Ст 80 тк рф п 1: Страница не найдена
Ст. 80 ТК РФ
Работник имеет право расторгнуть трудовой договор, предупредив об этом работодателя в письменной форме не позднее чем за две недели, если иной срок не установлен настоящим Кодексом или иным федеральным законом. Течение указанного срока начинается на следующий день после получения работодателем заявления работника об увольнении.
По соглашению между работником и работодателем трудовой договор может быть расторгнут и до истечения срока предупреждения об увольнении.
В случаях, когда заявление работника об увольнении по его инициативе (по собственному желанию) обусловлено невозможностью продолжения им работы (зачисление в образовательную организацию, выход на пенсию и другие случаи), а также в случаях установленного нарушения работодателем трудового законодательства и иных нормативных правовых актов, содержащих нормы трудового права, локальных нормативных актов, условий коллективного договора, соглашения или трудового договора работодатель обязан расторгнуть трудовой договор в срок, указанный в заявлении работника.
До истечения срока предупреждения об увольнении работник имеет право в любое время отозвать свое заявление. Увольнение в этом случае не производится, если на его место не приглашен в письменной форме другой работник, которому в соответствии с настоящим Кодексом и иными федеральными законами не может быть отказано в заключении трудового договора.
По истечении срока предупреждения об увольнении работник имеет право прекратить работу. В последний день работы работодатель обязан выдать работнику трудовую книжку или предоставить сведения о трудовой деятельности (статья 66.1 настоящего Кодекса) у данного работодателя, выдать другие документы, связанные с работой, по письменному заявлению работника и произвести с ним окончательный расчет.
Если по истечении срока предупреждения об увольнении трудовой договор не был расторгнут и работник не настаивает на увольнении, то действие трудового договора продолжается.
Прокурор разъясняет – Прокуратура Рязанской области
Статья 80 Трудового кодекса РФ предусматривает, что работник имеет право расторгнуть трудовой договор, предупредив об этом работодателя в письменной форме не позднее чем за две недели, если иной срок не установлен ТК РФ или иным федеральным законом. То есть, расторжение трудового договора по инициативе работника допустимо в случае, когда подача заявления об увольнении являлась добровольной.
Трудовым законодательством установлен прямой запрет дискриминации в сфере труда. Принуждая сотрудника написать заявление «по собственному желанию», работодатель тем самым нарушает требования закона.
Лица, считающие себя подвергнутыми дискриминации в сфере труда, вправе обратиться в суд с заявлением о восстановлении нарушенных прав, возмещении материального вреда и компенсации морального вреда.
Согласно разъяснениям, данным в п. 22 Постановления Пленума Верховного Суда РФ «О применении судами РФ Трудового кодекса РФ», при рассмотрении споров о расторжении по инициативе работника трудового договора, заключенного на неопределенный срок, а также срочного трудового договора (п. 3 ч. 1 ст.77, ст.80 Трудового кодекса РФ) суд учитывает, что расторжение трудового договора по инициативе работника допустимо в случае, когда подача заявления об увольнении являлась добровольным его волеизъявлением.
Согласно ч. 4 ст. 80 Трудового кодекса РФ работник может также отозвать свое заявление об увольнении до истечения срока предупреждения об увольнении. Работник вправе отозвать заявление в любое время до тех пор, пока ему не дали ознакомиться с приказом об увольнении и не выдали на руки трудовую книжку с расчетом.
В случае установления факта принуждения к увольнению работника работодатель может быть привлечен к административной ответственности, предусмотренной ст.5.27 КоАП РФ.
Подготовлено прокуратурой Захаровского района
Статья 80. Расторжение трудового договора по инициативе работника (по собственному желанию).
§ 1. Статья 80 ТК предоставляет право работнику по его инициативе в любое время расторгнуть трудовой договор, предупредив об этом работодателя в письменной форме не позднее чем за две недели, если ТК или иным федеральным законом не установлен иной срок. Необходимо знать, что течение указанного срока начинается на следующий день после получения работодателем заявления работника об увольнении. Данное положение отражает принцип свободы труда и свободы трудового договора.
§ 2. Трудовой договор по соглашению работника, подавшего заявление об увольнении по собственному желанию, с работодателем может быть расторгнут и до истечения срока предупреждения об увольнении.
§ 3. В тех случаях, когда заявление работника об увольнении обусловлено невозможностью продолжения работы (прием его на очное обучение в вуз или другое образовательное учреждение, выход на пенсию, перевод супруга в другую местность и другие уважительные причины), а также при нарушении работодателем трудовых прав работника, условий трудового или коллективного договора, соглашения работодатель обязан расторгнуть трудовой договор в срок, указанный в заявлении работника.
§ 4. Работник имеет право до истечения срока предупреждения в любое время отозвать свое заявление, кроме случая, когда на его место приглашен в письменной форме из другой организации работник, которому нельзя отказать в приеме на работу согласно ст. 64 ТК (см. комментарий к ней). Работодатель обязан (кроме указанного случая) аннулировать заявление работника (вернуть его ему).
§ 5. Следует иметь в виду, что Пленум Верховного Суда РФ в Постановлении от 17 марта 2004 г. N 2 в п. 22 указал, что, если по истечении срока предупреждения трудовой договор не был расторгнут и работник не настаивает на увольнении, действие трудового договора считается продолженным.
Если заявление об увольнении подал работник, не достигший 18 лет, об этом надо ставить в известность комиссию по делам несовершеннолетних.
§ 6. Если работник оставил работу до истечения срока предупреждения и без приказа о его досрочном увольнении, работодатель может квалифицировать это как прогул без уважительных причин и уволить такого работника за прогул (см.
Работодатель не имеет права без согласия работника уволить его по поданному им заявлению до истечения срока предупреждения. Он не может его уволить по ст. 80 ТК, если нет письменного заявления работника об этом.
§ 7. По истечении срока предупреждения, если работодатель не увольняет работника по какой-то причине (что часто встречается на практике), последний может оставить работу. Работодатель обязан выдать ему трудовую книжку и произвести с ним расчет. В противном случае, согласно ст. 234 ТК, работнику выплачивается не полученный им заработок за время незаконного лишения его возможности трудиться, поскольку он не может поступить без трудовой книжки на другую работу.
§ 8. В течение предупредительного срока работодатель вправе уволить работника, если тот совершил проступок, который является основанием увольнения (появился на работе в нетрезвом состоянии и т.д.).
§ 9. Срок предупреждения исчисляется со следующего дня после подачи работником заявления. Если последний день срока предупреждения приходится на нерабочий день, то днем окончания срока предупреждения считается ближайший следующий за ним рабочий день. В последний день работы работодатель обязан оформить увольнение и произвести расчет, выдать работнику трудовую книжку с оформленной записью об основании увольнения.
§ 10. Поскольку ст. 80 не оговаривает (как было в ст. 31 КЗоТ), что таким образом расторгается трудовой договор на неопределенный срок, мы делаем вывод, что она предоставляет аналогичное право расторжения по собственному желанию срочного трудового договора.
§ 11. Осужденные к исправительным работам без лишения свободы в течение срока их отбывания не могут быть уволены по собственному желанию без разрешения в письменной форме уголовно-исправительной инспекции (ст. 40 УИК РФ).
Пресненский межрайонный прокурор разъясняет особенности восстановления работника на работе при увольнении по собственному желанию
В соответствии с п.3 ч.1 ст.77 ТК РФ основанием прекращения трудового договора может быть расторжение трудового договора по инициативе работника.
Согласно ст. 80 ТК РФ работник имеет право расторгнуть трудовой договор предупредив об этом работодателя в письменной форме не позднее чем за две недели, если иной срок не установлен настоящим Кодексом или иным федеральным законом. Течение указанного срока начинается на следующий день после получения работодателем заявления работника об увольнении.
По соглашению между работником и работодателем трудовой договор может быть расторгнут и до истечения срока предупреждения об увольнении.
