дж. М.. Новый метод ПЦР, инициированный обратной транскриптазой, в реальном времени с однокопийной чувствительностью к РНК вируса иммунодефицита человека 1 типа в плазме. J Clin Microbiol. 2003. 41: 4531–4536. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 95. Мальдарелли Ф., Палмер С., Кинг М.С., Виганд А., Полис М.А., Микан Дж., Ковач Дж. А., Дэйви Р. Т., Рок-Кресс Д., Дьюар Р., Лю С., Меткалф Дж. А., Рем К., Брун СК, Ханна Дж. Дж., Кемпф DJ, Гроб JM, Mellors JW.АРТ подавляет РНК ВИЧ-1 в плазме до стабильного заданного значения, предсказанного на основе виремии до начала терапии. PLoS Pathog. 2007; 3: e46. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 96. Германкова М., Рэй С.К., Рафф С., Пауэлл-Дэвис М., Ингерсолл Р., Д’Акуила Р.Т., Куинн Т.К., Силичиано Д.Д., Силичиано Р.Ф., Персо Д. Профили лекарственной устойчивости ВИЧ-1 у детей и взрослых с вирусной нагрузкой <50 копий / мл, получающих комбинированную терапию. ДЖАМА. 2001; 286: 196–207. [PubMed] [Google Scholar] 97. Киффер Т.Л., Финукейн М.М., Крапива Р.Е., Куинн Т.К., Броман К.В., Рэй С.К., Персо Д., Силичиано Р.Ф.Генотипический анализ лекарственной устойчивости ВИЧ-1 на пределе обнаружения: производство вируса без эволюции у пролеченных взрослых с неопределяемой нагрузкой ВИЧ. J Infect Dis. 2004. 189: 1452–1465. [PubMed] [Google Scholar] 98. Персо Д., Сибри Г.К., Ахонхай А., Кайдас Дж., Мони Д., Хаттон Н., Уотсон, округ Колумбия, Куинн Т.К., Рэй С.К., Силичиано РФ. Продолжение производства лекарственно-чувствительного вируса иммунодефицита человека типа 1 у детей, получающих комбинированную антиретровирусную терапию, с неопределяемой вирусной нагрузкой. J Virol. 2004; 78: 968–979.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 99. Крапива Р.Э., Киффер Т.Л., Квон П., Мони Д., Хан Й., Парсонс Т., Кофранческо Дж., Младший, Галлант Дж. Э., Куинн Т.С., Джексон Б., Флекснер С., Карсон К., Рэй С., Персо Д., Силичиано Р.Ф. Прерывистая виремия ВИЧ-1 (вспышки) и лекарственная устойчивость у пациентов, получающих ВААРТ. ДЖАМА. 2005; 293: 817–829. [PubMed] [Google Scholar] 100. Бейли Дж., Седагат А. Р., Киффер Т., Бреннан Т., Ли П. К., Винд-Ротоло М., Хаггерти С. М., Камиредди А. Р., Лю Й., Ли Дж., Персо Д., Галлант Дж. SC, Силичиано Дж. Д., Крапива RE, Силичиано РФ.В остаточной виремии вируса иммунодефицита человека типа 1 у некоторых пациентов, получающих антиретровирусную терапию, преобладает небольшое количество инвариантных клонов, которые редко встречаются в циркулирующих CD4 + Т-клетках. J Virol. 2006. 80: 6441–6457. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 101. Никль Д.К., Дженсен М.А., Шрайнер Д., Броди С.Дж., Френкель Л.М., Миттлер Д.Э., Маллинс Д.И. Эволюционные индикаторы резервуаров и компартментов вируса иммунодефицита человека 1 типа. J Virol. 2003; 77: 5540–5546. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 102.Tobin NH, Learn GH, Holte SE, Wang Y, Melvin AJ, McKernan JL, Pawluk DM, Mohan KM, Lewis PF, Mullins JI, Frenkel LM. Доказательства того, что виремии низкого уровня во время эффективной высокоактивной антиретровирусной терапии являются результатом двух процессов: экспрессии архивного вируса и репликации вируса. J Virol. 2005; 79: 9625–9634. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 103. Диносо Дж.Б., Ким С.И., Виганд А.М., Палмер С.Е., Ганге С.Дж., Кранмер Л., О'Ши А., Каллендер М., Спивак А., Бреннан Т., Кирни М.Ф., Прошан М.А., Микан Дж. М., Рем Калифорния, Коффин Дж. М., Меллорс Дж. В., Силичиано Р.Ф., Мальдарелли Ф.Интенсификация лечения не снижает остаточную виремию ВИЧ-1 у пациентов, получающих высокоактивную антиретровирусную терапию. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2009; 106: 9403–9408. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 104. Gandhi RT, Zheng L, Bosch RJ, Chan ES, Margolis DM, Read S, Kallungal B, Palmer S, Medvik K, Lederman MM, Alatrakchi N, Jacobson JM, Wiegand A, Kearney M, Coffin JM, Mellors JW, Eron JJ Группа клинических испытаний СПИДа Команда A5244. Влияние интенсификации ралтегравира на остаточную виремию низкого уровня у ВИЧ-инфицированных пациентов, получающих антиретровирусную терапию: рандомизированное контролируемое исследование.PLoS Med. 2010; 7: e1000321. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 105. McMahon D, Jones J, Wiegand A, Gange SJ, Kearney M, Palmer S, McNulty S, Metcalf JA, Acosta E, Rehm C, Coffin JM, Mellors JW, Maldarelli F. Краткосрочная интенсификация ралтегравира не снижает стойкий низкий уровень уровень виремии у пациентов с подавлением ВИЧ-1 на фоне приема комбинированной антиретровирусной терапии. Clin Infect Dis. 2010; 50: 912–919. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 106. Joos B, Fischer M, Kuster H, Pillai SK, Wong JK, Boni J, Hirschel B, Weber R, Trkola A, Gunthard HF Швейцарское когортное исследование ВИЧ.ВИЧ восстанавливается от латентно инфицированных клеток, а не от продолжения репликации на низком уровне. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2008; 105: 16725–16730. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 107. Хилл А.Л., Розенблум Д.И., Фу Ф., Новак М.А., Силичиано РФ. Прогнозирование результатов лечения для ликвидации латентного резервуара ВИЧ-1. Proc Natl Acad Sci U S A 2014 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 108. Eriksson S, Graf EH, Dahl V, Strain MC, Yukl SA, Lysenko ES, Bosch RJ, Lai J, Chioma S, Emad F, Abdel-Mohsen M, Hoh R, Hecht F, Hunt P, Somsouk M, Wong J, Джонстон Р., Силичиано Р.Ф., Ричман Д.Д., О'Догерти Ю., Палмер С., Дикс С.Г., Силичиано Д.Д.Сравнительный анализ показателей вирусных резервуаров в исследованиях ликвидации ВИЧ-1. PLoS Pathog. 2013; 9: e1003174. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 109. Hutter G, Nowak D, Mossner M, Ganepola S, Mussig A, Allers K, Schneider T, Hofmann J, Kucherer C, Blau O, Blau IW, Hofmann WK, Thiel E. Долгосрочный контроль ВИЧ с помощью CCR5 Delta32 / Delta32 трансплантация стволовых клеток. N Engl J Med. 2009. 360: 692–698. [PubMed] [Google Scholar] 110. Генрих Т.Дж., Ху З., Ли Дж.З., Шарангелла Дж., Буш М.П., Китинг С.М., Галлиен С., Лин Н.Х., Гигель Ф.Ф., Лавуа Л., Хо В.Т., Арманд П., Сойфер Р.Дж., Сагар М., Лакасче А.С., Курицкес ДР.Долгосрочное сокращение резервуаров ВИЧ 1 типа в периферической крови после кондиционирующей аллогенной трансплантации стволовых клеток с пониженной интенсивностью. J Infect Dis. 2013; 207: 1694–1702. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 111. Генрих Т.Дж., Ханхаузер Э., Марти Ф.М., Сириньяно Миннесота, Китинг С., Ли TH, Роблес Ю.П., Дэвис Б.Т., Ли Дж.З., Хейси А., Хилл А.Л., Буш М.П., Арман П., Сойфер Р.Дж., Альтфельд М., Курицкес ДР. Ремиссия ВИЧ-1 без антиретровирусной терапии и возврат вируса после трансплантации аллогенных стволовых клеток: отчет о 2 случаях.Ann Intern Med. 2014; 161: 319–327. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 112. Gartner S, Markovits P, Markovitz DM, Kaplan MH, Gallo RC, Popovic M. Роль мононуклеарных фагоцитов в инфекции HTLV-III / LAV. Наука. 1986; 233: 215–219. [PubMed] [Google Scholar] 113. Koenig S, Gendelman HE, Orenstein JM, Dal Canto MC, Pezeshkpour GH, Yungbluth M, Janotta F, Aksamit A, Martin MA, Fauci AS. Обнаружение вируса СПИДа в макрофагах в ткани мозга больных СПИДом с энцефалопатией. Наука. 1986; 233: 1089–1093.[PubMed] [Google Scholar] 114. Игараши Т., Браун С.Р., Эндо Ю., Баклер-Уайт А., Плишка Р., Бишофбергер Н., Хирш В., Мартин М.А. Макрофаги являются основным резервуаром и поддерживают высокую вирусную нагрузку у макак-резусов после истощения CD4 + Т-клеток высокопатогенным вирусом иммунодефицита обезьян / химерой ВИЧ типа 1 (SHIV): последствия для инфицирования людей ВИЧ-1. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2001; 98: 658–663. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 115. Бабас Т., Муньос Д., Манковски Дж. Л., Таруотер П. М., Клементс Дж. Э., Цинк М.С.Роль микроглиальных клеток в избирательной репликации генотипов вируса иммунодефицита обезьян в головном мозге. J Virol. 2003. 77: 208–216. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 116. Гонсалес-Скарано Ф, Мартин-Гарсия Дж. Нейропатогенез СПИДа. Nat Rev Immunol. 2005; 5: 69–81. [PubMed] [Google Scholar] 117. Пэн Джи, Гринвелл-Вайлд Т, Нарес С., Джин В., Лей К.Дж., Рангель З.Г., Мансон П.Дж., Валь С.М. Миелоидная дифференцировка и восприимчивость к ВИЧ-1 связаны с экспрессией APOBEC3. Кровь. 2007; 110: 393–400.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 118. Арфи В., Ривьер Л., Джарроссон-Вуйлем Л., Гужон С., Ригал Д., Дарликс Дж. Л., Чимарелли А. Характеристика ранних стадий инфицирования первичных моноцитов крови вирусом иммунодефицита человека 1 типа. J Virol. 2008; 82: 6557–6565. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 119. Schnell G, Spudich S, Harrington P, Price RW, Swanstrom R. Компартментализованный вирус иммунодефицита человека типа 1 происходит из долгоживущих клеток у некоторых субъектов с деменцией, связанной с ВИЧ-1.PLoS Pathog. 2009; 5: e1000395. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 120. Редель Л., Ле Дус В., Шерье Т., Марбан С., Яноши А., Аунис Д., Ван Линт С., Рор О., Шварц С. Регулирование латентности ВИЧ-1 в моноцитарно-макрофагальной линии и в CD4 + Т-лимфоцитах. J Leukoc Biol. 2010. 87: 575–588. [PubMed] [Google Scholar] 121. Schnell G, Joseph S, Spudich S, Price RW, Swanstrom R. Репликация ВИЧ-1 в центральной нервной системе происходит в двух разных типах клеток. PLoS Pathog. 2011; 7: e1002286. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 122.Криббс С.К., Леннокс Дж., Калиендо А.М., Браун Л.А., Гвидо Д.М. Здоровые ВИЧ-1-инфицированные люди, получающие высокоактивную антиретровирусную терапию, содержат ВИЧ-1 в своих альвеолярных макрофагах. AIDS Res Hum Retroviruses. 2015; 31: 64–70. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 123. Ханикатт Дж. Б., Валь А., Бейкер С., Спаньоло Р. А., Фостер Дж., Захарова О., Витгрефе С., Каро-Вегас С., Мэдден В., Шарп Дж., Хааз А. Т., Эрон Дж. Дж., Гарсия СП. Макрофаги поддерживают репликацию ВИЧ in vivo независимо от Т-клеток. J Clin Invest 2016 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 125.Саху Г.К., Ли К., Джи Дж., Брасиале В., Барон С., Клойд М.В. Новая система in vitro для создания и изучения латентно ВИЧ-инфицированных долгоживущих нормальных CD4 + Т-лимфоцитов. Вирусология. 2006; 355: 127–137. [PubMed] [Google Scholar] 127. Ян Х.С., Син С., Шань Л., О’Коннелл К., Диносо Дж., Шен А., Чжоу И., Шрам С.К., Хан Й., Лю Джо, Чжан Х., Марголик Дж. Б., Силичиано Р.Ф. Скрининг малых молекул с использованием модели латентного периода ВИЧ на первичных клетках человека позволяет идентифицировать соединения, которые обращают латентный период без клеточной активации. J Clin Invest.2009. 119: 3473–3486. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 128. Tyagi M, Pearson RJ, Karn J. Установление латентности ВИЧ в первичных CD4 + -клетках происходит из-за эпигенетического подавления транскрипции и ограничения P-TEFb. J Virol. 2010. 84: 6425–6437. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 129. Салех С., Соломон А., Уайтман Ф., Ксилага М., Кэмерон ПУ, Левин С.Р. Лиганды CCR7 CCL19 и CCL21 увеличивают способность CD4 + Т-клеток памяти в состоянии покоя к инфекции ВИЧ-1: новая модель латентного периода ВИЧ-1. Кровь.2007; 110: 4161–4164. [PubMed] [Google Scholar] 130. Корделас Л., Верхейен Дж., Белен Д.В., Хорн П.А., Хайнольд А., Кайзер Р., Треншель Р., Шадендорф Д., Диттмер Ю., Esser S. Essen HIV AlloSCT Group. Сдвиг тропизма ВИЧ при трансплантации стволовых клеток с мутацией CCR5 Delta32. N Engl J Med. 2014; 371: 880–882. [PubMed] [Google Scholar] 131. Силичиано Дж. Д., Силичиано РФ. Расширенный анализ культуры для обнаружения и количественного определения латентно инфицированных, покоящихся CD4 + Т-клеток, несущих репликационно-компетентный вирус, у ВИЧ-1-инфицированных лиц.Методы Мол биол. 2005; 304: 3–15. [PubMed] [Google Scholar] 132. Лэрд Дж. М., Эйзеле Э., Раби С. А., Лай Дж., Чиома С., Бланксон Дж. Н., Силичиано Дж. Д., Силичиано Р. Ф. Быстрая количественная оценка латентного резервуара ВИЧ-1 с помощью анализа вирусного роста. PLoS Pathog. 2013; 9: e1003398. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 133. Лэрд Дж. М., Розенблум Д. И., Лай Дж., Силичиано Р. Ф., Силичиано Дж. Д.. Измерение частоты латентного ВИЧ-1 в покоящихся CD4 (+) Т-клетках с использованием анализа кокультуры с ограниченным разбавлением. Методы Мол биол.2016; 1354: 239–253. [PubMed] [Google Scholar] 134. Чун Т.В., Никл Д.С., Юстемент Дж.С., Большой Д., Семерджиан А., Керлин М.Э., О’Ши М.А., Халлахан К.В., Даучер М., Уорд Д.Д., Мойр С., Маллинс Д.И., Ковач С., Фаучи А.С. ВИЧ-инфицированные люди, получающие эффективную противовирусную терапию в течение продолжительных периодов времени, постоянно пополняют свой запас вирусов. J Clin Invest. 2005; 115: 3250–3255. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 135. Флетчер К.В., Стаскус К., Витгрефе С.В., Ротенбергер М., Рейли К., Чипман Дж. Г., Бейлман Г.Дж., Хоруц А., Торкельсон А., Шмидт Т.Э., Андерсон Дж., Перки К., Стивенсон М., Перельсон А.С., Дук Д.К., Хааз А.Т., Шакер Т.В. .Устойчивая репликация ВИЧ-1 связана с более низкими концентрациями антиретровирусных препаратов в лимфатических тканях. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2014; 111: 2307–2312. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 136. Лоренцо-Редондо Р., Фрайер Х.Р., Бедфорд Т., Ким Е.Ю., Арчер Дж., Косаковский пруд С.Л., Чанг Ю.С., Пенугонда С., Чипман Дж. Г., Флетчер К.В., Шакер Т.В., Малим М.Х., Рамбаут А., Хаасе А.Т., Маклин А.Р., Волинский С.М. . Постоянная репликация ВИЧ-1 поддерживает тканевый резервуар во время терапии. Nature 2016 [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 137.Мартин А.Р., Силичиано РФ. Прогресс на пути к искоренению ВИЧ: отчеты о случаях, текущие усилия и проблемы, связанные с лечением. Анну Рев Мед, 2015 [PubMed] [Google Scholar] 138. Shankarappa R, Margolick JB, Gange SJ, Rodrigo AG, Upchurch D, Farzadegan H, Gupta P, Rinaldo CR, Learn GH, He X, Huang XL, Mullins JI. Последовательные эволюционные изменения вируса, связанные с прогрессированием инфекции вируса иммунодефицита человека 1 типа. J Virol. 1999; 73: 10489–10502. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 139.Манский Л.М., Темин Н.М. Более низкая частота мутаций вируса иммунодефицита человека типа 1 in vivo, чем это было предсказано на основе точности очищенной обратной транскриптазы. J Virol. 1995; 69: 5087–5094. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 140. Шихи AM, Гэддис NC, Choi JD, Malim MH. Выделение человеческого гена, который подавляет инфекцию ВИЧ-1 и подавляется вирусным белком Vif. Природа. 2002; 418: 646–650. [PubMed] [Google Scholar] 141. Yu Q, Konig R, Pillai S, Chiles K, Kearney M, Palmer S, Richman D, Coffin JM, Landau NR.