В случае, если работник после написания заявления об увольнении по собственному желанию передумал увольняться, то в соответствии с п. 4 ст. 80 ТК РФ до истечения срока предупреждения об увольнении работник имеет право в любое время отозвать свое заявление. Увольнение в этом случае не производится, если на его место не приглашен в письменной форме другой работник, которому в соответствии с настоящим Кодексом не может быть отказано в заключении трудового договора.
Если по истечении срока предупреждения об увольнении трудовой договор не был расторгнут и работник не настаивает на увольнении, то действие трудового договора продолжается.
В случае, если работник в установленные законом сроки не отозвал свое заявление об увольнении по собственному желанию, то при ознакомлении и подписании приказа об увольнении истец может оставить на приказе свои возражения, свое несогласие, связанное с увольнением.
При рассмотрении судом гражданского спора о восстановлении на работе в связи с увольнением по собственному желанию и в случае заявления работником в ходе рассмотрения дела о том, что заявление об увольнении по собственному желанию было написано им под давлением со стороны работодателя, данные доводы проверяются судом в обязательном порядке, путем вызова и допроса свидетелей по обстоятельствам дела. Кроме того, выясняются такие обстоятельства, как обращался ли истец (работник) в трудовую инспекцию, правоохранительные органы, прокуратуру по факту оказания на него давления, а в случае нахождения работника в подавленном эмоциональном состоянии, обращался ли он за медицинской помощью в медицинские организации.
Временная нетрудоспособность и увольнение работника
Работница 24 апреля написала заявление об увольнении по собственному желанию 25 апреля. При этом у нее есть листок нетрудоспособности с 19 по 30 марта, который имеет продолжение. То есть работница еще находится на больничном. Дата закрытия листка нетрудоспособности пока не известна. Когда следует уволить работницу и по какой статье: ст. 77 или 80 ТК РФ?Если работник в течение 30 дней после увольнения открывает новый лист нетрудоспособности, организация должна оплатить его. А сколько последующих листов нетрудоспособности должна оплачивать организация?
Поскольку задано, по сути, несколько вопросов, ответим на них по порядку.
Увольнение по инициативе работника (по собственному желанию) осуществляется на основании п. 3 ч. 1 ст. 77 ТК РФ, что предписано соответствующими нормативными документами.
Извлечение
из Правил ведения и хранения трудовых книжек, изготовления бланков трудовой книжки и обеспечения ими работодателей
(утверждены Постановлением Правительства РФ от 16.04.2003 № 225, в ред. от 19.05.2008)
15. При прекращении трудового договора по основаниям, предусмотренным статьей 77 Трудового кодекса Российской Федерации (за исключением случаев расторжения трудового договора по инициативе работодателя и по обстоятельствам, не зависящим от воли сторон (пункты 4 и 10 этой статьи), в трудовую книжку вносится запись об увольнении (прекращении трудового договора) со ссылкой на соответствующий пункт части первой указанной статьи.
16. При расторжении трудового договора по инициативе работодателя в трудовую книжку вносится запись об увольнении (прекращении трудового договора) со ссылкой на соответствующий пункт статьи 81 Трудового кодекса Российской Федерации.
17. При прекращении трудового договора по обстоятельствам, не зависящим от воли сторон, в трудовую книжку вносится запись об основаниях прекращения трудового договора со ссылкой на соответствующий пункт статьи 83 Трудового кодекса Российской Федерации.
18. При прекращении трудового договора по другим основаниям, предусмотренным Трудовым кодексом Российской Федерации или иными федеральными законами, в трудовую книжку вносится запись об увольнении (прекращении трудового договора) со ссылкой на соответствующие статью, пункт Трудового кодекса Российской Федерации или иного федерального закона.
Увольнение на основании ст. 80 ТК РФ невозможно, так как эта статья является процессуальной, то есть устанавливает процедуру (порядок) увольнения по п. 3 ч. 1 ст. 77 ТК РФ.
Извлечение
из Инструкции по заполнению трудовых книжек
(утверждена Постановлением Минтруда России от 10.10.2003 № 69)
5.2. При прекращении трудового договора по основаниям, предусмотренным статьей 77 Трудового кодекса Российской Федерации (за исключением случаев расторжения трудового договора по инициативе работодателя и по обстоятельствам, не зависящим от воли сторон (пункты 4 и 10 этой статьи), в трудовую книжку вносится запись об увольнении (прекращении трудового договора) со ссылкой на соответствующий пункт указанной статьи.
Например: «Уволен по соглашению сторон, пункт 1 статьи 77 Трудового кодекса Российской Федерации» или «Уволен по собственному желанию, пункт 3 статьи 77 Трудового кодекса Российской Федерации».
5.3. При расторжении трудового договора по инициативе работодателя в трудовую книжку вносится запись об увольнении (прекращении трудового договора) со ссылкой на соответствующий пункт статьи 81 Трудового кодекса Российской Федерации либо иные основания расторжения трудового договора по инициативе работодателя, предусмотренные законодательством.
Например: «Уволен в связи с ликвидацией организации, пункт 1 статьи 81 Трудового кодекса Российской Федерации» или «Уволен в связи с прекращением допуска к государственной тайне, пункт 12 статьи 81 Трудового кодекса Российской Федерации».
5.4. При прекращении трудового договора по обстоятельствам, не зависящим от воли сторон, в трудовую книжку вносится запись об основаниях прекращения трудового договора со ссылкой на соответствующий пункт статьи 83 Трудового кодекса Российской Федерации.
Например: «Уволен в связи с неизбранием на должность, пункт 3 статьи 83 Трудового кодекса Российской Федерации» или «Трудовой договор прекращен в связи со смертью работника, пункт 6 статьи 83 Трудового кодекса Российской Федерации».
5.5. При прекращении трудового договора по дополнительным основаниям, предусмотренным Трудовым кодексом Российской Федерации или иными федеральными законами, в трудовую книжку вносятся записи об увольнении (прекращении трудового договора) со ссылкой на соответствующую статью Трудового кодекса Российской Федерации или иного федерального закона.
Например: «Уволен в связи с повторным в течение года грубым нарушением устава образовательного учреждения, пункт 1 статьи 336 Трудового кодекса Российской Федерации» или «Уволен в связи с достижением предельного возраста, установленного для замещения государственной должности государственной службы, пункт 2 (1) статьи 25 Федерального закона от 31.07.1995 № 119-ФЗ “Об основах государственной службы Российской Федерации”».
5.6. При расторжении трудового договора по инициативе работника по причинам, с которыми законодательство связывает предоставление определенных льгот и преимуществ, запись об увольнении (прекращении трудового договора) вносится в трудовую книжку с указанием этих причин. Например: «Уволена по собственному желанию в связи с переводом мужа на работу в другую местность, пункт 3 статьи 77 Трудового кодекса Российской Федерации» или «Уволена по собственному желанию в связи с необходимостью осуществления ухода за ребенком в возрасте до 14 лет, пункт 3 статьи 77 Трудового кодекса Российской Федерации».
2. Можно ли уволить работника в день временной нетрудоспособности?
Работница 24-го числа написала заявление с просьбой уволить ее 25-го числа. Другими словами, она не выполнила требование ч. 1 ст. 80 ТК РФ о необходимости предупредить работодателя о своем увольнении за две недели или более. Однако при этом она попыталась действовать в рамках ч. 2 ст. 80 ТК РФ, попробовав прийти с работодателем к соглашению о сокращении срока предупреждения.
В подобных случаях работодатель вправе как отказать работнице, так и удовлетворить ее просьбу и уволить женщину в день, указанный в заявлении.
Согласно ч. 3 ст. 84.1 ТК РФ днем увольнения работника может быть как рабочий, так и любой нерабочий день.
Извлечение из Трудового кодекса РФ
Статья 84.1. Общий порядок оформления прекращения трудового договора
[…]
Днем прекращения трудового договора во всех случаях является последний день работы работника, за исключением случаев, когда работник фактически не работал, но за ним, в соответствии с настоящим Кодексом или иным федеральным законом, сохранялось место работы (должность).
На основании вышесказанного можно сделать вывод о том, что увольнение работника по собственному желанию в период временной нетрудоспособности не противоречит Трудовому кодексу РФ, поскольку в этот период за работником сохраняется его рабочее место (должность).
Согласно ч. 2 ст. 5 Федерального закона от 29.12.2006 № 255-ФЗ «Об обязательном социальном страховании на случай временной нетрудоспособности и в связи с материнством» (в ред. от 03.12.2011) в случае, если листок нетрудоспособности по болезни либо по уходу за больным членом семьи был выдан (нетрудоспособность наступила) в период работы по трудовому договору либо заболевание или травма наступили в течение 30 календарных дней со дня прекращения указанной работы, то работникам (бывшим работникам) должно быть выплачено пособие по временной нетрудоспособности.
Таким образом:
а) если больничный был открыт в период действия трудового договора, он оплачивается со всеми продолжениями;
б) оплачиваются все больничные, независимо от их количества, открытые в течение 30 календарных дней со дня после увольнения работника.
И. В. Журавлева, юрист, автор и преподаватель «Школы Кадровика» при Институте повышения квалификации ИКТ
Сколько раз работник может быть уволен на пенсию по возрасту? //
По данному вопросу мы придерживаемся следующей позиции:
Если работающий пенсионер в заявлении укажет в качестве причины увольнения выход на пенсию, то работодатель обязан будет расторгнуть трудовой договор по п. 3 части первой ст. 77 ТК РФ в указанный в заявлении срок, даже если этот работник раньше уже увольнялся по аналогичной причине.
Обоснование позиции:
Одним из общих оснований прекращения трудового договора является расторжение его по инициативе работника (по собственному желанию) (п. 3 части первой ст. 77 ТК РФ). В этом случае работник должен предупредить работодателя об увольнении в письменной форме не позднее чем за две недели, если иной срок не установлен ТК РФ или иным федеральным законом (часть первая ст. 80 ТК РФ).
При этом часть третья ст. 80 ТК РФ предусматривает, что в случаях, когда заявление работника об увольнении по собственному желанию обусловлено невозможностью продолжения им работы, работодатель обязан расторгнуть трудовой договор в срок, указанный в заявлении работника. В качестве примера законодатель приводит несколько уважительных причин невозможности продолжения работы, в их числе назван и выход на пенсию.
Иными словами, часть третья ст. 80 ТК РФ квалифицирует выход работника на пенсию как ситуацию, которая заведомо свидетельствует о том, что если такой работник принял решение об увольнении по собственному желанию, то он не имеет возможности продолжать работу. Поэтому он не обязан соблюдать срок предупреждения о расторжении трудового договора по собственному желанию, установленный частью первой ст. 80, ст. 280 ТК РФ и иными нормами ТК РФ и других федеральных законов (например, частью четвертой ст. 71, ст. 292, частью первой ст. 296 ТК РФ).
Обращаем Ваше внимание, что в ст. 80 ТК РФ нет определения понятия “выход на пенсию” или ссылок на конкретные нормы пенсионного законодательства. Соответственно, пенсионером в контексте этой статьи является гражданин, которому назначена пенсия в рамках любого вида пенсионного обеспечения и по любому основанию.
При этом в ст. 80 ТК РФ не содержится каких-либо ограничений по временному интервалу между моментом назначения пенсии и моментом увольнения работника по собственному желанию. Иными словами, закон не требует, чтобы момент назначения пенсии и момент принятия решения об увольнении обязательно совпадали. Следовательно, работник, имеющий право на пенсию, вне зависимости от давности возникновения этого права, вправе уволиться по собственному желанию в любой срок, который он укажет в заявлении об увольнении. Сказанное подтверждается судебной практикой (смотрите, например, определение Московского городского суда от 08.12.2010 N 33-38420).
Трудовым законодательством не установлено, сколько раз работник может увольняться по собственному желанию в связи с выходом на пенсию. В настоящее время по этому вопросу существуют две противоположные точки зрения. Причиной их возникновения является как раз тот факт, что в законодательстве нет четкого определения понятия “выход на пенсию”.
Одни придерживаются мнения, что под выходом на пенсию можно понимать смену социального статуса гражданина. А раз право на пенсию, как и статус пенсионера, приобретаются только один раз, то и уволиться по собственному желанию в связи с выходом на пенсию (с внесением соответствующей записи в трудовую книжку) можно только однократно (смотрите, например, определение Мурманского областного суда от 11.04.2012 N 33-842, решение Петроградского районного суда г. Санкт-Петербурга от 18.06.2012 N 2-2974/2012).
Другие исходят из того, что работающий пенсионер сохраняет статус пенсионера, поэтому часть третья ст. 80 ТК РФ должна применяться в отношении всех пенсионеров, решивших по своей инициативе прекратить работу. Следовательно, если работающий пенсионер в заявлении укажет в качестве причины увольнения выход на пенсию, то работодатель обязан будет расторгнуть трудовой договор по п. 3 части первой ст. 77 ТК РФ в указанный в заявлении срок, даже если этот работник раньше уже увольнялся по аналогичной причине (смотрите, например, определение Хабаровского краевого суда от 06.04.2011 N 33-2143, решение Центрального районного суда г. Читы от 05.03.2013 N 2-1137-13, решение Московского районного суда г. Твери от 31.08.2012 N 2-2024/2012).
Таким образом, при принятии решения по данному вопросу работодателю необходимо учитывать возможный риск судебного спора с сотрудником, а чтобы исключить такую ситуацию, рекомендуем договориться с таким работником о дате увольнения и учесть его пожелания.
Поскольку в части третьей ст. 80 ТК РФ отсутствует прямое указание на то, что применяться она может только однократно, полагаем, трактовать эту норму нужно в пользу работника. Поэтому верной, на наш взгляд, является позиция, согласно которой право пенсионера воспользоваться льготой части третьей ст. 80 ТК РФ не ограничено единственным разом.
Ответ подготовил:
Эксперт службы Правового консалтинга ГАРАНТ
Каменщиков Александр
Информационное правовое обеспечение ГАРАНТ
http://www. garant.ru
Многоканальный телефон: (347) 292-44-44
Сконструированный онколитический вирус, экспрессирующий ингибиторы PD-L1, активирует опухолевые неоантиген-специфические Т-клеточные ответы
Клеточные линии
Клеточная линия эмбриональной почки человека 293T, остеосаркома HUTK-143B, фибробласты почек обезьяны CV1, аденокарцинома мыши-F-M110230 мыши и мышиная лимфома EL4 были приобретены из Американской коллекции типовых культур (АТСС). Клетки аденокарциномы толстой кишки мыши MC38 были приобретены у Kerafast. Все прикрепленные клетки культивировали в полной среде Игла, модифицированной Дульбекко, с добавлением 10% инактивированной нагреванием фетальной телячьей сыворотки (FBS) и 1% пенициллин-стрептомицин-глутамин 100х (Thermo, cat.№: 10378016). Т-клетки и спленоциты выращивали в RPMI с 10% инактивированного нагреванием FBS, 10 мМ HEPES, 1 мМ пирувата натрия, 0,05 мМ β-меркаптоэтанола, 1% пенициллин – стрептомицин – глутамин и 1 × минимальных незаменимых аминокислот в среде. Клетки поддерживали в инкубаторе при 37 ° C и 5% CO 2 .