Одноцепочечная специфичность APOBEC3G объясняет дезаминирование минус-цепи генома ВИЧ. Nat Struct Mol Biol. 2004. 11: 435–442. [PubMed] [Google Scholar] 142. Киффер Т.Л., Квон П., Крапива Р.Е., Хан Й., Рэй С.К., Силичиано РФ. G -> Гипермутация в областях протеазы и обратной транскриптазы вируса иммунодефицита человека типа 1, находящихся в покоящихся CD4 + Т-клетках in vivo. J Virol. 2005; 79: 1975–1980. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 143. Куэвас Дж. М., Геллер Р., Гарихо Р., Лопес-Альдегер Дж., Санджуан Р.Чрезвычайно высокая скорость мутации ВИЧ-1 in vivo. PLoS Biol. 2015; 13: e1002251. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 144. Mens H, Pedersen AG, Jorgensen LB, Hue S, Yang Y, Gerstoft J, Katzenstein TL. Изучение признаков недавней эволюции пула провирусной ДНК ВИЧ типа 1 за годы успешной ВААРТ. AIDS Res Hum Retroviruses. 2007. 23: 107–115. [PubMed] [Google Scholar] 145. Вагнер Т.А., МакКернан Дж. Л., Тобин Н. Х., Тапиа К. А., Маллинс Дж. И., Френкель Л. М.. Увеличение доли монотипных последовательностей ДНК ВИЧ-1 во время антиретровирусного лечения свидетельствует о пролиферации ВИЧ-инфицированных клеток.J Virol. 2013; 87: 1770–1778. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 146. Бланксон Дж., Финци Д., Пирсон Т. К., Сабундайо Б. П., Чедвик К., Марголик Дж. Б., Куинн Т. К., Силичиано РФ. Двухфазный распад латентно инфицированных CD4 + Т-клеток при острой инфекции вируса иммунодефицита человека 1 типа. J Infect Dis. 2000; 182: 1636–1642. [PubMed] [Google Scholar] 147. Лардер Б.А., Дарби Г., Ричман Д.Д. ВИЧ с пониженной чувствительностью к зидовудину (AZT), выделенный при длительной терапии. Наука. 1989; 243: 1731–1734. [PubMed] [Google Scholar] 148.Гроб JM. Динамика популяции ВИЧ in vivo: значение для генетической изменчивости, патогенеза и терапии. Наука. 1995; 267: 483–489. [PubMed] [Google Scholar] 149. Гунтхард Х.Ф., Вонг Дж.К., Игнасио С.К., Гуателли Дж.К., Риггс Н.Л., Хавлир Д.В., Ричман Д.Д. Репликация вируса иммунодефицита человека и генотипическая резистентность в крови и лимфатических узлах после года мощной антиретровирусной терапии. J Virol. 1998. 72: 2422–2428. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 151. Клавель Ф, Ханс А.Дж. Устойчивость к лекарствам от ВИЧ. N Engl J Med.2004; 350: 1023–1035. [PubMed] [Google Scholar] 152. Theys K, Snoeck J, Vercauteren J, Abecasis AB, Vandamme AM, Camacho RJ Португальская группа изучения устойчивости к ВИЧ-1. Снижение темпов популяционной селекции мутации устойчивости K65R с течением времени у пациентов с ВИЧ-1, получающих комбинированную терапию, включая тенофовир. J Antimicrob Chemother. 2013; 68: 419–423. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 153. Шарпантье С., Ламберт-Никло С., Виссо Б., Моран-Жубер Л., Сторто А., Ларруи Л., Ландман Р., Кальвез В., Марселин А.Г., Декамп Д.Эволюция мутаций обратной транскриптазы K65R, K103N и M184V / I у ВИЧ-1-инфицированных пациентов с вирусологической неудачей в период с 2005 по 2010 год. J Antimicrob Chemother 2013 [PubMed] [Google Scholar] 154. Бонтелл И., Хаггблом А., Братт Дж., Альберт Дж., Соннерборг А. Тенденции в антиретровирусной терапии и распространенность мутаций лекарственной устойчивости ВИЧ в Швеции, 1997–2011 гг. PLoS One. 2013; 8: e59337. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 155. Накагава Ф., Мэй М., Филлипс А. Ожидаемая продолжительность жизни, живущей с ВИЧ: недавние оценки и будущие последствия.Curr Opin Infect Dis. 2013; 26: 17–25. [PubMed] [Google Scholar] 156. ван Сигхем А.И., Гра Л.А., Рейсс П., Бринкман К., де Вольф Ф. Национальное наблюдательное когортное исследование ATHENA. Ожидаемая продолжительность жизни недавно диагностированных бессимптомных ВИЧ-инфицированных пациентов приближается к продолжительности жизни неинфицированных людей. СПИД. 2010; 24: 1527–1535. [PubMed] [Google Scholar] 157. Миллс Э.Дж., Баканда С., Бирунги Дж., Чан К., Форд Н., Купер С.Л., Начега Дж.Б., Дайбул М., Хогг Р.С. Ожидаемая продолжительность жизни лиц, получающих комбинированную антиретровирусную терапию в странах с низким уровнем дохода: когортный анализ из Уганды.Ann Intern Med. 2011; 155: 209–216. [PubMed] [Google Scholar] 158. Johnson LF, Mossong J, Dorrington RE, Schomaker M, Hoffmann CJ, Keizer O, Fox MP, Wood R, Prozesky H, Giddy J, Garone DB, Cornell M, Egger M, Boulle A Международные эпидемиологические базы данных для оценки сотрудничества по СПИДу в Южной Африке . Ожидаемая продолжительность жизни взрослых южноафриканцев, начинающих антиретровирусное лечение: совместный анализ когортных исследований. PLoS Med. 2013; 10: e1001418. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 159. Хаммарлунд Э., Льюис М.В., Хансен С.Г., Стрелов Л.И., Нельсон Дж.А., Секстон Г.Дж., Ханифин Дж.М., Слифка М.К.Продолжительность противовирусного иммунитета после вакцинации против оспы. Nat Med. 2003; 9: 1131–1137. [PubMed] [Google Scholar] 160. Takaki A, Wiese M, Maertens G, Depla E, Seifert U, Liebetrau A, Miller JL, Manns MP, Rehermann B. Клеточные иммунные ответы сохраняются, а гуморальные реакции снижаются через два десятилетия после выздоровления от вспышки гепатита C. Med. 2000. 6: 578–582. [PubMed] [Google Scholar] 161. Мичи, Калифорния, Маклин А., Алкок С., Беверли, ПК. Продолжительность жизни субпопуляций лимфоцитов человека, определяемых изоформами CD45.Природа. 1992; 360: 264–265. [PubMed] [Google Scholar] 162. Маклин АР, Мичи Калифорния. Оценка in vivo деления и смертности Т-лимфоцитов человека. Proc Natl Acad Sci U S. A. 1995; 92: 3707–3711. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 163. Hellerstein MK, Hoh RA, Hanley MB, Cesar D, Lee D, Neese RA, McCune JM. Субпопуляции долгоживущих и короткоживущих Т-клеток при запущенной инфекции ВИЧ-1. J Clin Invest. 2003; 112: 956–966. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 164. Врисекоп Н., ден Брабер I, де Бур А.Б., Руйтер А.Ф., Акерманс М.Т., ван дер Краббен С.Н., Шрайвер Э.Х., Шпиренбург Г., Зауэрвайн Х.П., Хазенберг М.Д., де Бур Р.Дж., Мидема Ф., Борганс Дж.А., Тесселаар К.Редкая продукция, но предпочтительное включение недавно продуцированных наивных Т-клеток в периферический пул человека. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2008; 105: 6115–6120. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 166. Джоветт Дж. Б., Планеллес В., Пун Б., Шах Н. П., Чен М. Л., Чен И. С.. Ген vpr вируса иммунодефицита человека типа 1 задерживает инфицированные Т-клетки в фазе G2 + M клеточного цикла. J Virol. 1995; 69: 6304–6313. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 167. Жерар ФК, Ян Р., Романи Б., Пуассон А., Белзил Дж. П., Ружо Н., Коэн Е. А..Определение взаимодействий и роли DCAF1 / VPRBP в комплексе DDB1-cullin4A E3 убиквитин-лигаза, задействованном Vpr ВИЧ-1 для индукции остановки клеточного цикла G2. PLoS One. 2014; 9: e89195. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 168. Романи Б., Шейх Байглоо Н., Агасадеги М.Р., Аллахбахши Э. Белок Vpr ВИЧ-1 усиливает протеасомную деградацию фактора репликации ДНК MCM10 через убиквитинлигазу Cul4-DDB1 [VprBP] E3 для индукции остановки цикла клеток G2 / M. J Biol Chem. 2015; 290: 17380–17389. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 169.Bosque A, Famiglietti M, Weyrich AS, Goulston C, Planelles V. Гомеостатическая пролиферация не может эффективно реактивировать ВИЧ-1, латентно инфицированные CD4 + Т-клетки центральной памяти. PLoS Pathog. 