Антитела
Антитела, использованные в исследовании, включали: анти-CD16 / 32 (клон: 93, Biolegend, 1: 100), анти-PD-L1 (APC или PE-cy7, клон: 10F.9G2, Biolegend; клон: MHI5, eBioscience, 1: 100), анти-IgG2a-Fc (поликлональный, Thermo, 1: 500), анти-CD45 (BV421 или PE, клон: 30-F11, Biolegend, 1: 500), анти-CD11c (PE или APC, клон: HL3, BD Biosciences, 1: 100), анти-CD11b (eF450 или PE-cy5, клон: M1 / 70, BD Biosciences, 1: 100), анти-CD103 (FITC, клон: 2E7 , Biolegend, 1: 100), краситель жизнеспособности (BV510 или UV450, Tonbo Biosciences, 1: 1000), анти-CD3 (FITC или Pacific Blue, клон: 17A2, Biolegend, 1: 1000), анти-CD4 (PE или PE -cy5, клон: RM4-5, BD Biosciences, 1: 500), анти-CD8 (FITC, APC или APC-cy7, клон: 53-6.7, Biolegend, 1: 1000), анти-Gr-1 (PE или PE-cy7, клон: RB6-8C5, Biolegend, 1: 100), MHCII (Pacific Blue, FITC или PE, клон: M5 / 114.15. 2, Biolegend, 1: 100), анти-FoxP3 (APC или PE, клон: FJK-16s, Biolegend, 1: 100), анти-IFN-γ (APC, клон: XMG1. 2, Biolegend, 1: 100) , анти-107a (FITC, клон: 1D4B, Biolegend, 1: 500), анти-TNFα (PE, клон: MP6-XT22, BD Biosciences, 1: 100), анти-IL-2 (PerCP – cy5. 5, клон: JES6-5h5, Biolegend, 1: 100), анти-IL-12 (PE-cy7, клон: C15.6, Biolegend, 1: 100), анти-CXCL9 (AF647, клон: MIG-2F5.5, Biolegend, 1: 100), анти-CD80 (PE-cy5, клон: 16-10A1, Biolegend, 1: 100), анти-CD86 (PE-cy7, клон: GL-1, Biolegend, 1: 100) и анти-CD40 (PE, клон 3/23, Biolegend, 1: 100), анти-CD31 (FITC, клон: 390, Biolegend, 1: 100), анти-Ter119 (APC, клон: TER-119, Biolegend , 1: 100), козье антитело против мышиного IgG (поликлональное, Li-cor) IRDye® 800CW, анти-CD40 (номер по каталогу: BP0016-2, лот: 671717N1, BioXcell) и анти-PD-L1 (клон: 10F.9G2, BioXcell) Пентамер H-2Db-ASMTNMELM-PE был предоставлен ProImmune Inc (1: 100).
Генерация и очистка рекомбинантных VV
VV челночный вектор pSel-DsRed2N1 (ссылки 25,26 ) был использован для конструирования рекомбинантных челночных векторов для коэкспрессии iPDL1 (дополнительный рисунок 15a, b) под контролем VV Pse / l и GM-CSF под контролем более позднего раннего промотора p7. 5 VV (рис. 1а). Для создания рекомбинантных ddVV в качестве родительского вируса для гомологичной рекомбинации использовали штамм VV с удаленным геном vgf WR, vSC20. Вкратце, клетки CV1 были инфицированы vSC20 при множественности инфицирования (MOI) 0.1 в течение 2 ч, а затем трансфицировали одной из рекомбинантных челночных плазмид. Раствор для экстракции клеток использовали для заражения клеток HUTK-143B в присутствии 50 мкг / мл бромдезоксиуридина (Sigma B5002). Три RFP-положительных бляшки были выделены, ресуспендированы и дополнительно инфицированы клетки HUTK-143B в течение еще трех циклов отбора бляшек до тех пор, пока все бляшки не станут RFP-положительными 25,56 . Вытесненные инфицированные вирусом клетки собирали с супернатантами, отбрасываемыми центрифугированием при 1000 × g в течение 5 минут.Клетки, ресуспендированные в 1-2 мл охлажденного 10 мМ трис-буфера (pH = 9,0), обрабатывали ультразвуком в течение 1 мин на водяной бане и трижды замораживали / размораживали на бане сухой лед / этанол. Безъядерный клеточный лизат осторожно наслоили в ультрацентрифужную пробирку, подходящую для ротора ультрацентрифуги SW41, предварительно наслоенную 2 мл 40% раствора сахарозы, и центрифугировали при 20000 × g в течение 2 часов при 4 ° C без тормозов. Белые осадки на дне пробирки после ультрацентрифугирования, ресуспендированные в от 200 мкл до 1 мл 10 мМ трис-буфера, хранили при -80 ° C и в дальнейшем использовали для исследования на животных 56 .
Титрование вирусов: клетки HuTK-143B (2 × 10 5 ) высевали в 12-луночные планшеты на 24 часа. На монослой клеток добавляли ВВ с десятикратными серийными разведениями. После 1 ч инкубации при качании в клетки осторожно добавляли 2 мл культуральной среды и инкубировали в течение 24–48 часов. Клетки промывали и фиксировали 0,1% -ным кристаллическим фиолетовым в 20% -ном этаноле. Бляшки подсчитывали под микроскопом 57 .
Вестерн-блот
Всего 5 × 10 6 клеток, культивированных в шестилуночных планшетах, инфицировали указанными VV при MOI = 2. После инкубации в течение 48 часов супернатанты собирали и осветляли центрифугированием при 10000 × g в течение 2 минут. Клетки лизировали в 1 × буфере RIPA (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, штат Миссури) и 1 × ингибиторе протеазы млекопитающих (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, штат Миссури) в течение 15 мин на льду и осветляли центрифугированием при 10000 × g для 2 мин. Образцы как супернатантов, так и клеточных лизатов смешивали с буфером для образцов с 6 × додецилсульфатом натрия (SDS) (Bioworld, Dublin, OH) и подвергали электрофорезу в 4–20% градиентном SDS-полиакриламидном геле (Thermo, Waltham, MA).Фракционированные образцы белка переносят на нитроцеллюлозную мембрану 0,2 мкм (Thermo, Waltham, MA). Нитроцеллюлозную мембрану блокируют на 30–60 мин при комнатной температуре (RT) в буфере TBS (Bio-Rad, Ирвин, Калифорния), содержащем 5% обезжиренного молока. Иммунодетекцию iPDL1 проводят путем инкубации с RD800-конъюгированным козьим антителом против IgG мыши (Licor, Lincoln, NE) при комнатной температуре в течение 1 ч или с крысиным антителом против PD-1 мыши (Biolegend, Сан-Диего, Калифорния) при 1 мкг / мл в течение ночи при 4 ° C, а затем с RD800-конъюгированным антителом против IgG крысы (Licor, Lincoln, NE). Блоты обнаруживают с помощью тепловизора Odyssey Imager (LI-CON, Lincoln, NE).
Иммуноферментный анализ
Опухолевые клетки инфицировали указанными вирусами при MOI = 2. Через 24, 48 или 72 часа собирали супернатанты культур опухолевых клеток. Сыворотку мышей собирали в указанные моменты времени после внутриопухолевой инъекции указанных VV. Сывороточный iPDL1 или GM-CSF определяли с использованием набора ELISA PD-1 DuoSet мыши (R&D, Миннеаполис, Миннесота) или набора GM-CSF ELISA мыши (Biolegend, Сан-Диего, Калифорния).
МТТ-анализ
Опухолевые клетки, посеянные в 96-луночный планшет, инфицировали указанными VV при различных MOI в трех повторностях. Жизнеспособность опухолевых клеток определяли с помощью анализа МТТ (ATCC, Manassas, VA) в соответствии с инструкциями производителя. Оптическую плотность считывали при длине волны 490 нм на считывающем устройстве для микропланшетов VersaMax. Жизнеспособность инфицированных опухолевых клеток рассчитывали в процентах по отношению к ложно инфицированным клеткам 58 . Данные = среднее ± стандартное отклонение.
Анализ дифференцировки DC на основе BM
Свежевыделенные клетки BM от мышей культивировали в полной среде RPMI1640 с добавлением 10% FBS, 20 нг / мл GM-CSF и 40 нг / мл IL-4 в течение 72 часов.Прилипшие или неплотно прилипшие клетки собирали, ресуспендировали в культуральной среде с добавлением 100 нг / мл IL-4 (Peprotech, Лондон, Великобритания) и аликвотировали в 12-луночный планшет для культуры ткани. Добавляли в общей сложности 100 мкл супернатантов различных клеток, инфицированных VVs (отфильтрованных 0,1 мкм). Всего добавляли 50 нг / мл коммерческого GM-CSF (Peprotech, Лондон, Великобритания) в качестве положительного контроля. Все клетки культивировали в течение дополнительных 72 часов, а затем анализировали проточной цитометрией с окрашиванием APC-анти-CD11c (см. 59 ).