2011; 7: e1002288. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 170. Мальдарелли Ф., Ву Х, Су Л., Симонетти Ф. Р., Шао В., Хилл С., Спиндлер Дж., Феррис А. Л., Меллорс Дж. В., Кирни М. Ф., Гроб Дж. М., Хьюз Ш. Латентный период ВИЧ. Конкретные сайты интеграции ВИЧ связаны с клональной экспансией и персистенцией инфицированных клеток. Наука. 2014; 345: 179–183.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 171. Wagner TA, McLaughlin S, Garg K, Cheung CY, Larsen BB, Styrchak S, Huang HC, Edlefsen PT, Mullins JI, Frenkel LM. Латентный период ВИЧ. Распространение клеток с ВИЧ, интегрированных в гены рака, способствует стойкой инфекции. Наука. 2014; 345: 570–573. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 172. Simonetti FR, Sobolewski MD, Fyne E, Shao W, Spindler J, Hattori J, Anderson EM, Watters SA, Hill S, Wu X, Wells D, Su L, Luke BT, Halvas EK, Besson G, Penrose KJ, Yang Z , Kwan RW, Van Waes C, Uldrick T., Citrin DE, Kovacs J, Polis MA, Rehm CA, Gorelick R, Piatak M, Keele BF, Kearney MF, Coffin JM, Hughes SH, Mellors JW, Maldarelli F.Клонально размноженные CD4 + Т-клетки могут продуцировать инфекционный ВИЧ-1 in vivo. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2016; 113: 1883–1888. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 173. Суэйн С.Л., Ху Х., Хьюстон Г. Класс II-независимого поколения Т-клеток памяти CD4 из эффекторов. Наука. 1999; 286: 1381–1383. [PubMed] [Google Scholar] 174. Кассиотис Г., Гарсия С., Симпсон Э., Стокингер Б. Ухудшение иммунологической памяти в отсутствие MHC, несмотря на выживание Т-клеток памяти. Nat Immunol. 2002; 3: 244–250. [PubMed] [Google Scholar] 175.Бренчли Дж. М., Рафф Л. Э., Казазза Дж. П., Куп Р. А., Прайс Д. А., Дуек, округ Колумбия. Предпочтительная инфекция сокращает продолжительность жизни CD4 + Т-клеток, специфичных к вирусу иммунодефицита человека, in vivo. J Virol. 2006; 80: 6801–6809. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 176. Су Л.Ф., Кидд Б.А., Хан А., Котцин Дж.Дж., Дэвис М.М. Вирусспецифические Т-клетки с фенотипом памяти CD4 (+) широко распространены у взрослых, не подвергавшихся воздействию. Иммунитет. 2013; 38: 373–383. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 177. Surh CD, Спрент Дж. Гомеостаз наивных Т-клеток и Т-клеток памяти.Иммунитет. 2008; 29: 848–862. [PubMed] [Google Scholar] 178. Maeurer MJ, Lotze MT. Мыши с нокаутом интерлейкина-7 (ИЛ-7). Влияние на лимфопоэз и органоспецифический иммунитет. Int Rev Immunol. 1998. 16: 309–322. [PubMed] [Google Scholar] 179. Purton JF, Tan JT, Rubinstein MP, Kim DM, Sprent J, Surh CD. Противовирусные CD4 + Т-клетки памяти зависят от IL-15. J Exp Med. 2007; 204: 951–961. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 180. Священное Писание-Адамс Д.Д., Брукс Д.Г., Корин Ю.Д., Зак Дж. Интерлейкин-7 индуцирует экспрессию латентного вируса иммунодефицита человека типа 1 с минимальным влиянием на фенотип Т-клеток.J Virol. 2002; 76: 13077–13082. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 181. Wang FX, Xu Y, Sullivan J, Souder E, Argyris EG, Acheampong EA, Fisher J, Sierra M, Thomson MM, Najera R, Frank I, Kulkosky J, Pomerantz RJ, Nunnari G. штамм-специфический индуктор латентных клеточных резервуаров ВИЧ-1 у инфицированных лиц, получающих ВААРТ с подавлением вируса. J Clin Invest. 2005. 115: 128–137. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 182. Vandergeeten C, Fromentin R, DaFonseca S, Lawani MB, Sereti I, Lederman MM, Ramgopal M, Routy JP, Sekaly RP, Chomont N.Интерлейкин-7 способствует сохранению ВИЧ во время антиретровирусной терапии. Кровь. 2013; 121: 4321–4329. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 183. Катлама С., Ламберт-Никлот С., Ассуму Л., Папаньо Л., Лекардоннель Ф, Зуроб Р., Тамбусси Дж., Клотет Б., Юле М., Ахенбах С.Дж., Мерфи Р.Л., Кальвез В., Костальола Д., Отран Б. Исследовательская группа EraMune-01. Интенсификация лечения с последующим введением интерлейкина-7 реактивирует ВИЧ без снижения общей ДНК ВИЧ: рандомизированное исследование. СПИД. 2016; 30: 221–230. [PubMed] [Google Scholar] 184.Саллусто Ф., Лениг Д., Форстер Р., Липп М., Ланзавеккья А. Два подмножества Т-лимфоцитов памяти с различными потенциалами самонаведения и эффекторными функциями. Природа. 1999; 401: 708–712. [PubMed] [Google Scholar] 185. Riou C, Yassine-Diab B, Van grevenynghe J, Somogyi R, Greller LD, Gagnon D, Gimmig S, Wilkinson P, Shi Y, Cameron MJ, Campos-Gonzalez R, Balderas RS, Kelvin D, Sekaly RP, Haddad EK. Конвергенция TCR и передачи сигналов цитокинов приводит к фосфорилированию FOXO3a и способствует выживанию CD4 + центральных Т-клеток памяти.J Exp Med. 2007. 204: 79–91. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 186. Сориано-Сарабия Н., Бейтсон Р. Э., Даль Н. П., Крукс А. М., Курук Д. Д., Марголис Д. М., Арчин Н. М.. Количественное определение репликационно-компетентного ВИЧ-1 в популяциях покоящихся CD4 + Т-клеток. J Virol. 2014; 88: 14070–14077. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 187. Gattinoni L, Lugli E, Ji Y, Pos Z, Paulos CM, Quigley MF, Almeida JR, Gostick E, Yu Z, Carpenito C, Wang E, Douek DC, Price DA, June CH, Marincola FM, Roederer M, Restifo NP . Подмножество Т-клеток памяти человека со свойствами стволовых клеток.Nat Med. 2011; 17: 1290–1297. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 188. Buzon MJ, Sun H, Li C, Shaw A, Seiss K, Ouyang Z, Martin-Gayo E, Ленг Дж., Хенрих TJ, Ли JZ, Pereyra F, Zurakowski R, Walker BD, Rosenberg ES, Yu XG, Lichterfeld M. Персистенция ВИЧ-1 в CD4 (+) Т-клетках со свойствами стволовых клеток. Nat Med. 2014. 20: 139–142. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 189. Хо Ю.К., Шан Л., Хосман Н.Н., Ван Дж., Ласки С.Б., Розенблум Д.И., Лай Дж., Бланксон Дж. Н., Силичиано Дж. Д., Силичиано Р.Ф. Компетентные к репликации неиндуцированные провирусы в латентном резервуаре повышают барьер на пути лечения ВИЧ-1.Клетка. 2013; 155: 540–551. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 190. Райнхардт Р.Л., Хоруц А., Мерика Р., Зелл Т., Дженкинс М.К. Визуализация генерации Т-лимфоцитов CD4 во всем теле. Природа. 2001; 410: 101–105. [PubMed] [Google Scholar] 191. Том Дж.Дж., Юданин Н., Омура Ю., Кубота М., Гриншпун Б., Сатхалиявала Т., Като Т., Лернер Х., Шен И., Фарбер Д.Л. Пространственная карта компартментализации и поддержания Т-клеток человека на протяжении десятилетий жизни. Клетка. 2014; 159: 814–828. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 192.Фарбер Д.Л., Юданин Н.А., Рестифо Н.П. Т-клетки памяти человека: генерация, компартментализация и гомеостаз. Nat Rev Immunol. 2014; 14: 24–35. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 193. Hong JJ, Amancha PK, Rogers K, Ansari AA, Villinger F. Пространственные изменения между CD4 (+) T-фолликулярным помощником, B и CD8 (+) T-клетками во время инфицирования вирусом иммунодефицита обезьян: гомеостаз T / B-клеток, активация и потенциальный механизм утечки вируса. J Immunol. 2012; 188: 3247–3256. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 194.Perreau M, Savoye AL, De Crignis E, Corpataux JM, Cubas R, Haddad EK, De Leval L, Graziosi C, Pantaleo G. Фолликулярные Т-хелперные Т-клетки служат основным компартментом Т-лимфоцитов CD4 для инфицирования, репликации и репликации ВИЧ-1. производство. J Exp Med. 2013; 210: 143–156. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 195. Конник Э., Фолкворд Дж.