Очистка белка iPDL1
Клетки HUTK-143B были инфицированы VV-iPDL1 / GM при MOI = 2 без FBS. Культуральные среды собирали через 48 часов после заражения и фильтровали через фильтр-шприц 0,8 мкм (Millipore, Дармштадт, Германия). Среду инкубировали с 200 мкл Protein G Sepharose (Sigma-Aldrich, St Louis, MO) при 4 ° C в течение ночи. Гранулы протеина G трижды промывали 1 × PBS и элюировали 0,1 М глицин-HCL, pH = 2,8. Элюирование диализовали в 4 л 1 × PBS в течение ночи 30,31,60 .Концентрацию белка iPDL1 определяли с использованием набора для анализа BSA (Thermo, Waltham, MA).
Анализ связывания iPDL1 с помощью проточной цитометрии
Опухолевые клетки инфицировали PBS, VV-RFP и VV-iPDL1 / GM при MOI = 0,5. Через 24 часа все клетки собирали и окрашивали анти-IgG Fc. Для некоторых экспериментов опухолевые клетки сначала культивировали в течение ночи в присутствии IFN-γ (20 нг / мл) для усиления экспрессии PD-L1, а затем инфицировали PBS, VV-RFP и VV-iPDL1 / GM при MOI = 0,5. .Сорок часов спустя все клетки собирали и окрашивали анти-PD-L1 или анти-IgG Fc. PD-L1 + RFP + (инфицированные вирусом) клетки и PD-L1 + RFP – (неинфицированные) клетки анализировали методом проточной цитометрии. Для обнаружения связывания очищенного iPDL1 клетки MC38 дикого типа и клетки MC38, трансдуцированные рекомбинантным лентивирусным вектором PD-L1shRNA / GFP, инкубировали с 50 мкг / мл IgG или очищенным iPDL1 в течение 30 минут на льду. Затем клетки окрашивали анти-PD-L1 или анти-IgG Fc.
Ингибирование взаимодействия PD-1 / PD-L1
Девяносто шестилуночных планшетов для ELISA покрывали 1 мкг / лунку белка PD-L1 (Abcam, ab130039). Всего 50 мкл смеси 20 нг PD-1-биотина мыши (Sino Biological, 50124-M08H-B) и очищенного iPDL1, контроля IgG (Sigma, I5381) или контроля антител против PD-L1 (Biolegend, 124301) при указанной концентрации или 50 мкл буфера для анализа (пустой) добавляли в лунки и инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов. Разбавленный стрептавидин-HRP добавляли в каждую лунку после промывки и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч при медленном встряхивании.После трехкратной промывки добавляли субстрат TMB HRP до тех пор, пока в лунке с положительным контролем не разовьется синий цвет. Значение OD при 450 нм УФ измеряли после добавления 100 мкл 2N серной кислоты для остановки реакции. (OD неизвестного – OD холостого опыта) / (OD положительного контроля – OD холостого опыта) представляет собой процент ингибирующей активности.
Анализ ADCC
Всего 1 × 10 4 клеток-мишеней на лунку MC38 или IFNγ-стимулированные клетки MC38 высевали в 96-луночный планшет за 1 день до эксперимента.В день эксперимента в лунки, содержащие клетки-мишени MC38, добавляли различные количества PBS, IgG Fc (Thermo, каталожный номер: 31205) или очищенного iPDL1 с последующим добавлением 6 × 10 4 эффекторных клеток ADCC для биоанализа на каждый хорошо, которые были предоставлены в наборе ADCC Reporter Bioassays (Promega, Madison, WI). После инкубации в течение 6 ч при 37 ° C планшеты выдерживали на столе в течение 15 мин. Затем в каждую лунку добавляли 75 мкл реагента люциферазы Bio-Glo и выдерживали при комнатной температуре в течение 10 мин. Значения люминесценции измеряли с использованием планшет-ридера с возможностью считывания люминесценции свечения.
Эксперименты на мышах
Все эксперименты на животных проводились в соответствии с руководящими принципами Институционального комитета по уходу за животными и их использованию USC, а их разведение и поддержание содержались в наших учреждениях, свободных от патогенов. Опухоли B16-F10, B16-F10-Luc, Py230 или MC38 были созданы путем подкожной инъекции 5 × 10 5 соответствующих опухолевых клеток в левый бок мышей C57BL / 6J ( N = 5 или 10 на группу, Лаборатория Джексона). Для установленной модели опухоли 1 × 10 5 клеток B16-F10 инъецировали одновременно в правый бок.Когда размер опухоли на левом фланге достигал ~ 100 мм 3 или указанных размеров, в опухоли внутриопухолево вводили 50 мкл указанных ВВ трижды в дни 0, 3 и 7 (5 × 10 7 БОЕ / опухоль) или PBS с внутривенным введением или без него инъекции 50 мкл (200 мкг / мл) антитела против PD-L1. Размеры опухолей обработанных первичных опухолей и необработанной опухоли на противоположной стороне (удаленная опухоль) измеряли штангенциркулем или контролировали с помощью биолюминесцентной визуализации опухолей B16-F10-Luc. Объемы опухоли рассчитывали по формуле: ширина 2 × длина × 0.5. Для анализа повторного заражения опухолью обработанным мышам подкожно инъецировали 2,5 × 10 5 клеток B16-F10, 5 × 10 5 Py230 или 5 × 10 5 MC38 на правый бок каждой мыши в указанные сроки. дней после лечения вирусом. Группе наивных мышей инъецировали опухолевые клетки для контроля. За реактивированными опухолями наблюдали, как описано выше. Для эксперимента по истощению Т-лимфоцитов CD8 вводили антитела против CD8 (клон: 2,43, клетка Bio X, каталожный номер: ВР0061) i.v. два раза в неделю, начиная за день до вирусной инъекции.
Анализы неоантиген-специфического ответа Т-лимфоцитов
Спленоциты были выделены от различных мышей C57BL / 6, подвергнутых лечению VV, и культивированы в 96-луночном планшете с круглым дном (1 × 10 5 клеток / лунка) в присутствии одиночный неопептид или смесь неопептидов MC38 в указанных концентрациях при 37 ° C в 5% CO 2 . После 80 ч инкубации из каждой лунки собирали 200 мкл супернатантов для оценки IFN-γ с помощью ELISA.Добавляли [ 3 H] тимидин (1 мкКи на лунку) и культивировали еще 16 часов. Включение [ 3 H] тимидина измеряли на сцинтилляционном и люминесцентном счетчике TopCount. Для проточного цитометрического анализа спленоциты из различных групп, получавших VV, были совместно культивированы с сингенными ДК, полученными из моноцитов (10: 1), которые обрабатывались неопептидами в течение 12 часов в присутствии или в отсутствие пробки Гольджи 61 . Клетки окрашивали анти-CD8, анти-107a, анти-IFN-γ, анти-IL2 и анти-TNF-α и анализировали проточной цитометрией.
Анализ репликации вируса in vivo
Мышам C57BL / 6 имплантировали 5 × 10 5 клеток MC38 подкожно. Когда опухоли достигли ~ 100 мм 3 , мышей вводили 1 × 10 7 БОЕ / мышь VV-iPDL1 / GM внутриопухолево. В указанные дни мышей умерщвляли, а ткани подвергали трем циклам замораживания-оттаивания-обработки ультразвуком для высвобождения вируса. Всего 500 мкл гомогената инкубировали с клетками 143B TK и определяли титры 25,26 .Титры вирусов были стандартизированы по массе ткани.
Генерация Т-клеток, примированных неоэпитопами
Мышам C57BL / 6 (6-8 недель) внутрибрюшинно вводили смесь из 11 пептидов (по 10 мкг каждый), приготовленную с адъювантной системой, состоящей из 100 мкг анти-CD40 (Abclone FJK45 ) и 100 мкг поли (I: C; InvivoGen) два раза в дни 0 и 14. На 21 день спленоциты собирали и стимулировали in vitro облученными аутологичными наивными спленоцитами, предварительно обработанными смесью пептидов в течение двух циклов.Разросшиеся клетки селезенки собирали для дальнейших экспериментов 33,62 .