М., Линд К.Т., Ракаш Э.Г., Майлз Б., Уилсон Н.А., Сантьяго М.Л., Шмитт К., Стивенс Э.Б., Ким ХО, Вагстафф Р., Ли С., Абделал Х.М., Кемп Н., Уоткинс Д.И., Мауинни С., Скиннер П.Дж. . Компартментализация репликации вируса обезьяньего иммунодефицита во вторичных лимфоидных тканях макак-резус связана со стадией заболевания и обратно пропорциональна локализации вирус-специфичных CTL.J Immunol. 2014; 193: 5613–5625. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 196. Fukazawa Y, Lum R, Okoye AA, Park H, Matsuda K, Bae JY, Hagen SI, Shoemaker R, Deleage C, Lucero C, Morcock D, Swanson T, Legasse AW, Axthelm MK, Hesselgesser J, Geleziunas R, Hirsch VM , Эдлефсен П.Т., Пятак М., младший, Эстес Д.Д., Лифсон Д.Д., Пикер Л.Дж. Святилище В-клеточных фолликулов допускает стойкую продуктивную инфекцию вируса иммунодефицита обезьян у элитных контролеров. Nat Med. 2015; 21: 132–139. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 197.Шан Л., Дэн К., Шрофф Н.С., Дюран С.М., Раби С.А., Ян Х.С., Чжан Х., Марголик Дж. Б., Бланксон Дж. Н., Силичиано Р.Ф. Стимуляция ВИЧ-1-специфических цитолитических Т-лимфоцитов способствует устранению скрытого резервуара вируса после реактивации вируса. Иммунитет. 2012; 36: 491–501. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 200. Пурвар Р., Кэмпбелл Дж., Мерфи Дж., Ричардс В.Г., Кларк Р.А., Куппер Т.С. Резидентные Т-клетки памяти (T (RM)) широко распространены в легких человека: разнообразие, функция и антигенная специфичность. PLoS One. 2011; 6: e16245.[Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 201. Чун Т.В., Никл Д.С., Джастемент Дж. С., Мейерс Дж. Х., Роби Дж., Халлахан С. В., Коттилил С., Мойр С., Микан Дж. М., Маллинс Дж. И., Уорд ди-джей, Ковач Дж. А., Маннон П. Дж., Фаучи А. С.. Сохранение ВИЧ в лимфоидной ткани кишечника, несмотря на длительную антиретровирусную терапию. J Infect Dis. 2008; 197: 714–720. [PubMed] [Google Scholar] 202. Lerner P, Guadalupe M, Donovan R, Hung J, Flamm J, Prindiville T., Sankaran-Walters S, Syvanen M, Wong JK, George MD, Dandekar S. Резервуар вируса в слизистой оболочке кишечника у ВИЧ-инфицированных пациентов не является основным источником отскока плазменной виремии после прерывания высокоактивной антиретровирусной терапии.J Virol. 2011; 85: 4772–4782. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 203. Андерсон Дж. А., Арчин Н. М., Инс В., Паркер Д., Виганд А., Коффин Дж. М., Курук Дж., Эрон Дж., Суонстром Р., Марголис Д. М.. Клональные последовательности, выделенные из плазмы пациентов с остаточной вирусемией ВИЧ-1 и получающих усиленную антиретровирусную терапию, идентичны реплицирующимся вирусным РНК, выделенным из циркулирующих покоящихся CD4 + Т-клеток. J Virol. 2011. 85: 5220–5223. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 204. Шредер А.Р., Шинн П., Чен Х., Берри К., Эккер Дж. Р., Бушман Ф.Интеграция ВИЧ-1 в геном человека способствует активным генам и локальным «горячим точкам». Клетка. 2002; 110: 521–529. [PubMed] [Google Scholar] 205. Хан И, Лассен К., Мони Д., Седагат А.Р., Шимодзи С., Лю Х, Пирсон Т.К., Марголик Дж.Б., Силичиано Р.Ф., Силичиано Дж.Д. Покоящиеся CD4 + Т-клетки от людей, инфицированных вирусом иммунодефицита человека типа 1 (ВИЧ-1), несут интегрированные геномы ВИЧ-1 внутри активно транскрибируемых генов хозяина. J Virol. 2004. 78: 6122–6133. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 206. Берри CC, Gillet NA, Melamed A, Gormley N, Bangham CR, Bushman FD.Оценка количества сайтов вставки ретровирусов на основе данных о длине фрагментов ДНК. Биоинформатика. 2012. 28: 755–762. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 207. Cohn LB, Silva IT, Oliveira TY, Rosales RA, Parrish EH, Learn GH, Hahn BH, Czartoski JL, McElrath MJ, Lehmann C, Klein F, Caskey M, Walker BD, Siliciano JD, Siliciano RF, Jankovic M, Nussenzweig . Пейзаж интеграции ВИЧ-1 при скрытой и активной инфекции. Клетка. 2015; 160: 420–432. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar] 208.Икеда Т., Шибата Дж., Йошимура К., Който А., Мацусита С. Рецидивирующая интеграция ВИЧ-1 в локусе BACh3 в покоящихся популяциях CD4 + Т-клеток во время эффективной высокоактивной антиретровирусной терапии. J Infect Dis. 2007; 195: 716–725. [PubMed] [Google Scholar] 209. Имамичи Х., Натараджан В., Адельсбергер Дж. В., Рем К.А., Лемпицки Р.А., Дас Б., Хазен А., Имамичи Т., Лейн Х.С. Продолжительность жизни CD4 + Т-клеток эффекторной памяти определяется некомпетентным к репликации интегрированным провирусом ВИЧ-1. СПИД. 2014; 28: 1091–1099. [PubMed] [Google Scholar] 210.Simonetti FR, Sobolewski MD, Fyne E, Shao W., Spindler J, Hattori J, Anderson EM, Watters SA, Hill S, Wu X, Wells D. Клонально размноженные CD4 + Т-клетки могут продуцировать инфекционный ВИЧ-1 in vivo. Труды Национальной академии наук. 2016; 113 (7): 1883–1888. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [Google Scholar]TCRF 2013: Взгляд со стороны – Новости – Waxahachie Daily Light
Техасский фестиваль Country Reporter, названный в честь ведущего Texas Country Reporter Боба Филлипса, – это своего рода большое событие.Не только местным жителям, но, как я узнал сегодня, также и многим набожным туристам повсюду. На самом деле, это, наверное, самое большое событие года в плане фестивалей, которые обычно собирают десятки тысяч людей в год в наше сообщество.
Хотя я уверен, что есть много жителей, которые с нетерпением ждут этого грандиозного события каждую осень, я честно нашел только несколько уроженцев Ваксахачи, когда гулял по центру города. Кажется, что у журнала Texas Country Reporter из года в год на этот фестиваль стекаются толпы приезжих.
Первыми посетителями фестиваля, с которыми я разговаривал, были Боб Смит и Сильвия Сартр, дуэт брата и сестры, которые совершили удивительный девятичасовой поход, чтобы насладиться подарками этого мероприятия.
О, я просто обожаю смотреть «Texas Country Reporter», и мне очень нравится знакомиться со всеми артистами, которых я привык видеть в этой программе, – сказал шестидесятилетний учитель рисования и волонтер хосписа Сатре, работающий неполный рабочий день.
Следующая группа зевак, с которыми я разговаривал, родом из Флауэр-Маунд, штат Техас.Саманта и Т. Д. Хэнкок приехали на фестиваль, потому что им нравятся ремесла и дружелюбная к собакам среда. Они ищут любую причину, чтобы вывести из дома своего 175-фунтового английского мастифа Мэдди. Однако в следующий раз мы не будем подлетать слишком близко к продавцам еды, – они засмеялись, вспомнив, как им обоим потребовались усилия, чтобы удержать массивного мастифа от запаха ноги индейки, летящей в их сторону.
Продолжая пробираться сквозь толпу, я наткнулся на Натаниэля Вудса, музыканта из Дентона, четвертого участника фестиваля.Он сказал мне, что его любимым продавцом в тот день была талантливая девушка, которая выставляла в палатке картины, сделанные из кофе.
Барбара Гонгавэр приехала из Форт-Уэрта. Мне пришлось отвести ее в сторону и отрегулировать громкость диктофона, чтобы заглушить звуки дико талантливой группы мятлика Purple Hull, играющей на заднем плане. Однако, оглядываясь назад, он воспроизводит как совершенно подходящий саундтрек к ее жареной стране истории о двух ее любимых продавцах того времени.
Во-первых, она объяснила в своей анимированной южной фразе, как она получила неоновый украшенный драгоценностями карман для крепления бюстгальтера от создателей Пэтти Эрнандес и Элис Комптон.
Он идеально подходит для суперактивной девушки в движении, – поделилась Гонгавэр. – Наконец-то у меня есть место, где можно носить его в тренажерном зале, чтобы я мог быть уверен в своей переписке. Она также рассказала мне о скамейках, которые мастер делал из использованных кузовов грузовиков.
Марк Пакетт – человек, стоящий за планом в этой находчивой будке, которая позволяет техасцам продемонстрировать свою гордость за грузовики в форме мебели. Независимо от того, являетесь ли вы человеком Ford или Chevy, вам понравится, как отображается задняя часть кузова грузовика.
Судя по всему, Гонгавэр была девушкой Chevy, потому что в итоге она купила две скамейки Chevy.
Последний зритель, которого я хочу упомянуть, это женщина, которая действительно тронула мое сердце. Оказалось, что она сама была одной из продавцов, которые сделали перерыв в своей будке, у нее автоматически было более глубокое значение для того, чтобы быть здесь. Когда она спросила меня, действительно ли я хочу знать, почему она здесь сегодня, с мрачным выражением ее лица я понял, что значение было намного глубже, чем в любых моих предыдущих случайных встречах.Дииэнн В. Сиврайт рассказала мне от всей души о том, почему она каждый год приезжает на фестиваль, чтобы продать свое мыло из козьего молока ручной работы.
Ее сын был убит около 10 лет назад этой осенью, и сначала все подумали, что это было самоубийство, но после тщательного расследования выяснилось, что это убийство. Однако за это время она рассказала мне о том, как она была настолько эмоционально несостоятельной, что целую неделю сидела в кресле, почти не в силах пошевелиться. Когда она наконец собралась с силами, чтобы встать, она сказала, что у нее есть великодушное желание сделать мыло.
«Это было как подарок от Бога», – сказал Сорайт. Я просто знала, что мне нужно что-то делать, и именно это вернуло меня на грань истощения.
Несмотря на то, что вскоре после этого она узнала, что ее сын не покончил жизнь самоубийством, она уже использовала свой бизнес как способ знакомиться с людьми и говорить о трагической бессмысленности самоубийства. Это дало ей чувство надежды и цели, которые, по ее словам, спасли ей жизнь, и поэтому она будет продолжать распространять это послание.
Эти люди обычно настолько отчуждены от любви других, что даже один человек может иметь такое значение, сказала она.Если мы действительно начнем оглядываться и больше заботиться друг о друге, вместо того, чтобы оставаться такими укоренившимися в нашей повседневной жизни. Мы понятия не имеем, какие изменения мы можем внести в жизнь другого человека. Может быть, даже разница, которая изменит жизнь.
В тот момент я подумал о событиях дня и понял, что все, с кем я разговаривал, хотя поначалу были немного напуганы, действительно, казалось, действительно тепло принимают мой искренний интерес к их мыслям и чувствам.
Никогда не недооценивайте силу небольшого человеческого контакта, заключил Сорит.
Я точно знаю, что вы имеете в виду, я ответил, приятно удивив ее, сердечными объятиями, которые длились немного дольше, чем большинство.
Были ли у них серьезные планы или просто они хотели неспешно хорошо провести время, Фестиваль Боба Филлипса в этом году удовлетворил их всех.
Джессика Уоткинс – жительница Ваксахачи и обозреватель Daily Light.
Универсальный безкриогенный криостат для электромагнитных характеристик сверхпроводящих радиочастотных катушек | EPJ Techniques and Instrumentation
Санчес-Эредиа Дж. Д., Шочска Хансен Э. С., Лаустсен К., Журбенко В., Арденкьер-Ларсен Дж. Х. Схема активной развязки с низким уровнем шума и ее применение в криогенных РЧ катушках 13C на 3 T. Томография. 2017; 3 (1): 60–6.
Артикул Google ученый
Darrasse L, Ginefri JC. Перспективы использования криогенных радиочастотных зондов в биомедицинской МРТ. Биохимия. 2003. 85: 915–37.
Артикул Google ученый
Laistler E. Магнитно-резонансная микрофотография кожи человека in vivo с использованием миниатюрных радиочастотных катушек; 2010.
Google ученый
Poirier-Quinot M, Ginefri JC, Girard O, Robert P, Darrasse L. Характеристики миниатюрной высокотемпературной сверхпроводящей (ВТСП) поверхностной катушки для микроизображения мышей in vivo в стандартном клиническом целом 1,5 Тл сканер тела. Magn Reson Med. 2008. 60 (4): 917–27.
Артикул Google ученый
Шен Зи. Высокотемпературные сверхпроводящие схемы СВЧ [интернет]. Артек Хаус; 1994. стр. 272. Доступно по адресу: https://us.artechhouse.com/High-Temperature-Superconducting-Microwave-Circuits-P870.aspx.
Google ученый
Anlage SM, Hu W., Vlahacos CP, Steinhauer D, Feenstra BJ, Dutta SK, et al. Микроволновые нелинейности в высокотемпературных сверхпроводниках: правда где-то рядом. J Supercond. 1999 г., 1 апреля; 12 (2): 353–62.
ADS Статья Google ученый
Girard O, Ginefri JC, Poirier-Quinot M, Darrasse L. Метод нелинейной характеристики радиочастотных катушек, изготовленных из высокотемпературного сверхпроводящего материала, с точки зрения приложений магнитно-резонансной томографии. Rev Sci Instrum. 2007; 78 (12): 124703.
ADS Статья Google ученый
Холт Д.И., Ричардс РЭ. Отношение сигнал / шум в эксперименте ядерного магнитного резонанса. Дж. Магн Резон. 1976; 24: 71–85.
ADS Google ученый
Холт Д.И., Ричардс RE. Отношение сигнал / шум в эксперименте ядерного магнитного резонанса. Дж. Магн Резон 1969. 1976; 24 (1): 71–85.
Google ученый
Hall AS, Nm A, Button TW, Gilderdale DJ, Gehring KA, Young IR. Использование высокотемпературного сверхпроводника в приемной катушке для магнитно-резонансной томографии. Magn Reson Med.1991. 20 (2): 340–3.
Артикул Google ученый
Penn SJ, Alford NM, Bracanovic D, Esmail AA, Scott V, Button TW. Толстопленочные YBCO приемные катушки для МРТ с очень слабым полем. IEEE Trans Appl Supercond. 1999 июн; 9 (2): 3070–3.
ADS Статья Google ученый
van Heteren JG, James TW, Bourne LC. Тонкопленочные высокотемпературные сверхпроводящие РЧ катушки для МРТ с низким полем.Magn Reson Med. 1994. 32 (3): 396–400.
Артикул Google ученый
Wosik J, Nesteruk K, Xie L-M, Strikovski M, Wang F. MillerJr. JH и др. катушки высокотемпературного сверхпроводящего приемника для магнитно-резонансной томографии мелких животных. Phys C Supercond. 2000. 341–348 (4): 2561–4.
ADS Статья Google ученый
Wright AC, Song HK, Wehrli FW.МР-микроскопия in vivo с использованием обычных радиочастотных катушек, охлаждаемых до 77 ° K. Magn Reson Med. 2000. 43 (2): 163–9.
Артикул Google ученый
Ginefri J-C, Darrasse L, Crozat P. Высокотемпературная сверхпроводящая поверхностная катушка для микроизображения кожи человека in vivo. Magn Reson Med. 2001. 45 (3): 376–82.
Артикул Google ученый
Манн Л.Д., Дюрк Дж. Л., Вендт М., Хансен К. Л., Брей У.Небольшая сверхпроводящая поверхностная катушка с расширенной полосой пропускания и активной развязкой; 1998. с. 435.
Google ученый
Miller JR, Hurlston SE, Ma QY, Face DW, Kountz DJ, MacFall JR и др. Характеристики высокотемпературного сверхпроводящего зонда для микроскопии in vivo при 2,0 Тл. Magn Reson Med. 1999. 41 (1): 72–9.
Артикул Google ученый
Odoj F, Rommel E, Kienlin M, Haase A.Сверхпроводящая головка зонда, применимая для микроскопии ядерного магнитного резонанса в 7 T. Rev. Sci Instrum. 1998. 69 (7): 2708–12.
ADS Статья Google ученый
Lambert S, Ginefri JC, Poirier-Quinot M, Darrasse L. Высокотемпературный сверхпроводящий радиочастотный зонд для магнитно-резонансной томографии, работающий ниже давления окружающей среды в простом криостате с жидким азотом. Rev Sci Instrum. 2013; 84 (5): 054701.
ADS Статья Google ученый
Райт А.С., Сонг Х.К., Эллиотт Д.М., Верли Ф.В. Использование микрохолодильника Джоуля – Томсона для охлаждения радиочастотной катушки для магнитно-резонансной микроскопии. Rev Sci Instrum. 2004; 76 (1): 014301.