Выделение инфильтрирующих опухоль иммунных клеток
Мышей C57BL / 6 подкожно инокулировали клетками MC38 (1 × 10 6 ) с одной стороны. Когда размер опухоли достигал ~ 100 мм 3 или указанных размеров (считался как день 0), мышам внутриопухолево вводили 50 мкл PBS, VV-RFP, VV-GM или VV-iPDL1 / GM (5 × 10 ). 7 БОЕ / опухоль) в дни 0 и 3. Одной группе мышей внутрибрюшинно вводили 200 мкг антитела против PD-L1 (клон 10F.9Г2). В указанные дни после вирусной обработки опухоли собирали, взвешивали и обрабатывали коллагеназой типа I и ДНКазой в течение 30 минут при 37 ° C. Опухолевые ткани гомогенизировали, а затем фильтровали через нейлоновое сито 70 мкм 33 . Суспензии отдельных клеток анализировали с помощью FACS или использовали для других анализов 61 .
Анализы in vitro и in vivo неоэпитоп-специфических Т-клеточных ответов
ДК, инфильтрирующие опухоль, от различных VV-обработанных мышей с опухолями выделяли с использованием CD11c MicroBeads UltraPure (Miltenyi Biotec, 130-108-338).В DC вводили импульсы с указанными неопептидами, а затем совместно культивировали с Т-клетками, примированными неоантигенами, для оценки продукции цитокинов и пролиферации Т-клеток 61 .
Для оценки иммуногенности опухолевых клеток, обработанных VV, клетки MC38, высеянные в 96-луночные круглодонные планшеты (5 × 10 3 на лунку), инфицировали PBS, VV-RFP, VV-GM или VV- iPDL1 / GM при MOI = 1 в течение 2 часов. Инфицированные клетки MC38 тщательно промывали и затем сокультивировали с 2 × 10 4 Т-клеток, примированных неоантигенами, в течение 48 часов.В одну из совместных культур MC38 / CTL с ложным инфицированием добавляли 1 мкг / мл антитела против PD-L1. Супернатанты собирали для анализа продукции IFN-γ с помощью ELISA. Клетки собирали, иммуно окрашивали анти-CD3. Количество Т-клеток подсчитывали, добавляя точные счетные шарики (Biolegend, 424902).
Для оценки in vivo пролиферации Т-клеток, примированных неоантигенами, у различных мышей с опухолями, леченных VV, мышей с опухолью MC38 лечили указанными вирусами (5 × 10 7 БОЕ) с последующим адоптивным переносом меченных CFSE 2 × 10 6 Т-клеток, примированных неоантигенами.Через три дня собирали TdLN и оценивали их пролиферацию на основании разведения CFSE с помощью проточной цитометрии 34 . Показанные данные представляют собой типичную гистограмму двух независимых экспериментов.
CTL-анализ
Клетки, стабильно экспрессирующие люциферазу светлячка, культивировали совместно с эффекторными Т-клетками в указанных соотношениях. Сорок восемь часов спустя все клетки центрифугировали и ресуспендировали в 100 мкл среды с добавлением 100 мкг / мл калиевой соли люциферина жука и инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут.Клетки переносили в 96-луночный белый непрозрачный планшет. Эмиссию люциферазы измеряли на сцинтилляционном и люминесцентном счетчике TopCount. % Лизиса уничтожения = [1 – (неизвестно – пусто) / (положительный контроль – пусто)] × 100%.
РНК секвенирование
клеток MC38 инфицировали VV-iPDL1 / GM. Клетки собирали в разное время. Клеточные РНК экстрагировали из клеточных лизатов с использованием RNeasy Plus Mini Kit (Qiagen). Общая РНК обогащена олиго (dT) магнитными шариками (рРНК удалена). Подготовка библиотеки RNA-seq с использованием набора для подготовки библиотеки Stranded RNA-Seq Library Prep Kit (Illumina).Библиотеки секвенировали на приборе HiSeq 4000 с использованием парного секвенирования 2 × 150 п.н. (Arraystar Inc, Rockville, MD).
Программное обеспечение
Odyssey v3.0, MikroWin2000, Living Image v4.4, FACS DIVA 6.1.2, Illustrator CS6, flowjo 10.4.0, Graphpad prism 6, Microsoft excel 2011 для Mac, Living Image v4.3.1, RNA- seq-анализ выполнялся с помощью следующего программного обеспечения HTSeq v0.5.3, Solexa pipeline v1.8, FastQC 0.11.7, Hisat2, StringTie 1.3.3, R 3.4.1 и Python 2.7.
Статистика
Статистический анализ был выполнен с использованием GraphPad Prism 6. При прохождении теста нормальности для сравнения двух групп использовался двусторонний тест Стьюдента t . В противном случае использовали тест Манна – Уитни U . Двусторонний дисперсионный анализ с повторными измерениями с поправкой Бонферрони использовался для сравнения эффекта нескольких уровней двух факторов с множественными наблюдениями на каждом уровне (для объемов опухоли). Выживаемость животных представлена с использованием кривых выживаемости Каплана-Мейера и статистически проанализирована с использованием логарифмического рангового критерия.Данные, представленные на рисунках, являются средними ± стандартное отклонение. P Значения <0,05 считались статистически значимыми.
Сводка отчетов
Дополнительная информация о дизайне исследований доступна в Сводке отчетов по исследованиям природы, связанной с этой статьей.
% PDF-1.7 % 7997 0 объект > эндобдж xref 7997 98 0000000016 00000 н. 0000003666 00000 н. 0000004029 00000 н. 0000004066 00000 н. 0000004158 00000 п. 0000004236 00000 п. 0000004326 00000 н. 0000004406 00000 н. 0000004495 00000 н. 0000004528 00000 н. 0000004624 00000 н. 0000004653 00000 п. 0000004776 00000 н. 0000005926 00000 н. 0000006144 00000 н. 0000006314 00000 н. 0000006483 00000 н. 0000006653 00000 п. 0000006824 00000 н. 0000006995 00000 н. 0000007163 00000 н. 0000007334 00000 н. 0000007505 00000 н. 0000007676 00000 н. 0000007847 00000 н. 0000008018 00000 н. 0000008189 00000 н. 0000008360 00000 н. 0000008531 00000 н. 0000008702 00000 н. 0000008872 00000 н. 0000009043 00000 н. 0000009213 00000 н. 0000009383 00000 п. 0000009554 00000 п. 0000009724 00000 н. 0000009895 00000 н. 0000010161 00000 п. 0000010717 00000 п. 0000010756 00000 п. 0000010871 00000 п. 0000010984 00000 п. 0000011577 00000 п. 0000012210 00000 п. 0000012689 00000 п. 0000013187 00000 п. 0000013696 00000 п. 0000014223 00000 п. 0000014489 00000 п. 0000015031 00000 п. 0000015652 00000 п. 0000015796 00000 п. 0000015825 00000 п. 0000016447 00000 п. 0000016908 00000 п. 0000017324 00000 п. 0000017756 00000 п. 0000017827 00000 н. 0000017884 00000 п. 0000036199 00000 п. 0000036256 00000 п. 0000036537 00000 п. 0000036594 00000 п. 0000037074 00000 п. 0000037131 00000 п. 0000052895 00000 п. 0000052952 00000 п. 0000053056 00000 п. 0000053113 00000 п. 0000066157 00000 п. 0000066214 00000 п. 0000066271 00000 п. 0000066328 00000 п. 0000066385 00000 п. 0000066442 00000 п. 0000066499 00000 н. 0000066556 00000 п. 0000066613 00000 п. 0000066670 00000 п. 0000066727 00000 п. 0000066784 00000 п. 0000066841 00000 п. Ab @ Y- ” @ L, N ¡o $ q004 ; -cu4 _rxNr | It ߊʋ ‘(y ||| _Φ
Страница не найдена | Questionmark
Похоже, в этом месте ничего не было найдено.Может быть, попробуйте одну из ссылок ниже или поиск?