ADS Статья Google ученый
Hill HDW. Повышенная чувствительность датчиков ЯМР-спектроскопии за счет использования катушек обнаружения высокотемпературных сверхпроводников.IEEE Trans Appl Supercond. 1997. 7 (2): 3750–5.
ADS Статья Google ученый
Thompson PS, Ackermann RA, Hedeen RA. Двухступенчатый магнит для МРТ с криоохлаждаемой импульсной трубкой. AIP Conf Proc. 2002; 613 (1): 649–53.
ADS Статья Google ученый
Радебо Р. Криокулеры: современное состояние и последние разработки. J Phys Condens Matter Inst Phys J.2009; 21 (16): 164219.
ADS Статья Google ученый
Ginefri J-C, Durand E, Darrasse L. Быстрое измерение чувствительности катушки ядерного магнитного резонанса с помощью одноконтурного зонда. Rev Sci Instrum. 1999. 70 (12): 4730–1.
ADS Статья Google ученый
Authelet G, Bonelli A, Poirier-Quinot M, Ginefri J-C, Saniour I, Baudouy B. Полностью полимерный криогенный криостат для применения $ \ upmu $ -MRI в клинической сфере.IOP Conf Ser Mater Sci Eng. 2019 Апрель; 502: 012156.
Артикул Google ученый
Authelet G, Poirier-Quinot M, Ginefri J-C, Bonelli A, Baudouy B. Концептуальный дизайн устройства μMRI, не содержащего криогенов. IOP Conf Ser Mater Sci Eng. 2017; 278 (1): 012122.
Артикул Google ученый
Saniour I., Authelet G, Baudouy B, Dubuisson R-M, Jourdain L, Willoquet G, et al.Криостат с регулируемой температурой, не содержащий криогенных веществ, интегрированный со сверхпроводящей катушкой, работающей в режиме приемопередатчика, для магнитно-резонансной томографии высокого разрешения. Rev Sci Instrum. 2020; 91 (5): 055106.
ADS Статья Google ученый
Saniour I., Authelet G, Baudouy B, Dubuisson R-M, Jourdain L, Willoquet G, et al. Характеристики нового криостата, не содержащего криогенные вещества, с автоматическим контролем температуры для точной настройки высокотемпературных сверхпроводящих РЧ катушек: МРТ высокого разрешения при 1.5 Т. В ISMRM; 2019. стр. 0570.
Google ученый
Li Z, Bou Abboud G, Guillot G, Hosseinnezhadian S, Jourdain L, Poirier-quinot M, et al. Изучение двух принципов бесконтактной настройки малых монолитных радиочастотных катушек МРТ и разработка автоматизированной системы на основе пьезоэлектрического двигателя. Sens Actuators Phys. 2016; 241: 176–89.
Артикул Google ученый
Saniour I, Authelet G, Baudouy B, Dubuisson R-M, van der Beek CJ, Darrasse L, et al. Новый подход к пассивной развязке для ВЧ-катушек высокого разрешения, основанный на нелинейных электрических свойствах сверхпроводников. Роттердам: ESMRMB 2019, 36-е ежегодное научное собрание. Springer; 2019. https://doi.org/10.1007/s10334-019-00754-2.
Geahel M, Jouanny I, Gorse-Pomonti D, Poirier-Quinot M, Briatico J, van der Beek CJ. Загрязнение краев, объемный беспорядок, шероховатость фронта потока и мультиискейлинг в сверхпроводящих тонких пленках II типа.Конденсирует Материю. 2017; 2 (3): 27.
Артикул Google ученый
Wosik J, Xue L, Xie L-M, Kamel MR, Nesteruk K, Bankson JA. Сверхпроводящая матрица для высокополевой магнитно-резонансной томографии. Appl Phys Lett. 2007; 91 (18): 183503.
ADS Статья Google ученый
Скрытый дворец
Всем привет! Это снова то время!
Продолжая наши усилия с Project Deluge, сегодня мы представляем более 349 прототипов Microsoft Xbox и 135 прототипов Sega Dreamcast! От невыпущенных игр до ранних сборок, эта серия продолжает приносить плоды.
Напомним, что Project Deluge – это постоянный проект по архивированию и оценке всех элементов, представленных во множестве материалов по разработке видеоигр, которые были собраны в течение многих лет. Это стало возможным благодаря самоотверженности только одного чрезвычайно доброго человека, который взял на себя титаническую задачу самостоятельно выбросить все вещи на участке. Каждый предмет в партии оценивался группой преданных своему делу людей на предмет игровых возможностей и целостности как программного обеспечения (посредством эмуляции), так и оборудования, когда это необходимо.Затем каждый элемент был слегка задокументирован и дан общий обзор некоторых основных интересных фактов об этом элементе.
Вначале мы выпустили почти 800 уникальных прототипов для PlayStation 2. После этого мы выпустили вместе более 500 прототипов PlayStation, Sega Saturn и Philips CD-i. На момент написания мы просмотрели почти 4000 дисков, которым не видно конца.
Во-первых, у нас есть довольно приличная партия прототипов Sega Dreamcast, чтобы показать вам! У нас есть ранний прототип 4 Wheel Thunder, скомпилированный за пять месяцев до первой доступной розничной сборки, еще тогда, когда он назывался «Offroad Thunder».У нас также есть прототип Deep Fighter, скомпилированный за несколько месяцев до первой финальной сборки, у которого все еще есть большая часть его FMV-последовательностей в пре-продакшене (без пост-эффектов). У нас есть два хороших прототипа Illbleed и Jet Grind Radio, которые обладают некоторыми приличными функциями отладки. У нас также есть достойные прототипы Ready 2 Rumble Boxing Round 2, San Francisco Rush 2049, Shadow Man, Test Drive Cycles, Vigilante 8: Second Offense, WWF Attitude и даже Pro Skater Тони Хока. Хотя в этой части лота было не так много невыпущенных игр, мы все же нашли неизданный прототип Shanghai Dynasty с английской локализацией, который собирался опубликовать Activision, но был отменен.
В качестве дополнительного удовольствия Лоран из Sega Dreamcast Info Games Preservation любезно пожертвовал два прототипа Dreamcast как раз вовремя для Project Deluge! Лоран уже много лет занимается консервацией прототипов Dreamcast, накопил и выпустил множество прототипов. У него есть планы выпустить много, много больше в конце этого года, так что будьте уверены, что еще больше не за горами!
Неплохое начало, но могло бы быть лучше, правда?
Далее, однако, у нас есть очень хорошая коллекция прототипов Microsoft Xbox! От невыпущенных игр, ранних прототипов, технических демонстраций, прототипов локализации, отладочных сборок и некоторых близких к финальным сборкам с включенными функциями отладки – эта часть лота поможет вам.Это тоже в некоторой степени уместно, поскольку Xbox в некотором роде духовный преемник Dreamcast.
В этой части лота у нас есть неизданный порт Xbox для American Idol, Hail to the Chimp (который будет выпущен на 360), He-Man: Defender of Grayskull и Pac-Man World Rally. У нас есть неизданная английская локализация игры Dinosaur Hunting: Ushinawareta Daichi, которая изначально должна была быть опубликована Metro 3D где-то в конце 2003 года, но вскоре была отменена по неизвестным причинам.У нас также есть прототипы неизданных игр, таких как The Red Star, US Open 2003 и The Vatz. По иронии судьбы, поскольку Xbox является своего рода духовным преемником Dreamcast, у нас есть немало действительно интересных прототипов некоторых игр, разработанных Sega! У нас есть действительно хороший прототип Crazy Taxi 3: High Roller, ToeJam & Earl III (почему так много прототипов этой игры ?!), Jet Set Radio Future, Sega GT и Gun Valkyrie! Некоторые другие примечательные прототипы – действительно хороший прототип Psychonauts, который в настоящее время является самым ранним из доступных прототипов, Rogue Ops, Room Zoom: Race for Impact (под названием Micro Mayhem) и многое другое!
Что интересно в большинстве прототипов Xbox, так это то, сколько из них еще не выпущено.Учитывая, что Microsoft в то время была относительно новичком в индустрии видеоигр, и учитывая, что Sony PlayStation 2 штурмом захватила весь мир, вполне вероятно, что многие разработчики / издатели остерегаются и решили не портировать некоторые игры, которые могут не переноситься. хорошо продаются на платформе. Скорее всего, в то время существовало сомнение в том, будет ли Xbox вообще иметь успех, поэтому большинство разработчиков, возможно, не захотели размещать некоторые из своих игр на платформе. К счастью для Microsoft, после успешного существования Xbox 360 ситуация изменилась.