Архив
Попробуйте поискать в ежемесячных архивах. 🙂
Архивы Выберите месяц май 2021 апрель 2021 март 2021 февраль 2021 январь 2021 декабрь 2020 ноябрь 2020 октябрь 2020 сентябрь 2020 август 2020 июль 2020 июнь 2020 май 2020 апрель 2020 март 2020 февраль 2020 январь 2020 декабрь 2019 ноябрь 2019 октябрь 2019 сентябрь 2019 июль 2019 июнь 2019 май 2019 Апрель 2019 март 2019 февраль 2019 январь 2019 декабрь 2018 ноябрь 2018 сентябрь 2018 июль 2018 июнь 2018 май 2018 апрель 2018 март 2018 февраль 2018 январь 2018 декабрь 2017 ноябрь 2017 октябрь 2017 август 2017 июль 2017 июнь 2017 май 2017 апрель 2017 март 2017 февраль 2017 январь 2017 Декабрь 2016 ноябрь 2016 октябрь 2016 сентябрь 2016 август 2016 июль 2016 июнь 2016 май 2016 апрель 2016 март 2016 февраль 2016 январь 2016 декабрь 2015 ноябрь 2015 октябрь 2015 сентябрь 2015 август 2015 июль 2015 июнь 2015 май 2015 апрель 2015 март 2015 февраль 2015 январь 2015 декабрь 2014 Ноябрь 2014 г. tober 2014 сентябрь 2014 август 2014 июль 2014 июнь 2014 май 2014 апрель 2014 март 2014 февраль 2014 январь 2014 декабрь 2013 ноябрь 2013 октябрь 2013 сентябрь 2013 август 2013 июль 2013 июнь 2013 май 2013 апрель 2013 март 2013 февраль 2013 январь 2013 декабрь 2012 ноябрь 2012 октябрь 2012 Сентябрь 2012 Август 2012 Июль 2012 Июнь 2012 Май 2012 Апрель 2012 Март 2012 Февраль 2012 Январь 2012 Декабрь 2011 Ноябрь 2011 Октябрь 2011 Сентябрь 2011 Август 2011 Июль 2011 Июнь 2011 Май 2011 Апрель 2011 Март 2011 Февраль 2011 Январь 2011 Декабрь 2010 Ноябрь 2010 Ноябрь 2010 Октябрь 2010 Сентябрь 2010 Август 2010 Июль 2010 Июнь 2010 Май 2010 Апрель 2010 Март 2010 Февраль 2010 Январь 2010 Декабрь 2009 Ноябрь 2009 Октябрь 2009 Сентябрь 2009 Август 2009 Июль 2009 Июнь 2009 Май 2009 Апрель 2009 Март 2009Elecraft k2 схема
Схема elecraft k2 Я снял крышку в поисках каких-либо проблем.K2 Front Panel Board Rev C 5 4. Если вы зарегистрированный пользователь, пожалуйста, 8. Требуется vbrun300. Приложение: Bart, PA3GYU, написал 25. Посты про емкостную сенсорную кнопку CW написаны 2e0dfu. Но я думал о походном радио SSB, которое охватывает несколько диапазонов, которые были бы интересны для дневных походов. трансивер Elecraft K2 / 100, а также базовый K2. 6Мб Скачать. 32 и это. Elecraft K2. com Elecraft может решить обновить их, но не берет на себя никаких обязательств делать это. Входная линия -PTT также привязана к входу Data 1 мультиплексора (только со стороны точки), чтобы позволить выходу перейти в низкий уровень (состояние 4 вместо состояния 5), который активирует внутренний сигнал -DOT / PTT K2 для микропроцессор и включает режим передачи.ФНЧ мощностью 5 кВт на 160-6 м 1. ком в 2 категориях. Составлено Сверре Холмом, LA3ZA, со страниц руководства www. Elecraft K2: Объявления и ссылки на руководства можно найти на странице K2. до 5 P. Теперь, когда я прочитал весь исторический материал, в котором обсуждаются альтернативы ручному микрофону Mh4, я все еще не уверен, как получить свой проверенный K3 Heil с кабелем, адаптированным для работы с KX3. Итак, 3 дБм – это 2 милливатта, а 10 дБм – 10 милливатт. Это программное обеспечение полезно при использовании K3S, K3, KPA1500, KPA500 или KAT500 в удаленной настройке.Приемопередатчики Elecraft K1, K2 и K2 / 100 Приемопередатчики Elecraft – это очень хорошо сделанные и очень хорошо работающие радиостанции. Elecraft Mh3 поставляется с мощностью 1/4 Вт 5. От источника питания 8 В имеется развязывающий резистор на 100 Ом, за которым следует некоторое количество В этом PDF-файле описывается моя модификация Elecraft K2 для PSK31, RTTY и т.д. ОПИСАНИЕ ЦЕПИ Этот интерфейс преобразователя DEM EKTI специально разработан для подключения разъема J-13 в приемопередатчике Elecraft K2 к обычному преобразователю порта ПЧ (прием и передача по одному коаксиальному кабелю), например 144-28EC.началось 2003-01-19 10:09:00 UTC. Elecraft T1 – это компактный автоматический антенный тюнер, охватывающий диапазон от 160 до 6 м, подходящий для использования с радиоприемниками 0, все поляризованные конденсаторы в мкФ, 20%; Минимум 50в. Предоставлено: TANG Hengfang. Мне понадобилась небольшая фиктивная антенна для тестирования моего Elecraft K2. На схеме одного из поврежденных компонентов есть символ, с которым я не знаком, и он не отображается в моей таблице условных обозначений “Справочника”. Only at – это веб-сайт, посвященный ветчине. Схемам предшествует блок-схема для контекста.K2 Control Board Rev F 6 5. Forty-9er возник в клубе Norcal QRP, оригинальная документация для этого существа находится здесь, и есть много хардкорных мертвых ошибок и манхэттенских итераций. Подробную информацию об этих трансиверах можно найти на веб-сайте Elecraft здесь, поэтому мне не нужно повторять технические данные и т. Д. Для базового K2, похоже, прямая калибровка мощности зафиксирована в прошивке (мои настройки не совпадают мой калиброванный измеритель мощности). Джим, AB0UK K2 / 100 S / N 4787 22 марта 2006 г., в 12:29 Джим Харрис написал:> Я использую предусилитель с моими микрофонами не K2, когда я использую их> с K2.445. Технические данные Toyocom или NDK 10MHz. Я обнаружил, что когда я подключил линейный (AL-811H) и нажал на микрофон, мое радио программное обеспечение (TS-590) И программа Elecraft отключались. RIGblaster – это самый простой способ правильно подключить радиостанцию к компьютеру, чтобы вы могли использовать более 100 существующих и будущих программ для звуковых карт для радиолюбителей. Тема: Re: [Elecraft] Микрофонная проводка K2 для TenTec 705. 2 (5 мм) плюс зазор для проводки. Схема: Зарядное устройство регулирует выходное напряжение на 14.03d У меня были проблемы с низкой выходной мощностью через автоматический тюнер K2. Схему предусилителя я получил с сайта Don> Wilhelms. ] Я обнаружил большой интерес к панадаптеру SpectraScan от владельцев Elecraft K2. PDF, рус – 457kb ACOM – 2000A. Страница 4: Elecraft Базовый K2 работает на 80-10 м CW и обеспечивает более 10 метров. Уникальной особенностью K2 является то, что он обеспечивает собственные встроенные тестовые ватты РЧ-выхода. Подробнее об этом позже. Требуется vbrun300. Это означает, что до того, как ваш K2 (или любой другой передатчик RF) включит вход AN-762, реле должно быть переключено.com домен. Метод заключается в использовании тональных сигналов в расписании WWV для выполнения калибровки. 1. elecraft. Электрическая схема Shimizu SS-105S. Быстрый поиск в Интернете натолкнул на это сообщение из архива отражателя Elecraft, написанное Доном Вильгельмом, W3FPR. Схематическая диаграмма гидрофильной модификации белка-носителя витамина K2 и стимулирования дифференцировки остеобластов. Elecraft KX1: Рекламу и инструкции можно найти на странице KX1. Основная категория – это модификации КВ радио, советы и хитрости о модификациях КВ радио, моды для радиолюбителей kenwood icom yaesu alinco mods.