Системный диск 2 (Источник: Handheldmuseum.com)
Подавляющее большинство прототипов Dreamcast мастерируются на GD-R, перезаписываемой версии проприетарного формата оптических дисков Sega GD-ROM (который представляет собой не что иное, как усиленный компакт-диск, использующий ISO 9660). Прототипы Dreamcast немного сложно сбросить, так как даже по сей день все диски GD-R можно читать только на реальном оборудовании. К счастью, GD-R можно прочитать на розничном оборудовании, но с одной загвоздкой.Чтобы Dreamcast мог получить доступ к содержимому GD-R, если он не использует комплект разработчика Katana, вам понадобится что-то, называемое системным диском 2. Системный диск 2 – это специальный диск, который используется для разблокировки Dreamcast. на уровне микропрограммы привода, чтобы он мог читать диски. Поскольку задействованные механизмы безопасности встроены в сам физический диск, вы не можете создать копию системного диска 2, создав его самозагружающуюся версию на CD-R. По иронии судьбы это небольшое предостережение окажется более безопасным, чем то, как защищены розничные игры.Помимо физической замены GD-R на розничный диск с таким же количеством дорожек, требуется системный диск 2 для чтения и сброса GD-R с помощью розничного оборудования. По сей день вы не можете прочитать GD-R даже с помощью традиционных методов замены дисков в приводе CD / DVD. Каждый прототип Dreamcast, представленный в этой части лота, был сброшен с использованием реального оборудования вместе с системным диском 2 с использованием устройства чтения SD-карт, которое можно подключить к последовательному порту консоли. К сожалению, это не одобренный Redump метод сброса, поэтому никакие прототипы не могут быть немедленно загружены в каталог Redump. Учитывая, что устаревшие оптические приводы Dreamcast не прослужат вечно, мы надеемся, что когда-нибудь прототипы Dreamcast можно будет легко сбросить с помощью более доступного оборудования и техники.
К счастью, прототипы Xbox не являются проприетарными, но гораздо более непоследовательны, когда дело доходит до того, как они создаются и хранятся. Большинство розничных игр для Xbox создаются на двухслойных DVD-дисках, состоящих из раздела DVD-VIDEO (который воспроизводится, когда диск Xbox вставлен во что-либо, кроме Xbox) и собственный раздел «игры» для Xbox. Насколько нам известно, это согласованная структура разделов, которая существует в каждой розничной игре для Xbox. А вот с прототипами – совсем другая история.Возможно, из-за того, что платформа Xbox еще не была полностью разработана, многие прототипы осваиваются непоследовательно. Чтобы дать вам представление о том, насколько непоследовательны, вот варианты, в которых можно освоить прототипы Xbox.
- Прототипы могут быть изготовлены либо на однослойном CD, DVD-R, либо на двухслойном DVD-R (или прессованном, как в розничной торговле).
- Прототипы на любом из этих дисков могут быть освоены со следующими схемами разделов:
- Один пустой раздел DVD-VIDEO, за которым следует раздел с игрой Xbox.
- Один игровой раздел Xbox.
- Раздел UDF для хранения игровых данных, эквивалентный записи файлов непосредственно на DVD-R с помощью отдельной программы.
- ISO 9660 для хранения игровых данных, используется везде, где можно использовать CD-R.
- Прототипы можно запустить следующими способами:
- Прямо из файла default.xbe, встроенного в раздел игры Xbox, если он есть.
- Из случайного файла .xbe, расположенного в корне диска или внутри отдельной папки, обычно используемой, если диск использовал UDF.
- Принудительно устанавливается на жесткий диск Xbox с помощью программы установки CBX.
- Принудительно устанавливается на жесткий диск Xbox с помощью собственного установщика игры.
- Если прототипы изготовлены на штампованном диске (например, в розничной торговле), предполагается, что они будут работать даже на розничном оборудовании.
- Если прототипы создаются на записываемых носителях, их, скорее всего, нужно будет воспроизвести на Xbox Developer’s Kit.
- Некоторые прототипы разработаны для поддержки 128MB RAM, обычно в целях отладки.Это означает, что игры никогда не будут работать в розничном магазине с 64 МБ ОЗУ.
Из-за этих несовместимых условий просмотр дисков усложнялся, поскольку к каждой игре приходилось обрабатывать по-своему. Хотя большинство игр могут работать на розничном оборудовании, если их поместить непосредственно на внутренний жесткий диск Xbox, для работы некоторых игр требуются комплекты разработчика. Все эти прототипы, представленные в лоте, взяты с записываемых носителей, так как спрессованные диски не могли быть выброшены вовремя. Тем не менее, планируется архивировать эти диски, так что ожидайте этого.… когда-нибудь… 🙂
Это также усложнило оценку игр с помощью наших скриптов, так как каждый из этих сценариев должен был быть рассмотрен, чтобы сканировать каждый элемент в партии. У нас также были некоторые трудности с получением данных из дампов розничных игр в стиле Redump, поскольку у нас нет доступа к обновленному полному набору для работы. Диски Xbox, в которых используется проприетарный игровой раздел Xbox, используют уникальную файловую систему, которая не включает отметки времени ни для одного из файлов. К счастью, каждая игра для Xbox использует один или несколько исполняемых файлов с именем.xbe, которые содержат очень подробные метаданные для каждого диска с игрой. Мы смогли использовать эти метаданные для определения дат сборки дисков, идентификаторов игр для сопоставления и т. Д. Мы продолжили использовать наш метод составной контрольной суммы для этой части лота, чтобы найти игры, соответствующие финалу. Однако, учитывая, что игры иногда могут быть освоены способами, отличными от окончательной розничной версии, в случае, если у нас была игра, которая содержала исполняемую метку времени сборки, которая соответствовала эквиваленту в нашем окончательном наборе данных, мы вручную исследовали игра, чтобы определить, действительно ли она уникальна.В большинстве случаев большинство сборок, в которых не было совпадения составной контрольной суммы, различались из-за водяных знаков или причудливых различий мастеринга, которые включали каталоги, которые были удалены после последнего нажатия, или других несущественных изменений, которые можно отметить где-то еще.
Это подводит нас к последней части нашей оценки – игровому тестированию. Как упоминалось ранее в наших предыдущих статьях, посвященных Project Deluge, мы потратили много времени на тестирование каждого уникального прототипа в партии и написали базовое резюме заметных различий, с которыми мы столкнулись во время игры.Мы делаем это для того, чтобы игры сохранялись по сути, чтобы в них можно было играть как угодно. В прошлом мы преимущественно использовали эмуляцию для запуска каждой игры для удобства и в большинстве случаев для отладки, и эта часть партии не оказалась исключением. Учитывая непоследовательный характер этой части партии, тестирование на реальном оборудовании оказалось довольно трудным, особенно с учетом того, что только у одного или двух из нас есть розничное оборудование, с которым можно поиграть!
Хотя мы не связаны ни с одним разработчиком эмуляторов (и не связаны с нами), мы были очень впечатлены тем, насколько далеко зашла эмуляция Xbox всего за несколько лет.Хотя эмуляция Xbox существует уже более десяти лет, только недавно большинство игр можно было эмулировать с относительно комфортным интерфейсом. Из 349 представленных сегодня игр только около 80 нужно было запускать на оборудовании, чтобы их можно было правильно протестировать. Во время игрового тестирования мы вели записи о каждом запущенном прототипе и о любых проблемах, с которыми мы сталкивались, которые мешали нам работать. Мы не смогли бы сделать это даже пять лет назад, что является верным свидетельством того, насколько далеко зашла эмуляция Xbox.
Как всегда, мы хотели бы поблагодарить всех членов команды Project Deluge за помощь нам в этом проекте. Без вашей помощи на то, чтобы что-то произошло, потребовались бы эоны. Мы хотели бы поблагодарить Джейсона Скотта из Internet Archive за предоставленную нам возможность пройти этот путь и за предоставление хостинга для текущего проекта, а также Iniche за работу с владельцем всех этих замечательных сборок, чтобы все это произошло. .Особая благодарность Master Emerald за то, что он снова создал для нас прекрасное искусство, чтобы сделать каждый из наших релизов чем-то особенным (особенно в короткие сроки!). Мы хотели бы поблагодарить drx и ehw за написание сценариев и помощь в создании проекта на начальном этапе, а также Sazpaimon за то, что он пошел дальше, расширив возможности сценария, запустив некоторые сборки на оборудовании, потоках и многое другое. И последнее, но не менее важное: мы хотели бы поблагодарить всех наших исследователей (Zoda-Y13, GopherGirl, Xkeeper (TCRF), Rusty (TCRF), Shoemanbundy, Hwd45, SolidSnake11, DigitalWarrior, Nex и Drac за то, что нашли время чтобы помочь нам пройти каждую сборку на этом участке.И, наконец, мы также хотели бы поблагодарить Лорана из Sega Dreamcast Info Preservation Games за дополнительные вкусности как раз к этому выпуску! Он сделал больше для сохранения прототипов Dreamcast, чем кто-либо другой, и в настоящее время является мировым рекордсменом по количеству сброшенных и принадлежащих прототипам для Sega Dreamcast!
Этот проект еще далек от завершения и только начинается! Следите за обновлениями в ближайшие пару месяцев, чтобы узнать больше!
До следующего раза!
(ПРИМЕЧАНИЕ. Мы находимся в процессе миграции нашего сервера, чтобы использовать больше хранилища.Мы добавили возможность добавления внешних ссылок в форму прототипа.