Вот мой опыт и несколько рекомендаций для —– Исходное сообщение —– От: elecraft-request . Операторы QRP много работают с DX, участвуют в соревнованиях и, как правило, весело проводят время с другими радиолюбителями. Нажатие K1 переключает между Да и Нет, а нажатие K2 подтверждает выбор. Требования к питанию +12 В при 20 мА. qth. дает нам письменный отчет о деталях вашей проблемы. microHAM USB-2; microHAM USB-3; microHAM Digikeyer; microHAM Digikeyer-2; Список всех кабелей DB15 ОБЩИЕ: Тип: Любительский приемопередатчик HF / VHF: Диапазон частот: TX: 10-160 м + WARC / 6 м RX: 0.Этот файл в формате ZIP представляет собой простой калькулятор для проектирования полосовых ВЧ-фильтров. Это означает, что ссылки на буку LOW band DXing от John ON4UN, edisi 5, maka transceiver buatan Elecraft, AS, inilah yang sedang naik pamornya. Это действительно двойное назначение, несмотря на то, что его легко построить. 0 Усилитель буфера с Elecraft K2 Введение [1 сентября 2006 г. – Я тщательно отредактировал эту страницу, чтобы отразить версию 2. Снова полубарабайство. О руководстве по Elecraft K2 Ресурс в настоящее время находится в dxzone.0 МГц (Орион) 4. Это все-таки цель вышеупомянутой схемы. 8–54 МГц A 1. Ресурсы, перечисленные в категории Yaesu FT-857, относятся к основной коллекции КВ трансиверов и проверяются и оцениваются радиолюбителями. элкрафт. Далее идут батарейки. Ресурсы, перечисленные в категории «Интерфейс звуковой карты», относятся к основному сборнику технических справочников и проверяются и оцениваются радиолюбителями. k2 sdq31 h4 svref0 h5 svref1 у5 svref2 AA8 svref3 AB6 sdqs0 AC5 sdqs0 # AB1 sdqs1 aa2 sdqs1 # r1 sdqs2 p2 sdqs2 # k1 sdqs3 j2 sdqs3 # AC6 sdqm0 w1 sdqm1 r2 sdqm2 g1 sdqm3 v2 SCK # v1 SCK n3 scke0 J4 scke1 w4 sa0 r4 sa1 u4 sa2 m4 sa3 y4 sa4 n4 sa5 v4 sa6 m3 sa7 aa3 sa8 p4 sa9 l3 sa10 w3 sa11 p3 sa12 y3 sa13 r3 sa14 k3 sba0 l4 sba1 k4 sba2 t3 swe u3 О цифровом интерфейсе K2 В настоящее время ресурс указан в dxzone.4 1806. Первое, что нужно установить с любым передатчиком, – это ширина полосы пропускания. 5k) 5% резистор имеет КОРИЧНЕВЫЕ цветные полосы, на схеме с этим символом: ЗЕЛЕНЫЙ и КРАСНЫЙ. Создано соучредителями Elecraft Уэйном На картинке выше я нахожусь в группе CW под именем TK / LA3ZA с Корсики с Elecraft K2 – моей первой любовью в ригах. Руководство пользователя. Подробную информацию об этих трансиверах можно найти на веб-сайте Elecraft здесь, поэтому мне не нужно повторять технические данные и т. Д. Это настоящий трансивер двойного назначения, сочетающий в себе рабочие функции, которые вы ожидаете от установки для домашней станции. с небольшими размерами и массой прочного портативного устройства, которое можно брать с собой куда угодно.Выбирают ли они 5 Вт или менее 1 Вт, эти радиолюбители все равно находят множество контактов и получают массу удовольствия! Хотя K2 не скоро появится, я купил Elecraft K2 / 10 («/ 10» означает 10 Вт). Компания Elecraft разработала отличный преобразователь постоянного тока в схему переключения усилителя мощности KPA100. Введение Elecraft K2 – это высокопроизводительный синтезированный CW / SSB. K2 – это комплект среднего уровня, но вы будете приятно удивлены трансивером, который покрывает все HF-диапазоны. 25 (32 мм). производительность передатчика и усилителя.elecraft @ mailman. элкрафт. C. K1 потребляет 7 Вт, и бюджет мощности K2 также велик, измеряется в амперах. Forty-9er возник в клубе Norcal QRP, оригинальная документация для этого существа находится здесь, и есть много хардкорных мертвых ошибок и манхэттенских итераций. Elecraft K2 – это высокопроизводительный синтезированный приемопередатчик CW / SSB, который охватывает все диапазоны HF. М. Я собрал прочный дорожный комплект K2 для полевых операций с K2. Мне нравится встроенный переключатель на 3 антенны и широкий диапазон настройки.Многие построили это, а некоторые разместили изображения и макет – http: // www. Я использовал формирователь T68-6, и информация о поворотах есть на моей схеме выше – T50-7 займет немного меньше места. Это необходимо для использования LP-PAN с этими радиостанциями. Кто-нибудь продублировал эту конфигурацию, и если да, то каковы были назначения контактов перемычки Radio Jumper для K2 как Radio # 2? Мне сказали, что распиновка такая же, как у Kenwood, но это не сработало. EKTI будет обеспечивать уровень возбуждения передачи, доступный от K2 (от +0 до + 3dBm) на 28 Универсальном интерфейсе трансвертера для Elecraft K2 ОПИСАНИЕ ЦЕПИ Новый интерфейс трансвертера DEM TIK2 разработан для установки в приемопередатчик Elecraft K2.K2 был той установкой, которая помогла мне пройти QRP DXCC в 2003 году. По возможности используйте электронную почту; это оплатит обратную доставку. Прочитав несколько очень технических обзоров Elecraft K3, рекламирующих технические характеристики и достоинства этой очень интересной установки, а также много поговорив с давним пользователем K3 (и полевым испытателем Elecraft), я решил взять в качестве такового, для всех, кто работает с Frog, здесь есть копии схемы, спецификации и обзора, которые идут с моим комплектом. au / 2014/04/20 / elecraft-k2-amp-keying-circuit / Вопрос для Elecraft, когда у вас будет время;
<)): Глядя на картинку, это немного догадка, но телефонный разъем на передней панели он имеет размер 1/4 дюйма, а не 1/8 дюйма, как у K2, в то время как разъем на задней панели выглядит как разъем 1/8 дюйма.Клон Frog Sounds Forty-9er - старший брат Pixie, который я построил в прошлом месяце. 2kb Скачать. Sdr hf preamp Теперь моя задача состоит в том, чтобы настроить переключение моих двух микрофонов, каждый из которых подключен к круглому разъему ICOM между IC-756 и недавно приобретенным Elecraft K2. Jingtong JT-208 - это портативная УКВ-связь, произведенная в Китае. Плата интерфейса IF-2000 для FT-950/2000 производства RF Space доступна в HRO. Мой Elecraft K2 не имеет линейного входа высокого уровня для звука, вам нужно использовать гнездо для микрофона на передней панели, поэтому я добавил некоторое дополнительное затухание в корпусе микрофонного штекера, чтобы поддерживать выходной уровень от USB-соединения, подобный тому, который требуется другие радиоприемники.Схема C3600. Обратите внимание, что я добавил блокирующий конденсатор постоянного тока в СХЕМУ: DB37-EL-K2: K2 (используйте DB37-El-K23) DB37-EL-K23: K2, K3, K3S (микрофон на передней панели) DB37-EL-K3R: K3 , K3S (микрофон на задней панели) СХЕМА: DB37-EL-K2: K2 (используйте DB37-EL-K23) DB37-EL-K23: K2, K3, K3S (микрофон на передней панели) DB37-EL-K3R: K3, K3S ( Микрофон на задней панели) ACOM - 1000. Схема elecraft k2